BD Modified CNA Agar • BD Modified CNA Agar with Crystal Violet
реклама
ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ — ГОТОВАЯ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ СРЕДА В ЧАШКАХ PA-255082.03 Ред.: сентябрь 2011 г. BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet НАЗНАЧЕНИЕ BD Modified CNA Agar (модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой) — это селективная среда для изоляции грамположительных бактерий из клинических образцов. BD Modified CNA Agar with Crystal Violet (модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового) используется для изоляции стрептококков и энтерококков и подавляет стафилококки и грамотрицательные бактерии. ПРИНЦИПЫ И ОПИСАНИЕ МЕТОДИКИ Микробиологический метод. Благодаря своей питательной композиции триптиказо-соевый агар Trypticase Soy Agar (TSA) является популярной средой как в необогащенном виде, так и в качестве основы для сред, содержащих кровь.1 Триптиказо-соевый агар Trypticase Soy Agar II (TSA II) — это улучшенный вариант, содержащий факторы роста для обеспечения более прозрачных гемолитических зон по сравнению с триптиказо-соевым агаром Trypticase Soy Agar (TSA) при его использовании с 5 % овечьей крови. Он обеспечивает превосходный рост и гемолиз бета-гемолитических стрептококков и других микроорганизмов. Эллнер (Ellner) с коллегами обнаружили, что среда, содержащая колистин и налидиксовую кислоту, на основе колумбийского агара, обогащенного 5 % овечьей крови, должна поддерживать рост стафилококков, гемолитических стрептококков и энтерококков, замедляя при этом рост видов Proteus, Klebsiella и Pseudomonas.2 Основа из колумбийского агара характеризуется относительно высоким содержанием углеводов, поэтому бета-гемолитические стрептококки могут вызывать зеленоватый цвет при гемолитической реакции, которая может быть ошибочно принята за альфа-гемолиз. Триптиказо-соевый агар Trypticase Soy Agar II обеспечивает более ярко выраженные гемолитические реакции, но колонии меньше по размеру. В модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar и модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet основой является поставляющий питательные вещества триптиказо-соевый агар Trypticase Soy Agar II, в который добавлены колистин и налидиксовая кислота для селективного поддержания роста грамположительных бактерий. Овечья кровь с добавлением телячьей сыворотки усиливает рост и позволяет обнаруживать гемолитические реакции. Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet помимо этих ингредиентов содержит кристаллический фиолетовый, который является эффективным ингибитором стафилококков. Поэтому данная среда используется для изоляции стрептококков и энтерококков, которые не подавляются этим красителем. PA-255082.03 -1- РЕАГЕНТЫ Рецептуры* на литр очищенной воды BD Modified CNA Agar Панкреатический гидролизат казеина 14,5 г Папаиновый гидролизат соевой муки 5,0 Натрия хлорид 5,0 Агар 14,0 Факторы роста 1,5 Колистин 0,01 Налидиксовая кислота 0,01 Телячья сыворотка 50,0 мл Овечья кровь, дефибринированная 5% pH 7,3 +/- 0,2 Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet помимо перечисленных выше ингредиентов содержит 2 мг кристаллического фиолетового на литр среды. * При необходимости изменяется и/или дополняется для соответствия критериям эффективности. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Только для профессионального применения. Не используйте чашки при наличии признаков бактериального заражения, изменения цвета, высыхания или других признаков разложения продукта. Прочитайте документ ОБЩИЕ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ, в котором приведено описание асептических методов работы, биологических опасностей и утилизации использованных продуктов. ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ После получения храните чашки в темноте при температуре от 2 до 8 °C в оригинальной обертке до начала использования. Избегайте замораживания и перегрева. Чашки могут быть засеяны до даты истечения срока годности (см. этикетку на упаковке) и инкубированы в течение рекомендованного времени инкубации. Чашки из открытых стопок по 10 чашек могут использоваться в течение одной недели при условии хранения с соблюдением чистоты при температуре от 2 до 8 °C. