Небольшой молекулярный активатор гипертрофии сердца обнаружили при химическом скрининге ... модификаторов пути кальцинейриновой сигнализации
реклама
Небольшой молекулярный активатор гипертрофии сердца обнаружили при химическом скрининге для модификаторов пути кальцинейриновой сигнализации Кальмодулинзависимая фосфатаза кальциневрина регулирует рост и экспрессию генов поперечно-полосатых мышц. Активность кальциневрина модулируется семейством кофакторов, которые называют модулирующими взаимодействие кальциневрина белками ( MCIPs ). В центре процесса ген MCIP1, который активируется кальциневрином, поэтому было предложено включить цепь отрицательной обратной связи, чтобы сдержать потенциально патологические сигналы кальциневрина, которые в противном случае могут привести к аномальному сердечному росту. При скрининге для малых молекул , способных регулировать экспрессию MCIP1 в мышечных клетках , мы определили уникальное производное 4-аминопиридина, обладающее встроенной частичной структурой серотонина (5- гидрокситриптамина , 5-НТ) . Эта молекула упоминается как пиридиновый активатор гипертрофии миоцитов и действует как селективный агонист для 5-HT2A/2B рецепторов и индуцирует гипертрофию сердечной мышцы через сигнальный путь с участием кальциневрина и киназа -зависимый механизм, который инактивирует дезацетилазу гистонов класса II, которые действуют как репрессоры сердечного роста. Эти данные идентификации MCIP1 как нижестоящий цели сигнализации рецептора 5-HT2A/2B в клетках сердечной мышцы предлагают возможное применение для 5-HT2A/2B агонистов и антагонистов , как модуляторов сердечного роста и экспрессии генов. Многочисленные агонисты , которые действуют через G -белок вызвать активацию кальций-зависимых сигнальных путей , которые стимулируют сердечный рост и экспрессию генов (см. обзор в работе . 1 ). Послеродовая возможность кардиомиоцитов реагировать на такие сигналы гипертрофического роста , характеризуется увеличением размера миоцитов и синтеза белка, сборки саркомеров и активации программы генов плода (rev. Ref. 2 ). Активации кальмодулин -зависимой фосфатазы кальциневрина достаточно и , во многих случаях , она необходима для патологической сердечной гипертрофии, основного предиктора заболеваемости и смертности людей. Таким образом, имеет огромный интерес в выявлении новых малых молекул , способных терапевтической модуляции сигналов кальциневрина в сердце. Многие кальциневрин чувствительных гены контролируются членами семейства ядерного фактора активированных Т-клеток ( NFAT ), семейства транскрипционных факторов , которые перемещается в ядро , когда произошло дефосфорилирование по кальцинейриновому пути. Кальциневриновый путь также стимулирует энхансер фактор -2 ( MEF2 ) миоцитов, транскрипционный фактор нескольких механизмов (6). Мы показали, что кальцинейрин активирует киназы, которые фосфорилируют класс II дезацетилазы гистонов ( HDACs ) , которые действуют как MEF2 корепрессоры ( 7 ) . Сигнал - зависимое фосфорилирование HDACs класса II запускает их экспорт из ядра и активацию MEF2 генов-мишеней (8, 9) . HDACs мутанты, лишенные сигнальных сайтов фосфорилирования являются невосприимчивыми к кальциевой сигнализации и не имеют гипертрофию кардиомиоцитов. На деятельность кальцинейрина влияют кофакторы, известные как модуляторы кальцинейрин взаимодействующих белков ( MCIPs ) или кальцийпрессоры ( в обзоре . 