Изучите полную инструкцию перед началом работы 117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6 Тел./факс +7 (495) 980-45-55 Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный) E-mail: hotline@dna-technology.ru, www.dna-technology.ru Только для научноисследовательских целей Набор реагентов для выявления условно-патогенных микроорганизмов полости рта методом ПЦР в режиме реального времени (ПародонтоСкрин) Информация о наборе Назначение: Набор реагентов «ПародонтоСкрин» предназначен для выявления условно-патогенных микроорганизмов полости рта методом ПЦР в режиме реального времени. Метод: Полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени. Материал для исследования: зубные отложения, десневая жидкость. Выделение ДНК: Рекомендуются комплекты реагентов для выделения нуклеиновых кислот ПРОБА-ГС-ПЛЮС, ПРОБА-НК-ПЛЮС (ООО «НПО ДНК-Технология»). Особенности набора: Внутренний контрольный образец (ВК)– необходим для контроля прохождения полимеразной цепной реакции. КВМ – требуется для анализа качества выделения и позволяет определить, достаточно ли полученного количества ДНК для проведения анализа. Приборное обеспечение: Амплификаторы детектирующие (ООО «НПО ДНК-Технология») ДТлайт1, ДTпрайм2 и ДТ-96; версия программного обеспечения не ниже 7.6.5.12 Время проведения анализа (с учётом пробоподготовки): от 4 ч. Количество определений: 24 Состав набора: 1 2 Реактив Смесь для амплификации, запечатанная парафином Раствор Taq–полимеразы Минеральное масло Положительный контрольный образец («К+») – только модели 4S1; 4S2; 5S1; 5S2; 6S1; 6S2 – только модели 4M1; 4M3; 4M6; 5M1; 5M3; 5M6; 6M1; 6M3; 6M6 20 мкл 480 мкл 960 мкл 150 мкл Количество 24 стрипа по 8 пробирок 4 пробирки 4 пробирки 1 пробирка Изучите полную инструкцию перед началом работы Состав стрипов ПародонтоСкрин, цветовая маркировка и каналы детекции продуктов амплификации Hex Rox Цветовая маркировка буфера ВК - Голубой ВК - ВК ВК ВК - 6 Общая бактериальная масса Actinobacillus actinomycetemcomitans Porphyromonas gingivalis Prevotella intermedia Tannerella forsythensis (Bacteroides forsythus) Treponema denticola ВК - 7 Candida albicans ВК - 8 КВМ ВК - Канал детекции № пробирки 1 2 3 4 5 Fam Маркер Бесцветный Проведение анализа 1. Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции 1.1. Промаркируйте по одному стрипу со смесями для амплификации для каждого исследуемого образца, отрицательного контрольного образца («K–») и положительного контрольного образца («К+»). Примечание. Один стрип рассчитан на исследование одного образца. Например, необходимо проанализировать два образца. Нужно промаркировать 2 стрипа для исследуемых образцов, один для «K–» и один для «K+». Общее количество стрипов – 4 (таблица 1). Таблица 1 Маркировка пробирок для проведения ПЦР Образец 1 Образец 2 «K–» «K+» Пробирки Пробирки Пробирки Пробирки 1-8 1-8 1-8 1-8 1.2. Встряхните пробирку с с раствором Taq-полимеразы в течение 3–5 сек на микроцентрифуге/вортексе и центрифугируйте при 1000 об/мин в течение 3–5 сек. 1.3. Добавьте в каждую пробирку стрипов, не повреждая слой парафина, по 10 мкл раствора Taqполимеразы. 1.4. Добавьте в каждую пробирку стрипов по 1 капле (около 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки пробирок. 1.5. Для предотвращения контаминации следует перед внесением образцов открывать крышку только того стрипа, в который будет вноситься данный образец, и закрывать ее перед внесением следующего. Препараты ДНК рекомендуется вносить наконечниками с фильтром. 1.6. Внесите в каждую пробирку стрипов для исследуемых образцов, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл выделенного из образцов препарата ДНК (один стрип для каждого образца). 1.7. Внесите в каждую пробирку стрипов, маркированных «K–», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения НК. Внесите в каждую пробирку стрипов, маркированных «K+», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл положительного контрольного образца. 1.8. Центрифугируйте стрипы на микроцентрифуге/вортексе в течение 1-3 сек. 1.9. Установите все стрипы в блок амплификатора детектирующего. 1.10. Запустите программное обеспечение RealTime_PCR в режиме «Работа с прибором». При первом проведении ПЦР создайте или загрузите файл «Parodont». При последующих постановках добавьте в протокол тест «Parodont», укажите количество и идентификаторы образцов, в том числе положительного и отрицательного контрольных образцов, отметьте расположение пробирок на матрице термоблока в соответствии с их установкой (см. п. 1.9) и проведите ПЦР. 2. Регистрация и учёт результатов ПЦР проводится автоматически программным обеспечением для амплификаторов детектирующих. Интерпретация результатов проводится в соответствии с таблицей 2. Внимание! Значение КВМ меньше 2,5 следует интерпретировать как недостаточное количество материала. Изучите полную инструкцию перед началом работы Таблица 2 Количество микроорганизмов в зубных отложениях и десневой жидкости при различных состояниях (Lg ГЭ/образец) Степень пародонтита № Название микроорганизма Норма Легкая/ Средняя Тяжелая 1 Общая бактериальная масса <6,5 ≥6,5 >7,5 2 Actinobacillus <4,0 ≥4,0 >5,0 <5,0 <4,5 ≥5,0 ≥4,5 >6,0 >6,0 <5,0 ≥5,0 >5,5 6 Porphyromonas gingivalis Prevotella intermedia Tannerella forsythensis (Bacteroides forsythus) Treponema denticola <3,5 ≥3,5 >5,0 7 Candida albicans <4,5 ≥4,5 >6,0 actinomycetemcomitans 3 4 5 Условия хранения и эксплуатации Набор следует хранить в тёмном месте при 2–8 °С в течение всего срока годности. Срок годности набора – 9 месяцев с даты изготовления. По вопросам, касающимся качества набора реагентов для выявления условно-патогенных микроорганизмов полости рта методом ПЦР в режиме реального времени (ПародонтоСкрин), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, тел./факс +7 (495) 980-45-55, www.dna-technology.ru Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный), E-mail: hotline@dna-technology.ru Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»: http://www.dna-technology.ru/support/ Номер: 346 16.01.15 Изучите полную инструкцию перед началом работы ДНК-Технология 117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, корп.6 Тел./факс +7 (495) 980-45-55 Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный) Е-mail: hotline@dna-technology.ru