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Засейте репрезентативные образцы следующими штаммами (подробные сведения см. в документе ОБЩИЕ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ). Инкубируйте при температуре 35 2 °C в течение 18 – 24 ч, предпочтительно в аэробной атмосфере, обогащенной диоксидом углерода. Штаммы Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 PA-255082.03 BD Modified CNA Agar Рост от хорошего до превосходного; колонии зеленовато-серого цвета; альфа-гемолиз Рост от хорошего до превосходного; небольшие колонии белесого цвета с бетагемолизом -2- BD Modified CNA Agar with Crystal Violet Рост от умеренного до превосходного; колонии серовато-зеленоватого цвета; альфа-гемолиз Рост от хорошего до превосходного; небольшие колонии серо-голубого цвета; бета-гемолиз Штаммы Staphylococcus aureus ATCC 25923 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Proteus mirabilis ATCC 12453 Незасеянные BD Modified CNA Agar Рост от хорошего до превосходного; средние колонии от белого до желтого цвета с бетагемолизом или без него Рост от хорошего до превосходного; небольшие колонии белесого цвета с серым вкраплением; без гемолиза Ингибирование от частичного до полного; отсутствие роста Красный цвет (цвет крови) BD Modified CNA Agar with Crystal Violet Полное ингибирование Рост от умеренного до превосходного; небольшие колонии голубоватого цвета; без гемолиза Ингибирование от частичного до полного; отсутствие роста Красный цвет (цвет крови), синеватый оттенок МЕТОДИКА Поставляемые материалы BD Modified CNA Agar или BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, обе среды поставляются в чашках Stacker 90 мм. Свободные от микроорганизмов. Непредоставляемые материалы Дополнительная питательная среда, реагенты и лабораторное оборудование по мере необходимости. Типы образцов Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar — это селективная среда для изоляции множества грамположительных бактерий в аэробной бактериологии, которая может использоваться для работы с бактериологическими образцами всех типов. Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet — это подавляющая стафилококки селективная среда для изоляции стрептококков и энтерококков. Она используется, главным образом, для обнаружения стрептококков в образцах, полученных с тех участков тела, где эти микроорганизмы играют значительную роль в качестве возбудителей инфекций, например для обнаружения стрептококков группы A (Streptococcus pyogenes) в образцах из верхней части дыхательного тракта, хотя ее также можно использовать и для обнаружения этих и других стрептококков и энтерококков в других клинических образцах. Дополнительную информацию об этой среде см. в разделе ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ. Методика тестирования Засейте образец штрихами как можно раньше после его получения лабораторией в модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar или в модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet. Чашка для посева используется, главным образом, для отделения чистых культур от образцов, содержащих смешанную флору. В качестве альтернативы, если материал засевается непосредственно с тампона, проверните тампон над небольшим участком поверхности возле края, а затем сделайте штрихи с этого засеянного участка. PA-255082.03 -3- Для обеспечения обнаружения всех патогенных микроорганизмов в образце необходимо использовать колумбийский агар с 5 % овечьей крови BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood и дополнительную селективную среду в зависимости от типа образца.3,4 Поскольку для поддержания первичного выделения многих патогенных микроорганизмов требуется диоксид углерода, чашки следует инкубировать в аэробной атмосфере с содержанием около 3 – 10 % CO 2 . Инкубируйте чашки при температуре 35 – 37 °C в течение 18 – 24 ч или дольше, если необходимо. Результаты Типичная морфология колонии в модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar: Стрептококки (не Небольшие колонии от белого до сероватого цвета; входящие в группу D) возможен гемолиз в зависимости от вида Энтерококки (группа D) Колонии от небольших до средних, однако они превышают по размеру колонии стрептококков группы A; серые Стафилококки Средние колонии от белого до серого или кремового цвета; возможен гемолиз в зависимости от вида Микрококки Крупные колонии от белого до серого или от желтого до оранжевого цвета Коринебактерии Колонии от небольших до крупных, от белого до серого или желтого цвета Виды Candida Небольшие колонии белого цвета Небольшие колонии серого цвета со слабым бетаListeria monocytogenes гемолизом Грамотрицательные От частичного до полного ингибирования бактерии В модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet стафилококки и грамотрицательные бактерии будут частично или полностью ингибироваться, а стрептококки и энтерококки будут проявлять такой