Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике».
реклама
ÈÏÀÒÎÂÀ Î.Ì. ÔÎÑÔÎÃËÈÂ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÊËÈÍÈÊÅ ÌÎÑÊÂÀ ÈÇÄÀÒÅËÜÑÒÂÎ _________________ 2005 1 ÁÁÊ ________ ____________ ____________ Àâòîð Èïàòîâà Î.Ì. Ôîñôîãëèâ: ìåõàíèçì äåéñòâèÿ è ïðèìåíåíèå â êëèíèêå. Ìîñêâà: Èçäàòåëüñòâî________________ 2005 - _____ ñ ISBN________ Êíèãà ïîñâÿùåíà âàæíåéøèì àñïåêòàì èçó÷åíèÿ ñòðóêòóðîîáðàçóþùåé è ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ôîñôîëèïèäîâ â êëåòêå 2 ÎÃËÀÂËÅÍÈÅ Ïðåäèñëîâèå ÃËÀÂÀ 1. ÎÁÙÈÅ ÏÐÅÄÑÒÀÂËÅÍÈß Î ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÀÕ 1.1. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è ñâîéñòâà 1.1.1. Æèðíûå êèñëîòû. 1.1.2. Ãëèöåðîôîñôîëèïèäû 1.1.3. Ñôèíãîôîñôîëèïèäû 1.2. Ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ îðãàíîâ è òêàíåé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ 1.3. Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ôîñôîëèïèäîâ ÃËÀÂÀ 2. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÉ ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ ÁÈÎÌÅÌÁÐÀÍ È ËÈÏÎÏÐÎÒÅÈÍΠ2.1. Ñòðîåíèå áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí 2.2. Àñèììåòðèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ìåìáðàíå. 2.3. Æèäêîñòíîñòü áèîìåìáðàí êàê ôàêòîð ðåãóëÿöèè ìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ. 2.4. Ìåìáðàííûå áåëêè. 2.5. Ëàòåðàëüíàÿ ãåòåðîãåííîñòü áèîìåìáðàí. 2.6. Ñîñòàâ è ìîëåêóëÿðíàÿ îðãàíèçàöèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè ÃËÀÂÀ 3. ÔÓÍÊÖÈÎÍÀËÜÍÀß ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÊËÅÒÊÅ 3.1. Ôîñôàòèäèëõîëèí 3.2. Ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí 3.3. Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû. 3.3.1. Îáùèå ôóíêöèè àíèîííûõ ôîñôîëèïèäîâ è èõ âëèÿíèå íà àêòèâíîñòü âíåìåìáðàííûõ áåëêîâ. 3.3.2. Ñïåöèôè÷åñêèå ôóíêöèè èíäèâèäóàëüíûõ àíèîííûõ ôîñôîëèïèäîâ. 3.4. Ñôèíãîìèåëèí è äðóãèå ñôèíãîëèïèäû. 3.5. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ëèçîôîñôîëèïèäîâ. 3.5.1. Ëèçîñôèíãîëèïèäû 3.5.2. Ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäû. 3.5.3. Ñî÷åòàííîå äåéñòâèå ñôèíãîëèïèäîâ è ëèçîôîñôîëèïèäîâ íà êëåòî÷íûå ïðîöåññû. 3.6. Ôóíêöèè æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ ÃËÀÂÀ 4. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÏÐÎÖÅÑÑÀÕ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈß ÊËÅÒÊÈ 4.1. Îñíîâíûå èçìåíåíèÿ â êëåòêàõ ïðè ïîâðåæäåíèè 4.1.1. Ðåàêöèÿ êëåòêè íà èçìåíåíèÿ óñëîâèé. 3 4.1.2. Ïðè÷èíû, âûçûâàþùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè. 4.2. Àïîïòîç è íåêðîç - äâà âàðèàíòà ãèáåëè ïîâðåæäåííîé êëåòêè. 4.2.1. Àïîïòîç. 4.2.2. Èíèöèàöèÿ è òðàíñäóêöèÿ àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíàëà. 4.2.3. Ìèòîõîíäðèàëüíûé ïóòü àïîïòîçà. 4.2.4. Àïîïòîç è ôîñôîëèïèäû. 4.3. Íåêðîç è ïîâðåæäåíèå áèîìåìáðàí. 4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû ïðè íåêðîçå. 4.3.2. Îáðàòèìîñòü ïîâðåæäåíèé. 4.4. Ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí êàê îáðàòèìûé ýòàï íåêðîçà. 4.4.1.Îáùèå áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàíû. 4.4.2. Ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ. 4.4.3. Ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ïðîòåèíàçàìè è ôîñôîëèïàçàìè. 4.4.4. Ìåõàíèçìû çàùèòû êëåòîê îò îêèñëèòåëüíûõ ïîâðåæäåíèé. 4.5. Èçìåíåíèÿ ñîñòàâà ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ òêàíåé ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ. ÃËÀÂÀ 5. ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÉ ÊËÅÒÎÊ ÏÅ×ÅÍÈ. ÌÅÕÀÍÈÇÌÛ ÃÅÏÀÒÎÒÎÊÑÈ×ÍÎÑÒÈ. 5.1. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè êèñëîòàìè 5.2. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ. 5.3. Õåìîêèíû, ìîëåêóëû àäãåçèè è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ ïðè âîñïàëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè. 5.4. Ãåïàòîòîêñè÷íîñòü, âûçûâàåìàÿ äèñôóíêöèåé ìèòîõîíäðèé. 5.5. Òîêñè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè. 5.6. Ëåêàðñòâåííàÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü. ÃËÀÂÀ 6. ÌÅÌÁÐÀÍÍÛÅ ÔÅÐÌÅÍÒÍÛÅ ÑÈÑÒÅÌÛ: ÈÕ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÅ È ÐÅÏÀÐÀÖÈß 6.1. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì áèîìåìáðàí. 6.2. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà êàê ïîêàçàòåëü ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè è èõ ðåïàðàöèÿ ôîñôîëèïèäàìè. ÃËÀÂÀ 7. ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÀß ÊÈÑËÎÒÀ: ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ Â ÊÀ×ÅÑÒÂÅ ÏÐÎÒÈÂÎÂÈÐÓÑÍÎÃÎ ÀÃÅÍÒÀ 7.1. Îñíîâíûå áèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. 7.1.1. Èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà. 4 7.1.2. Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå. 7.1.3. Àíòèîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà 7.1.4. Ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà. 7.1.5. Ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò. 7.1.6. Àíòèêàíöåðîãåííîå äåéñòâèå. 7.1.7. Âëèÿíèå íà îáðàçîâàíèå NO. 7.2. Ïðèìåíåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå. 7.2.1. Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. 7.2.2. Ðåçóëüòàòû êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ. ÃËÀÂÀ 8. ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÀß ÊÎÌÏÎÇÈÖÈß ÍÀ ÎÑÍÎÂÅ ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ È ÔÎÑÔÀÒÈÄÈËÕÎËÈÍÀ ÑÎÈ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß È ÒÅÕÍÎËÎÃÈß ÏÎËÓ×ÅÍÈß 8.1. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ è ýôôåêòèâíîñòè çàùèòíîãî äåéñòâèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû íà ìèêðîñîìàëüíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè. 8.2. Èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. 8.2.1.Ñðàâíèòåëüíàÿ õàðàêòåðèñòèêà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ. 8.2.2. Âëèÿíèå ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 . 8.2.3. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà àêòèâíîñòü ìèêðîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì. 8.2.4. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèàëüíûõ ôåðìåíòîâ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåïàòèòîì. 8.2.5. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ. 8.2.6. Ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà êóëüòóðó. ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ïðè âîçäåéñòâèè òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ 8.3. Òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ôîñôîãëèâà íà îñíîâå ôîñôàòèäèëõîëèíà ñîè è ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. ÃËÀÂÀ 9. ÄÎÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß ÔÎÑÔÎÃËÈÂÀ 9.1. Ñðàâíèòåëüíîå èçó÷åíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòîâ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå â ýêñïåðèìåíòàõ in situ. 9.2. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòà 5 ôîñôîãëèâ â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè îñòðîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4. 9.3. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ôîñôîãëèâà â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑ14. 9.4. Ðàñïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ ôîñôîãëèâà - ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû è ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà - â îðãàíèçìå. 9.5. Òîêñèêîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ôîñôîãëèâà ÃËÀÂÀ 10. ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ ÏÐÅÏÀÐÀÒÀ ÔÎÑÔÎÃËÈÂ. 10.1. Îáîñíîâàíèå êëèíè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ 10.2. Ïðèìåíåíèå êàïñóëüíîé ôîðìû ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ 10.3. Êëèíè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà. 10.4. Ïðèìåíåíèå êîìáèíèðîâàííîãî (êàïñóëüíîãî è â/â) êóðñà ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì. 10.5. Ïåðñïåêòèâû ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà. 10.6. Ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â ïåäèàòðèè. ÐÅÊÎÌÅÍÄÎÂÀÍÍÛÅ ÑÕÅÌÛ ËÅ×ÅÍÈß ÔÎÑÔÎÃËÈÂÎÌ. 6 ÏÐÅÄÈÑËÎÂÈÅ Îñíîâíîé öåëüþ ìîíîãðàôèè Î.Ì.Èïàòîâîé ÿâëÿåòñÿ æåëàíèå îáñóäèòü äâà âîïðîñà, êîòîðûå îáäåëåíû âíèìàíèåì êàê ñîâðåìåííîé áèîõèìèè, òàê è ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãèè. Îáà âîïðîñà ÿâëÿþòñÿ "ïàñûíêàìè" ýòèõ íàóê, èáî ìåæäó äîñòèæåíèÿìè ñîâðåìåííîé áèîìåäèöèíñêîé íàóêè â îáëàñòè ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè è áèîõèìèè è ïðîáëåìàìè, êîòîðûå áóäóò îáñóæäàòüñÿ â ýòîé êíèãå, ñóùåñòâóåò îãðîìíûé ïðîáåë. Ïåðâûé âîïðîñ - ðîëü ôîñôîëèïèäîâ â êëåòêå, èõ ó÷àñòèå â ôóíêöèîíèðîâàíèè êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, ñèãíàëüíûõ ïðîöåññàõ è ò.ä. Ê ñîæàëåíèþ, ôîñôîëèïèäàì ëèøü â ñàìîå ïîñëåäíåå âðåìÿ ñòàëè óäåëÿòü áîëüøå âíèìàíèÿ, ÷åì çà ïðåäøåñòâóþùèå 10-20 ëåò ðàçâèòèÿ áèîõèìèè. Ïðàâäà ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî îñîáûõ äîñòèæåíèé â ýòîé îáëàñòè ïîêà íåò. Îäíàêî íå âûçûâàåò ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî î ðîëè ôîñôîëèïèäîâ â êëåòêå ñòàëî èçâåñòíî ãîðàçäî áîëüøå èìåííî çà ïîñëåäíèå ïÿòü ëåò. Îñîáåííî èíòåðåñíû òå èññëåäîâàíèÿ, â êîòîðûõ îñíîâíîå âíèìàíèå óäåëåíî ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ëèïèäîâ â êëåòêå, òàê êàê âñÿ ïðåäøåñòâóþùàÿ èñòîðèÿ ôîñôîëèïèäîâ, ïî ñóòè, áûëà èñòîðèåé ôîñôîëèïèäîâ êàê ñòðóêòóðíûõ êîìïîíåíòîâ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí è ëèïîïðîòåèíîâ.  äàííîé îáëàñòè íàêîïëåí óæå äîñòàòî÷íî áîëüøîé íàó÷íûé ìàòåðèàë, íî, ê ñîæàëåíèþ, ýòè çíàíèÿ íå ïîëó÷èëè äîëæíîé ðåàëèçàöèè â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå. Ïî ñóòè äåëà, åñëè ìåäèöèíñêèé àñïåêò ïðîáëåìû ðàññìàòðèâàòü â èñòîðè÷åñêîì ïëàíå, òî ôîñôîëèïèäû â êà÷åñòâå ëåêàðñòâ ýôôåêòèâíî áûëè èñïîëüçîâàíû ëèøü îäíîé ôèðìîé ("Íàòòåðìàíí", Ãåðìàíèÿ) à ñîçäàííûå åé â íà÷àëå 60-õ ã.