Слайд 1 - Институт химической физики им. Н.Н. Семенова РАН

реклама
«ХИМИЧЕСКАЯ ФИЗИКА - МЕДИЦИНЕ»
Россия, Москва, 7 ноября 2013 г
ИХФ им. Н.Н. Семёнова РАН
Устойчивость бактерий к
антибиотикам
Эль-Регистан Г.И.
УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК
ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ
ИМ. С.Н. ВИНОГРАДСКОГО РАН
Состояние вопроса
• Растущее распространение антибиотикорезистентности (АР) микроорганизмов.
• Инфекционные осложнения у иммунокомпрометирометированных пациентов (у
онкобольных - до 80%)
• Обнаружение детерминант АР и переживающих клеток (морфотипов) в вечной мерзлоте (сотни тыс.- млн. лет).
Эволюционные направления развития
резистетности бактерий к антибиотикам
(токсикантам)
Изменение фенотипа
Изменение генотипа
прекращение деления
- персистеры (П)
- стационарные клетки (СК)
- покоящиеся формы (ПФ)
развитие генотипов с детерминантами
устойчивости (клоны)
- изменение рецепторов (мишеней)
- активный выброс из клетки
- изменение антибиотика
механизм
изменение экспрессии белков,
обусловливающих прекращение
роста
- внутригеномные перестройки
- горизонтальный перенос генов АУ
- локальные мутации
выживание в присутствии
антибиотиков
рост в присутствии антибиотиков
антибиотикотолерантность
антибиотикоустойчивость
Фенотипы антибиотикорезистнтности
(образуются всегда в цикле развития любой микробной культуры)
пролиферативный покой
выход из клеточного цикла
- клетки-персистеры (П)
- стационарные клетки (СК)
П
СК
0.001-1.0% 100%
ПФ
0.001-1.0%
метаболический покой
гипометаболическое или
анабиотическое состояние
покоящиеся формы (ПФ):
- цистоподобные покоящиеся
клетки (ЦПК)
- некультивируемые клетки (НК)
- ультрамелкие покоящиеся
клетки (УМП)
П, СК, ПФ
Полиморфизм цистоподобных клеток
Pseudomonas aurantiaca
Вид покоящихся клеток в вечной мерзлоте
30-40 тыс. лет
2 млн. лет
7-10 тыс. лет
30-40 тыс. лет
Масштабная метка 0.2 мкм
Генотипы устойчивости
(выщепление и развитие внутрипопуляционных диссоциантов - клонов,
вариантов, в том числе - антибиотикоустойчивых)
Колониально-морфологическая диссоциация при прорастании ПФ
P.aurantiaca и P.fluorescens
S
S
R
Sm
R
M
Mm
Таким образом,
- Клетки с фенотипом АР воспроизводят в новом цикле
развития такую же популяцию,
- существующую как многоклеточный
самоорганизующийся организм,
- выживание которого при (антибиотическом) стрессе
обусловлено изначально предсуществующей
гетерогенностью популяции (по фенотипам и
генотипам)
- Вывод – полностью уничтожить микробную
популяцию фармакологическими средствами
невозможно, т.к. в любом случае останутся клетки,
предназначенные для сохранения вида.
- Поэтому бороться с антибиотикоустойчивотью
бактерий целесообразно, регулируя образование и
«консервацию» персистеров и покоящихся форм, а
также выщепление АУ клонов
Уровни организации АР бактериальных популяций
Молекулярный
Клеточный
экспрессия и активность белков
- стрессовых генов (молекулярных шаперонов,
антиоксидантных систем, репарации ДНК)
- регуляторных (на уровне транскрипции)
- структурных и функциональных
прекращение
деления
(П и СК)
прорастание
Популяционный
прекращение
метаболизма
(ПФ)
прорастание
диссоциация
популяции
(АУ клоны)
реверсия к другим
типам
развитие популяции как единого многоклеточного
организма с помощью низкомолекулярных
регуляторов межклеточной коммуникации.
