Insert FQS-MS_ver 1011_RU_doc3841

Общая информация
Ку-лихорадка
-
зоонозная
Перечень компонентов
болезнь
животных.
всего
бессимптомно
и
характеризуется
выкидышами в конце беременности. Инфицированные
1.
Не пипетировать растворы ртом.
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
кожи в случае контакта.
3.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M) может вызвать серьезные
ожоги кожи (R35). При попадании на кожу и в глаза
следует
немедленно
промыть
их
большим
количеством воды и обратиться за медицинской
помощью (S26).
Компоненты*
Вызавается риккетсиями Coxiella burnetii, протекает
чаще
Меры предосторожности
Микропланшет с адсорбированным в лунках антигеном
Coxiella burnetii
животные выделяют возбудителя с кровью, слюной,
Концентрат коньюгата (10 х)
мочой, калом и молоком. Особенно инфицированы
Положительний контроль
плодные оболочки и воды.
Отрицательный контроль
В наборе ID Screen® Q Fever Indirect используется
штамм
Coxiella burnetii
фаз I и II, полученный во
Франции из коровьего выкидыша. Может применяться
для диагностики сывороток и плазмы крови и молоке
Буферный раствор 2
4.
Буферный раствор 3
Концентрат промывочного раствора (20 х)
Не оставлять субстратный раствор под действием
прямого солнечного света и не допускать его
окисления.
коров, коз и овец. Консультация в случае применения к
Субстратный раствор
другим видам.
Стоп-реагент
Описание и принцип действия
Лунки микропланшета сенсибилизированы штаммом
Coxiella burnetii фаз I и II фаз.
При внесении в лунки микропланшета образцов
исследуемых сывороток, антитела, специфические к
Coxiella burnetii,
связываются на твердой фазе с
антигенами, образуя комплексы антиген - антитело.
После этапа промывки в лунки вносится специфический
иммуноферментный
коньюгат,
меченный
пероксидазой, который связывается с Coxiella burnetii,
образуя комплексы антиген- антитело-коньюгат. После
отмывания несвязанных компонентов в лунки
добавляют субстратный раствор проявителя – хромоген
(TMB). Пероксидазную реакцию останавливают,
добавляя стоп-реагент.
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
отсутствии либо наличии в исследуемых образцах
антител, специфичных к Coxiella burnetii:
-
-
При наличии антител раствор имеет синий цвет,
который становится желтым после добавления
стоп-реагента;
При
отсутствии
окрашивается.
антител
раствор
не
Оптическую
плотность
раствора
измеряют
фотометрически при длине волны 450 нм.
Страница 2
FQS-MS версия 1011 RU
5.
* Поставляемые количества компонентов обозначены
на этикетке комплекта
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный
6.
Все одноразовые материалы, используемые в работе,
необходимо продезинфицировать в 5% растворе
натрия гипохлорида за 1 час до начала работы или
0
автоклавировать при температуре +120 С.
Дезактивировать все реагенты перед уничтожением.
раствор хранят при Т +5°C (± 3°C).
Подготовка образцов
2. Другие реактивы хранят от Т +2°C до +26°C.
3. Все
компоненты,
имеющие
одинаковые
наименования (промывочный раствор, растворители)
могут применяться ко всей гамме продукции IDvet.
Дополнительные материалы и
оборудование
1.
Пипетки
одноканальные
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и, 200µl.
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
микропланшета.
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
5.
Ручная или автоматическая промывочная установка.
Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
рекомендуется предварительно внести все образцы и
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
внести
многоканальным
дозатором
в
рабочий
микропланшет.
Подготовка промывочного раствора
Доведите концентрат промывочного раствора (20х) до
комнатной температуры перед разведением. При наличии
кристаллов необходимо тщательно перемешать.
Для приготовления промывочного раствора
(1X)
необходимо развести концентрат промывочного раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
Для анализа сыворотки и плазмы крови:
1.
