СКРИНИНГ ШТАММОВ АНТАГОНИСТОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ БЕЛОЙ

ISSN 0202-5493.МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ.
Научно-технический бюллетень Всероссийского
научно-исследовательского института масличных
культур. Вып. 2 (151–152), 2012
_____________________________________________
________________________________________________________________________________
СКРИНИНГ ШТАММОВ
АНТАГОНИСТОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ
БЕЛОЙ ГНИЛИ РАПСА
Л.В. Маслиенко,
доктор биологических наук
Д.А. Курилова,
научный сотрудник
Е.Ю. Шипиевская,
кандидат биологических наук
ГНУ ВНИИМК Россельхозакадемии
Россия, 350038, г. Краснодар, ул. Филатова, д. 17
Тел.: (861) 275-85-19, e-mail: biometod@yandex.ru
Ключевые слова: рапс, белая гниль, скрининг, штаммы антагонисты, антагонистическая активность, жизнеспособность
склероциев, микробиопрепараты
УДК 632.4:633.853.494
Введение. В России массовое распространение получили передоваемые через
почву болезни экономически значимых
сельскохозяйственных культур. В отношении их возбудителей фунгициды малоэффективны, сорта и гибриды с группогрупповой устойчивостью практически
отсутствуют.
Особую опасность для многих сельскохозяйственных культур, в том числе и
масличных (подсолнечника, рапса и сои)
представляет белая гниль Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) De Bary. В последние годы
в регионе Северного Кавказа белая гниль
особенно вредоносна на озимом рапсе –
распространѐнность составляет 30–70 %,
с высокой степенью поражения растений
(3–4 балла). Вредоносность белой гнили
выражается в преждевременном усыхании растений, снижении урожая и ухудшении его качества. Основной запас
инфекционного начала возбудителя болезни сохраняется на растительных
остатках и в почве в виде склероциев.
Наиболее приемлемый путь решения
проблемы – целенаправленное заселение
почвы и растительных остатков поражѐнных растений антагонистами, обладающими, кроме фунгицидных свойств, ещѐ
и целлюлозоразрушающей активностью
Усилия учѐных многих стран в течение
нескольких десятилетий были направлены на поиски мер борьбы с белой гнилью,
или склеротиниозом, на подсолнечнике. В
связи с тем, что основной запас инфекции
возбудителя сохраняется в почве и на
растительных остатках в виде склероциев, биологические меры борьбы направлены
на
уменьшение
потенциала
почвенной инфекции путѐм интродукции
в почву антагонистов. Большинство работ
во многих странах посвящено изучению
эффективного гиперпаразита на склероциях белой гнили Coniothyrium minitans
Campbell – в Канаде [1; 2], Румынии [3],
Молдавии [4, 5], Украине [6]. Проводился
поиск и других антагонистов, перспективных для разработки биологического
метода борьбы с белой гнилью на подсолнечнике. Лидирующее положение во
всех странах занимают грибы-антагонисты из рода Trichoderma (T. harzianum, T. viri-
de, T. koningii, T. hamatum) и из рода Gliocladium (G. roseum, G. catenulatum, G.
virens). В качестве антагонистов выделены также грибы из рода Fusarium, Sporidesmium, Mucor, Verticillium, Aspergillus,
Trichothecium, Talaromyces, Penicillium,
Chaetomium и бактерии из рода Bacillus
[7–23].
Таким образом, в мировой литературе
представлено большое количество работ,
авторы которых сообщают о коммерческих штаммах микробов-антагонистов,
проявляющих высокую активность в отношении возбудителя белой гнили, однако готовых и эффективных препаратов,
защищающих растения, а особенно, снижающих запас инфекционного начала болезни, крайне недостаточно. Кроме того,
исследования антагонистической активности (in vitro и/или in vivo) микроорганизмов к возбудителю белой гнили
проводились в основном на подсолнечнике. Сведения о проведении таких исследований на озимом рапсе отсутствуют.
Материалы и методы. Скрининг
штаммов антагонистов из коллекции лаборатории биометода к возбудителю белой гнили на рапсе проводили in vitro,
затем во влажной камере в лабораторных
условиях. Активные штаммы оценивали
на фитотоксичность и ростостимулирующую активность к растениям озимого
рапса.
