Методические рекомендации - Дагестанская государственная

Министерство образования и науки РФ
ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» МЗ РФ
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Методические разработки к практическим занятиям по
иммунологии для студентов лечебного и педиатрического
факультетов
Махачкала 2013
Составители: Саидов М.С. – зав.кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии,
к.м.н., доцент; д.б.н., проф. Омарова С.М., к.м.н., доценты - Царуева Т.В.,Гаджиева А.Д.,
к.м.н., ассистенты Алиева А.И., Саидова Б.М., Исаева Р.И.
Рецензент: зав. кафедрой патологической физиологии д.м.н., профессор Саидов М.З.
Пособие рекомендовано ЦК МС ДГМА для использования в учебном процессе (протокол
№_____ от «___»_________________2013г.)
2
Занятие № 1
Тема: Иммунитет. Виды иммунитета. Врожденный иммунитет. Клеточные факторы.
Фагоцитоз.
Цель занятия: Изучить виды иммунитета, механизмы и факторы неспецифической
резистентности.
Вопросы обсуждения:
1.
Современное понятие иммунитета.
2.
Виды иммунитета.
3.
Врожденный иммунитет(неспецифическая резистентность). Факторы.
4.
Клеточные факторы врожденногоиммунитетаНР.
5.
Фагоцитоз. Стадии фагоцитоза.
6.
Незавершенный фагоцитоз.
7.
Фагоцитарная активность, фагоцитарное число их определение.
8.
Естественные киллеры, их функция в организме.
Самостоятельная работа студентов:
1.
Составить таблицу – «Виды иммунитета»
2.
Определение фагоцитарной активности в готовых препаратах (подсчет
фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя)
3.
Изучить незавершенный фагоцитоз по готовым препаратам.
Методические указания к самостоятельной работе:
Определение фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя invitro
Техника постановки: в небольшую пробирку наливают последовательно
микропипеткой 0,05мл 2% р-ра цитрата натрия, 0,1мл испытуемой крови и 0,05мл 2миллиардной взвеси S. Aureus (штамм 209). Тщательно перемешивают и выдерживают
30мин. При 37ºС. После этого содержимое пробирки вновь перемешивают и готовят из
него тонкие мазки, которые фиксируют метанолом или смесью Никифорова и
окрашивают по Романовскому-Гимзе в течении 20 – 30 минут.
Препараты микроскопируют, передвигая мазок в одном направлении,
подсчитывают число фагоцитированных бактерий в 50 лейкоцитах. Исходя из этого
определяют среднее количество фагоцитированных бактерий на один лейкоцит.
Изучение незавершенного фагоцитоза в препаратах из отделяемого уретры
больного гонореей. Результаты записать в тетрадь.
Мазки фиксируют на пламени горелки и окрашивают по Грамму (или метиленовой
синькой). При микроскопии мазков отмечают наличие грамотрицательных диплококков,
расположенных внутри фагоцитов (лейкоцитов). Зарисовать в тетради.
Расчет показателей фагоцитоза
1.
Процент фагоцитирующих нейтрофилов (% фагоцитоза) – считают процент клеток,
вступивших в фагоцитоз, от общего количества посчитанных нейтрофилов. В норме
процент фагоцитоза у взрослых -60-90%, у детей – 30-65%.
2.
Фагоцитарное число – это среднее количество поглощенных бактерий или частиц
на 1 клетку (полиморфно – ядерный лейкоцит).
В норме фагоцитарное число после 30 мин инкубации составляет 4,57,5.
3.
Показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - оценивают переваривающую
функцию нейтрофилов. Это отношение количества переваренных микробов к общему
числу поглощенных микробов (переваренных и непереваренных), выраженное в
процентах. Норма для взрослых - 64 – 72%.
4.
Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ). В норме через 30 мин начинается
переваривание поглощенных микроорганизмов нейтрофилами, через 2 ч. оно должно
закончиться. Поэтому процент фагоцитирующих нейтрофилов и среднее число
поглощенных микроорганизмов после 2-часовой экспозиции меньше, чем после 30 –
3
минутной, а ИЗФ - больше 1,0, что указывает на завершенность фагоцитоза. ИЗФ меньше
1, 0 свидетельствует о сниженной киллерной функции нейтрофилов.
ИЗФ – среднее число поглощенных микроорганизмов через 30 мин/ среднее число
поглощенных микроорганизмов через 120 мин.
Занятие № 2.
Тема: Врожденный иммунитет. Клеточные и гуморальные факторы неспецифической
резистентности организма.
Цель занятия: Изучить клеточные и гуморальные факторы неспецифической
резистентности организма.
Вопросы обсуждения:
1. Врожденный иммунитет. Внешние и внутренние барьеры неспецифической
резистентности организма.
2. Клеточные и гуморальные факторы врожденного иммунитета.
3. Что такое лизоцим? Методика определения лизоцима в слюне
4. Комплемент, пути активации комплемента.
5. Интерферон, острофазные белки сыворотки крови.
6. Воспаление, признаки воспаления.
Самостоятельная работа студентов:
1. Определить титр лизоцима в слюне по демонстрационному материалу
2. Разобрать схему классического и альтернативного путей активации комплемента.
(табл.)
3. Поставить опыт по определению бактерицидного действия кожи
4. Изучить комплементарную активность сыворотки крови по демонстрационному
материалу.
Методические указания к самостоятельной работе
1.
Определение титра лизоцима в слюне
Лизоцим представляет собой термостабильный белок типа муколитического фермента. Он
содержится в тканевых жидкостях животных и человека –в слезах, слюне, перитонеальной
жидкости, плазме, сыворотке крови, лейкоцитах, материнском молоке и др.
Лизоцим продуцируется моноцитами крови и тканевыми макрофагами. Он вызывает
лизис бактерий, но не активен в отношении вирусов.
Для определения титра готовят ряд последовательных разведений слюны в пробирках, в
каждую из которых вносят по 1 мл. суспензии суточной культуры Micrococcuslisodecticus,
содержащей 1 млрд/мл микробных тел.
(табл)
Протокол определения действия лизоцима слюны на
Micrococcuslisodecticus
Титр
1:2
1:4
1:8
1:16
Кс
Кф
Кк
1
1,0
2
3
4
Слюна
5
1,0
6
_
7
_
Физ. раствор
1,0
1,0
1,0
1,0
_
1,0
_
Взвесь
культуры
Mlisodecticus
суточной 1,0
1,0
1,0
1,0
_
_
1,0
Ингредиенты
4
Примечание: Из 4- пробирки 1,0 мл вылить в банку с дезраствором.
После инкубации в термостате в течение 3 ч определяют титр лизоцима по последнему
разведению, в котором наблюдается полный лизис бактерий – просветление. Более
точную оценку активности лизоцима можнопроводить, измеряя спектрофотометрическим
методом изменение оптической плотности микробной взвеси после инкубации ее с
разведениями лизоцима. Пользуясь калибровочными кривыми или специальными
таблицами, активность лизоцима можно выразить в мкг/мл. Уровень содержания
лизоцима в слюне здоровых людей колеблется от 50 до 70 мкг/мл.
2.
Определение бактерицидного действия кожи
Важным фактором неспецифической резистентности является функция кожи как
механического барьера для внедрения паразита. Отторжение верхних слоев эпидермиса,
секреты сальных и потовых желез способствуют их удалению с поверхности кожи.
Существенную роль в элиминации микробов с поверхности кожи играют различные
микробоцидные субстанции (молочные и жирные кислоты и др.), обеспечивающие ее
«самоочищение». Поэтому различные микроорганизмы, не являющиеся ее постоянными
обитателями, не могут в течение продолжительного времени сохраняться на коже.
Бактерицидность кожных секретов зависит от их кислотности.
Для определения бактерицидной активности кожи суточную бульонную культуру
кишечной палочки (1:50000) наносят на внутреннюю поверхность предплечья и
распределяют равномерно шпателем. Делают отпечаток на предметное стекло со средой
Эндо с одного участка исследуемой кожи, а через 15 минут - со смежного. Инкубируют
посевы 18-24 часа при 37°С и подсчитывают колонии на 3 см2 поверхности каждой
пластины.
Индекс бактерицидности (ИБ) вычисляют по формуле:
ИБ=К1-К2х100
К1
где K l - количество колоний сразу после нанесения на кожу, К 2 - количество колоний
через 15 минут после контакта.
У здоровых людей ИБ равен 90-100%
3.
Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК)
Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) является показателем естественной
способности крови к самоочищению. В 1886 г. Высокович обнаружил, что различные
бактерии, введенные в кровь кроликов и собак, не удаляются из организма
выделительными органами, если эти микробы не повреждены. Исчезновение их из
организма связано с наличием в сыворотке особых веществ, убивающих и растворяющих
микробные клетки. Бактерицидное действие сыворотки крови распространяется как на
грамположительные, так и на грамотрицательные бактерии.
Методика:
Из 18-ти часовой культуры кишечной палочки методом серийных разведений готовят
рабочую концентрацию до 40-50 тыс. м. т. в 1 мл. Рабочую взвесь тест-микробов в
количестве 0,1 мл высевают на чашку Петри с МПА. Шаблоном диаметром 20 мм по
поверхности агара с культурой микроорганизмов делают отверстия (в центре и по
периферии отмечают контрольные отверстия, на которые не наносится испытуемая
сыворотка). На каждую площадку с посевом тест-культуры наносят пипеткой 0,05 мл
исследуемой сыворотки. Через 24 часа инкубации в условиях термостата проводят
подсчет выросших колоний, как на опытных, так и на контрольных площадках.
Бактерицидную активность сыворотки крови рассчитывают по формуле:
5
БАСК(%) =100х(1- конечное количество жизнеспособных бактерий)
исходное количество бактерий
Нормативное значение - 80 - 90%
Занятие № 3
Тема:Иммунная система. Иммунокомпетентные клетки. Происхождение Т и В лимфоцитов, их
функциональное значение в иммунных реакциях.
Цель занятия: Изучить свойства иммунокомпетентных клеток и их взаимосвязь в
иммунном ответе. Познакомиться с тестами определения Т и В лимфоцитов.
Вопросы обсуждения:
1. Центральные и периферические органы иммунитета.
2. Принцип организации иммунной системы.
3. Генез (развитие и дифференцировка) лимфоцитов и их значение в формировании
клеточного и гуморального иммунитета.
4. Понятие о предшественниках Т- и В- лимфоцитов.
5. Сходство и различие Т- и В- лимфоцитов.
6. Рециркуляция лимфоцитов.
7. Понятие об иммунном ответе, его формы.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение препаратов со спонтанным
розеткообразованием - определение
количества Т-лимфоцитов (определить % Е - РОК)
2. Изучение бласттрансформации лимфоцитов под влиянием ФГА для определения
функциональной активности Т-лимфоцитов (определить % бластов).
3. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.
4. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Иммунологические методы диагностики - методы исследования иммунного статуса
организма; применяются в педиатрии, акушерстве и гинекологии. Ныне принят
двухэтапный метод оценки функционирования иммунной системы. На 1-м этапе
выявляются обобщённые характеристики В- и T-систем иммунитета и фагоцитоза. К
иммунологическим тестам 1-го уровня относят определение: 1) абсолютного и
относительного числа лимфоцитов в периферической крови; 2) абсолютного и
относительного числа Т- и В-лимфоцитов в крови; 3) концентрации сывороточных
иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA); 4) фагоцитарной активности нейтрофилов.
Сведения об абсолютном и относительном числе лимфоцитов являются интегральным
показателем функционирования иммунной системы. Для определения Т-лимфоцитов
используют реакцию спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Ерозеткообразование), В-лимфоцитов - реакцию розеткообразования с эритроцитами
барана, несущими на своей поверхности комплекс антитело-комплемент (ЕАСрозеткообразование). Возможно также определение В-лимфоцитов методом
спонтанногорозеткообразования с эритроциами мыши. К-во IgM, IgG, IgA чаще всего
оценивается методом радиальноиимму-нодиффузии по Манчини. При различных
заболеваниях наблюдаются стереотипные колебания уровня Т- и В-лимфоцитов,
иммуноглобулинов, которые во многом сходны и лишены специфичности, т. к. связаны не
с непосредственным этиологическим фактором, а со стрессовой реакцией организма на
болезнь. Динамика уровней иммуноглобулинов, Т- и В-клеток очень важна для выявления
больных с иммунологической недостаточностью, определения влияния на иммунную
систему тех или иных лекарственных средств.
6
О функциональной активности Т- и В-лимфоцитов судят по реакции бластной
трансформации (РБТЛ) с использованием митогена - фитогемагглютинина (ФГА).
Реакция бласттрансформации характеризует способность лейкоцитов к трансформации и
размножению под воздействием антигенов, аллергенов и митогенов.
Пролиферативный ответ лимфоцитов на антигены даёт представление о выраженности
специфической сенсибилизации организма.
Реакция бласттрансформации применяется для комплексной оценки иммунного статуса
больного.
Метод определения реакции бласттрансформации
Микроскопия.
Нормальные пределы реакции бласттрансформации
Для РБТЛ с ФГА: 50-70%
Для РБТЛ с антигеном: отрицательный
Материал для анализа реакции бласттрансформации
Плазма крови.
Забор крови осуществляется в пробирку с гепарином. Кровь должна быть доставлена в
лабораторию в течение 2 часов.
Подготовка пациента к реакции бласттрансформации
Забор крови осуществляют в утренние часы натощак. Накануне исследования и в день
забора крови исключить жирную пищу.
Факторы, влияющие на реакцию бласттрансформации
Снижают: цитостатики, иммунодепрессанты, кортикостероиды, облучение ионизирующей
радиацией.
Расшифровка анализов
РБТЛ с ФГА
Повышение: гиперактивность иммунной системы при аллергических и аутоаллергических
заболеваниях, активация антитрансплантационного иммунитета, острый период
первичной инфекции, иммунный ответ на тимусзависимые антигены.
Снижение: онкологические заболевания, вторичные иммунодефициты, первичные
иммунодефициты, СПИД, тяжёлые вирусные инфекции, тяжёлые ожоги, травмы.
РБТЛ с антигеном:
Наличие пролиферативного ответа лимфоцитов на определенный антиген даёт
представление о наличии и выраженности специфической сенсибилизации организма.
Занятие № 4
Тема: Антигены, их классификация. Главный комплекс гистосовместимости, строение и
функция.
Цель занятия: Изучить антигены, их классификацию, центральные и периферические
органы иммунной системы.
Вопросы для обсуждения:
1. Антигены, их свойства. Полноценные и неполноценные антигены.
2. Антигенная структура микробов. Протективные антигены. Гетерогенные антигены.
