микробиологической лаборатории. Правила работы

ЛЕКЦИЯ 6
ОРГАНИЗАЦИЯ И ОБОРУДОВАНИЕ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ
ЛАБОРАТОРИИ. ПРАВИЛА РАБОТЫ С
МИКРООРГАНИЗМАМИ.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Работа
в
микробиологической
лаборатории требует строгого соблюдения
специальных правил, что определяется
двумя основными положениями:
1.
В микробиологической практике
используют, главным образом, чистые
культуры микроорганизмов, т. е. популяции
микроорганизмов одного вида.
Во избежание контаминации культур
необходимо строгое соблюдение правил
асептики.
2.
При
исследованиях
с
неидентифицированными
микроорганизмами, при их выделении из объектов
окружающей среды могут быть выделены
патогенные
и
условно
патогенные
микроорганизмы. Кроме того, клетки как
сапрофитных,
так
и
патогенных
микроорганизмов
могут
являться
аллергенами
для
определенных
индивидуумов.
Обеспечение личной безопасности,
безопасности окружающих и окружающей
среды приобретает особое значение.
Типы микробиологических лабораторий
в зависимости от задач и выполняемых
исследований:
1. Диагностические
(клинико–
диагностические
и
санитарноэпидемиологические) лаборатории:
проводят
микробиологическую
диагностику инфекционных заболеваний:
выделение и идентификацию возбудителя,
выявление иммунологических изменений у
больного.
На
основании
результатов
лабораторных исследований составляется
рациональная схема терапии.
выполняют
бактериологические,
вирусологические,
микологические,
серологические исследования материала от
здоровых людей, работающих в системе
здравоохранения, торговли, общественного
питания, образования, сельского хозяйства и
пр.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
3. Научно-исследовательские микробиологические
лаборатории: изучение физиолого-биохимических
и генетических особенностей микроорганизмов,
механизмов и способов получения БАВ и т.д.
4.
Производственная
микробиологическая
лаборатория (фармацевтического производства):
осуществляет
микробиологический
контроль
сырья, вспомогательных материалов, готовой
продукции, санитарно-гигиенического состояния
производственных помещений, технологического
оборудования, инвентаря, тары, рук,
одежды
работающих, а также разработку и валидацию
методик
определения
микробиологических
показателей, работу с культурами-продуцентами
БАВ и т.д.
5.
Специализированные
лаборатории,
обеспечивающие безопасность персонала и
невозможность
«утечки»
патогенных
микроорганизмов за пределы лаборатории : работа
с возбудителями особо опасных инфекций.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Санитарные правила СП 17 -129 РБ 2000
«БЕЗОПАСНОСТЬ
РАБОТЫ
С
МИКРООРГАНИЗМАМИ III-IY ГРУПП
ПАТОГЕННОСТИ И ГЕЛЬМИНТАМИ».
Утверждены и введены в действие
Постановлением Главного государственного
санитарного врача Республики Беларусь от
27 июля 2000 года № 40.
Требования
Правил
обязательны
для
выполнения
всеми
предприятиями,
учреждениями,
организациями
(лабораториями)
на
территории
Республики
Беларусь независимо от их ведомственной
принадлежности и форм собственности,
проводящими работы с патогенными
биологическими агентами (ПБА) III – IV
групп патогенности, а также для проектных,
строительных
и
других
организаций,
занимающихся вопросами выбора земельных
участков, проектирования, строительства и
реконструкции лабораторий.
Требования Правил направлены на охрану
здоровья персонала и обеспечение защиты
окружающей среды при работе с ПБА III-IY
групп патогенности.
Патогенные биологические агенты (ПБА)
- патогенные для человека микроорганизмы
(простейшие, грибы, бактерии, микоплазмы,
риккетсии,
хламидии,
вирусы),
модифицированные
генно-инженерными
методами микроорганизмы, яды биологического
происхождения (токсины), гельминты, а также
биологический материал (включая кровь, другие
биологические
жидкости
и
экскреты
организма), подозрительные на содержание
перечисленных агентов.
По степени опасности для человека и
общества все ПБА отнесены к 4-м группам
патогенности.
В качестве источника заболеваний человека
и животных, вызываемых микроорганизмами IIY групп, следует считать инфицированных:
человека,
теплокровных
животных,
переносчиков, объекты внешней среды.