Определение антагонистической активности штаммов in vitro осуществляли
методом двойных или встречных культур
[24]. Культуры антагонистов и возбудителя болезни выращивали отдельно в течение 5 дней на агаризованной
питательной среде. Сверлом, предварительно простерилизованным, вырезали
блоки с мицелием антагониста и патогена
и помещали в одну чашку Петри на расстоянии 6 см. Контролем служили культуры
антагонистов
и
патогенов,
посеянные порознь. Учѐты проводили на
пятые, десятые, пятнадцатые и тридцатые
сутки культивирования. Отмечали рост
патогена и антагониста и характер их взаимодействия.
В лабораторных условиях во влажной
камере определяли влияние антагонистов
на жизнеспособность склероциев методом инфекционной капли [25]. Белую
гниль выращивали на твѐрдой питательной среде в течение 30 дней при температуре 18–20 оС. Выращенные склероции
помещали во влажную камеру в чашки
Петри и пипеткой наносили на склероции
суспензию спор антагонистов с титром
не менее 1×107 КОЕ/мл. Затем склероции
поддерживали во влажном состоянии в
течение 60 дней. Для определения жизнеспособности склероциев их разрезали и
пересевали на агаризированную питательную среду. Контролем служили склероции, помещѐнные во влажную камеру
без антагониста.
Исследование активных штаммов на
возможное патогенное или токсичное
действие на культуру озимого рапса проводили методом замачивания семян и
7-дневных проростков в суспензии антагонистов. Для этого культуры активных
штаммов антагонистов выращивали на
агаризированных питательных средах при
температуре 25 °С в течение 10 суток.
Семена озимого рапса замачивали на 2 ч в
суспензии антагонистов и ставили на
проращивание в рулоны из фильтровальной бумаги. Контроль – семена, замоченные в стерильной воде. Учѐты проводили
через 7 дней. По количеству проросших
семян в вариантах и в контроле судили о
фитотоксичности выделенных антагонистов, а по длине корней и стеблей и по
весу корней по сравнению с контролем
судили об их ростостимулирующей активности. С целью установления влияния
перспективных штаммов на увядание
проростков озимого рапса в суспензию
антагонистов помещали здоровые 7-дневные проростки. Контроль – стерильная
вода. По количеству увядших растений в
контроле и в вариантах судили о патогенности отобранных штаммов.
Результаты и обсуждение. В основе
разработанной нами концепции целенаправленного создания микробиопрепаратов для защиты подсолнечника и других
сельскохозяйственных культур от болезней, лежит поиск штаммов антагонистов,
безопасных для человека, нефитотоксичных, проявляющих высокую активность в
широко варьируемых условиях против
комплекса возбудителей заболеваний, обладающих полифункциональным типом
действия [23]. В результате многолетних
исследований в лаборатории биометода
ВНИИМК создана коллекция перспективных штаммов грибов и бактерийантагонистов широкого круга патогенов,
поражающих масличные культуры.
Первичным этапом скрининга было
определение антагонистической активности штаммов грибов и бактерий антагонистов из коллекции лаборатории к
возбудителю белой гнили озимого рапса
методом двойных культур (табл. 1, 2, 3).
При определении антагонистической
активности грибных штаммов методом
двойных культур их взаимоотношения с
возбудителем белой гнили сводились к
нескольким типам:
1 тип – разрастание колонии антагониста, которая занимала максимальную поверхность питательной среды, не давая
расти колонии патогена. Данное взаимоотношение с патогеном характерно для
грибов из родов Trichoderma, Penicillium,
Sordaria. Эти грибы отличались быстрым
ростом в чистой культуре;
2 тип – замедление роста колонии патогена на некотором расстоянии от колонии антагониста (антибиотическая зона).
Такая зона отмечена при взаимодействии
Sclerotinia sclerotiorum с грибами из родов Penicillium, Trichoderma, Trichothecium;
3 тип – более интенсивный рост патогена в начальный период (30–60 %
поверхности питательной среды) с последующим нарастанием колонии антагониста на колонию патогена, в которой
происходило изменение окраски, струк-
туры и гибель мицелия. Такой тип взаимоотношений
характерен
для
возбудителя белой гнили и антагонистов
из класса Basidiomycetes и рода Chaetomium. Кроме того, у представителей рода
Chaetomium
образовавшиеся
склероции белой гнили покрывались плодовыми телами антагониста.