3. Антигены организма человека и животных (опухолевые, аутоантигены, изоантигены,
антигены главного комплекса гистосовместимости).
4. Иммунная система организма взрослого и ребенка: организация и функции.
5. Что такое антиген? Дайте определение. Какова химическая природа антигенов.
6.Дайте понятие чужеродности, антигенности, иммуногенности, специфичности
антигена.
7. Что такое антигенная детерминанта? Дайте определение валентности антигена.
8. Чем обусловлены особенности химического строения антигенов?
7
9. Что такое гаптен? Приведите примеры.
10. Укажите виды антигенной специфичности?
11. Назовите изоантигены человека: эритроцитарные, лимфоцитарные, тромбоцитарные.
12. Что такое тимусзависимые и тимуснезависимые антигены? Приведите примеры.
13. Когда возникают аутоантигены? Что это за антигены?Понятие иммунитета. Виды и
формы иммунитета.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение препаратов
2. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.
3. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Антигены – это высокомолекулярные соединения. При попадании в организм вызывают
иммунную реакцию и взаимодействуют с продуктами этой реакции: антителами и
активированными лимфоцитами.
Классификация антигенов.
1. По происхождению:
1) естественные (белки, углеводы, нуклеиновые кислоты, бактериальные экзо– и
эндотоксины, антигены клеток тканей и крови);
2) искусственные (динитрофенилированные белки и углеводы);
3) синтетические (синтезированные полиаминокислоты, полипептиды).
2. По химической природе:
1) белки (гормоны, ферменты и др.);
2) углеводы (декстран);
3) нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК);
4) конъюгированные антигены (динитрофенилированные белки);
5) полипептиды (полимеры a-аминокислот, кополимерыглутамина и аланина);
6) липиды (холестерин, лецитин, которые могут выступать в роли гаптена, но,
соединившись с белками сыворотки крови, они приобретают антигенные свойства).
3. По генетическому отношению:
1) аутоантигены (происходят из тканей собственного организма);
2) изоантигены (происходят от генетически идентичного донора);
3) аллоантигены (происходят от неродственного донора того же вида);
4) ксеноантигены (происходят от донора другого вида).
4. По характеру иммунного ответа:
1) тимусзависимые антигены (иммунный ответ зависит от активного участия Тлимфоцитов);
2) тимуснезависимые антигены (запускают иммунный ответ и синтез антител В-клетками
без Т-лимфоцитов).
Выделяют также:
1) внешние антигены; попадают в организм извне. Это микроорганизмы,
трансплантированные клетки и чужеродные частицы, которые могут попадать в организм
алиментарным, ингаляционным или парентеральным путем;
2) внутренние антигены; возникают из поврежденных молекул организма, которые
распознаются как чужие;
3) скрытые антигены – определенные антигены (например, нервная ткань, белки
хрусталика и сперматозоиды); анатомически отделены от иммунной системы
гистогематическими барьерами в процессе эмбриогенеза; толерантность к этим молекулам
не возникает; их попадание в кровоток может приводить к иммунному ответу.
Иммунологическая реактивность против измененных или скрытых собственных антигенов
возникает при некоторых аутоиммунных заболеваниях.
Свойства антигенов:
1) антигенность – способность вызывать образование антител;
8
2) иммуногенность – способность создавать иммунитет;
3) специфичность – антигенные особенности, благодаря наличию которых антигены
отличаются друг от друга.
Гаптены – низкомолекулярные вещества, которые в обычных условиях не вызывают
иммунной реакции, но при связывании с высокомолекулярными молекулами приобретают
иммуногенность. К гаптенам относятся лекарственные препараты и большинство
химических веществ. Они способны вызывать иммунный ответ после связывания с
белками организма.
Антигены или гаптены, которые при повторном попадании в организм вызывают
аллергическую реакцию, называются аллергенами.
2. Антигены микроорганизмов
Инфекционные антигены – это антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших.
Существуют следующие разновидности бактериальных антигенов:
1) группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства);
2) видоспецифические (встречаются у различных представителей одного вида);
3) типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары, антигеновары –
внутри одного вида).
В зависимости от локализации в бактериальной клетке различают:
1) О – АГ – полисахарид; входит в состав клеточной стенки бактерий. Определяет
антигенную специфичность липополисахарида клеточной стенки; по нему различают
сероварианты бактерий одного вида. О – АГ слабо иммуногенен. Он термостабилен
(выдерживает кипячение в течение 1–2 ч), химически устойчив (выдерживает обработку
формалином и этанолом);
2) липид А – гетеродимер; содержит глюкозамин и жирные кислоты. Он обладает сильной
адьювантной, неспецифической иммуностимулирующей активностью и токсичностью;
3) Н – АГ; входит в состав бактериальных жгутиков, основа его – белок флагеллин.
Термолабилен;
4) К – АГ – гетерогенная группа поверхностных, капсульных антигенов бактерий. Они
находятся в капсуле и связаны с поверхностным слоем липополисахарида клеточной
стенки;
5) токсины, нуклеопротеины, рибосомы и ферменты бактерий.
Антигены вирусов:
1) суперкапсидные антигены – поверхностные оболочечные;
2) белковые и гликопротеидные антигены;
3) капсидные – оболочечные;
4) нуклеопротеидные (сердцевинные) антигены.
Все вирусные антигены Т-зависимые.
Протективные антигены – это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые
вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного
инфицирования данным возбудителем.
Пути проникновения инфекционных антигенов в организм:
1) через поврежденную и иногда неповрежденную кожу;
2) через слизистые оболочки носа, рта, ЖКТ, мочеполовых путей.
Гетероантигены – общие для представителей разных видов антигенные комплексы или
общие антигенные детерминанты на различающихся по другим свойствам комплексах. За
счет гетероантигенов могут возникать перекрестные иммунологические реакции.
У микробов различных видов и у человека встречаются общие, сходные по строению
антигены. Эти явления называются антигенной мимикрией.
Суперантигены – это особая группа антигенов, которые в очень малых дозах вызывают
поликлональную активацию и пролиферацию большого числа Т-лимфоцитов.
Суперантигенами являются бактериальные энтеротоксины, стафилококковые, холерные
токсины, некоторые вирусы (ротавирусы).
9
Занятие № 5
Тема: Антиген-представляющие клетки, характеристика, основные свойства. Механизмы
презентации антигена молекулами МНС IиIIклассов.
Цель занятия: Изучить антигены-представляющие клетки, дать им характеристику и
определить свойства.
Вопросы для обсуждения:
1. Понятие о генах и антигенах гистосовместимости. HLA система человека.
Номенклатура,генная организация (гены классов I, II,III).
2. Антигены классов I и III, их роль в межклеточных взаимодействиях, в представлении
антигена
Т-лимфоцитам, в феномене двойного распознавания.
3. Понятие HLA фенотипа, генотипа, гаплотипа. Особенности наследования.
Самостоятельная работа студентов:
1. Методы исследования и типирования HLA системы: серологические,
клеточноопосредованные, генные (полимеразная цепная реакция, зонды ДНК).
2. Практические аспекты типирования HLA антигенов. HLA в популяциях, биологическое
значение.
3. HLA и заболевания человека, механизмы ассоциации. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Главный
комплекс
гистосовместимости
ГКГС
(англ.
МНС
–
MajorHistocompatibilityComplex)представляет собой систему генов, контролирующих
синтез антигенов, которые определяютгистосовместимость тканей при пересадках
органов и индуцируют реакции, вызывающие отторжениетрансплантатов. Поверхностные
структуры цитомембраны клеток, индуцирующие реакцииотторжения, получили название
антигенов гистосовместимости, а кодирующие их гены были названыгенами
гистосовместимости
–
Н-генами
(Histocompatibility).
Открытие
антигенов
гистосовместимостипослужило основой развития трансплантационной иммунологии.
В последующем было доказано, что главный комплекс гистосовместимости является
основной генетической системой, определяющей функционирование иммунной
системы и,прежде всего Т-системы иммунитета. ГКГС регулирует иммунный ответ,
кодирует способностьраспознавать «своё» и «чужое», отторгать чужеродные клетки,
способность синтезировать рядмолекул иммунной системы. Он определяет
предрасположенность человека к ряду болезней (диабет,злокачественные опухоли,
артриты, амилоидоз, болезни сердечно-сосудистой системы, почек и др.).
Трансплантационные
антигены
имеются
(экспрессируются)
на
поверхности
всехядросодержащих клеток. Но их количество в различных тканях неодинаково. У
человека наибольшееих количество содержится в лимфоидной ткани (на лимфоцитах и
макрофагах). Другие клеткиорганов по убывающей на них концентрации антигенов МНС
располагаются в следующем порядке:печень, легкие, кишки, почки, сердце, желудок,
аорта, мозг.
Совсем не обнаруживаются классические антигены системы HLA в жировой ткани и на
эритроцитах, а так же на нейронах и клетках трофобласта.
У человека главная система гистосовместимости получила название HLA-система
(HumanLeukocyteAntigens). Это система генов, контролирующих синтез антигенов
гистосовместимости. Онасостоит из трех регионов расположенных на коротком плече 6-й
хромосомы. Эти регионы носятназвание: класс 1, класс 2, класс 3 (класс I, класс II, класс
III).В состав региона входят гены илилокусы. В названии каждого HLA-гена присутствует
буквенное обозначение локуса (А, В, С) ипорядковый номер, например: HLA-A3, HLAB27, HLA-C2 и т.д. Одноименное обозначение имеют иантигены, кодируемые геном. В
локусе D выявлено 3 сублокуса (DP, DQ, DR). (Смотри схемурасположенную выше). В
10
утвержденном ВОЗ списке насчитывается 138 антигенов HLA. (Однакоиспользование
ДНК-типирования, т.е. возможности изучать сами гены, привело к выявлениюбуквально в
последние годы более 2000 аллелей).
Занятие № 6
Тема: Эндогенные иммуннорегуляторы. Гармоны, цитокины, их роль в иммунитете.
Цель занятия:Изучить характеристику гормонов и пептидов иммунной системы.
Вопросы для обсуждения:
1. Понятие о системе гормонов и цитокинов.
2. Общая характеристика гормонов и пептидов тимуса, костного мозга.
3. Классификация (интерлейкины, интерфероны, колониестимулирующие факторы,
факторы роста, хемокины, факторы некроза опухоли).
4. Цитокины про- и противовоспалительной природы. Роль цитокинов Th1 и Th2
клеток в регуляции дифференцировки и репарации в норме и при патологии.
5. Цитокины и апоптоз. Цитокинзависимая иммунопатология. Цитокины как
лекарственные средства.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение препаратов
2. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.
3. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Цитокинами принято называть обширное семейство биологически активных пептидов,
обладающих гормоноподобным действием, обеспечивающих взаимодействие клеток
иммунной, кроветворной, нервной и эндокринной систем. В отличие от гормонов,
поддерживающих гомеостатический баланс, цитокины обеспечивают ответную реакцию
на внедрение чужеродных тел, иммунное повреждение, а также воспаление, репарацию и
регенерацию. Многие исследователи рассматривают цитокины как «микроэндокринную
систему».
Цитокины
являются
необходимыми
медиаторами
межклеточного
взаимодействия. Они формируют сеть коммуникационных сигналов между клетками
иммунной системы и клетками других органов и тканей.
Цитокины впервые были описаны как полипептидные факторы, обусловливающие
взаимодействие клеток иммунной системы. Эти медиаторы, секретируемые лимфоцитами
и моноцитами, получили название соответственно «лимфокины» и «монокины». Позднее,
когда было обнаружено, что подобные или идентичные белковые медиаторы могут
секретировать не только иммунокомпетентные, но и другие клетки, эти молекулы стали
называть цитокинами. В последние годы появился еще один термин «эндогенные
иммуномодуляторы»,
объединяющий
интерлейкины,
лимфокины,
монокины,
интерфероны, гормоны тимуса, цитотоксические и супрессорные факторы.
Следовательно, последний термин имеет более широкое смысловое значение, чем понятие
«цитокины».
Классификация и общие свойства цитокинов. Универсальное определение цитокинов
отсутствует, тем не менее они рассматриваются как полипептиды и белки, которые
обеспечивают развитие воспаления и иммунного ответа. Цитокины секретируются не
всегда. В некоторых случаях они могут экспрессироваться на поверхности
стимулированных клеток. Однако независимо от того, секретируются цитокины или
только экспрессируются, все они обладают некоторыми общими свойствами:
— синтезируются в процессе реализации механизмов неспецифического или
специфического иммунитета;
11
— связываются со специфическими рецепторами на клетках—мишенях;
— проявляют свою активность при низких концентрациях (порядка 10—11 моль/л);
— не обладают ферментативной активностью или химической реактивностью;
— действуют опосредованно, изменяя функциональное состояние клеток—мишеней с
помощью вторичных мессенджеров (от англ. messenger — вестник, посыльный);
— оказывают аутокринное (на клетку—продуцент), паракринное (на соседние с клеткой—
продуцентом клетки) и дистантное (на клетки удаленных на значительное расстояние
органов и тканей) действие;
— служат медиаторами иммунной и воспалительной реакций;
— действуют как факторы роста и факторы дифференцировки клеток (при этом вызывают
преимущественно медленные клеточные реакции, требующие синтеза новых белков);
— образуют регуляторную сеть, в которой отдельные элементы обладают синергическим
или антагонистическим действием;
— обладают полифункциональной активностью и перекрывающимися функциями.
Лейкоциты являются источниками цитокинов, в то же время — и мишенью для них. В
связи с этим многие из цитокинов получили название «интерлейкинов».
Классификация цитокинов до определенного времени была бессистемной. Некоторые из
них первоначально назвали по их доминирующему биологическому действию. С 1976 г.,
когда был открыт ИЛ2, описано более 20 иммунологически активных цитокинов,
оказывающих различное действие на иммунную систему в условиях invitro. Некоторые
цитокины имеют не интерлейкиновую номенклатуру, а свое первоначальное название,
например, ФНО (фактор некроза опухолей), КСФ (колониестимулирующие факторы),
OSM (онкостатин М), LIF (фактор, ингибирующий лейкозные клетки), NGF (фактор роста
нервов), CNTF (цилиарный нейротрофический фактор). Различные цитокины могут быть
сгруппированы в 5 обширных классов, объединенных по их доминирующему
биологическому действию: 1) воспалительные; 2) антивоспалительные; 3) факторы,
вызывающие
рост
и
дифференцировку
лимфоцитов;
4)
гемопоэтические
колониестимулирующие факторы; 5) факторы, вызывающие рост мезенхимальных клеток.
