Новые технологии индикации патогенов Дятлов И.А. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ПРИКЛАДНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ПРИКЛАДНОЙ
МИКРОБИОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ
ОБОЛЕНСК
Новые технологии индикации патогенов
Дятлов И.А.
ИНДИКАЦИЯ патогенных
биологических агентов

Комплекс специальных
организационных и диагностических
мероприятий, проводимых с целью
подтверждения факта проявления,
выброса или применения патогенного
биологического агента с
определением видовой
принадлежности возбудителя.
2
Биологические агенты, цитируемые под
разными названиями, представляющую
наибольшую опасность.
ООН (1969 г.),
ВОЗ (1970 г.),
КБО CBM-F (1992 г.),
Австралийская группаe (1992 г.),
НАТО (1996 г.),
CDC категория А (2000 г.),
Проект протокола к КБО (2001 г.).
Всего 46 нозологических форм
3
Биологические агенты
Заболевания
Категория А
Variola major
Оспа натуральная
Bacillus anthracis
Сибирская язва
Yersinia pestis
Чума
Clostridium botulinum (ботулинические токсины)
Ботулизм
Francisella tularensis
Туляремия
Филовирусы и Аренавирусы ( вирусы Эбола и Ласса)
Вирусные геморрагич. лихорадки)
Категория В
Coxiella burnetii
Лихорадка Ку
Brucella spp.
Бруцеллёз
Burkholderia mallei
Сап
Burkholderia pseudomallei
Мелиодоз
Alphaviruses (ВЭЛ, ВсЭЛ, ЗЭЛa)
Энцефалиты вирусные
Rickettsia prowazekii
Сыпной тиф
Токсины ( Рицин, Стафилококковые, Бутоло и др.)
Токсические синдромы
Chlamydia psittaci
Орнитозы
Патогены угрожающие пищевой безопасности (e.g., Salmonella spp., Escherichia coli O157:H7)
Патогены угрожающие водной безопасности (e.g., Vibrio cholerae, Cryptosporidium parvum)
Категория С
Возникающие опасные агенты (например Nipah вирус, хантавирусы и др.)
4
Некоторые термины и определения
в индикации








Иммуносенсоры - устройства, регистрирующие специфическое
взаимодействии антигена с антителом
Поликлональные антитела - смесь разнообразных антител с различной
степенью аффинности и специфичности.
Моноклональные антитела – эпитопная специфичность, получение
неограниченного количества стандартных и высокоспецифичных антител.
Рекомбинантные антитела – клонирование в фагах (фаговый дисплей),
бактериальных или дрожжевых клетках.
Искусственные антитела - аптамеры-синтетические олигонуклеотиды
прочно взаимодействующие с антигенами
Иммунохроматография – вариант иммуноферментного метода с сухими
полосками.
Иммуносепарация - с помощью антител, нагруженных магнитными
частицами.
Биочипы - аналитические системы для селективного определения веществ
и организмов, комбинация биологической системы узнавания и физического
преобразователя. Три основных типа - электрохимические, оптические и
масс-метрические.
5
Основные элементы схемы
диагностических исследований
Отбор и подготовка проб
Выделение
Выделениепатогенного
патогенногоагента
агентасспомощью
помощьюбиологической
биологическойпробы
пробы
Использование
транспортныхсред
среддля
длядоставки
доставки
материала
в Центры
Использование транспортных
материала
в Центры
индикации
Индикации
и диагностики
и Центрыдиагностической
верификации деятельности
и диагностики
и Центры верификации
Использование элективных и селективных питательных сред для
выделения возбудителя и его идентификации.
Инструментальные методы иммунофлюоресцентного, иммуноферментного, иммунохроматографического, геномного анализа, биочипы для
выявления: возбудителей, токсинов и ядов биологического происхождения.
ИНДИКАЦИЯ
6
Значимость коллекционной
деятельности для целей индикации