ã. ïðåïàðàòû "Ýññåíöèàëå" è "Ëèïîñòàáèë" äî ñèõ ïîð ÿâëÿþòñÿ åäèíñòâåííûìè íà ìèðîâîì ôàðìàöåâòè÷åñêîì ðûíêå. Àâòîð êíèãè ïîñòàðàëàñü âîñïîëíèòü ñóùåñòâóþùèé ïðîáåë â ôîñôîëèïèäíîé íàóêå è ïðåäëàãàåò âíèìàíèþ ÷èòàòåëåé íîâûé îòå÷åñòâåííûé ëåêàðñòâåííûé ïðåïàðàò "Ôîñôîãëèâ" ãåïàòîïðîòåêòîð ñ àíòèâèðóñíûì äåéñòâèåì. Ñîçäàííàÿ ñ ó÷àñòèåì àâòîðà îðèãèíàëüíàÿ òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ôîðì "Ôîñôîãëèâà" íå èìååò àíàëîãîâ â ìèðå è â íàñòîÿùåå âðåìÿ ýòîò ïðåïàðàò âñå øèðå è øèðå íà÷èíàåò èñïîëüçîâàòüñÿ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè ðàçëè÷íîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. Äðóãîé îáîéäåííûé âíèìàíèåì âîïðîñ, âòîðîé "ïàñûíîê" áèîõèìèè è ôàðìàêîëîãèè - ýòî çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî óãðîçà øèðîêîãî ðàñïðîñòðàíåíèÿ ãåïàòèòà Ñ íàâèñëà íàä âñåì ìèðîì (òàê, íàïðèìåð, â ÑØÀ âèðóñîíîñèòåëÿìè ãåïàòèòà Ñ 7 ÿâëÿþòñÿ îêîëî 4 ìëí. ÷åëîâåê, â íàøåé ñòðàíå ýòà öèôðà ïðèáëèæàåòñÿ ê 3,5 ìëí., à ñîãëàñíî ïðîãíîçàì Âñåìèðíîé îðãàíèçàöèè çäðàâîîõðàíåíèÿ, ÂÎÇ, ê 2010 ãîäó îêîëî ïîëîâèíû íàñåëåíèÿ çåìíîãî øàðà áóäåò èíôèöèðîâàíî ýòèì âèðóñîì) âíèìàíèÿ ýòîìó âîïðîñó óäåëÿåòñÿ íåäîñòàòî÷íî. Íà òî åñòü ñâîè îñíîâàíèÿ. Ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ íàèáîëåå òðóäíûì îáúåêòîì, íàèáîëåå òðóäíîé ìèøåíüþ äëÿ ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãèè. Åñëè ïåðå÷íè ëåêàðñòâ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ëå÷åíèÿ ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòûõ, îíêîëîãè÷åñêèõ, ëåãî÷íûõ, èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé äîñòàòî÷íî îáøèðíû, êàæäûé èç íèõ âêëþ÷àåò íåñêîëüêî äåñÿòêîâ, à òî è ñîòåí íàèìåíîâàíèé, òî â ñëó÷àå ïå÷åíè, ïî ñóòè äåëà, â íàøåì ðàñïîðÿæåíèè íåò ëåêàðñòâ, äåéñòâóþùèõ ïàòîãåíåòè÷åñêè. Íåêîòîðûå ñèìïòîìàòè÷åñêèå ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû, òàêèå êàê "Ãåïàáåíå", "Ãàëñòåíà", "Òûêâåîë", "Õîôèòîë", "Ëàêòóëîçà" è ðÿä äðóãèõ íåëüçÿ íàçâàòü ëåêàðñòâàìè, âîññòàíàâëèâàþùèìè ôóíêöèþ ïå÷åíè. Òàê íàçûâàåìûå "ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñîåäèíåíèÿ" òåðìèí, êîòîðûé ñóùåñòâóåò â ôàðìàêîïåÿõ äàëåêî íå âñåõ ñòðàí, èìååò î÷åíü ðàçìûòîå òîëêîâàíèå.  äîñëîâíîì ïåðåâîäå "ãåïàòîïðîòåêòîðû" - ïðåïàðàòû, çàùèùàþùèå ïå÷åíü. À ÷òî ýòî çíà÷èò? Ïå÷åíü ñàìà âûïîëíÿåò çàùèòíóþ ôóíêöèþ â îðãàíèçìå. ×òî çíà÷èò çàùèùàòü îðãàí, âûïîëíÿþùèé çàùèòíóþ ôóíêöèþ? Òàê ÷òî, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî ýòîò òåðìèí øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí, ñìûñë åãî ïðîäîëæàåò îñòàâàòüñÿ íå ÿñíûì. Åñëè â ñëó÷àå òîêñè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè ìíîãèìè õèìè÷åñêèìè ñîåäèíåíèÿìè òàê íàçûâàåìûå ãåïàòîïðîòåêòîðû è îáëàäàþò íåêîòîðîé ýôôåêòèâíîñòüþ, òî äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ âèðóñíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ, ìåõàíèçì âîçíèêíîâåíèÿ êîòîðûõ äî ñèõ ïîð íå ðàñøèôðîâàí, ýòè ñîåäèíåíèÿ, ïî ñóòè äåëà, íå ÿâëÿþòñÿ ëåêàðñòâåííûìè ïðåïàðàòàìè. Äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ, êàê ïðàâèëî, èñïîëüçóþòñÿ ïðåïàðàòû ñ øèðîêèì ñïåêòðîì àíòèâèðóñíîãî äåéñòâèÿ, ýôôåêòèâíîñòü êîòîðûõ â îòíîøåíèè ïå÷åíè âåñüìà îãðàíè÷åíà. Èç-çà ñëîæíîñòè îðãàíèçàöèè è ìíîãîîáðàçèÿ ôóíêöèé ïå÷åíè ìíîãèå âðà÷è è ôàðìàêîëîãè, â ïðèíöèïå, íå âåðÿò â âîçìîæíîñòü ñîçäàíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé, íàïðàâëåííûõ íà âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ïîðàæåííîé ïå÷åíè, ò.å. ëåêàðñòâ ñî ñòðîãî íàïðàâëåííûì, âîçäåéñòâóþùèì íà ïàòîãåíåç çàáîëåâàíèÿ äåéñòâèåì.  ýòîé ìîíîãðàôèè àâòîð ïîñòàðàëàñü óáåäèòü ÷èòàòåëÿ, ÷òî îäíèì èç ïåðâûõ òàêîãî ðîäà ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ ÿâëÿåòñÿ "Ôîñôîãëèâ", îáúåäèíÿþùèé â ñåáå ñâîéñòâà ãåïàòîïðîòåêòîðà (ÿ èñïîëüçóþ ýòîò íåóäà÷íûé òåðìèí, ò.ê. îí øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â íàøåé ëèòåðàòóðå) è àíòèâèðóñíîãî ïðåïàðàòà øèðîêîãî ñïåêòðà 8 äåéñòâèÿ. Îáúåäèíåíèå ýòèõ äâóõ ìåõàíèçìîâ äåéñòâèÿ â ñîñòàâå îäíîé êîìïîçèöèè ïîçâîëèëî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïîëó÷åííûé ïðåïàðàò íå ïðîñòî ñóììà îò ýòèõ äâóõ ñîñòàâëÿþùèõ, íî è îáëàäàåò ñèíåðãåòè÷åñêèì (ïðåâûøàþùèì ïðîñòîå ñóììèðîâàíèå) ëå÷åáíûì ýôôåêòîì â îòíîøåíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Îäèí èç îñíîâíûõ êîìïîíåíòîâ ýòîãî ïðåïàðàòà ôîñôàòèäèëõîëèí (ëåöèòèí) ñîè îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ âîññòàíàâëèâàòü ñòðóêòóðó ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê, äåéñòâóÿ êàê "ìåìáðàííûé êëåé", "çàêëåèâàþùèé" äåôåêòû ïîâðåæäåííûõ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí íåçàâèñèìî îò èõ ïðîèñõîæäåíèÿ. Ýòîò êîìïîíåíò "Ôîñôîãëèâà" ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì äåéñòâóþùèì íà÷àëîì è òàêîãî õîðîøî èçâåñòíîãî ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà, êàê "Ýññåíöèàëå". Íîâèçíà åãî èñïîëüçîâàíèÿ â ïðåïàðàòå "Ôîñôîãëèâ" çàêëþ÷åíà â ñîâåðøåííî íîâîé òåõíîëîãèè ïðèãîòîâëåíèÿ ñóõîé ïîðîøêîîáðàçíîé ôîðìû ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà, ÷òî íå óäàâàëîñü íèêîìó â ïðîøëîì. Âîçìîæíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà â âèäå ñóõîãî ãðàíóëèðîâàííîãî ïîðîøêà ðàñøèðèëî âîçìîæíîñòü åãî õðàíåíèÿ â êàïñóëàõ â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ëåò. Îðèãèíàëüíàÿ òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ïîçâîëèëà ñîçäàòü óíèêàëüíóþ ôîñôîëèïèäíóþ íàíîñèñòåìó ýìóëüãèðîâàííûõ ìèöåëë è ëèïîñîì, ïðåäñòàâëÿþùóþ ñîáîé óñòîé÷èâûå ÷àñòèöû ñî ñðåäíèì äèàìåòðîì 30 - 50 íì, íå ñîäåðæàùóþ òîêñè÷íûõ ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûõ ñîåäèíåíèé (äåòåðãåíòîâ). Ïðîöåäóðà ïîëó÷åíèÿ òîíêîé ýìóëüñèè ñëîæíûõ ìèöåëë, ñïîñîáíûõ õðàíèòüñÿ â ñóõîì ñîñòîÿíèè â òå÷åíèå 5-6 ëåò, ñîñòàâëÿåò îñíîâó òåõíîëîãèè èçãîòîâëåíèÿ ýòîãî ïðåïàðàòà. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî, êàê è ëþáûå äðóãèå íàíî÷àñòèöû, îíè ìîãóò îáëàäàòü ñîâåðøåííî èíûìè ôèçèêî-õèìè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè ïî ñðàâíåíèþ ñ ìèêðî- è ìàêðîñèñòåìàìè òîãî æå ñîñòàâà, è èçó÷åíèå ýòèõ ñâîéñòâ óæå íà÷àëîñü â ëàáîðàòîðèè àâòîðà. Âòîðûì êîìïîíåíòîì "Ôîñôîãëèâà" ÿâëÿåòñÿ ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà - ñîåäèíåíèå ñ àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ øèðîêî èçâåñòíîå â ßïîíèè, Êèòàå è äðóãèõ ñòðàíàõ Þãî-Âîñòî÷íîé Àçèè.  îñíîâå ìåõàíèçìà åå äåéñòâèÿ ëåæèò èíòåðôåðîíïðîäóöèðóþùàÿ àêòèâíîñòü ýòîãî ñîåäèíåíèÿ, à òàêæå è íåêîòîðûå äðóãèå àíòèâèðóñíûå ýôôåêòû. Ñîåäèíåíèå â îäíîì ïðåïàðàòå äâóõ êîìïîíåíòîâ: ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà, äåéñòâóþùåãî êàê "ìåìáðàííûé êëåé" è âîññòàíàâëèâàþùåãî ôóíêöèþ ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê, ñ îäíîé ñòîðîíû, è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû êàê àíòèâèðóñíîãî êîìïîíåíòà, ñ äðóãîé, ïîçâîëèëî ïîëó÷èòü ëåêàðñòâî íîâîãî ïîêîëåíèÿ, ãåïàòîïðîòåêòîð ñ àíòèâèðóñíûì äåéñòâèåì. Êðîìå òîãî, ñîçäàíèå ñòàáèëüíîé âûñîêîäèñïåðñíîé 9 íàíîñèñòåìû èç ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà ïîçâîëèëî ïîëó÷èòü óíèâåðñàëüíóþ ñèñòåìó äëÿ òðàíñïîðòà ìíîãèõ ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé. Ãèäðîôîáíûå, ïëîõî ðàñòâîðèìûå â âîäå ëåêàðñòâà âêëþ÷àþòñÿ â ÿäðî ôîñôîëèïèäíîé ìèöåëëû, ïðåäñòàâëÿþùåå ñîáîé ãèäðîôîáíîå ïðîñòðàíñòâî, ñîñòîÿùåå èç æèðíûõ êèñëîò ôîñôàòèäèëõîëèíà. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, ôîñôîëèïèäíûå íàíî÷àñòèöû ñ âûñîêî ðàçâèòîé ïîâåðõíîñòüþ ìîãóò ñîðáèðîâàòü äîñòàòî÷íî áîëüøîå êîëè÷åñòâî ãèäðîôèëüíûõ (âîäîðàñòâîðèìûõ) ëåêàðñòâ íà ñâîåé ïîâåðõíîñòè. Ïîýòîìó èíúåêöèîííàÿ ôîðìà "Ôîñôîãëèâà" ìîæåò ñëóæèòü îñíîâîé âûñîêîýôôåêòèâíîé òðàíñïîðòíîé ñèñòåìû, óëó÷øàþùåé áèîäîñòóïíîñòü ìíîãèõ ëåêàðñòâ êàê æèðîðàñòâîðèìûõ (ãèäðîôîáíûõ), òàê è âîäîðàñòâîðèìûõ (ãèäðîôèëüíûõ) ïî ñâîèì ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì. Íåñîìíåííî, ÷òî îñíîâíûì äîñòèæåíèåì àâòîðñêîãî êîëëåêòèâà ÿâëÿåòñÿ ñîçäàíèå îðèãèíàëüíûõ òåõíîëîãèé ïðèãîòîâëåíèÿ íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì - êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé. Íà î÷åðåäè íàõîäèòñÿ ñîçäàíèå äðóãèõ ôîðì ïðåïàðàòà. Ñîçäàííûå îðèãèíàëüíûå âûñîêèå òåõíîëîãèè ïðèãîòîâëåíèÿ ãîòîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì äàëè íîâóþ æèçíü ñòàðûì õîðîøî èçâåñòíûì ñâîèìè ëåêàðñòâåííûìè ñâîéñòâàìè êîìïîíåíòàì "Ôîñôîãëèâà" - ñîåâîìó ôîñôàòèäèëõîëèíó è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòå. Íåñîìíåííî, ÷òî ñîçäàíèå ýòîãî îðèãèíàëüíîãî îòå÷åñòâåííîãî ïðåïàðàòà ÿâëÿåòñÿ ñóùåñòâåííûì äîñòèæåíèåì ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãè÷åñêîé íàóêè è îòå÷åñòâåííîé ôàðìàöåâòè÷åñêîé èíäóñòðèè. Îíî êàê áû îïðîâåðãàåò øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûé òåçèñ, ÷òî Ðîññèÿ íå ãîòîâà ê ñîçäàíèþ íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ è ïîýòîìó âûíóæäåíà äîâîëüñòâîâàòüñÿ ïðîèçâîäñòâîì äæåíåðèêîâ. Ñîçäàíèå ïðåïàðàòà ïî äîñòîèíñòâó áûëî îòìå÷åíî â íàøåé ñòðàíå ïðèñóæäåíèåì ãðóïïå àâòîðîâ, ñðåäè êîòîðûõ è Èïàòîâà Î.Ì. - ïðåìèè Ïðàâèòåëüñòâà ÐÔ çà 2002 ãîä. Íà ìîé âçãëÿä, òàêæå êàê è íà âçãëÿä äðóãèõ àâòîðîâ ýòîãî ïðåïàðàòà è ìíîãèõ âðà÷åé, ïðîâîäèâøèõ êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ, ïðåïàðàòó "Ôîñôîãëèâ" ñóæäåíî áîëüøîå áóäóùåå. Àêàäåìèê ÐÀÌÍ Àð÷àêîâ À.È., äèðåêòîð ÃÓ ÍÈÈ áèîìåäèöèíñêîé õèìèè èì. Â.Í.Îðåõîâè÷à ÐÀÌÍ 10 ÃËÀÂÀ 1. ÎÁÙÈÅ ÏÐÅÄÑÒÀÂËÅÍÈß Î ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÀÕ 1.1. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è ñâîéñòâà Âñå áèîìåìáðàíû, âêëþ÷àÿ ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó è âíóòðåííèå ìåìáðàíû ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé àíñàìáëè ëèïèäíûõ è áåëêîâûõ ìîëåêóë. Ñîäåðæàíèå äðóãèõ êîìïîíåíòîâ ñîñòàâëÿåò, êàê ïðàâèëî, ìåíåå 5%. Ëèïèäû ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îáøèðíûé êëàññ íåïîëÿðíûõ ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé, ðàçëè÷àþùèõñÿ ìåæäó ñîáîé õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðîé. Ê íèì îòíîñÿò æèðíûå êèñëîòû, íåéòðàëüíûå ãëèöåðèäû, ôîñôîëèïèäû, ñôèíãîëèïèäû, âîñêà è ò.ä.  êëåòêå è îðãàíèçìå ëèïèäàì ïðèñóùè òðè îñíîâíûå ôóíêöèè: (1) ýòî âàæíåéøèå ñòðóêòóðíûå êîìïîíåíòû êëåòî÷íûõ ìåìáðàí; (2) âàæíåéøèå áèîýôôåêòîðû, ðåãóëèðóþùèå âíóòðèêëåòî÷íûå ðåàêöèè è ìåæêëåòî÷íûå âçàèìîäåéñòâèÿ; (3) ôîðìà çàïàñà ìåòàáîëè÷åñêîãî òîïëèâà. Ôîñôîëèïèäû (ÔË) ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îñíîâíîé êëàññ ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, ñîäåðæàíèå êîòîðûõ âàðüèðóåò îò 40 äî 90% îáùåãî êîëè÷åñòâà ëèïèäîâ.  