В большинстве случаев регуляторная функция цитокинов осуществляется в местах
проникновения или концентрации патогенных агентов и сводится к вовлечению клеток
близлежащих тканей и крови в процесс элиминации чужеродного агента, обеспечивая
иммунные и воспалительные реакции. В критические моменты, когда местная
воспалительная реакция оказывается несостоятельной, цитокины появляются в крови и
разносятся кровотоком в различные органы и ткани, знаменуя начало острофазового
ответа организма. Иммунный процесс, воспаление и острофазовый ответ характеризуются
множеством хорошо известных проявлений: лихорадкой, похуданием, сонливостью,
потерей аппетита, лейкоцитозом, появлением в крови белков острой фазы, активацией
гипофизадреналовой системы (стрессорная реакция), болевым синдромом и т. д. Все или
большинство из них являются результатом действия цитокинов.
Механизмы действия цитокинов. Влияние цитокина осуществляется путем его
взаимодействия со специфическим мембранным рецептором клетки—мишени. В
большинстве случаев рецепторы для цитокинов представлены одной двумя или тремя
12
пептидными или гликопротеидными цепями, встроенными в клеточную мембрану. При
этом цитокин взаимодействует с внешней, экстрацеллюлярной, частью рецептора. Сигнал
отакого рода взаимодействии передается внутрь клетки интрацеллюлярной частью
рецептора, которая обладает ферментативной активностью. Эффективность действия
рецептора зависит от его аффинности, т. е. от того, какое минимальное количество
лиганда необходимо для образования прочного комплекса и, как следствие, для передачи
специфического сигнала внутрь клетки.
Рецепторы цитокинов обнаруживаются на различных типах клеток. Связывание цитокина
с рецептором приводит к экспрессии генов и последующему синтезу молекул,
характерных для данного типа клеток. Большинство генов могут экспрессироваться под
действием нескольких цитокинов, взаимодействующих со своими индивидуальными
клеточными рецепторами. При этом возможны различные варианты таких
взаимодействий.
Занятие №7
Тема: Гуморальный и клеточный иммунный ответ. Антитела. Классы иммуноглобулинов.
Количественное определение иммуноглобулинов.
Цель занятия:Изучить основные механизмы взаимодействия клеток иммунной системы
(межклеточная кооперация) при специфическом иммунном ответе гуморальном и
клеточном. Изучить природу, строение, структурно-функциональные особенности
иммуноглобулинов различных классов, методы их определения.
Вопросы для обсуждения:
1. В чем заключается механизм клеточного иммунитета и гуморального иммунного
ответа.
2. Назовите иммунокомпетентные клетки – антиген представляющие, регуляторные
(индукторные), эффекторные.
3. МНС 1 класса и МНС II класса. На каких клетках они экспрессируются?
4. Что такое СД-антигены? Роль основных СД-маркеров – СД1, СД2, СД3, СД4, СД8.
5. Назовите основные этапы иммунологического ответа по гуморальному типу с
участием Т-хелперов.
6. Назовите основные этапы иммунологического ответа по клеточному типу.
7. Что представляют собой антитела, какова структура молекулы антител?
8. Дайте характеристику пяти классов иммуноглобулинов. Какой класс Yg синтезируется
первыми при иммунном ответе, реакции агглютинации?
9. Какие ингредиенты необходимы для постановки РПГА? Что представляет собой
эритроцитарныйдиагностикум?
10. Как готовят О-диагностику м и Н-диагностикум?
11. Как готовят поливалентные и моновалентные диагностические сыворотки?
12. Антитела. Структура, классы иммуноглобулинов, возрастная динамика. Защитная
функция антител при инфекциях.
13. Возрастные особенности иммуногенеза: Особенности иммуногенеза у пожилых.
14. Характеристика иммунокомпетентных клеток Т и В лимфоцитов, макрофагов.
15. Иммунологические тесты для количественной и функциональной оценки Т и В
лимфоцитов (спонтанное и комплементарное розеткообразование).
Самостоятельная работа студентов:
1. Пользуясь таблицей, зарисуйте схему молекулы иммуноглобулина, обозначьте на
рисунке основные структуры: Н – и L– цепи, Fab, домены, шунт, Fc-фрагмент.
2. Зарисуйте схему иммунологического ответа по гуморальному типу с участием Тхелперов и без участия Т-хелперов.
3. Зарисуйте схему иммунологического ответа по клеточному типу.
13
4. Зарисуйте в тетради схему реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини,
поставьте эту реакцию по демонстрационной чашке, оцените результаты реакции,
дайте заключение.
Методические указания к самостоятельной работе
Цели применения серологических реакций в лабораторной диагностике
1.Идентификация вида АГ при помощи известных АТ.
Ингредиенты: а) неизвестный АГ – микроорганизмы (также токсины, белки крови, клетки
разных органов), б) известные АТ – иммунные диагностические сыворотки.
2. Определение АТ в сыворотке крови (или в других биологических жидкостях) при
помощи известного АГ – серологическая диагностика.
Ингредиенты:
а) исследуемая сыворотка
б) диагностикум – стандартный препарата с известным антигеном.
Методы постановки реакции агглютинации
1. РА на стекле (ориентировочная)
2. РА развернутая (в пробирках).
Ориентировочная реакция агглютинации на стекле.
Идентификация вида дизентерийных бактерий при бактериологической диагностике
дизентерии.
Развернутая реакция агглютинации. Серологическая диагностика брюшного тифа –
реакция Видаля.
Реакция пассивнойимагглютинации (РПГЛ) или
реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
№
Титры
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
КС
КАГ
0,9
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,1
0,5
Ингредиенты
1.
2.
Физ.раствор
Исследуемая сыворотка
3
Эритроцитаридиагностикум
0,5
Учет результатов
Заключение
Занятие № 8
Тема:Серологическая диагностика инфекционных болезней. Реакция агглютинации, ее
вариантны. РПГА.
Цель занятия:Изучить практическое применение серологических реакций (реакций АГ +
АТinvitro) в лабораторной диагностике инфекционных, также аутоиммунных,
эндокринных и других) заболеваний. Изучить различные методы постановки реакции
агглютинации.
Вопросы для обсуждения:
1.
С какой целью применяют серологические реакции при лабораторной диагностике
заболеваний?
2.
Назовите виды серологических реакций. Простые двухкомпонентные реакции и
сложные многокомпонентные реакции.
3.
Физико-химический механизм РА (образование комплекса по типу решетки).
4.
Какие ингредиенты участвуют в реакции агглютинации с целью идентификации
антигена? Что представляет собой диагностическая сыворотка?
14
5.
Какие ингредиенты необходимы для обнаружения АТ в исследуемой сыворотке.
Что такое диагностикум?
6.
Что такое титр диагностической сыворотки, что такое диагностический титр
серологической реакции.
7.
Какие вы знаете два способа постановки и какиеIg передаются плоду через
плаценту?
8.
Что такое цитокины (интерлейкины)?
9.
Что такое афинность, авидность, валентность антител?
Самостоятельная работа студентов:
1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле для определения
вида микроба. Зарисовать в тетради схему реакции, по результатам реакции дать
заключение.
2. Составить схему постановки развернутой реакции агглютинации.
3. Поставить развернутую реакцию агглютинации с исследуемой сывороткой.
4. Произвести учет развернутой
реакции агглютинации (демонстрация), дать
заключение.
5. Составить схему РПГА, по демонстрационным планшетам с РПГА учесть
результаты, дать заключение.
Методические указания к самостоятельной работе
Иммунохимические характеристики АТ:
1)
Аффинитет – это точность совпадения конфигурации активного центра АЬ
(паротока) и антигенной детерминанты (эпитока).
2)
Авидность – это сила прочности иинтенсивности связи АГ + АТ.
3)
Валентность – это количество активных центров АТ, которыеспособны
соединяться с антигенными детерминантами.
Радиальная иммунодиффузия по Манчини. В чашку Петри (или другая плоская
поверхность)
заливают
агар,
содержащий
специфичную
антиглобулиновуюантисыворотку. В агаре делают пункт и вносят в них испытуемые
сыворотки. Диаметр колец преципитации увеличивается до тех пор, пока не истощится в
образце сыворотки иммуноглобулин, который в данном случае служит антигеном.
Радиальная иммунодиффузия пригодна для количественного определения любых классов
сывороточных
иммуноглобулинов при условии, что имеются соответствующие
моноспецифические антисыворотки и стандартные антигены для калибровки системы.
Образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агарового геля, который содержит
антитела против, например, YgM или YgA в известной концентрации. Одновременно в
ряд лунок вносят стандартный
антиген (иммуноглобулин определенного класса). При
этом образуются кольца преципитации антигена. Далее по калибровочному графику
зависимости диаметра кольца от концентрации стандартного антигена определяют
концентрацию иммуноглобулинов отдельных классов в испытуемых образцах сывороток,
предварительно измерив диаметры колец преципитации.
В сыворотке крови здоровых людей содержание иммуноглобулинов колеблется в
пределах (г/л): YgM – 0,65 – 1,65; Ygg – 7.50 – 15.45; YgA – 1.25 – 2.50.
Схема постановки реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини.
Занятие № 9
Тема:Серологическая диагностика инфекционных болезней. Реакция преципитации,
нейтрализации.
Цель занятия: Изучить основы постановки реакции преципитации и ее вариантов
15
Вопросы для обсуждения:
1. Реакция преципитации. Варианты постановки реакции (кольцепреципитация,
преципитация в геле, иммуноэлектрофорез). Количественное определение Ig по
Манчини.
2. Антитоксины. Реакция нейтрализации токсина антитоксином “invivo”и “invitro”.
Получение антитоксических сывороток.
Самостоятельная работа студентов:
1. Постановка реакции кольцепреципитации для определения видовой принадлежности
кровяного пятна.
2. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
3. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Схема постановки реакции преципитации
Ингредиенты
Преципитирующая сыворотка против белков
крови человека
Преципитирующая сыворотка против белков
крови барана
Физиологический
раствор
Экстракт кровяного пятна «Х»
Результат (образование преципитата)
1
пробирка
2
пробирка
3 пробирка
(контроль АГ)
0,2
-
-
-
0,2
-
-
-
0,2
0,2
0,2
0,2
-
Техника постановки реакции кольцепреципитации.
Реакция преципитации (РП) - это формирование и осаждение комплекса растворимого
молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он
образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток
одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
РП ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.
Широкое распространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или
агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия,
иммуноэлектрофорез и др.
Механизм. Проводится с прозрачными коллоидными растворимыми антигенами,
экстрагированными из патологического материала, объектов внешней среды или чистых
культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагностические преципитирующие
сыворотки с высокими титрами антител. За титр преципитирующей сыворотки
принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммунной
сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.
Реакция кольцепреципитации ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые
вносят по 0,2—0,3 мл преципитирующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой
медленно наслаивают 0,1—0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят в
вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае
положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым антигеном
появляется преципитат в виде белого кольца. В контрольных пробирках преципитат не
образуется.
16
Занятие № 10
Тема:Реакция антиген-антитело с участием комплемента: реакция бактериолиза,
гемолиза, РСК.
Цель занятия:Изучить механизм, методику постановки и практическое значение реакций
бактериолиза, гемолиза, связывания комплемента.
Вопросы для обсуждения:
1. Лизины и реакция лизиса. Реакция бактериолиза.
2. Реакция гемолиза и ее практическое применение.
3. Реакция связывания комплемента. Практическое применение РСК для диагностики
инфекционных заболеваний.
Самостоятельная работа студентов:
1. Освоить технику постановки РСК.
2. Постановка и учет РСК для серологической диагностики коклюша.
3. Определение бактериолитической активности сыворотки по демонстрационным чашкам.
4. Изучение демонстрационных препаратов.
5. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Вначале в 2 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая
сыворотка. Затем в 1-ю пробирку приливается антиген, во вторую — физиологический
раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента.
После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 °С
на 30 минут (горячее связывание). При холодном связывании штатив с пробирками
помещается в ледник при температуре — 4ºС на 18 часов. После выдерживания в
термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Реакция ставится в
объёме 0,5 мл. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, после чего производится
предварительная регистрация результатов. Пробирки остаются при комнатной
температуре, а на следующий день отмечается окончательный результат.
Степень интенсивности реакции оценивается в плюсах. Полная задержка гемолиза —
четыре плюса (++++), неполная - три и один плюс. Полный гемолиз обозначается
минусами (-).
Занятие № 11
Тема: Серологические реакции с меткой антигена или антител (РИФ, ИФМ).
Цель
занятия:Ознакомить
студентов
с
серологическими
реакциями
иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментного анализа (ИФА). Уметь поставить и
произвести учет.
Вопросы для обсуждения:
1. Виды серологических реакций.
2. Реакции с участием меченых антигенов или антител.
3. РИФ. Прямой и непрямой методы.
4. Преимущества ИФА по сравнению с РИА (радиоиммунологический
анализ).
5. Какие ферменты используют в качестве метки в ИФА (РЭМА)?
6. Расшифровать аббревиатуру слова «РЭМА»?
7. Какие красители используют в реакции иммунофлюоресценции?
8. Варианты постановки РИФ.
9. Какие из серологических реакций отличаются: а) наиболее высокой
чувствительностью, б) доступностью и простотой, в) универсальностью, г)
экспресс – диагностикой?
17
Самостоятельная работа студентов:
1. Составить схему постановки РИФ.
2. Составить схему постановки ИФА.
3. Промикроскопировать готовые препараты люминесцентной микроскопией.
4. Оценка интенсивности окраски при ИФА визуально и с помощью
спектрофотометра.
Методические указания к самостоятельной работе
Реакции, в которых участвуют меченые антигены или антитела (иммунофлюоресценции,
радиоиммунный и иммуноферментный методы) по своей чувствительности превосходят
все серологические реакции.
Реакция иммунофлюоресценцииКунса (РИФ)Иммунофлюоресценция – это метод,
основанный на использовании специфичности и чувствительности иммунологической
реакции. В отличие от других методов маркировки постановка пробы и точная
локализация иммунной реакции на поверхности клетки или ткани происходит довольно
быстро. Один из компонентов иммунной реакции, как правило антитело, метится
флюоресцирующим красителем (маркировка, конъюгирование). После возбуждения
флюоресцирующего
агента
положение
антигена
становится
доступным
непосредственному наблюдению вследствие развития флюоресценции. Предложенный в
1941г. Кунсом, этот метод после многочисленных усовершенствований прочно вошел в
лабораторную практику. Данный метод относится кэкспресс – диагностике.
Различают прямой и непрямой метод.