Максимальную антагонистическую активность к возбудителю белой гнили проявили
штаммы
грибов
из
рода
Trichoderma (Т-1, Т-2, Т-3). Площадь зарастания поверхности питательной среды
в чашке Петри в двойных культурах составляла 100 % (1 тип) (рис. 1).
Рисунок 1 – Антагонистическая активность штамма Т-1 Trichoderma sp.
к возбудителю белой гнили
Sclerotinia sclerotiorum (ориг.):
а – антагонист, б – патоген.
Высокую антагонистическую активность к возбудителю белой гнили при одновременном посеве в чашки Петри
проявили грибы из рода Penicillium и
штамм Sm-1 Sordaria macrospora. Особенно выделялись грибы Pr-1 Penicillium
rugulosum и Pk-1-3 Penicillium vermiculatum, когда мицелий патогена успевал
обрасти только посевной блок и полностью подавлялся антагонистом.
Таблица 1
Антагонистическая активность штаммов грибов-антагонистов к возбудителю белой гнили
рапса Sclerotinia sclerotiorum, на 10-е сутки культивирования
Краснодар, ВНИИМК, 2011 г.
Площадь зарастания поверхности питательной
среды
контроль
антагонистом
патогеном
%
см²
%
см²
%
см²
%
см²
Размер
антибиотической
зоны, мм
100
66,4
-
-
-
-
-
-
-
85,0
56,4
75,0
49,8
25,0
16,6
20,5
а
13,6
2,0
T-1 Trichoderma sp.
T-2 Trichoderma sp.
T-3 Trichoderma sp.
100
100
100
66,4
66,4
66,4
100
100
100
66,4
66,4
66,4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
T-4 Trichoderma sp.
90,0
59,8
98,0
65,1
2,0
1,3
2,0
Pk-1-3
Penicillium
vermiculatum
100
66,4
96,3
63,9
3,7
2,9
3,7
M-24 P. vermiculatum
95
63,1
70,0
48,5
10,0
6,6
Pv-3 P. verrucosum
100
66,4
80,0
53,1
20,0
Pf-1 P. funiculosum
100
66,4
60,0
39,8
Pbc-1
P.
compactum
100
66,4
95,0
Pr-1 P. rugulosum
100
66,4
Pp-1P. purpurescens
100
Tr-1
Trichothecium
roseum
Вариант
Sclerotinia
orum
Tv-1
viride
scleroti-
Trichoderma
Зона нарастания
антагониста (а),
патогена (п)
0
0
0
а
1,3
а
2,9
0
0
0
0
0
1,0
13,3
0
0
3,0
4,0
2,7
0
0
0
63,1
2,5
3,3
0
0
0
100
66,4
0
0
0
0
0
66,4
70,0
46,5
7,5
5,0
0
0
4,0
60,0
39,8
47,5
31,5
52,5
34,9
0
0
7,5
Xk-1
Chaetomium
olivaceum
40,0
26,6
30,0
19,9
50,0
33,2
4,0
Xk-1-4 Ch. olivaceum
40,0
26,6
40,0
26,6
45,0
29,9
7,0
Хк-2 Ch. globosum
60,0
39,8
50,0
33,2
15,0
10,0
4,0
Sm-1
Sordaria
macrospora
100
66,4
100
66,4
0
0
0
0
0
Tt-1
Talaramyces
trachispermus
20,0
13,3
20,0
13,3
36,5
64,7
0
0
7,0
A-1 Basidiomycetes
100
66,4
92,5
61,4
7,5
5,0
8,5
5,6
0
И-3 Basidiomycetes
95,0
63,1
45,0
29,9
55,0
36,5
9,5
п
6,3
0
brevi-
а
2,7
а
4,7
а
2,7
0
0
0
0
0
Антагонисты Tr-1 Trichotecium roseum
и Tt-1 Talaramyces trachispermus не занимали большую поверхность площади питания, но образовывали максимальную
антибиотическую зону – 7,0–7,5 мм
(2 тип).