Взаимодействие коллекций и их специализация.
Развитие сети глобального биоресурсного центра
(GBRCN) – использование информации для
дифференциации микробов. WFCC – ATCC.
Развитие вопросов таксономии и и геносистематики на
основе сиквенирования – новые подходы.
Технологические аспекты функционирования
коллекций культур: хранение систематизация, обмен.
Инновационный аспект развития коллекционной
деятельности.
Правовые аспекты коллекционной деятельности.
7
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Основные проблемы: низкая концентрация ПБА в пробе,
вещества мешающие анализу, деструкция мишеней
Мишень ДНК/РНК: Специальные реагенты
разрушающие загрязнения. Картриджи
(микроколонки) с ионообменными смолами
для выделения ДНК.
Мишень – антигены, токсины: Картриджи
(микроколонки) с антителами для
выделения антигенов. Иммуномагнитные
частицы для выделения и
концентрирования.
Имеющиеся пробоотборники импакторы и и импинжеры: ПАБ-1,
Кротова, Дьяконова, ПОВ-1, «Микроциклон», УПА и т.д.
малоэффективны и не удовлетворяют новым требованиям.
8
Совмещение процессов пробоотбора,
пробоподготовки и анализа
Пробоотборник совмещен с двумя аналитическими блоками
-иммунохроматографическим и биосенсорным.
Возможность использования магноиммуносорбентов.
Отечественная разработка – испытано на ООИ
9
Существующие полевые
пробоотборники с детекцией
Прибор особой прочности для
идентификации патогенных веществ
(биологический детектор) R.A.P.I.D.
Оснащена 4 гражданская группа
поддержки США
Комплекс отечественных
технических решений по отбору
проб для микробиологического
анализа. Пробоотборник
биоаэрозолей «ГосНИИ БП».
Инфракрасный химбиодетектор
10
Повышение
эффективности биопроб
Искусственное снижение антибактериальной резистентности модельных
животных с помощью иммуносупрессоров. Cтероидные гормоны
(гидрокортизон, преднизолон), Двухвалентное сернокислое железо (FeSO4)
Цитостатики (циклофосфан)
Использование нескольких путей введения подопытным животным
исследуемого материала. Подкожное и внутричерепное введение,
Внутрибрюшинное и внутричерепное введение. Внутрибрюшинное и
внутрижелудочное введение.
Выбор адекватных модельных животных при подозрении на конкретную
инфекцию. Мыши (чума, сибирская язва, туляремия, сальмонеллёз, ботулизм),
Крысы (чума) Морские свинки (сибирская язва, чума, бруцеллёз, дифтерия,
туберкулёз, ботулизм) Хомяки (сап, мелиоидоз).
Одновременное использование нескольких видов животных для постановки
биопроб.
Объединение образцов биоматериалов для сокращения количества
используемых животных
Концентрирование биоматериала на бактериальных фильтрах перед
введением животным.
Использование в полевых условиях клеток-микроизоляторов, крышка с
НЕРА-фильтром.Предотвращение вторичной контаминации подопытных
животных. Ограждение от неконтролируемого проникновения в клетку других
животных. Обеспечивает безопасность окружающей среды и экспериментатора
11
Питательные среды
Транспортные среды (сохранение
жизнеспособности)
В России разрабатывается и
выпускается крайне мало, что
сказывается на уровне диагностики и
выделении культур
Для бактерий: Кери-Блейра, Среда Эймса (с углем и без него )
Для вирусов: основной раствор Хенкса, RPMI, ИГЛА и др.)
Обеспеченность России питательными средами высокая.
Проблема состоит в разработке и внедрении высокоэффективных
хромогенных элективных и селективных сред.
Хромогенная йерсиниозная среда. Агар МакКонки. Шокодадный агар. Флюорохромнаяфлуоресцентная среда ФСБ бульон. Среда типа Вильсона Блэера. Макконки бульон
(вместо среды Кесслера).
12
Дифференциация Bacillus по морфологии
на хромогенных средах

