1 ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ АУЕСКИ Халявина В. С

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ АУЕСКИ
Халявина В. С., Николаева О.Н.
ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ
Уфа, Россия
THE LABORATORY DIAGNOSIS OF THE ILLNESS OF AUJESKI
Halyavina V. S., Nikolaeva O.N.
The Bashkir State Agrarian University
Ufa, Russia
Болезнь Ауески — остро протекающая болезнь многих видов домашних и диких
животных, проявляющаяся расстройством ЦНС, сильным зудом и расчёсами (у всех
животных, кроме свиней и пушных зверей). У свиней болезнь обычно протекает в виде
лихорадки, а у молодняка сопровождается судорогами, параличами, гибелью животных.
Зафиксированы случаи заболевания у людей с симптомами зуда и лихорадки [1].
Экономический ущерб складывается из падежа, вынужденного убоя, снижения
прироста массы животного, потери племенных качеств, выбраковки туш, абортов, затрат
на ликвидацию, общую и специфическую профилактику болезни.
Болезнь Ауески свиней встречается во всех странах мира. По 5 вспышек данной
болезни было отмечено в России. Помимо собственных источников возбудителя болезни
Ауески, эпизоотическую угрозу в отношении этой болезни для России представляют
страны, откуда возбудитель может быть занесен с импортируемой свининой: Бразилия,
Голландия, Франция, Испания, Польша [2].
На сегодняшний день специфические и медикаментозные средства лечения
больных животных пока разработаны недостаточно хорошо.
Возбудителем заболевания является герпесвирус Suid herpesvius 1.
Order/Отряд – Herpesvirales
Family/ Семейство – Herpesviridae
Subfamily/ Подсемейство – Alphaherpesvirinae
Genus/ Род – Varicellovirus
Species/ Вид - Suid herpesvirus 1
Методы лабораторной диагностики болезни Ауески утверждены Постановлением
Государственного комитета СССР по стандартам (ГОСТ 25753-83) от 22 апреля 1983 г.
№ 2016 и основаны на обнаружении и идентификации вируса в патологическом материале
с помощью РНГА; на выявлении специфических антител в сыворотке крови больных и
переболевших животных в РНГА или РН в культуре ткани; на постановке биологической
пробы.
1
Для диагностики вируса используются:
1. Метод
биологической
пробы.
Сущность
метода
заключается
в
воспроизведении заболевания у здоровых кроликов или котят, путем введения
паталогического материла.
Кроликам или котятам внутримышечно вводят суспензию паталогического
материала (головной мозг, легкие, печень, селезенка) от павших или убитых с
диагностической целью животных. При наличии вируса в патматериале у животных
появляются клинические признаки (расчесы, зуд) и через 2-10 суток наступает смерть.
Если животное погибло, без наличия признаков болезни Ауески, биопробу повторяют,
используя патматериал первого пассажа. Для идентификации вируса используют
серологический метод.
2. Метод выделения вируса в культурах клеток. Сущность метода заключается в
выявлении цитопатического действия (ЦПД) вируса в культуре клеток и его
последующей идентификации.
Для выделения вируса болезни Ауески используют культуру клеток первичнотрипсинизированных почек и щитовидный железы поросят, семенников телят, эмбрионов
кур, почек эмбрионов свиньи и коровы, а также перевиваемые линии клеток. Культуру
клеток заражают испытуемым материалом и выдерживают в термостате при температуре
37° в течение 30 минут. Затем удаляют надосадочную жидкость и добавляют
поддерживающую питательную среду. Инкубируют вместе с контрольной культурой
клеток в течение 2-5 суток. Сроки наступления цитопатогенного действия зависят от дозы
вируса и количества пассажей [4].
При наличии вируса проявляется цитопатическое действие (ЦПД) в виде
округления клеток, появлении гигантских клеток, растворения клеток и их систем с
отпадением пораженных клеток от стекла. В незараженных (контрольных) культурах
клеток
не
должно
быть
цитопатических
изменений.
