фролова марина алексеевна промышленные технологии

На правах рукописи
[/
ФРОЛОВА
МАРИНА АЛЕКСЕЕВНА
ПРОМЫШЛЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ СЫРЬЯ
ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора биологических наук
1 /. м ю н 2012
Щелково - 2012
Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исгаедовательсьсий и технологический институт биологической промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук
Научный консультант: академик РАСХН, академик НААН Украины, доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат Государственной премии РФ, Заслуженный
деятель науки РФ Самуйленко Анатолий Яковлевич
Официальные оппоненты:
Мелентъев Александр Иванович-доктор биолоптческих наук, профессор. Институт
биологии УНЦ РАН, директор;
Скотникова Татьяна Анатольевна-доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», зав. лабораторией обеспечения качества вакцин;
Балышева Вера Ивановна-доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологи и микробиологии», ведущий научный сотрудник лаборатории биотехнологии, лауреат Государственной
премии.
Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт
экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»
Запщта состоится 03 июля 2012 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте
биологической промышленности РАСХН по адресу: 141142, Московская область,
Щелковский район, пос. Биокомбината, д.17, ВНИТИБП, e-mail: vnitibp@mail.ru
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научноисследовательского и технологического инстшута биологической промышленности.
Автореферат разослан 01 июня 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук
Фролов Юрий Дмитриевич
1 . 0 Б Щ А Я ХАРАКТЕРИСТИКА Р А Б О Т Ы
1Л.Актуальность работы. Разработка промышленной технологии производства биологически активных веществ из сырья природного происхождения
является важной задачей биотехнологии, позволяющей осуществить более
полное и комплексное использование биоресурсов.
В настоящее время вопросами разработки препаратов на основе переработки морепродуктов в различных областях народного хозяйства занимаются многие научные коллективы как в нашей стране, так и за рубежом (Новикова М.В. с соавт., 1997; Самуйленко А.Я. с соавт.,2003; Быкова В.М. с соавт.,2003; Гамзазаде А.И. с соавт.,2003; Большаков И.Н. с соавт.,2003; Фомичев Ю.П. с соавт., 2006; Wall D. et a l , 2001; Chaidedgumjom et al., 2002; Muzzarelli R.A.A. et al., 2005).
Хитозан привлекает внимание широкого круга исследователей и практиков благодаря комплексу физико-химических и биологических свойств и неограниченной воспроизводимой сырьевой базе. Полисахаридная природа хитозана обусловливает его сродство к живым организмам, а наличие реакционноспособных функциональных групп обеспечивает возможность разнообразных химических модификаций, позволяющих усиливать присущие ему
свойства или придавать новые в соответствии с предъявленными требованиями.
Значительный вклад в изучение хитина и хитозана внесли ученые: Быков
B.П.,
Рогожин C.B., Гамзазаде А.И., В.П., Варламов В.П., Албулов А.И.,
Немцев C.B., Нудьга Л.А., Скрябин К.Г., Сафронова Т.М., Быкова В.М., Вихорева Г.А., Феофилова Е.П., Маслова Г.В., Новиков В.Ю., Куприна Е.Э.,
Михайлов С.Н., Кильдеева Н.Р., Липатова И.М., Александрова В.А., Комаров
Б.А., Марквичева Е.А., Урьяш В.Ф., Братская С.Ю., Тихонов В.Е., Лопатин
C.А., Велешко А.Н., Ежова Е.А., Акопова Т.А и другие исследователи, работы которых направлены на изучение свойств хитина и хитозана, способов их
получения из разных видов сырья и применения в различных областях народного хозяйства.
•Л
4
Производство ферментных препаратов является одним из перспективных
направлений в современной биотехнологии. Ежегодный мировой прирост
объема их производства в настоящее время составляет 10-15 %. Наибольший
удельный вес среди выпускаемых ферментных препаратов (до 60% общего
объема) занимают протеиназы и амилазы. В настоящее время отечественная
промышленность заметно отстает по объему производства ферментов от ведущих зарубежных стран, а высокие цены на коммерческие трипсины зарубежных производителей стимулируют интерес к разработке и усовершенствованию технологических процессов его получения.
Применяемые в настоящее время методы выделения ДНК из сырья животного происхождения многостадийны, трудоемки и требуют дорогостоящего оборудования и реактивов. У нас в стране и за рубежом она производится в небольших объемах. Основным недостатком большинства способов
получения Д1Ж является дороговизна и сложность их воспроизведения в
промышленных условиях. В связи с этим, разработка промышленной технологии получения дезоксирибонуклеиновой кислоты для практического применения актуальна.
Одним из современных подходов к решению проблемы иммунной недостаточности у молодняка сельскохозяйственных животных является разработка, производство и применение новых экологически безопасных эффективных препаратов, таких как пробиотики и пребиотики, которые в малых дозах способны существенно изменять обмен веществ и повышать общую резистентность организма (Панин А.Н., 1997; Субботин В.В. с соавт.,1998; Тараканов Б.В., 1998; 2002; Мштик Н.И., 2002; Архипов A.B., 2010).
Богатейший источник биологически активных веществ - обитатели Мирового океана, в частности моллюски, в мясе которых обнаружены соединения,
обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности. Способность повышать общую резистентность организма связывают с
наличием в мидийных препаратах липидных антиоксидантов, меланоидинов
и микроэлементов.
5
1.2. Цель и задачи исследований. Цель работы - разработка промышленных технологий изготовления биолспгчески
акгивньк веществ из сырья
природного происховдения и создание на их основе новых экологически
безопасных эффекгавных биопрепаратов для применения в различных отраслях народного хозяйства.
Для достижения поставленной цели бьши определены следующие задачи:
- проанализировать современное состояние производства биологически
активных веществ;
-разработать технологические процессы производства производных хитозана, протеолитического ферментного препарата трипсина, дезоксирибонуклеиновой кислоты и мидийного гидролизата;
-изготовить
опытные
образцы
препаратов,
изучить
их
физико-
химические свойства, биологическую активность и эффективность применения в различных отраслях народного хозяйства;
- разработать нормативную документацию на препараты и освоить их
промышленный выпуск.
1.3. Научная новизна. Впервые разработаны промышленные технологии
получения
хитозана
с заданш,1ми характеристиками
для практического
применения.
Установлена
профилакгическая и терапевтическая эффективность низ-
комолекулярного хитозана (ММ 5-10 кДа) при гамма-облучении мышей радиоцезием в летальных дозах.
Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность использования хитозана для терапии и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.
Показана высокая ростостимулирующая активность хитозана при введении его в рацион подсоснь»! свиноматкам и поросятам, при этом у животных
отсутствовала стрессорная реакция адаптационного синдрома.
6
Установлены высокие сорбционные свойства хитозана в отношении бактерий
Р.тикос1(1а и показана возможность его использования в качестве
флокулянта в технологическом процессе концентрирования бакмассы.
Научно обоснована и экспериментально доказана эффективность влияния комплекса пробиотика «Проваген» с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.
Экспериментально доказана эффективность вьшаивания раствора хитозана из расчета 5 мг/голову начиная с 32-х дневного возраста в составе рациона кормления на среднесуточный прирост и живую массу цыплятбройлеров.
Включение в рецептуру лечебно-профилактической зубной пасты низкомолекулярного водорастворимого хитозана (ММ 10-40 кДа) позволило получить пасту с противовоспалительным и кариеспрофилактическим действием, а также высокими очищающими и дезодорирующими свойствами (Патент РФ № 2328267).
Впервые разработана промышленная технология изготовления протеолитического ферментного препарата трипсина, отличающаяся экологической
безопасностью производства, с применением адсорбента - природного полисахарида хитозана (Патент РФ № 2265053; Патент РФ № 2437936).
Впервые разработана промышленная технология изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты ( Д Ш ) из молок лососевых рыб с использованием
ферментного препарата трипсина.
Впервые разработана экологически безопасная промьппленная технология получения Мидийного гидролизата-биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус». (Патент РФ № 2284708).
Экспериментально обоснованы схемы применения Мидийного препарата при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы
для увеличения интенсивности роста и уровня естественной резистентности.
7
1.4. Практическая значимость работы
Результаты исследований использованы при разработке технологий изготовления: различных форм и модификаций хитозана («Хитозан пищевой»;
лекарственного средства для лечения и профилактики желудочно-кишечных
заболеваний молоднжа сельскохозяйственных животных «Хитозан»;' косметического сырья «Сукцинат хитозана», «Ламихит» - экстракта ламинарии с
хитозаном, «Фукохит» - экстракта фукуса с хитозаном); протеолитического
ферментного препарата трипсина; дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок лососевых рыб; мидийного гидролизата - биологически активной пищевой добавки из мяса мидий «Мидийный соус».
Промышленный выпуск разработанных препаратов освоен на производственном участке
отдела
получения
биологически
активных
веществ
ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс».
Создание новых технологий и организация промышленного выпуска биологически активных веществ дшш возможность их применения:
- в ветеринарии (лекарственное средство «Хитозан»);
- в пищевой промышленности («Хитозан шщевой», биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»,
биологически активная пищевая добавка «Мидийный соус»);
- в биологической промышленности (ферментный препарат трипсин);
- в парфюмерно-косметической промышленности (косметическое сырье
«Сукцинат хитозана», «Ламихит», «Фукохит», «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»).
Годовой объем выпуска биологически акгивных веществ в зависимости от
вида продукции и потребностей составляет от 800 кг до 3-5 тонн.
1.5 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-промьппленные технолопш изготовления низкомолекулярного хитозана
и сукцината хитозана;
-параметры острой и хронической токсичности хитозана;
-радиопротекторные и флокулирующие свойства хитозана;
- различные формы хитозана в ветеринарной практике;
-оценка эффективности влияния препаратов хитозана на резистентность
сельскохозяйственных животных и птицы;
-хитозан в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животпых и птицы;
-хитозан в технологии получения протеолитического ферментного препарата трипсина;
-хитозан в составе парфюмерно-косметической продукции;
-промышленная технология изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (Д1Ж) и практические аспекты ее применения;
-промышленная технология получения Мидийного гидролизата;
-эффективность применения мидийного гидролизата для повьппения резистентности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.
1.6. Апробация работы. Основные материалы доложены и обсуждены:
- в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на заседаниях ученого совета и методических комиссий ВНИТИБП (1996-2011 гг.); на секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (2008-2012 гг.); на
Международных конгрессах в Москве, Санкт-
Петербурге, Минске, Ялте, Алуште, Харькове, Всесоюзных, Республиканских и Всероссийских конференциях в Москве, Санкт-Петербурге, Орле,
Черноголовке, Щелково, Ставрополе, Казани, Пущино, Махачкале, Луганске,
Светлогорске, Нижнем Новгороде, Ярославле, Воронеже, Боровске, ЮжноСахалинске, Уфе, Армавире, Краснодаре (1996-2012 гг.).
Разработки демонстрировались на выставках: П Международная выставка
«Инновации 99. Технологии живых систем» (Москва, 1999); УП1 Международная выставка «Медицина для Вас» (Москва, 2001); Международная выставка «Биотехника» (Ганновер, 2001); II Международная выставка «Планета и здоровье» (Москва, 2001); «Биотехнологии России» (Берлин, 2001); «Лаборатория-Экспо» (Москва, 2009-2011); «Биоиндустрия-биотехнологические
решения для здравоохранения» (С.-Петербург, 2011); Российская агропро-
9
мыпшенная выставка «Золотая осень» (Москва, 2002-2011 гг.). Разработки по
материалам диссертационной работы были награждены 16 дипломами, 7 золотыми, 3 серебряными и 1 бронзовой медалью ВДНХ СССР и ВВЦ. За разработку промышленных технологий изготовления биологически активных
препаратов и внедрение их в производство автором
получены 4 медали
«Лауреат ВВЦ» и серебряная медаль РАЕН имени Е. Дашковой.