Грибы из рода Chaetomium (Xk-1,
Xk-1-4 Chaetomium olivaceumи Хk-2
Chаetomium globosum) не отличались быстрым ростом и занимали в двойных
культурах с возбудителем белой гнили
40,0–50,0 % поверхности питательной
среды (рис. 2), но на 15–20-й день совместного культивирования образовавшиеся
склероции патогена полностью покрывались плодовыми телами антагонистов
(3 тип).
Рисунок 2 – Антагонистическая
активность штамма Хk-1-4 Chaetomium
olivacеum к возбудителю белой гнили
Sclerotinia sclerotiorum (ориг.):
а – антагонист, в – патоген.
Таким образом, из коллекции грибов
антагонистов выделились 11 штаммов с
различным механизмом подавления возбудителя белой гнили: T-1, T-2, T-3
Trichoderma sp., Pk-1-3 P. vermiculatum,
Pr-1 P. rugulosum, Tr-1 Trichotecium
roseum, Tt-1 Tal. trachispermus, Xk-1,
Xk-1-4 Ch. olivaceum и ХК-2 Ch. globosum.
Штаммы бактерий по механизму антагонистического действия на возбудителя
белой гнили разделены на две группы:
- штаммы, образующие стерильную зону
антагонистического действия (табл. 2);
- штаммы, ингибирующие развитие патогена, занимая бόльшую площадь питательной среды ЧП (табл. 3).
Таблица 2
Антагонистическая активность бактериальных штаммов, образующих стерильную
зону в отношении гриба Sclerotinia sclerotiorum
Краснодар, ВНИИМК, 2011 г.
Штамм
Sgc-1 Pseudomonas sp.
12-2 Pseudomonas sp.
13-2 Pseudomonas sp.
15-1 Pseudomonas sp.
Sgrc-1 P. Fluorescens
14-3 P. chlororaphis
14-4 Pseudomonas sp.
16-2 Pseudomonas sp.
Oif 2-1 Pseudomonas sp.
D 1-3 Bacillus sp.
3-1 Bacillus sp.
3-2 Bacillus sp.
3-3 Bacillus sp.
1а B. polymyxa
К1-1 B. subtilis
Р-9 B. polymyxa
11-1 Bacillus sp.
11-3 Bacillus sp.
ВВ(С) B. subtilis
5Б-1 B. subtilis
Диаметр зоны ингибирования, мм
инкубация, сутки
5-е
7-е
0
0
18,5±4,5
21,0±3,0
0
0
0
0
0
0
18,5±0,5
19,5±0,5
13,5±0,5
17,5±2,5
0
0
0
0
1,0±1,0
8,5±3,5
4,5±1,5
0
3,0±1,0
0
8,0±1,0
0
7,0±1,0
0
15,0±1,0
14,5±0,5
21,0±1,0
30,0±2,0
28,0±2,0
0
31,0±2,0
0
7,0±1,0
0
8,0±0
0
Установлено, что максимальную стерильную зону антагонистического действия с возбудителем белой гнили образовывали штаммы бактерий из рода
Pseudomonas (12-2 Pseudomonas sp., 14-3
P. chlororaphis и 14-4 Pseudomonas sp.) –
17,5–21,0 мм. Из бактерий рода Bacillus
выделились штаммы К1-1 B. subtilis, D 1-3
Bacillus sp., и Р-9 B. polymyxa, образующие зоны ингибирования 8,5–30,0 мм.
Из бактериальных штаммов рода Bacillus выделилось 9 штаммов, обладающих высоким показателем подвижности в
отношении гриба S. sclerotiorum (табл. 3).
Таблица 3
Антагонистическая активность
бактериальных штаммов рода Bacillus,
обладающих высоким показателем
подвижности, в отношении гриба Sclerotinia sclerotiorum
Краснодар, ВНИИМК, 2011 г.
Штамм
Контроль
01 корf Bacillus sp.
D 10 Bacillus sp.
D 1-1 Bacillus sp.
Fa 4-1 B. subtilis
Fa 4-2 Bacillus sp.
Far 8 Bacillus sp.
5-3 Bacillus sp.
D 7-1 B. subtilis
D 7-3 Bacillus sp.
Р-8 B. polymyxa
Fz 9 Bacillus sp.