Наиболее
опасные
микроорганизмы
отнесены в 1 и 2 группу патогенности. Для
работы с ними требуются специальные условия
и разрешения.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Классификация патогенных для человека микроорганизмов (бактерий и грибов)
Группа
патогенности
Характеристика
Наименование
микроорганизма
Заболевание, вызываемое
микроорганизмом
БАКТЕРИИ
индивидуаль- Yersinia pestis
общественный
I
высокий
ный и
риск
II
высокий индивидуаль- Вacillus anthracis
ный и низкий общественный риск
Brucella melitensis
Legionella pneumophila
Vibrio choleraе
III
умеренная
индивиду- Bordetella pertussis
альная опасность, низкая Corinebacterium
общественная опасность diphtheriae
Salmonella typhi
возбудитель чумы
возбудитель
сибирской
язвы
возбудитель бруцеллеза
возбудитель
легионеллеза
возбудитель холеры
возбудитель коклюша
возбудитель дифтерии
возбудитель
тифа
брюшного
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
IV
отсутствие или низкая Clostridium perfringens
индивидуальная и общественная опасность
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
возбудитель газовой
гангрены
возбудитель энтерита
возбудитель местных
воспалительных
процессов, сепсиса
ГРИБЫ
II
III
IV
Аналогично
бактериям
Blastomyces brasiliensis
возбудитель
бластомикоза
Aspergillus flavus
возбудитель
аспергиллёза
Candida albicans
возбудитель кандидоза
Aspergillus brasiliensis
(niger)
возбудитель
аспергиллёза
Candida tropicalis
возбудитель кандидоза
Microsporum spp.
возбудитель
микроспории
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Требования к устройству микробиологических лабораторий для работы
с ПБА III – IV групп патогенности:
Общие требования к организации лабораторий:
• Типовые проекты, а также проекты реконструкции и перепланировки
зданий и помещений лаборатории подлежат обязательному согласованию
с органами государственного санитарно-эпидемиологического надзора;
• Производственные лаборатории, должны располагаться в отдельно
стоящих зданиях, не связанных с производственными помещениями, или
изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход. Не допускается
их размещение в подвальных и цокольных этажах зданий;
• Диагностические лаборатории, должны иметь 2 входа: один - для
сотрудников, другой - для доставки материала на исследование.
Допускается получение материала через передаточное окно;
• В лабораториях научно-исследовательских учреждений, а также в
производственных лабораториях, проводящих экспериментальные
исследования, допускается наличие одного входа;
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Требования к планировке,
внутренней отделке и организации работы в
микробиологической лаборатории
1. Работа с ПБА может проводиться только в лабораториях, имеющих разрешение,
выданное в установленном порядке.
2. В составе микробиологической лаборатории обязательным должно быть наличие
следующих основных и вспомогательных помещений:
• Для приема и регистрации проб,
• Для проведения исследований,
• Боксированные помещения,
• Моечная,
• Автоклавная для обеззараживания отработанного материала ("грязная автоклавная"),
• Автоклавная для стерилизации посуды и питательных сред ("чистая автоклавная"),
• Средоварочная с боксом для разлива питательных сред,
• Гардеробы для домашней и рабочей одежды персонала,
• Комната отдыха и приема пищи,
• Комната для работы с документацией и литературой,
• Кладовые для хранения питательных сред, химических реактивов, лабораторной
посуды, контейнеров, уборочного инвентаря и др.
• Туалет.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
3. Лаборатории и боксы должны быть обеспечены устройствами приточно-вытяжной
вентиляции.
4. Движение «заразного» и «чистого» материалов должно быть разделено во
времени.
5. Внутренняя отделка помещений лаборатории: поверхность пола, стен и потолка
должна быть гладкой, без щелей, легко обрабатываемой, устойчивой к действию
моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими. Окна и
двери должны быть герметичными.
6. В помещении моечной пол должен быть покрыт керамической плиткой; покрытие
пола
в
помещениях
автоклавных
должно
быть
выполнено
из
электроизолирующего материала.
7. Покрытие потолка и стен выше 1,5 или 2 м от пола допускается силикатными
красками; для отделки потолка может применяться покрытие масляными или
водоэмульсионными красками. Не допускается в помещениях лабораторий
применение подвесных потолков.
8. Лаборатория должна быть оснащена необходимым оборудованием и техникой:
термостаты, автоклавы, сухожаровые шкафы, центрифуги, холодильники,
измерительные приборы. Все оборудование и техника должны быть подписаны,
аттестованы и проходить периодическую поверку для подтверждения их
соответствия необходимым требованиям, иметь паспорта и инструкции по
применению.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
9. Лаборатория должна быть оснащена необходимой мебелью: шкафы, стеллажи,
столы, оргтехника и др.