Видовую
принадлежность
выделенного вируса подтверждают методом идентификации вируса.
3. Метод идентификации вируса. Сущность метода заключается в обнаружении
подавления биологоческой активности вируса в культуре клеток с помощью
типоспецифических сывороткок.
Вирус болезни Ауески можно идентифицировать в реакции нейтрализации на том
лабораторном объекте, на котором он был обнаружен. Перед постановкой реакции
положительную и отрицательную сыворотки разбавляют питательной средой для
культуры клеток. Затем прогревают в водной бане при температуре 56° в течение
30 минут. Готовят десятикратное разведение испытуемого вируса и вносят в пробирки с
2
сыворотками, выдерживают в термостате при температуре 37° в течение 1 часа. Каждую
смесь сывороток с разведениями вируса вносят в пробирки с культурой клетки и
инкубируют в термостате при температуре 37°.
Результаты учитывают по цитопатическому действию вируса через 2-3 суток, с
помощью определения титра исследуемого вируса в присутствии положительной и
отрицательной сыворотки и выражают его в логарифмах. Видовую принадлежность
вирусов устанавливают при наличии разности в титрах вируса с отрицательными и
положительными сыворотками не менее чем на два логарифма [4].
4. Серологический метод
исследования. Сущность метода заключается в
специфическом свойстве нейтрализующих антител подавлять способность
вируса вызывать цитопатическое действие в культуре клеток.
Основным методом диагностики болезни Ауески в нашей стране является реакция
нейтрализации.
Недостатками
этого
теста являются:
трудность
и длительность
выполнения, необходимость поддержания соответствующих культур клеток и штаммов
вируса.
Для
диагностики
болезни
Ауески
разработана
реакция
пассивной
гемагглютинации, но этот метод не получил широкого применения из-за отсутствия
промышленного выпуска диагностикумов [3].
Результаты серологического исследования испытуемых сывороток считают
положительными, если цитопатическое действие отсутствует в разведениях сыворотки 1:2
и выше. При этом в контроле должны быть такие результаты как:
•
в контроле культуры клеток монослой клеток должен оставаться прежним, то есть
без изменений;
•
в контроле дозы вируса ЦПД должно быть в рабочем разведении вируса;
•
в контроле токсичности сывороток у положительной сыворотки (переболевшее
животное) должен отсутствовать цитопатический эффект, начиная с разведения
сыворотки
1:2,
а
у
отрицательной
сыворотки
(специфические
антитела
отсутствуют) наоборот должен присутствовать цитопатический эффект;
•
в контроле специфичности вируса в культурах клеток, в которые введена смесь
специфической сыворотки и вируса, должен отсутствовать цитопатический эффект.
Наличие специфических антител в испытуемых сыворотках крови свидетельствует
об инфицировании данной особи, группы животных возбудителем болезни Ауески или
возможной вакцинации животных против болезни Ауески.
Положительный результат серологического метода исследования сывороток крови
невакцинированных животных свидетельствует о подозрении на заболевание, которое
подтверждают постановкой биопробы [4].
3
В связи с вышеизложенным, своевременная лабораторная диагностика позволяет
предотвратить распространение данной инфекции.
Библиографический список
1. Бессарабов Б. Ф. Инфекционные болезни животных: учебник / Б. А. Бессарабов, А. А.
Вашутин, Е. С. Воронин [и др.] – М. : КолоС, 2007.- 671 с.
2. Болоцкий И. А. Болезнь Ауески [Текст] / И. А. Болоцкий, В. И. Семенцов, А. К.
Васильев, С. В. Пруцаков // Инфекционные болезни животных. – 2009. - № 2. – С. 19.
3. Корниенко Л. Н. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни
Ауески: Автореферат дис. канд. биол. наук / Л. Н. Корниенко. - Владимир. : 1993.
- 23 с.
4. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески : ГОСТ 25753-83. - 7с.
4