Молекулярные методы диагностики и алгоритмы лабораторного обследования на урогенитальные инфекции Гущин А.Е. Лаборатория молекулярной диагностики и эпидемиологии инфекций органов репродукции ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора г. Москва Возбудители инфекции органов репродукции T.pallidum N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium Вирусы (HSV1&2; HPV) Условно-патогенные микоплазмы U.urealyticum, U. parvum, M.hominis Candida spp. G. vaginalis, A.vaginae и BV-ассоциированные микроорганизмы Другая условнопатогенная флора Возбудители ИППП Нозологическая форма (МКБ-X) Наиболее частая клиническая форма (клинический синдром) Treponema pallidum Сифилис Эрозивно-язвенные поражения половых органов Neisseria gonorrhoeae Гонорея Уретрит, цервицит, ВЗОМТ Trichomonas vaginalis Урогенитальный трихомоноз Уретрит (мужчины) Вагинит Chlamydia trachomatis (серотипы …) Урогенитальный хламидиоз Уретрит, цервицит, ВЗОМТ Mycoplasma genitalium - Уретрит (мужчины), цервицит, ВЗОМТ Ureaplasma urealyticum (биовар Т-960) - Уретрит (мужчины) Проблемы диагностики ИППП на современном этапе Разнообразие лабораторных тестов для диагностики ИППП с различными аналитическими и диагностическими характеристиками; Методы диагностики гонореи Метод диагностики Диагн. чувствит. метода Микроскопия (по Граму) 80-95% (М) 30-50% (Ж) Бак. посев. 95-98 (М) 80-87% (Ж) ПЦР 95-98% (М и Ж) Методы диагностики хламидиоза Метод диагностики Диагн. чувств. метода Микроскопия (по Романовскому) 10-12% ПИФ 10-40% Бак. посев. 60-80% ПЦР 95-98% Методы диагностики трихомониаза Метод диагностики Диагн. чувствит. метода Микроскопия (окраш. преп.) 10-20% (М) 50-60 (Ж) Бак. посев. 70-95% ПЦР 90-96% Рутинные методы диагностики инфекции вызванной M.genitalium Метод диагностики Диагн. чувств. метода Микроскопия - ПИФ - Бак. посев. - МАНК 96-99% Клинический синдром Нозологическая форма Лабораторные методы обследования Этиология заболевания Этиотропная терапия Лабораторные методы обследования Контроль эффективности лечения Дифференциальная диагностика уретрита использованием классических методов «не-ПЦР» ПЦР Ширшова Е.В., Кисина В.И., Гущин А.Е., 2007 Универсальный протокол выявление возбудителей с помощью ПЦР ПЦР на N.gonorrhoeae ПЦР на C.trachomatis ПЦР на T.vaginalis ПЦР на M.genitalium Дифференциальная диагностика уретрита использованием ПЦР ПЦР Ширшова Е.В., Кисина В.И., Гущин А.Е., 2007 Выявление возбудителей ИППП с помощью «АмплиСенс-NG/CT/MG/TV-мультипрайм» ПЦР на: N.gonorrhoeae T.vaginalis C.trachomatis M.genitalium АмплиСенс N.gonorrhoeae/C.trachomatis/ M.genitalium/T.vaginalisМУЛЬТИПРАЙМ-FL (кат.№ R-B55) для 5-6 канального RG6000 Проблемы диагностики ИППП на современном этапе Разнообразие лабораторных тестов для диагностики ИППП с различными аналитическими и диагностическими характеристиками; Отсутствие обоснованных рекомендаций по использованию подтверждающих тестов; Какой метод использовать в дополнении к ПЦР? Screening Tests To Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Infections --- 2002 … Because of the greater sensitivity of NAATs, a NAAT is the only recommended additional test to verify a result from another NAAT… … В связи с более высокой чувствительностью МАНК, верификацию их результатов, следует проводить на основе альтернативных МАНКтестов… Тесты с аналитической чувствительностью меньшей, чем у метода ПЦР (ПИФ, Бак. посев) не корректно использовать для подтверждения его результатов! Гонококковая инфекция: МАНК 1 + МАНК 2 ≈ Бак. Посев * … Two positive NAATs, each targeting a different nucleic acid sequence, may be substituted for culture of the cervix or the urethra as legal evidence of infection... Harrison`s Principles of Internal Medicine 16th Edition, 2006 * Кроме случаев обследования детей и образцов экстрагенитальной локализации Диагностическая чувствительность и специфичность методов выявления C.trachomatis Метод Культ. клеток ПЦР (Амплисенс) NASBA (Амплисенс) ДЧ (%) 78,4 ДС (%) 100 100 100 100 100 Шипицына Е.