Набор для выявления вирусов инфекционного

Набор для выявления
вирусов инфекционного
ларинготрахеита и
болезни Марека
(количественный)
Вир-10-100, на 100 реакций
1
Содержание
Компоненты набора .................................................. 3
Область применения ................................................. 3
Гарантия ..................................................................... 3
Описание .................................................................... 4
Меры предосторожности ......................................... 4
Необходимое оборудование .................................... 4
Важные замечания .................................................... 5
Необходимые контрольные образцы ...................... 5
Этап I. Постановка ПЦР ........................................... 6
Этап II. Анализ результатов ..................................... 7
Проблемы и рекомендации....................................... 8
Контроль качества ..................................................... 8
Хранение и стабильность ......................................... 9
Служба технической поддержки ............................. 9
Информация для заказов........................................... 9
2
Компоненты набора
Компоненты
2X Микс ПЦР
H-Taq полимераза
Набор калибровочных образцов от
10 до 107 копий.
Вода
количество
1,4 мл
55 мкл
7х 100 мкл
2 мл
Область применения
Набор предназначен для выявления геномной ДНК вирусов
инфекционного ларинготрахеита и болезни Марека,
выделенных из биологических образцов и смывов, и
оценки количества вирионов в исследуемых образцах.
Анализ основан на методе ПЦР в реальном времени.
Чувствительность набора до 103/мл геном эквивалентов в
исходной пробе. Набор рассчитан на проведение 100
реакций, включая контроли.
Гарантия
Фрактал Био гарантирует изготовление всех продуктов
согласно описанию в руководстве. Покупатель должен
определить соответствие продукта для конкретного его
использования. Если продукт не дает заявленного
результата по любой причине, за исключением
неправильного использования, мы бесплатно произведем
замену продукта или вернем покупателю его полную
стоимость. Мы сохраняем за собой право изменять или
модифицировать любой продукт в целях улучшения его
3
качеств и дизайна. Если у Вас возникли вопросы по
применению продукта или оценке результата, вы можете
обращаться в Службу технической поддержки (см. на
обороте).
Описание
Процедура анализа состоит из двух этапов: 1) проведение
ПЦР с флуоресцентной детекцией в реальном времени, 2)
анализ результатов. Для детекции используются каналы:
FAM (макс. поглощения
490 нм, макс.
флуоресценции 520 нм
ROX (макс. поглощения 580 нм, макс.
флуоресценции 610 нм).
Меры предосторожности
При приготовлении смесей используйте индивидуальные
средства защиты. Компоненты набора не обладают
токсическими и другими свойствами, за счѐт которых
возможно негативное воздействие на человека.
Необходимое оборудование
Термостат
Амплификатор для ПЦР в реальном времени
Микроцентрифуга
Ламинарный и ПЦР-бокс
Набор дозаторов
Одноразовые наконечники с фильтрами для дозаторов
Одноразовые
полипропиленовые
микропробирки
объѐмом 0,2 (0,5) мл
4
Штативы для наконечников и микропробирок
Халат и одноразовые перчатки
Важные замечания
При работе с ДНК необходимо использовать только
одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку “DNase-free”.
Для приготовления смесей и добавления нуклеиновых
кислот используйте только наконечники с фильтрами.
Работать только в одноразовых перчатках.
Всѐ лабораторное оборудование, в том числе дозаторы,
лабораторная посуда, а также все рабочие растворы,
должны быть строго стационарным.
Приготовление реакционных смесей для ПЦР
необходимо проводить в ПЦР-боксе.
Необходимые контрольные образцы
Этап постановки ПЦР:
Отрицательный контрольный образец (вода или
продукт выделения ДНК из воды)
3-4 калибровочных образца (входят в состав
набора)
Калибровочные образцы всегда добавляйте последними,
после закрытия пробирок с пробами.
5
Этап I. Постановка ПЦР.
1.
Смешайте компоненты, входящие в набор, в
указанных ниже пропорциях:
Компонент
2Х Микс
H-Taq
полимераза
Вода
На 1
реакцию
(мкл)
12,5
0,5
На 5
реакций
(мкл)
62
2,5
7
35
На N реакций
12,5х(N+1) мкл
0,5х(N+1) мкл
7х(N+1) мкл
Важно! ПЦР смесь на несколько реакций (более пяти)
готовится на одну реакцию больше, чем нужно, чтобы
избежать недостатка смеси из-за погрешности пипеток и
потерь на наконечниках.