10. Лабораторное оборудование и мебель должны быть прочными, изготовленными
из устойчивых к действию дезинфектантов материалов;
11. Помещения лабораторий должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых;
12. Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения.
13. Для создания асептических условий при проведении микробиологических
исследований и других работ, а также предотвращения микробиологического
загрязнения внешней среды в составе лаборатории предусматривается устройство
боксированных помещений (боксов).
Боксированное
помещение
(бокс)специальным
образом
устроенное
помещение, состоящее из собственно бокса
и предбокса, предназначенное для создания
асептических условий при проведении
исследований, а также для предотвращения
микробного загрязнения внешней среды.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
‐лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
•
•
•
•
•
Cтены,
пол и потолок помещений бокса должны быть облицованы
материалом, устойчивым к действию дезинфицирующих средств.
Не должно быть недоступных для влажной дезинфекции поверхностей,
исключено движение воздуха, создаваемое сквозняками, должны
отсутствовать инженерные коммуникации.
Допускается устройство в предбоксе раковины для мытья рук с подводкой
горячей и холодной воды.
Боксы должны быть оборудованы бактерицидными облучателями.
Эксплуатация бактерицидных облучателей должна осуществляться в рамках,
указанных в паспорте и инструкции по их эксплуатации. Бактерицидное
облучение проводится после влажной уборки; вход в помещение разрешается
через 30 минут после отключения облучателя.
Не разрешается устанавливать в помещении бокса лабораторное
оборудование, кроме рабочего стола, бактерицидной лампы, необходимых
инструментов для посева; в предбокснике допускается размещение
термостатов для выращивания соответствующих данному боксу посевов;
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
•
•
"Чистая" зона - помещение
или
группа
помещений
лаборатории, где не про
•
водятся манипуляции с ПБА.
"Заразная"
зона
помещение
или
группа
помещений лаборатории, где
проводятся манипуляции с
патогенными биологическими
агентами и их хранение.
Столы, на которых проводят работу с ПБА IIIIY групп патогенности, должны быть покрыты
пластиком
или
другим
материалом,
устойчивым к действию дезинфицирующих
средств
и
фламбированию
горящим
спиртовым факелом, не должны иметь швов и
трещин;
Ежедневная уборка помещений лаборатории
должна проводиться влажным способом с
использованием водно-мыльных растворов в
«чистой» и с применением дезинфицирующих
растворов и моющих средств в «заразной»
зоне.
В помещениях боксов должна проводиться
еженедельная
генеральная
уборка
с
применением
дезинфицирующих
средств
путем протирания поверхности мебели,
приборов, аппаратов, а также стен (на высоту
до 2 метров). После влажной
уборки
помещения
облучают
бактерицидными
лампами в течение 30-60 минут.
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Требования к режиму работы в микробиологической лаборатории:
•
•
•
•
•
Работу с ПБА III-IY групп патогенности выполняют специалисты с высшим и
средним специальным образованием, прошедшие соответствующую
подготовку;
Персонал допускается к работе с ПБА только после проведения инструктажа
по соблюдению требований биологической безопасности; последующие
инструктажи проводятся не реже 2 раз в год;
Доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в
специальных контейнерах, биксах или сумках-холодильниках; доставляемые
емкости с жидким материалом должны быть закрыты резиновыми или
пластмассовыми пробками, исключающими выливание содержимого во время
транспортирования;
Во время работы двери боксов и предбоксников должны быть закрыты; выход
из бокса во время проведения работы запрещается;
Все инструменты, имевшие контакт с ПБА III-IY групп патогенности,
фламбируются в пламени горелки или сбрасываются в емкости с
дезинфицирующим раствором или специальные емкости для последующего
обеззараживания;
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
•
•
•
•
•
Работы по обеззараживанию автоклавированием ПБА III-IY групп
патогенности, стерилизации питательных сред и лабораторной посуды,
производящиеся в одном помещении (автоклавной), должны быть разделены
во времени;
По окончанию работы все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в
хранилища (холодильники, термостаты, шкафы); в обязательном порядке
производится дезинфекция рабочих поверхностей столов;
Остатки ПБА III-IY групп патогенности, использованная посуда собираются в
закрывающиеся емкости и передаются в автоклавную для уничтожения