1.7. Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 101 научной работе, в том числе в 1 монографии и 19 статьях в
изданиях по перечню, рекомендованному ВАК Минобрнауки России. По материапам исследований получено 4 Патента РФ на изобретения.
1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 307
страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, выводы и практические предложения, содержит 57 таблиц и 25 рисунков. Список литературы
включает 458 наименований, из которых 300 отечественных и 158 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающие достоверность работы, ее научную и практическую значимость.
1.9. Личный вклад автора заключается в формулировании проблемы,
постановке целей и задач исследований, теоретическом и методическом
обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном планировании экспериментов и выполнении исследований, обобщении и интерпретации результатов, разработке нормативной документации, организации апробации и промышленного производства разработанных препаратов.
1.10. Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту директору ВНИГИБП, академику РАСХН А.Я.Самуйленко. За практическую и консультативную помощь выражаю благодарность заведующему
отделом получения БАВ ВНИТИБП доктору биологических наук, профессору А.И. Албулову, сотрудникам института А.С.Фоменко, С.М. Шинкареву
В.И.
Еремцу,
В.Н.Качалову,
Л.А.Неминущей,
а
также
Т.А.Скотниковой,
сотрудникам
Центра
Т.А.Авдеевой,
«Бионженерия»
РАН
10
В.П.Варламову,
С.А.Лопатину,
Брянской
ГСХА
Е.В.Крапивиной,
Н.П.Старовойтовой, ВНИРО С.В.Немцеву, ИПХФ Б.А.Комарову, Уральской
ГАВМ А.Р.Таировой, Белорусской ГСХА П.А.Красочко, МГАВМиБ им.
К.И.Скрябина, ВГНКИ, ВНИИВВиМ, ФГУП «Щелковский биокомбинат».
2. Материалы и методы
Работа вьшолнена в 1996-2012 гг. во ВНИТИБП согласно планам НИР и
ОКР, а также в плане реализации творческого научного сотрудничества
Брянской ГСХА и ГНУ ВНИТИБП в объеме комплексных исследований по
теме «Изучение иммунного статуса и разработка мероприятий повышения
резистентности свиней Брянской области» и Договора о творческом сотрудничестве Национального университета биоресурсов и природоиспользования
(НУБиП) Украины (г. Киев) и ГНУ ВНИТИБП по проведению совместных
исследований по вопросам создания, изучения и применения препаратов на
основе хитозана в сфере ветеринарной медицины и животноводства.
Экспериментальные исследования осуществляли в отделе получения БАВ
ВНИТИБП, ЗАО «Биопрогресс», Центре «Биоинженерия» РАН,
Брянской
ГСХА, УО «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия»,
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского»
Республики Беларусь, Уральской государственной академии ветеринарной
медицины, Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии, в хозяйствах
Московской, Тульской и Брянской областей (Агрофирма «Повадинская»,
СХПК «Заря Подмосковья» и «Щелковская птицефабрика» Московской области, АОЗТ «Красное» и КСХП «Приупское» Тульской области, СТФ СПК
«Родина», ОУХ «Кокино» и СТФ СПК «Культура» Брянской области).
Эффективность разработок испытывали в ЗАО «Биопрогресс»,
ФГУП
«Ставропольская биофабрика», ФГУП «Армавирская биофабрика», ОАО
«Покровский завод биопрепаратов».
Объектами исследований служили опытно-промышленные партии хитозана с различной молекулярной массой (80 кДа, 150 кДа, 300 кДа, 380 кДа,
500 кДа) и растворимостью (кислоторастворимый и водорастворимый);
11
опытно-промышленные партии
ферментного препарата трипсина; опытно-
промышленные партии препарата дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК);
опытно-промышленные партии мидийного препарата.
Животные: телята черно-пестрой породы 2 - 8-суточного возраста и 1 1,5-месячного возраста для оценки эффективности применения препаратов
хитозана для лечения и профштактики желудочно-кишечных заболеваний у
молодняка сельскохозяйственных животных и изучения влияния пробиотика
«Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоценоз
толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят; поросята крупной белой породы (сосуны и отьемыши), подсвинки крупной белой породы 3,5-4,5-месячного возраста, свиноматки крупной белой породы для оценки эффекгавности применения препаратов хитозана для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных и изучения влияния Мидийного препарата на резистентность сельскохозяйственных животных; цыплята-бройлеры кросса «Гибро» и цьшлята породы кросс «П-46»
18-
сугочного и б-суточного возраста для оценки эффективности применения
Мидийного препарата; белые беспородные мыши-самцы массой 18-20 г, 25 г
и 25-30 г для оценки токсичности препаратов.
Материалы и методы: хитин из панцирей камчатских крабов (ТУ 15-01472) - для изготовления хитозана: поджелудочная железа от убойных животных (крупный рогатый скот и свиньи) (ГОСТ 11285-73) - для изготовления трипсина; мидии-сырец (ТУ 15-02 279-83) - для изготовления мидийного
гидролизата; молоки лососевьк рыб (ТУ 9267-037-33620410) - для изготовления дезоксирибонуклеиновой
кислоты (ДНК); трипсин
импортного
(«Ferab>, «Sigma») и отечественного (НПО «Вектор») производства - для
оценки активности опытно-промышленных партий препарата трипсин; культуры клеток различного происхождения: первичные
- куриных эмбрионов
(ФКЭ), почек теленка (ПТ) и перевиваемые линии клеток - почек свиньи
(СПЭВ), почек сирийского хомячка (ВНК-1), McCoy - для оценки дисперги-
12
рующих СВОЙСТВ опытно-промышленных партий трипсина;
пробиотическая
кормовая добавка «Проваген» - для изучения влияния комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят чернопестрой породы 1-1,5-месячного возраста;
производственные
штаммы
Р.тиИос1с1а трех серовариантов: А - штамм 1231, В - штамм 681 и Д - штамм
Т-80 - для оценки флокулирующих свойств хитозана; полупроницаемые
мембраны в виде полых волокон из полиамида с пределом задержания по
белку 15, 30 и 100 кДа - для очистки и концентрирования биологически активных веществ;
Протеолитическую активность трипсина определяли по методу Кш11г
е! а1. с использованием субстрата казеина по Гаммерстену (1991 г.).
Степень дезацетилирования хитозана определяли
модифицированным
методом Ван-Слайка и кондуктометрическим титрованием.
Молекулярную массу хитозана определяли с использованием капиллярного вискозиметра Убеллоде с диаметром капилляра 0,71 мм.
Динамическую вязкость растворов хитозана определяли на ротационных вискозиметрах «Кео1е51"," Кео1е51-2" и Брукфилда.
Контроль готовых препаратов проводили в соответствии с ТУ.
Антиоксидантную активность мидийного препарата определяли амперометрически на приборе «ЯузаАААО!».
Статистическую обработку результатов (с числом повторов п> 3) проводили методами Кербера в модификации Ашмарина, наименьших квадратов,
статистических критериев Стьюдента-Фишера (^критерий) и Кокса-Стюарта
с использованием стандартных программ МАТНСа(1-2001.
13
14
3. Результаты исследований
3.1. Разработка промышленных технологий изготовления хитозана и его
производных для практического применения в различных областях народного хозяйства. Применение хитозана в медицине, пищевой промышленности, ветеринарии и некоторых других областях требует строго определенных характеристик препарата. Проведенный нами сравнительный анализ
образцов хитозана отечественных
производителей показал, что препарат
значительно отличается по качественным характеристикам. Функциональные
свойства хитозана (сорбция, биологическая активность, токсичность и т.д.)
зависят от молекулярной массы полимера. Так, хитозан с молекулярной массой до 35 к Да используется в качестве иммуностимулятора, радиопротектора,
для покрытия микрокапсул и образования пленок. Полимер с молекулярной
массой 30-100 кДа включают в состав БАД, применяют в производстве вакцин и сьшороток. В бумажной и текстильной промышленности, а также для
очистки сточных вод и сорбции тяжелых металлов целесообразно использование хитозана с диапазоном молекулярной массы 80-250 кДа. В пищевой,
косметической промышленности, научных исследованиях преимущественно
используют хитозан с молекулярной массой свыше 200 кДа. Поэтому исследования по созданию новых, более совершенных, экономичньш и экологически безопасных технологий получения хитозана и его модификаций являются
актуальными и имеют важное практическое значение.
3.1.1. Разработка промышленной технологии изготовления низкомолекулярного хитозана. Для получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана с регулируемой молекулярной массой, пригодного для применения в ветеринарии, медицине и биотехнологии совместно с ВНИРО и Центром «Биоинженерия» РАН нами были проведены исследования, направленные на разработку параметров технологического процесса перекисного гидролиза хитозана. В экспериментах использовали хитозан в виде чешуек размером до 6 мм, молекулярной массой (ММ) 350 кДа и степенью дезацетилирования (СДА) 79,3%. Для повышения реакционной способности хитозана
15
его подвергали аморфизации, поскольку известно, что макромолекулы хитозана являются полужесткоцепными и во время проведения осаждения, промывки или при изменении концентрации препарата могут образовываться
жидкокристаллические растворы, что отрицательно сказывается на реакционной способности и качестве продукта в целом.
Изменением условий проведения гидролиза хитозана (концентрация перекиси водорода, температура процесса и его продолжительность) удалось
снизить его молекулярную массу до 23 кДа (Рисунки 2 и 3).
Рис.2 Влияние концентрации перекиси водорода на молекулярную массу гидролизата
хитозана (г 45°С)
16
Рис. 3 Влияние температуры на молекулярную массу гидролизата хитозана (0,2 % Н2О2)
В качестве оптимальной концентрации перекиси водорода нами была выбрана 0,2%, так как 0,1% оказалась недостаточной для получения низкомолекулярного хитозана с молекулярной массой 20-50 кДа, а использование
0,3% -ной перекиси водорода при температуре 60°С приводило к появлению
в конечном продукте окисленных и модифицированных остатков хитозана.
Процесс гидролиза останавливали добавлением двукратного объема холодной деминерализованной воды (8-10°С) и фильтрацией через бельтингткань, в процессе которой происходила дополнительная очистка низкомолекулярного хитозана от солей и остатков перекиси водорода. Полное удаление
перекиси водорода достигалось 2 - 3-кратной промывкой. После лиофильного высушивания полимер имел вид белого аморфного порошка.
В результате проведенных исследований разработана принципиально новая технология получения низкомолекулярного хитозана, включающая стадии гидролиза высокомолекулярного хитозана 0.2%-ной перекисью водорода
при температуре 45°С в течение 1,5-2 часов, отделения низкомолекулярного
хитозана на рамном фильтре с бельтинг-тканью, растворения при рН 5,5 и
лиофильного или распытительного высушивания (рисунок 4).
17
Кислоторастворт1ый
хитозан
^
Вода
Смешивание
Перекись водорода
1
Гияполи.ч
Фильтрование
т
Низкомолекулярный хитозан
Концентрированная
соляная кислота
Раствооение
Сточные воды
т
Фильтрование
Г П —
Лиофильная или
распылительная сушка
Рис.4. Блок-схема технологаческого процесса получения низкомолекулярного хитозана
методом перекисного гидролиза
ли^и^ода
Промышленное производство низкомолекулярного хитозана освоено на
производственном участке отдела получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс». Годовой объем производства низкомолекулярного хитозана в зависимости от потребностей составляет до 800 кг.