10 ) . Недавние исследования на дрожжах (11) и клетках млекопитающих (12-14) показали положительные и отрицательные роли этих белков в контроле кальциневриновой активности. Избыточная экспрессия MCIP1 (также называемый синдром Дауна критической области 1) , например, подавляет кальциневриновую сигнализацию (12). В противоположность этому, MCIP1 также, кажется, усиливает кальциневриновую сигнализацию, о чем свидетельствует уменьшение деятельности кальцинейрина в сердцах мышей с MCIP1 (13). Интересно, что ген MCIP1 является мишенью NFAT и повышающей регуляции в ответ на передачу сигналов кальциневрина (15), который был предложен , чтобы создать цепь отрицательной обратной связи , которая гасит активность кальциневрина, которая в противном случае может привести к аномальному сердечному росту. В целях выявления новых малых молекул, которые могут помешать патологической гипертрофии сердца, стимулируя экспрессию MCIP1, мы провели высокой пропускной скрининг (HTS) из химической библиотеки для соединений, способных активировать кальциневрин / NFAT промотор гена MCIP1 в мышечных клетках. Мы описываем ранее неохарактеризованный 4-аминопиридин, который мы называем пиридиновый активатор гипертрофии миоцитов ( PAMH ) , который индуцирует экспрессию MCIP1 и, неожиданно, приводит к гипертрофии кардиомиоцитов. PAMH действует как 5 - гидрокситриптамин (5-НТ ) агонист на 2А/2В рецепторы и вызывает гипертрофию , по крайней мере частично , за счет стимулирования ядерного импорта NFAT и ядерного экспорта HDACs класса II. Эти данные проливают свет на мощный гипертрофический сигнальный путь от сигналов рецептора 5-HT2A/2B и предполагают, что химические модуляторы этого пути могут быть эффективны в борьбе с сердечной гипертрофией и экспрессией генов. Материалы и методы Культура кардиомиоцитов. Желудочковые миоциты новорожденной крысы ( NRVMs ) культивировали , как описано ранее(16). Для получения подробных сведений см. вспомогательном текст, который публикуется в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS . Первичные HTS . H9c2 клетки ( American Type Culture Collection нет CRL- 1446 ; . . Ссылка 17 ) культивировали в DMEM с добавлением 10% FBS / 4 мМ L-глутамина / 1% пенициллина / стрептомицина . Клетки в концентрации 50000 клеток на мл временно трансфицировали в пакетном режиме с репортерной конструкцией (20 пг на клетку ) , кодирующей люминисцентной люциферазы под контролем промотора экзона 4 гена из человеческой MCIP1 ( пар оснований -874 до +30 относительно начиная экзона 4) и FuGENE реагента ( 6 × 10-5 мкл ) . Трансфицированные клетки высевали на 96-луночные планшеты (Packard) при плотности 5000 клеток на лунку. Библиотеку в 20000 низкомолекулярных испытуемых соединений (выбранными для молекулярного разнообразия и приобретенных у ChemBridge , Сан-Диего ) затем добавляют с помощью Biomek FX роботизированной системы подготовки проб ( Beckman Coulter ) ( одной сложной на лунку, 10 концентрация мкМ) . Шестнадцать контрольных лунок на чашку получают водный носитель ( 0,1 % ДМСО , окончательный ) . Планшеты инкубировали в течение 48 ч и обрабатывали для количественного определения активности люциферазы при помощи многоямного люминометра (Packard Fusion ) . Вестерн-блот анализ и иммунное окрашивание . Пептид, соответствующий С-концу мышиного белка MCIP1 (GenBank не AAF63486 ; . CRPEYTPIHLS ) синтезировали (Sigma Genosys ) с включением N -концевого остатка цистеина для облегчения конъюгации с гемоцианин лимфой улитки (KLH ). Кролики были иммунизированы KLH , конъюгированным пептидом согласно стандартным процедурам ( Lampire биологические лаборатории , Pipersville , PA) . Вестерн-блот и методы иммунологического окрашивания к β - миозин тяжелой цепи и предсердному натрийуретическому фактору (ANF) проводили, как описано в сопровождающем тексте . Результаты HTS для молекул, которые повышают MCIP1 экспрессию в мышечных клетках. Основываясь на устойчивости к гипертрофии трансгенных мышей, которые сверхэкспрессируют MCIP1 в сердце (18, 19), мы стремились определить