При
прямом
иммунофлюоресцентном
методе
Кунса
специфические
флюоресцирующие антитела образуют комплексы с микробными антигенами, которые
светятся при люминесцентной микроскопии препаратов. Недостатком прямого метода
является необходимость приготовления широкого набора флюоресцирующих
специфических сывороток против каждого изучаемого антигена. Непрямой метод
предусматривает использование одной универсальной флюоресцирующей сыворотки –
антиглобулиновой, содержащей антитела только против кроличьих глобулинов.
Поскольку диагностические антисыворотки, полученные путем иммунизации кроликов,
так же содержат кроличьи глобулины, они в качестве антигенов реагируют
c
флюоресцирующей антиглобулиновой сывороткой и, вместе с тем, в качестве антител
соединяются со специфическими исследуемыми антигенами (микроорганизмов). При этом
на образующемся комплексе (специфические
антитела + исследуемый антиген)
фиксируются флюоресцирующие антиглобулиновые антитела, вызывая его свечение при
люминесцентной микроскопии.
Этапы
1. На предметном стекле готовят мазок из материала.
2. Фиксируют эталоном и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой
(содержит антитела против возбудителя – антигена).
3. Помещают во влажную камеру и инкубируют при 370С в течение 15мин.
(для образования комплекса антиген – антитело.
4. Промывают изотоническим раствором хлорида натрия (для удаления не
связавшихся с антигеном антител).
5. На препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку
против глобулинов кролика. Выдерживают в течение 15мин при 370С.
6. Препарат тщательно промывают
изотоническим раствором хлорида
натрия, высушивают и исследуют методом люминесцентной микроскопии.
18
Реакция энзим – меченых антител (РЭМА) или иммуноферментный анализ
(ИФА). Английская аббревиатура «EZIZA» (enzrymelinkedimmunosorbentassoy).
Иммуноферментный анализ является современным, высокочувствительным
методом. Результаты реакции могут учитываться как визуально, так и инструментально.
Принцип метода заключается в фиксации известного антигена или антитела на
носителе с последующей обработкой его исследуемой сывороткой или исследуемым
антигеном и выявлении комплекса антиген-антитело антивидовыми глобулинами,
мечеными ферментом «щелочная фосфатаза» или «пероксидаза хрена».
Для фиксации антигена или антитела используют полиэтиленовые пробирки или
полистироловые пластинки. Сенсибилизацию лунок панелей производят антигеном или
антителом при + 40С в течение 14-16 часов или при 370С в течение 30 мин.
Схема постановки ИФА.
Титры
Ингредиенты
реакции
Буферный
раствор
Исследуемая
сыворотка
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
К сыв
К буфер
Контр
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
-
0,05
-
0,05
0,5мл
в дез.
р-р
0,05
-
-
0,05
0,05
0,05
Конъюгат
(антитело или
антиген
обрабатывают
ферментом)
Контакт в течение 1 часа при 370С. Затем 3-х кратное отмывание буферным раствором.
Субстрат
(5аминосалициловая
кислота +Н2О2)
Учет результатов
реакции
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
+
+
+
+
-
-
0,05 0,05
-
-
Этапы постановки ИФА
1. Сенсибилизация полистироловых пластинок антигеном при +4ос в течение 14-16
часов или при 370 в течение 30 мин.
2. Сенсибилизированные панели промывают от несвязавшегося белка забуферным
физиологическим раствором с добавлением твин-20.
3. 3-х кратно промывают панели физиологическим раствором.
4. Высушивание панелей.
5. Затем в лунки вносят по 0,05мл исследуемой сыворотки в разведении (от1: 4 до 1:
32), инкубируют в течение 18ч. при комнатной температуре.
6. Лунки промывают забуферным физиологическим раствором (для удаления
непрореагировавшегося сывороточного глобулина).
7. Обрабатывают антииммуноглобулиновой сывороткой, меченой ферментом
(пероксидаза хрена, кислая или щелочная фосфатаза или глюкооксидаза).
8. Активность фермента измеряют колориметрическим путем при добавлении
субстрата 5-аминосалициловая кислота + Н2О2.
19
Занятие № 12
Итоговое занятие 1-12.
1. Тестовый контроль.
2. Разбор типовых и ситуационных задач по серологической диагностике инфекционных
болезней.
Занятие № 13
Тема:Особенности иммунного ответа при различных микробных и паразитарных
инфекциях.
Цель занятия:Изучить факторы, способствующие развитию иммунного ответа при
различных инфекционных процессах.
Вопросы для обсуждения:
1. Лимфоцит – основная структурная и функциональная единица иммунной
системы.
2. Характеристика различных форм лимфоцитов.
3. Функции лимфоцитов.
4. Общая характеристика инфекционного процесса.
5. Возбудители, оказывающие патологическое действие на ткани
инфицированного организма.
6. Неспецифический (врожденный) иммунитет.
7. Специфический иммунитет при инфекциях.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение поверхностной микрофлоры кожи: посев отпечатков кожи пальцев рук на
МПА
2. Изучение микрофлоры полости рта: приготовление мазка из зубного налета и окраска
по Граму.
3. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.
4. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Макроорганизм имеет широкий спектр средств защиты своей целостности и поддержания
гомеостаза. Однако для минимизации энергетических и пластических затрат
макроорганизм для устранения конкретного антигена использует лишь наиболее
эффективные механизмы и факторы защиты. Поэтому при воздействии различных по
природе и свойствам антигенов иммунное реагирование макроорганизма имеет свои
особенности.
Иммунная реакция макроорганизма в ответ на бактериальную инфекцию в
значительной степени определяется факторами патогенности микроба и в первую очередь
его способностью к токсинообразованию. Различают иммунитет антибактериальный против структурных компонентов бактериальной клетки и антитоксический - против
белковых токсинов.
Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях. Основными факторами
антибактериальной защиты являются антитела и фагоциты. Антитела эффективно
инактивируют биологически активные молекулы бактериальной клетки (токсины,
ферменты агрессии и др.), маркируют их, запускают антителозависимый бактериолиз и
иммунный фагоцитоз. Фагоциты непосредственно осуществляют фагоцитоз, в том числе
иммунный, антителозависимый бактериолиз и внеклеточный киллинг патогена при
помощи ион-радикалов и ферментов. Важная роль в борьбе с грамположительными
микробами принадлежит лизоциму, а с грамотрицательными - комплементу
20
(альтернативный путь активации), кроме того, существенное значение имеют белки
острой фазы (С-реактивный и маннозосвязывающий протеин).
Ряд бактерий, относящихся к факультативным внутриклеточным паразитам, отличается
повышенной устойчивостью к действию комплемента, лизоцима и фагоцитов
(незавершенный фагоцитоз). К их числу относятся микобактерии, йерсинии, бруцеллы,
сальмонеллы и некоторые другие. В такой ситуации макроорганизмвынужден
переключать нагрузку на клеточное звено иммунитета, что ведет к аллергизации
организма по механизму ГЗТ. Особое значение приобретают активированные макрофаги и
естественные киллеры, осуществляющие АЗКЦТ, а также γδТ-лимфоциты.
Напряженность специфического антибактериального иммунитета оценивают в
серологических тестах по титру или динамике титра специфических антител, а также по
состоянию клеточной иммунореактивности (например, по результатам кожноаллергической пробы).
Особенности иммунитета при протозойных инвазиях.
Паразитарная инвазия сопровождается формированием в макроорганизме
гуморального и клеточного иммунитета. В крови определяются специфические антитела
классов M и G, которые чаще всего не обладают протективным свойством. Однако они
активируют АЗКЦТ с участием макрофагов, а в случае внутриклеточного
паразитирования - естественных киллеров и T лимфоцитов. Паразитарные инвазии
соспровождаютсяаллергизацией макроорганизма по механизму ГЗТ.
Характер
противопаразитарного
иммунитета
определяется
биологическими
особенностями паразита. Многие паразиты обладают высокой антигенной изменчивостью,
что позволяет им избегать действия факторов иммунитета. Например, каждой стадии
развития малярийного плазмодия соответствуют свои специфические антигены.
Напряженность противопаразитарного иммунитета оценивается в серологических
тестах по титру специфических антител и в кожно-аллергических пробах с протозойным
антигеном.
Занятие № 14
Тема:Понятие об иммунологической толерантности. Трансплантационный иммунитет.
Цель занятия:Изучить механизмы иммунологической толерантности.
Вопросы для обсуждения:
1. Иммунологическая толерантность, ее виды: центральная, периферическая
псевдотолерантность.
2. История развития трансплантологии.
3. Общая характеристика отторжения.
4. Иммунные механизмы отторжения.
5. Клинические проблемы трансплантации.
6. Заготовка, методы консервирования и сроки хранения трансплантатов.
и
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Новейшие достижения в области трансплантологии позволяют все шире использовать
трансплантацию органов и тканей для лечения разных заболеваний. В последнее время
наряду с трансплантацией костного мозга, почки, печени и сердца стали применять
21
трансплантацию тонкой кишки, доли и сегментов печени, легкого, костей, поджелудочной
железы и клеток панкреатических островков, а также других органов и тканей. Для
трансплантации используются как трупные, так и полученные от живых доноров органы и
ткани. Чаще донорами служат родственники реципиента. После трансплантации в
организме реципиента развивается иммунный ответ на многочисленные антигены
трансплантата. Исключение составляют случаи, когда донор и реципиент — однояйцовые
близнецы. Наиболее изученные антигены человека, с которым связан иммунный ответ на
трансплантат, — это антигены HLA (иногда их называют трансплантационными
антигенами).
Механизмы трансплантационного иммунитета. Иммунный ответ на трансплантат
обусловлен в первую очередь распознаванием антигенов HLA донора лимфоцитами
реципиента. Это вызывает активацию T-хелперов, которые, в свою очередь, стимулируют
пролиферацию B-лимфоцитов и цитотоксических T-лимфоцитов. Антитела к чужеродным
антигенам HLA могут присутствовать в сыворотке реципиента и до трансплантации. Их
выявление свидетельствует о предшествующей иммунизации антигенами HLA. Она
возможна при переливании цельной крови и во время беременности. Выявление в
сыворотке реципиента антител к антигенам HLA донора свидетельствует о высоком риске
сверхострого отторжения трансплантата. Оно обусловлено образованием комплексов,
состоящих из антигенов трансплантата и антител реципиента, которые активируют
свертывание крови и приводят к тромбозу сосудов трансплантата. Поскольку отторжение
трансплантата вызывают чужеродные антигены HLA, лучший способ его профилактики
— подбор донора, совместимого с реципиентом по антигенам HLA. Если реципиент уже
иммунизирован антигенами HLA, донор должен быть полностью совместим с
реципиентом.
Занятие № 15
Тема:Противоопухолевый иммунитет.
Цель занятия:Изучить механизмы противоопухолевого иммунитета.
Вопросы для обсуждения:
1. Иммунологический надзор и механизмы противоопухолевого
иммунитета.
2. Факторы, способствующие развитию злокачественных опухолей.
3. Характеристика злокачественных заболеваний.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Механизмы специфического противоопухолевого иммунитета.
Очень опасным
врагом иммунной системы являются раковые клетки. Рак начинается с мутации ДНК
одной или нескольких клеток, что приводит к их бесконтрольному делению.
В нормальных клетках процесс деления жестко контролируется на всех уровнях.
Поэтому для возникновения злокачественной опухоли обычно нужна не одна, а целая
серия мутаций. Сначала опухоли растут очень медленно. Это значит, что перед иммунной
системой стоит задача узнать буквально несколько десятков поврежденных клеток среди
триллионов нормальных. Это то же самое, что определить террориста еще до того, как он
начнет подготовку к террористическому акту. Тем не менее, ученые считают, что
иммунная система справляется с этой задачей успешно и регулярно. Просто
поразительной способностью опознавать и убивать раковые клетки обладают макрофаги и
клетки-киллеры.
22
В начале 60-х годов известный австралийский учёный М.Бернет выдвинул концепцию
иммунологического надзора, по которой иммунная система конкретного индивидуума
срабатывает всегда, когда сталкивается с признаками генетически чужеродной
информации. Иначе, иммунитет призван не только осуществлять антиинфекционную
защиту, но главным образом обеспечивать генетическую целостность соматических
клеток организма в течение его индивидуальной жизни. Среди прочих факторов, с
которыми имеет дело иммунологический надзор, особое место занимает злокачественно
перерождённые клетки.
Т-клетки. Среди всех иммунологических факторов, принимающих участие в защите
организма от неоплазм (опухолей), главная роль принадлежит клеточной форме защиты.
Наиболее активными клетками в разрушении опухоли являются CD8 Т-клетки,
Цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) или Т-киллеры и Т-хелперы. Если ЦТЛ выполняют
прямую киллерскую функцию, то Т-хелперы способствуют её успешной реализации через
секрецию цитокинов (интерферон-g, стимулирующий макрофаги и увеличивающий
активность НК-клеток).
Активность ЦТЛ проявляется в результате распознавания комплекса – пептид
опухолевого антигена+молекула 1 класса МНС (Главного комплекса гистологической
совместимости). Механизм действия ЦТЛ на опухолевую клетку следующий: в т.н.
«тёмных органеллах» внутри Т-киллера содержится белок–полимер перфорин, который в
момент контакта ЦТЛ с клеткой–мишенью выбрасывается на поверхность оболочки
клетки мишени, полимеризуется в присутствии ионов Са+, образуя поры-т.н.
«перфориновые дыры». В результате, вода и соли через эти поры проходят легко, а белки
задерживаются, осмотическое давление снаружи и внутри выравнивается и клетка гибнет.
В-клетки. Участие В-клеток в противоопухолевом иммунитете может проявлятся
несколькими способами:
- разрушение опухолевых клеток антителами, фиксирующими комплемент;
- накопление НК-клеток, имеющих на своей поверхности цитофильные антитела;
Натуральные киллеры. Другим типом клеток, осуществляющих иммунологический
надзор и участвующих в уничтожении трансформированных клеток, являются НК. Они
относятся к лимфоидным клеткам, но при этом лишены маркеров Т- и В-лимфоцитов.
Набор клеток, подвергающихся литическому действию НК, достаточно широк. Это — ряд
вирусинфицированных и опухолевых клеток, клеток, на поверхности которых
представлены цитофильные антитела, эмбриональные клетки. Несмотря на то что НК
морфологически напоминают лимфоциты или лимфобласты, их гистогенетическая связь с
Т- или В-лимфоцитами не установлена. Вероятно, НК относятся к самостоятельной линии
дифференцировки, хотя на самых ранних этапах развития у них имеется общий с
лимфоцитами предшественник. В отличие от лимфоцитов, НК не имеют
антигенраспознающих
рецепторов,
не
увеличиваются
количественно
после
взаимодействия с чужеродным (например, вирусным) антигеном и не способны к
формированию иммунологической памяти. При этом их активность повышается под
влиянием цитокинов Т-клеток и в первую очередь интерлейкина-γ.