H-Taq полимеразу следует убрать на -20 °С сразу после
использования.
2.
Перемешайте подготовленную смесь на вортексе и
осадите капли кратковременным центрифугированием (2-3
сек).
3.
После приготовления смеси перенесите по 20 мкл в
каждую пробирку для ПЦР.
4.
Внесите в первую пробирку с ПЦР смесью 5 мкл
отрицательного контрольного образца (К-).
5.
Внесите по 5 мкл каждого образца ДНК в пробирки
с ПЦР смесью. Закройте крышки пробирок.
6.
Для построения калибровочного графика проведите
реакции с входящими в набор калибровочными образцами
(КО). Указанное на образцах количество копий содержится
6
в 5 мкл. Таким образом, на реакцию необходимо брать 5
мкл. Для построения графика нет необходимости брать все
калибраторы. Берите 3-4 в том диапазоне, в котором будут
давать результат Ваши исследуемые пробы.
ВАЖНО: Пробирки с калибровочными образцами,
входящие в набор, открывайте только после раскапывания
и закрытия крышек пробирок всех исследуемых проб.
7.
Поместите пробирки в амплификатор и запустите
программу амплификации:
95°С - 3 минуты
50 циклов 60°С - 30 секунд
95°С - 20 секунд
Для приборов компании “BioRad”
установить на этапе 60 °С – 30 секунд.
съѐмку
следует
Этап III. Анализ результатов.
По
каналу
ROX
регистрируется
сигнал,
свидетельствующий о накоплении продукта амплификации
ДНК вируса болезни Марека.
По
каналу
FAM
регистрируется
сигнал,
свидетельствующий о накоплении продукта амплификации
ДНК вируса инфекционного ларинготрахеита.
Определите пороговые циклы (Ct) для каждой из проб. При
этом Сt для отрицательного контроля (К-) по обоим
каналам должен быть >50.
Постройте калибровочный график в соответствии с
инструкцией
к
используемому
программному
обеспечению. Определите количество копий ДНК в
исследуемых пробах по калибровочному графику.
7
ВНИМАНИЕ: Калибровочные образцы показывают
количество пар копий. Таким образом, получаемый
результат даѐтся в количестве пар копий.
Проблемы и рекомендации
Сt для калибровочных Убедитесь, что не вышел срок
образцов не определено годности.
Обратитесь
к
(Сt >50).
производителю
Сt для проб меньше 17
Разведите ДНК в 10-1000 раз и
повторите анализ.
Сt для отрицательного Возможно,
установлены
контроля <40
некорректные параметры для
расчѐта.
Контаминация.
Проведите мероприятия по
очистке
оборудования
и
помещения от контаминантов.
Смените
реактивы.
Не
открывайте
пробирку
с
контрольным образцом до
приготовления отрицательного
контроля и анализируемых
проб.
Контроль качества
Тестирование набора проводилось на плазмидах,
содержащих отрезки ДНК вирусов инфекционного
ларинготрахеита и болезни Марека, в соответствии с
протоколом, описанным выше.
8
Хранение и стабильность
Набор может храниться до 6 месяцев без изменения
качественных характеристик при температуре -20°С.
Служба технической поддержки
В случае появления вопросов обращайтесь в службу
технической поддержки: technic@fractalbio.com.
Информация для заказов
Наименование
Кат.номер
Набор
для
выявления
вирусов
инфекционного ларинготрахеита и
болезни Марека, количественный (на
50 реакций)
Набор
для
выявления
вирусов
инфекционного ларинготрахеита и
болезни Марека, количественный (на
100 реакций)
Набор «ФБиоНуклео» для выделения
нуклеиновых
кислот
из
биологического материала (на 4
выделения)
Набор «ФБиоНуклео» для выделения
нуклеиновых
кислот
из
биологического материала (на 50
выделений)
9
Вир-10-50
Вир-10-100
НК-1-4
НК-1-50
Произведено: ООО “Фрактал Био”, 190020, г. СанктПетербург, ул. Бумажная, д. 17
сайт: fractalbio.com
E-mail: info@fractalbio.com
Контактный телефон/факс: (812) 495-96-95
Дата изготовления:
10