мониторинг контролируемой среды: использование контактных

Чистый барьер
Оквха Ким,
Эрик А. Биндер,
Натан Стори,
Дэвид Джонс
МОНИТОРИНГ КОНТРОЛИРУЕМОЙ
СРЕДЫ: ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
КОНТАКТНЫХ ЧАШЕК ДЛЯ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОЗДУШНОЙ СРЕДЕ
Статья опубликована на сайте журнала «Controlled Environments», (www.cemag.us)
Введение
Анализ содержания жизнеспособных микроорганизмов
в воздушной среде является ключевым элементом программы мониторинга окружающей среды при асептическом производстве. Для подтверждения соответствия класса чистого
помещения установленным требованиям используются как
пассивный метод с применением седиментационных чашек,
так и активный метод отбора проб воздуха. Согласно Приложению 1 для контроля уровня жизнеспособных микроорганизмов в воздухе проводится 4-часовой пассивный отбор
проб с помощью чашек Петри диаметром 90 мм, содержащих
триптоно-соевый агар (англ. TSA – Tryptic Soy Agar). В то же
время для мониторинга загрязнения поверхностей микроорганизмами, находящимися в воздушной среде, используются
чашки диаметром 55 мм с тем же триптоно-соевым агаром,
но с добавлением лецитина и полисорбата 80 (TSA с LP80).
Использование и обработка чашек разного размера с разной средой может потребовать дополнительных ресурсов для
проведения испытаний контроля качества.
Ниже описано исследование применения контактных
пластин «Growth Cassettes™» («Кассеты для оценки микробиологического роста») для мониторинга загрязнения воздуха
и поверхностей, подтверждающее, что эффективность использования этих пластин не уступает традиционным решениям.
Материалы и методы
Метод с применением седиментационных пластин
В ходе исследования в 49 точках отбора проб были установлены рядом одна чашка Петри с TSA и одна контактная
пластина Growth Cassette. Время контакта с воздухом составляло 4 часа. Из-за разного размера чашки Петри и контактной пластины (90 мм и 57 мм, соответственно) дополнительно
был проведен отбор проб с использованием одной чашки
Петри с TSA и двух контактных пластин в каждой точке.
В случае с двумя контактными пластинами отбор проб производился из 50-ти сред с низкой бионагрузкой и такого же
количества сред с высокой бионагрузкой. После 5-дневной
инкубации и ручного подсчета был проведен сравнительный
анализ полученных результатов.
52
Метод активного отбора проб
В ходе исследования был произведен отбор проб воздуха общим объемом 1000 л. Пробы отбирались в одной и той
же точке в среде с высокой бионагрузкой в течение 3-х различных дней. В первый и второй день количество проб для
каждой чашки Петри и каждой контактной пластины Growth
Cassette составило шесть, а в третий день – девять. Кроме
того, с помощью пробоотборника MAS-100 были отобраны
дополнительные пробы для одной чашки Петри диаметром
90 мм и одной контактной пластины, установленных рядом.
После инкубации и подсчета было проведено сравнение результатов между чашками Петри и контактными пластинами.
Результаты
Сравнение результатов пассивного отбора проб
При использовании только одной контактной пластины
Growth Cassette в каждой точке отбора проб общее количество колониеобразующих единиц, обнаруженных на всех
контактных пластинах, составило 72, в то время как для всех
чашек Петри аналогичный показатель составил 148. Таким
образом, эффективность выявления микроорганизмов с помощью контактных пластин составила 46,8% по сравнению
с чашками Петри.
Таблица 1 содержит сравнение результатов, полученных
при размещении в одной точке двух контактных пластин
и одной чашки Петри, с результатами, полученными при размещении одной контактной пластины и одной чашки Петри.
Таблица 1
Результаты, полученные для контактных пластин
Growth Cassette и чашек Петри при пассивном отборе проб
Общее количество КОЕ
для контактных пластин
Growth Cassette
Общее количество КОЕ для
чашек Петри
Одна пластина
Growth Cassette
72
148
Две пластины
Growth Cassette
570
489
ЧИСТЫЕ ПОМЕЩЕНИЯ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ СРЕДЫ
Чистый барьер
Сравнение результатов активного отбора проб
При активном отборе проб общее количество микроорганизмов составило 1726 КОЕ для 21 чашки Петри и 1393 КОЕ
для 21 контактной пластины. Согласно графику, представленному на рисунке 2, с помощью чашек Петри и контактных
пластин в одних и тех же точках были получены одинаково
высокие и низкие показатели. В этом случае общая эффективность выявления микроорганизмов с помощью контактных пластин составила 80,7% относительно чашек Петри.
Пассивный отбор проб
35
Две контактные пластины
в одной точке отбора проб (КОЕ)
Для определения общего количества КОЕ сначала суммировались показатели обеих пластин Growth Cassette, расположенных в одной точке отбора проб, а затем – общие показатели обеих пластин во всех точках. В этом случае в чашках
Петри было обнаружено 489 КОЕ, а в контактных пластинах –
570 КОЕ. Следовательно, эффективность выявления микроорганизмов с помощью двух контактных пластин составила
116% по сравнению с одной чашкой Петри.
30
25
20
15
10
5
0
0
5
10
№ 1 (53) ЯНВАРЬ — МАРТ 2015
20
25
30
35
Рис. 1. Сравнение показателей, полученных с помощью чашки
Петри и контактных пластин Growth Cassettes при пассивном
отборе проб
Анализ результатов и выводы
Активный отбор проб
160
Контактные пластины (КОЕ)
Результаты, полученные при пассивном отборе проб,
явно указывают на необходимость использования двух
контактных пластин в каждой точке отбора проб, поскольку
в этом случае эффективность выявления микроорганизмов
составляет 116% против 48,6% для одной пластины. Это
объясняется тем, что площадь поверхности чашки Петри
в 2,5 раза превышает площадь контактной пластины Growth
Cassettes. Согласно графику, представленному на рисунке 1,
при использовании двух контактных пластин большинство
показателей расположены очень близко к линии регрессии,
а между показателями, полученными для чашек Петри и контактных пластин, существует сильная линейная взаимосвязь
как в чистой, так и в загрязненной среде.
При использовании активного метода отбора проб эффективность выявления микроорганизмов с помощью контактных пластин составила 80,7% относительно чашек Петри.
Учитывая разницу в площади поверхности пластины и чашки
Петри, это очень высокий показатель. Таким образом, можно сделать вывод, что при активном отборе проб контактные
пластины так же эффективны, как и чашки Петри, несмотря
на разницу в объеме пробы воздуха, контактирующей с поверхностью.
В результате исследования было установлено, что применение контактных пластин Growth Cassettes и стандартных
15
Одна чашка Петри (КОЕ)
140
120
100
80
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
Чашки Петри (КОЕ)
Рис. 2. Сравнение показателей, полученных с помощью
чашки Петри и контактных пластин Growth Cassettes
при активном отборе проб
чашек Петри одинаково эффективно как при активном, так
и при пассивном отборе проб. Следовательно, для отбора
проб воздуха с целью мониторинга окружающей среды могут
использоваться контактные пластины с агаром установленного размера, что значительно сократит время, необходимое на
проведение лабораторных испытаний контроля качества. 