малые молекулы, способные повышению экспрессии MCIP1 в мышечных клетках, как потенциальное средство подавления патологического сердечного роста. С этой целью мы провели HTS для соединений, способных стимулировать экспрессию гена люциферазы, контролируемого альтернативного промотора экзона 4 гена MCIP1 человека в мышечных клеток линии H9c2 (рис. 1а). Это область генома содержит 15 NFAT-сайты связывания (15). Транскрипты, инициированные из экзона 4 промотора кодируют белок MCIP1 197-AA с M R ≈ 28 кДа по сравнению с ≈ 38 кДа белком, кодируемым транскриптами, содержащими экзон 1 (20). При скрининге 20000 соединений , мы определили , что 21 стимулировало экспрессию MCIP1 - люциферазы в 2 раза или больше. Самый сильный удар, названный PAMH, показал ранее не охарактеризованный 4аминопиридин (5,6,7,8- тетрагидро-3- метил-2- фенил [1] бензотиено [2,3- Ь] пиридин-4- амин), который имеет встроенную частичную структуру серотонина ( 5-HT ) (рис. 1В). В соответствии со своей способностью стимулировать промотор MCIP1 экзона 4 , PAMH выборочно и воспроизводимо вызывало резкое увеличение экспрессии 28 - кДа виде MCIP1 NRVMs (рис. 1в) .Чувствительность 28 - кДа MCIP1 приведена на рис . 1D . Заражение NRVMs с кодированием аденовирус активированного кальциневрина предпочтительно активирует такую форму белка , кодируемого кДНК , который инициирует ATG в экзоне 4. 38- кДа MCIP. Изменчивость в отзывчивости белка 38 - кДа MCIP1 может отражать посттрансляционный эффект PAMH независимо от его влияния на кальцинеурин экзона 4 промоутера. Торможение деятельности кальцинеурина циклоспорином А (CSA) уменьшило увеличение эндогенной экспрессии MCIP1 вызванной кальцинейрином и PAMH (рис. 1 D и E ) . Стимуляция гипертрофии кардиомиоцитов PAMH . Поскольку экспрессия MCIP1 индуцируется в кардиомиоцитах разнообразными прогипертрофическими агонистами (21) , мы протестировали соединения после основного скрининга на их потенциал вызывать гипертрофию NRVMs . PAMH мощно индуцирует гипертрофию NRVMs , если судить по сборке саркомеров , размером клеток и синтеза белка (рис. 2-C ) . PAMH также активируется выражение АНФ и β - миозина тяжелой цепи , маркеров генной программы плода , а также содействовал гипертрофии так же эффективно, как фенилэфрин (PE) , мощный гипертрофический агонист, который действует через α -адренорецепторы (рис. 2 B -E) . Образцы экспрессии генов в присутствии PAMH и ПЭ , как определено с помощью анализа микрочипов , были также удивительно похожи . Из 15866 кДНК проанализированных на микрочипе соединений, 175 были активирующими и 226 были отрицательно регулирующими ( рис. 2F) . Величина изменения в экспрессии генов и ранг отзывчивости генов к двум агонистам были также похожие у обеих агонистов (табл. 1 , которая публикуется в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS , и поддержка Text ) . MCIP1 мРНК до регулируемых ≈ 3 раза по PAMH и PE. Сигнализация PAMH через 5-HT2A/2B рецепторы. После наблюдения за частичным участком серотонина встроенным в структуре PAMH ( рис. 1В ) , мы сравнили эффекты PAMH и серотонина на NRVMs . Серотонин (1 мкМ) не давал наблюдаемых эффектов на рост миоцитов или выражения MCIP1. Эффект наблюдася после добавления к PAMH NRVMs , предполагая, что он действовал на поверхности клетки . Для идентификации рецепторов клеточной поверхности , которые могут опосредовать действия этих веществ, мы проверили эффекты серии агонистов и антагонистов на способность PAMH побудить ANF мРНК в NRVMs (рис. 3а) . Несмотря на схожесть между биологической активностью ПЭ и PAMH , активность PAMH не зависит от антагониста α –адренорецепторов празозина или антагониста β -адренорецепторов пропранолола . В противоположность этому, общий 5 -HT антагонист рецептора ципрогептадин и селективный 5-HT2A/2C антагонист , кетансерин , блокировали индукцию ANF и 28 кДа форму MCIP1 в ответ на PAMH (фиг. 3 А и С). АМИ- 193 и SB204741 , которые выступают в качестве 5-НТ2А и 5 - НТ2В селективных антагонистов , соответственно , у каждого было частичное тормозящее действие на PAMH, в то время как 5-HT2B/2C селективный антагонист , SB206553 , не имел никакого влияния на PAMH деятельность (рис. . 