же рост, как и в модифицированном агаре с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar. Следует отметить, однако, что в нем колонии могут окрашиваться в голубоватый цвет в связи с накоплением кристаллического фиолетового. Другие грамположительные бактерии могут расти или подавляться в зависимости от их чувствительности к ингибиторам. Подробную информацию об интерпретации роста в чашках для первичной изоляции см. в справочных материалах.4–7 ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой BD Modified CNA Agar используется для изоляции грамположительных бактерий, таких как стрептококки, стафилококки, коринеформные бактерии, виды Listeria и др.2 Модифицированный агар с колистином и налидиксовой кислотой с добавлением кристаллического фиолетового BD Modified CNA Agar with Crystal Violet используется для изоляции стрептококков и энтерококков. Стафилококки в этой среде ингибируются. Другие грамположительные бактерии могут расти или ингибироваться в этой среде в зависимости от видов и их чувствительности к ингибиторам. Большинство грамотрицательных бактерий, таких как Enterobacteriaceae, ингибируются в этой среде. Результаты определения эффективности Для оценки роста и гемолитических реакций в этой среде было проведено внутреннее тестирование штаммов указанных далее видов. В качестве эталонной среды использовался колумбийский агар с CNA и 5 % овечьей крови BD Columbia CNA Agar PA-255082.03 -4- with 5% Sheep Blood. Чашки были инкубированы в обогащенной CO 2 аэробной атмосфере при температуре 35 – 37 °C в течение 20 ч. Результаты приведены в таблице 1. Ограничения применения методики Рост аэробных спорообразующих микроорганизмов (видов Bacillus и родственных им) может ингибироваться в этих средах. Эти среды не ингибируют грибки. Количество и видовое разнообразие бактерий, являющихся возбудителями инфекций, очень велико. Поэтому перед использованием данных сред для редко выделяемых или недавно описанных микроорганизмов пользователь должен сначала протестировать их на пригодность путем культивирования чистой культуры исследуемого микроорганизма. Несмотря на то что определенные диагностические тесты можно выполнять непосредственно в этих средах, для полной идентификации необходимо провести биохимическое и, если показано, иммунологическое тестирование с использованием чистых культур. Таблица 1. Результаты определения эффективности Виды микобактерий BD Modified CNA BD Modified CNA Agar Agar with Crystal Violet Рост; бета-гемолиз Рост; бета-гемолиз Streptococcus pyogenes Рост; бета-гемолиз Рост; бета-гемолиз Streptococcus agalactiae Рост; альфаStreptococcus pneumoniae Рост; альфагемолиз гемолиз Рост; слабый Рост; слабый Streptococcus sanguis альфа-гемолиз альфа-гемолиз Рост Рост Enterococcus faecalis Рост; бета-гемолиз Отсутствие роста Staphylococcus aureus Отсутствие роста Staphylococcus epidermidis Рост Рост; слабый бета- Отсутствие роста Listeria monocytogenes гемолиз Escherichia coli Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Отсутствие роста Очень слабый рост; рост ограничен Отсутствие роста BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood Рост; бета-гемолиз Рост; бета-гемолиз Рост; альфагемолиз Рост; слабый альфа-гемолиз Рост Рост; бета-гемолиз Рост Рост; очень слабый бетагемолиз Отсутствие роста Отсутствие роста Очень слабый рост; Очень слабый рост ограничен рост; рост ограничен Отсутствие роста Отсутствие роста СПРАВОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ 1. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In: E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504. 3. Forbes, B.A. and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 9th ed., p. 415. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO. 5. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Ruoff, K. L., R.A. Whiley, and D. Beighton. 2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA-255082.03 -5- 7. Teixeira, L.M., and R.R. Facklam. 2003. Enterococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. УПАКОВКА И НАЛИЧИЕ BD Modified CNA Agar with 5% Sheep Blood № по каталогу 255082 Готовая к использованию среда в чашках; 20 чашек BD Modified CNA Agar with Crystal Violet and 5% Sheep Blood № по каталогу 255086 Готовая к использованию среда в чашках; 20 чашек ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ Для получения дополнительной информации обратитесь к местному представителю компании BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD logo, Trypticase and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company 2011 BD PA-255082.03 -6-
