ОБНАРУЖЕНИЕ СПОР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ВО

ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈß
свиней имел наибольшее распространение в Брестской, Гомельской,
Могилевской и Витебской областях,
в 1966−1977 гг. — в Могилевской,
Витебской, Гомельской, Брестской
и Гродненской областях. С 1977 по
2002 гг. наиболее широко регистрировался пастереллез свиней в Минской (26,0%), Гродненской (25,8%) и
Гомельской (17,6%) областях.
Заключение
На основании приведенных данных
можно сделать заключение, что пастереллез в Республике Беларусь является
широко распространенным заболеванием свиней. В ближайшие годы зна-
чительного улучшения эпизоотической
ситуации по пастереллезу свиней не
прогнозируется.
Распространение
пастереллеза
в республике тесно связано с этапами развития сельского хозяйства
и свиноводства в частности. В связи с этим изучение эпизоотической
ситуации по пастереллезу свиней в
Республике Беларусь в настоящий
момент является актуальным вопросом. Это изучение должно проводится, основываясь на глубоком анализе
эпизоотической ситуации по пастереллезу и другим инфекционным заболеваниям.
EPIZOOTOLOGICAL SITUATION AND PROGNOSIS ON PASTEURELLOSIS
OF SWINE IN THE REPUBLIC OF BELARUS
Y.G. Lyakh
S.N. Vyshelesski Institute of Experimental Veterinary Medicine NAS of the Republic of Belarus.
Summari
the carcasses of died animals were analyzed. It
The data of the Chief department of vetis established, that pasteurellosis of swine is a
erinary medicine of the Ministry of agriculwidespread disease in the Republic of Belarus.
ture, the results of the clinical and epizootoIn coming years considerable improvement of
logical examination of swine-breeding farms,
epizootological situation on this disease cannot
unsafe in regard to respiratory diseases, and
be prognosticated.
the data of pathoanatomical examination of
Литература
1. Андросик Н.Н., Лях Ю.Г. Профилактика пастереллеза сельскохозяйственных животных на современном этапе. // Весці акадэміі навук Рэспублікі Беларусь. Мінск, 2000. № 4. С. 62-64.
2. Геведзе В.И. Пастереллез свиней. Минск
«Ураджай», 1979. 140 с.
3. Лях Ю.Г. Актуальные вопросы борьбы с заболеваниями молодняка сельскохозяйственных животных пастереллезной этиологии в
условиях Республики Беларусь. // Teз. докл.
III Международной научно-практич. конф.
Уч. записки ВГАВМ. Том 35. - Витебск 4-5
ноября 1999 г. С. 88-89.
4. Лях Ю.Г. Пастереллоносительство у свиней
и его вакцинопрофилактика. // Пятый международный форум по глобальной вакцинологии «Вакцины и иммунизация». Минск,
15-16 октября 2001. С. 46.
УДК 619:579.852.11:577.21
ОБНАРУЖЕНИЕ СПОР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ВО
ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
Н.М. Александрова, Т.Х. Фаизов
Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт
(ТЕЗИСЫ)
В данном сообщении приведены
результаты индикации возбудителя
сибирской язвы в объектах окружающей среды и кормах.
С этой целью была усовершенствована подготовка проб различных
объектов для индикации бацилл анВетеринарная патология. № 1. 2003.
тракса молекулярно-генетическими
методами, синтезированы специфичные праймеры и разработана технология проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для индикации генома В. аnthracis.
Проведен сравнительный анализ
139
ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈß
индикации возбудителя методом ПЦР
с общепринятыми методами.
Исследования проводили со штаммами В. аnthracis: СТИ, 55, Ч-7, 34F2,
71/12. Для контроля специфичности
реакции использовали бациллы гетерологичных видов: В. cereus № 8035,
В. subtilis № 433, B. pseudoanthracis
104/2, а также бактерии других родов:
Brucella abortus шт. 54 и Listeria monocytogenes.
ДНК из спор выделяли по методу
Мармура (1961) с некоторыми модификациями.Концентрацию и чистоту
препаратов ДНК определяли спектрофотометрически (Реrkin-Elmer-402).
Полимеразную цепную реакцию
выполняли на амплификаторе, в автоматическом режиме поддерживающем заданные температурные и временные параметры амплификации
(по R.K. Saiki, 1985). ПЦР проводилась как с очищенными препаратами
ДНК, так и с лизатами бактерий.
Для синтеза праймеров выбрали
участки ДНК плазмиды рХ02 возбудителя сибирской язвы, отстоящие
друг от друга на расстоянии 622 пары нуклеотидов. К нуклеотидной последовательности этих участков были синтезированы комплементарные
праймеры.
В результате исследований были
определены оптимальные условия
проведения реакции с данной парой
праймеров. Установили, что оптимальной температурой “отжига” является 55оС, а концентрация ионов
магния в смеси для ПЦР должна быть
8 мМ.
При амплификации фрагментов
ДНК, на матрице Вас.аnthracis шт.