Макрофаги. В исследованиях установлено, что макрофаги, активированные цитокинами
Т-клеток, оказывают определенное противоопухолевое действие. Оно может быть связано
как с явлением прямого фагоцитоза опухолевых клеток, так и с процессом,
опосредованным Фактором Некроза Опухоли.
23
Занятие № 16
Тема:Аллергические реакции. Механизмы и факторыВ и Т зависимых аллергий.
Классификация аллергических реакций по Джеллу и Кумбсу.
Цель занятия: Изучить механизмы и факторы развития аллергических реакций, методы
выявления.
Вопросы для обсуждения:
1. Аллергия. Взаимоотношение аллергии и иммунитета. Основные понятия.
2. Аллергены: классификация и свойства. Экзоаллергены и эндоаллергены.
Аллергические и псевдоаллергические реакции. Аллергены, классификация.
Виды неинфекционных и инфекционных аллергенов.
3. Типы иммунологической гиперчувствительности по Gell&Coombs. Механизмы
и факторы В- и Т-зависимых аллергий.
4. Реагиновый тип аллергических реакций.
5. Цитотоксический тип аллергических реакций.
6. Иммунокомплексный тип (тип Артюса) аллергических реакций.
7. Клеточно-опосредованный тип аллергических реакций.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Классификация аллергических реакций по Джеллу и Кумбсу.
(ГМ-КСФ — гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор)
24
25
Аллергия несомненно относится к иммунологическим феноменам. Здесь наблюдается
воздействие антигена (аллергена), выработка антител и образование комплекса аллерген
— антитело. Однако иммунитет проявляется обычно не в виде защиты организма от
патогенных факторов, а в развитии повышенной чувствительности к этим антигенам.
Правда, сенсибилизация еще не есть аллергия. Однако ее сравнивают с пороховой
бочкой, которая еще не взорвалась, но в любой момент может взорваться.
Принято считать, что взаимодействие антигена с антителами, которое способствует
повышению сопротивляемости организма, и есть иммунитет. Но в том случае, когда такое
взаимодействие вызывает болезнь,— это уже аллергия. В основе ее лежит иммунный
ответ, протекающий с повреждением тканей. При этом срабатывают те же
иммунологические реакции, которые были выработаны для защиты организма от
генетически чужеродной информации.
Механизмы аллергии и иммунитета настолько близки, что в настоящее время
аллергические реакции ускоренного и замедленного типа нередко обозначают как Т- и Взависимые. К Т-зависимым аллергическим реакциям относятся: реакция отторжения
трансплантата, замедленная аллергия к растворимым белкам, ряд аутоаллергических
реакций, контактный аллергический дерматит. Т-зависимая аллергия играет важную роль
при повышенной чувствительности к микробактериям туберкулеза, а также при
26
некоторых других инфекциях (например, вирусных или вызванных патогенными
грибками).
Замедленные аллергические реакции возникают преимущественно при помощи Тактивных клеток. При аллергических реакциях ускоренного типа появляющиеся
агрессивные антитела наряду с блокадой аллергена бьют и по самому организму. Нередко
именно избыточное накопление этих антител является непосредственной причиной
гибели организма (например, от анафилактического шока). Для аллергической реакции не
существует какого-либо специального механизма. Это тот же механизм иммунитета,
только сопровождающийся клиническим проявлением аллергии. Поэтому и считается:
аллергия — иммунитет наоборот.
Одним из широко известных, непосредственно относящимся к иммунопатологии
является СПИД (синдром приобретенного иммунного дефицита).
Занятие № 17
Тема:Инфекционная аллергия. Аллергические реакции IV типа. Принципы диагностики,
терапии, профилактики аллергий.
Цель занятия:Изучить механизмы и факторы развития аллергических реакций, принципы
диагностики, лечения и профилактики.
Вопросы для обсуждения:
1. Гиперчувствительность немедленного типа.
2. Классификация аллергенов.
3. Механизм развития аллергического процесса.
4. Гиперчувствительность замедленного типа.
5. Особенности аутоиммунных заболеваний.
6. Стадии
развития
и
клинические
проявления
иммунологической
гиперчувствительности. Роль IgE, цитотоксических Т лимфоцитов,
гуморальных медиаторов воспаления и биологически активных аминов,
комплемента, фагоцитов, эозинофилов.
7. Классификация аллергических (иммунопатологических) реакций. Стадии
развития аллергических реакций. Значение Th2 и их цитокинов (ИЛ-4, ИЛ13) в патогенезе аллергий.
8. Принципы диагностики, лечения и профилактики аллергий.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Реакции повышенной чувствительности замедленного типа наблюдаются при
бруцеллезе, туберкулезе, туляремии, токсоплазмозе, орнитозе, а также при различных
грибковых и паразитарных заболеваниях. Чувствительность организма к антигенам
возбудителя усиливается в течение заболевания и сохраняется длительное время после
выздоровления больного, постепенно ослабевая. При некоторых инфекциях (туберкулез,
бруцеллез, туляремия) она может сохраняться до 10 лет.
Повышенную чувствительность организма можно выявить при введении специальных
диагностических препаратов — аллергенов. В качестве таких аллергенов используют
антигены микробов, полученные различными методами; фильтраты культур микробов,
ихлизаты; культуры, убитые нагреванием или химическими веществами, полисахаридные
и другие фракции антигена. Аллерген вводят подкожно, внутрикожно, на кожу и
слизистые оболочки. Если человек чувствителен к данному аллергену,
27
на месте введения возникают местные очаговые реакции, покраснение, отек,
болезненность кожи, конъюнктивит при нанесении аллергена на конъюнктиву. У больных
туберкулезом при подкожном введении аллергена — туберкулина — наблюдаются и
общие реакции: слабость, депрессия, обострение процесса в легких.
Реакции повышенной чувствительности используют в диагностике многих
инфекционных заболеваний. Этот аллергический метод диагностики применяют при
туберкулезе (проба Пирке — накожное введение туберкулина и проба Манту —
внутрикожное введение туберкулина), туляремии, бруцеллезе (проба Бюрне),
токсоплазмозе, орнитозе, грибковых и протозойных заболеваниях. Аллергены называют
по заболеванию: туберкулин, бруцеллин, тулярин, токсоплазмин.
Для диагностики инфекционного заболевания обычно применяют накожные и
внутрикожные аллергические пробы. Глазную пробу с малеином используют для
выявления бессимптомного сапа у лошадей.
Занятие № 18
Тема:Методы исследования иммунного статуса. Первичные и вторичные
иммунодефициты.
Цель занятия:Познакомиться с комплексом тестов, применяемых в клинической
практике для оценки иммунного статуса организма. Изучить методы выявления и
коррекции первичных и вторичных иммунодефицитов.
Вопросы для обсуждения:
1. Что такое иммунный статус?
2. Сформулируйте основные подходы к оценке иммунной системы человека.
3. В чем состоит двухэтапный принцип оценки иммунного статуса? Перечислите тесты
уровней 1 и 2.
4. Какие биологические материалы используются для оценки состояния иммунной
системы человека?
5. Перечислите основные методы оценки процессов распознавания, активации
пролиферации,
дифференцировки,
регуляции
иммунного
ответа.
Обоснуйте
патогенетический подход.
6. В чем состоит патогенетический принцип оценки иммунной системы?
7. В чем состоит этиологический принцип оценки иммунной системы?
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Состояние функциональной активности иммунной системы человека в целом имеет
жизненно важное для организма и обозначается понятием "иммунный статус".
Иммунный статус - это количественная и качественная характеристика состояния
функциональной активности органов иммунной системы и некоторых неспецифических
механизмов противомикробной защиты.
Нарушения иммунного статуса и способности к нормальному иммунному ответу на
разные антигены называют иммунодефицитными состояниями (иммунодефицитами),
которые делятся на:
а) первичные (врожденные, наследственные),
б) вторичные (приобретенные).
28
Первичные иммунодефицитные состояния.
Первичный иммунодефицит человека - генетически обусловленная неспособность
организма реализовать то или иное звено иммунитета. Проявляются вскоре после
рождения, наследуются, как правило, по рецессивному типу. Первичные
иммунодефицитные состояния могут выражаться в поражениях В- и Т-системы.
Вторичные иммунодефицитные состояния.
Вторичные иммунодефицитные состояния возникают как следствие нарушений
иммунорегуляции и других патологических процессов, сопровождаются лимфопенией и
гипогаммаглобулинемией. Вторичные иммунодефициты связаны с: перенесенными
инфекционными (корь, грипп, проказа, кандидоз) и соматическими процессами
Методы оценки иммунного статуса
Для выявления иммунодефицитных состояний возникает необходимость оценки
показателей функциональной активности иммунной системы, т. е. иммунного статуса.
Оценка иммунного статуса слагается из нескольких этапов: Клинико-лабораторный этап,
который включает в себя: сбор и оценку иммунологического
Обследование дает информацию о состоянии различных звеньев иммунитета, что
используется в диагностике первичных и вторичных иммунодефицитов, аутоиммунных,
лимфопролиферативных, инфекционных, гематологических заболеваний.
Изменения иммунологических показателей могут быть проявлением нормальной реакции
организма на воздействие физиологических или патологических факторов (с различной
картиной сдвигов на разных стадиях заболевания), отражать чрезмерную активацию,
истощение иммунной системы, характеризовать врожденный или приобретенный дефект
отдельных звеньев иммунной системы.
Показания к назначению анализов
1. Рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным
течением.
2. Подозрение на генетически обусловленный или приобретенный иммунодефицит.
3. Аутоиммунные заболевания.
4. Аллергические заболевания.
5. Подозрение на синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).
6. Онкологические заболевания.
7. Обследование реципиентов до и после трансплантации органов.
8. Обследование пациентов перед серъезными оперативными вмешательствами.
9. Осложненное течение послеоперационного периода.
10. Контроль терапии цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами.
Занятие № 19
Тема: Методы исследования иммунного статуса. Первичные и вторичные
иммунодефициты (продолжение). Методы диагностики и коррекции иммунодефицитов.
Цель занятия:Познакомиться с комплексом тестов, применяемых в клинической
практике для оценки иммунного статуса организма. Изучить методы выявления и
коррекции первичных и вторичных иммунодефицитов.
Вопросы для обсуждения:
1. Понятие об иммунном статусе. Оценка иммунного статуса организма.
2. Врожденные (первичные) иммунодефициты. В-клеточные и Т-клеточные дефициты.
3. Приобретенные (вторичные) иммунодефициты. Механизмы развития. Основные формы.
4. Методы выявления и коррекции иммунодефицитов.
5. Развитие ВИЧ-инфекции.
29
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Иммунная система — сложная функциональная структура человеческого организма,
которая должна, с одной стороны, поддерживать постоянство клеточного состава
органов и тканей, а с другой — отражать агрессию проникших в организм патогенных
факторов.
Иммунные реакции реализуются посредством двух тесно связанных между собой звеньев
иммунитета —— клеточного (Т- и В-лимфоциты, макрофаги и др.) и гуморального
(иммуноглобулины). Для обмена информацией и координации действий иммунной
системы лимфоциты вырабатывают белки-цитокины: интерфероны, интерлейкины и др.
Количественная или функциональная недостаточность того или иного звена иммунной
системы ведет к развитию иммунодефицитных состояний. Наиболее частыми
клиническими проявлениями иммунодефицитов служат рецидивирующие, затяжные,
тяжело протекающие инфекции: бактериальные, вирусные, грибковые.
С невысокой частотой встречаются первичные (врожденные) иммунодефициты. Они
обусловлены мутациями специфических генов иммунного ответа. Вторичный
иммунодефицит — клинико-иммунологический синдром, развивающийся на фоне ранее
нормального функционирования иммунной системы. Он характеризуется устойчивым
выраженным
снижением
количественных
и
функциональных
показателей
специфических и/или неспецифических факторов иммунорезистентности. Среди причин
развития вторичного иммунодефицита следует указать: вирусные инфекции, особенно
поражающие лимфоциты и макрофаги; некоторые бактериальные инфекции;
ионизирующую радиацию; воздействие химических ядов и некоторых лекарств
(цитостатики, циклоспорины, глюкокортикостероидные гормоны); протозойные и
глистные инвазии; дефицит в организме белка, витаминов и микроэлементов;
злокачественные новообразования, почечную недостаточность, сахарный диабет,
большинство хронических заболеваний; алкоголизм, наркоманию, курение.
Для восстановления функций иммунной системы используют лекарственные препараты
— иммуномодуляторы. Иммунологический эффект иммуномодуляторов зависит от
исходного состояния иммунитета пациента: эти лекарственные средства понижают
повышенные и повышают пониженные показатели иммунитета. Свойствами
иммуномодуляторов обладать соединения различной природы и химического строения:
вещества микробного происхождения и их синтетические и полусинтетические аналоги;
препараты животного происхождения (экстракты из тимуса, костного мозга, селезенки и
др.); цитокины (например, интерфероны) и препараты, стимулирующие их синтез в
организме; средства растительного происхождения (на основе эхинацеи, женьшеня и
др.). Получено также несколько синтетических соединений, оказывающих выраженное
влияние на иммунную систему (азоксимера бромид, левамизол и т.д.). Особое место
среди иммуномодуляторов замают препараты из диализированных экстрактов
лейкоцитов (dialyzedleukocyteextract — DLE) человека, содержащие так называемые
Факторы переноса (Трансфер факторы).
30
Занятие № 20
Тема: Аутоиммунные реакции и заболевания. Аутоантигены. Аутоантитела. Природа
аутоиммунных заболеваний.
Цель занятия:Изучить роль микроорганизмов как пусковых факторов аутоиммунитета.
Вопросы для обсуждения:
1. Аутоиммунные заболевания.
2. Природа аутоантигенов, аутоантител и сенсибилизированных лимфоцитов,
методы их выявления.
3. Аутоиммунитет, цитокины, воспаление.
4. CD5 В-клетки и аутоиммунитет.
5. Виды тканевых повреждений при аутоиммунной патологии.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Аутоиммунные заболевания — это группа заболеваний, характеризующихся
повреждением и разрушением органов и тканей организма под воздействием собственной
иммунной системы.
Механизм развития аутоиммунных заболеваний полностью не изучен. Очевидно, что
аутоиммунные заболевания вызваны нарушением функции иммунной системы в целом
или ее отдельных компонентов.