Б (2-1) B. licheniformis
Б-2 B. circulans
Б-4 B. circulans
Б-5 B. licheniformis
Б-12 B. licheniformis
Рост мицелия патогена
от посевного блока, мм
инкубация, сутки
5-е
7-е
8,0±0,7
74,0±1,4
1,5±0,5
1,5±0,5
0
0
0
0
4,0±1,0
3,0±1,0
0
0
0
0
0
0
0
3,0±0,5
0
0
27,5±2,5
27,5±2,5
0
0
4,0±2,0
4,0±2,0
15,0±15,0
17,0±17,0
2,0±1,0
42,0±2,0
0
0
0
0
Максимальную ингибирующую активность по отношению к S. sclerotiorum
проявили штаммы D 1-1 Bacillus sp., D 10
Bacillus sp., Fa 4-2 Bacillus sp., Far 8 Bacillus sp., 5-3 Bacillus sp., D 7-3 Bacillus sp.,
Fz 9 Bacillus sp., Б-5 и Б-12 B. licheniformis, которые занимали всю площадь
питательной среды ЧП, блокируя развитие патогена (рис. 3).
Рисунок 3 – Антагонистическая активность штамма Б-12 Bacillus licheniformis к
возбудителю белой гнили Sclerotinia sclerotiorum (ориг.):
а – антагонист, б – патоген.
Таким образом, из коллекции бактерий-антагонистов выделились 15 штаммов с различным механизмом подавления
возбудителя белой гнили:12-2 Pseudomonas sp., 14-3 P. chlororaphis, 14-4 Pseudomonas sp., К1-1 B. subtilis, D 1-3 Bacillus
sp., Р-9 B. polymyxa, D 1-1 Bacillus sp., D 10
Bacillus sp., Fa 4-2 Bacillus sp., Far 8 Bacillus sp., 5-3 Bacillus sp., D 7-3 Bacillus sp.,
Fz 9 Bacillus sp., Б-5и Б-12 B. licheniformis.
Следующим этапом скрининга было
определение влияния выделенных перспективных штаммов грибов и бактерийантагонистов на жизнеспособность склероциев белой гнили методом инфекционной капли (табл. 4).
Таблица 4
Влияние перспективных штаммов
грибов-антагонистов на жизнеспособность
склероциев белой гнили (метод инфекционной
капли)
Краснодар, ВНИИМК, 2011, 2012 гг.
Штамм
Титр, КОЕ/г
Контроль
T-1 Trichoderma sp.
T-2 Trichoderma sp.
T-3Trichoderma sp.
PK-1-3 Penicillium vermiculatum
Pr-1 P.rugulosum
Tr-1 Trichothecium roseum
Sm-1 Sordaria macrospora
Xk-1 Chaetomium olivaceum
Xk-1-4 Ch.olivaceum
Xk-2 Ch .globosum
Tt-1 Talaramyces trachispermus
4,8 x 109
5,2 x 109
2,8 x 109
2,0 х 109
2,8 х 109
2,8 х 109
1,8 x 108
1,7 x 108
1,8 x108
2,0 x108
2,0 х 109
Жизнеспособность
склероциев,
%
90,0
20,0
30,0
40,0
40,0
30,0
60,0
40,0
30,0
0
30,0
60,0
При испытании грибов-антагонистов
склероции полностью разлагались за 60
дней в варианте с грибом Xk-1-4 Ch. olivaceum (рис 4). Ha 80,0 % снижалась жизнеспособность склероциев при нанесении
суспензии гриба T-1 Trichoderma sp., на
70,0 % – Xk-1 Ch. olivaceum, Xk-2
Ch. globosumи, на 60,0 % – T-3 Trichoderma sp., Pk-1-3 P. vermiculatum и Sm-1 Sordaria macrospora.
Рисунок 4 – Подавление жизнеспособности
склероциев белой гнили Sclerotinia sclerotiorum штаммом Хk-1-4 Chaetomium olivacеum
(ориг.):
а – контроль, в – вариант.
При смачивании склероциев суспензиями бактерий и дальнейшем содержании их во влажной камере жизнеспособность склероциев снижалась меньше
(табл. 5).
При замачивании склероциев суспензиями бактерий рода Pseudomonas, и дальнейшем содержании их во влажной камекамере жизнеспособными оставались 80,0
% склероциев.