Bac. antracis
Bac. subtilis
Bac.cereus (var.antracoides)
Среда с сорбитолом, бромтимоловым синим и АБ для
дифференциации и выделения В.antracis
13
Основные требования к инструментальным
методам выявления микроорганизмов
Пределы детекции: микроорганизмы - 100 кл/мл,
токсины - ниже 1 нг/мл. Время: меньше 5 минут.
Специфичность: вид/род. Размер: носимая в руках. Цена: низкая
Заражающие дозы некоторых возбудителей и агентов – требования к
нижнему пределу детектирования и основа выбора чувствительности
метода.
Возбудитель или агент
Минимальная заражающая
доза
Сибирская язва
10,000 спор
Бруцеллез
10 клеток
Чума
10 клеток
Туляремия
10 клеток
Оспа
10 вирионов
Геморрагические лихорадки
единичные вирионы
Ботулинических токсин
~70 ng
Стафликокковый токсин B
~30 ng
14
Сравнение методов выявления
Методы выявления и идентификации
Время до
результата
Культивирование.
Прямая микроскопия, питательные среды, биохимия,
фагодиагностика……………………………………………………….
Реакция нарастания титра фага. Реализовано для B.anthracis с
детекцией фага «Оболенск R-1» ИХ-тестом…………………………
4-16 ч
Выявление нуклеиновых кислот.
ПЦР, real-time ПЦР, МР-ПЦР, ДНК-зонды………................................
Секвенирование………………………………………………………....
от 30 мин
от 24 ч
Иммунодиагностические методы
ИФА, ДОТ, Иммунофлуоресценция, Латекс-агглютинация (РПЛА).
Иммунохроматография…………………………………………………
Иммуносенсоры…………………………………………………………
Приборы. Bioplex 200 (Biorad) 5x102 vp/ml
SectorImager 2400 (Meso scale) 103 vp/ml
M1M (BioVeris) 104 vp/ml
Abicap columns (Senova) 5x104 vp/ml
3ч
15 мин
30 мин
3h
1,5h
2,5h
1h
24 ч
15
Выявление возбудителей с помощью
технологии биочипов
Биочипы - аналитические системы для селективного определения
веществ и организмов, состоящая из биологической системы
узнавания и физического преобразователя.
электрохимические, оптические и масс-метрические
Простые
гибридизационные микрочипы
для выявления
ООИ
16
Разработки для ООИ – ДНК и белковые
гелевые чипы. Токсины – на основе МКА.
A
B
E
Iфлуор.о.е.
200
100
0
0
C
D
50
100
150
200
250
мкм
F
Iфлуор.о.е.
200
100
0
0
5
10
15
20
Изображения
гелевого
элемента
микрочипа,
полученные на
конфокальном и
флуоресцентном
микроскопах.
25
мкм
Первое направление, реализованное в ФЦП «Биопатоген»
17
1
7
2
8
3
9
4
10
5
11
6
Биочип для одновременного количественного анализа десяти
биотоксинов: 1 – летального фактора сибиреязвенного токсина,
2 – протективного антигена сибиреязвенного микроба, 3 –
холерного токсина F5/H3, 4 – рицина, 5 – SeA, 6 – SeB, 7 – SeC1,
8 – SeI, 9 – SeE, 10 – SeG, 11 – контроль (-).
18
Внедрение технологии планарных
микрочипов для диагностики
Нет спор
3х103 спор/мл
Создание технологии микрочипов с МКА для скрининга
большого количества образцов (в рамках результатов ФЦП
«ХИМБИО» 2009 г. Участники ЦНИИЭ, ГНЦ ПМБ, ГНЦ
«Вектор», РосНИПЧИ «Микроб»)
На примере возбудителя сибирской язвы
Необходима закупка стандартного оборудования для
разработки чипов, отработка методологии, регистрация
чипов, затем внедрение в территориальных лабораториях
и ПЧС. Разработка отечественного оборудования.
19
ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ ПРОФИЛИ ПОСЛЕ ГИБРИДИЗАЦИИ НА ДНКЧИПЕ
Отрицательный
флуоресцируют
соответствующие
границы эррея
контроль
(К-)
–
только
споты,
локализации
маркера
Наличие B.anthracis, флуоресцируют
споты,
соответствующие
локализации
зондов B.a.pagA и B.a.capB
Наличие F.tularensis, флуоресцируют
споты,
соответствующие
локализации
зондов F.t fopA, F.t RD1 и F.t.mVin
Наличие Y.pestis, флуоресцируют споты,
соответствующие
локализации
зондам
локусов Y.p сaf1 (два зонда), Y.p caf2,
Y.p.YPO0394, Y.p. YPO0397.
20
Преимущества планарных чипов для
широкого внедрения
•Возможность организации
массового производства.
•Низкая стоимость чипа.
•Низкая стоимость ридеров.
•Длительный срок хранения
(до 2-х лет).
•Возможность использования
персоналом без специальной
подготовки.
•Индикация множества
патогенов одновременно в
короткие сроки.
21
Последние достижения микрочипового
ПЦР-анализа для экспресс-диагностики
Стеклянно-кремниевый
микрочип
Система флюоресцентного
детектирования
микрочип
объектив
DM
LED
9 микрореакторов объемом
250 нл
CCD камера
22
Макетное
представление
микрочипового ПЦРанализатора
Микрореакторы
Программное
обеспечение
для real-time
PCR
23
Стекло
Кремний