3.1.2. Разработка промышленной технологии изготовления натриевой соли сукцината хитозана. Совместно с Шинкаревым С.М. (ВНИТИБП)
была разработана технология получения натриевой соли сукцината хитозана,
которая заключается в сукщшилировании активированного хитозана янтарным ангидридом, нейтрализации свободных карбоксильных групп янтарной
кислоты раствором гидроокиси натрия, фильтрации полученного геля с последующим высушиванием на распылительной или лиофильной сушке (рисунок 5).
18
Кислоторастворимый
хитозан
i
1-%-ная уксусная
кислота
Растворение
I
Фильтрование
I
10%-ный раствор
NaOH
Переосаяедение
Промывка и
концентрирование
Промывные воды
Янтарный ангидрид
Переосажденный хитозан
Растворение
т
Подведение рН
i
-1
Т
10%-ный раствор
NaOH
Фильтрование
1
Сублимационная или
распылительная сушка
i
Фасовка, маркировка, упаковка
Рис.5. Блок-схема технологического процесса получения натриевои соли сукцината
хитозана
При отработке параметров технологического процесса основными критериями оценки являлись степень замещения (СЗ)
и вькод натриевой соли
сукцината хитозана.
На основании результатов органолептических, санитарно-гигиенических,
микробиологических и токсикологических исследований натриевой соли
сукцината хитозана, изготовленного по разработанной технологии, в аккредитованном испытательном лабораторном центре при ФГУЗ «Центр гигиены
и эпидемиологии в городе Москве» и в аккредитованном испытательном
лабораторном центре AHO НИЦ «Косметология» было сделано заключение.
19
ЧТО препарат безвреден, ЛД^о при внутрибрюшинном введении >5 т/кг, при
накожном >2,5 г/кг, что позволяет отнести его к ГУ классу опасности по
ГОСТу
12.01.007-76. Препарат не обладает общетоксическим,
кожно-
раздражающим, сенсибилизирующим действием, физико-химические и микробиологические показатели соответствуют требованиям СанПиН 1.2.681-97
к косметическому сырью.
Натриевая соль сукцината хитозана в настоящее время применяется рядом отечественных косметических фирм в качестве биологически активного
компонента
при изготовлении
кремов, гелей, шампуней,
бальзамов-
ополаскивателей и др. На зубную пасту, содержащую биологически активную добавку хитозан, обладающую противовоспалительньпи и кариеспрофилактическим действием, а также высокими очищающими и дезодорирующими свойствами, нами был получен Патент РФ №2328267 «Зубная паста»,
приоритет изобретения от 16.01.2007 г.
Для применения в качестве сырья для парфюмерно-косметической продукции были разработаны промышленные технологии изготовления комбинированных препаратов на основе экстрактов бурых водорослей - ламинарии
(«Ламихит») и фукуса («Фукохит»), ассоциированных с хитозаном. Препараты отличаются значительно более высокой биологической активностью благодаря синергизму компонентов, входящих в их состав.
Промышленное производство натриевой соли сукцината хитозана и препаратов на основе экстрактов бурых водорослей налажено на производственном участке отдела получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс». В
настоящее время годовой объем производства препаратов в зависимости от
потребностей составляет 600-1000 кг.
3.2. Изучение параметров острой и хронической токсичности хитозана
С целью изучения возможности применения выпускаемого нами хитозана
для
лечения
и
профилактики
заболеваний
животных
совместно
с
А.Р.Таировой (Уршп.ская ГАВМ) и Кузнецовым П.А. (ВНИТИБП) был проведен комплекс экспериментов по определению острой и хронической ток-
20
сичности на мышах. Установлено, что максимально переносимая доза хитозана составляет 1600 мг/кг, профилактическая - 70 мг/кг, а терапевтический
индекс (соотношение этих доз) - 22,8 , что указывает на достаточный предел
безопасного применения препарата в ветеринарной практике.
В соответствии с методикой определения хронической токсичности хитозан вводили в желудок мышей в течение 6 месяцев с 5-дневными интервалами. Показатели содержания гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в крови,
а также гексаналовой пробы, определяющей состояние детоксицирующей
функции печени, в опытной группе не отличались от таковых в контрольной .
При гистологическом исследовании внутренних органов от животных,
получавших препарат хитозан в течение 6-ти месяцев, существенных изменений, которые можно было бы связать с воздействием препарата на их организм, не обнаружено.
Была исследована зависимость токсических свойств хитозана от его молекулярной массы. В опытах использовались белые мыши в возрасте 2-2,5
месяцев и массой тела 18-22 г. Препараты хитозана вводились однократно в
виде 2 % растворов в уксусной кислоте. Контрольным животным также однократно вводили водный раствор уксусной кислоты с рН 5,8. Наблюдение за
животными после инъекций испытуемых препаратов проводилось в течение
3 недель. Величину ЛДзо для препаратов хитозана вычисляли по методу Кербера. Как показали результаты исследований, фракции хитозана с молекулярной массой 0-5, 5-10, 10-20 кДа обладают значительно меньшей (в 2-3
раза) токсичностью, чем более высокомолекулярные фракции (с ММ от 20
кДа и более).
З.З.Изучение радиопротекторных свойств хитозана. Изучение радиопротекторных свойств хитозана проводили совместно с Лысенко Н.П. (МГАВМиБ им. К.И.Скрябина) и Шинкаревыс С.М. (ВНИТИБП) на мышах-самцах
весом 20-25 г, подвергнутых гамма-облучению на установке
«Гамма-
панорама» (источник излучения - '''Сз, мощность излучения - 14 Р/мин, длительность облучения - 58,5 мин). Бьшо сформировано 4 опытных и 2 кон-
21
трольных группы животных по 7 голов в каждой. Контроль I - облученные
животные, контроль II - животные облучению не подвергались. Животным
опытных групп вводили внутрибрюшинно хитозан (ММ 5-10 кДа) в дозе 200
мг/кг живой массы: I опытная группа - за 3 дня до облучения, II, III и IV
опытные группы - через 3, 9 и 22 дня после облучения, соответственно. Сроки введения хитозана обоснованы основными стадиями лучевой болезни.
Результаты изучения радиопротекторных свойств хитозана представлены
на рисунке 6. Полученные результаты свидетельствуют о положительном
профилактическом и лечебном эффекте низкомолекулярного хитозана при
гамма-облучении мышей в летальных дозах.
Рис.6. Радиопротекторные свойства хитозана
3.4. Практические аспекты применения хитозана и его производных в
различных областях народного хозяйства
3.4.1. Применение различных форм хитозана в ветеринарной практике
В хозяйствах Московской, Курской и Тульской областей в период массовых отелов и опоросов проведена серия опытов по изучению эффективности
применения хитозана для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.
Совместно с Шинкаревым С.М. (ВНИТИБП) испытывался хитозан с различной молекулярной массой (80 кДа, 150 кДа, 300 кДа, 380 кДа, 500 кЦа) и
растворимостью (кислоторастворимый и водорастворимый), оптимизировались схемы лечения и профилактики (продолжительность, кратность и способ применения), уточнялась доза препарата. Контролем служили группы те-
22
лят и поросят, которым вводили антибиотики или не назначали лечебный
препарат. Лечебный эффект хитозана оценивали по клиническому состоянию животных, среднесуточному привесу массы тела, по продолжительности
течения болезни, проценту вылеченньк или павших животных и по биохимическим показателям крови.
Первые опыты были проведены совместно со специалистами Курского
облветуправления в хозяйствах Фатежского района Курской области на телятах с желудочно-кишечными заболеваниями. Использовали 2-3%-ный гелевый раствор хитозана с молекулярной массой 300-500 кДа с различными
схемами применения. Лечебный эффект наблюдали при выпаивании телятам
геля хитозана в дозе 40-60 мл 3-4 раза в день перед кормлением. Курс приема
составлял 2-5 дней в зависимости от интенсивности проявления диарейного
синдрома. После получения разрешения Департамента ветеринарии МСХиП
РФ широкие производственные испытания хитозана были продолжены в хозяйствах Тульской и Московской областей (Таблица 1).
Таблица 1
Эффективность применения кислоторастворимой формы хитозана различной
молекулярной массы при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний телят в КСХП «Приупское» Тульской области
Эффективность
Кол- Время проММ
текания захитозана, во
голов болевания,
кДа
сутки
Лечебная
380
29
3±1
150
23
3±1
80
19
3±1
380
150
80
22
16
24
19
Профилактическая
Контроль
-
-
6±2
Привесы за Примечание
время
наб.!1юдения
(8 суток), кг
1 гол. -диарея
4,6±1,2
после лечения
1 гол. - диарея
4,5±13
после лечения
1 гол. -диарея
4,6±1,1
незначительная
5,1±1,7
6,1±1,4
6,1±1,6
4,8±1,4
Заболело-4 гол.
Пало -2 гол.
23
Проведенные исследования показали, что хитозан имеет высокую терапевтическую и профилактическую активность при полном отсутствии токсичности и других побочных действий. При его использовании наблюдалось
улучшение клинического состояния животных, исчезали признаки диареи,
улучшались биохимические показатели крови, в 80- 90% случаев наступало
полное выздоровление животных.
3.4.2. Изучение влияния хитозана на резистентность сельскохозяйственных животных. Для изучения влияния гелевого раствора хитозана на резистентность животных и оптимального режима его применения в УОХ «Кокино» Выгоничского района Брянской области на свиньях крупной белой породы совместно с Крапивиной Е.В. (Брянская ГСХА) бьш проведен научнохозяйственный опыт. Были сформированы с учетом возраста, живой массы и
продуктивности за предыдущий опорос три группы аналогов - свиноматок
крупной белой породы по 3 головы в каждой (А. Б и С группы, соответственно). Свиноматкам С группы дважды (с 6-го и 22-го дня после опороса) утром
и вечером по 5 дней выпаивали 2%-ный гелевый раствор хитозана в 1%-ной
уксусной кислоте в дозе 3 мл/кг живой массы, свиноматкам А и В групп хитозан не скармливали. Поросят от свиноматок А, В и С групп обозначили,
соответственно,
как
1 (контрольная)-
хитозан
не
скармливали,
2
и
З(опытные)- дважды (на 30-й и 45-й день после рождения) утром и вечером
по 5 дней вместе с подкормкой скармливали по 3 мл/кг живой массы 2%-ного
гелевого раствора хитозана. Всем подопытным животным скармливали основной рацион (и подкормку) согласно рекомендуемым для данной половозрастной группы нормам. Контрольные индивидуальные взвешивания поросят
проводили на 1, 30 и 60 сутки после рождения. Перед отъемом (в возрасте 60
суток) у подопытных поросят (по 6 голов из группы) были отобраны пробы
крови для анализа.
Была установлена отчетливая тенденция увеличения выживаемости поросят во второй месяц жизни. При скармливании животным гелевого раствора хитозана за весь опытный период наибольший ростостимулирующий эф-
24
фект отмечается при скармливании хитозана только поросятам. (Рисунки 7 и
8). К 2-месячному возрасту количество эритроцитов в крови у всех исследованных животных было практически одинаковым, содержание гемоглобина
превышало значения физиологической нормы, причем у животных, получавших препарат хитозана, было выше, чем у контрольных животных. Содержание лейкоцитов в крови поросят, получавших хитозан, соответствовало
верхней границе физиологической нормы, при этом у контрольных животных этот показатель был значительно выше.
1г
1
12 т
10 -
ш
1
8 —•-1группа
б ^
^
——2группа
-«—>3 группа
4 -
2 -
0 1
30
60
Вре«ля,сутки
Рис.7 Динамика живой массы поросят при различных формах скармливания гелевого раствора хитозана
§
80
3 группа
60 В р е м я , с у т к и
Рис.8 Выживаемость поросят в зависимости от способа скармливания хитозана
25
3.4.3. Применение хитозана в составе кормовых добавок для сельскохозяйственных животных и птицы. В условиях современного животноводства и птицеводства значительно усилилась технологическая и микробиологическая нагрузка на организм животных и птицы. При этом среди причин отхода молодняка основное место занимают болезни желудочно-кишечного
тракта, возбудителями которых является
условно-патогенная микрофлора.