Таким образом, в результате скрининга
выделились
штаммы грибов Xk-1-4
Ch. olivaceum, T-1 Trichoderma sp., и бактерии Б-5 и Б-12 B. licheniformis, разлагающие склероции белой гнили на 80–100 %.
Дальнейший этап скрининга включал
исследование активных штаммов грибов
и бактерий-антагонистов на возможное
токсическое, патогенное воздействие на
культуру рапса (табл. 6).
Таблица 6
Фитотоксичность перспективных штаммов
антагонистов к культуре рапса, сорт Миот
Краснодар, ВНИИМК, 2011, 2012 гг.
Таблица 5
Влияние перспективных штаммов
бактерий-антагонистов на жизнеспособность
склероциев белой гнили (метод инфекционной
капли)
Краснодар, ВНИИМК, 2011, 2012 гг.
Штамм
Контроль
Б-5 Bacillus licheniformis
Б-12 B. licheniformis
К -1-1 Bacillus subtilis
D1-3 Bacillus sp.
5-3 Bacillus sp.
D-1-1 Bacillus sp.
D 10 Bacillus sp.
Fa 4-2 Bacillus sp.
Far 8 Bacillus sp.
D 7-3 Bacillus sp.
Fz 9 Bacillus sp
Р-9 B. polymyxa
12-2 Pseudomonas sp.
14-3 P. chlororaphis
14-4 Pseudomonas sp.
Титр,
КОЕ/мл
1,0 х 1010
1,2 х 1010
1,8 х 1010
1,8 х 1010
1,5 х 1010
1,0 х 1010
1,3 х 1010
1,0 х 1010
1,6 х 1010
1,2 х 1010
1,4 х 1010
1,5 х 1010
1,8 х 1012
1,5 х 1012
1,0 х 1012
Жизнеспособность
склероциев, %
90,0
20,0
20,0
50,0
90,0
50,0
50,0
80,0
80,0
70,0
70,0
60,0
70,0
80,0
80,0
80,0
На 80,0 % разлагались склероции в вариантах с бактериями Б-5 и Б-12 B. licheniformis,
на 50,0 % – в вариантах со штаммами К-1-1
B. subtilis, 5-3 Bacillus sp. и D 1-1 Bacillus sp.
Вариант
Контроль
Б-5 Bacillus licheniformis
Б-12 Bacillus licheniformis
Tk-1 Trichoderma sp.
Xk-1-4 Chaetomium olivaceum
Обработка
семян
всхожесть,
%
92,0
97,0
98,0
98,0
98,0
Погружение корней
проростков
в суспензию
увядание,
%
0
0
0
0
0
Анализ данных показал, что тестируемые штаммы не оказывают негативного
влияния на всхожесть семян, а также не
вызывают увядания проростков рапса.
Далее было исследовано влияние перспективных штаммов антагонистов на
культуру озимого рапса с целью установления их ростостимулирующего действия (табл. 7).
Установлено, что перспективные штаммы антагонистов обладали ростостимулирующей активностью, оказывая наибольшее влияние на длину и массу корня
рапса (118,1–246,1 и 133,3–266,7 % соответственно). Максимальное увеличение
этих показателей установлено у штаммов
Xk-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-12 B. licheniformis. Кроме того, штамм Xk-1-4
Ch. olivaceum значительно увеличивал
длину и массу побега (42,2–50,0 %).
Таблица 7
Влияние активных штаммов антагонистов
на рост и развитие проростков озимого
рапса, сорт Миот
Длина корня
Вариант
см
в%
к
контролю
Контроль
3,04
XK-1-4
Chaetomium
olivaceum 6,63 118,1
T-1
Trichoderma sp. 6,94 128,2
Б-5
Bacillus
licheniformis
10,45 243,8
Б-12
Bacillus
licheniformis
10,52 246,1
Длина
побега
в%
к
см контролю
2,87
-
4,08
42,2
2,82
Масса
Масса побега
корня
в%
в%
к
к
г
контг
контроролю
лю
0,006
-
0,022
-
0,017 183,3
0,033
50,0
0
0,014 133,3
0,021
0
2,96
3,1
0,018 200,0
0,018
0
3,00
4,5
0,022 266,7
0,21
0
Выводы. 1. Из коллекции грибовантагонистов выделены 11 штаммов, с различным механизмом подавления возбудителя белой гнили: T-1, T-2, T-3 Trichoderma
sp., Pk-1-3 Penicillium vermiculatum, Pr-1
Penicillium rugulosum, Tr-1 Trichothecium
roseum, Tt-1 Talaramyces trachispermus, Xk-1,
Xk-1-4 Chaetomium olivaceum и Хk-2
Chаetomium globosum.