Внести:
- 90 мкл Буферного раствора 2 в каждую лунку.
- 10 мкл Отрицательного контроля в лунки A1 и В1.
- 10 мкл Положительного контроля в лунки C1 и D1.
-10 мкл каждого исследуемого образца в оставшиеся
лунки.
2. Инкубировать (45±
±4) мин при (21 ± 5)°C.
3. Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку. Избегать
высыхания лунок между этапами промывки.
Для анализа индивидуальных образцов и пула
молока:
Центрифугировать каждый образец молока (или просто
оставить на время образцы), чтобы сливки отделились
от молочной сыворотки (сливки сверху, сыворотка
молока внизу). Осторожно пипетировать сыворотку под
сливками так, чтобы только она попала в конус
наконечника (в молочной сыворотке антитела
присутствуют).
1. Внести:
- 90 мкл Буферного раствора 2 и 10 мкл
Отрицательного контроля в лунки А1 и В1 .
- 90 мкл Буферного раствора 2 и 10 мкл
Положительного контроля в лунки С1 и D1.
- 50 мкл Буферного раствора 2 и 50 мкл каждого
образца молока (индивидуального или пула) в
оставшиеся лунки.
2. Инкубировать (45±
±4) мин при (21 ± 5)°C.
3. Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку. Избегать
высыхания лунок между этапами промывки.
Обратить внимание на то, чтобы не оставался
белый след от сливок после промывки. Для
избежания этого, можно оставлять промывочный
раствор на 2-5 минут между каждой промывкой.
Процедура анализа
Все реагенты набора перед использованием должны иметь
комнатную температуру (21 ± 5)°C и перемешаны.
Страница 3
FQS-MS версия 1011 RU
Для всех протоколов:
4.
Certified
management
system
Интерпретация результатов
Подготовить
конъюгат
(1X)
разведением
концентрата конъюгата (10X) в соотношении
1:10 в Буферном растворе 3.
5.
Внести 100 мкл конъюгата (1X) в каждую лунку.
6.
Инкубировать (30±
±3) мин при (21± 5)°C.
7.
Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
Для каждой исследуемой пробы рассчитывается
процентное значение S/P (S/P%):
ОП пробы - ОП кS/P % =
8.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в каждую
лунку.
9.
Инкубировать (15±
±2) мин при (21±5)°C в темноте.
x 100
ОП к+ - ОП к-
Сыворотка и плазма крови:
10. Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для остановки реакции.
Значение S/P
Интерпретация результата
S/P % ≤ 40%
отрицательный
40% < S/P % ≤ 50%
сомнительный
50% < S/P % ≤ 80%
положительный
S/P % > 80%
сильно положительный
ID Screen®
Q Fever Indirect Multi-species
11. Измерить оптическую плотность (ОП) при 450 нм.
Молоко: индивидуальные образцы:
Валидация
Проведение анализа считают корректным, если:
среднее
значение
оптической
Значение S/P
Интерпретация результата
S/P % ≤ 50%
отрицательный
50% < S/P % ≤ 60%
сомнительный
S/P % > 60%
положительный
плотности
положительного контроля (ОПк+) больше, чем 0,35:
Для диагностики in vitro
Молоко: пул образцов:
ОПK+ > 0,35
ОП
Значение S/P
Интерпретация результата
положительного контроля (ОПК+) и отрицательного
S/P % ≤ 30%
отрицательный
30% < S/P % ≤ 40%
сомнительный
S/P % > 40%
положительный
отношение
между
Тест-система для выявления антител к Coxiella burnetti
непрямым иммуноферментным методом (ELISA) в сыворотке и
плазме крови, а также молоке коров, коз и овец
средними
контроля (ОПк-) больше 3:
значениями
FQS-MS версия 1011 RU
ОП K+ / ОПK- > 3
Страница 4
FQS-MS версия 1011 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: info@id-vet.com