Банане кишечной микрофлоры может быть восстановлен с помощью пробиотиков - кормовых добавок, представляющих собой одну или несколько
стабилизированных культур симбиотических микроорганизмов.
Помимо
пробиотиков, имеется и другая группа препаратов, имеющих разную биологическую природу и механизм действия (кормовые антибиотики, ферменты,
пребиотики и др.). Все эти препараты влияют на здоровье и продуктивность
животного сходным образом - через регулирование микробной популяции в
желудочно-кишечном тракте. К их числу может быть отнесен и хитозан.
Совместно со специапистами
Брянской ГСХА (Крапивина Е.В.) было
изучено влияние выпаивания разных доз пробиотика «Проваген», в состав
которого входят пробиотические штаммы сапрофитных бактерий В.зиЬйИз
ВКМВ-2287 и
В.ИсЬеп1Гогш15 В1СМ В-2414, и комплекса этого пробиотика
с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы
и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.
В
МТФ
СПК
Агрофирма
«Культура»
был
проведен
научно-
хозяйственный опыт. С учетом живой массы и интенсивности роста методом
парных аналогов были сформированы 3 группы телят черно-пестрой породы 1 - 1,5-месячного возраста: 1 группа - контрольная, 2 и 3 - опытные. Телятам 2 группы ежедневно в течение 7 суток выпаивали пробиотик «Проваген» (14 г/голову), животным 3 группы - кo^шлeкc этого пробиотика (14
г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову). Телята содержались в соответствующих
ветеринарно-зоогигиеническим требованиям условиях, получали хозяйственный рацион в соответствии с общепринятыми нормами. Через 5 суток по-
26
еле окончания выпаивания препаратов у 3 голов из каждой группы брали содержимое прямой кишки для анализа микробиоты.
Как показапи результаты исследований, выпаивание в течение 7 суток
«Провагена» с хитозаном обусловило тенденцию к оптимизации в содержимом толстого кишечника телят уровня эшерихий.
Живая масса у телят 2 и 3 подопытных групп в начале эксперимента существенно не различалась, при этом через 14 суток опыта отмечена тенденция к повышению
среднесуточных приростов живой массы на 10,64% и
21,28%, соответственно, по сравнению с контролем. Комплекс пробиотика с
хитозаном в этом отношении оказался более эффективным. (Рисунок 9).
Рис.9 Влияние вьшаивания 1-1,5 месячным телятам аробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на среднесуточные приросты живой массы
В результате анализа проб крови животных подопытных групп установлено, что перед началом опыта содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина соответствовало нормативным значениям и по окончании его существенно не изменялось.
Содержание общего белка в сыворотке крови телят всех подопытных
групп перед началом опыта соответствовало нижним границам физиологических значений без существенных межгрупповых различий. Выпаивание 1 1,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика
27
с хитозаном обусловило оптимизацию гомеостаза, на что указывает увеличение общего белка и снижение билирубина в сыворотке крови. Добавка хитозана к пробиотику обусловила повышение уровня гуморальной защиты организма за счет повышения содержания у-глобулинов в сыворотке крови.
Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят-бройлеров проводили совместно с Красочко П.А. (Белорусская
ГСХА) в условиях структурного подразделения «Околица»
ОАО «Птице-
фабрика им. Н.К.Крупской» Республики Беларусь.
Таблица 2
Схема опыта по изучению влияния хитозана на продуктивность цыплятбройлеров кросса «Гибро»
Группа
1 (контрольная)
Количество
голов
7000
2 (опытная)
3 (опытная)
7000
7000
Условия кормления
Основной рацион - O.P. (полнорационный комбикорм для цыплят-бройлеров соответствующего
возраста)
O.P. + хитозан ( 3 мг/гол с 32-х дневного возраста)
O.P. + хитозан ( 5 мг/гол с 32-х дневного возраста)
За весь период опыта сохранность птицы в контрольной, 1 и 2 опытных
группах составила 92,1%; 92,4% и 92,6 %, количество павшей птицы 7,9%;
7,6% и 7,4 %, получено прироста живой массы 883 г; 1165 г и 1153 г, живая
масса в конце опыта составила 2210,0±55,19 г; 2545,б0±95,54 г и 2626,00±
71,57 г, соответственно. Наблюдаемое положительное влияние хитозана в составе рациона кормления цыплят-бройлеров на их продуктивность возможно
связано со способностью хитозана при поступлении с пищей обволакивать
стенки слизистой кищечника, адсорбировать и выводить из организма микотоксины, ионы тяжелых металлов, продукты метаболизма бактерий.
Исходя из условий эксперимента, наиболее оптимальной дозой хитозана
является ежедневное выпаивание раствора хитозана из расчета 5 мг/голову,
начиная с 32-х дневного возраста.
28
100
а Контроль
80
Гр^-ппа 1
га Группа 2
1
ш
/
•
Среднесуточный
прирост « и в о й массы/
Средний 54 прироста
живая масса в конце
живой массы
опыта, %
Рис.10 Динамика живой массы и среднесуточных приростов цыплят бройлеров при введении в корм хитозана
3.4.4. Применение хитозана в качестве флокулянта при концентрировании бакмассы P.muitocida. Флокулирующие свойства хитозана изучали
на производственных штаммах Р.тииос1(1а трех серовариантов: А - штамм
1231, В - штамм 681 и Д - штамм Т-80 в цехе № 4 ФГУП «Щелковский биокомбинат». На первом этапе исследований было установлено, что наилучшие
флокулирующие свойства проявляют 1%-ные растворы хитозана, что соответствует 0,02% в пересчете на сухое вещество, а оптимальное значение рН
находится в пределах 5,5-6,2. Наиболее полный эффект флокуляции наблюдали в 10 - 12-часовых культурах пастерелл, при этом 4 - 8-часовые культуры в той или иной степени также взаимодействовали с хитозаном.
Изучалась эффективность процессов флокуляции в зависимости от температуры реакционной среды (4, 22 и 37°С), молекулярной массы хитозана
(хитозан с ММ 2, 10 и 35 кДа оказался недостаточно эффективным) и степени дезацетилирования (79-97 %). Осаждение клеток пастерелл проходило
эффективно при использовании растворов хитозана с ММ в диапазоне 50-500
кДа. После внесения хитозана образование осадка происходило уже через 1-2
минуты. Полностью процесс заканчивался за 24 часа. Увеличение экспозиции до 48-72 часов не давало положительного результата.
29
Из полученных данных следует, что характер и степень флокуляции клеток Р.тиИос1(1а различных серовариантов зависит от целого ряда факторов
( температуры взаимодействия клеток с флокулянтом, ММ хитозана, СДА и
др.). Однако при всем многообразии условий эксперимента можно выявить
некоторые общие закономерности. Клетки серовариантов Р.тииос1(1а на различных сроках роста популяций эффективнее связываются хитозаном по мере увеличения его молекулярного веса, при этом температура осаждения заметно снижается. В целом сравнительный анализ выявил относительно ограниченную активность хитозана с ММ 500 кДа. Следует отметить, что наиболее активным для концентрирования клеток Р.тииос1(1а являются растворы
хитозана с ММ 50 кДа (СДА 85%), 100 кДа (СДА 85%) и 250 кДа (СДА 79%).
В данных экспериментальных условиях выявлена зависимость степени связывания культур пастерелл от серовариантной принадлежности штаммов. В
порядке возрастания эффективности связывания бактерий хитозаном штаммы можно расположить следующим образом: А. В и Д. Последнее, скорее
всего, объясняется особенностями морфологии клеток каждого сероварианта.
На основании полученных результатов можно сделать заключение о высоких сорбционных
свойствах
хитозана
в отношении
бактерий
вида
Р.шикос1ёа и возможности его использования в технологическом процессе
концентрирования бакмассы.
3.4.5. Применение хитозана в технологии получения протеолитического
ферментного препарата трипсин.
Согласно оценке российских аналити-
ков, в настоящее время в нашей стране потребность промьшшенности в ферментных препаратах удовлетворяется за счет импорта более чем на 90%.
Разработанная нами технология получения трипсина включает стадию
измельчения на коллоидной мельнице предварительно дефростированной
при +15 - +25°С поджелудочной железы от убойных животных - крупного
рогатого скота и свиней, получения экстракта трипсина с одновременным
удалением из него балластных веществ в виде белково-липидного комплекса
с использованием в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана с мо-
30
лекулярной массой 150-250 кДа и нормой ввода 0,4-1,2 литра 1%-ного раствора хитозана на 1 кг поджелудочной железы, фильтрацию экстракта трипсина через бельтинг-ткань и ультрафильтрацию раствора через полупроницаемые мембраны в виде полых волокон из полиамида с пределом задержания по белку 15, 30 и 100 кДа, что обеспечивает необходимую степень очистки и концентрирования раствора трипсина перед его лиофильным высушиванием. Технология отличается простотой, полным исключением применения органических растворителей и солей-осадителей ферментов, воспроизводимостью и сравшггельно низкими трудозатратами. Основные технологические операции могут быть осушествлены на отечественном оборудовании
(рисунок 11).
Рис. 11. Блок-схема технологического процесса получения трипсина
Применение в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана позволило в несколько раз увеличить выход целевого продукта, повысить его активность и сократить время изготовления (Патент № 2265053 «Способ полу-
31
чения трипсина», приоритет изобретения от 24.12.2002 г.). Разработан способ
иммобилизации трипсина (Патент № 2АЪ19Ъв «Способ иммобилизации трипсина», приоритет изобретения от 17.06.2010 г.).
Испытания эффективности трипсина для диспергирования тканей животных и птиц при получении культур клеток в производственных условиях
(ФГУП «Ставропольская биофабрика», ФГУП «Армавирская биофабрика»,
ОАО «Покровский завод биопрепаратов») показали, что испытуемый препарат не токсичен и обладает активными диспергирующими свойствами. Морфология клеток в культурах была без зернистости и признаков дегенерации.
Опытно-промышленный выпуск ферментного препарата трипсина налажен в условиях опытного производства в отделе получения БАВ ВНИТИБП
и в ЗАО «Биопрогресс».
3.5.Разработка промышленной технологии изготовления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и практические аспекты ее применения.
Разработанный нами способ изготовления ДНК отличается высокой производительностью, возможностью масштабирования процесса, позволяющего получать высокий выход и снизить стоимость целевого продукта. В качестве исходного сырья для получения дезоксирибонуклеиновой кислоты используются замороженные молоки лососевых рыб. Схема технологического
процесса получения ДНК представлена на рисунке 12.
При отработке параметров технологического процесса основными критериями оценки являлись содержание основного вещества в препарате ДЬЖ и
выход готового продукта. Было изучено влияние на эти показатели таких параметров, как соотношение компонентов реакционной смеси, температура и
продолжительность процесса. Полученный продукт характеризуется следующими показателями: внешний вид - аморфный порошок; цвет - от белого
до светло-коричневого; запах - свойственный данному продукту с рыбным
оттенком; массовая доля влаги, %, не более - 8,0; массовая доля основного
вещества, %, не менее - 40,0.
