Insert SBVS_ver 0912_RU_doc3549

Общая информация
Компоненты
Меры предосторожности
Процедура анализа
Компоненты*
1.
Не пипетировать растворы ртом.
Все реагенты набора перед использованием должны иметь
набор входит мультивидовой конъюгат, позволяющий
Микропланшет с адсорбированным в лунках
рекомбинантным нуклеопротеином вируса
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
работать с материалом различных животных (консультации
Концентрат коньюгата (10 х)
Тест-система предназначена для выявления антител к вирусу
Шмалленберга в сыворотке или плазме крови крупного и
мелкого рогатого скота (овец, коз) в формате скрининга. В
можно получить в компании ООО ИнтерЛабСервис).
комнатную температуру (21 ± 5)°C и перемешаны.
кожи в случае контакта.
Лунки микропланшета адсорбированы рекомбинантным
нуклеопротеином вируса Шмалленберга.
•
90 мкл Буфера для разведения 14 в каждую лунку.
•
10 мкл Отрицательного контроля в лунки A1 и B1.
Отрицательный контроль
ожоги кожи (R35). При попадании на кожу и в глаза
•
10 мкл Положительного контроля в лунки C1 и D1.
Буферный раствор 14
следует немедленно промыть их большим количеством
•
10 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
Буферный раствор 3
воды и обратиться за медицинской помощью(S26).
3.
Концентрат промывочного раствора (20 х)
При
внесении
исследуемых
в
лунки
сывороток
микропланшета
и
промывки в
лунки
Стоп-реагент
окисления.
* Поставляемые количества компонентов обозначены на
этикетке комплекта
антигеном, образуя комплексы антиген – антитело.
этапа
прямого
вносится
5.
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный раствор
3. Все компоненты, имеющие одинаковые наименования
(промывочный раствор, растворители) могут применяться
раствора
в
лунках
свидетельствует
против вируса Шмалленберга:
-
ко всей гамме продукции IDvet.
об
отсутствии или наличии в исследуемых образцах антител
Дополнительные материалы и
оборудование
При наличии антител раствор имеет синий цвет,
1.
который становится желтым после добавления
Пипетки
одноканальные
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
стоп-реагента;
2.
-
При отсутствии антител раствор не окрашивается.
Оптическую
плотность
раствора
фотометрически при длине волны 450 нм.
Страница 2
SBVS версия 0912 RU
и
не
допускать
его
3.
Инкубировать 45 мин ± 5 мин при температуре 21°C (±
5°C).
4.
Промыть
микропланшет
3
раза
Промывочным
Все одноразовые материалы, используемые в работе,
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку. Избегать
необходимо
высыхания лунок между этапами промывки.
продезинфицировать
в
5%
растворе
5.
Подготовить конъюгат (1X) разведением концентрата
конъюгата
(10X)
в
Буферном
растворе
3
в
соотношении 1:10.
Дезактивировать все реагенты перед уничтожением.
2. Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.
лунки добавляют субстратный раствор (ТМБ). Реакцию
Окрашивание
света
0
автоклавировать при температуре +120 С.
6.
останавливают, добавляя стоп-реагент.
Перемешать микропланшет вручную или с помощью
шейкера для смешания всех компонентов.
хранят при Т +5°C (± 3°C).
к вирусу Шмалленберга, образуя комплексы антиген –
антитело – конъюгат. После отмывки микропланшета в
солнечного
натрия гипохлорида за 1 час до начала работы или
конъюгат,
меченный пероксидазой, который связывается с антителами
2.
Не оставлять субстратный раствор под действием
Субстратный раствор
антитела,
специфичные к вирусу, связываются на твердой фазе с
После
4.
образцов
контролей,
Внести:
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M) может вызвать серьезные
Положительный контроль
Описание и принцип действия
1.
3.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
микропланшета.
измеряют
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
5.
Ручная или автоматическая промывочная установка.
Подготовка образцов
Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
рекомендуется предварительно внести все образцы и
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
внести
многоканальным
дозатором
в
рабочий
микропланшет.
6.
Внести 100 мкл Конъюгата (1X) в каждую лунку.
7.
Инкубировать 30 мин ± 3 мин при 21°C (± 5°C).
8.
9.
Для приготовления промывочного раствора
(1X)
необходимо развести концентрат промывочного раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
микропланшет
3
раза
Промывочным
высыхания лунок между этапами промывки.
Подготовка промывочного раствора
Доведите концентрат промывочного раствора (20х) до
комнатной температуры перед разведением. При наличии
кристаллов необходимо тщательно перемешать.
Промыть
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку. Избегать
Внести 100 мкл Субстратного раствора в каждую
лунку.
10.
Инкубировать 15 мин ± 2 мин при 21°C (± 5°C) в
темноте.
11.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку для
остановки реакции.
12.
Измерить оптическую плотность (ОП) при 450 нм.
Страница 3
SBVS версия 0912 RU
Certified
management
system
Валидация
Интерпретация результатов
Результаты теста считаются достоверными, если:
Для каждого образца рассчитывается значение S/P (S/P%):
среднее
значение
оптической
ОП образца - ОП к-
плотности
S/P % =
положительного контроля (ОПк+) больше 0,35:
x 100%
-
ОП к+ - ОП к
ОПк+ > 0,35
отношение
между средними значениями
ОП
положительного контроля (ОПК+) и отрицательного
контроля (ОПк-) больше, чем 3:
Значение S/P
Интерпретация
S/P % ≤ 50%
отрицательный
50% < S/P % ≤ 60%
сомнительный
S/P % > 60%
положительный
ID Screen®
Schmallenberg virus Indirect
Multi-species
Screening test
ОПК+ / ОПК- > 3
Важно: положительные результаты могут быть
подтверждены другими серологическими методами
(реакция
нейтрализации
иммунофлуоресценция).
вируса,
непрямая
Тест-система для выявления антител к вирусу Шмалленберга в сыворотке
или плазме крови КРС и МРС непрямым иммуноферментным методом
(ELISA) (скрининговый формат)
Для диагностики in vitro
Август 2012: Температура хранения микропланшет
от +50С ± 30С. Особые условия хранения
микропланшет (см. доп. инструкцию ”Schmallenberg
Plate Storage Condition”).
Сентябрь 2012: Замена Буфера для разведения 11
на Буфер для разведения 14; разведение образцов
внутри рабочего микропланшета (предварительное
разведение не требуется)
SBVS версия 0912 RU
Страница 4
SBVS версия 0912 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: info@id-vet.com