В частности, доказано, что в развитии системной красной волчанки, миастении или
диффузного токсического зоба, задействованы Т-лимфоциты супрессоры. При этих
заболеваниях наблюдается снижение функции этой группы лимфоцитов, которые в норме
тормозят развитие иммунного ответа и предотвращают агрессию собственных тканей
организма. При склеродермии наблюдается повышение функции Т-лимфоцитов
помощников (Т-хелперы), что в свою очередь приводит к развитию избыточного
иммунного ответа на собственные антигены организма. Не исключено, что в патогенезе
некоторых аутоиммунных заболеваний задействованы оба эти механизма, равно как и
другие типы нарушений функции иммунной системы. Функциональность иммунной
системы во многом определяется наследственными факторами, поэтому многие
аутоиммунные заболевания передаются из поколения в поколение. Возможно нарушение
функции иммунной системы под действием внешних факторов, таких как инфекции,
травмы, стресс. На данный момент считается, что неблагоприятные внешние факторы, как
таковые не способны вызвать развития аутоиммунного заболевания, а лишь повышают
риск его развития у лиц с наследственной предрасположенностью к патологии этого типа.
Классические аутоиммунные заболевания встречаются относительно редко. Гораздо чаще
возникают аутоиммунные осложнения некоторых заболеваний. Присоединение
аутоиммунного механизма может во многом утяжелить эволюцию заболевания и потому
определяет прогноз болезни. Аутоиммунные реакции возникают, например, при ожогах,
хронических ангинах, инфаркте миокарда, вирусных заболеваниях, травмах внутренних
органов. Патогенез развития аутоиммунных реакции очень сложен и во многом не ясен.
На данный момент достоверно известно, что некоторые органы и ткани человеческого
организма развиваются в относительной изолированности от иммунной системы, поэтому
в момент дифференцировки иммунных клеток, клоны способные атаковать эти типы
тканей или органов не удаляются. Аутоиммунная агрессия наступает тогда, когда по
каким-то причинам барьер, отделяющий эти ткани или органы от иммунной системы
разрушается и они распознаются иммунными клетками как «чужеродные». Такое
происходит с тканями глаза или яичка, которые могут подвергнуться аутоиммунной атаке
31
во время различных воспалительных реакций (при воспалении тканевые барьеры
нарушаются). Другим механизмом развития аутоиммунных болезней являются
перекрестные иммунные реакции. Известно, что некоторые бактерии и вирусы, равно как
и некоторые лекарства, по своей структуре схожи с некоторыми компонентами тканей
человека. Во время инфекционного заболевания, вызванного данным типом бактерии или
вируса, или во время приема определенного лекарства иммунная система начинает
вырабатывать антитела, которые способны реагировать с нормальными тканями
организма, компоненты которых схожи с антигенами, вызвавшими иммунную реакцию.
Описанный выше механизм лежит в основе возникновения ревматизма (перекрестная
реакция на антигены стрептококка), сахарного диабета (перекрестная реакция на антигены
вируса Коксаки В и гепатита А), гемолитических анемий (перекрестная реакция на
медикаменты).
В ходе различных заболеваний ткани организма подвергаются частичной денатурации
(изменению структуры), что наделяет их свойствами чужеродных структур. В таких
случаях возможно возникновение аутоиммунных реакций, которые направлены против
здоровых тканей. Такой механизм характерен для повреждений кожи при ожогах,
синдрома Дреслера (перикардит, плеврит) при инфаркте миокарда. В других случаях
здоровые ткани организма становятся мишенью для собственной иммунной системы из-за
присоединения к ним чужеродного антигена (например, при вирусном гепатите В).
Еще одним механизмом аутоиммунного поражения здоровых тканей и органов является
вовлечение их в аллергические реакции. Такое заболевание как гломерулонефрит
(поражение клубочкового аппарата почек), развивается в результате осаждения в почках
циркулирующих иммунных комплексов, которые образуются в ходе обычной ангины.
Занятие № 21
Тема:Аутоиммунные реакции и заболевания (продолжение).
аутоиммунных заболеваний.
Цель занятия:Изучить классификацию аутоиммунных заболеваний.
Классификация
Вопросы для обсуждения:
1. Классификация аутоиммунных заболеваний.
2. Гипотезы развития аутоиммунной патологии.
3. Аутоиммунные расстройства и толерантность к «своему».
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
2. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
В обычных условиях функция системы иммунитета заключается в определении
(распознавании) и ликвидации чужеродных структур, к которым относятся
микроорганизмы, клетки опухолей, трансплантированные ткани, но в результате
определенных нарушений собственные клетки начинают восприниматься ею как
чужеродные.
На данный момент используется классификация, согласно которой выделяется несколько
групп различных аутоиммунных заболеваний по механизму их возникновения:
♦ заболевания, появляющиеся вследствие развития проницаемости сосудисто-тканевых
барьеров и выхода антигенов из различных тканей организма (щитовидной железы, мозга,
хрусталика и т. д.). Эти антигены вызывают развитие активного иммунного ответа с
активацией Т-лимфоцитов специфического класса и образованием антител;
32
♦ заболевания, прогрессирование которых определяется тканевыми собственными
компонентами организма, претерпевшими определенные изменения под воздействием
каких-нибудь внешних факторов (физических, химических, бактериальных, вирусных).
При этом свойства собственных компонентов меняются до такой степени, что начинают
восприниматься иммунной системой в качестве чужеродных;
♦ заболевания, возникающие в результате некоторого сходства собственных тканевых
компонентов с внешними антигенами. В данном случае нормальная реакция иммунной
системы, вызванная экзоантигеном, распространяется и на определенный вид собственной
ткани организма;
♦ заболевания, в основе механизма развития которых лежат те или иные нарушения
функции лимфоидной ткани, возникновение клеток, под воздействием которых
происходит лизирование (разрушение) собственных тканей (подобные дисфункции в
работе иммунной системы нередко генетически обусловлены); заболевания
обусловленные индивидуальными особенностями организма;
♦ заболевания, генетически обусловленные и проявляющиеся под воздействием внешних
факторов, в частности обширных травм, стрессов, некоторых химических веществ,
излучения и т. д.
Занятие № 22
Тема: Принципы иммунотропной терапии. Иммунопрофилактика.
Цель занятия:Изучить основы специфической профилактики и специфической терапии
инфекционных заболеваний.
Вопросы для обсуждения:
1. Вакцины: живые, убитые, химические, анатоксин. Принципы получения. Разработка
вакцин нового типа.
2. Вакцинопрофилактика. Календарь прививок у детей. Критерии оценки
поствакцинального иммунитета.
3. Вакцинотерапия. Аутовакцина.
4. Иммунные сыворотки: лечебно-профилактические сыворотки и -глобулины
(получение, применение, осложнения).
Самостоятельная работа студентов:
1. Оценка иммунного статуса пациента по результатам комплексного
иммунологического исследования.
2. Изучение демонстрационных препаратов.
3. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
4. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Иммунореабилитация– это научное понятие, которое было введено немногим более 20
лет назад и за эти годы прошло путь от «восточной сказки» до всемирного признания.
Вопросы
иммунореабилитации
сегодня
занимают
существенное
место
в
профессиональной деятельности специалистов различного профиля. Интерес врачей к
иммунотропной терапии возрос в связи с повышением распространенности хронической
инфекционной патологии, вызываемой условно-патогенными (или оппортунистическими)
микроорганизмами с атипичными биологическими свойствами и устойчивостью к
антибиотикам, увеличением числа аллергических заболеваний, онкопатологии. Очевиден
33
факт снижения иммунологической реактивности у населения и необходимости
использования в комплексе лечения методов иммунореабилитации. В настоящее время
под иммунореабилитацией подразумевается восстановление способности иммунной
системы осуществлять защитные и регуляторные функции с целью устранения
клинических симптомов иммунопатологии. По Р.В. Петрову (1994), иммунореабилитация
– это восстановление функциональной активности иммунной системы и здоровья
человека при применении комплекса медикаментозных и немедикаментозных лечебных
мероприятий.
Известно, что иммунный ответ (по Е.Ф. Чернушенко, 2006) – это единый процесс
клеточного взаимодействия, обусловленный синергизмом таких звеньев иммунитета, как
синтез цитокинов, экспрессия клеточных рецепторов, активация ферментов, развитие
клеточной сенсибилизации, синтез антител и нормальный гемостаз. Планируя комплекс
иммунореабилитационных мероприятий, врач должен четко представлять механизм
дисфункции иммунной системы в том или ином случае иммунопатологии с целью
адекватного назначения иммунотропной терапии.
К настоящему времени разработано много способов и средств, направленных на
улучшение функционирования иммунной системы, и их популярность велика. Однако их
выбор должен основываться на точной клинической диагностике иммунопатологии и
тщательном анализе иммунного статуса пациента, свидетельствующего о локализации
нарушений в звеньях иммунной системы и степени их выраженности. Уточним
дефиницию терминов, определяющих способы воздействия на иммунную систему
больного.
Включение в комплекс лечения препаратов химической или биологической природы,
обладающих иммунотропной активностью, с профилактической или терапевтической
целью называется иммунотерапией.
Иммунокоррекция– это исправление дефектного функционирования иммунной системы,
т.е. активное вмешательство с целью стимуляции или супрессии всей системы или
отдельных ее звеньев.
Иммунопрофилактика – это воздействие на систему иммунитета с целью
предупреждения первичных проявлений клинических признаков заболевания или начала
рецидива при его хроническом течении. Иными словами, это иммунокоррекция
лабораторных признаков дисфункции иммунной системы, выявляемых при
профилактических осмотрах, при обследовании лиц с хроническими заболеваниями вне
их обострения.
Различают
специфическую
и
неспецифическую
иммунотерапию
и
иммунопрофилактику. Неспецифическое воздействие на функцию иммунной системы
включает факторы, неспецифичные по отношению к возбудителю (антигену)
патологического процесса. Специфическое воздействие обусловлено применением
препаратов антигенов (аллергенов) или антител, специфичных к возбудителю (антигену,
аллергену) болезни.
Кроме того, различают активную иммунотерапию (или иммунопрофилактику), когда
система иммунитета активно отвечает на введенный препарат (обычно на антигены,
вакцины), и пассивную, когда в организм вводят готовые защитные иммуноглобулины.
В зависимости от механизма (или характера) воздействия на иммунную систему
выделяют два вида иммунотерапии и иммунопрофилактики: стимулирующий и
супрессирующий.
Иммуностимуляция – это повышение иммунологической защиты организма.
Иммуносупрессия
–
ослабление
патологического
иммунного
ответа
иммунодепрессантами или ионизирующим облучением.
В клинической иммунологии существует еще ряд терминов, таких как иммуномодуляция,
иммунопотенцирование, иммуноадаптация.
34
Иммуномодуляция – меры по достижению сбалансированного иммунного ответа путем
его стимуляции или супрессии с помощью различных воздействий на иммунную систему.
Иммунопотенцирование– это возможность получения желаемого иммунного ответа с
помощью комплекса мер воздействия на иммунную систему, дополняющего основной
метод иммунокоррекции (стимулирующий или супрессирующий).
Иммуноадаптация – комплекс мер по оптимизации иммунных реакций организма при
перемене условий проживания.
Иммунореконструкция
(иммунная
инженерия)
–
использование
с
иммунокорригирующей или заместительной целью биологического материала:
трансплантация тимуса, костного мозга, эмбриональной печени, ксеноселезенки, β-клеток
поджелудочной железы, подсадка плаценты, коры надпочечников, кожного лоскута
беременным при резус-конфликтах, введение в кровь или локально на рану собственных
(аутолимфокинотерапия) или аллогенных (свиных) цитокинов, иммуноглобулинотерапия
и экстракорпоральные методы детоксикации (плазмаферез, иммуносорбция, гемосорбция,
магнитосорбция и др.).
Таким образом, на сегодняшний день существует много методов, способных
воздействовать на функцию иммунной системы.
Занятие № 23
Тема:Принципы
иммуннотропной
терапии
и
профилактики
(продолжение).
Иммунномодуляторы и их применение.
Цель
занятия:Познакомиться
с
принципами
получения
и
применения
иммунобиологических препаратов в диагностических целях.
Вопросы для обсуждения:
1. Иммунные сыворотки: диагностические сыворотки: получение и их применение для
сероидентификации микроорганизмов
(агглютинирующие,
преципитирующие,
антитоксические, гемолитические, противовирусные, люминесцирующие).
2. Диагностикумы: получение и применение для серодиагностики инфекционных
заболеваний.
3. Бактериофаги (видовые, типовые, индикаторные). Получение и применение.
4. Аллергены. Выявление сенсибилизации “invivo” и “invitro”.
Самостоятельная работа студентов:
1. Оценка иммунного статуса пациента по результатам комплексного
иммунологического исследования.
2. Изучение демонстрационных препаратов.
3. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов.
4. Оформление и защита протокола.
Методические указания к самостоятельной работе
Иммуномодуляторами называются препараты, влияющие на иммунную систему, и
изменяющие ее работу. Иммуномодуляторы можно разделить на 2 группы:
1. Иммуностимуляторы – стимулируют иммунные реакции, повышают иммунитет.
2. Иммуносупрессанты – понижают иммунитет.
Таким образом, любой иммуностимулятор относится к иммуномодуляторам, но не
каждый иммуномодулятор является иммуностимулятором.
В любом случае правильнее применять термин "иммуномодуляторы", т.к. повышение
иммунитета с помощью иммуностимуляторов не безгранично, а лишь до уровня
физиологической нормы.
35
Иммуномодуляторы применяются в основном для повышения защитных сил организма
при различных заболеваниях:
хронические, вялотекущие инфекции;
аллергические заболевания;
опухоли;
состояния иммунодефицита.
Но в некоторых случаях (при аутоиммунных заболеваниях, когда иммунитет начинает
работать не против "внешних врагов", а против собственного организма),
иммуномодуляторы используются для снижения иммунитета.
Лечение иммуномодуляторами – не совсем правильный термин. Эти препараты не
излечивают болезнь - они лишь помогают организму побороть ее. Действие
иммуномодуляторов на организм человека не ограничивается периодом болезни - оно
продолжается длительно, годами.
Классификация иммуномодуляторов
Существует несколько классификаций иммуномодуляторов. Согласно одной из них, все
эти препараты разделяются на три группы:
1. Эндогенные (синтезируются в самом организме). Представитель этой группы –
интерферон.
2. Экзогенные (попадают в организм из окружающей среды):
бактериальные: Бронхомунал, ИРС-19, Рибомунил, Имудон;
растительные: Иммунал, "Эхинацея ликвидум", "Эхинацея композитум СН", "Эхинацея
ВИЛАР".