2. Из коллекции бактерий-антагонистов выделены 15 штаммов с различным механизмом подавления возбудителя
белой гнили: 12-2 Pseudomonas sp., 14-3
Pseudomonas chlororaphis, 14-4 Pseudomonas sp., К1-1 B. subtilis, D 1-3 Bacillus
sp., Р-9 B. polymyxa, D 1-1 Bacillus sp., D 10
Bacillus sp., Fa 4-2 Bacillus sp., Far 8 Bacillus sp., 5-3 Bacillus sp., D 7-3 Bacillus sp.,
Fz 9 Bacillus sp., Б-5 B. licheniformis и
Б-12 B. licheniformis.
3. В результате ступенчатого скрининга отобраны
штаммы гриба Xk-1-4
Chaetomium olivaceum и бактерии Б-12
Bacillus licheniformis, разлагающие склероции белой гнили на 80–100 % и обладающие ростостимулирующей активностью к культуре рапса.
Исследования выполнены при финансовой
поддержке РФФИ, грант 11-08-96512.
Список литературы
1. Huang, H.C. Pathogenicity and survival of the tan-sclerotial strain of Sclerotinia
sclerotiorum / H.C. Huang // Canada I. Plant
Pathol. – 1984. – 5, № 4. – P. 245–247.
2. Huang, H.C. Penetration of hyphae of
Sclerotinia sclerotiorum by Coniothyrium
minitans without the formation of appressoria /
H.C. Huang, E.G. Kokko // I. Phytopathol. –
1988. – 123, № 2. – P. 133–139.
3. Sesan, T. Biocontrol of Botritis cinerea
and Sclerotinia sclerotiorum with Trichoderma sp. and Coniothyrium minitans / T.
Sesan, M. Oprea, N. Csep [et al.] // Phytoparasitica. – 1999. – 27, № 1. – P. 67.
4. Бондаренко, А.И. Микофлора склероциев белой гнили подсолнечника и еѐ
гиперпаразитическая активность / А.И.
Бондаренко, М.Е. Штейнберг // Биологическая регуляция численности вредных
организмов. – М.,1986. – С. 122–133.
5. Богданова, В.Н. Применение гиперпаразита Coniothyrium minitans против белой гнили подсолнечника / В.Н. Богданова,
Н.П. Крутова // Бюллетень ВНИИ защиты
растений. – СПб., 1988. – 70. – С. 7–11.
6. Чабан, В.С. Результаты испытания
биопрепарата Т-3 на основе Coniothyrium
minitans против белой гнили подсолнечника / В.С. Чабан, И.В. Якубова, А. Н.
Корнейчук // Проблемы создания и применения микробиологических средств
защиты: тез. докл. Всес. конф. (16–18 мая
1989 г.). – Велегож, 1989. – С. 244.
7. Zazzerini, A. Prove di antagonisto di
alcuni isolati batterici nei confronti della
Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary / A.
Zazzerini, L. Tosi // Inform. Fitopatologico.
– 1985. – 35, № 1. – P. 27–30.
8. Pieta, D. Micopasozythictw Penicillium vermiculatum Dang. i Verticillium tenerum (Neet ex Pers) Link w stosunku do
niektorych fitopatogen ow fasoli / D. Pieta //
Biul.LTN. Biol. – 1988 (1991). – 30, № 1–2.
– C. 23–30.
9. Phillips, A. I. L. Fungi associated with
sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum in South
Africa and their effects on the pathogen /
A.I.L. Phillips // Phytophylactica. – 1989. –
21, № 2 – P. 135–139.
10. Chin, W.P. Hyperparasitism of Gliocladium delibuescens and Penicillium vermiculatum of Sclerotinia sclerotiorum / W.
P. Chin // Biological Abstrats I.A. – 1989. –
V. 31, № 2. – P. 175–184.
11. Knudsen, G.R. Potential for biocontrol
of Sclerotinia sclerotiorum through colonization of sclerotia by Trichoderma harzianum / G.R. Knudsen, D.I. Eschen, L.M.
