© Êîëëåêòèâ àâòîðîâ, 2003 Ì. È. Àíòîíîâà, À. À. Ïðîêîïîâ, Â. È. Àõàïêèíà, À. Ñ. Áåðëÿíä ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÛÉ ÀÍÀËÈÇ ÔÅÍÎÒÐÎÏÈËÀ  ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÕ ÎÁÚÅÊÒÀÕ ÌÅÒÎÄÎÌ ÃÀÇÎÆÈÄÊÎÑÒÍÎÉ ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈÈ Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèêî-ñòîìàòîëîãè÷åñêèé óíèâåðñèòåò Ôåíîòðîïèë (N-êàðáàìîèëìåòèë-4-ôåíèëïèððîëèäîí-2) ÿâëÿåòñÿ ïðîèçâîäíûì ïèðàöåòàìà è çíà÷èòåëüíî ïðåâîñõîäèò åãî ïî íîîòðîïíîé àêòèâíîñòè [1]. Ñ öåëüþ èçó÷åíèÿ äîêëèíè÷åñêîé ôàðìàêîêèíåòèêè ôåíîòðîïèëà íàìè áûëà ðàçðàáîòàíà ìåòîäèêà åãî êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ â áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ. Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ ÷àñòü Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëè íà õðîìàòîãðàôå ËÕÌ-8 ÌÄ (ìîäåëü 5) ñ ïëàìåííî-èîíèçàöèîííûì äåòåêòîðîì.  ðàáîòå ïðèìåíÿëè ñòàëüíóþ êîëîíêó äëèíîé 1 ì è âíóòðåííèì äèàìåòðîì 3 ìì, çàïîëíåííóþ 15 % Àïèåçîíîì L íà õðîìàòîíå N-AW-DMCS 0,160 – 0,200 ìì. Àíàëèç âûïîëíÿëè â èçîòåðìè÷åñêîì ðåæèìå ïðè òåìïåðàòóðå êîëîíêè 240 °C, òåìïåðàòóðà èñïàðèòåëÿ 350 °C. Ñêîðîñòü ãàçà-íîñèòåëÿ (àçîò) — 35 ìë/ìèí, âñïîìîãàòåëüíûõ ãàçîâ: âîçäóõà — 300 ìë/ìèí, âîäîðîäà — 35 ìë/ìèí. Âíóòðåííèì ñòàíäàðòîì ñëóæèë ïðåäñòàâèòåëü êîíäåíñèðîâàííûõ áèñìî÷åâèí — 2,4,5,7,8,10-ãåêñàìåòèë-2,4,8,10-òåòðààçàáèöèêëî[4.4.0]äåêàíäèîí-3,9 (À). Ïàðàìåòðîì ðàñ÷åòà õðîìàòîãðàìì áûëà âûáðàíà ïëîùàäü ïèêîâ. Ïðè îöåíêå êîëè÷åñòâåííîãî ñîäåðæàíèÿ ôåíîòðîïèëà â ïëàçìå êðîâè è ìî÷å ïîëüçîâàëèñü ïðåäâàðèòåëüíî èçìåðåííûì êîýôôèöèåíòîì îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà ïî âíóòðåííåìó ñòàíäàðòó Ki/s, êîòîðûé â èíòåðâàëå ìàññîâûõ ñîîòíîøåíèé ôåíîòðîïèë — A îò 1:3 äî 3:1 ñîñòàâèë 1,02 ± 0,01.  ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè íàòèâíóþ êðîâü è ìî÷ó êðûñ-ñàìöîâ, à òàêæå ïðåäïîëàãàåìûå íàìè ê èñïîëüçîâàíèþ ïðè èçó÷åíèè ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè ôåíîòðîïèëà êðîâü è ìî÷ó êðûñ, ïîëó÷åííûå ïîñëå ââåäåíèÿ èì ïðåïàðàòà â äîçå 100 ìã/êã. Ýêñòðàãèðîâàíèå ôåíîòðîïèëà èç áèîæèäêîñòåé ïðîâîäèëîñü õëîðîôîðìîì.  ïðåäâàðèòåëüíûõ îïûòàõ áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè îäíîêðàòíîé ýêñòðàêöèè ôåíîòðîïèëà èç ïëàçìû êðîâè è ìî÷è 40-êðàòíûì îáú¸ìîì õëîðîôîðìà â òå÷åíèå 20 ìèí ñòåïåíü èçâëå÷åíèÿ âåùåñòâà ñîñòàâëÿåò ñîîòâåòñòâåííî 84,1 ± 4,3 % è 91,8 ± 1,9 %. Äëÿ îöåíêè ñïåöèôè÷íîñòè è ñåëåêòèâíîñòè ìåòîäèêè êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ êðûñàì ââîäèëè ôåíîòðîïèë â äîçå 100 ìã/êã. ×åðåç îïðåäåë¸ííûå èíòåðâàëû âðåìåíè îòáèðàëè ïðîáû êðîâè è ìî÷è æèâîòíûõ. Êðîâü öåíòðèôóãèðîâàëè 10 ìèí ïðè 3000 îá/ìèí. Ê 1 ìë ïëàçìû êðîâè èëè ìî÷è ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà, à òàêæå ê 1 ìë èíòàêòíûõ ïëàçìû êðîâè è ìî÷è äîáàâëÿëè 40 ìë õëîðîôîðìà è âñòðÿõèâàëè íà øåéêåðå â òå÷åíèå 20 ìèí. Õëîðîôîðìíûé ñëîé îòäåëÿëè ïîñëå âûìîðàæèâàíèÿ âîäíîé ôàçû ïðè òåìïåðàòóðå –15 °C è óïàðèâàëè íà ðîòîðíîì èñïàðèòåëå äî îáú¸ìà 2 – 3 ìë. Îñòàòîê êîëè÷åñòâåííî ïåðåíîñèëè â ìèêðîïðîáèðêó ñ äíîì, îòòÿíóòûì â êàïèëëÿð, è óïàðèâàëè äîñóõà â òîêå àçîòà. Ê ïîëó÷åííîìó ñóõîìó îñòàòêó äîáàâëÿëè âíóòðåííèé ñòàíäàðò — 0,1 % õëîðîôîðìíûé ðàñòâîð À — â êîëè÷åñòâå, ñîîòâåòñòâóþùåì ñîîòíîøåíèþ êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèë — âíóòðåííèé ñòàíäàðò À îò 3:1 äî 1:3.  