3А) . Кроме того, мы протестировали рецептор- связывающие свойства PAMH путем измерения его способности конкурировать с радиоактивным диэтиламидом лизергиновой кислоты , стандартным лигандом для 5 - HT2B рецепторов в рецепторсвязывающем анализе. PAMH связан с 5 - HT2B рецептором высоким сродством , показывая K I к рецептору 64 нМ (рис. 3б) . В противоположность этому, PAMH не показал никакого заметного связывания с α -адренергическими рецепторами (данные не показаны ). Хотя PAMH связывает 5 HT2B рецептор , SB206553 ингибирует PAMH деятельность, что предполагает, что 2А и 2B рецепторы могут играть перекрывающие роли в передаче PAMH сигналов. Эффекты каждого из указанных выше антагонистов на экспрессию ANF и MCIP1 и на гипертрофию миоцитов и сборку саркомеров в присутствии PAMH были сопоставимы (данные не показаны). Эти данные позволяют предположить, что PAMH действует через 5НТ2А и / или 5 - НТ2В рецепторы, и что MCIP1 и гипертрофия регулируются параллельно PAMH .В целях выявления новых миметиков PAMH или антагонистов , мы сравнили деятельность ряда структурно родственных молекул. Одна из таких молекула , 2- фенил-4- хинолинамин, который мы называем антагонистом PAMH (А- PAMH , на фиг. 1b) , блокировал гипертрофию и индукцию MCIP1 в ответ на PAMH (рис. 3 D и Е ). Анализ PAMH сигнального пути . Чтобы исследовать путь PAMH сигнализации , мы проверили эффекты протеинкиназы и ингибиторов фосфатазы на деятельность PAMH в NRVMs . Гипертрофическая деятельность PAMH был заблокирована стауроспорином , общим ингибитором серина, треонинкиназы , и ингибитором тирозинкиназы AG556 и AG490 (рис. 4) , в то время как ингибиторы РКС ( Gö6983 , бисиндолилмалеимид ) , ПКА ( H89 , HA1004 ) , PKG ( HA1004 и ингибитор PKG ) , фосфатидилинозит -3 -киназы ( вортманнин , LY294002 ) , Раф ( ZM336372 ) , или MEK1 / 2 ( PD98059 ) незначительно или совсем не воздействовали на PAMH деятельность. Торможение кальцинейрина по ЦсА имело лишь частичное влияние на деятельность PAMH . Транскрипция- ответ на PAMH. В свете чувствительности промоутера экзона 4 MCIP1 к сигнализации кальцинейрин / NFAT (15), мы протестировали способствовал ли PAMH ядерной импорт NFAT в NRVMs. PAMH и ПЭ индуцируют транслокацию гибридного белка GFP-NFATc из цитоплазмы в ядро, что позволяет предположить, что они активируют кальциневриновый путь (рис. 5а). Мы также исследовали влияние PAMH по ядерной локализации HDAC5 , который , как и другие HDACs класса II , действует как подавитель гипертрофии сердца ( 7 ) . Гипертрофические сигналы приводят к фосфорилированию двух критических остатков серина в N -концевых регуляторных областях класса II HDACs , что приводит к их экспорту из ядра и дерепрессии гипертрофической программы гена ( 8 ) . Как показано на рис. 5В, слитый белок GFP- HDAC5 был локализован в ядре в стимулированных NRVMs и стал распределен диффузно по всей клеток в присутствии PAMH , предполагая, что PAMH активирует киназа зависимый ядерный экспорт HDAC5 . ЧП также приводит ядерный экспорт GFP- HDAC5 . Экспорт был заблокирован A- PAMH ( данные не представлены) .