Ч-7 синтезировался специфичный
фрагмент. В то же время праймер ни
с одним из бескапсульных штаммов
бацилл сибирской язвы и геномов
гетерологичных видов и родов не
связывался и не инициировал синтез фрагментов ДНК. Из результатов этих опытов видно, что праймер
94+95 обнаруживает геном капсуло140
образующих штаммов возбудителя
сибиреязвенной инфекции, то есть
позволяет выявлять только патогенные штаммы.
Для определения пригодности метода ПЦР для индикации возбудителя
сибирской язвы в различных объектах нами были проведены модельные
опыты. В качестве объектов исследования нами использовались почва,
зерно и вода, контаминированные
спорами В. anthracis шт. 71/12.
Навески почвы и зерна по 300 г
контаминировали из расчета 100 спор
на 1 г и для контроля В.сеreus в количестве 10 тыс. спор на 1 г. Пробы
заливали тремя объемами физиологического раствора и перемешивали в
течение 15 минут. Смесь отстаивали
30 минут и фильтровали через фильтровальную бумагу в центрифужные
пробирки. После центрифугирования
при 5000g в течение 15 минут, осадок
ресуспендировали в 200 мкл ТЕ-буфера. Лизирование клеток проводили
при помощи гидрооксида натрия.
Пробы воды по 3 литра, контаминировали спорами В.аnthracis шт. 71/
12, в количестве 5 и 10 спор на 1 см3.
Данное количество зараженной воды фильтровали через мембранные
фильтры (Владипор № 3), после чего
фильтры измельчали и обрабатывали
лизирующей смесью.Из приготовленных препаратов на реакцию брали по
3 мкл лизата.
Специфичный фрагмент синтезировался на матрице, ДНК бацилл антракса из всех проб и не было синтеза
на матрице В.cereus. В результате экспериментов удалось установить, что
метод ПЦР позволяет обнаружить до
10 спор на 1 г (мл) пробы.
Анализ чувствительности, специфичности и эффективности использованных методов индикации
показал, что метод ИФА позволял
достоверно обнаруживать до 1000
спор на 1 г (см3) пробы. Метод ДНК
гибридизации оказался чувствительнее. Так с тотальным ДНК-зондом
Ветеринарная патология. № 1. 2003.
ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈß
выявлялось 100 спор в 82% проб,
а с рестрикционным зондом в 86%
случаев. Наиболее чувствительным
способом индикации оказался метод
ПЦР, позволяющий достоверно обнаруживать до 10 спор, с повторяемостью 97–99%.
Таким образом, из всех апробированных способов индикации возбуди-
теля сибирской язвы наиболее простым, экспрессивным и высокочувствительным оказалась полимеразная
цепная реакция. Простота испольнения, высокая чувствительность и
специфичность ПЦР дает основание
предложить данный метод в практику
районных и республиканских ветеринарных лабораторий.
УДК 616.981.136.616-07
ВЫЯВЛЕНИЕ LISTERIA MONOCYTOGENES В ОБЪЕКТАХ
ВЕТЕРИНАРНОГО НАДЗОРА
М.А. Алимов
Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт,
г. Казань
РЕЗЮМЕ
Установлена контаминированность объектов ветеринарного надзора возбудителем листериоза. Показана более высокая эффективность ПЦР по сравнению с бактериологическими исследованиями.
Возбудитель листериоза, обладая
выраженной пластичностью биологических свойств и высокой устойчивостью, способен не только длительно сохраняться, но и при определенных условиях размножаться на
объектах внешней среды [1, 3]. Поэтому имеется опасность заражения
людей и животных. Однако принятые на практике методы индикации
листерий трудоемки и недостаточно
чувствительны.
Одним из перспективных методов
обнаружения патогенных агентов является полимеразная цепная реакция
(ПЦР) [2, 3]. Однако пока еще этот
метод не получил широкого применения на практике.
Материал и методы
При ПЦР анализе в качестве мишени нами был использован фрагмент
ДНК гена листериолизина O hly. Была
синтезирована пара праймеров длиной
по 20 нуклеотидов, которые обозначили Л1+Л2. Опытным путем был определен оптимальный режим ПЦР. Отработанный режим ПЦР обеспечивал
Ветеринарная патология. № 1. 2003.
выявление ДНК листерий с чувствительностью до 10 микробных клеток
в 1 г (мл) пробы. Продолжительность
анализа составляла 5–6 часов.
Бактериологическим исследованиям и ПЦР анализу были подвергнуты
1100 проб продуктов, кормов, воды и
других объектов ветеринарного надзора (почва, растения, сточные воды
животноводческих ферм, мясокомбинатов, колбасных цехов, молочных
заводов, смывы с поверхности стен и
полов этих объектов).
Пробы жидких объектов, содержащие взвешенные частицы, предварительно очищали центрифугированием
при 500g в течение 5 мин. Затем надосадочную жидкость вновь центрифугировали при 4000g — 20 мин. Осадок
(видимый и предполагаемый) высевали на обычные и элективные жидкие и
плотные питательные среды.
Пробы сыпучих объектов разбавляли с физиологическим раствором
в соотношении 1:1 и инкубировали
при 37°С в течение 30 мин. Кусочки
колбас, сосисок, мясного фарша, тво141