- микробных
- растительных
- животных
Основные свойства регуляторов
- низкомолекулярные соединения
- низкая метаболизируемость
- перемещаются между клеткой и средой без
участия мембранных транспортных систем
- обладают дозозависимым эффектом
- зависимость концентрации от клеточной
плотности продуцента
- чувствительность (компетентность) клетокреципиентов
влияют фенотип, физиологический возраст и
гетерогенность популяции
Участники регуляторного контроля развития
микробных популяций
- ацилированные ГСЛ – плотностные регуляторы
- Rрf-белки – реактиваторы ПФ
- ненасыщенные жирные кислоты – реактиваторы
ПФ
- Rf-белки – протекторы
- SH-содержащие пептиды
- биологические амины
- регуляторы адгезии
- алкилоксибензолы –
регуляторы
полимодальные
АОБ
Свойства и функциональная активность
АОБ
Реакционная способность
– Н…Н; гидрофобные и электростатические взаимодействия
Амфифильность
Изменение спектра изомеров
и гомологов АОБ в цикле развития
Мембранотропное действие (изменение функциональной активности мембран,
изменение направления ионных потоков)
Регуляция (де)гидратации клеток
Модификация структуры белков: стабилизация ферментов, модуляция их
активности, изменение субстратной специфичности
Стабилизация и изменение топологии ДНК
Антиоксидантная активность
Индукция стрессовых генов
(регулонов rpoS и SOS-ответа)
Регуляция экспрессии генов (пилей 1 типа,
К-М вариантов, физиологических диссоциантов)
Функции АОБ в регуляции АУ бактерий
Функция
стрессовые гены
генотип. вариаб-ть
образование П
образование СК
образование ПФ:
индукция
созревание
сохранение
прорастание ПФ
Длинноцепочечные
АОБ (С5-С18)
(Н...Н, эл-стат, г-фоб)
индукция
повышение
???
ускорение
Короткоцепочечные
АОБ (С1-С2)
(Н...Н, эл-стат)
протекция
снижение
???
ускорение
???
???
развитие анабиотического состояния как результат
суммы физико-химических процессов
запрещение, переход
в микромумии
все эффекты дозо-зависимы
стимуляция
Нежизнеспособные мумифицированные клетки
КС
Свойства:
фЦПМ
КС
ПЦ
• сильная рефрактерность и
сохранение внешней формы;
ПП
0.5 мкм
• полная утрата
жизнеспособности;
а
M. luteus
0.5 мкм
б
S. aureus
ф НМ
• деструкция клеточных мембран
СВ
0.5 мкм
0.5 мкм
P. aurantiacaг
в
л
0.5 мкм
Микомумия
дрожжей
0.5 мкм
КС
л
Микрофоссилии в
керитах (1.85 млн.лет)
[Gorlenko et al., 2000]
Л
КС
0.5 мкм
д
Л
S.е cerevisiae
0.2 мкм
Функционирование алкилоксибензолов
в качестве структурных модификаторов и
стабилизаторов белков
Активность, %
120
100
80
60
40
20
0
0
а
Активность,%
180
б
160
140
120
100
80
0,03 0,05 0,25 0,5
С12-АОБ, мМ
1
1,5
2
0
2
4
6
8
10
12
С7-АОБ, мМ
Влияние прединкубации трипсина с С12-АОБ (а) и С1-АОБ (б)
на его протеолитическую активность.
Расположение С1-АОБ
вокруг молекулы лизоцима.
Стэкингвзаимодействия
(пояснение).
Возможные пути регуляции (снижения)
антибиотикорезистентности бактерий
Тип устойчивости
Персистеры
Цель воздействия
Методы и агенты
достижения цели
стрессопротекторы, антиснижение численности
оксиданты
перевод в делящееся состояние мембранотропные в-ва
(НЖК и др.)
С6-С18 АОБ
ингибирование метаболизма
ПФ
снижение численности
прорастание («тиндализация»)
перевод в микромумии
стрессопротекторы
НЖК, затем антибиотики
С6-С18 АОБ
АУ клоны
снижение численности
видоспецифичные адаптогены
стрессопротекторы, антиоксиданты
ингибирование образования ПФ
Таким образом, внеклеточные
(ауто)регуляторы разной химической природы
контролируют поэтапный скоординированный
ответ популяции на воздействия стрессоров, в
том числе, антибиотиков. Поэтому перспективно
использовать регуляторы для контроля
антибиотикорезистентности бактерий.
Ничто не стоит так
дешево и не ценится
так дорого, как…
общение.
Скачать