Разработан и создан макет микрочипового
ПЦР-анализатора для проведения ПЦР в
режиме реального времени
Получены высокая производительность
анализа (~20 мин/9 образцов), и
чувствительность ~300 копий ДНК в пробе.
Общая стоимость разработки – 10 млн. $.
Разрабатывается вариант на 100 агентов
за 1 час – стоимость разработки около 50
млн. $. (Idaho Technology)
24
Диагностика на основе технологии хМАР
(Биоплекс 200)

Возможность проведения массовых анализов
одновременно по многим (до 100) патогенам на
основе иммунодетекции. Оснащены 8 центров
индикации и диагностики Роспотребнадзора.
25
Использование
современнейших
технологий
уникальным
образом
скомбинированных между
собой :
•проточная цитометрия,
•микросферы из полистирола, маркированные красными и
инфракрасными флуорофорами,
•лазерная детекция,
•цифровая обработка сигнала,
•традиционная химия.
26
Анализ поверхности микросфер – детекция
антигенов или нуклеиновых кислот
Меченая искомая
ДНК / РНК
Одноцепочечный
зонд
Захватывающий
зонд
Детектирующий
зонд
Искомая ДНК/РНК
Захватывающий
и детектирующий
зонды
Использование принципа мультиплексирования - Измерение
концентрации нескольких аналитов (белков, РНК, ДНК и др.) в
27
каждом индивидуальном образце в одном анализе
Иммуно-ПЦР
Комплексный метод, объединяющий в себе технологию ПЦР (стандартную или
в реальном времени) и технологию иммуно-энзиматического теста ELISA .
Идея Кантора о том, что репортером в позитивном иммунном тесте может
выступать не только специфический продукт ферментативной активности, как
в ELISA, но и специфический ПЦР-продукт.
Иммуно-ПЦР основана на использовании двух типов специфических антител:
иммобилизованных на твердом носителе (фиксирующее антитело) и
репортерных реагентов (детектирующих антител). Парные Моноклональные
антитела и Праймеры у нас есть практически на все опасные патогены.
28
Иммуно-ПЦР
Ранняя диагностика болезни Альцгеймера [Keating, 2005],заболевания,
вызываемых норовирусами [Tial P., 2006], ротавирусами [Adler M et al.,
2005], вирусом HIV-1 [Barletta et al., 2004], стафилококками
[Huang&Chang, 2004], гельминтами [Chye et al., 2004] .
Минимальный уровень чувствительности иммуно-ПЦР соответствует одной
тысячной части клетки Streptococcus pyogenes , даже в присутствии 100 тыс.
клеток E. coli. При этом не было обнаружено никаких перекрестных реакций с
другими видами стрептококков [Liang et al., 2003].
Преимущества метода:
•объем образца может быть меньше 1 мкл,
•время тестирования – около 25 мин,
•высокая специфичность при низком фоновом сигнале,
•простая подготовка матрицы,
•повышение чувствительности ИФА более чем в 100000 раз,
•возможность прямого детектирования единичных копий вирусов и бактерий.
29
Полногеномное секвенирование