ñîñòàâ ÔË âõîäÿò äëèííîöåïî÷å÷íûå íàñûùåííûå èëè íåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû, ñîäåðæàùèå îò 10-12 äî 26-28 àòîìîâ óãëåðîäà. Îáÿçàòåëüíûì ïðèçíàêîì ÔË ÿâëÿåòñÿ íàëè÷èå ôîñôàòíîé ãðóïïû, ê êîòîðîé ïðèñîåäèíåíà ñïåöèôè÷åñêàÿ ïîëÿðíàÿ ãðóïïà. Ïîëÿðíûìè ãðóïïàìè ÿâëÿþòñÿ àçîòèñòûå îñíîâàíèÿ (ýòàíîëàìèí èëè õîëèí), àìèíîêèñëîòíûé îñòàòîê (ñåðèí) èëè óãëåâîäíûé ôðàãìåíò (èíîçèò) [1 - 7]. Ñîïðÿæåíèå ìåæäó æèðíîêèñëîòíîé è ïîëÿðíîé ÷àñòüþ ìîëåêóëû îñóùåñòâëÿåòñÿ â ïðèðîäå, êàê ïðàâèëî, ÷åðåç îäèí èç äâóõ âèäîâ ñëîæíûõ ñïèðòîâ - ãëèöåðèíà èëè àìèíî-ñîäåðæàùåãî ñïèðòà ñôèíãîçèíà (ÑÔ).  çàâèñèìîñòè îò ýòîãî ðàçëè÷àþò ãëèöåðîôîñôîëèïèäû è ñôèíãîôîñôîëèïèäû. Íåñìîòðÿ íà ðàçëè÷èå ñòðóêòóðû îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË, âñå îíè ïîñòðîåíû ïî ñõîæåìó ïðèíöèïó.  ñòðóêòóðå ÔË âûäåëÿþò ïîëÿðíóþ "ãîëîâêó" è äâà ãèäðîôîáíûõ "õâîñòà" (Ðèñ. 1.1.1). Ó ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ ãèäðîôîáíûå õâîñòû ïðåäñòàâëåíû óãëåâîäîðîäíûìè ðàäèêàëàìè æèðíûõ êèñëîò, à ïîëÿðíàÿ ãîëîâêà - îñòàòêîì ôîñôàòà, ñîåäèíåííîãî ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçüþ ñ (àìèíî)ñïèðòîì. Èìåííî ýòî ñî÷åòàíèå îáóñëàâëèâàåò îñíîâíîå ñâîéñòâî ÔË àìôèôèëüíîñòü, ò.å. ñðîäñòâî ê ïîëÿðíîé (âîäíîé) è ê ãèäðîôîáíîé (æèðîâîé) ñðåäàì. Æèðíûå êèñëîòû (ÆÊ) ÿâëÿþòñÿ óíèâåðñàëüíûì êîìïîíåíòîì âñåõ òèïîâ îìûëÿåìûõ ëèïèäîâ, âêëþ÷àÿ ÔË. Îíè âî ìíîãîì îïðåäåëÿþò ñâîéñòâà ÔË è îñîáåííîñòè èõ áèîëîãè÷åñêîãî 11 Ðèñ. 1.1.1. Ñòðóêòóðà ìîëåêóëû òèïè÷íîãî ãëèöåðîôîñôîëèïèäà À - õèìè÷åñêàÿ ôîðìóëà; Á - ïðîñòðàíñòâåííîå ðàñïîëîæåíèå àòîìîâ;  - ïðèíÿòîå óñëîâíîå èçîáðàæåíèå. ôóíêöèîíèðîâàíèÿ.  ìîëåêóëå ÔË æèðíûå êèñëîòû ñîåäèíåíû ñ ãëèöåðèíîì (ñôèíãîçèíîì) ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçüþ, â îáðàçîâàíèè êîòîðîé ó÷àñòâóþò êàðáîêñèëüíûå ãðóïïû æèðíîé êèñëîòû è ãèäðîêñèëüíàÿ ãðóïïà ñïèðòà. Ñóùåñòâóåò áîëüøîå ðàçíîîáðàçèå îñòàòêîâ æèðíûõ êèñëîò, êîòîðîå îïðåäåëÿåòñÿ äëèíîé óãëåâîäîðîäíîé öåïè, êîëè÷åñòâîì è ìåñòîì ðàñïîëîæåíèÿ â íåé äâîéíûõ ñâÿçåé. Íàëè÷èå äâîéíîé ñâÿçè - ò.å. íåíàñûùåííîñòü âàæíàÿ õàðàêòåðíàÿ ÷åðòà êàæäîé êèñëîòû, ÷àñòî îïðåäåëÿþùàÿ åå ïîëîæåíèå â ìîëåêóëå ôîñôîëèïèäà, åãî ïîâåäåíèå è ñâîéñòâà â êëåòî÷íîé ìåìáðàíå. Íàñûùåííûå, ìîíîíåíàñûùåííûå è ïîëèíåíàñûùåííûå ÆÊ â ðàçëè÷íûõ êîìáèíàöèÿõ ïðèñóòñòâóþò â ìîëåêóëàõ ÔË ïðàêòè÷åñêè êàæäîãî ïðèðîäíîãî îáúåêòà (áèîìåìáðàí èëè ëèïîïðîòåèíîâ). Íåñìîòðÿ íà ÷ðåçâû÷àéíîå ðàçíîîáðàçèå ÆÊ â ïðèðîäå (èõ íàñ÷èòûâàþò áîëåå 800 [8]), â ñîñòàâå ëèïèäîâ è ÔË òêàíåé æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà êîëè÷åñòâî âñòðå÷àþùèõñÿ æèðíûõ êèñëîò îãðàíè÷åíî 20, à ïðàêòè÷åñêè - åñëè íå ñ÷èòàòü ìèíîðíûõ, äîëÿ êîòîðûõ ìåíåå 0.1% - îïðåäåëÿþò 10-12 îñíîâíûõ òèïîâ æèðíûõ êèñëîò. Íî äàæå è ýòîãî êîëè÷åñòâà äîñòàòî÷íî, ÷òîáû îáåñïå÷èòü øèðîêîå ðàçíîîáðàçèå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ êàæäîãî èç ïðèðîäíûõ ôîñôîëèïèäîâ. 1.1.1. Æèðíûå êèñëîòû. Îñíîâíûå íàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû ÔË æèâîòíûõ 12 îðãàíèçìîâ - ïàëüìèòèíîâàÿ (Ñ16:0) è ñòåàðèíîâàÿ (Ñ18:0). Ðåæå âñòðå÷àþòñÿ, õîòÿ ïðèñóòñòâóþò â ìèíîðíûõ êîëè÷åñòâàõ â æèâîòíûõ òêàíÿõ, íàñûùåííûå êèñëîòû ñ áîëåå êîðîòêîé öåïüþ Ñ14:0 (ìèðèñòèíîâàÿ) èëè Ñ8:0 (êàïðèëîâàÿ), à òàêæå ñ áîëåå äëèííîé öåïüþ, íàïðèìåð Ñ22:0 (ëèãíîöåðèíîâàÿ êèñëîòà). Âñå æèâîòíûå êëåòêè ñïîñîáíû ñèíòåçèðîâàòü de novo íàñûùåííûå ÆÊ, ïðåèìóùåñòâåííî ïàëüìèòèíîâóþ, à òàêæå ñòåàðèíîâóþ, áåãåíîâóþ (Ñ20:0) è ëèãíîöåðèíîâóþ êèñëîòû. Èç ìîíîíåíàñûùåííûõ, íàçûâàåìûõ ìîíîåíîâûìè, æèðíûõ êèñëîò â ÔË ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì îëåèíîâàÿ êèñëîòà (Ñ18:1), à òàêæå - çíà÷èòåëüíî â ìåíüøåì êîëè÷åñòâå ïàëüìèòîëåèíîâàÿ (Ñ16:1). Áîëåå ïîëîâèíû æèðíûõ êèñëîò ÔË ñîäåðæàò äâå è áîëåå äâîéíûå ñâÿçè (äèåíîâûå ÆÊ è ïîëèåíîâûå ÆÊ, íàçûâàåìûå òàêæå ïîëèíåíàñûùåííûìè æèðíûìè êèñëîòàìè - ÏÍÆÊ). Ó÷èòûâàÿ ðàçëè÷èÿ ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ è áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÏÍÆÊ, èõ ðàçäåëÿþò íà ñåìåéñòâà, èñõîäÿ èç ïîëîæåíèÿ äâîéíîé ñâÿçè â öåïè æèðíîé êèñëîòû îòíîñèòåëüíî êîíå÷íîãî àòîìà óãëåðîäà (ω- èëè n-).  ïðèðîäå ðàñïðîñòðàíåíû äâà îñíîâíûõ ñåìåéñòâà ÏÍÆÊ, êîòîðûå îáðàçóþòñÿ èç ëèíîëåâîé è àëüôà-ëèíîëåíîâîé êèñëîò: n-6 è n-3.  ïðîöåññàõ ìåòàáîëèçìà â êëåòêå â ìîëåêóëó ÆÊ ìîãóò áûòü ââåäåíû äîïîëíèòåëüíûå äâîéíûå ñâÿçè. Ýòó ðåàêöèþ êàòàëèçèðóþò ôåðìåíòû äåñàòóðàçû. Ïðè äåéñòâèè äðóãèõ ôåðìåíòîâ, ýëîíãàç, äëèíà óãëåâîäîðîäíîãî ñêåëåòà ìîæåò áûòü óâåëè÷åíà íà 2 àòîìà óãëåðîäà. Òàêèì îáðàçîì, ïðè äåéñòâèè ýëîíãàç è äåñàòóðàç ÆÊ ìîãóò ñòàòü äëèííåå è ïðèîáðåñòè áîëüøåå ÷èñëî äâîéíûõ ñâÿçåé. Ðàñòèòåëüíûå êëåòêè èìåþò â öèòîçîëå òàêèå äåñàòóðàçû, êîòîðûå ïîçâîëÿþò èì ñèíòåçèðîâàòü ÏÍÆÊ ñåìåéñòâà n-3 è n-6, èìåþùèå â óãëåâîäîðîäíîé öåïè äâå è áîëåå äâîéíûõ ñâÿçè. Äåñàòóðàçû æèâîòíûõ êëåòîê ìîãóò îáðàçîâûâàòü äâîéíûå ñâÿçè, óäàëåííûå îò êàðáîêñèëüíîé ãðóïïû íå äàëåå 9 àòîìà óãëåðîäà. Ïîýòîìó â îðãàíèçìå ÷åëîâåêà n-3 è n-6 ÏÍÆÊ, ñîäåðæàùèå äâîéíûå ñâÿçè äèñòàëüíåå 9 àòîìà, íå ìîãóò îáðàçîâûâàòüñÿ: n-6 ëèíîëåâàÿ Ñ18:2 (∆9,12), n-3 ëèíîëåíîâàÿ Ñ18:3 (∆9,12,15). Ïîñêîëüêó ýòè êèñëîòû íåîáõîäèìû äëÿ íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ îðãàíèçìà, îíè äîëæíû ïîñòóïàòü ñ ïèùåé, ïîýòîìó ÏÍÆÊ n-6 è n-3 íàçûâàþò ýññåíöèàëüíûìè æèðíûìè êèñëîòàìè. Ëèíîëåâààÿ êèñëîòàà, 18:2(n-66) - ñàìûé ðàñïðîñòðàíåííûé êîìïîíåíò ðàñòèòåëüíûõ ëèïèäîâ è âñåõ êîììåð÷åñêèõ ìàñåë, ïðîèçâîäèìûõ èç ñåìÿí. Õîòÿ âåñü ëèíîëåàò, ïðèñóòñòâóþùèé â æèâîòíûõ òêàíÿõ, ïîñòóïàåò òîëüêî ñ ïèùåé, â áîëüøèíñòâå 13 êëàññîâ ëèïèäîâ ìëåêîïèòàþùèõ îí ñîñòàâëÿåò - âìåñòå ñ îáðàçóþùåéñÿ èç íåãî àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé - 15-25%.  êàðäèîëèïèíå êëåòîê ñåðäöà ýòà öèôðà ìîæåò äîñòèãàòü 75% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ÆÊ. Ëèíîëåâàÿ êèñëîòà òàêæå ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøèì êîìïîíåíòîì ÔË ðûá, õîòÿ ó ïîñëåäíèõ ïðåîáëàäàþò æèðíûå êèñëîòû ñåìåéñòâà n-3. Aðààõèäîíîâààÿ êèñëîòàà, 20:4(n-66) - âàæíåéøèé ìåòàáîëèò ëèíîëåâîé êèñëîòû â æèâîòíûõ òêàíÿõ. Ýòî íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àþùèéñÿ ïîëèíåíàñûùåííûé êîìïîíåíò ÔË, à â îäíîì èç êëàññîâ ÔË - ôîñôàòèäèëèíîçèòå - îíà ñîñòàâëÿåò áîëåå 40% îò âñåõ ÆÊ. Ìíîãèå áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå ñîåäèíåíèÿ, âêëþ÷àÿ ïðîñòàãëàíäèíû (ðÿäà PG2), òðîìáîêñàíû, ëåéêîòðèåíû è ëèïîêñèíû, ÿâëÿþòñÿ ïðîèçâîäíûìè àðàõèäîíîâîé êèñëîòû. Àëüôàà-ë ëèíîëåíîâààÿ êèñëîòàà, 18:3(n-33) - îñíîâíîé êîìïîíåíò ëèñòüåâ è îñîáåííî ôîòîñèíòåçèðóþùåé ñèñòåìû âîäîðîñëåé è âûñøèõ ðàñòåíèé. Ñîäåðæàíèå ëèíîëåíîâîé êèñëîòû â ëüíÿíîì ìàñëå ñîñòàâëÿåò â ñðåäíåì 65% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ÆÊ, è ïîýòîìó ýòî ìàñëî î÷åíü ÷óâñòâèòåëüíî ê îêèñëåíèþ. Ñîåâîå è ðàïñîâûå ìàñëà ñîäåðæàò òîëüêî äî 7% ëèíîëåíàòà, ïîýòîìó îíè áîëåå óñòîé÷èâû ê îêèñëåíèþ.  êëåòêàõ æèâîòíûõ àëüôà-ëèíîëåíîâàÿ êèñëîòà ÿâëÿåòñÿ ìèíîðíûì êîìïîíåíòîì. Îñòàëüíûå n-3 ÆÊ ñèíòåçèðóþòñÿ â ðàñòèòåëüíûõ è æèâîòíûõ êëåòêàõ èç àëüôà-ëèíîëåíîâîé êèñëîòû â õîäå ïîñëåäîâàòåëüíîãî óäëèíåíèÿ (ýëîíãàöèè) è äåñàòóðàöèè. Âñå æèðíûå êèñëîòû n-3 ðÿäà ÿâëÿþòñÿ ýññåíöèàëüíûìè, òàê êàê èõ èñòî÷íèê, àëüôà-ëèíîëåíîâàÿ êèñëîòà, ïîñòóïàåò â îðãàíèçì òîëüêî ñ ïèùåé. Ñîõðàíåíèå ïîñòîÿííîãî óðîâíÿ íåíàñûùåííîñòè æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ áèîìåìáðàí íåîáõîäèìî â ïåðâóþ î÷åðåäü äëÿ ïîääåðæàíèÿ îïðåäåëåííûõ åå ôèçè÷åñêèõ ñâîéñòâ, òàêèõ, êàê ïðîíèöàåìîñòü, æèäêîñòíîñòü è ò.ä. Òàêèì îáðàçîì, ýññåíöèàëüíûå ëèíîëåâàÿ è ëèíîëåíîâàÿ êèñëîòû íå ñèíòåçèðóþòñÿ â òêàíÿõ æèâîòíûõ è äîëæíû îáÿçàòåëüíî ïîñòóïàòü ñ ïèùåé. Îíè àáñîëþòíî íåîáõîäèìû îðãàíèçìó äëÿ ðîñòà, ðåïðîäóêöèè è íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ.  ýêñïåðèìåíòàõ ñ íîâîðîæäåííûìè æèâîòíûìè ñ äåôèöèòîì ýññåíöèàëüíûõ ÏÍÆÊ ïîêàçàíà çàäåðæêà ðîñòà, íàðóøåíèå öåëîñòíîñòè ìåìáðàí è ãèáåëü êëåòîê ïî÷åê è ïå÷åíè, ðàçâèòèå äåðìàòèòîâ è, êàê ðåçóëüòàò, ãèáåëü îðãàíèçìà â öåëîì. Äåôèöèò ýññåíöèàëüíûõ ÆÊ ïðîÿâëÿåòñÿ ó íîâîðîæäåííûõ äåòåé èëè ó âçðîñëûõ, íàõîäÿùèõñÿ íà ïàðåíòåðàëüíîì ïèòàíèè, à òàêæå ïðè íåêîòîðûõ ãåíåòè÷åñêèõ íàðóøåíèÿõ. Àáñîëþòíûå 14 ïîòðåáíîñòè îðãàíèçìà æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà â ýññåíöèàëüíûõ ÆÊ ñåìåéñòâà n-3 è n-6 çàâèñÿò îò ðÿäà ôàêòîðîâ, âêëþ÷àÿ âèä è ïîë. Êàê ïðàâèëî, ïîòðåáíîñòü ñîñòàâëÿåò äî 1-2% îò âñåõ ïîñòóïèâøèõ ñ ïèùåé æèðíûõ êèñëîò äëÿ ëèíîëåàòà è íåñêîëüêî ìåíüøå äëÿ ëèíîëåíàòà. Æèâîòíûì è ÷åëîâåêó ëèíîëåàò è ëèíîëåíàò íåîáõîäèìû äëÿ ñèíòåçà âàæíåéøèõ äëèííîöåïî÷å÷íûõ ìåòàáîëèòîâ. Ôóíêöèè àðàõèäîíîâîé, ýéêîçàïåíòàåíîâîé è äîêîçàãåêñàåíîâîé êèñëîò, îïðåäåëÿþùèå èõ íåçàìåíèìîñòü äëÿ îðãàíèçìà, åùå äî êîíöà íå èçó÷åíû. Îíè ïðèäàþò îïðåäåëåííûå ñâîéñòâà ìåìáðàííûì ÔË. Êðîìå òîãî, ýòè ÏÍÆÊ ÿâëÿþòñÿ ïðåäøåñòâåííèêàìè ýéêîçàíîèäîâ, âêëþ÷àÿ ïðîñòàãëàíäèíû (PG1, PG2 è PG3 ðÿäà), òðîìáîêñàíû, ëåéêîòðèåíû è ëèïîêñèíû [9 - 11]. Îáùèé ïëàí ïîñòðîåíèÿ ìåìáðàí, îïðåäåëåííûé íàáîð â ìåìáðàíå ÔË è èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ, ãåíåòè÷åñêè çàêðåïëåííûé è ïðèíÿòûé åñòåñòâåííûì îòáîðîì, ñîõðàíèëèñü â ïðîöåññå ýâîëþöèè [12]. Îäíàêî ïîñòîÿííûì ÿâëÿåòñÿ òîëüêî îáùèé ïðèíöèï ïîñòðîåíèÿ ìåìáðàíû, â òî âðåìÿ êàê ñîñòàâ ÔË è èõ æèðíûõ êèñëîò â ìåìáðàíàõ îòäåëüíûõ âèäîâ æèâîòíûõ ñóùåñòâåííî îòëè÷àåòñÿ. Äî ñèõ ïîð íå âïîëíå ÿñíî, çà÷åì ïðèðîäå ïîíàäîáèëîñü òàêîå ðàçíîîáðàçèå ëèïèäíûõ ñòðóêòóð. Îäíàêî òîò ôàêò, ÷òî â îäíîé ìåìáðàíå ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü áîëåå ñîòíè ðàçíîðîäíûõ ïî ñòðóêòóðå ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé, ñîîòíîøåíèÿ êîòîðûõ ñïåöèôè÷íû äëÿ êàæäîãî òèïà ìåìáðàí, ïîêàçûâàåò, ÷òî îíè äîëæíû ïðèíèìàòü ó÷àñòèå âî ìíîãèõ ïðîöåññàõ, ïðîòåêàþùèõ â êëåòêå. Óíèêàëüíûå ôóíêöèè â êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ íåêîòîðûõ èíäèâèäóàëüíûõ âèäîâ ÔË íà÷èíàþò âûÿâëÿòüñÿ òîëüêî â ïîñëåäíèå ãîäû. 1.1.2. Ãëèö öåðîôîñôîëèïèäû.  ìîëåêóëàõ ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ îãðàíè÷åí íàáîð ïîëÿðíûõ ãðóïï (ãîëîâîê).  çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà ýòèõ ãðóïï ðàçëè÷àþò îñíîâíûå êëàññû: ôîñôàòèäèëõîëèí, ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí, ôîñôàòèäèëñåðèí, ôîñôàòèäèëèíîçèò, ôîñôàòèäèë-ãëèöåðèí. (Ðèñ. 1.1.2) Ôîñôààòèäèëõîëèí (ÔÕ, òðèâèàëüíîå íàçâàíèå - ëåöèòèí) ôîñôîëèïèä, íàèáîëåå øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûé âî âñåõ æèâûõ êëåòêàõ (Ðèñ. 1.1.2.1). Åãî ñîäåðæàíèå äîñòèãàåò â ñðåäíåì 50% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïèäîâ. ÔÕ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì "ñòðîèòåëüíûì áëîêîì" ìåìáðàí êëåòîê è ñóáêëåòî÷íûõ îðãàíåëë. Ñîäåðæàíèå ýòîãî ôîñôîëèïèäà âûøå âî âíåøíåì ìîíîñëîå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, ÷åì âî âíóòðåííåì. ÔÕ òàêæå 15 Ðèñ. 1.1.2. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ãëèöåðîôîñôàëèïèäîâ 16 îòíîñèòñÿ ê îñíîâíûì ôîñôîëèïèäàì, öèðêóëèðóþùèì â êðîâè, ãäå îí ÿâëÿåòñÿ èíòåãðàëüíûì êîìïîíåíòîì ëèïîïðîòåèíîâ, îñîáåííî âûñîêîé ïëîòíîñòè. Ñîäåðæàíèå ÔÕ â ëèïîïðîòåèíàõ âûøå, ÷åì â ìåìáðàíàõ êëåòîê è äîñòèãàåò 70 - 75% âñåõ ÔË. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, ÔÕ ðåäêî îáíàðóæèâàåòñÿ â áàêòåðèàëüíûõ ìåìáðàíàõ, ãëàâíûì îáðàçîì ó ãðàì-îòðèöàòåëüíûõ âèäîâ. ÔÕ äîìèíèðóåò âî ìíîãèõ òêàíÿõ îðãàíèçìà ÷åëîâåêà è ñîñòàâëÿåò îò 30 äî 45% âñåõ ôîñôîëèïèäîâ. Òàê, âûñîêîå ñîäåðæàíèå ÔÕ îáíàðóæåíî â òêàíÿõ ëåãêèõ (46,5%), ïå÷åíè (43,6%) è ñåëåçåíêå (41,2%) [13]. Ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ ìîëåêóëà ÔÕ íå íåñåò ñóììàðíîãî çàðÿäà è ÿâëÿåòñÿ öâèòòåðèîíîì.  òêàíÿõ æèâîòíûõ ÔÕ ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì â äèàöèëüíîé ôîðìå (ðèñ. 1.1.2.), ïðè÷åì, êàê ïðàâèëî, R' ïðåäñòàâëåíà íàñûùåííîé ÆÊ, à R''- íåíàñûùåííîé). Òêàíè áîëüøèíñòâà æèâîòíûõ îðãàíèçìîâ ñî ñõîäíîé ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ èìåþò ÔÕ ñî ñõîäíûì æèðíîêèñëîòíûì ñîñòàâîì. Êðîìå òîãî, â ñîñòàâ ìåìáðàí êëåòîê òêàíåé íåêîòîðûõ îðãàíîâ âõîäèò ÔÕ, ñîäåðæàùèé âûñîêîå êîëè÷åñòâî íàñûùåííûõ ÆÊ. Íàïðèìåð, èçâåñòíî, ÷òî ÔÕ ëåãêèõ ó âñåõ âèäîâ æèâîòíûõ ñîäåðæèò âûñîêîå êîëè÷åñòâî (50% è áîëåå) äèïàëüìèòîèëôîñôàòèäèëõîëèíà (ÄÏÔÕ). Ýòî îáóñëîâëåíî òåì, ÷òî ÄÏÔÕ - îñíîâíîé êîìïîíåíò ëåãî÷íîãî ñóðôàêòàíòà, îáåñïå÷èâàåò ñòàáèëüíîñòü àëüâåîë, ñíèæàÿ èõ ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå äî î÷åíü íèçêîãî óðîâíÿ. Íàðÿäó ñ âàæíåéøåé ðîëüþ ÔÕ êàê ñòðóêòóðíîãî êîìïîíåíòà ìåìáðàí, óñòàíîâëåíû åãî îïðåäåëåííûå, íå ìåíåå âàæíûå ôóíêöèè â ïåðåäà÷å êëåòî÷íîãî ñèãíàëà, íàïðèìåð, â ïðîöåññå îáðàçîâàíèÿ ôîíäà äèãëèöåðèäîâ èç ÔÕ. Îäíàêî, îòìå÷àþò, ÷òî áîëüøîå êîëè÷åñòâî ÔÕ â êëåòêå èíãèáèðóåò åãî ïðåâðàùåíèå â äèãëèöåðèäû. Ñïåöèôè÷åñêîå ðàñùåïëåíèå ÔÕ â òêàíÿõ äëÿ îáðàçîâàíèÿ ðÿäà áèîàêòèâíûõ êîìïîíåíòîâ ïðîèñõîäèò ïîä äåéñòâèåì ôîñôîëèïàç, àêòèâèðóåìûõ ðÿäîì àãîíèñòîâ. Ëèçîôîñôààòèäèëõîëèí (ëèçîÔÕ) - ôîñôîëèïèä, â ìîëåêóëå êîòîðîãî åäèíñòâåííûé îñòàòîê ÆÊ íàõîäèòñÿ â ïîëîæåíèè sn-1. Îí ñîäåðæèòñÿ â íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ â áîëüøèíñòâå æèâîòíûõ òêàíåé (Ðèñ. 1.1.2.2). ËèçîÔÕ îáðàçóåòñÿ ïðè ãèäðîëèçå ÔÕ ôîñôîëèïàçîé A2, â õîäå öèêëè÷åñêîãî ïðîöåññà äåàöèëèðîâàíèÿ/ðåàöèëèðîâàíèÿ, êîíòðîëèðóþùåãî ìîëåêóëÿðíûé ñîñòàâ âñåõ âèäîâ ÔË â îðãàíèçìå. Ôîñôîëèïàçà A2 ðàñùåïëÿåò ñëîæíîýôèðíóþ ñâÿçü â ìîëåêóëå ÔÕ â ïîëîæåíèè sn-2 ñ îáðàçîâàíèåì ëèçîÔÕ. 17 Âûñâîáîæäàåìàÿ ïðè ýòîì íåíàñûùåííàÿ æèðíàÿ êèñëîòà, íàïðèìåð, àðàõèäîíîâàÿ, ìîæåò ñëóæèòü ñóáñòðàòîì äëÿ ñèíòåçà ïðîñòàãëàíäèíîâ è ëåéêîòðèåíîâ [1, 11].  ïëàçìå êðîâè ó æèâîòíûõ çíà÷èòåëüíîå êîëè÷åñòâî ëèçîÔÕ îáðàçóåòñÿ ïîä äåéñòâèåì ôåðìåíòà ëåöèòèí-õîëåñòåðèíàöèëòðàíñôåðàçû (ËÕÀÒ), ñåêðåòèðóåìîãî ïå÷åíüþ. Ôåðìåíò êàòàëèçèðóåò ïåðåíîñ æèðíûõ êèñëîò ôîñôàòèäèëõîëèíà èç ïîëîæåíèÿ sn-2 ê ñâîáîäíîìó õîëåñòåðèíó (ÕÑ) â ïëàçìå ñ îáðàçîâàíèåì ýôèðîâ ÕÑ è ëèçîÔÕ [14]. ËèçîÔÕ, êàê è äðóãèå ëèçîôîñôîëèïèäû, â ñâîþ î÷åðåäü ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì äëÿ àöèëòðàíñôåðàç. Àöèëòðàíñôåðàçû, âîçäåéñòâóÿ íà ëèçîÔË, ñïîñîáíû âêëþ÷àòü â ðåàêöèþ ðàçëè÷íûå àöèëüíûå ãðóïïû, ÷òî â èòîãå ïðèâîäèò ê çàìåíå æèðíîêèñëîòíîãî îñòàòêà â èñõîäíîé ìîëåêóëå äèàöèëüíîãî ÔË.  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ àöèëüíûå ãðóïïû, êîòîðûå â íà÷àëüíîé ñòàäèè ñèíòåçà ïåðåìåùàþòñÿ ïîä äåéñòâèåì àöèëòðàíñôåðàç, îòëè÷àþòñÿ îò òåõ àöèëüíûõ ãðóïï, êîòîðûå ïðèñóòñòâóþò â ôîñôîëèïèäå. Òàêèå çàìåíû àöèëüíûõ ãðóïï ÿâëÿþòñÿ ðåçóëüòàòîì âîçäåéñòâèÿ ôîñôîëèïàç À1 è À2. Ôîñôîëèïàçû Ñ è D ðàñùåïëÿþò ñâÿçè îêîëî ôîñôàòíîé è õîëèíîâîé ãðóïï ñîîòâåòñòâåííî (Ðèñ. 1.1.3.). Ðèñ. 1.1.3. Äåéñòâèå ðàçëè÷íûõ ôîñôîëèïàç íà ìîëåêóëó ôîñôîëèïèäà. Ñóùåñòâåííûå êîëè÷åñòâà ëèçîÔÕ âõîäÿò â ñîñòàâ îêèñëåííûõ ëèïîïðîòåèíîâ íèçêîé ïëîòíîñòè (ËÍÏ) è ñ÷èòàþòñÿ "ïàòîëîãè÷åñêèì" êîìïîíåíòîì ËÍÏ, òàê êàê ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî ýòè ëèïîïðîòåèíû ÿâëÿþòñÿ îñíîâíûìè ôàêòîðàìè âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ àòåðîñêëåðîçà [15, 16].  ïîñëåäíèå 1015 ëåò áûëè óñòàíîâëåíû íåêîòîðûå ôóíêöèè ëèçîÔÕ â ïåðåäà÷å êëåòî÷íîãî ñèãíàëà, îïîñðåäîâàííîãî ðåöåïòîðîì, ñîïðÿæåííûì ñ G-áåëêàìè (GPCR) (ñì. ãëàâó 3). 18 Ôîñôààòèäèëýòààíîëààìèí (ÔÝ, òðèâèàëüíîå íàçâàíèå - êåôàëèí) ÿâëÿåòñÿ âòîðûì ïî ðàñïðîñòðàíåíèþ ôîñôîëèïèäîì â ëèïèäàõ æèâîòíûõ è ðàñòåíèé è, êàê ïðàâèëî, ãëàâíûì ëèïèäíûì êîìïîíåíòîì ìåìáðàí ìíîãèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Òàê æå êàê è ÔÕ, ÔÝ ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûì "ñòðîèòåëüíûì áëîêîì" ìåìáðàííîãî áèñëîÿ. ÔÝ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íåéòðàëüíûé öâèòòåðèîííûé ôîñôîëèïèä (Ðèñ.1.1.2.3). Ïî àíàëîãèè ñ ÔÕ, ÔÝ ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæèò îòíîñèòåëüíî âûñîêèå êîëè÷åñòâà àðàõèäîíîâîé è äîêîçàãåêñàåíîâîé êèñëîò. Îäíàêî ÔÝ èìååò ìåíüøóþ "ïîëÿðíóþ ãîëîâêó", ÷åì ÔÕ, è, â îòëè÷èå îò íåãî, ñïîñîáåí îáðàçîâûâàòü äîïîëíèòåëüíûå âîäîðîäíûå ñâÿçè ïðè ïîìîùè êîíöåâîé àìèíîãðóïïû. Ôîñôààòèäèëñåðèí (ÔÑ), èëè 1,2-äèàöèë-sn-ãëèöåðî-3-ôîñôîL-ñåðèí - åäèíñòâåííûé ôîñôîëèïèä â æèâîòíûõ êëåòêàõ, êîòîðûé ñîäåðæèò îñòàòîê àìèíîêèñëîòû. (Ðèñ. 1.1.2.4). Õîòÿ ÔÑ øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â ïðèðîäå ó æèâîòíûõ, ðàñòåíèé è â ìèêðîîðãàíèçìàõ, îí îáû÷íî ñîñòàâëÿåò ìåíåå 10% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïèäîâ. Íàèâûñøåå ñîäåðæàíèå ÔÝ îáíàðóæåíî â òêàíÿõ ìîçãà. Íî â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è ýíäîïëàçìàòè÷åñêîì ðåòèêóëóìå (ÝÐ) êëåòîê åãî êîëè÷åñòâî ìîæåò äîñòèãàòü 20 % îò âñåõ ÔË. Ïî õèìè÷åñêîìó ñòðîåíèþ ÔÑ - àíèîííûé ôîñôîëèïèä ñ òðåìÿ èîíèçèðîâàííûìè ãðóïïàìè: ôîñôàòíîé-, àìèíîè êàðáîêñèëüíîé. Êàê è äðóãèå êèñëûå ëèïèäû, îí ñóùåñòâóåò â ïðèðîäå â ñîëåâîé ôîðìå. Ôîñôààòèäèëèíîçèòîë (ÔÈ) ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøèì ôîñôîëèïèäîì æèâûõ ñèñòåì. Ñ îäíîé ñòîðîíû, ÔÈ - êëþ÷åâîé êîìïîíåíò ìåìáðàíû, à ñ äðóãîé - âàæíåéøèé ó÷àñòíèê ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ðàñòåíèé, æèâîòíûõ è íåêîòîðûõ âèäîâ áàêòåðèé (Ðèñ. 1.1.2.5À). ÔÈ ÿâëÿåòñÿ êèñëûì (àíèîííûì) ôîñôîëèïèäîì, êîòîðûé ñîäåðæèò ôîñôàòèäíóþ êèñëîòó, ñâÿçàííóþ ÷åðåç ôîñôàòíóþ ãðóïïó ñ øåñòèàòîìíûì ñïèðòîì èíîçèòîì (ãåêñàîêñèöèêëîãåêñàíîì).  ìåìáðàíàõ ýòîò ôîñôîëèïèä ëîêàëèçóåòñÿ ïî÷òè ïîëíîñòüþ íà öèòîçîëüíîé ñòîðîíå áèñëîÿ. Îí ïðèñóòñòâóåò âî âñåõ êëåòêàõ è òêàíÿõ æèâîòíûõ, íî â ìåíüøèõ êîëè÷åñòâàõ, ÷åì ÔÕ, ÔÝ è ÔÑ. Áîëüøå âñåãî ÔÈ ñîäåðæèòñÿ â òêàíÿõ ìîçãà, ãäå åãî óðîâåíü ìîæåò äîñòèãàòü 10% îò êîëè÷åñòâà âñåõ ÔË. Õàðàêòåðíîé ÷åðòîé ÔÈ, âûäåëåííîãî èç òêàíåé æèâîòíûõ, ÿâëÿåòñÿ âûñîêîå ñîäåðæàíèå ñòåàðèíîâîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò. Ïîýòîìó â æèâîòíûõ òêàíÿõ ÔÈ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì èñòî÷íèêîì àðàõèäîíîâîé êèñëîòû, íåîáõîäèìîé äëÿ áèîñèíòåçà ýéêîçàíîèäîâ, âêëþ÷àÿ ïðîñòàãëàíäèíû. 19 Èíîçèòîëüíûå ôîñôîëèïèäû (ôîñôîèíîçèòèäû, âêëþ÷àÿ ïîëèôîñôîèíîçèòèäû), ïîâèäèìîìó, èãðàþò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ìåæôàçíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ è â ðåãóëÿöèè ïîâåäåíèÿ áåëêîâ íà ãðàíèöàõ ðàçäåëà ôàç â êëåòêå. Áóäó÷è ïîëèàíèîíàìè, ôîñôîèíîçèòèäû îáåñïå÷èâàþò ýôôåêòèâíûå íåñïåöèôè÷åñêèå ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ ñ áåëêàìè. Ýòè ÔË ÿâëÿþòñÿ îñîáåííî ýôôåêòèâíûìè â ñïåöèôè÷åñêîì ñâÿçûâàíèè ñ òàê íàçûâàåìûìè "ÐÍ" äîìåíàìè êëåòî÷íûõ áåëêîâ (ñì. ãëàâó 3). Íàèáîëåå ñóùåñòâåííîé ðåàêöèåé ìåòàáîëèçìà ÔÈ ïîä äåéñòâèåì ôîñôîëèïàç Ñ ÿâëÿåòñÿ îáðàçîâàíèå äèãëèöåðèäîâ. Èìåííî ÔÈ â æèâîòíûõ è ðàñòèòåëüíûõ êëåòêàõ ÿâëÿåòñÿ èñòî÷íèêîì äèãëèöåðèäîâ - âàæíåéøèõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë äëÿ êëåòîê. Ïðîÿâëåíèÿ áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ðàçëè÷íûõ ñîåäèíåíèé, îáðàçóþùèõñÿ â êëåòêå èç ôîñôîèíîçèòèäîâ, áûëè ïðåäìåòîì èíòåíñèâíîãî èçó÷åíèÿ ïîñëåäíèõ äâàäöàòè ëåò. Ïîêàçàíû ìíîãî÷èñëåííûå ýôôåêòû êàê äèãëèöåðèäîâ, òàê è îòäåëüíûõ ôîñôîðèëèðîâàííûõ èíîçèòèäîâ, ñâÿçàííûå, â îñíîâíîì, ñ ïðåîáðàçîâàíèåì (òðàíñäóêöèåé) êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ. Èçâåñòíî, ÷òî ÔÈ ôîñôîðèëèðóåòñÿ ðÿäîì ðàçëè÷íûõ êèíàç, êîòîðûå ïåðåíîñÿò ôîñôàòíóþ ãðóïïó îò ÀÒÔ ê 4 è 5 ïîëîæåíèÿì èíîçèòíîãî êîëüöà. Òåðìèíîëîãè÷åñêè, ðàçëè÷íûå ñîåäèíåíèÿ, ñîäåðæàùèå èíîçèò, îáúåäèíåíû ïîä îáùèì íàçâàíèåì "ôîñôîèíîçèòèäû". Èçâåñòåí áîëüøîé ðÿä èçîìåðîâ, íî íàèáîëåå âàæíûìè êàê â êîëè÷åñòâåííîì, òàê è â áèîëîãè÷åñêîì îòíîøåíèÿõ ÿâëÿþòñÿ ÔÈ-4-ôîñôàò (PIP) è ÔÈ-4,5-äèôîñôàò (PIP2) (Ðèñ.1.1.2.5Á, Â). Êàê ïðàâèëî, ýòè èçîìåðû ïðèñóòñòâóþò â òêàíÿõ òîëüêî â íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ, ñîñòàâëÿÿ ïðèáëèçèòåëüíî 5% îò êîëè÷åñòâà ÔÈ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ñîäåðæàíèå PIP è PIP2 ïîääåðæèâàåòñÿ íà ïîñòîÿííîì óðîâíå íà âíóòðåííåé ñòîðîíå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ñ ïîìîùüþ ñåðèè íåïðåðûâíûõ è ïîñëåäîâàòåëüíûõ ðåàêöèé ôîñôîðèëèðîâàíèÿäåôîñôîðèëèðîâàíèÿ, êàòàëèçèðóåìûõ ñîîòâåòñòâóþùèìè êèíàçàìè è ôîñôàòàçàìè.  