Dandurand [et al.] // Plant Disease. – 1991. –
75, № 5. – P. 466–470.
12. McLaren, D.L. Biological сontrol of
Sclerotinia wilt of sunflower with Talaromyces flavus and Coniothyrium minitans /
D.L. McLaren, H.C. Huang, G.C. Kozub [et
al.] // Plant Disease. – 1994. – 78, № 3. – P.
231–235.
13. Huang, H.C. Effect of allyl alcohol
and fermented agricultural wastes on carpogenic germination of sclerotia of Sclerotinia
sclerotiorum and colonization by Trichoderma sp. / H. C. Huang, I. W. Huang, G.
Saindon [et al.] // Can. J. Plant Phatol. –
1997. – 19, № 1. – P. 43–46.
14. Soitonq, K. Application of Chaetomium sp. (Ketomium) as a new broad
spectrum biological fungicide for plant disease control / K. Soitonq, S. Kanokmedhakul, V. Kukonqviriyapa [et al.] // A
review article Fungal Diversity. – 2001. – 7.
– P. 1–15.
15. Шатрова, Г.Л. Влияние некоторых
штаммов гриба Trichoderma lignorum на
рост и развитие Sclerotinia sclerotiorum в
культуре / Г.Л. Шатрова // Микробиологический метод борьбы с болезнями и
вредителями растений. – Кишинѐв, 1984.
– С. 3–18.
16. Тихонов, О.И. Грибы-антагонисты
склероциев белой гнили подсолнечника /
О.И. Тихонов, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. –Краснодар, 1985. – Вып. 4
(91). – С. 25–29.
17. Тихонов, О.И. Влияние грибовантагонистов на выживаемость склероциев белой гнили в почве / О.И. Тихонов,
Л.В. Маслиенко // Болезни подсолнечни-
ка. Сб. науч. работ ВНИИ масличных
культур. – Краснодар. – 1988. – С. 15–18.
18. Штейнберг, М.Е. Сравнительная
характеристика некоторых изолятов Gliocladium - биологических агентов в борьбе
с белой гнилью подсолнечника / М.Е.
Штейнберг, И.А. Завелишко // Микробиолгия. –1988. – Т. 50. – № 6. – С. 63–67.
19. Богданова, В.Н. Применение гиперпаразита Coniothyrium minitans против белой гнили подсолнечника / В.Н. Богданова,
Н.П. Крутова // Бюллетень ВНИИ защиты
растений. – СПб., 1988. – 70. – С. 7–11.
20. Афанасьева, Л.В. Перспектива
применения бактерий против возбудителя
белой гнили подсолнечника / Л.В. Афанасьева, И.Н. Скворцова // Микробиологический метод защиты растений от
вредителей, болезней и сорняков. – Кишинѐв, 1989. – С. 86–92.
21. Маслиенко, Л.В. Штамм бактерии
Bacillus licheniformis для получения препарата против белой гнили подсолнечника: пат. 2032345 Россия, МКИ6 А01 №
63/00, С. 12 № 1/20 / Л.В. Маслиенко,
О.А. Лавриченко.- № 5005211/13; Заявл.
03.07.91; Опубл. 10.04.95, Бюл. № 10.
22. Маслиенко, Л.В. Биологический метод защиты подсолнечника и других
сельскохозяйственных культур от болезней // Агро ХХI. – 1999. – № 8. – С. 9.
23. Маслиенко, Л.В. Обоснование и
разработка микробиологического метода
борьбы с болезнями подсолнечника / Любовь Васильевна Маслиенко // Автореф.
дис. … док. биол. наук. – Краснодар,
2005. – 49 с.
24. Егоров, Н.С. Выделение микробовантагонистов и биологические методы
учета их антибиотической активности /
Н.С. Егоров. – М.: Изд-во МГУ, 1957. –
78 с.
25. Богданова, В.И. Лабораторная
оценка антагонистической активности
Coniothyrium minitans Campb. / В.И. Богданова, Г.Д. Клименко // Микробиологический метод борьбы с вредителями и
болезнями растений. – Кишинѐв, 1984. –
С. 70–79.