Наиболее перспективное направление в диагностике и
индикации. Скорость получения результата возрастает с
каждым годом.
Пиросеквенирование небольшого генома бактерии
Mycoplasma genitalium (582970 пар нуклеотидных
оснований) занимает всего 4 ч с охватом 96 % всего
генома и 99,96 %-й достоверностью.
Незаконченные - 96 %-ные сиквенсы, достаточны для
проведения достоверного сравнительного определения
набора генов в бактериальных геномах при проведении
экстренных расследований эпидемических вспышек.
Обладает значительно большей разрешающей
способностью, чем мультилокусный VNTR анализ
(MLVA).
30
Бесприборные иммуносенсоры
(иммунохроматографические тесты)
Создана технологическая линия
Зарегистрированы в Росздравнадзоре - для
чумы (2), туляремии, сибирской язвы (споры).
Основная задача – поэтапная замена
иммуносуспензионных тестов на более чувствительные
и удобные. Хранение 2 года при комн. температуре.
31
Два варианта использования ИХ-тестов
Хаузенги – тесты в
платиковом кожухе –
1 тест
В упаковках по
10-20 тестов.
(созданы и испытаны
для гриппа А)
Оба варианта апробированы на бактериальных инфекциях
32
Оборудование документирования и
программное обеспечение для ИХ
ИХ-датчик
Сигнал ИХ-датчика
33
Разработки и внедрения ИХ-тестов в
ближайшие 2 года
1. ИХ тест-система для выявления чумного микроба 2009
2. Иммунохроматографическая система для выявления вегетативных форм сибиреязвенного микроба
3. ИХ тест-система для выявления антител к антигену чумного микроба 2010
4. Иммунохроматографическая тест-система для выявления О1-антигена холерного вибриона
5. Иммунохроматографическая тест-система для выявления ОГАВА-антигена холерного вибриона
6. Иммунохроматографическая тест-система для выявления ИНАБА-антигена холерного вибриона
7. Иммунохроматографическая тест-система для выявления протективного антигена сибиреязвенного
микроба
8. ИХ тест-система для выявления спорового антигена сибиреязвенного микроба
9. ИХ тест-система для выявления туляремийного микроба 2009
10. Иммунохроматографическая тест-система для выявления антител к возбудителю туляремии
11. Иммунохроматографическая тест-система для выявления легионеллеза
12. Иммунохроматографическая тест-система для выявления вирулентных штаммов возбудителя
сальмонеллеза
13. Иммунохроматографическая тест-система для выявления стафилококкового энтеротоксина B
14. Иммунохроматографическая тест-система для выявления рицина
15. Иммунохроматографическая тест-система для выявления ботулотоксина
34
ИХ-тесты испытаны в полевых условиях при выявлении
возбудителя туляремии непосредственно в суспензии растертых
клещей (Ставропольский НИПЧИ) и при прямом определении
холерного токсина в культурах возбудителя холеры
(Ростовский НИПЧИ, Иркутский НИПЧИ).
Проведены успешные испытания
новых тестов для выявления
возбудителя гриппа А в «48 ЦНИИ МО
«Вирусологических центр».
Рекомендованы к внедрению.
Основная проблема – повышение
чувствительности.
Решение:

Использование систем концентрирования –
магноиммуносорбенты, иммунофильтрация.

Флуоресцентная детекция реакции в ИХтестах.
35
Повышение чувствительности
ИХ-тестов
Новые метки:
 Наночастицы фосфорав10-100 раз (антистоксовое излучение)
 “квантовые точки” нанокристаллы
36
Разработка магноиммуносорбентов
Технология разработана с
использованием парных моноклональных
антител ГНЦ ПМБ и
магноиммуносорбентов Ставропольского
НИПЧИ
Споры B.anthracis
Клетки F.tularensis
Чувствительность 1×103 1×102 спор B.anthracis
Объем пробы от 1 до 3000
мл
37
Использование новых методических
подходов (выявление B.anthracis )
БИОЧИП ДНК
Проба из
NEW
NEW
МИС
скотомогильника
2 ч.
NEW
MP PCR RT
NEW
ИХ-тесты
1. Споры
6-8 ч.
NEW
2. Вегетат.
15-20 мин.
Дифф.
среда
ИХ-тест
PCR
ИХ-тесты
1. Споры
NEW
Вегетативн.
2. Вегетат.
24 ч.
NEW
NEW
Реакция нарастания
титра фага R1
4-16 ч.
Проба в фагом
«Obolensk R1»
24 ч.
38
Биосенсоры
Перспективы иммуносенсоров связаны с развитием технологий
создания сенсорных элементов, прежде всего за счет
наноматериалов и нанотехнологий и совершенствованием
детекционных технологий за счет создания новых меток и
детекторов
Иммуносенсоры с использованием меток для
детекции взаимодействия антиген- антитело



Радиоактивные
Каталитические
Магнитные



Хемилюминисцентные
Фосфоресцентные
Флуоресцентные
39
Оптоволоконный сенсор Y.pestis





Время анализа –до 30
мин.
Нижний предел
детектирования-от 60
м.к. (до 60млн).
Значительный
линейный
динамический диапазон
по антигену (50-1000
нг/мл).
Полевой вариант.
Нелинейный сигнал от
10 000 м.к .
(Китай, Шанхай)
40
Последние разработки в
области детекции с
нанотехнологиями
•Углеродные нанотрубки в
качестве многоцветных
Рамановских меток.
Возбуждение флуоресценции
поверхностно связанной метки.
Сенсор на основе нанопор.
Нанопроводной сенсор.
41
Последние разработки в области
чип-детекции