В. С соавт. «Журнал акушерства и женских болезней» 2005, том LIV, выпуск 4, стр. 17-21 NASBA + ПЦР = Достоверность лабораторного диагноза Проблемы диагностики ИППП на современном этапе Разнообразие лабораторных тестов для диагностики ИППП с различными аналитическими и диагностическими характеристиками; Отсутствие обоснованных рекомендаций по использованию подтверждающих тестов; Отсутствие стандартизованных алгоритмов диагностики ИППП. Категории пациентов обследуемых на ИППП: Лица с симптомами и клиническими проявлениями инфекции Дифференциальная диагностика клинических синдромов Лица без клинических проявлений инфекции и лица с высоким риском инфекции Скрининг и установление бессимптомных инфицированных Клинически здоровые лица с низким риском инфекции Скрининг и исключение ИППП Лица с клинико-лабораторными признаками урогенитальной инфекции ДНК «…» НЕ обнаружена Синдромальная терапия ПЦР N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium ДНК «…» обнаружена Этиотропная терапия НАСБА-исследование не требуется Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции Уретрит N.gonorrhoeae C.trachomatis M.genitalium T.vaginalis Цервицит N.gonorrhoeae C.trachomatis M.genitalium T.vaginalis Выделения из влагалища G.vaginalis, A.vaginae, BVассоц. микроорганизмы M.hominis, Ureaplasma spp. Candida spp. Выявление возбудителей ИППП с помощью «АмплиСенс-NG/CT/MG/TV-мультипрайм» ПЦР на: N.gonorrhoeae T.vaginalis C.trachomatis M.genitalium Лица с клинико-лабораторными признаками урогенитальной инфекции ДНК «…» НЕ обнаружена Синдромальная терапия ПЦР N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium ДНК «…» обнаружена Этиотропная терапия НАСБА-исследование не требуется Половые партнеры (без клинических проявлений) лиц с установленной урогенитальной инфекцией ДНК «…» НЕ обнаружена ПЦР: N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium НАСБАисследование РНК «…» обнаружена РНК «…» НЕ обнаружена Инфекция Не установлена ДНК «…» обнаружена Этиотропная терапия Лица без клинических проявлений урогенитальной инфекции после сомнительных половых контактов ДНК «…» НЕ обнаружена НАСБАисследование (N.gonorrhoeae, C.trachomatis) РНК «…» НЕ обнаружена Инфекция Не установлена ПЦР: N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium РНК «…» обнаружена Этиотропная терапия ДНК «…» обнаружена НАСБАисследование РНК «…» НЕ обнаружена Инфекция Не установлена Лица без клинических проявлений – постоянные половые партнеры, семейные пары, прегравидарная подготовка ДНК «…» НЕ обнаружена Инфекция Не установлена ПЦР: N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium РНК «…» НЕ обнаружена Этиотропная терапия ДНК «…» обнаружена НАСБАисследование РНК «…» обнаружена Особенности эрадикации C.trachomatis при терапии разными препаратами Окончание приема Джозамицин Окончание приема Доксициклин A.Savicheva et al., 2006г. Лица после проведенной этиотропной терапии (контроль лечения) ДНК «…» НЕ обнаружена Эрадикация ПЦР : N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium РНК «…» НЕ обнаружена ≤ 1 недели – не полная элиминация ≥ 1-2 недель – рецидив инфекции ≥ 1-3 мес. – рецидив инфекции-?, реинфекция-? ДНК «…» обнаружена НАСБАисследование РНК «…» обнаружена ФЛОФОЦЕНОЗ- комплексный подход к диагностик е условно-патогенной флоры ПЦР-мультипрайм M.hominis U.urealyticum U.parvum (Количественный формат) диагностика генитальных микоплазм ПЦР-мультипрайм C.albicans C.galbrata C.crusei (количественный формат ) диагностика кандидоза ПЦР-мультипрайм G.vaginalis A.vaginae Lactobacteria Bacteria (количественный формат ) диагностика бактериального вагиноза