Чтобы независимо проверить , требуется ли HDAC фосфорилирование для PAMH -опосредованной гипертрофии , мы рассмотрели могут ли устойчивые у сигналам HDAC5 мутанты , содержащие аланины вместо серина 259 и 498 , которые требуются для ядерного экспорта , блокировать активность прогипертрофических PAMH . Действительно, HDAC5 мутанты не показали рост ни в размерах клеток , ни в сборке саркомера в ответ на PAMH ( рис. 5С) . Эти данные позволяют предположить , что гипертрофия в ответ на PAMH требует активации транскрипции генов, которые подавляются HDAC5 , и что PAMH активирует киназы , которые фосфорилируют серины , которые инактивируют HDACs класса II . Обсуждение При химическом скрининге для регуляторов экспрессии MCIP1 , мы определили, что 5-HT2A/2B агонист собладает мощной гипертрофической деятельностью для сердечных мышечных клеток. Этот агонист, называется PAMH , стимулирует промотор гена MCIP1 и способствует гипертрофии миоцитов, по крайней мере частично , через кальцинеурин, что зависит от ядерного импорта NFAT и киназа -зависимого ядерного экспорта HDACs класса II. Сигнализация PAMH через 5-HT2A/2B рецепторы . Мы предполагаем, что PAMH и серотонин имеют частичный фармакофор (рис. 1б) , который направляет деятельность PAMH через 5 - HT2 рецепторы. По сравнению с серией PAMH аналогов, представляется, что конденсированное кольцо циклоалкила является критическим для биологической активности , и что замещение в пиридиновом кольце способствует прогипертрофической активности. Антагонист PAMH , APAMH , в котором отсутствуют конденсированное кольцо циклогексила и модификация PAMH метилированной боковой цепью, не может вызывать гипертрофию, хотя могутт связывать 5-НТ рецепторы ( данные не показаны). PAMH структурно связан с семейством молекул , которые обладают анксиолитической активностью (25), однако, не сообщалось о их потенциальном воздействии на мышечные клетки. Антигипертрофическая активность A- PAMH имеет потенциально серьезные последствия для блокады патологической гипертрофии сердца. В связи с этим, интересно отметить, что кетансерин, как было показано, уменьшает гипертрофию левого желудочка при сохранении сердечной функции у пациентов с артериальной гипертензией (26) , а также 5-НТ антагонист сарпогрелат ослабляет способность гипертрофических агонистов ангиотензина II и эндотелина- 1 стимулировать синтез белка в кардиомиоцитах (27). На основе эффектов 5 HT2 антагонистов на прогипертрофическую деятельность PAMH, мы заключаем, что PAMH является селективным для 5-HT2A/2B рецепторов. Влияние сигнализации рецептора 5 - НТ2В на сердечный рост и развития ( в обзоре . 24 ) . Мыши, лишенные рецептора умирают от истощения миокарда (22) , а избыточная экспрессия рецептора во взрослых сердцах приводит к гипертрофии (23). Примечательно, что серотонин, который также связывает 5 HT2 рецепторы, не способствовал гипертрофии кардиомиоцитов. Это несоответствие в действиях серотонина и PAMH можно объяснить тем, что серотонин неустойчив и быстро разлагается. Кроме того, он может активировать про-и анти- гипертрофические сигнальные пути, в то время как PAMH активирует только прогипертрофические пути. 5-HT2A/2B рецепторы также могут существовать в нескольких состояниях (для обзора см. кат. 28). Путь сигнализации PAMH. Подтипы рецепторов 5- HT2 ( 2А, 2В и 2С ) пара на Gαq/G11 и фосфолипазы С, которые вызывают высвобождение кальция внутриклеточного через инозиттрифосфат и последующую активацию PKC (рис. 6). Сильное ингибирование активности PAMH стауроспорином, но не ингибиторами PKC или других киназ, вовлеченных в гипертрофическую сигнализацию, предполагает, что кальций- зависимые киназы еще не были идентифицированы и могут опосредовать эффекты PAMH. Ингибиторы тирозинкиназы также подавляют PAMH действие. Несколько тирозинкиназ, в том числе SRC , JAK киназы и Erb -B, были вовлечены в передачу сигналов рецепторов 5-НТ (24). Роль