Разработана новое полимерное покрытие для поверхности
сенсоров имеющее толщину гидрофильного слоя
около 30нм и обладающее высокой емкостью по
связыванию нуклеиновых кислот и белков
Разработаны детекторы измеряющие сдвиг спектра
интерференции отраженного света для измерения
толщины и конформации чувствительного слоя
биосенсоров с разрешением меньше 1 нм.
Коммерциализация начата компанией ZOIRAY TECH INC


Эти разработки легли в основу нового поколения
биочипов работающих без использования меток, в
реальном времени, и с недостижимой ранее для
безметочных систем аналитической чувствительностью.
С помощью таких биочипов становится реальностью
экспресс-идентификация патогенов по генетическим
и биохимическим маркерам, как в лаборатории так и в
полевых условиях или у постели больного(POC).
42
Электрооптический анализ
ЧДАП латексны х частиц после их инкубации с бактериями
отн.ед.
400
200
1
кГц
2
0
1
10
100
1000
10000
3
100000
1 – чистые латексные частицы
2 - латексные частицы-клетки Salm onella enteriditis
3 - латексные частицы-клетки Escherichia coli
43
Бесконтактный метод определения бактерий
по анализу запаха (искусственный нос)
44
Сверхчувствительное определение
бактерий Атомно-силовой микроскопией
Определение бактериальных нанофрагментов
Специфическое
улавливание спор
сибирской язвы на
аффинной поверхности
45
Использование модифицированных
антителами магнитных частиц (АСМ)
Магнитная частица с
антителами
Частица с антителами и клетка
46
Выявление взаимодействия фагов с
S. enteritidis АСМ
47
Плазмонный резонанс
Измеряется разница в
интенсивности
отраженного
поляризованного
света(пропорциональна
массе задержанного на
аффинной
поверхностисти антигена)
Самоорганизующийся
слой тиолов на золоте
Для ГНЦ ПМБ закуплен по ФЦП «Химбио» прибор ПРОТЕОН на
данной основе
48
Новейшая технология «АПТАМЕРОВ»




Аптамеры - небольшие молекулы нуклеиновых кислот,
распознающие и специфически связывающие мишени.
Предварительный синтез коротких однонитевых РНК.
Биосенсор состоит из однослойных углеродных нанотрубок
(ОСНТ) и фрагментов синтезированных РНК.
На поверхности ОСНТ слоя иммобилизованы РНК-аптамеры
специфически связывающиеся с клетками S. typhi, что
приводит к изменению заряда в слое и измеряемого
потенциала.
а – Самосборка
аптамеров на
слое ОСНТ;
b)
взаимодействие
бактериимишени с
ОСНТ/аптамер. 49
Новейщая технология молекулярного
импринтинга с использованием нанотрубок
•Новый класс синтетических
материалов -молекулярноимпринтированные полимеры (MIPs).
•Метод получения MIPs - темплатная,
шаблонная или матричная
полимеризация.
•В результате в материале образуются
полости (поры) — трехмерные
отпечатки.
•Распознающая способность MIPs специфическое соответствие формы
отпечатков молекулам-шаблонам.
•Чувствительность - пикограммы/литр
•Неограниченный срок хранения.
Испытано на целом папиломавирусе человека50
Заключительные замечания





Необходимо интенсифицировать разработки в области выделения
микробных культур для целей коллекционной деятельности и
решения задач молекулярной эпидемиологии.
Целесообразно создание центров секвенирования патогенных
микробов в различных регионах РФ т.к. в мире в ближайшие 3-4
года полногеномное секвенирование станет одним из основных
методов расследования вспышек инфекционных заболеваний.
Центры индикации и диагностики, а также реферес-центры
должны стать центрами высоких диагностических технологий,
обладая рядом методологий высокого уровня (микроэррей, xMap,
иммуно-ПЦР, иммуносенсоры, иммунохроматография и др.), вести
научные исследования в направлении повышения
чувствительности и скорости получения результата,
разрабатывать принципиально новые платформы.
Региональные и территориальные центры должны быть оснащены
индикационными технологиями для качественной оценки наличия
возбудителей или токсинов в пробах (ПЦР, белковые и ДНКбиочипы, иммунохроматография, иммуносуспензионне методы).
Для всех центров необходимым является разработка и внедрение
новых высокоэффективных бактериальных и вирусных
питательных сред, транспортных сред.
51
52