öåëîì, áîëüøèíñòâî ðàçëè÷íûõ ôîñôîèíîçèòèäîâ âêëþ÷åíû â êîíòðîëü ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Îñîáåííî ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ èõ ó÷àñòèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëîâ, äëÿ ïåðåãðóïïèðîâêè àêòèíîâîãî öèòîñêåëåòà è âíóòðèêëåòî÷íîãî âåçèêóëÿðíîãî òðàíñïîðòà. Èõ ñ÷èòàþò èäåàëüíûìè êàíäèäàòàìè â ðåãóëÿòîðû äèíàìè÷åñêèõ êëåòî÷íûõ ìåõàíèçìîâ. Ôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ÔÊ) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ôîñôîëèïèä, âñòðå÷àþùèéñÿ ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ æèâûõ îðãàíèçìàõ. Îíà ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ïðîìåæóòî÷íûì ñîåäèíåíèåì â áèîñèíòåçå òðèãëèöåðèäîâ è áîëüøèíñòâà îñíîâíûõ ÔË. Ìîëåêóëà ÔÊ íåñåò 20 îòðèöàòåëüíûé çàðÿä è òðåáóåò ïðèñóòñòâèÿ ïðîòèâîèîíîâ (Ðèñ. 1.1.2.6). Ëèçîôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ëèçîÔÊ) - 1-àöèë-sn-ãëèöåðèí-3ôîñôàò - îòëè÷àåòñÿ îò ôîñôàòèäíîé êèñëîòû òåì, ÷òî èìååò òîëüêî îäíó ìîëåêóëó ÆÊ íà ìîëåêóëó ôîñôîëèïèäà. Õîòÿ ëèçîÔÊ ïðèñóòñòâóåò â î÷åíü íèçêèõ êîëè÷åñòâàõ òîëüêî â æèâîòíûõ òêàíÿõ, îíà èìååò âàæíîå áèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå, ò.ê. âëèÿåò íà ìíîãèå áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû. ËèçîÔÊ ÿâëÿåòñÿ âíóòðèêëåòî÷íûì ëèïèäíûì ìåäèàòîðîì ñ àêòèâíîñòüþ, ïîäîáíîé ôàêòîðàì ðîñòà. Îíà áûñòðî ïðîäóöèðóåòñÿ è âûñâîáîæäàåòñÿ èç àêòèâèðîâàííûõ òðîìáîöèòîâ, îêàçûâàÿ âëèÿíèå íà ìíîãèå êëåòêè-ìèøåíè. Ôîñôààòèäèëãëèö öåðèí. Ïðè ñîåäèíåíèè äâóõ ìîëåêóë ôîñôàòèäíîé êèñëîòû ÷åðåç ãèäðîêñèë ôîñôàòíîé ãðóïïû, îáðàçóåòñÿ ìîëåêóëà ôîñôàòèäèëãëèöåðèíà (ÔÃ) (Ðèñ. 1.1.2.7). Ôà - îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííàÿ ìîëåêóëà ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ. Ýòîò ôîñôîëèïèä îáëàäàåò âûðàæåííûìè ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûìè ñâîéñòâàìè, ÷òî îïðåäåëÿåò åãî ëîêàëèçàöèþ â ñóðôàêòàíòå àëüâåîë âìåñòå ñ ÄÏÔÕ - îñíîâíûì ÔË ëåãêèõ. Èìåííî âûðàæåííûå ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûå ñâîéñòâà Ôà ïîçâîëÿþò èñïîëüçîâàòü åãî êàê îäèí èç êîìïîíåíòîâ ëèïîñîìàëüíûõ íîñèòåëåé ðÿäà ëåêàðñòâ. Ïðèñîåäèíåíèå åùå îäíîãî ôîñôîãëèöåðèíîâîãî ôðàãìåíòà ÷åðåç ãèäðîêñèë âòîðîé ôîñôàòíîé ãðóïïû, ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ äèôîñôàòèäèëãëèöåðèíà, íàçûâàåìîãî òàêæå êàðäèîëèïèíîì. Êààðäèîëèïèí (ÊË) - ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé î÷åíü êèñëóþ ìîëåêóëó, íåñóùóþ ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ äâà îòðèöàòåëüíûõ çàðÿäà (-2) (Ðèñ. 1.1.2.8). Ýòîò ôîñôîëèïèä ëîêàëèçîâàí, ãëàâíûì îáðàçîì, íà âíóòðåííåé ñòîðîíå ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû. Êàðäèîëèïèí áûë îòêðûò ïîçæå äðóãèõ ÔË, â 30-õ ãîäàõ ïðîøëîãî âåêà. Âïåðâûå îí áûë âûäåëåí è îõàðàêòåðèçîâàí èç ñåðäöà áûêà. ÊË ïðèñóòñòâóåò òàêæå è â äðóãèõ òêàíÿõ, îäíàêî åãî ðàñïðåäåëåíèå â êëåòêå íåðàâíîìåðíî, è ìåñòîì ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèè ÿâëÿþòñÿ ìèòîõîíäðèè. Ôààêòîð àêòèâààöèè òðîìáîö öèòîâ (PAF, platelet activating factor) 1-àëêèë-2-àöåòèë-sn-ãëèöåðî-3-ôîñôîõîëèí - áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûé àíàëîã ÔÕ ñ ïðîñòîé ýôèðíîé ñâÿçüþ (âìåñòî ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçè, êàê â ÔÕ) (Ðèñ. 1.1.2.9). Ïåðâîíà÷àëüíî PAF ïðèâëåê âíèìàíèå ñâîåé ñïîñîáíîñòüþ â î÷åíü íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ âûçûâàòü àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, à òàêæå îêàçûâàòü ãèïåðòåíçèâíîå äåéñòâèå.  ïîñëåäóþùèõ ðàáîòàõ áûëà âûÿâëåíà åãî ðîëü êàê ìåäèàòîðà âîñïàëåíèÿ, ó÷àñòâóþùåãî â ïàòîãåíåçå ðÿäà çàáîëåâàíèé. 21 PAF áûë ïåðâûì ÔË, äëÿ êîòîðîãî óñòàíîâëåíû ôóíêöèè ìåññåíäæåðà, ïðè÷åì ïðîöåññ ïåðåäà÷è ñèãíàëà ñ ïîìîùüþ PAF ïðîèñõîäèò íå â ðåçóëüòàòå ïðÿìîãî âîçäåéñòâèÿ íà ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó êëåòêè, à îïîñðåäóåòñÿ ÷åðåç ïðèñîåäèíåíèå ýòîé ìîëåêóëû ê ñïåöèôè÷åñêèì ðåöåïòîðàì. PAF îáû÷íî íå íàêàïëèâàåòñÿ â êëåòêàõ, íî ñèíòåçèðóåòñÿ èìè â óñëîâèÿõ âîñïàëåíèÿ â îòâåò íà ñïåöèôè÷åñêèå ñòèìóëû. Êîíöåíòðàöèÿ PAF â êëåòêàõ êîíòðîëèðóåòñÿ ñîîòâåòñòâóþùèìè ãèäðîëàçàìè, êîòîðûå íåàêòèâíû ïî îòíîøåíèþ ê íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ÔË. PAF ôóíêöèîíèðóåò êàê ìåäèàòîð ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè, îñòðîé âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè è àíàôèëàêòè÷åñêîãî øîêà. Îí ñèíòåçèðóåòñÿ â îòâåò íà îáðàçîâàíèå êîìïëåêñà àíòèãåí-IgE íà ïîâåðõíîñòè áàçîôèëîâ, íåéòðîôèëîâ, ýîçèíîôèëîâ, ìàêðîôàãîâ è ìîíîöèòîâ. Ñèíòåç è âûñâîáîæäåíèå PAF èç êëåòêè ïðèâîäèò ê àãðåãàöèè è îñâîáîæäåíèþ ñåðîòîíèíà èç òðîìáîöèòîâ. PAF òàêæå èíèöèèðóåò ðåàêöèè "êëåòî÷íîãî îòâåòà" â ïå÷åíè, ñåðäöå, ãëàäêîé ìûøöå, ëåãî÷íîé òêàíÿõ. Ïëààçìààëîãåí ÿâëÿåòñÿ ðàñïðîñòðàíåííûì ïðåäñòàâèòåëåì ôîðìû âèíèëîâîãî ýôèðà ôîñôîëèïèäîâ (àëêèëüíîé è àëêåíèëüíîé ôîðì) (Ðèñ. 1.1.2.10 À, Á). Ïëàçìàëîãåíû - âàæíåéøèå êîìïîíåíòû ìèåëèíà è ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà òêàíè ñåðäöà. Õîëèíïëàçìàëîãåíû â èçîáèëèè ïðèñóòñòâóþò â ñåðäå÷íûõ òêàíÿõ. 1.1.3. Ñôèíãîôîñôîëèïèäû.  îòëè÷èå îò ãëèöåðèíà, ñôèíãîçèí ñîäåðæèò îäíó èç äâóõ èìåþùèõñÿ â ìîëåêóëå ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé (êàê ïðàâèëî, âêëþ÷àþùóþ 15 óãëåðîäíûõ àòîìîâ). Äðóãàÿ óãëåâîäîðîäíàÿ öåïü â ïîëÿðíûõ ëèïèäàõ ýòîãî òèïà, ïðåäñòàâëåííàÿ îñòàòêîì ÆÊ, ñâÿçàíà ñî ñôèíãîçèíîì àìèäíîé ñâÿçüþ (Ðèñ. 1.1.4 À) [17]. Ñåìåéñòâî ñôèíãîëèïèäîâ âêëþ÷àåò ñôèíãîìèåëèíû è ãëèêîñôèíãîëèïèäû (öåðåáðîçèäû, ñóëüôàòèäû, ãëîáîçèäû è ãàíãëèîçèäû). Ñôèíãîìèåëèí (ÑÌ) ÿâëÿåòñÿ ñôèíãîëèïèäíûì àíàëîãîì ÔÕ è ïî ñòðîåíèþ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ôîñôîðèëõîëèíîâîå ïðîèçâîäíîå öåðàìèäà (öåðàìèä ôîñôîðèëõîëèí) (Ðèñ. 1.1.4.Á). Öåðàìèä ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé äëèííîöåïî÷å÷íîå ñôèíãîèäíîå îñíîâàíèå, ñâÿçàííîå ñ æèðíîé êèñëîòîé àìèäíîé ñâÿçüþ. ÑÌ øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â ïðèðîäå êàê íåîáõîäèìûé êîìïîíåíò ìåìáðàí æèâîòíûõ êëåòîê, â êîòîðûõ îí ÿâëÿåòñÿ ïðåîáëàäàþùèì ñôèíãîëèïèäîì.  íåêîòîðûõ òêàíÿõ ñîäåðæàíèå ÑÌ ìîæåò ñîñòàâëÿòü äî 50% 22 Ðèñ 1.1.4. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ñôèíãîçèíà, öåðàìèäîâ è ñôèíãîëèïèäîâ. îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ëèïèäîâ, õîòÿ, êàê ïðàâèëî, â æèâîòíîé êëåòêå åãî ñîäåðæèòñÿ ìåíüøå, ÷åì ÔÕ. Íàïðèìåð, îêîëî 10% ëèïèäîâ ãîëîâíîãî ìîçãà ñîñòàâëÿåò ÑÌ. Òàêæå, ñôèíãîìèåëèí ôàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ çàìåùàåò ÔÕ â ýðèòðîöèòàõ áîëüøèíñòâà æâà÷íûõ æèâîòíûõ. Ïîäîáíî ÔÕ, ñôèíãîìèåëèí ïðåèìóùåñòâåííî ëîêàëèçóåòñÿ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå, îñîáåííî íà åå âíåøíåé ñòîðîíå. Îáû÷íî â ìîëåêóëàõ ÑÌ ñîäåðæàòñÿ æèðíûå êèñëîòû ñ î÷åíü äëèííîé öåïüþ, ñîäåðæàùåé ñâûøå 22 àòîìîâ Ñ - íàñûùåííûå è ìîíîíåíàñûùåííûå, â òîì ÷èñëå è ñ íå÷åòíûì êîëè÷åñòâîì óãëåðîäíûõ àòîìîâ (÷òî íå ñâîéñòâåííî ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì). Äîëãîå âðåìÿ ñ÷èòàëè, ÷òî åäèíñòâåííîé ôóíêöèåé ñôèíãîìèåëèíà ÿâëÿåòñÿ çàìåíà ÔÕ êàê ñòðîèòåëüíîé åäèíèöû ìåìáðàíû [5, 21]. Ïîëàãàëè, ÷òî ïðèñóòñòâèå ÑÌ íåîáõîäèìî äëÿ îáðàçîâàíèÿ ñòàáèëüíîé íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ëèïèäíîãî áèñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû. Äåéñòâèòåëüíî, ýòî îäíî èç ñâîéñòâ ÑÌ. Èìåþòñÿ äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå î òåñíîé âçàèìîñâÿçè ñôèíãîìèåëèíà è õîëåñòåðèíà â êëåòêå [18].  îòëè÷èå îò ìåìáðàí äðóãèõ âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë (íàïðèìåð, ìèòîõîíäðèé), îáà ôîñôîëèïèäà ïðåîáëàäàþò â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è ìåìáðàíå àïïàðàòà Ãîëüäæè [18, 19]. Èìåÿ ðàçíîå ñòðîåíèå, ÑÌ è ÔÕ åñòåñòâåííî îòëè÷àþòñÿ ïî ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì, â ÷àñòíîñòè, ïî ñïîñîáíîñòè îáðàçîâûâàòü âîäîðîäíûå ñâÿçè. Àìèäíàÿ ñâÿçü âî 2-îì ïîëîæåíèè îñòàòêà ñïèðòà ñôèíãîçèíà è ãèäðîêñèëüíàÿ ãðóïïà â ïîëîæåíèè 3 ìîãóò ó÷àñòâîâàòü â ôîðìèðîâàíèè âîäîðîäíûõ ñâÿçåé. Èìåþùàÿñÿ äâîéíàÿ ñâÿçü â óãëåâîäîðîäíîé öåïè ÑÌ îáåñïå÷èâàåò ìåæìîëåêóëÿðíûå âçàèìîäåéñòâèÿ â ìåìáðàíàõ. Ó ÔÕ, íàïðîòèâ, äâå ñëîæíîýôèðíûå êàðáîíèëüíûå ãðóïïû ìîãóò ñëóæèòü òîëüêî êàê àêöåïòîðû âîäîðîäà. ÑÌ ñóùåñòâåííî îòëè÷àåòñÿ îò ÔÕ è ïî ñòåïåíè íåíàñûùåííîñòè æèðíîêèñëîòíûõ 23 öåïåé, òàê êàê ñîäåðæèò çàìåòíûå êîëè÷åñòâà íåñâîéñòâåííûõ äðóãèì ÔË äëèííîöåïî÷å÷íûõ íàñûùåííûõ è ìîíîåíîâûõ ÆÊ.  íàñòîÿùåå âðåìÿ èçâåñòíî, ÷òî ÑÌ (êàê è äðóãèå ñôèíãîëèïèäû) âìåñòå ñ õîëåñòåðèíîì ñîñòàâëÿþò îñíîâó ñïåöèôè÷åñêèõ ìåìáðàííûõ äîìåíîâ, íàçûâàåìûõ "ðàôòàìè" è "êàâåîëàìè", êîòîðûå èãðàþò âàæíåéøóþ ðîëü â ìåõàíèçìàõ ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ â êëåòêå (ñì. ãëàâó 2). Ïîìèìî ýòîãî, ÑÌ ñëóæèò ïðåäøåñòâåííèêîì äëÿ îáðàçîâàíèÿ öåðàìèäîâ, äëèííîöåïî÷å÷íûõ îñíîâàíèé, ñôèíãîçèí-1-ôîñôàòà (S1P) è ìíîãèõ äðóãèõ âàæíûõ ñôèíãîëèïèäîâ. Íåêîòîðûå èç ýòèõ ñîåäèíåíèé âûïîëíÿþò ôóíêöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåññåíäæåðîâ, à äðóãèå ÿâëÿþòñÿ âàæíûìè ñîñòàâíûìè ÷àñòÿìè ìåìáðàíû. Ñôèíãîëèïèäû, ïîñòóïàþùèå ñ ïèùåé, ãèäðîëèçóþòñÿ â êèøå÷íèêå äî öåðàìèäîâ è äëèííîöåïî÷å÷íûõ îñíîâàíèé, êîòîðûå çàòåì âñàñûâàþòñÿ è ìåòàáîëèçèðóþòñÿ. Ñ÷èòàþò, ÷òî ñôèíãîëèïèäû íåçàìåíèìû äëÿ ðàçâèòèÿ è æèçíåäåÿòåëüíîñòè ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê [20, 21].  äîïîëíåíèè ê èõ ïåðâè÷íîé ðîëè â êà÷åñòâå ñòðóêòóðíûõ êîìïîíåíòîâ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, îíè âûïîëíÿþò âàæíûå ôóíêöèè è êàê âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû. ÑÌ ÿâëÿåòñÿ êîìïîíåíòîì ëèïîïðîòåèíîâ ñûâîðîòêè êðîâè. Ñôèíãîëèïèäû âûïîëíÿþò ðåãóëÿòîðíóþ ðîëü â êëåòêå, ó÷àñòâóÿ â ïðîöåññàõ ïåðåäà÷è êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [22, 23]. Ïðè ýòîì ÑÌ âíóòðåííåé ïîâåðõíîñòè áèñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ÿâëÿåòñÿ äîíîðîì âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ â ñôèíãîìèåëèíîâîì öèêëå [24, 25]. Íåñìîòðÿ íà îòñóòñòâèå äàííûõ î ïîòðåáíîñòè îðãàíèçìà â ñôèíãîëèïèäàõ, âêëþ÷àÿ ÑÌ, êàê êîìïîíåíòîâ ïèòàíèÿ, îðèåíòèðîâî÷íî ïîäñ÷èòàíî, ÷òî ïîòðåáëåíèå ñôèíãîëèïèäà íà äóøó íàñåëåíèÿ â ÑØÀ ñîñòàâëÿåò ïîðÿäêà 0,3 - 0,4 ã â äåíü. Ñîâñåì íåäàâíî ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÑÌ ìîæåò ñëóæèòü "ôóíêöèîíàëüíûì" êîìïîíåíòîì áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ äîáàâîê ê ïèùå äëÿ ïðîôèëàêòèêè ðÿäà çàáîëåâàíèé.