èñïàðèòåëü õðîìàòîãðàôà ââîäèëè 1 – 3 ìêë ïðîáû è õðîìàòîãðàôèðîâàëè â óêàçàííûõ âûøå óñëîâèÿõ. Íà ðèñ. 1 è 2 ïðåäñòàâëåíû òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ èç ïëàçìû êðîâè è ìî÷è êðûñ äî è ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, ïèê ôåíîòðîïèëà ïðè äàí- J I II Äîñòîâåðíîñòü ðåçóëüòàòîâ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ Áèîæèäêîñòü Ïëàçìà êðîâè Ìî÷à 46 Âçÿòî íà àíàëèç, ìêã/ìë Íàéäåíî, ìêã/ìë 10,00 10,00 10,00 10,00 9,75 10,35 9,84 9,67 10,00 10,00 10,00 10,00 9,87 9,79 10,23 9,71 Ìåòðîëîãè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè (n = 5, p = 0,95) X = 9,96; S = 0,30; DX = 0,37; X ± DX = 9,96 ± 0,37; e = 3,7 % X = 9,95; S = 0,23; DX = 0,29; X ± DX = 9,95 ± 0,29; e = 2,9 % B A 0 5 10 15 T, ìèí Ðèñ. 1. Òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ èç ïëàçìû êðîâè êðûñ è èíòàêòíîé ïëàçìû êðîâè êðûñ: A — ýêñòðàêò èíòàêòíîé ïëàçìû êðîâè êðûñ; B — ýêñòðàêò èç ïëàçìû êðîâè êðûñ ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà â äîçå 100 ìã/êã; I — ïèê âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, II — ïèê ôåíîòðîïèëà. Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 37, ¹ 10, 2003 íûõ óñëîâèÿõ àíàëèçà óäîâëåòâîðèòåëüíî ðàçäåëÿåòñÿ ñ ïèêàìè ýíäîãåííûõ ñîåäèíåíèé è âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î äîñòàòî÷íîé ñåëåêòèâíîñòè è ñïåöèôè÷íîñòè óñëîâèé àíàëèçà ôåíîòðîïèëà â áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ äëÿ èññëåäîâàíèÿ åãî ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè íà æèâîòíûõ. Îöåíêó äîñòîâåðíîñòè ìåòîäèêè êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ ïðîâîäèëè äëÿ ìîäåëüíûõ ñìåñåé — îïðåäåë¸ííîé êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòà â ïëàçìå êðîâè è ìî÷å. Àíàëèç ïðîâîäèëè â îïèñàííûõ âûøå óñëîâèÿõ. Âíóòðåííèé ñòàíäàðò äîáàâëÿëè â êîëè÷åñòâå, ñîîòâåòñòâóþùåì îáëàñòè ñîîòíîøåíèé êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèë — âíóòðåííèé ñòàíäàðò À, â êîòîðîé ñèãíàë äåòåêòîðà ëèíååí. Êîíöåíòðàöèþ ôåíîòðîïèëà îïðåäåëÿëè, èñïîëüçóÿ êàëèáðîâî÷íûé êîýôôèöèåíò Ki/s = 1,02 è íàéäåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíî çíà÷åíèÿ ïðîöåíòà ýêñòðàêöèè ïðåïàðàòà èç áèîæèäêîñòåé.  òàáëèöå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ. Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå, îòíîñèòåëüíàÿ îøèáêà îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â ïëàçìå êðîâè ñîñòàâëÿåò 3,7 %, à â ìî÷å — 2,7 %. Èñòèííûå çíà÷åíèÿ êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ (10 ìêã/ìë) ëåæàò âíóòðè äîâåðèòåëüíîãî èíòåðâàëà ñðåäíåãî, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè ñèñòåìàòè÷åñêîé îøèáêè è ïðàâèëüíîñòè ðåçóëüòàòîâ. Ìèíèìàëüíàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü îïðåäåëåíà ïî ýòîé ìåòîäèêå, ñîñòàâëÿåò 0,5 ìêã/ìë. Òàêèì îáðàçîì, ðàçðàáîòàíà ñïåöèôè÷åñêàÿ, âûñîêî÷óâñòâèòåëüíàÿ è õîðîøî âîñïðîèçâîäèìàÿ ìåòîäè- Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 37, ¹ 10, 2003 J I II B A 0 5 10 15 20 25 T, ìèí Ðèñ. 2. Òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ èç ìî÷è êðûñ è èíòàêòíîé ìî÷è êðûñ: A — ýêñòðàêò èíòàêòíîé ìî÷è êðûñ; B — ýêñòðàêò èç ìî÷è êðûñ ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà â äîçå 100 ìã/êã; I — ïèê âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, II — ïèê ôåíîòðîïèëà. êà êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ èçó÷åíèÿ åãî ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè ó æèâîòíûõ. Ë È Ò Å ÐÀ Ò Ó ÐÀ 1. Ïàòåíò ÐÔ ¹ 2050851, Áþë. Èçîáðåò., ¹ 36 (1995). Ïîñòóïèëà 20.05.03 47