32
Молоки лососевых рыб
(замороженные)
1
Размораживание
1
Измельчение на коллоидной
мельнице
Раствор трипсина
Ферментативный гидролиз
Т
Центрифугирование
Центрифугах
1
Лиоф ильная сушка
Осадок
1
Утилизация
Фасовка, маркировка,
упаковка
Рис.12. Блок-схема технологического процесса получения ДЕЖ
Лабораторные испьпания ДНК, изготовленной по разработанной нами
технологии, в аккредитованном испытательном лабораторном центре ФГУЗ
«Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» показали, что препарат
по санитарно-гигиеническим и микробиологическим показателям соответствует требованиям СанПиН
1.2.681-97 «Гигиенические требования к произ-
водству и безопасности парфюмерно-косметической продукции» и МУ 05
РЦ/3140. По параметрам острой токсичности сырье косметическое «Кислота
дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» относится к малоопасным
веществам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76) при внугрижелудочном
пути поступления. В 50% концентрации не оказывает раздражающего действия на кожные покровы при однократном и повторном воздействии, раздражает слизистую оболочку глаз: 2 балла (гиперемия коньюктивы - 1 балл,
отек века - 1 балл). В условиях проведенного эксперимента сенсибилизирующее действие не было обнаружено. В настоящее время ДНК в качестве
биологически активной добавки введена в состав кремов, гелей и другой
33
косметической продукцил, где оказывает геронтологическое действие на метаболические процессы, протекающие в коже.
Промышленное производство ДНК в настоящее время освоено на производственном участке отдела получения БАВ ВНИТИБП и в ЗАО «Биопрогресс» с годовым объемом производства в зависимости от потребностей 100150 кг.
3.6. Разработка промышленной технологии получения Мидийного
гидролизата и изучение эффективности его применения для повышения
резистентности молодняка
сельскохозяйственных животных и птицы.
Биологически активные добавки в жизни животного играют важную роль при крайне малых дозах они способны существенно изменить обмен веществ
и повысить общую резистентность организма. В мясе мидий обнаружены соединения, обладающие широким спектром биологической и фармакологической активности. Способность повышать общую резистентность организма
связывают с наличием в мидийных препаратах липидных антиоксидантов,
меланоидинов и микроэлементов. Широкое применение нашли кислотные и
ферментативные гидролизаты мидий. Ученьши ВНИРО разработан Мидийный гидролизат кислотный лечебно-профилактический (МИГИ-К-ЛП), промышленное производство которого было налажено во ВНИТЖП-ЗАО «Биопрогресс». С целью
оптимизации технологического процесса и увеличения
объёмов производства нами бьша разработана экологически чистая технология получения мидийного гидролизата - биологически активной добавки к
пище «Мидийный соус». При этом были решены вопросы локализации и
нейтрализации выбросов, стандартизации препарата и снижения энергозатрат
(Патент № 2284708 «Биологически активная пищевая добавка из мяса мидий
и способ ее получения», приоритет изобретения 29.12.2004) (рисунок 13).
34
Рис.13. Блок-схема технологического процесса получения мидийного гидролизата
Нами были проведены испытания мидийного препарата, являющегося
побочным продуктом при производстве «Мидийного соуса», в составе ращюна молодняка свиней и птшщ.
Изучение влияния Мидийного препарата па рост, развитие
и сохран-
ность цыплят проводили на Щелковской птицефабрике на цьшлятах породы
35
кросс «П-46» (48710 голов) 6- и 18-суточного возраста и яйценоской породы
«Родонит» (23690 голов) 4-суточного возраста. Мидийный препарат вводили
в основной рацион из расчета 1,5 г/кг и 2,0 г/кг живой массы птицы в сутки.
Скармливание Мидийного препарата оказало положительное влияние на
рост и развитие молодняка птицы: увеличение среднесуточного прироста
живой массы на 4,2-10,9%, снижение затрат корма на 1 кг прироста живой
массы на 3,9-4,4%, уменьшение количества расклевов, приводящих к гибели
птицы, что свидетельствует о повьппении биологической ценности кормов и
общей резистентности организма.
Изучение эффективности
щивании молодняка
применения Мидийного
препарата при выра-
свиней крупной белой породы было проведено на под-
свинках 4-месячного возраста со средней живой массой 46,95 кг совместно с
Крапивиной Е.В. и Старовойтовой Н.П. (Брянская ГСХА) на СТФ СПК Агрофирма «Культура» Брянской области. Животные контрольной группы получали основной рацион, сбалансированный по основньш питательным веществам в соответствии с общепринятыми нормами. Животным опытных
групп дополнительно к основному рациону ежедневно скармливали Мидийный препарат в дозах 10, 15 и 20 г/кг сухого вещества рациона.
В конце опыта (на 114 день) среднесуточные приросты живой массы в
опытных группах по отношению к контрольной были выше на 15,96%19,45% , затраты корма на 1 кг прироста живой массы ниже на 13,75-16,35%.
В проведенном совместно со специалисталш СПК «Новое Литвиново»
(Московская область) научно-хозяйственном опыте на подсвинках крупной
белой породы 4-х месячного возраста (Мидийный препарат скармливали в
тех же дозах) через 15 дней после начала опыта было отмечено увеличение
прироста живой массы подсвинков на 5,5- 6,3% по сравнению с контролем.
Живая масса подсвинков опытных групп на 45-й день скармливания была на
7,9%-11,0% больше, чем у животных контрольной группы.
Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют
об эффективности применения Мидийного препарата в качестве биологиче-
36
ски активной добавки в составе корма при выращивании молодняка свиней.
Многочисленными исследованиями установлено, что повышение содержания радиоцезия в почвах предопределяет более высокое включение его в
ткани животных и снижение под влиянием хронического воздействия радионуклида функциональной активности защитных систем организма.
Для изучения влияния Мидийного препарата на резистентность
ных, содержащихся в зонах с различной поверхностной активностью
животпочвы
по '^^Cs и оптимального режима его применения совместно с Крапивиной
Е.В. (Брянская ГСХА) в УОХ «Кокино», СТФ СХПК Агрофирма «Культура»,
СТФ СХПК «Родина» Брянской области бьша проведена серия опытов на
свиньях крупной белой породы (свиноматки, поросята 30-суточного, 3-3,5месячного, 4,5-месячного возраста). Испьггьшались разные схемы скармливания препарата: свиноматкам с 20-х суток после опороса в течение 5 дней
вместе с кормом 0,5 литра на голову разведенного водой (1:3) Мидийного
препарата (I схема); поросятам на 30-е сутки после рождения в течение 10
дней возрастающие дозы, начиная с 30 мл/голову разведенного водой (1:3)
Мидийного препарата (II схема); поросятам из расчета 10, 15 и 20 г Мидийного препарата на 1 кг сухого вещества рациона в течение всего периода откорма молодняка свиней (III схема).
По I и II схеме скармливания Мидийный препарат оказьгеал положительный эффект в отношении выживаемости поросят к 60-дневному возрасту, их
средней живой массе, содержания гемоглобина, количества лейкоцитов и
уровня у-глобулинов в сыворотке крови. Наиболее эффективным оказалось
непосредственное скармливание препарата только самим поросятам. Скармливание препарата по Ш схеме в течение 45 дней вызвало достоверное повышение среднесуточного прироста живой массы до 34,12% по сравнению с
контролем, увеличение содержания гемоглобина, нормализацию содержания
лейкоцитов.
37
На основании научно-хозяйственных опытов, проведенных в различных
хозяйствах Брянской области, составлены Методические положения по применению Мидийного препарата при выращивании молодняка свиней.
4. ВЫВОДЫ
1.
Разработана промьшхленная технология изготовления низкомолекуляр-
ного хитозана (ММ 20-50 кДа) с применением метода перекисного гидролиза.
2.
Разработана промышленная технология изготовления натриевой соли
сукцината хитозана, заключающаяся в сукцию^лировании активированного
хитозана янтарным ангадридом, нейтрализации свободных карбоксильных
групп янтарной кислоты раствором гидроокиси натрия, фильтрации и высушивании раствора натриевой соли сукцината хитозана.
3.
Определены параметры острой и хронической токсичности кислотора-
створимого хитозана (ММ 250 кДа, СДА 88%): максимально переносимая
доза - 1600 мг/кг, профилактическая доза - 70 мг/кг, терапевтический индекс
- 22,8. В хроническом эксперименте на мышах внутрижелудочное введение
раствора хитозана в дозе 70 мг/кг веса тела не привело к изменениям гематологических показателей крови и функционального состояния печени.
4.
Установлено, что хитозан (ММ 5-10 кДа) обладает профилактическш^
и лечебным эффектом при гамма-облучении мьштей в летальных дозах. Процент выживаемости животных был тем выше, чем на более ранних сроках
относительно момента облучения вводился хитозан.
5.
В экспериментальных условиях показана возможность и отработаны
условия применения хитозана в качестве энтеросорбента при желудочнокишечных заболеваниях молодшпса сельскохозяйственных животных: в целях профилактики в виде 2%-ного раствора из расчета 2 мл на 1 кг живого
веса за 30 мш1ут до кормления 2 раза в день в течение 2 суток, для лечения в
виде 3%-ного раствора из расчета 3 мл на 1 кг живого веса за 30 мипуг до
кормления 3 раза в день в течение 3 суток.
38
6.
В экспериментальных условиях изучено влияние выпаивания хитозана
в комплексе с пробиотиком «Провагего> на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза
телят. Установлено, что ежедневное выпаивание в течение 7 суток 1-1,5месячным телятам комплекса пробиотика «Проваген» в дозе 14 г/голову и
хитозана в дозе 0,8 г/голову в сутки приводит к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника за счет повышения уровня эшерихий, повышение
среднесуточных приростов живой массы на 9,62%, а также оптимизацию гомеостаза.
7.
Установлена зависимость характера и степени флокуляции клеток Р.
multocida различных серовариантов от молекулярной массы и степени дезацетилирования хитозана. Наиболее активными для концентрирования клеток Р. multocida являются растворы хитозана с молекулярной массой 50 кДа
(СДА 85%), 100 кДа (СДА 85%) и 250 кДа (СДА 79%).
8.
Разработана экологически безопасная промьппленная технология полу-
чения протеолитического ферментного препарата трипсина из поджелудочной железы убойных животных (крупный рогатый скот, свиньи) с использованием в качестве осадителя кислоторастворимого хитозана с молекулярной
массой 150-250 кДа. Показана возможность применения трипсина для получения первичных и перевиваемых культур клеток.
9.
Разработана технология получения ДНК из молок лососевых рыб с ис-
пользованием протеолитического фермента трипсина, позволяющая получать
препарат с высоким содержанием основного вещества (50-70%), отличающаяся высокой производительностью, возможностью масштабирования процесса, высоким выходом и низкой стоимостью целевого продукта.
10.
Разработана экологически безопасная технология получения мидийно-
го гидролизата - биологически активной добавки к пище «Мидийный соус».
11.
В условиях научно-хозяйственного опыта показана эффективность
применения в составе кормовых рационов мидийного препарата, являющегося побочным продуктом при производстве «Мидийного соуса», на рост, раз-
39
витие и уровень естественной резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
По результатам исследований разработана н утверяедена в установленном порядке следующая нормативно-техническая документация:
ТУ 9289-008-11734126-05 «Хитозан»; ТУ 9289-067-00472124-01 (Изменение
№ 1) «Хитозан пищевой»; ТУ 9284-027-11743126-08 «Сукцинат хитозана»;ТУ 9284-026-11734126-08 «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном);
ТУ 9284-025-11734126-08 «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном); ТУ
9154-030-11734126-10 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» ; ТУ 9289-029-11734126-09 Биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб»; ТУ 9283-02111734126-07 «Мидийный соус»; Инструкция по применению лекарственного
средства Хитозан для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных (Регистрационный номер
ПВР-2-2.6/01705 от 15 мая 2007 года); Технологический регламент па производство ферментного препарата трипсин; Методические положения по применению трипсина в биотехнологии при производстве препаратов ветеринарного назначения; Методические положения по применению хитозана в
качестве флокулянта при концентрировании бакмассы Р.ши11ос1аа; Методические положения по применению Мидийного препарата при выращивании
молодняка свиней.