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ïîÿâèëèñü äàííûå îá èíãèáèòîðíîì äåéñòâèè ÑÌ íà ðàçâèòèå àòåðîñêëåðîçà è ðàêà. Îïûòû íà æèâîòíûõ ïîêàçàëè, ÷òî êîðìëåíèå ñôèíãîëèïèäàìè èíãèáèðóåò ðîñò îïóõîëè òîëñòîé êèøêè ó êðûñ, ñíèæàåò ñîäåðæàíèå ÕÑ â ëèïîïðîòåèíàõ íèçêîé ïëîòíîñòè (ËÍÏ) â êðîâè è ïîâûøàåò ÕÑ ëèïîïðîòåèíîâ âûñîêîé ïëîòíîñòè (ËÂÏ) [26, 27, 28]. Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîëèïèäû è èõ ìåòàáîëèòû ðàçíîîáðàçíû â ðàçëè÷íûõ ïðèðîäíûõ îáúåêòàõ.  òî æå âðåìÿ íå âñå ïðèâåäåííûå âûøå ôîñôîëèïèäíûå ñîåäèíåíèÿ èìåþò îäèíàêîâîå çíà÷åíèå è ðàñïðîñòðàíåííîñòü â êëåòêàõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà. Íàáîð íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ ÔË áèîìåìáðàí îãðàíè÷åí 24 íåñêîëüêèìè âèäàìè. Ðàçíîîáðàçèå æå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ìåìáðàííûõ ÔË îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ìíîæåñòâåííîñòè êîìáèíàöèé îòíîñèòåëüíî íåáîëüøîãî ÷èñëà èõ êîìïîíåíòîâ æèðíûõ êèñëîò, îäíîãî èç äâóõ òèïîâ ïîëÿðíûõ ãîëîâîê è òèïà ïîëÿðíîãî ôðàãìåíòà ãëèöåðîôîñôîëèïèäà. 1.2. Ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ îðãàíîâ è òêàíåé ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ ÔË îáû÷íî âûäåëÿþò èç òêàíåé ïóòåì îáðàáîòêè îðãàíè÷åñêèìè ðàñòâîðèòåëÿìè ñ ïîñëåäóþùèì õðîìàòîãðàôè÷åñêèì ðàçäåëåíèåì [29]. Ïðàêòè÷åñêè â ëþáîé æèâîòíîé òêàíè îáíàðóæèâàåòñÿ ñåìü îñíîâíûõ êëàññîâ ÔË (â ïîðÿäêå óáûâàíèÿ) - ÔÕ, ÔÝ, ÑÌ, à òàêæå, â çíà÷èòåëüíî ìåíüøèõ êîëè÷åñòâàõ (ìåíåå 10%), ÔÑ, ÔÈ, ëèçîÔÕ è ÊË (ðèñ. 1.1.2). Îäíîöåïî÷å÷íûå ëèïèäû òèïà ëèçîÔË îáû÷íî íå ñèíòåçèðóþòñÿ êëåòêîé â çíà÷èòåëüíîì êîëè÷åñòâå, òàê êàê îíè, ïîäîáíî äåòåðãåíòàì, ðàçðóøàþò ìåìáðàíû. Ïðèìåðîì ìîæåò ñëóæèòü äåéñòâèå ëèçîÔÕ, êîòîðûé îáðàçóåòñÿ èç ÔÕ ïîä âëèÿíèåì ôîñôîëèïàçû À2. Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè ýòîãî ÔË ìîæåò ïðèâåñòè ê ðàñïàäó êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, ÷òî è ÿâëÿåòñÿ îäíîé èç ïðè÷èí ñìåðòè ïðè óêóñå çìåè, ÿä êîòîðîé ñîäåðæèò çíà÷èòåëüíûå êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïàçû À2.  ïðèíöèïå âñå òêàíè ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæàò ñõîæèå ÔË â áëèçêîì êîëè÷åñòâåííîì ñîîòíîøåíèè [13]. Íàïðèìåð, ÔË íåðâíîé òêàíè âûñøèõ æèâîòíûõ îòëè÷àþòñÿ îò ÔË æèâîòíûõ, ñòîÿùèõ íà áîëåå íèçêèõ ñòóïåíÿõ ýâîëþöèè, â îñíîâíîì íàëè÷èåì ÑÌ è ÔÈ-4-ôîñôàòà.  êëåòêàõ æèâîòíûõ îðãàíèçìîâ ñóììàðíîå ñîäåðæàíèå öâèòòåðèîííûõ (ýëåêòðîíåéòðàëüíûõ) ëèïèäîâ (ÔÕ+ÔÝ+ÑÌ) ñîñòàâëÿåò 75-90% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïèäîâ. Ñóùåñòâóþò íåêîòîðûå ñïåöèôè÷åñêèå îñîáåííîñòè íàáîðà ÔË ðàçëè÷íûõ áèîìåìáðàí. Íàïðèìåð, â ìåìáðàíàõ øâàííîâñêîé êëåòêè ìîçãà îòìå÷àåòñÿ âûñîêîå ñîäåðæàíèå ÔÈ (10%) è íèçêîå - ÔÑ è ÔÝ - 3 è 14%, ñîîòâåòñòâåííî [30]. Õàðàêòåðíîé îñîáåííîñòüþ ìåìáðàí ýðèòðîöèòîâ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ÿâëÿåòñÿ ïðàêòè÷åñêè ïîëíîå îòñóòñòâèå ÔÕ.  òêàíÿõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà îáíàðóæèâàþòñÿ è ìèíîðíûå ÔË. Íàïðèìåð, â ñëîÿõ êîæè ãëàçíîãî âåêà ÷åëîâåêà îáíàðóæåíû àëêèë-àöèë-ÔÕ è ýòàíîëàìèí-ïëàçìàëîãåíû [31], ïðè÷åì â ýïèäåðìèñå óðîâåíü ýòèõ ÔË ñíèæåí íà ôîíå ïîâûøåííîãî ñîäåðæàíèÿ ÔÕ. Íà îñíîâàíèè ðàçëè÷èé â ãèäðîôîáíîñòè ýòèõ ÔË àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî òàêîé ñîñòàâ ÔË ýïèäåðìèñà 25 ñïîñîáñòâóåò îñóùåñòâëåíèþ ôóíêöèè ýôôåêòèâíîãî âîäíîãî áàðüåðà. Ïðèñóòñòâèå ÔË ñ ïðîñòûìè ýôèðíûìè ñâÿçÿìè (àëêèëÔË) îòìå÷àåòñÿ è â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ ÷åëîâåêà [32], à òàêæå â ìèåëèíå è ñåðîì âåùåñòâå ìîçãà êðûñ [33]. Ñèñòåìàòè÷åñêèé àíàëèç ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà òêàíåé îêîëî 180 âèäîâ ìîðñêèõ áåñïîçâîíî÷íûõ ïîêàçàë, ÷òî âñå îíè ñîäåðæàò ÔÕ, ÔÝ, ÔÑ è ÔÈ â êà÷åñòâå îñíîâíûõ êîìïîíåíòîâ; êðîìå òîãî, â íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ â ìåìáðàíàõ ñîäåðæàòñÿ ÔÊ, ÊË è ÔÈ-4ôîñôàò. Ó áîëåå âûñîêîðàçâèòûõ âèäîâ (÷ëåíèñòîíîãèå, îáîëî÷íèêè, èãëîêîæèå) ñîäåðæàíèå ÔÕ äîñòèãàåò 65%, â òî âðåìÿ êàê ãóáêè, êîëü÷àòûå ÷åðâè è ìîëëþñêè ñîäåðæàò ~30% ýòîãî ëèïèäà [34]. Íàèáîëåå ÿðêî ñèñòåìàòè÷åñêèå ðàçëè÷èÿ ïðîÿâëÿþòñÿ â ñîäåðæàíèè ñôèíãîëèïèäîâ - â ïðîöåññå ýâîëþöèè íàðàñòàåò ñîäåðæàíèå ÑÌ. Ó ãóáîê (íàèìåíåå ðàçâèòûõ æèâîòíûõ) ñîäåðæàíèå ÔÑ äîñòèãàåò 25%, ïðè÷åì ñôèíãîëèïèäû îòñóòñòâóþò ñîâñåì [34].  ïðîöåññå ýâîëþöèè áåñïîçâîíî÷íûõ ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ ôîñôîëèïèäîâ ñ õîëèíîâûìè ãðóïïàìè (ÔÕ è ÑÌ) è óìåíüøàëîñü ñóììàðíîå êîëè÷åñòâî ëèïèäîâ, ñîäåðæàùèõ àìèíîãðóïïû (ÔÝ, ÔÑ). Ñîîòíîøåíèå îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË â êëåòêå ìåíÿåòñÿ â ðàçëè÷íûõ ñèòóàöèÿõ è ñòàäèÿõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è îðãàíèçìà â öåëîì. Òàê, ïðè äëèòåëüíîé ôèçè÷åñêîé íàãðóçêå â ñêåëåòíûõ ìûøöàõ êðûñû ñîäåðæàíèå îòäåëüíûõ ÔË ìåíÿåòñÿ, ïðè÷åì â ðàçëè÷íûõ òèïàõ ìûøö ýòî èçìåíåíèå ïðîèñõîäèò ïîðàçíîìó [35]. Èìåþòñÿ äàííûå î âîçðàñòàíèè êîëè÷åñòâà ÑÌ â ìåìáðàíàõ ðÿäà êëåòîê ïðè ñòàðåíèè [36]. Ëþáîé èç ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ, íàïðèìåð ÔÕ, ÿâëÿåòñÿ íå èíäèâèäóàëüíûì âåùåñòâîì, à ñìåñüþ âåùåñòâ, ìîëåêóëû êîòîðûõ ñîäåðæàò îäíó è òó æå ïîëÿðíóþ ÷àñòü ôîñôîõîëèí, è ðàçëè÷íûå æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè. Ïîñêîëüêó îäíà è òà æå ïîëÿðíàÿ ãîëîâêà ìîæåò ñîåäèíÿòüñÿ ñ ðàçíûìè öåïÿìè, îòêðûâàåòñÿ âîçìîæíîñòü îãðîìíîãî ÷èñëà êîìáèíàöèé ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ. Èìåííî áëàãîäàðÿ ðàçíîîáðàçèþ ÆÊ ïðè âûäåëåíèè êàêîãî-ëèáî ôîñôîëèïèäà ïðàêòè÷åñêè òðóäíî ïîëó÷èòü åãî â ïîëíîñòüþ îäíîðîäíîì ñîñòîÿíèè, òàê êàê ïîëó÷åííîå âåùåñòâî áóäåò ïðåäñòàâëÿòü ñìåñü ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ äàííîãî ÔË, îòëè÷àþùèõñÿ ðàçíûì íàáîðîì æèðíûõ êèñëîò.  îäíîì îáúåêòå ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü áîëåå ñîòíè íåîäèíàêîâûõ ïî ñòðóêòóðå ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé, ïðè÷åì ñîîòíîøåíèÿ ìåæäó íèìè ñïåöèôè÷íû, ÷òî ïðåäïîëàãàåò èõ ó÷àñòèå âî ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ. Êàê óæå îòìå÷àëîñü, â ïðèðîäå íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåíû ñëåäóþùèå âèäû ÆÊ: ïàëüìèòèíîâàÿ (16:0), ñòåàðèíîâàÿ (18:0), îëåèíîâàÿ (18:1), ëèíîëåâàÿ (18:2), àðàõèäîíîâàÿ (20:4), à òàêæå 26 ëèíîëåíîâàÿ (18:3), ýéêîçîïåíòàåíîâàÿ (20:5) è äîêîçàãåêñàåíîâàÿ (22:6) êèñëîòû.  ìîëåêóëå ÔÕ ýòè êèñëîòû ñâÿçàíû ñ ãëèöåðèíîì â äâóõ ïîëîæåíèÿõ, ïîýòîìó ðàçëè÷íûå ñî÷åòàíèÿ ñîçäàþò âîçìîæíîñòü ñóùåñòâîâàíèÿ ðàçíûõ ìîëåêóë. Åñëè ó÷åñòü åùå ìåíåå ðàñïðîñòðàíåííûå âèäû æèðíûõ êèñëîò, òî ÷èñëî ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ åùå áîëåå âîçðàñòàåò, õîòÿ è îãðàíè÷èâàåòñÿ îáùèì ïðàâèëîì ïðåèìóùåñòâåííîé (90-95%) ëîêàëèçàöèåé â ÔË íàñûùåííûõ è íåíàñûùåííûõ ÆÊ â ïîëîæåíèè sn-1 è â ïîëîæåíèè sn-2, ñîîòâåòñòâåííî. Òàê, áûëî èäåíòèôèöèðîâàíî îêîëî 10 îñíîâíûõ âèäîâ ìîëåêóë ÔÕ, ðàçëè÷àþùèõñÿ æèðíîêèñëîòíûì ñîñòàâîì. Íàïðèìåð, óñòàíîâëåíî, ÷òî â ïå÷åíè êðûñû ïðèñóòñòâóþò îêîëî 30% ÔÕ, ñîäåðæàùåãî ïàëüìèòèíîâóþ êèñëîòó (16:0), 18% ÔÕ ñ àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé (20:4), áîëåå 16% ÔÕ, ñîäåðæàùåãî ëèíîëåâóþ êèñëîòó (18:2), ïî÷òè 50% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ÔÈ ñîäåðæàëî â ïîëîæåíèè sn-1 ñòåàðèíîâóþ êèñëîòó (18:0), à 37% - àðàõèäîíîâóþ â ïîëîæåíèè sn-2, è ò.ä. [37]. Íàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû ñîñòàâëÿþò â áîëüøèíñòâå ÔË îêîëî 50% (÷òî ñîîòâåòñòâóåò ïî÷òè ïîëíîìó èõ çàïîëíåíèþ ïîëîæåíèÿ sn-1 ìîëåêóëû ÔË). Êðîìå òîãî, ñóùåñòâóåò îïðåäåëåííàÿ èçáèðàòåëüíîñòü â ïðåäïî÷òåíèè îòäåëüíûõ æèðíûõ êèñëîò îòäåëüíûìè ÔË [18, 37]. Äëÿ ÔÊ, ÔÕ è ÔÑ ýòî â îñíîâíîì êèñëîòà Ñ16:0, à äëÿ ÔÈ - Ñ18:0. Äëÿ ÑÌ õàðàêòåðíû íàñûùåííûå (è ìîíîíåíàñûùåííûå) êèñëîòû ñ îñîáî äëèííîé öåïüþ, Ñ24 è áîëåå. Ëèíîëåâàÿ êèñëîòà (Ñ18:2) â çàìåòíîì êîëè÷åñòâå ïðèñóòñòâóåò â ÔÑ, ÔÊ è ÔÕ, íî áîëüøå âñåãî åå â êàðäèîëèïèíå (íàïðèìåð, â ÊË ïå÷åíè - 77,5%). Íàèáîëåå âûñîêîå ñîäåðæàíèå àðàõèäîíîâîé êèñëîòû (Ñ20:4) õàðàêòåðíî äëÿ ÔÈ. Ðàçíîîáðàçèå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔË ñâÿçàíî ñ èõ ó÷àñòèåì â ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññàõ. Òàê, äëÿ òðîìáîöèòîâ ÷åëîâåêà ïîêàçàíà ãåòåðîãåííîñòü æèðíûõ êèñëîò â ðàçíûõ êëàññàõ ÔË. Ñî÷åòàíèå ïàëüìèòèíîâîé è îëåèíîâîé êèñëîò îêàçàëîñü õàðàêòåðíûì â îñíîâíîì äëÿ ÔÕ (21% îò îáùåãî ÔÕ), â ìîëåêóëàõ ÔÝ, ÔÈ è ÔÑ òðîìáîöèòîâ ýòà ïàðà ÆÊ ïðàêòè÷åñêè íå âñòðå÷àåòñÿ. Ñî÷åòàíèå ñòåàðèíîâîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò ïðåîáëàäàåò â ìîëåêóëàõ ÔÝ è ÔÈ (71%). Òàê êàê àðàõèäîíîâàÿ êèñëîòà ÿâëÿåòñÿ èñòî÷íèêîì òðîìáîêñàíà, òî åå íåðàâíîìåðíîå ðàñïðåäåëåíèå ìåæäó ÔË óêàçûâàåò íà îïðåäåëåííóþ ñòåïåíü ñåëåêòèâíîñòè â íà÷àëüíîì ýòàïå îáðàçîâàíèÿ òðîìáîêñàíà è ïðîñòàãëàíäèíîâ: ãèäðîëèçó ôîñôîëèïàçîé À2 (PLÀ2) ïîäâåðãàþòñÿ â ïåðâóþ î÷åðåäü ÔÝ è ÔÈ [38]. Äðóãîé æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ ñâîéñòâåíåí, íàïðèìåð, ÔË ýðèòðîöèòîâ, ïðè÷åì ìåæäó îòäåëüíûìè âèäàìè æèâîòíûõ íàáëþäàþòñÿ ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ. Íàïðèìåð, ýðèòðîöèòû 27 ÷åëîâåêà ñîäåðæàò îêîëî 5 ðàçëè÷íûõ ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔÕ, à â ýðèòðîöèòàõ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà îáíàðóæèâàþòñÿ òîëüêî ñëåäû ÔÕ; ýðèòðîöèòû ÷åëîâåêà è êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ñîäåðæàò îêîëî 8 ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔÝ, ðàçëè÷àþùèõñÿ êàê ïî êîëè÷åñòâåííîìó ñîäåðæàíèþ, òàê è ïî æèðíîêèñëîòíîìó ñîñòàâó.  ÔÝ ýðèòðîöèòîâ ÷åëîâåêà ïðåîáëàäàþùåé ÆÊ ÿâëÿåòñÿ Ñ16:0, à êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà - Ñ18:1; äëÿ ÑÌ, ñîîòâåòñòâåííî, Ñ18:0 è Ñ24:0 è ò.ä. [39]. Ñîñòàâ ÆÊ, âõîäÿùèõ â äàííûé ôîñôîëèïèä, ìîæåò èçìåíÿòüñÿ ïðè ðÿäå ïàòîëîãèé èëè ïðè ñòàðåíèè [40]. Ãóëüáåðò ñ ñîàâò. [41] ïðîâåëè àëëîìåòðè÷åñêèé àíàëèç ñîñòàâà æèðíûõ êèñëîò ÔË òêàíåé ðàçëè÷íûõ êëàññîâ æèâîòíûõ è ñãðóïïèðîâàëè èõ â ïîðÿäêå óâåëè÷åíèÿ ìàññû òåëà æèâîòíîãî - îò çåìëåðîéêè (ñ âåñîì ïîðÿäêà 7 ã) äî êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà (ñ âåñîì áîëåå 370 êã). Îêàçàëîñü, ÷òî ïî ìåðå óâåëè÷åíèÿ ìàññû òåëà â ÔË ñåðäöà, ìûøö, ïå÷åíè è ïî÷åê ñíèæàåòñÿ ñîäåðæàíèå n-3 ÏÍÆÊ, îñîáåííî 22:6, õîòÿ â ìîçãå ó âñåõ âèäîâ æèâîòíûõ îòìå÷àëîñü âûñîêîå ñîäåðæàíèå ýòèõ æèðíûõ êèñëîò. Àâòîðû âûäâèãàþò ãèïîòåçó, ÷òî ñîäåðæàíèå 22:6 æèðíîé êèñëîòû â ìåìáðàíàõ ÔË îòðàæàåò ñòåïåíü ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè. 1.3. Ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ôîñôîëèïèäîâ Íàëè÷èå ó ìîëåêóë ÔË äâóõ ÷àñòåé - ñèëüíî ïîëÿðíîé "ãîëîâêè" è íåïîëÿðíûõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé, ïðåïÿòñòâóåò èõ ðàñòâîðèìîñòè â âîäå è äðóãèõ ïîëÿðíûõ ðàñòâîðèòåëÿõ è îáóñëàâëèâàåò èõ ñïîñîáíîñòü îáðàçîâûâàòü ìåìáðàíû. Ëîêàëèçàöèÿ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé ÆÊ â óïîðÿäî÷åííîé ñòðóêòóðå âîäû ýíåðãåòè÷åñêè íåâûãîäíà, è èìåííî ïîýòîìó ÔË ñòðåìÿòñÿ ê îáðàçîâàíèþ âåçèêóëÿðíûõ èëè ìèöåëëÿðíûõ äèñïåðñèé (ðèñ. 1.3.1). Íà ýëåêòðîííûõ ìèêðîôîòîãðàôèÿõ òàêèõ äèñïåðñèé îáíàðóæåíû ñëîèñòûå ñòðóêòóðû, çàìûêàþùèåñÿ äðóã ñ äðóãîì ñ îáðàçîâàíèåì ìåìáðàííûõ îáîëî÷åê, êîòîðûå îêàçàëèñü âíåøíå ÷ðåçâû÷àéíî ïîõîæèìè íà ìåìáðàíû êëåòîê. Âñêîðå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî åñëè â êîíòàêòèðóþùåì ñ ÔË âîäíîì ðàñòâîðå ïðèñóòñòâóþò èîíû, òî îíè âêëþ÷àþòñÿ â îáðàçóþùóþñÿ âíóòðåííþþ âîäíóþ îáëàñòü è óäåðæèâàþòñÿ òàì äëèòåëüíîå âðåìÿ. Ýòî ïðîèñõîäèò çà ñ÷åò òîãî, ÷òî ñîçäàâàåìûå ôîñôîëèïèäàìè ñëîèñòûå ìåìáðàííûå îáîëî÷êè çàõâàòûâàþò ïðè çàìûêàíèè ÷àñòü âîäíîãî ðàñòâîðà è îáëàäàþò ñâîéñòâàìè ïîëóïðîíèöàåìîãî áàðüåðà, ëåãêî ïðîïóñêàþùåãî âîäó, íî îãðàíè÷èâàþùåãî äèôôóçèþ ðàñòâîðåííûõ â íåé äðóãèõ âåùåñòâ [42, 43]. ÔË, ÿâëÿþùèåñÿ îñíîâíûìè êîìïîíåíòàìè è 28 ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè áèîìåìáðàí, ìîãóò â âîäíîì îêðóæåíèè ñïîíòàííî îáðàçîâûâàòü çàìêíóòûå ìåìáðàííûå ñòðóêòóðû. Ýòî îòêðûòèå ñûãðàëî áîëüøóþ ðîëü â ìåìáðàíîëîãèè. Ýíåðãåòè÷åñêè âûãîäíîå ðàñïîëîæåíèå äëÿ òàêèõ àìôèôèëüíûõ ñîåäèíåíèé êàê ÔË - ìîíîìîëåêóëÿðíûé ñëîé íà ïîâåðõíîñòè ðàçäåëà ìåæäó âîäîé è ãèäðîôîáíîé ñðåäîé; â òàêîì ñëó÷àå ïîëÿðíûå "ãîëîâêè" îðèåíòèðîâàíû â ñòîðîíó âîäû, à æèðíîêèñëîòíûå öåïè ïîãðóæåíû â íåïîëÿðíóþ ñðåäó (ðèñ. 1.3.1). Ïîýòîìó â âîäíîé ñðåäå ìîëåêóëû ÔË àññîöèèðóþòñÿ äðóã ñ äðóãîì, îáðàçóÿ ìèêðîñêîïè÷åñêèå àññîöèàòû èëè áèñëîè, â êîòîðûõ ðàñïîëîæåííûå âíóòðè ãèäðîôîáíûå öåïè ("õâîñòû") çàùèùåíû îò âîäû ïîëÿðíûìè ãîëîâêàìè. Ñòðåìëåíèå ìàêñèìàëüíî îãðàíè÷èòü êîíòàêò íåïîëÿðíûõ öåïåé ëèïèäà ñ âîäîé ïðèâîäèò ê òîìó, ÷òî áèñëîé ïðè åãî äîñòàòî÷íîé ïðîòÿæåííîñòè, ìîæåò çàìûêàòüñÿ ñàì íà ñåáÿ, ôîðìèðóÿ ñôåðè÷åñêèå ïîëûå îáîëî÷å÷íûå ñòðóêòóðû, ïîëó÷èâøèå íàçâàíèå âåçèêóëû. Ðèñ. 1.3.1. Ôîðìû îðèåíòàöèè ìîëåêóë ÔË â âîäå. Îáðàçîâàíèå ìèöåëë, ëèïîñîì, ëàìåëëÿðíûõ ñòðóêòóð. Îáû÷íî íàçâàíèÿ "ëèïîñîìû" è "ëèïèäíûå âåçèêóëû" èñïîëüçóþò êàê ñèíîíèìû, íî íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ëèïîñîìàìè âïåðâûå áûëè íàçâàíû ÷àñòèöû, îáðàçóþùèåñÿ ïðè ìåõàíè÷åñêîì äèñïåðãèðîâàíèè âçâåñè ÔË â âîäå.  ýòîì ñëó÷àå îáðàçóþòñÿ áîëüøîãî ðàçìåðà (äî 50 ìêì), ñîñòîÿùèå èç íåñêîëüêèõ äåñÿòêîâ ëèïèäíûõ áèñëîåâ, ðàçäåëåííûõ âîäíûìè ïðîìåæóòêàìè (ìóëüòèëàìåëëÿðíûå) âåçèêóëû (ëèïîñîìû), èìåþùèå íåäîñòàòî÷íî ðàçâèòóþ ïîâåðõíîñòü [44, 45]. Ïðèìåíåíèå ñïåöèàëüíûõ òåõíîëîãèé (óëüòðàçâóê, äåòåðãåíòû è äð.) ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü ìîíîëàìåëëÿðíûå ëèïîñîìû ñ áîëüøåé ïîâåðõíîñòüþ, äèàìåòðîì 100 - 200 íì, êîòîðûå ñîõðàíÿþò 29 íåêîòîðîå êîëè÷åñòâî çàõâà÷åííîé ïðè çàìûêàíèè âîäíîé ôàçû, îêðóæåííîé áèñëîéíîé ôîñôîëèïèäíîé îáîëî÷êîé (ðèñ. 1.3.1). Íàèáîëåå ìåëêèå ôîñôîëèïèäíûå ÷àñòèöû (ìåíåå 100 íì) ñ âûñîêîðàçâèòîé ïîâåðõíîñòüþ, ñ ïîëÿðíûìè ãðóïïàìè ñíàðóæè è æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè âíóòðè íàçûâàþò ìèöåëëàìè.  îòëè÷èå îò ëèïîñîì, îíè íå èìåþò âíóòðåííåãî âîäíîãî îáúåìà. Ôîðìû ñàìîîðãàíèçàöèè ÔË â âîäå îïðåäåëÿþòñÿ çàðÿäîì èõ ïîëÿðíûõ ãîëîâîê è ñîîòíîøåíèåì îáúåìîâ, çàíèìàåìûõ ãîëîâêàìè è íåïîëÿðíûìè æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè. Êîãäà ýòè îáúåìû ïðèìåðíî îäèíàêîâû, ò. å. êîãäà ìîëåêóëû ëèïèäà èìåþò öèëèíäðè÷åñêèå î÷åðòàíèÿ, ïðåîáëàäàåò òåíäåíöèÿ ê îáðàçîâàíèþ áèñëîÿ. Åñëè æå îáúåì ïîëÿðíîé ãîëîâêè áîëüøå îáúåìà öåïåé (êàê, íàïðèìåð, ó ëèçîÔÕ), òî ìîëåêóëà ïî ôîðìå ïðèáëèæàåòñÿ ê îáðàùåííîìó êîíóñó, è â âîäíîì îêðóæåíèè îíà áóäåò íàõîäèòüñÿ â ìèöåëëÿðíîé ôàçå [46]. Ëèïèäíàÿ ìèöåëëà ìîæåò áûòü îêðóæåíà ïðåäïî÷òèòåëüíî èîíàìè âîäîðîäà èëè ãèäðîêñèëüíûìè ãðóïïàìè îêðóæàþùåé åå âîäû. Ïîýòîìó ïî ñâîèì ôèçè÷åñêèì ñâîéñòâàì âîäà âáëèçè ïîâåðõíîñòè ìèöåëëû çàìåòíî îòëè÷àåòñÿ îò îñòàëüíîé. Ñïîñîáíîñòü ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ îáðàçîâûâàòü áèñëîéíóþ ñòðóêòóðó ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì èõ àìôèïàòè÷íîñòè [47]. Ñêëîííîñòü ÔË ê àññîöèàöèè è ôîðìèðîâàíèþ áèñëîåâ è îïðåäåëÿåò èõ ôóíêöèè â æèâîé êëåòêå, ãäå îíè ÿâëÿþòñÿ îñíîâíûìè "ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè" áèîìåìáðàí âñåõ êëåòîê â æèâîé ïðèðîäå, îñíîâíûì ìàòðèêñîì, êóäà âñòðîåíû ìíîãî÷èñëåííûå ìåìáðàííûå áåëêè è ôåðìåíòíûå ñèñòåìû. Ïðèìåðîì ïðèðîäíûõ ëèïîñîì ÿâëÿåòñÿ ñàìà êëåòêà è åå îðãàíåëëû, à ëèïîïðîòåèíû êðîâè, îòâåòñòâåííûå çà òðàíñïîðò áèîàêòèâíûõ ñîåäèíåíèé, ïî ñòðîåíèþ ÿâëÿþòñÿ ìèöåëëàìè. Ïåðâîå ïðèìåíåíèå ëèïîñîì â íàó÷íûõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ñâÿçàíî ñ ìîäåëèðîâàíèåì êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Ñ èõ ïîìîùüþ áûëè óñòàíîâëåíû îñíîâíûå çàêîíîìåðíîñòè òðàíñïîðòà âåùåñòâ ÷åðåç ìåìáðàíó, îïðåäåëåíû ïàðàìåòðû ëèïèäíîãî áèñëîÿ è åãî äèíàìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè, èçó÷åíû ïðîöåññû ñëèÿíèÿ ìåìáðàí. Ðåêîíñòðóèðîâàííûå ôîñôîëèïèäíûå ñèñòåìû èñïîëüçóþò äëÿ èçó÷åíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ è áåëêîâûõ àíñàìáëåé. Ôàðìàêîëîãè÷åñêîå ïðèìåíåíèå ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö (ìèöåëë, ëèïîñîì) ñâÿçàíî ñ èõ ñïîñîáíîñòüþ òðàíñïîðòèðîâàòü ñàìûå ðàçíîîáðàçíûå õèìè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ [48-53]. Õàðàêòåðíîé îñîáåííîñòüþ ôîñôîëèïèäíûõ óïîðÿäî÷åííûõ ñòðóêòóð ÿâëÿåòñÿ èõ ñïîñîáíîñòü ê ôàçîâûì ïåðåõîäàì. ×èñòûì èíäèâèäóàëüíûì ÔË, êàê è ìíîãèì õèìè÷åñêèì ñîåäèíåíèÿì, ñâîéñòâåííà îïðåäåëåííàÿ òåìïåðàòóðà ïëàâëåíèÿ, íàçûâàåìàÿ 30 ÷àùå òåìïåðàòóðîé ôàçîâîãî ïåðåõîäà (Òô.ï.). Ïðè ýòîé òåìïåðàòóðå îñóùåñòâëÿåòñÿ ïåðåõîä ÔË îò ôàçû óïîðÿäî÷åííîãî (òâåðäîãî) ãåëåîáðàçíîãî ñîñòîÿíèÿ â ôàçó ìåíåå óïîðÿäî÷åííîãî, òåêó÷åãî, òàê íàçûâàåìîãî, æèäêî-êðèñòàëëè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ [54]. Æèäêîñòíîñòü (èëè Òô.ï.) ôîñôîëèïèäîâ ñóùåñòâåííî çàâèñèò îò ñòðóêòóðû æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé, óâåëè÷èâàÿñü ñ ïîâûøåíèåì äëèíû öåïåé è ñíèæàÿñü ïðè âîçðàñòàíèè ñòåïåíè èõ íåíàñûùåííîñòè. Ñôèíãîëèïèäû íàèáîëåå áîãàòû äëèííûìè íàñûùåííûìè æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè, ÷òî ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ áîëåå ïëîòíîé ìîëåêóëÿðíîé óïàêîâêè, è ïîýòîìó îíè èìåþò ñðàâíèòåëüíî âûñîêóþ Òô.ï..  ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, ó ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ, ñîäåðæàùèõ îáû÷íî íåíàñûùåííûå àöèëüíûå öåïè, Òô.ï. áîëåå íèçêàÿ (Òàáë.1.3.1). Òàáëèöà 1.3.1. Òåìïåðàòóðû ôàçîâûõ ïåðåõîäîâ ÔÕ è ÔÝ ñ ðàçëè÷íûìè æèðíûìè êèñëîòàìè [ïî 54 c èçìåíåíèÿìè] Ôîñôîëèïèä ÔÕ: ÄÑÔÕ ÄÏÔÕ ÏÎÔÕ ÑËÔÕ ÄÎÔÕ ÔÝ : ÄÑÔÝ ÄÌÔÝ Æèðíûå êèñëîòû 18:0, 18:0 16:0, 16:0 16:0, 18:1 18:0, 18:2 18:1, 18:1 18:0, 18:0 14:0, 14:0 Òô.ï. , îÑ 55 42 -7 - 16.7 -21 58 48 Cîêðàùåíèÿ: Ñ - ñòåàðèë-, Ï - ïàëüìèòîèë, Î - îëåîèë, Ë - ëèíîëåîèë; ÄÑ-, ÄÏ-, ÄÎ-, ÄÌ - äèñòåàðîèë-,äèïàëüìèòîèë-, äèîëåîèë-, äèìèðèñòîèë- , ñîîòâåòñòâåííî Äðóãèå ìåìáðàííûå ÔË, òàêèå, êàê ÔÑ, Ôà è ÔÈ, ñîäåðæàò â îñíîâíîì íåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû è ïîýòîìó, ïîäîáíî ÔÕ, óâåëè÷èâàþò æèäêîñòíîñòü îáðàçîâàííûõ èç íèõ ìåìáðàí.  òî æå âðåìÿ, ïðèñóòñòâèå ãëèêîñôèíãîëèïèäîâ (íàïðèìåð, ãàíãëèîçèäîâ), èìåþùèõ ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü, ïîõîæóþ íà òàêîâóþ ó ñôèíãîëèïèäîâ, ïðèäàåò æåñòêîñòü áèñëîþ [55]. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ I 1. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Ì., Íàóêà. 1982. 2. Avogaro H., Catapano A. Phospholipids and atherosclerosis. Raven Press, N.Y. 1983. 3. Pulfer M., Murphy R.C. Electrospray mass spectrometry of phospholipids. Mass Spectrom Rev. 2003, 22, 332-364. 4. Audesirik T., Audesirik G. Biology, life on earth prentice hall. New Jersey. 1999. 5. Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff Ì., Roberts Ê., Watson J. D. 31 Molecular Biology of the Cell. N.Y. 1994. 6. Wolfe S.L. Molecular and Cellular Biology. Wadsworth Publishing Company. 1993. 7. Wang Y., Krull I.S, Liu C., Orr J.D. Derivatization of phospholipids. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2003, 793, 3-14. 8. Âàñüêîâñêèé Â.Å. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1997, 3, 32-37. 9. Zurier R.B. Prostaglandins: then and now and next. Semin Arthritis Rheum. 2003, 33, 137-139. 10. Scholz H. Prostaglandins. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003, 285, R512-514. 11. Claria J., Arroyo V. Prostaglandins and other cyclooxygenasedependent arachidonic acid metabolites and the kidney in liver disease. Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2003, 72, 19-33. 12. Òèòîâ Â.Í. Àòåðîñêëåðîç êàê ïàòîëîãèÿ ïîëèåíîâûõ æèðíûõ êèñëîò Ì., 2002. 13. Gundermann K.-J. Fd. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic Publisher Polish Section of European Society of biochemical pharmacology, Szczecin. 1993, 2-17. 14. Glomset J. The plasma lecithin:cholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res. 1968, 9, 155-167. 15. Ïðîêàçîâà Í.Â., Çâåçäèíà Í.Ä., Êîðîòàåâà À.À.. Âëèÿíèå ëèçîôîñôàòèäèëõîëèíà íà ïåðåäà÷ó òðàíñìåìáðàííîãî ñèãíàëà âíóòðü êëåòêè. Áèîõèìèÿ, 1998, 63, 38-46. 16. Gouni-Berthold I., Sachinidis A. Does the coronar risk factor low density lipoprotein alter growth and signaling in vascular smooth muscle cells? FASEB J. 2002, 16, 1477-1488. 17. Ýëëèîò Â., Ýëëèîò Ä. Áèîõèìèÿ è ìîëåêóëÿðíàÿ áèîëîãèÿ. Ïåðåâîä ñ àíãëèéñêîãî. Ì., 2002, 56. 18. Èâêîâ Â.Ã., Áåðåñòîâñêèé Ã.Í. Ëèïèäíûé áèñëîé áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Ì., 1982. 