3. Синтетические препараты (представители:Левамизол, Полиоксидоний, Глутоксим,
Галавит, Полудан и др.).
Другая классификация делит иммуномодуляторы на поколения, в соответствии с
хронологическим порядком их создания:
I. Препараты I поколения (созданы в 50-х годах XX века): вакцина БЦЖ, Пирогенал,
Продигиозан.
II. Препараты II поколения (созданы в 70-х годах XX века): Рибомунил, Бронхомунал,
Бронхо-Ваксом, Ликопид, ИРС-19.
III. Препараты III поколения (созданы в 90-х годах XX века): к этой группе относятся
наиболее современные иммуномодуляторы – Кагоцел, Полиоксидоний, Гепон,
Майфортик, Иммуномакс, Селлсепт, Сандиммун, Трансфер Фактор и др. Все эти
препараты, кроме Трансфер Фактора, имеют узконаправленное применение, и
пользоваться ими можно только по назначению врача.
Занятие № 24
Итоговое занятие по темам 13-23.
1. Тестовый контроль.
2. Разбор типовых и ситуационных задач по серологической диагностике инфекционных
болезней.
Методические указания:Каждый студент отвечает на два теоритических вопроса и
разбирает типовую или ситуационную задачу.
36
Тесты
1. К периферическим органам иммунной системы относятся:
А. Вилочковая железа
Б. Костный мозг
В. Селезенка+
Г. Кровь+
Д. Лимфатические узлы+
2. При фагоцитозе бактерии внутриклеточныйкиллинг обеспечивают:
А. Антитела
Б. Комплемент
В. Интерферон
Г. Метаболиты кислорода
Д. Гидролазы лизосом+
3. Экзотоксины:
А. Обязательный продукт патогенных бактерий, грибов, вирусов
Б. Являются липополисахаридами
В. Являются липидами
Г. Выделяются при распаде микробной клетки
Д. Выделяются из живой микробной клетки в окружающую среду+
4. Лимфопоэз осуществляется в:
А. Селезенке
Б. Лимфоузлах
В. Костном мозге
Г. Крови
Д. Аппендиксе
5. К гуморальным факторам неспецифической защиты от бактерий относятся:
А. Гамма-интерферон
Б. Секреторные иммуноглобулины класса A
В. Комплемент+
Г. Антитоксины
Д. Т- лимфоциты
6. Альтернативный путь активации комплемента отличается от классического тем, что:
А. Активатором является комплекс антиген-антитело
Б. Активатором является только антитело
В. Активатором служит липополисахарид бактериальной стенки+
Г. Необходимо участие лизоцима
Д. Необходимо участие интерлейкина – 1
7. В активации комплемента по классическому пути участвуют антитела класса:
А. IgМиIgG+
Б. IgA секреторный
В. IgA сывороточный
Г. IgE
Д. IgD
8. Для профилактики туберкулеза применяют:
А. Живую вакцину+
Б. Генно-инженерную вакцину
В. Туберкулин
Г. Противотуберкулезную сыворотку
Д. Гамма – глобулин
37
9. Для плановой профилактики кори используют:
А. Живую вакцину+
Б. Убитую вакцину
В. Противокоревой гамма-глобулин
Г. Химическую вакцину
Д. Интерферон
10. Для плановой профилактики паротита у детей используют:
А. Анатоксин
Б. Химическую вакцину
В. Убитую вакцину
Г. Живую вакцину+
Д. Субъединичную вирионную вакцину
11. Полиомиелитная вакцина используется для:
А. Экстренной специфической профилактики
Б. Плановой специфической профилактики+
В. Неспецифической профилактики
Г. Лечения
Д. Пассивной иммунизации
12. Ученый, первый разработавший метод аттенуации для получения живых вакцин, это:
А. Р. Кох
Б. Э. Дженнер
В. Л. Пастер+
Г. И.И. Мечников
13. Антитоксический иммунитет вырабатывается в организме при:
А. Брюшном тифе
Б. Дифтерии+
В. Гриппе
Г. Кори
14. Пассивный антитоксический иммунитет развивается при введении в организм
следующих препаратов:
А. Бифидумбактерина
Б. Противодифтерийной сыворотки+
В. АДС-М
Г. Вакцины менингококковой полисахаридной групп А и С
15. Выберите из перечисленных вакцинных препаратов препарат, относящийся к
группе лечебных вакцин:
А. АКДС
Б. БЦЖ
В. Гонококковая вакцина+
Г. Гриппозная вакцина
Д. Сибиреязвенная вакцина
16. Вакцина БЦЖ относится к типу:
А. Инактивированных корпускулярных
Б. Химических
В. Синтетических
Г. Живых аттенуированных+
Д. Генно-инженерных
17. Вакцина против гепатита В представляет собой:
А. Генно-инженерную дрожжевую вакцину +
Б. Инактивированную культуральную вакцину
В. Сплит-вакцину
Г. Живую культуральную вакцину
38
Д. Субъединичную вакцину
18. Какие препараты используются для активной иммунизации:
А. Менингококковая вакцина+
Б. Бактериофаг
В. Противодифтерийная сыворотка
Г. Интерферон
Д. Иммуноглобулин человека нормальный
19. Обязательная плановая вакцинация проводится для профилактики:
А. Ботулизма
Б. Холеры
В. Брюшного тифа
Г. Дизентерии
Д. Туберкулёза+
20. Первичные иммунодефициты развиваются в результате:
А. Генетических нарушений+
Б. Воздействия радиации
В. Антибиотикотерапии
Г. Действия инфекционных факторов
Д. Глюкокортикоидной терапии
21. Реинфекция:
А. Повторное заражение бактериями другого вида
Б. Повторное заражение тем же возбудителем+
В. Возникает при заболеваниях со стойким иммунитетом
Г. Возможна за счет нормальной микрофлоры
Д. Заражение бактериями, выделяющими эндотоксин
22. К аллергическим реакциям немедленного типа относятся:
А. Анафилактический шок+
Б. Феномен Артюса
В. Аллергические состояния при инфекционных заболеваниях
Г. Кожная реакция на туберкулин
Д. Реакция отторжения гомотрансплантата
23. К неспецифическим гуморальным факторам иммунитета относятся:
А. Агглютинины.
Б. Комплемент+
В. Преципитины
Г. Лактамы
Д. Бактериолизины.
24. Анатоксины:
А. Продукт жизнедеятельности вирулентных бактерий.
Б. Используются как вакцины+
В. Вызывают пассивный антитоксический иммунитет.
Г. Участвуют в реакции агглютинации.
Д. Получают из эндотоксина.
25. Анатоксины:
А. Получают из микробных эндотоксинов.
Б. Являются липидами
В. Выделяются после разрушения микробной клетки
Г. Вызывают антимикробный иммунитет
Д. Создают антитоксический иммунитет+
26. Центральными органами иммунной системы являются:
А. Тимус+
Б. Лимфоузлы
39
В. Щитовидная железа
Г. Гипофиз
Д. Селезенка
27. В тимусе происходит:
А. Антителообразование
Б. Формирование В-лимфоцитов
В. Созревание СД4 и СД8 Т- клеток (Т-лимфоцитов)+
Г. Развитие тучных клеток
Д. Образование интерферона
28. Клеточный иммунитет- это:
А. Количество Т и В-лимфоцитов
Б. Количество естественных Т-киллеров (NK-клетки)
В. Фагоцитоз
Г. Антителообразование
Д. Отторжение чужеродного трансплантата+
29. Клеточные факторы неспецифической (естественной) резистентности:
А. Фагоцитоз+
Б. Комплемент
В. В-лимфоциты
Г. β – лизины
Д. Т- хелперы
30. Естественные киллеры (NK-клетки) выполнят функцию:
А. Фагоцитоза
Б. Антителообразования
В. Распознавания опухолевых клеток+
Г. Представления (презентацию) антигена
Д. Воспалительную реакцию
31. Антитела вырабатывают:
А. Базофилы
Б. Плазматические клетки (плазмоциты)+
В. Т- лимфоциты
Г. Тимоциты
Д. Гепатоциты
32. Клетки, участвующие в представлении антигена Т- лимфоцитам:
А. Плазматические клетки
Б. Макрофаги+
В. Тромбоциты
Г. Тучные клетки
Д. Т- киллеры
33. Для развития специфического иммунного ответа В- лимфоциты получают
информацию от:
А. Эритроцитов
Б. Т- лимфоцитов+
В. Гепатоцитов
Г. Базофилов
Д. Остеоцитов
34. Образование антител происходит в:
А. Лимфатических узлах+
Б. Коже
В. Кровеносных сосудах
Г. Костной ткани
Д. Тимусе
40
35. Через плаценту от матери к плоду переходят:
А. IgA
Б. IgG+
В. IgM
Г. IgD
Д. IgE
36. Для получения агглютинирующих сывороток иммунизируют:
А. Мышей
Б. Морских свинок
В. Кроликов+
Г. Баранов
Д. Лошадей
37. Для специфической профилактики гонореи используют:
А. Аутовакцину
Б. Антитоксическую сыворотку
В. Специфический иммуноглобулин
Г. Анатоксин
Д. Специфическая профилактика отсутствует+
38. Для специфической профилактики коклюша применяется:
А. Убитая вакцина+
Б. Бактериофаг
В. Антибиотики
Г. Живая вакцина
Д. Анатоксин
39. Для лечения столбняка используют:
А. Бактериофаги
Б. Интерферон
В. Антимикробную сыворотку
Г. Антитоксическую сыворотку+
Д. Анатоксин
40. Для лечения ботулизма используют:
А. Антимикробную сыворотку
Б. Поливалентную антитоксическую сыворотку+
В. Аутовакцину
Г. Анатоксин
Д. Бактериофаги
41. Для специфической профилактики дифтерии используется:
А. Живая вакцина
Б. Убитая вакцина
В. Химическая вакцина
Г. Анатоксин+
Д. Антимикробная сыворотка
42. Специфическая терапия дифтерии производится:
А. Анатоксином
Б. Антитоксической сывороткой+
В. Бактериофагом
Г. Антибиотиками
Д. Экзотоксином
43. Особенности противовирусного иммунитета:
А. Преобладание гиперчувствительности замедленного типа
Б. Преобладание клеточных механизмов защиты.
В. Завершенность фагоцитарной реакции.
41
Г. Формирование воспаления в месте входных ворот.
Д. Образование интерферона+
44.Какому типу
гиперчувствительности соответствует гемолитическая болезнь
новорожденных, вызванная резус конфликтом?
А. Атопическому или анафилактическому
Б. Цитотоксическому+
В. Иммунокомплексному
Г. Замедленному
45. Классический путь активации комплемента вызывается взаимодействием С1
фракции комплемента с
А. Антигеном
Б. Фактором В
В. Комплексом антиген- IgG+
Г. Бактериальным ЛПC
47. Положительный внутрикожный тест с туберкулином (аллергическая реакция
замедленного типа) указывает на
А. Гуморальный иммунный ответ
Б. Клеточный иммунный ответ+
В. Одновременное участие Т и В лимфоцитов
Г. Активность только В системы иммунитета
48. Во время созревания В лимфоцитов, первой синтезируется тяжелая цепь:
А. µ+
Б. γ
В. Ε
Г. Α
49. Наиболее высокая концентрация иммуноглобулинов, находящихся в крови
новорожденного это:
А. IgG+
Б. Ig M
В. Ig A
Г. IgD
Д. IgE
50. Функция макрофагов в гуморальном иммунном ответе заключается
А. в продукции антител
Б. в цитолизе вирус-инфицированных клеток
В. в активации цитотоксических лимфоцитов
Г. в процессинге и презентации антигена+
51. К центральным органам иммунной системы относятся:
А. Вилочковая железа +
Б. Селезенка
В. Костный мозг+
Г. Надпочечники и гипофиз
52. К гуморальным факторам неспецифической защиты организма относятся:
А. Комплемент+
Б. Секреторные иммуноглобулины класса А
В. Антитоксины
Г. Пропердин+
Д. Лизоцим+
53. К аллергическим реакциям немедленного типа относятся:
А. Цитотоксические реакции+
Б. Кожно-аллергические пробы
В. Сывороточная болезнь+
42
Г. Анафилактический шок+
54. Клетки, участвующие в презентации антигена Т-лимфоцитам:
А. Дендритные клетки+
Б. Плазматические клетки
В. Макрофаги+
Г. Тучные клетки
Д. Тромбоциты
55. С целью оценки иммунного статуса определяют:
А. Абсолютное число лимфоцитов в крови+
Б. Концентрацию иммуноглобулина М в сыворотке крови+
В. СОЭ
Г. Фагоцитоз+
Д. Антигены группы АВ0
56. Плазмоциты осуществляют функцию:
А. Фагоцитоз
Б. Синтез антител+
В. Синтез гармонов
Г. Синтез монокинов
Д. Синтез комплемента
57. Гиперчувствительность немедленного типа обеспечивается:
А. IgG
Б. Ig A
В. Ig E+
Г. Т-киллерами
Д. IgM
58. МНС IIкласса синтезируются:
А. Всеми бактериями
Б. Только патогенами
В. Только макрофагами и В-лимфоцитами+
Г. Только хламидиями
Д. Вирусами
59. Антигенным дрейфом обладают:
А. Антиганы лейкоцитов
Б. Антигены эритроцитов
В. Антиганы вируса гриппа+
Г. Антигены ВИЧ+
Д. Тканевые антигены
60. Валентность секреторногоIgA
А. 2
Б. 4+
В. 6
Г. 8
Д. 10
43
Тестовые задания 2-го уровня
1.
Компоненты реакции агглютинации: а) гемолитическая сыворотка, б) эритроциты
барана, в) исследуемая сыворотка, г) физиологический раствор, д) комплемент.
2.
На латинском языке сыворотка называется: …………………………..
3.
Для диагностики сифилиса используют реакцию: а) Видаля, б) Хеддльсона, в)
Райта, г) Вассермана, д) Борде - Жангу.
4.
Дляэкспресс – диагностики инфекционных заболеваний используют следующую
реакцию: а) ИФА, б) РСК, в) РИА, г) РИФ, д) РА.
5.
Для диагностики хронической формы гонореи используют реакцию:
а)
Вассермана, в) БордеЖангу, в) Райта, г) Видаля, д) Манту.
6.
В
реакции
связывания
комплемента
участвуют
две
системы:
1)……………………………….система и 2) ……………………система.
7.
В РСК индикарной системой является: …………………… .
8.
К серологическим реакциям относятся: а) Дика, б) Шика, в) Митчини, г) Манту, д)
Видаля.
9.
В ИФА меткой антигена или антитела является: а) фермент, б) сыворотка, в)
эритроциты барана, г) радиоактивные изотопы.