На разработанные препараты в государственных регистрационных органах получены: Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных «Хитозан» (Регистрационный номер
ПВР-2-2.6/01705 от 15.05. 2007 г.); Свидетельство о государственной регистрации
биологически
активной
добавки
«Хитозан
пищевой»
№
77.99.23.3.У.5797.6.09 от 10.06.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на Изменение № 1 к ТУ 9289-067-00472124-03 «Хитозан пищевой»
40
№ 77.99.23.003.Т.001570.06.09 от 10.06.2009 г.;
Санитарно-эпидемиоло-
гическое заключение на ТУ 9284-027-11734126-08 «Сукцинат хитозана» №
77.99.40.915.Т.003096.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое
заключение на ТУ 9284-026-11734126-08 «Ламихит» (экстракт ламинарии с
хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003098.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарноэпидемиологическое заключение на ТУ 9284-025-11734126-08 «Фу1Сохит»
(экстракт фукуса с хитозаном) № 77.99.40.915.Т.003099.12.08 от 18.12.2008
г.; Санитарно-эпидемиологическое
заключение на сырье косметическое
«Сукцинат хитозана», «Экстракт мидий», «Фукохит» (экстракт фукуса с хитозаном), «Ламихит» (экстракт ламинарии с хитозаном) № 77.99.40.915.
Д.013950.12.08 от 18.12.2008 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение
на ТУ 9154-030-11734126-08 «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.40.915.Т.001476.05.10.12.08 от 26.05.2010 г.; Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки
«Кислота
дезоксирибонуклеиновая
из
молок
лососевых
рыб»
№
77.99.11.3.У.11192.12.09 от 04.12.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ 9289-029-11734126-09 Биологически активная добавка «Кислота дезоксирибонуклеиновая из молок лососевых рыб» № 77.99.11.003.Т.003227.12.09 от 04.12.2009 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение
на
ТУ
9283-021-11734126-07
«Мидийный
соус»
№
50.99.01.928.Т.-
008693.06.07 от 04.06.2007 г.; Санитарно-эпидемиологическое заключение на
«Мидийный соус» № 50.99.01.928.П.009485.07.07 от 17.07.2007 г.
На производственных площадях ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс»
осуществляется промышленный выпуск: лекарственного средства для
животных «Хитозан»; пищевого сырья «Хитозана пищевого», «Хитозана
низкомолекулярного пищевого», «Кислоты дезоксирибонуклеиновой из молок лососевых рыб»; косметического сырья «Сукцината хитозана», « Ламихита» (экстракта ламинарии с хитозаном), «Фукохита» (экстракта фукуса с
хитозаном), «Кислоты дезоксирибонуклеиновой из молок лососевых рыб;
биологически активной добавки «Мидийный соус».
41
6. СПИСОК основных ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
6.1. Список научных публикаций в рецензируемых журналах,
рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ
1.
Самуйленко АЛ. Различные виды хитозана для ветеринарии и животноводства/ АЯ. Сам>-йленко, С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.В. Крапивина, П.А. Кузнецов // Аграрная Россия, М., 2004, С. 8-12.
2.
Албулов А.И. Разработка и расширение сферы применения биологически активных препаратов на основе сырья природного происхождения/ А.И. Албулов,
М.А. Фролова, АЯ. Самуйленко, В.И. Еремец и др. // Вестник биотехнологии и
физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова. - 2006. - № 2. - С. 33-34.
3. Кржижановская Е.В. Адсорбционные и адъювантные свойства хитозана/
Е.В.Кржижановская, А.И. Албулов, АЯ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, Л.С. Люлькова, М.А. Фролова, H.A. Бондарева, A.B. Гринь, В.Б. Хабаров // Ветеринария и
кормление.- 2008.- № 4.- С. 34-35.
4. Кржижановская Е.В. Антимикробный эффект кислоторастворимого хитозана/
Е.В.Кржижановская, А.И. Албулов, Е.А. Рубан, А.И. Албулов, АЯ. Самуйленко,
С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, В.И. Еремец, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, A.B.
Гринь // Ветеринария и кормление.- 2008.-№ 5.-С. 14-15.
5. Кржижановская Е.В. Изучение антимикробного действия низкомолекулярных
фракций хитозана на микобактерии/ Е.В.Кржижановская, A.B. Гринь, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, А.И. Албулов, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, Н.К. Еремец,
RB. Рахманина, И.А. Бараковсюш // Ветеринария и кормление.- 2008.-№ 6.-С. 316. Кржижановская Е.В. Получение низкомолекулярного хитозана и изучение его
антимикробных свойств/ Е.В .Кржижановская, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова,
A.B. Гринь, А.И. Албулов, Е.А. Рубан, A.B. Гринь // Достижения науки и техники
агропромышленного комплекса.-2008.-№ И.-С. 45-46.
7. Кржижановская Е.В. Изучение антимикробного действия хитозана/
Е.В.Кржижановская, Варламов В.П., АЛ. Самуйленко, А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, Н.К. Еремец, H.A. Бондарева, В.Б. Хабаров, A.B. Гринь //
Сельскохозяйственная биология.-2008.-№ 6.-С. 119-121.
8. Антонов С.Ф. Изучение ранозаживляющих свойств хитозана/ С.Ф. Антонов,
Е.В.Кржижановская, Ю.И. Филиппов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова // Доклады
Российской академии сельскохозяйственных наук.-2008.-№ 6.- С. 52-54.
9. Фролова М.А. Практические аспекты применения хитозана в ветеринарной
практике/ М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, А.И. Албулов, В.Н. Варламов, С.М.
Шинкарев, Н.К. Еремец, A.B. Гринь, В.И. Еремец, А.Г. Мищевцов, И.А. Бараковский // Труды Кубанского государственного аграрного университета.-Серия: ветер,
науки.- Краснодар.-2009.-№1 (ч.1.).-С. 300-302.
10. Фролова М.А. Ферментные препараты коллагеназа и трипсин для использования в биотехнологии/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко // Труды Кубанского государственного аграрного универсетета.- Серия: ветеринарные науки.Краснодар.-2009.- №1 (ч.1.).-С.303-304.
11. Фролова М.А. Роль гидролизата из мяса мидий в рационе кормления цыплят/
М.А. Фролова, А.И. Албулов, Н.К. Еремец, Г.Ю. Косовский, Р.В. Рогов // Труды
Кубанского государственного аграрного университета. Серия: ветеринарные науки.-Краснодар.-2009.-№1 (ч.2.).-С.346-347.
42
12. Албулов А.И. Хитансодержащие биологически активные добавки к .шще в рационализации шггания населения/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Б^-ханцев,
В.М. Быкова, Немцев, C.B. Б.А. Комаров // Рыбпром.-2010.-№ 2.-С. 25-28.
13. Трескунов К.А. Эффективность фитохитодезтерапии и проблемы сертификации
фитохитодезов/ К.А. Трескунов, Л.В. Погорельская, А.И. Албулов, М.А. Фролова,
Б.А. Комаров // Традиционная медицин.-Выпуск 5.-2011.-С. 393-394.
14. Фролова М.А. Получение опытно-промышленной партии белкового гидролизата из тушек норок и изучение его токсичности/ М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко,
А.И. Албулов, В.Н. Денисенко, П.Н. Абрамов, Р.В. Рогов //Матер. Всерос. конф. с
междун. участием «Экобиотех-2011» и 2-я Всерос. школа-конф. молодых ученых //
Известия Самарского научного цешраРАН.- Т.13. -№ 5(3). -2011.- С.207-209.
15. Крапивина Е.В. Влияние выпаивания телятам разных доз пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоцидную активность
нейтрофилов крови / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, M A . Фролова,
А.И. Албулов, О.В. Буханцев // Научный журнал КубГАУ [Электронный ресурс].Краснодар:
КубГАУ,
2012-№-02(76).
-12
с.
-Режим
достуna:http://ej.kubagro.ru/2012/02/pdf754.pdf
16. Буханцев О.В. Применение хитозана и белковых гидролизатов в комплексе с
пробиотиком «Муцинол» при откорме поросят/ О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А.
Фролова, А.И. Албулов, A.B. Гринь, П.Н. Абрамов, P.C. Краснокутский // СвиноВОДСТВО.-2012.-ХО з.-С 69-71.
17. Крапивина Е.В. Хитозан в составе пробиотической кормовой добавки «Проваген»/ Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, М.А. Фролова, А.И. Албулов,
О.В. Буханцев//Ветеринария и кормление.-2012.-№ 1.-С. 30-31.
18. Буханцев О.В. Влияние комплекса хитозан-пробиотик на морфо-биохимические
показатели гомеостаза молодняка свиней/ О.В. Бухащсв, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов // Ветеринария и кормление.-2012.-№ 2.-С.32-33.
19. Фролова М.А. Разработка промышленной технологии изготовления трипсина
для биотехнологических целей/ Фролова М.А. // Вестник Российской академии
сельскохозяйственных наук.-2012.-№ З.-С. 45-46.
6.2. Монография.
20. Албулов А.И. Хитозан в косметике/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А.
Фролова//В монографии «Хитин-Хитозаю), М., 2002-С.360-363.
6.3. Список патентов
21. Патент РФ № 2265053 Способ получения трипсина /А.И. Албулов, AJî. Самуйленко, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, И.Г. Ермишина, С.М. Шинкарев, В.Н.
Качалов, A.M. Трунов // приоритет от 24.12.2002.-опубл. 27.11.2005.- БИ № ЗЗ.-С.
180.
22. Патент РФ № 2284708 Биологически активная пищевая добавка из мяса мидий и способ ее получения /А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, АЯ.
Самуйленко, В.А. Терентьев, Т.А. Телегина //приоритет от 29.12.2004.-опубл.
10.10.2006.-БИ. № 28.- С. 80.
23. Патент РФ № 2328267 Зубная паста / А.И. Албулов, П.Е. Козырев, А Л . Самуйленко, Е.В. Кондратьев, М.А. Фролова, A.B. Гринь // приоритет от 16.01.2007.оп>'бл. 10.07.2008.-БИ № 19.- С. 390.
24. Патент № 2437936 Способ иммобилизации трипсина / В.М. Попова, В.И. Лукина, Е.И. Ярыгина, Л.А. Скороходова, А.И. Гуславский, А.Я. Самуйленко, И.И.
Кочиш, И.Н. Матвеева, В.И. Еремец, С.А. Гринь, A.A. Раевский, И.Л. Беро, М.А.
43
Фролова, H.K. Еремец // приоритет от 17.0б.2010.-опубл. 27.12.2011.-БИ № 36.- С.
812.
6.4. Список научных публикаций
25. Фролова М.А Использование хитозана в составе косметических препаратов/
М.А. Фролова //Мат. II Межд. научно-практич. конф.: «Биологически активные
вещества и новые продукты в косметике» М.-1997.- С. 13-14.
26. Албулов А.И. Препараты из мяса мидий как лечебно-профилактические средства при лечении молодняка сельскохозяйственных животных/ А.И. Албулов, A.C.
Фоменко, М.А. Фролова, В.Н. Качалов, Е.А. Пилипейко // Мат. Всероссийск. научно-пракг. конф., посвященной 70-летию Першина В.А..- Щелково.- ВНИТИБП.1998.- С. 36-37.
27. Албулов А.И. Использование хитозана в ветеринарии в составе средств для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, С.М. Шинкарев // Мат. Всероссийск. научно-практ. конф., посвященной 70-летшо Першина
B.А.- Щелково.- ВНИТИБП.- 1998.- С. 38-39.
28. Сушков И.В. Использование хитозана в растениеводстве/ И.В. Сушков, В.Н.
Чикин, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, Е.А. Е.А. Пилипейко //Мат.