тирозинкиназы и их потенциальные цели на пути PAMH сигнализации еще предстоит определить . В отличии от полного подавления PAMH деятельности стауроспорином и ингибиторами тирозинкиназы , CSA ингибирует PAMH деятельность лишь частично . Таким образом, мы предполагаем, что PAMH действует прежде всего через киназа -зависимые пути расширенные для кальциневрина (рис. 6) . Кроме того , неполное ингибирование PAMH деятельности CSA может отражать потенцию, в которой PAMH активирует пути кальциневрина. В соответствии с идеей, что PAMH активирует сигнализацию кальциневрина, он стимулирует ядерный импорт NFAT и активацию NFAT MCIP1 промоутера. Тем не менее, мы также отмечаем, что MCIP1 белок повышается более резко , чем MCIP1 мРНК PAMH . Таким образом, хотя PAMH был определен на основе его способности стимулировать экзон 4 промотора MCIP1 кальциневрина, посттрансляционные механизмы могут также способствовать резкому увеличению MCIP1 белка в присутствии PAMH . 5- HT2 рецепторы активации кальциневрина в нейронах (29). Точно так же, управление сигнальным путем серотонина у C. Элеганс путем активации кальциневринового пути (30), и трансгенная сверхэкспрессия MCIP1 имитирует фенотип с потерей функции кальцинейрина (31) , в соответствии с MCIP функционирует как репрессор сигнализации кальцинеурина. Хотя MCIP1 и CsA может подавлять гипертрофию из-за сигнализации кальцинеурина (18) , они могут не делать это в присутствии PAMH , потому параллельные пути , контролируемые PAMH - зависимых киназ обойти требование кальцинейрина .В дополнение к его влияние на NFAT ядерного импорта , способность PAMH содействовать ядерному экспорту HDAC5 и из сигнала устойчивостью HDAC5 мутанта блокировать гипертрофию в ответ на PAMH предполагает, что PAMH стимулирует активность в HDAC киназы , что инактивирует HDAC5. Вывод поддерживается полной блокадой PAMH деятельности после использования стауроспорина. Как мутантные HDACs подавляют активность PAMH еще предстоит определить , но мы выступаем за возможность того, что они взаимодействуют с усилителем фактора -2 миоцитов или других прогипертрофических транскрипционных факторов , таких как NFAT или GATA4 (32). Последствия. Биологическая активность PAMH предлагает интересные возможности для фармакологической модуляции роста мышц и функции. Помимо влияния на сердечный рост и развитие , передача сигналов рецептора 5 НТ2В способствует выживанию миоцитов и биогенезу митохондрий (33). Недавние исследования также показали, глубокое стимулирующее действие PAMH на развитие скелета мышц (неопубликованные результаты) . Таким образом, путь PAMH сигнализации обеспечивает терапевтические возможности для манипулирования функциями поперечно-полосатых мышц при патологической гипертрофии , сердечной недостаточности, или расстройствах скелетных мышц. Ссылки. ↵ Frey, N. & Olson, E. N. (2003) Annu. Rev. Physiol. 65 , 45-79. CrossRef Medline Web of Science ↵ MacLellan, W. R. & Schneider, M. D. (2000) Annu. Rev. Physiol. 62 , 289-319. CrossRef Medline Web of Science ↵ Olson, E. N. & Williams, R. S. (2000) Cell 101 , 689-692. CrossRef Medline Web of Science ↵ Kannel, W. B. & Cobb, J. (1992) Cardiology 81 , 291-298. Medline Web of Science ↵ Hogan, P. G., Chen, L., Nardone, J. & Rao, A. (2003) Genes Dev. 17 , 2205-2232. FREE Full Text ↵ McKinsey, T. A., Zhang, C. L. & Olson, E. N. (2002) Trends Biochem. Sci. 27 , 40-47. CrossRef Medline Web of Science ↵ Zhang, C. L., McKinsey, T. A., Chang, S., Antos, C. L., Hill, J. A. & Olson, E. N. (2002) Cell 110 , 479-488. CrossRef Medline Web of Science ↵ McKinsey, T. A., Zhang, C. L., Lu, J. & Olson, E. N. (2000) Nature 408 , 106-111. CrossRef Medline ↵ Grozinger, C. M. & Schreiber, S. L. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 , 7835-7840. Abstract/FREE Full Text ↵ Rothermel, B. A., Vega, R. B. & Williams, R. S. (2003) Trends Cardiovasc. Med. 13 , 15-21. CrossRef Medline Web of Science ↵ Kingsbury, T. J. & Cunningham, K. W. (2000) Genes Dev. 14 , 1595-1604. Abstract/FREE Full Text ↵ Rothermel, B., Vega, R. B., Yang, J., Wu, H., Bassel-Duby, R. & Williams, R. S. (2000) J. Biol. Chem. 275 , 8719-8725. Abstract/FREE Full Text ↵ Vega, R. B., Rothermel, B. A., Weinheimer, C. J., Kovacs, A., Naseem, R. H., Bassel-Duby, R., Williams, R. S. & Olson, E. N. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100 , 669-674. Abstract/FREE Full Text ↵ Ryeom, S., Greenwald, R. J., Sharpe, A. H. & McKeon, F. (2003) Nat. Immunol. 4 , 874-881. CrossRef Medline Web of Science ↵ Yang, J., Rothermel, B., Vega, R. B., Frey, N., McKinsey, T. A., Olson, E. N., Bassel-Duby, R. & Williams, R. S. (2000) Circ. Res. 87 , E61-E68. Abstract/FREE Full Text ↵ Molkentin, J. D., Lu, J. R., Antos, C. L., Markham, B., Richardson, J., Robbins, J., Grant, S. R. & Olson, E. N. (1998) Cell 93 , 215-228. CrossRef Medline Web of Science ↵ Kimes, B. W. & Brandt, B. L. (1976) Exp. Cell Res. 98 , 367-381. CrossRef Medline Web of Science ↵ Rothermel, B. A., McKinsey, T. A., Vega, R. B., Nicol, R. L., Mammen, P., Yang, J., Antos, C. L., Shelton, J. M., BasselDuby, R., Olson, E. N., et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98 , 3328-3333. Abstract/FREE Full Text ↵ Hill, J. A., Rothermel, B., Yoo, K. D., Cabuay, B., Demetroulis, E., Weiss, R. M., Kutschke, W., Bassel-Duby, R. & Williams, R. S. (2002) J. Biol. Chem. 277 , 10251-10255. Abstract/FREE Full Text ↵ Genesca, L., Aubareda, A., Fuentes, J. J., Estivill, X., De La Luna, S. & Perez-Riba, M. (2003) Biochem. J. 374 , 567575. CrossRef Medline Web of Science ↵ Wang, Y., De Keulenaer, G. W., Weinberg, E. O., Muangman, S., Gualberto, A., Landschulz, K. T., Turi, T. G., Thompson, J. F. & Lee, R. T. (2002) Am. J. Physiol. 283 , H533-H539. ↵ Nebigil, C. G., Choi, D. S., Dierich, A., Hickel, P., Le Meur, M., Messaddeq, N., Launay, J. M. & Maroteaux, L. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 , 9508-9513. Abstract/FREE Full Text ↵ Nebigil, C. G., Jaffre, F., Messaddeq, N., Hickel, P., Monassier, L., Launay, J. M. & Maroteaux, L. (2003) Circulation 107 , 3223-3229. CrossRef Medline Web of Science ↵ Nebigil, C. G. & Maroteaux, L. (2003) Circulation 108 , 902-908. CrossRef Medline Web of Science ↵ Thompson, M., Forbes, I. T. & Johnson, C. N. (1992) U. S. Patent 5,093,493. ↵ Cobo, C., Alcocer, L. & Chavez, A. (1990) Cardiovasc. Drugs Ther. 4 , 73-36. ↵ Ikeda, K., Tojo, K., Tokudome, G., Hosoya, T., Harada, M. & Nakao, K. (2000) Life Sci. 67 , 2991-2996. CrossRef Medline Web of Science ↵ Strange, P. G. (1999) Biochem. Pharmacol. 58 , 1081-1088. CrossRef Medline Web of Science ↵ Day, M., Olson, P. A., Platzer, J., Striessnig, J. & Surmeier, D. J. (2002) J. Neurophysiol. 87 , 2490-2504. Abstract/FREE Full Text ↵ Lee, M. H., Han, S. M., Han, J. W., Kim, Y. M., Ahnn, J. & Koo, H. S. (2003) FEBS Lett. 555 , 250-256. CrossRef Medline ↵ Bandyopadhyay, J., Lee, J., Lee, J. I., Yu, J. R., Jee, C., Cho, J. H., Jung, S., Lee, M. H., Zannoni, S., Singson, A., et al. (2002) Mol. Biol. Cell 13 , 3281-3293. Abstract/FREE Full Text ↵ Suzuki, Y. J., Day, R. M., Tan, C. C., Sandven, T. H., Liang, Q., Molkentin, J. D. & Fanburg, B. L. (2003) J. Biol. Chem. 278 , 17525-17531. Abstract/FREE Full Text ↵ Nebigil, C. G., Etienne, N., Messaddeq, N. & Maroteaux, L. (2003) FASEB J. 17 , 1373-1375. Abstract/FREE Full Text Переведено проектом МОЙМИО: www.mymio.org Оригинал статьи: http://www.pnas.org/content/101/9/2870.long