10.
Реакции, протекающие с укрупнением антигена: а) РСК, б) ПЦР, в) ИФА, г) РА,
д) РИА.
11.
Реакции, протекающие с нейтрализацией антигена: а) связывания комплемента, б)
агглютинации, в) иммуноферментный анализ, г) радиоиммунологический анализ, д)
полимеразно – цепная реакция, е) флоккуляции.
12.
Реакции, протекающие с участием комплемента: а) РА, б) РСК, в) РПГА, г)
гемолиза, д) бактериолиза.
13.
Реакции, протекающие с участием фагоцитов: а) РА, б) РСК, в) ПЦР, г) РПГА, д)
ОФР.
14.
Реакции, протекающие с участием меченых антигенов или антител: а) РСК, б) РА,
в) РПГА, г) ИФА, д) ПЦР.
15.
Мелкозернистую О-агглютинацию дают бактерии, лишенные ……….
16.
Крупно-хлопьевидный осадок характерен для бактерий имеющих ……
17.
Для постановки РПГА используют……………..
18.
При положительном результате РПГА эритроциты выпадают в осадок в виде
………………., а при отрицательном в виде…………………
19.
Расшифровать аббревиатуру слов – РПГА, ПЦР, РСК
20.
Варианты постановки реакции преципитации (2).
21.
Реакция Кумбса иначе называется……………… тест. Используют для
определения …………………………….. или ………… антител.
22.
Неполные антитела………….валентны, поскольку они имеют………
23.
Реакция преципитации для определения сибиреязвенного антигена иначе
называется реакция ………………… или …………….по ………..
24.
Реакция
преципитации
применяется
в……….………медицине,
в……..промышленности и в ………..для диагностики инфекционных заболеваний.
25.
Реакция, протекающие с нейтрализацией антигена (4).
26.
Реакция локального гемолиза в геле (реакция Ерне) является одним из вариантов
реакции………………………
27.
При постановке реакции Вассермана используют осадочные реакции: Какие!
28.
Современные иммуно…………………, иммуно………….иммунные методы
отличаются от других реакций высокой……………и…………...
29.
К простым реакциям относят: а) РСК, б) РА, в) ПЦР, г) ИФА, д) РИА.
30.
Иммуноблотинг – метод идентификации антигена или антител с помощью
соответствующих известных………………………..
44
31.
Для постановки РА (реакции агглютинации) необходимо иметь: а)……раствор, б)
………….ген, в)………..нин
32.
Для приготовления…………антигена к взвеси агаровой культуры микробов
добавляют 0,2% формалина (инкубация при 37ОС в течение 24 часов).
33.
Для приготовления О - антигенна используют прогревание пробирки со смывом
агаровой культуры в……………….в течение…………..часов.
34.
Ориентировочную реакцию агглютинации ставят: а) в пробирке, б) на предметном
стекле, в) во флаконе, г) в колбе.
35.
Лизины способны проявить свое лизирующее действие на антиген только в
присутствии: а) эритроцитов, б) интерферона, в) комплемента, г) лизоцима.
36.
Реакция бактериолиза иначе называется «Феномен………..»
37.
Иммунные сыворотки содержат ……………… к микробам или их токсинам.
38.
Сыворотку от больного для постановки серологической реакции получают из: а)
плазмы, б) лейкоцитов, в) крови, г) ликвора.
39.
Групповую принадлежность крови определяют постановкой реакции: а)
связывания комплемента, б) преципитации, в) агглютинации, г) ПЦР.
40.
Реакция Кумбса применяется для определения: а) полных антител, б)
комплемента, в) лизинов, г) неполных антител.
41.
Ингредиенты реакции агглютинации для идентификации выделенной культуры:
1)…………….., 2)…………………, 3)………………..
42.
Для постановки РПГА необходимы: 1) сыворотка больного, 2) физиологический
раствор, 3)…………………………
43.
Ингредиенты реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке
больного: 1)…………….., 2)………………, 3)………………..
44.
ИФА иначе называется: а) РА, б) РЭМА, в) РСК, г) ПЦР.
45.
Для метки специфических «антиген» или «антитело» используют: а)
гиалуронидаза, б) фибринолизин, в) пероксидаза, г) плазмокоагулаза.
46.
Реакции между антигенами и антителами invitro называются………………………
реакции.
47.
Серологическая реакция характеризуется …………….. и ……………….
48.
Все серологические реакции можно разделить на 5 групп: Перечислить.
49.
В серологических реакциях определяют главным образом иммуноглобулины (Jg)
классов …………. и ………….
50.
Варианты постановки реакции агглютинации: а) РСК, б) ПЦР, в) РПГА, г) реакция
Кумбса, д) реакция Кунса.
45
Ситуационные задачи
Задача 1. У больного К. 35 лет в иммунограмме выявлены следующие изменения.
ПОКАЗАТЕЛЬ
В НОРМЕ
У ОБСЛЕДУЕМОГО
СD3+лимфоциты в%
60-80
73
CD4+ лимфоциты в%
33-50
40
CD8+лимфоциты в%
16-39
29
CD16+лимфоциты в%
3-10
7
CD20+лимфоциты в%
6-23
21
Индекс CD4+/CD8+
1,5-2,0
1,5
Фагоцитарная активность
%
50-90
68
2-9
5
Фагоцитарное число
Фагоцитарный резерв %
65
IgG, г/л
0,9-4,5
6,0
IgA, г/л
8-20
2
IgM, г/л
0,6-2,5
1,8
Вопросы:
1. Какое звено иммунитета нарушено по результатам представленной
иммунограммы?
2. Какой иммунологический диагноз Вы поставите больному по изменениям в
иммунограмме?
3. Какие иммуномодуляторы можно назначить больному для коррекции выявленных
изменений?
4. Когда необходимо провести повторное иммунологическое обследование после
иммунокоррекции?
5. Какие наиболее часто встречаемые жалобы предъявляет больной с диагнозом
иммунологической недостаточности?
Ответы:
1.
2.
3.
4.
Гуморальное звено иммунитета.
Гипоиммуноглобулинемия (снижение содержания IgA).
Рибомунил, Бронхомунал, ИРС-19, Ликопид.
Не раньше чем через 2 недели после окончания терапии.
46
5. Частые простудные заболевания, длительное течение инфекционных заболеваний,
наличие заболеваний, вызванных условно-патогенной флорой, частые обострения
любых хронических заболеваний.
Задача 2. Больной 20 лет обратился с жалобами на эпизоды чихания (от 10 до 30
раз подряд), на обильные выделение водянистого секрета, приводящим к гиперемии –
раздражению кожи крыльев носа и верхней губы, нарушение носового дыхания, зуд носа,
нёба, глаз, слезотечение. Данные симптомы проявляются в летнее время и наиболее
выражены с утра. Также больной отмечает легкую утомляемость, отсутствие аппетита,
раздражительность.
Вопросы:
1.
2.
3.
4.
5.
Ваш предположительный диагноз?
Какой объём аллергологического обследования Вы назначите пациенту?
Какие группы препаратов показаны в данном клиническом случае?
В каком случае Вы бы назначили местную гормональную терапию в виде спрея?
Возможно ли проведение специфической иммунотерапии у данного больного?
Ответы:
1. Аллергический ринит.
2. Общей анализ крови, иммунологическое обследование, определение IgE-общего,
IgE-специфического, проведение кожных проб.
3. Антигистаминные, стабилизаторы мембран тучных клеток, применение
гормональных назальных спреев, проведение СИТ.
4. В случае выраженного обострения аллергического ринита.
5. Да.
Задача 3. Больной М, 53 лет, перенёс операцию по поводу гангренозноперфоративного аппендицита, диффузного перитонита. Течение послеоперационного
периода осложнилось нижнедолевой левосторонней пневмонией. В иммунограмме
отмечается лейкоцитоз, лимфопения, снижение показателей CD3+клеток, CD4+клеток,
CD8+клеток, снижение ИРИ.
Вопросы:
1. Каково иммунологическое заключение?
2. Какаяиммунокоррекция в сочетание с терапией антибиотиками показана в данном
случае?
3. По какой схеме введения назначается «Имунофан» в данном клиническом случае?
4. Как быстро нужно проводить повторное иммунологическое обследование после
окончания терапии?
5. Какие противопоказания Вы знаете при назначение Т-иммуностимуляторов?
Ответы:
1. Вторичная иммунологическая недостаточность по Т-клеточному звену.
47
2. Назначение Т-иммуностимуляторов, вариантом выбора является “Имунофан”.
3. «Имунофан» 0,005% - 1 мл, №10, внутримышечно. №5 – через день, следующие
№5 – один раз в три дня.
4. Повторное иммунологическое обследование проводится не раньше чем через 2
недели.
5. Противопоказания для иммуностимуляторов: беременность, аутоиммунная
патология, аллергопатология.
Задача 4. Больная П., 49 лет поступила по “03” с направительным диагнозом
острый сывороточноподобный синдром в аллергологическое отделение ГКБ. При
поступлении беспокоили артралгии, одышка, лихорадка, кожный зуд, заложенность носа,
кашель со скудной мокротой, гнойное отделяемое из левого уха.
Из анамнеза известно, что месяц назад лечилась по поводу острого гнойного отита
и ангины антибиотиком аугументином в течение 7 дней без эффекта, в течение месяца
сохранялся субфебрилитет, потливость, познабливание, наблюдалась в поликлинике, где
проходила курс физио- и лазеротерапии. В течение последних 5 суток перед поступление
в отделение состояние средней тяжести.на коже вокруг суставов геморрагическая сыпь,
лимфаденит, herpeslabialis. Также у больной язвенно-некротический стоматит,
левосторонний острый средний отит, отомикоз, грибковое поражение слизистой носа и
глотки, васкулит, артралгии, лихорадка, выраженная слабость. В анализах крови
лейкоцитоз, гиперглобулинемия, повышение уровня трансаминаз и сахара крови, высокие
СОЭ и С-реактивный белок, протеинурия.
Вопросы:
1.
2.
3.
4.
5.
Ваш предположительный диагноз?
В каком отделение больная должна проходить курс лечения?
Что можно выявить на рентгенограммах грудной клетки у данной больной?
Будут ли изменения в иммунограмме при данной патологии, и какие?
Каков объём проводимой терапии в данном клиническом случае?
Ответы:
1. ГранулематозВегенера.
2. В отделение ревматологии.
3. На рентгенограммах грудной клетки у больных гранулематозомВегенера
выявляются узлы, стойкие инфильтраты или полости.
4. Изменения лабораторных и иммунологических показателей при
гранулематозеВегенера свидетельствуют о наличие системного воспалительного
процесса и поражении органов-мишеней. Специфичными для данной патологии
являются АНЦА – антинейтрофильные цитоплазматические антитела.
5. Стандартная схема лечения включает в себя применение иммунодепрессивных
препаратов: гормональная терапия и/или с цитостатиками, а также НПВС,
дезинтоксикационная, симптоматическая терапия.
48
Задача 5. Больная Б.А.Я., 63 года, поступила на лечение в ГКБ. Жалобы при
поступление на боли в суставах кистей и стоп, в тазобедренных суставах, боли в суставах
беспокоят при движение и в покое, утренняя скованность, ограничением подвижности
суставов, сопровождающаяся плохим самочувствием, субфебрилитетом, похуданием,
депрессией, слабостью. За последний год часто болела ОРЗ.
Состояние при поступление относительно удовлетворительное. Кожные покровы
бледные, тургор снижен. Statuslocalis : Двустороннее, симметричное поражение мелких
суставов кистей и стоп, отечность пястно-фаланговых суставов 11 и 1V пальцев левой
кисти и лучезапястных суставов. Ульнарная девиация пястофаланговых суставов.
Положительный симптом “поперечного сжатия”. Амиотрофия тыльной поверхности
правой и левой кисти.
Вопросы:
1.
2.
3.
4.
5.
Ваш предположительный диагноз?
Каков объём проводимого обследования в данном клиническом случае?
Какие изменения в общем анализе крови и иммунограмме можно ожидать?
Каков объём проводимой терапии Вы предполагаете у данного больного?
Какие изменения можно выявить на рентгенограмме кистей рук у данного
больного?
Ответы:
1. Ревматоидный артрит.
2. Рентгенография кистей рук, общей анализ крови и мочи, биохимия крови,
определение ревматоидного фактора, иммуннологическое обследование.
3. В общем анализе крови могут быть: лейкоцитоз или лейкопения, анемия,
тромбоцитоз, лимфоцитоз или лимфопения, ускоренное СОЭ, повышение
концентрации С-реактивного белка. Определение РФ. В иммунограмме: снижение
абс. и отн. содержания CD8+лимфоцитов, повышение абс. и отн. содержания Влимфоцитов, всех классов иммуноглобулинов и ЦИК, повышение концентрации
активированных клеток с фенотипами CD38, CD71, CD95, CD25 и HLADR+клеток.
4. Стандартная схема лечения включает применение иммунодепрессантов:
метотрексата («золотой стандарт» в лечение РА), препаратов золота или
проведение гормонотерапии, НПВС, ФТЛ, ЛФК, проведение внутрисуставных
инъекций гормональными препаратами (кеналог, гидрокортизон, дипроспан) с
противовоспалительными гомеопатическими препаратами.
5. На рентгенограммах суставов можно выявить остеопороз, эрозии, деструкции,
кистовидные просветления, сужение суставной щели.
Задача 6
О чем свидетельствует следующий результат обследования военнослужащего. И. Л. 20
лет:
1. ВП с тетанином положительная ( + + + ) .
2. РГТГА сэритроцитарнымстолбнячнымдиагностикумом положительная в разведении
сыворотки 1:160.
49
Задача 7
Подсчитайте силу анатоксина в реакции флоккуляции, если сила антитоксической
сыворотки равна 200 АЕ_ Инициальная флоккуляция произошла во второй пробирке, где
прореагировало
0,15 мл сыворотки и 2 мл анатоксина.
Задача 8
Определите силу антитоксической сыворотки, если инициальнаяфлоккуляция произошла
в 3-й пробирке, где прореагировало
0,2 мл антитоксической- сыворотки и 2 мл анатоксина.
По условию 2 мл анатоксина составляет 60 Lf.
Задача 9
В лабораторию поступил материал (кожа от полушубка) для выявления сибиреязвенного
антигена. Какую серологическую реакцию следует поставить для обнаружения антигена?
Какие ингредиенты необходимы для этой реакции?
Задача 10
В поликлинику обратился больной 35 лет с саркомой Капоши, которого врач направил для
обследования на СПИД.
Какие серологические методы применяются для диагностики синдрома приобретенного
иммунодефицита?
50