Всеросс. научно-практ. конф., повященной 75-летию со дня рождения
Н.Ф.Чуклова.- Щелково.- 1998.- С. 44-45.
29. Бойков ПЛ. Проблема удаления запаха из морепродуктов и пути ее решения/
ПЛ. Бойков, Б.А. Комаров, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, Е.А.,
C.М. Шинкарев, В.М. Лукьянова//Мат. Всеросс. научно-практ. конф., повященной
75-легию со дня рождения Н.Ф. Чуклова.- Щелково.- 1998.- С. 47-49.
30. Новикова М.В. Мидийные гидролизаты - новая высокоэффективная лечебно профилактическая пищевая добавка/ М.В. Новикова, A.C. Фоменко, А.И. Албулов,
М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов // Мат. V Российский национ.
конгр.: «Человек и лекарство».- М.- 1998.- С. 390.
31. Албулов А.И. Хитозан и коллагеназа - биологически активные препараты из
морепродуктов и других отраслях народного хозяйства/ А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, Б.А. Комаров, С.В. Енгашев // Мат. V Российский национ. конгр.: «Человек и лекарство».- М.- 1998.- С. 342.
32. Албулов А.И. Мидийные препараты - новые продукты в косметике/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.C. Фоменко, С.М. Шинкарев // Мат. III Межд. научнопрактич. конф.: «Биологически активные вещества, новые технологии и продукты в
косметике».- М.- 1998.- С. 24.
33. Албулов А.И. Новые эффективные лекарственные препараты из сырья природного происхождения/ А.И Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов // Мат. I Российской научно-практич. конф.: «Актуальные проблемы медицинской экологии».- Орел.- 1998.- С. 11-12.
34. Костеша НЛ. Производство и контроль медтщинских, ветеринарных препаратов, опыт применения и реализащш их в странах СНГ/ НЛ. Костеша, А.К. Дубровский, А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, A.B. Кузьминенкова, С.М.
Шинкарев // Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов, опыт применения и реализации их в странах
СНГ».- Вольгинский.- 1999.- С. 21-23.
35. Албулов А.И. Лечебно-профилактические пищевые добавки из продуктов морского и растительного происхождения/ А.И. Атбулов, A.C. Фоменко, М.А. Фроло-
44
ва, В.Н. Качалов, С.М. Шинкарев, A.M. Трунов//Мат. науч. конф.: «Место фитотерапии в современной медицине».- Черноголовка.- 1999.- С. 4-7.
36. Новикова М.В. Мидийный падролизат (МИГИ-К ЛП) как лечебно - профилактический препарат/ М.В. Новикова, А.И. Албулов, A.C. Фоменко, М.А. Фролова,
С.М. П1инкарев//Мат. научн. конф.: «Место фитотерапии в современной медицине».-Черноголовка.- 1999,- С. 28-31.
37. Албулов А.И. Хитозан - новый препарат для медицины и ветеринарии/ А.И.
Албулов, А.Я. Самуйленко, A.C. Фоменко, М.А. Фролова, С.М. 111инкарев,
Б.А.Комаров // Мат. VIX Российск. национ. конгр.: «Человек и лекарство».- М.1999.- С. 379.
38. Албулов А.И. Применение хитозана в ветеринарии для лечения и профилактики
желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных/
А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, Н.Э. Нифангьев, A.C. Фоменко, М.А. Фролова,
С.М. Шинкарев //Мат. V конф.: «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана».- М.-Щелково.- 1999.- С. 115-117.
39. Албулов А.И. Перспективы применения хгп'озана в косметике/ А.И. Албулов,
Л.В. Симонова, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко, A.C. Фоменко//Мат. V конф.:
«Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М. - Щелково.- 1999.- С.
117-119.
40. Албулов А.И. Разработка новых лечебно-профилактических препаратов из морепродуктов и растительного сырья/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев, Е.А. Пилипейко, A.B. Кузьминенкова // Мат. Всеросс. научно-практич. конф.: «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной пракгике».Ставрополь,- 2000.- С. 70-72.
41. Пилипейко Е Л . Испытания препарата «Мидиум» в составе рациона кормления
цыплят/ Е.А. Пилипейко, А.И. Албулов, М.А. Фролова, М.В. Новикова // Мат.
Всеросс. научно-практич. конф., посвящ. ЗО-летию ВНИТИБП.- Щелково.- 2000.С. 339-340.
42. Пилипейко Е.А. К вопросу использования препарата «Мидиум» при выращивании цыплят/ Е.А. Пилипейко, А.И. Албулов, М.А. Фролова, П.Б. Ершов //Сборник
докладов Межд. конф. молодых ученых: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково.- 2001.- С. 174-176.
43. Крапивина Е.В. Состояние защитных механизмов поросят при различных способах использования гелевого раствора Х1ггозана/ Е.В. Крапивина, В.П. Иванов,
А.И. Албулов, А Л . Самуйленко, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Мат. VI Межд.
конф.: «Новые достижении в исследовании хитина и хитозана».- М.- 2001,- С. 199200.
44. Мельник Н.В. Применение хитозана для осаждения клеток пастерелл из бульонных культур/ Н.В. Мельник, Н.Д. Скичко, Е.А. Шубина, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова //Мат. VI Межд. конф.: «Новые достижении в исследовании хитина и хитозана».- М.- 2001.- С. 217-220.
45. Ершов П.Б. Применение биологически аьстившлх добавок из морепродуктов при
повышенных физических нагрузках/ П.Б. Ершов, С.М. Шинкарев, В.В. Коржов,
М.А. Фролова, А.И. Албулов // Сбор. докл. Межд. конф. молодых ученых: «Научные основы технологии производства ветершарных биопрепаратов»,- Щелково.2002.-С. 166-168.
45
46. Албулов А.И. Некоторые аспекты практического применения хитозана и его
производных/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Ж. «Парафармацевтика».- 2002.- № 8.- С. 48.
i' ч
47. Албулов А.И. Морские водоросли: путь к красоте/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии» - 2002 № 5 (24).- С. 9.
•
•
49. Албулов А.И. Хитозан: «роение и свойства/ А.И. Албулов, М.А. Фролова //Ж.
«Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии».- 2002,.- № 1
(20)ф~ С. 17.
50. Албулов А.И. Мидии для красоты и здоровья нашего организма/ А.И. Албулов,
М.А. Фролова //Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии».-2002.- № 6 (25).-С. 16.
51. Албулов А.И. Новое косметическое сырье из морских водорослей/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.М. Васильченко //Мат. VII Межд. научно-практ. конф.:
«Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность».- М,- 2002,- С.
37-38.
52. Албулов А.И. Хитозан как средство лечешм и профилактики желудочнокишечных заболеваний молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, АЯ. Самуйленко
М.А. Фролова, С.М. Шинкарев //Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Современные вопросы патологии с/х животных».- Мшск.- 2003.- С. 33-34.
53. Албулов А.И. Хитозан: вчера, сегодня, завтра/ А.И. Албулов, М.А. Фролова
//Мат. VIII Межд. научно-практич. конф.: «Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность».- М.- 2003.
54. Албулов А.И. Влияние препарата «Мидиум» в рационе питания молодняка с/х
животных и птицы на гематологические показатели/ А.И. Албулов, М.А. Фролова,
Е.А. Пилипейко, Е.В. Крапивина, Н.П. Старовойтова //Мат. Межд. научно-практич!
конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» Щелково.-2003.-С. 175-178.
55. Албулов А.И. Эффективность использования препарата «Мидиум» при выращивании молодняка с/х животных/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Е.А. Пилипейко,
Е.В. Крапивина, Н.П. Старовойтова//Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные
основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково - 2003 С.179-182.
56. Шинкарев С.М. Технолопгческие подходы к стандартизации качества хитозана/
С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, А.С. Фоменко,
П.А. Кузнецов//Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково,- 2003.- С. 183-186.
57. Евтихов П.Н. Сравнительная оценка протеолитической активности ферментных
препаратов, получаемых из животного и растительного сырья/ П.Н. Евтихов, С.А.
Марушина, Т.А. Потрехалина, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.M. Трунов /Мат.
Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково.-2003.-С. 195-198.
58. Албулов А.И. Коррекция качества хитозановых препаратов в промышленных
условиях/ А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, А.С.
Фоменко, С.И. Лебедько //Мат. VII Межд. конф.: «Современные перспективы в
исследовании хитина и хитозана», С-Пб - Репино.-2003.-С. 9-11.
59. Албулов А.И. Перспективы применения низкомолекулярных хитозанов в производстве БАД/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйиенко, М.А. Фролова //Мат. V Межд.
46
научной конф.: «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного
происхождения».-Черноголовка.-2004.-С. 312-319.
60. Фролова М.А. Некоторые направления применения различньпс форм хитозана
в ветеринарной практике/ М.А. Фролова, А_Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, П.А.
Кузнецов, Ю.Д. Фролов, А.И. Албулов //Мат. Межд. конф.: «Ветеринарная медицина 2005: современное состояние и проблемы обеспечения благополучия животноводства»,- Ялта.- 2005.-С. 45-49.
61. Албулов А.И. Получение низкомолекулярного хитозана методом ферментного
гидролиза' А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, М.А. Фролова, П.А. Кузнецов, A.B.
Гринь, В.П. Варламов, A.B. Ильина, C.B. Немцев //Мат. Межд. научно-практич.
конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,
поев. 35-летию ВНИТИБП.-Щелково.- 2005.-С. 430-435.
62. Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб - получение и свойства/ М.А.
Фролова, А.И. Албулов, С.М. Шинкарев, А.Я. Самуйленко, О.М. Васильченко,
Д.А. Данишевский //Мат. Межд. научно-практич. конф.: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», поев. 35-летшо ВНИТИБП.М.-2005.-С. 527-530.
63. Албулов А.И. Влияние скармливания хитозана на резистентность телят и поросят в условиях повышенной плотности загрязнения почв радиоцензием/ А.И. Албулов, В.В. Крапивина, М.А. Фролова, АЯ. Самуйленко, В.И. Еремец, С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, A.B. Гринь //Мат. Межд. научно-практич. конф. «Актуаньные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства».- Минск.- 2005.-С. 62-66.
64. Албулов А.И. Некоторые направления применения различных форм хитозана в
ветеринарной практике/ А.И. Атбулов, М.А. Фролова, АЯ.^ Самуйленко, С.М.
Шинкарев, П.А. Кузнецов, Ю.Д. Фролов //Межотраслевой научный сборник «Ветеринарная медицина».- Харьков.- 2005.- № 85.- Т. 2.- С. 45-49.
65. Фролова М.А.'Практические аспекты применения хитозана и его производных
в различных областях народного хозяйства/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, В.И.
Еремец, С.М. Шинкарев, A.B. Гринь //Мат. VIII Межд. конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Казань.- 2006.- С. 68-70.
66. Албулов А.И. Разработка и расширение сферы применения биологически активных препаратов на основе сырья природного происхождения/ А.И. Атбулов,
М.А. Фролова, AJ{. Самуйленко, В.И. Еремец, Е.В. Шмидт //Мат. IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова.- Пущино.-200б.-С. 8-10.
67. Албулов А.И. Хитозансодержащие лечебно-профилактические препараты: настоящее и будущее/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, Б.А. Комаров,
С.М. Шинкарев, П.А. Кузнецов, Е.В. Шмидт //Мат. VI Межд. научной конференции «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине».-Черноголовка.-2006.-С.22-24.
68. Албулов А.И. Опыт применения препаратов хитозана в сельском хозяйстве/
А.И. Албулов, М.А. Фролова, В.П. Варламов, Кузнецов П.А., С.М. Шинкарев, Е.В.