автоклавированием или путем погружения в дезинфицирующие растворы;
По окончании рабочей смены следует обработать и вымыть руки, снять
специальную одежду и снова вымыть руки; по окончании отдельных этапов
исследования персонал обязан обработать руки 70-ти процентным раствором
спирта и вымыть руки с мылом. Запрещается выходить из рабочих
помещений в специальной одежде;
Прием посетителей, хранение пищевых продуктов, прием пищи разрешается
только в специально отведенных местах в "чистой" зоне лаборатории
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Требования к порядку использования
средств индивидуальной защиты (СИЗ):
•
•
•
•
•
Сотрудники лабораторий должны быть
обеспечены
медицинскими
халатами,
комбинезонами, шапочками, сменной обувью
и другими СИЗ в зависимости от характера
выполняемых работ и в соответствии с
действующими нормами;
Рабочая одежда и обувь должны быть
индивидуальными, соответствовать размерам
работающих и храниться отдельно от личной
одежды;
При
проведении
исследований
в
боксированных помещениях производится
смена медицинского халата в предбоксе
Смена рабочей одежды должна проводиться по
мере загрязнения, но не реже 1 раза в неделю;
Перед сдачей в стирку защитная одежда
должна быть обеззаражена
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Режим обеззараживания различных объектов, зараженных или подозрительных
на заражение микроорганизмами III-IY групп патогенности
Способ
обеззара
живания
Паровой
стерилиза
тор
(автоклав)
Сухожаровой
шкаф
Кипячение
Объект,
подлежащий
обеззараживанию
Обеззаражива
ющий
агент
1. Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри, Водяной
насыщенный пар
гребенки для сушки культур, шприцы и другое).
под
2. Бактериологические посевы.
давлением
3. Жидкие отходы, смывные воды.
4. Резиновые пробки, шланги, груши для пипетирования зараженного
материала.
5. Перчатки резиновые.
6. Защитная одежда персонала (халаты, косынки, ватно-марлевые
маски, шапочки.
1. Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри,
Горячий воздух
гребенки для сушки культур, шприцы).
2.Пинцеты, скальпели, ножницы.
1. Резиновые пробки, шланги, груши для пипетирования зараженного
материала
2. Пинцеты, скальпели, ножницы, предметные и покровные стекла
Вода, раствор
детергента,
2 % раствор
пищевой соды
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
Прокаливан
ие в
пламени
горелки
1. Петли для пересева микроорганизмов
Пламя горелки
Фламбирование
горящим
факелом
1. Лабораторные столы
2. Внутренние поверхности термостатов
3. Внутренние поверхности холодильников
4. Пинцеты, скальпели, ножницы
Спирт этиловый
технический
Протирание
раствором
1.Микроскопы
2.Незащищенные участки кожи, руки
Спирт этиловый,
дезинфицирующи
е средства
Орошение
или протирание дезинфицирующи
м раствором
1. Поверхности в помещениях (пол, стены, двери, подоконники), Дезинфицируюмебель, оборудование, шкафы, и др. мебель, помещения
вивария
щие
средства,
2. Лабораторные столы
разрешенные
к
применению
Замачивание 1.Уборочный материал (ветошь, мочалки и др)
Дезинфицируюв дезинфици- 2. Защитная одежда персонала (халаты, косынки, ватно-марлевые щие средства
маски, шапочки).
рующем
растворе
1. Трупы лабораторных животных, подстилочный материал, остатки Пламя
Сжигание
кормов, выделения животных
2. Мусор
Лекция 6. Организация и оборудование микробиологической
лаборатории. Правила работы с микроорганизмами.
•
•
•
•
Ликвидация последствий аварий
Авария нештатная ситуация, при которой создается реальная или
потенциальная возможность выделения ПБА в воздух производственной
зоны, окружающую среду или заражения персонала.
При авариях работу с ПБА немедленно прекращают, ставят в известность
руководителя лаборатории или лицо, его замещающее;
Все открытые части тела обрабатывают дезинфицирующим раствором или 70ти процентным спиртом; при попадании инфекционного материала на
слизистые оболочки их немедленно обрабатывают:
- глаза - 1-процентным раствором борной кислоты, несколькими каплями 1процентного раствора азотнокислого серебра или струей воды;
- в нос закапывают, а рот и горло прополаскивают 0,05-процентным раствором
борной кислоты;
При аварии, связанной с ранением или другим повреждением кожных
покровов, перчатки (если работа проводилась в них) обрабатываются
дезраствором, снимаются, из ранки выдавливается кровь, руки
обрабатываются 70-процентным спиртом, затем моются водой с мылом, ранка
смазывается раствором йода;
Проводится обеззараживание места аварии; защитная одежда замачивается в
дезинфицирующем растворе; все сотрудники, находившиеся в зоне аварии,
должны принять душ;