Слайд-планшет для исследования осадка мочи методом Нечипоренко, а также эксудатов, транссудатов, перитонеальной и синовиальной жидкости. Миронова Ирина Ивановна доцент кафедры лабораторной диагностики РМАПО Пластиковый слайд-планшет содержит 10 камер для микроскопического исследования нативных и/или суправитально окрашенных препаратов, приготовленных из биологических жидкостей. Длина слайд-планшета 8 см, ширина – 3 см, толщина – 1,7 мм (рис 1), что примерно соответствует размерам предметных стекол для микроскопии. Каждая камера слайд-планшета покрыта тонкой, идеально прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Расстояние между поверхностью слайд-планшета и «покровным стеклом» позволяет клеточным элементам располагаться однослойно. В каждой камере слайд-планшета лева расположены две серии окружностей, по 9 в каждой. Они видны в проходящем свете и на малом увеличении микроскопа. На большом увеличении микроскопа (объектив х40) одна окружность занимает все поле зрения. Каждая окружность имеет диаметр 0,376 мм, объем одной окружности – 0,011 мкл. Объем каждой серии окружностей составляет 0,0111х9 = 0,099мкл или ≈0,1 мкл. Следовательно, если количество клеточных элементов, подсчитанных в одной серии окружностей Рисунок 1. умножить на 10, то получается содержание клеточных элементов в 1 мкл исследуемой жидкости. Например: в 9-ти окружностях камеры слайд-планшета подсчитано 8 эритроцитов, следовательно в 1 мкл жидкости содержится 80 эритроцитов. Подсчет общего количества клеточных элементов в биологических жидкостях с использованием одной или двух серий окружностей можно производить на малом увеличении микроскопа (окуляр х10, объектив х8 или х10). Дифференциацию клеточных элементов (подсчет лейкоцитарной формулы и количества эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров и других клеточных элементов) ориентировочно можно произвести, используя объектив х20 и окуляры х10. Более точная дифференциация клеток проводится на большом увеличении микроскопа (объектив х40 и окуляры х10). Исследование мочи по методу Нечипоренко Доставленная в лабораторию моча, собранная после туалета наружных половых органов (желательно средняя порция), аккуратно, без пены размешивается и переносится в 10 мл центрифужную пробирку. Если мочи мало, менее 10 мл, вся доставленная моча выливается в центрифужную пробирку, центрифугируется со скоростью 1500-2000 об/мин в течение 10-15 мин. Надосадочную мочу удаляют с помощью пипетки с баллоном. В пробирке оставляют 1 мл мочи с осадком. Осадок аккуратно без пены перемешивают и каплей осадка заполняют слайд-планшет. Лишнюю мочу удаляют с поверхности слайд-планшета кусочком фильтровальной бумаги или ватным тампоном. Препарат помещают на предметный столик микроскопа и при увеличении х200, х250, подсчитывают раздельно количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров. Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мл мочи по формуле: N=X x 1000, где V 1 N – количество форменных элементов в 1 мл мочи, Х – количество форменных элементов в 9 окружностях камеры слайд-планшета, 10 – коэффициент пересчета количества форменных элементов в камере слайд-планшета на 1 мкл мочи, 1000 – количество мочи с осадком в мкл, оставленное для исследования, V – количество мочи в мл, взятое для центрифугирования. Если для центрифугирования всегда берут 10 мл мочи, то окончательный вариант формулы следующий: N = X x 1000 Нормальное количество форменных элементов мочи по А.З. Нечипоренко: Лейкоциты – 2000 в 1 мл мочи. Эритроциты – 1000 в 1 мл мочи. Цилиндры – 20 в 1 мл мочи. Если в 9-ти окружностях обнаружен один цилиндр, необходимо исследовать эту мочу в камере Горяева. При обнаружении в камере Горяева одного и более цилиндров необходимо просмотреть еще не менее 4-х камер, заправленных осадком мочи и усреднить полученный результат. Подсчет клеточных элементов в ликворе, окрашенном реактивом Самсона (определение цитоза) Реактив Самсона: уксусная кислота ледяная 30,0 мл, концентрированная карболовая кислота 2,0 мл, фуксин, спиртовой раствор (1:10) 2,5 мл, дистиллированная вода – до 100 мл. Уксусная кислота разрушает эритроциты, карболовая кислота консервирует клетки и сохраняет их морфологию в течение 2-4 часов, а фуксин окрашивает ядра клеток в вишневый цвет, цитоплазму плазматических клеток – в ярко малиновый цвет, а зернистость эозинофилов окрашивается в коричневато-желтоватый цвет, кроме того, в цитоплазме нейтрофилов просматривается мелкая, пылевидная зернистость коричневато-вишневого цвета. 10-20 капель хорошо перемешанной спинномозговой жидкости поместить в центрифужную или видалевскую пробирку; внести, соответственно, 1-2 капли реактива Самсона и аккуратно, без пены перемешать. Через 10-15 мин вновь перемешать содержимое пробирки и каплей перемешанного окрашенного ликвора заполнить камеру слайд-планшета. Лишний ликвор удалить с поверхности слайд-планшета фильтровальной бумагой или ватным тампоном. Подсчитать общее количество ликворных клеток в 9 окружностях камеры и сделать расчет по формуле: H = X x 10, где H – количество клеток в 1 мкл ликвора; Х – количество клеток в 0,1 мкл, т.е. в 9 окружностях; 10 – коэффициент для пересчета клеток в 1 мкл ликвора. Если клетки в камере слайд-планшета распределились неравномерно, нужно сосчитать клетки во второй серии окружностей и произвести перерасчет на 1 мкл ликвора. В камере слайд-планшета при патологии обычно содержится достаточное количество клеток, позволяющее сосчитать лейкоформулу ликвора. Дифференциацию клеточных элементов необходимо производить при увеличении х 400. Результат выражается в процентах или в абсолютном количестве подсчитанных клеток. Например: общее количество клеток 39, из них: 15 нейтрофилов, 10 лимфоцитов, 5 моноцитов, 4 макрофага, 2 эозинофила и 3 плазматических клетки. Если в камере слайд-планшета клеток мало (единичные) и решается вопрос о нормальном или патологическом количестве клеточных элементов в ликворе, необходимо провести подсчет в камере Фукса-Розенталя. 2 Поиск патологических клеточных элементов, тканевых клочков, комплексов клеток злокачественных новообразований, клеток арахноэндотелия, кристаллов всегда производится на малом увеличении микроскопа. Преимущества исследования биологических жидкостей в слайд-планшетах 1. При работе со слайд-планшетами не используются предметные и покровные стекла 2. Исследование осадка мочи в слайд-планшете позволяет одновременно определить количество клеточных элементов в 1 мл мочи (число Нечипоренко) и получить представление о количестве форменных элементов в поле зрения или в препарате 3. В норме в люмбальном ликворе число клеток сосатвляет 3-5 в 1 мкл. Увеличенное количество клеток (плеоцитоз) определяется с помощью слайд-планшета быстрои достаточно точно. 4. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в ликворе и в осадке мочи требуют для каждого анализа пришлифовывать покровное стекло к камере, что вызывает затруднение в работе и отнимает время. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в камере слайд-планшета производится под фиксированным покровным стеклом 3