Шмидт, Е.И. Лебедько, A.B. Гринь //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвященной 80-летию со дня рождешм И.А.Харькова «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»,- Щелково.-200б.-С. 257-261.
69. Албулов А.И, Сорбционные свойства хитозана и их применение при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы/ А.И. Албулов, С.М,
Шинкарев, М.А. Фролова, Е.В, Кржижановская, А,К. Чуклов, A.B. Гринь, Е.В.
47
Шмидт //Сборник научных трудов «Основные проблемы ветеринарной медицины и
стратегия борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных животных в современных условиях» .-Махачкала.-2007.-С. 251-254.
70. Албулов А.И. Применение ферментов в технологиях переработки мясных и
рыбных производств/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.А., Марушина, Ф.М. Снегур, И.А. Ельцова //Сборник научных трудов Луганского национального аграрного
университета.- Луганск.-2008.-№ 87.-C.3-7.
71. Кузнецов П.А. Получение фракций хетозана и изучение их биологических
свойств/ П.А. Кузнецов, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова, С.М.
Шинкарев, Ю.Д. Фролов // Мат. научно-практич. конф. «Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы».- Светлогорск.- 2008.-С. 81-82.
72. Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб - эффективная биологачески активная добавка/ М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, А.И. Албулов, В.И. Еремец,
О.М. Васильченко // Мат. научно-практич. конф. «Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы».-Светлогорск.-2008.-С. 140.
73. Албулов А.И. Результаты и проблемы внедреьшя инновационных технологий на
основе хитинсодержащего сырья/ А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, М.А. Фролова,
С.М. Шинкарев, В.И. Еремец, A.B. Гринь //Мат. IX Межд. конф. «Современные
перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Ставрополь.- 2008.-С. 7-9.
74. Албулов А.И. Использование хитозана в составе препаратов для лечения и
профилактики болезней собак/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, С.А., Е.В. Шмидт,
Л.А. Гасанова, В.Н. Портянко, Е.И. Лебедько //Мат. XVI Моск. Межд. конгресса по
болезням мелких домашних ЖИВОТНЫХ.-2008.-М.-С. 157-158.
75. Красочко П.А. Влияние низкомолекулярного хитозана на продуктивность и качество продукции от цыплят-бройлеров/ П.А. Красочко, М.А. Фролова, А.И. Албулов, Н.К. Еремец, A.B. Гринь, И.Л. Беро, В.И. Еремец, А.П. Дуктов //Мат. Межд.
научно-практ. конф., посвящ. 40-летшо ВНИТИБП «Научные основы производства
ветеринарных биологических препаратов».-Щелково.- 2009.-С. 462-469.
76. Гулик Е.С. Влияние хитозана и хитабиса на состояние надэпителиального слизистого слоя тонкого кишечника/ Е.С. Гулшс, Г.А. Костеша, А.И. Албулов, М.А.
Фролова //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИТИБП «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».-Щелково2009.-С. 481-484.
77. Фролова М.А. Гидролизаты белков из сырья животного и растительного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, А Л . Самуйленко, Р.В. Рогов, И.Г. Ермишина, И.Л. Беро //Мат. Межд. научно-практ. конф., посвящ. 40-легию
ВНИТИБП: «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».-Ш;елково.-2009.- С. 517-522.
78. Албулов А.И. Современное состояние и перспективы производства хитозансодержащей продукции в России/ А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова,
A.B. Гринь, О.В. Буханцев, В.П. Варламов //Мат. X Межд. конф.: «Современные
перспективы в исследовании хитина и хитозана».-Нижний Новгород.-2010.-С.7-10.
79. Албулов А.И. Влияние способа высушивания на качество продукта при производстве хитозана и хитозансодержащей продукции/ А.И. Албулов, М.А. Фролова,
Б.А. Комаров, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.И. Еремец //Мат. 10-й Межд. конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана».НижнийНовгород.-2010.-С. 74-77.
48
80. Фролова М.А. Ферментативные гидролизаты из различных видов сырья животного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, Р.В. Рогов, А.К. Лихотин
//Ж. «Труды БГУ».-2009.-Т. 4.-ч. 2.-С. 298-300.
81. Фролова М.А. Гидролизаты белков из сырья животного и растигельного происхождения/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, Р.В. Рогов, И.Г. Ермишина // Сбор. мат. XI Межд. конф. молодых ученых «Пищевые технологии и
биотехнологии».-Казань.-2010.-Ч. 2.-С.
82. Албулов А.И. Отечественные хитозансодержащие биологически активные добавки/ А.И. Албулов, В.П. Варламов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, О.В. Буханцев
//Мат. I Межд. научно-практич. конф.: «Инновационные технологии управления
здоровьем и долголетием человека».-2010.-Санкт-Пегербург.-С. 10-14.
83. Фролова М.А. Эффективность применения препаратов хитозана при заболеваниях кожи и химических и термических ожогах/ М.А. Фролова, Е.И. Лебедько,
С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов //Мат. межд. научнопракгич. конф. «Акгуальные проблемы ветеринарии и животноводства».- 2010.Самара.- С. 334-337.
84. Комаров Б.А. Лиофилизация экстрактов лекарственных растений в присутствии хитозана полифракционного состава/ Б.А. Комаров, А.И. Албулов, М.А. Фролова, A.B. Гринь //Каталог докладов IV Межд. конф.: «Экстракция органических
соединений».-Воронеж.-2010.-С. 95.
85. Фролова М.А. Влияние природного полимера хитозана в составе пробиотических препаратов на состояние здоровья и продуктивность сельскохозяйственных
животных и птицы/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, A.B. Гринь,
Р.В. Рогов //Мат. межд. научно-практич. конф., посвященной 40-лет1по ГНУ ВНИВИПФиТ:«Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях».-Воронеж.-2010.-С.
86. Фролова М.А. Биологические свойства различных форм и модификаций XITTOзана при использовании их в ветеринарии, животноводстве и агробиологии/ Д'1.А.
Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.П.
Варламов, Е.В. Крапивина, Ю.Д. Фролов //Мат. V Межд. конф. «Акт. проблемы
биологии в животноводстве».-Боровск.-2010.-С. 124-125.
87. Фролова М.А. Разработка технологии изготовления гидролизатов из сырья
различного происхождения для использования в животноводстве/ М.А. Фролова,
A.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, Р.В. Рогов, М.Ю. Тюрмина //Матер. V Межд.
конф. «Актуальные проблемы биолоши в животноводстве».-Боровск.-2010.-С. 109110.
88. Фролова М.А. Разработка промышленной технологии изготовления фармацевтических препаратов протеолитического действ1и для использования в различных
областях народного хозяйства/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко,
B.П. Варламов, Р.В. Рогов, О.В. Буханцев //Сборник научных трудов «Перспе1сгивные биокатализаторы для перерабатывающих отраслей А1Ж».-М.-2010.-С. 123-128.
89. Фролова М.А. Лечебная эффективность хитозановых препаратов/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуйленко, С.Д. Антонов, С.М. Шинкарев, A.B. Гринь,
О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов //Ж. «Вегеринарна медицина выпуск 95», Харьков,
2011, С. 232-233.
90. Фролова М.А. Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на
продуктивность цыплят - бройлеров/ М.А. Фролова, А.И. Албулов, АЛ. Самуй-
49
ЦИОШ S
t И ? R
обогащения кормового paциона пчел/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, Р.В. Рогов, Н.Г. Билаш, С С COKOLсши /Мат. Мевд. научно-практич. конф.: «Пути развития пчеловодства в Росеш
я ; : с л Г ь ~ с Т
" Д-него
ЗарубежьГ
92. >^булов А.И. Перспективы получения биологически акгавных добавок к пище
на основе морепродуктов/ А.И. Албулов, М.А. Фролова, А Л . Саму^енко в Т
Варламов, В.М. Быкова, О.В. Буханцев // Мат. IV Меж;, к о н ^ Х р с Г ё
Р ^ Т Г ' М Г Г '
растительного проIZT^^l.
А.И. Албулов //Мат. II Межд. научной
конф.:^Шолодежная наука - пищевой промышленности». Ставрополь.-^П С
m f a C T e Z i l i f ; Эколошчески безопасные хитозансодержащие средства защита растеш1и для агропромышленного комштексаУ М.А. Фролова, А.И Албулов
ВЛ^Варламов, А Л . Самуйленко, О.В. Буханцев, A.B. Грин^ //Мат М е ж д ^ ^ ^ н о
№
конф. посвященной 10-летшо факультета ш^щевых биотехнолошй.Тфа ?ov " i f ^ f
of chitosan in veterinary practice / M.A. Frolova, A.I. Albuov, A.J. Smujlenko, S.M. Shinkarev, O.V. Buhantsev // Adv. Chitin Sei • fte 10th In1 Г Г8 9
- St.-Petetersburt 2 Ш
Vo,
'^i^Pbe и морепродукта / М.А. Фролова, А.И.
Албулов, О.М. Васш1ьченко, В.И. Еремец, О.В. Буханцев, Р.В. Рогов Ш а т Межд
решенЗ?
биотехнологт«. для здорового п ™ и
решения медико-социальных проблем».-Светлогорск-2011 -С 121-122
97. Албулов А.И Хитозан содержащие биологически активные добавки - источниФР"^"«^' В-П- Варламов,
^ая
f
М
е
ж
д
.
научно-практ. конф. Шище^
вая и морская биотехнолоптя для здорового питашм и решения медикосош1альныхщ,облем».-Светлогорск.-2011.-С.6-7
Решения медико
98 Фролова М.А. ДНК из молок лососевых рыб для применения в качестве БАД в
ioroB^Tl^'^'Z'^
0-М. Васильченко, Р З .
Рогов, Ю.Д. Фролов //Мат. Межд. научно-практ. конф. «Пищевая и морская биоС™гоТск.^11Тс'пГ1^
медико-социальных проблем».И^У^^™® эффективности применения мидийного гидролизата
V моГпГ
повышешм неспецифической резистентности организма
L r p T ^ n ' ' ' / ^
Са-муйленко, Е.В КрапиPZV
f ?
•
конф., посвященной 90-легшо ФГУП «Армавирская биофабрика».-Армавир.-2011.-С. 87-91.
100. Фролова М.А. Перспективы примененш! хитозана и его производных в соВарламов, A.B. Гринь, О.В. Буханцев //Мат. Межд. научно-практ. конф. «Фармацевтические и медицинские биотехнологии».-2012.- М.-С. 295-296.
50
101. Фролова М.А. Использование метода ультрафильтрацип при получешш ферментного препарата трипсина для биотехнологических целей/ М.А. Фролова, Р.В.
Рогов, А.И. Албулов, Д.С. Немцев, A.B. Гринь //Мат. VI Межд. научно-практич.
симпозиума: «Перспективные ферментные препараты и биотехнологаческие процессы в технологии продуктов питания и кормов».-М.-2012.-С. 47-50.
ОСНОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ИД - нормативная документация
ТУ - технические условия
ТИ - технологическая инструкция
ОР - основной рацион
ФР - физиологический раствор
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
АА - антиоксидантная акгавность
БАВ - биологически активное вещество
БАД - биологически активная добавка
кДа - килодальтон
ММ - молекулярная масса
ММР - молекулярно-массовое распределение
СДА - степень дезацетилирования
СЗ - степень замещения
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
КРС - крупный рогатый скот
ВНКИ-21 - перевиваемая линия клеток почки сирийского хомячка
ПТ - почка теленка
СПЭВ - перевиваемая линия почек свиней
ФКЭ - фибробласты куриных эмбрионов
ИП - индекс пролиферации
Заказ № 261. Объем 2 п.л. Тираж 100 экз.
Отпечатано в ООО «Петроруш».
пМосква, ул.Палиха 2а.тел.(499)250-92-06
wwлv.postatoг.ru