ФГБНУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток имени И.И.Мечникова» Взаимодействие вариантов штамма сибирского генотипа вируса клещевого энцефалита с дендритными клетками мыши. Мотузова Оксана Вячеславовна лаборатория биологии арбовирусов аспирант 3 года обучения Москва, 2015 Используемые в работе варианты штамма ЭК-328 ЭК-328 вариант М Клон 57 Клон 58 Область генома ЭК-328 Вариант М Клон 57 Клон 58 122 ак. белка Е Glu Gly Gly Glu 124 ак. белка Е Lys Lys Glu Lys 52 ак. белка NS2A Lys Asn Asn Asn 22 ак. белка NS4A Ser Gly Gly Gly 41 ак. белка NS4A Arg Lys Lys Lys prM Ala Val Val Val 42нт 5’-НТО +с а а а Используемые в работе клоны штамма ЭК-328 и их свойства NS2A и NS4A , 42нт 5’-НТО Нейроинвазивность Нейровирулентность Индукция ИФН Чувствительность к ИФН Время появления ИФНα Конформационная стабильность белка Е Термостабильность ЭК-328 57 58 Высокая Низкая Высокая Высокая Средняя Высокая Высокая Низкая Высокая Высокая Средняя Низкая 10ч 28ч в/д 5ч Устойчив Неустойчив Устойчив Средняя устойчивость Неустойчив Супер устойчив Белок Е Фенотип дендритных клеток Антиген MHC II CD4 CD80,86 CD40 CD11c CD38 Захват антигена процессинг а/г MHC экспрессия Способность к миграции Молекулы адгезии Костимуляторная активность Цель – изучить взаимодействие штамма ЭК328 и его вариантов с ДК костномозгового происхождения. . Задачи: Сравнить: 1)динамику размножения исходного штамма ЭК328 и его вариантов – клона 57 и клона 58 в дендритных клетках мыши ДК 2)динамику синтеза ИФН-α ДК 3)изменение фенотипа ДК под влиянием исследуемых вирусов. Динамика размножения Динамика размножения штамма ЭК-328 в культуре ДК мыши lgБОЕ 5,3 Множественность заражения 4,3 0,1 БОЕ/кл 3,3 1 БОЕ/кл 10 БОЕ/кл 2,3 1,3 0 5 10 14 18 24 48 часы 72 (высоковирулентный) Динамика размножения клона 57 в культуре ДК мыши lgБОЕ Динамика размножения клона 58 в культуре ДК мыши lgБОЕ 5,3 5,3 4,3 Множественность заражения 4,3 Множественность заражения 0,1 БОЕ/кл 3,3 1 БОЕ/кл 0,1 БОЕ/кл 3,3 1 БОЕ/кл 10 БОЕ/кл 2,3 10 БОЕ/кл 2,3 1,3 0 5 10 14 18 24 48 (низковирулентный) 72 часы 1,3 0 5 10 14 18 24 48 (высоковирулентный) 72 часы Индукция ИФН-α Вирус Шт. ЭК-328 57 клон 58 клон Доза (БОЕ/кл) 5ч п/и 10ч п/и 0,1 3/3 2/3 1 0/3 1/3 10 1/3 0/3 0,1 1/2 1/2 1 1/2 1/2 10 1/2 0/2 0,1 2/2 1/2 1 1/2 1/2 10 1/2 1/2 Влияние вариантов одного штамма ВКЭ на фенотип ДК % 90 80 70 60 штамм ЭК-328 58 клон 50 57 клон 40 Контроль 30 TNF-alfa 20 10 0 CD38 CD34 CD40 CD83 CD80/83 CD11c CD86/11c MHCII CD14 Гипотеза 57 клон MHC II CD40 CD80,86 CD38 CD11c штамм ЭК-328 CD4+ CD4 штамм ЭК-328 58 клон Выводы • Единичные точечные аминокислотные замены в молекуле белка Е вариантов ВКЭ могут изменять способность их взаимодействия с ДК. • Характер активации врожденного и адаптивного иммунного ответа может зависеть от соотношения этих вариантов в популяции. • Высоковирулентные вирусы отличились между собой по степени экспрессии маркера CD11c, но сходны по остальным маркерам. • Высоковирулентный клон 58 оказался наиболее активным индуктором созревания ДК. • Под действием низковирулентного клона 57 ДК экспрессировали MHCII на уровне отрицательного контроля Работа выполнена на базе лабораторий: ФГБНУ «ИПВЭ им. М.П.Чумакова» (зав. лаб. биологии арбовирусов, проф. Г.Г. Карганова) ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова» (зав.лаб. механизмов регуляции иммунитета, д.м.н. Н.К. Ахматова) Благодарю за внимание