19. Coste H, Martel M.B., Got R. Topology of glucosylceramide synthesis in Golgi membranes from porcine submaxillary glands. Biochim Biophys Acta. 1986, 858, 6-12. 20. Hannun Y.A., Luberto C. Ceramide in the eukaryotic stress response. Trends Cell Biol. 2000, 10, 73-80. 21. van Meer G., Holthuis J.C. Sphingolipid transport in eukaryotic cells. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 145-170. 22. Auge N., Negre-Salvayre A., Salvayre R., Levade T. Sphingomyelin metabolites in vascular cell signaling and atherogenesis. Prog Lipid Res. 2000, 39, 207-229. 23. Prieschl E.E., Baumruker T. Sphingolipids: second messengers, mediators and raft ñonstituents in signaling. Immunol Today. 2000, 21, 32 555-560. 24. Levade T., Auge N. Sphingolipid mediators in cardiovascular cell biology and pathology. Circulation Res. 2001, 89, 957-977. 25. zu Heringdorf D. M., van Koppen C. J., and Jakobs K. H. Molecular diversity of sphingolipid signalling. FEBS Lett. 1997, 410, 3438. 26. Silins I., Nordstrand M., Hogberg J., Stenius U. Sphingolipids suppress preneoplastic rat hepatocytes in vitro and in vivo. Carcinogenesis. 2003, 24, 1077-1083. 27. Spiegel S., Merrill A.H. Sphingolipid metabolism and cell growth regulation. FASEB J. 1996, 10, 1388-1397. 28. Chatterjee S.. Sphingolipids in atherosclerosis and vascular biology. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1998, 18, 1523-1533. 29. Kates M., Technigues of lipidology. Elsevier, Amsterdam.1986. 30. Calderon R.O., DeVries G.H. Lipid composition and phospholipid asymmetry of membrane from Schwann cell line. J Neurosci Res. 1997, 49, 372-380. 31. Greiner J.V., Glonek T., Townsend D.J., Hearn S.L. Epidermal and dermal phospholipids of the human eyelid: a 31P NMR sperctroscopy study. Arch Dermatol Res. 1998, 290, 298-305. 32. Murphy E.J., Joseph L., Stephens R., Horrock L.A. Phospholipid composition of cultured human endothelial cells. Lipids. 1992, 27, 150153. 33. Rosenberger T.A., Oki J., Purdon A.D., Rapoport S.I., Murphy E.J. Rapid synthesis and turnover of brain microsomal ether phospholipids in the adult rat. J Lipid Res. 2002, 43, 59-68. 34. Êîñòåöêèé Ý.ß. Ñðàâíèòåëüíîå áèîõèìè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà ìîðñêèõ áåñïîçâîíî÷íûõ. Òåç. Âñåñîþçí. êîíô. "Ýâîëþöèîííàÿ áèîõèìèÿ è ïðîèñõîæäåíèå æèçíè". Åðåâàí. 1978, 53-54. 35. Gorski J., Zendzian-Piotrowska M., deJong Y.F, Niklinska W., Glatz J.F. Effect of endurance training on the phospholipid content of skeletal muscles in the rat. Eur J Appl Physiol Occup Physiol. 1999, 79, 421-425. 36. Borchman D., Byrdwell W.C., Yappert M.C. Regional and agedependent differences in the phospholipid composition of human lens membranes. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1994, 35, 3938-3942. 37. Êàãàâà ßñóî. Áèîìåìáðàíû. Ì., 1985, 52-55. 38. Mahadevappa V.G., Holub B.J. The molecular species composition of individual diacyl phospholipids in human platelets. Âiochim Biophys Acta. 1982, 713, 73-79. 39. Van Dijk P.V.M., Van Zoelen E.J.J., Seldenrijk R., Van Deenen L.L.M. Calorimetric behaviour of individual phospholipid classes from 33 human and bovine erythrocyte membrane. Chem and Phys Lipids. 1976, 17, 336-343. 40. Laganiere S., Yu B.P. Modulation of membrane phospholipid fatty acid ñomposition by age and food restriction. Gerontology. 1993, 39, 7-18. 41. Hulbert A.J., Rana T., Couture P. The acyl composition of mammalian phospholipids: an allometric analysis. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2002, 132, 515-527. 42. Bangham A.D., Horne R.W. Negative staining of phospholipids and their strucrured modification by surface agents as observed in electron microscope. J Mol Biol. 1964, 8, 660-668. 43. Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. Diffusion of univalent ions across the lamelae of swollen phospholipids. J Mol Biol. 1965, 13, 238-252. 44. Áàðñóêîâ Ë.È., Ëèïîñîìû. Ñîðîñîâñêèé îáîçðåâàòåëüíûé æóðíàë. 1998, N 10, 2-9. 45. Bangham A.D. In Liposomes Letters (Bangham À.ed), L., N.Y., Añad Press. 1983, 12-15. 46. Ãåííèñ Ð.Á. Áèîìåìáðàíû. Ìîëåêóëÿðíàÿ ñòðóêòóðà è ôóíêöèè. Ïåðåâîä ñ àíãëèéñêîãî, Ì., 1997, 83. 47 Cavagnetto F., Relini A., Mirghani Z., Gliozzi A., Bertoia D., Gambacorta A. Molecular packing parameters of bipolar lipids. Biochim Biophys Acta. 1992, 1106, 273-281. 48. Ìàðãîëèñ Ë.Á., Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ëèïîñîìû è èõ âçàèìîäåéñòâèå ñ êëåòêàìè. Ì., 1986. 49. Barenholz Y. Design of liposome-based drug carriers: From basic research to application as approved drugs. In Medical Applications of Liposomes (Lasic D.D. and Papahadjopoulos D. eds), N.Y., Elsevier Science BV. 1998, 545-565. 50. Allen Theresa M. and Cullis Pieter R. Drug Delivery Systems: Entering the Mainstream. Drug Discovery. 2004, 303, 1818 - 1822. 51. Bashir R. BioMEMS: state-of-the-art in detection, opportunities and prospects. Adv Drug Deliv Rev. 2004, 56, 1565-1586. 52. Allen T.M., Cullis P.R. Drug Delivery Systems: Entering the Mainstream. Science. 2004, 303, 1818-1822. 53. Torchilin V.P . Drug targeting. Eur J Pharm Sci. 2000, 11, Suppl 2, 81-91. 54. Shaw A.W, McLean M.A,.Sligar S.G. Phospholipid phase transitions in homogeneous nanometer scale bilayer discs. FEBS Letters. 2004, 556, 260-264. 55. Hoekstra D., Maier O., van der Wouden J.M., Slimane T.A. Membrane dynamics and cell polarity: the role of sphingolipids. J Lipid Res. 2003, 44, 869-877. 34 ÃËÀÂÀ 2. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÉ ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ ÁÈÎÌÅÌÁÐÀÍ È ËÈÏÎÏÐÎÒÅÈÍΠÁèîìåìáðàíû èìåþò êëþ÷åâîå çíà÷åíèå, êàê â îðãàíèçàöèè ñòðóêòóðû, òàê è â ôóíêöèîíèðîâàíèè âñåõ êëåòîê: ïðîêàðèîòîâ, ýóêàðèîòîâ, ðàñòåíèé è æèâîòíûõ. Ìåìáðàíû, ïî ñóùåñòâó, óñòàíàâëèâàþò ãðàíèöû êîìïàðòìåíòîâ êëåòêè, îñóùåñòâëÿþò ñâÿçü ìåæäó íèìè. Îäíà èç âàæíåéøèõ ôóíêöèé áèîìåìáðàí çàêëþ÷àåòñÿ â îòäåëåíèè êëåòêè îò âíåøíåé ñðåäû è â ñîõðàíåíèè àâòîíîìíîñòè åå âíóòðåííåãî óñòðîéñòâà. Áëàãîäàðÿ íàëè÷èþ ìåìáðàíû, âíóòðè êëåòêè è â åå îðãàíåëëàõ ïîñòîÿííî ïîääåðæèâàþòñÿ âûñîêèå êîíöåíòðàöèè íåîáõîäèìûõ âåùåñòâ è îãðàíè÷èâàåòñÿ ïîñòóïëåíèå ÷óæåðîäíûõ ñîåäèíåíèé, íå ó÷àñòâóþùèõ â ïðîöåññàõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè. Êîìïàðòìåíòàëèçàöèÿ âíóòðåííåãî ñîäåðæèìîãî êëåòêè (ò. å. ïðîñòðàíñòâåííîå ðàçäåëåíèå ìåìáðàíàìè âíóòðèêëåòî÷íûõ ñèñòåì) ïîçâîëÿåò íåçàâèñèìî îñóùåñòâëÿòü ðàçëè÷íûå, èíîãäà ïðîòèâîïîëîæíî íàïðàâëåííûå ðåàêöèè ìåòàáîëèçìà, à òàêæå èõ òîíêóþ ðåãóëÿöèþ. Èìåííî ìåìáðàíû ïîääåðæèâàþò êëåòêó â íåðàâíîâåñíîì ñîñòîÿíèè, îáåñïå÷èâàÿ ñîõðàíåíèå ãðàäèåíòîâ êîíöåíòðàöèé è ýëåêòðè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà. Ñâîáîäíàÿ ýíåðãèÿ, çàïàñåííàÿ òàêèì îáðàçîì âíóòðè êëåòêè èëè åå îðãàíåëëàõ, ðàñõîäóåòñÿ íà îñóùåñòâëåíèå ìíîãèõ æèçíåííî âàæíûõ ôóíêöèé - îò ãåíåðàöèè è ðàñïðîñòðàíåíèÿ íåðâíîãî èìïóëüñà äî õèìè÷åñêîãî ñèíòåçà è ñîâåðøåíèÿ ìåõàíè÷åñêîé ðàáîòû. Ðàçðóøåíèå ìåìáðàíû ïðèâîäèò, êàê ïðàâèëî, ê ãèáåëè êëåòêè. Ìåìáðàíû îïðåäåëÿþò ïðèðîäó âñåõ ñâÿçåé êàê âíóòðè-, òàê è ìåæêëåòî÷íûõ. Îíè ôîðìèðóþò ñèñòåìû àêòèâíîãî âíóòðè- è ìåæêëåòî÷íîãî òðàíñïîðòà, îáåñïå÷èâàþò òðàíñäóêöèþ êëåòî÷íîãî ñèãíàëà.  êëåòî÷íóþ ìåìáðàíó âñòðîåíî áîëüøîå êîëè÷åñòâî òðàíñïîðòíûõ, ðåöåïòîðíûõ áåëêîâ, ôåðìåíòîâ è ôåðìåíòíûõ ñèñòåì/êîìïëåêñîâ. Îäíè ôåðìåíòû êàòàëèçèðóþò òðàíñìåìáðàííûå ðåàêöèè èëè òðàíñïîðò ìîëåêóë, ðàñïîëîæåííûõ êàê íà âíóòðåííåé, òàê è íà âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Äðóãèå - âîâëå÷åíû â öåëóþ ñåðèþ ïîñëåäîâàòåëüíûõ ðåàêöèé, êîòîðûå ïðîòåêàþò íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, ÷åì îáåñïå÷èâàåòñÿ èõ âûñîêàÿ èçáèðàòåëüíîñòü è ýôôåêòèâíîñòü. Äðóãèìè ñëîâàìè, áîëüøèíñòâî ôóíäàìåíòàëüíûõ ïðîöåññîâ, ïðîòåêàþùèõ â êëåòêå (ðåïëèêàöèÿ ÄÍÊ, áèîñèíòåç è ñåêðåöèÿ áåëêà, áèîýíåðãåòè÷åñêèå è ãîðìîí-çàâèñèìûå ïðîöåññû è ò.ä.), ïðîèñõîäèò ñ âîâëå÷åíèåì êàê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, òàê è ìåìáðàí åå êîìïàðòìåíòîâ. Áèîëîãè÷åñêèå ìåìáðàíû ñîäåðæàò ãåòåðîãåííóþ ñìåñü ÔË, 35 îòëè÷àþùèõñÿ äðóã îò äðóãà ñòðóêòóðîé ïîëÿðíîé "ãîëîâêè", äëèíîé æèðíîêèñëîòíîé öåïè, ñòåïåíüþ íåíàñûùåííîñòè àöèëüíûõ öåïåé, âèäîì èõ ñâÿçûâàíèÿ è ò.ä. Ó÷èòûâàÿ âñå ýòî, î÷åíü ñëîæíî îïðåäåëèòü ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà è ôóíêöèîíàëüíóþ ðîëü èíäèâèäóàëüíûõ ëèïèäîâ, è ñïîñîá èõ âçàèìîäåéñòâèÿ ñ äðóãèìè ëèïèäàìè â ïðèðîäíûõ áèîìåìáðàíàõ. Ïîýòîìó äëÿ ïîëó÷åíèÿ èíôîðìàöèè î ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è âçàèìîäåéñòâèè ëèïèäîâ âíóòðè ìåìáðàíû èññëåäîâàòåëè øèðîêî èñïîëüçîâàëè èñêóññòâåííûå ñèñòåìû, ñîäåðæàùèå ÔË è íåêîòîðûå äðóãèå ìåìáðàííûå êîìïîíåíòû, òàêèå êàê õîëåñòåðèí, èíòåãðàëüíûå áåëêè. Ïîñëå ïåðèîäà îòíîñèòåëüíîãî "çàñòîÿ", â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå, ñ ïîÿâëåíèåì íîâûõ ìåòîäè÷åñêèõ ïîäõîäîâ, áûë ñäåëàí áîëüøîé øàã â ïîíèìàíèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ. Êàê îòìå÷àþò Killian è van Meer [1], ëèïèäû, â ÷àñòíîñòè, ÔË â ìåìáðàíå âåäóò "äâîéíóþ æèçíü", ÿâëÿÿñü, ñ îäíîé ñòîðîíû, "ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè", à ñ äðóãîé - ìîäóëÿòîðàìè âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Ïðèìåíåíèå ñîâðåìåííûõ êîìïüþòåðèçèðîâàííûõ áèîõèìè÷åñêèõ è áèîôèçè÷åñêèõ ìåòîäîâ èññëåäîâàíèÿ ïîçâîëÿåò èçó÷àòü ïîâåäåíèå ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ íà ìîëåêóëÿðíîì è äàæå íà àòîìíîì óðîâíÿõ. Íîâûå ìåòîäè÷åñêèå ïîäõîäû ïîçâîëèëè â ïîñëåäíèå ãîäû äîñòè÷ü îïðåäåëåííûõ óñïåõîâ â îáëàñòè èññëåäîâàíèÿ ñòðóêòóðû áèîìåìáðàí, â ÷àñòíîñòè, ïåðåñìîòðåòü êëàññè÷åñêóþ ìîäåëü èõ ñòðîåíèÿ. Òàê, îïòè÷åñêèå ìåòîäû, ñâÿçàííûå ñ ðàçâèòèåì òåõíîëîãèè ôëóîðåñöåíòíûõ èçîáðàæåíèé (ìóëüòèôîòîííàÿ ëàçåðíàÿ ñêàííèðóþùàÿ ìèêðîñêîïèÿ è êîíôîêàëüíàÿ ìèêðîñêîïèÿ), ïîçâîëÿþò ñëåäèòü çà ðåàëüíûì ïîâåäåíèåì âî âðåìåíè, äèíàìèêîé è ëîêàëèçàöèåé ôëóîðåñöåíòíûõ àíàëîãîâ ïðèðîäíûõ ëèïèäîâ â ìåìáðàíàõ æèâîé êëåòêè. Ñ èõ ïîìîùüþ áûëî âïåðâûå ïîêàçàíî, ÷òî ñîñòàâ è ñòðóêòóðà ìåìáðàíû õàðàêòåðèçóþòñÿ íå ñòàòè÷åñêèìè ïðèçíàêàìè, ñâîéñòâåííûìè êëåòêå â òå÷åíèå âñåé åå æèçíè è ëèøü íåìíîãî ìåíÿþùèìèñÿ â ïðîöåññå ñîçðåâàíèÿ è ñòàðåíèÿ, à ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé äèíàìè÷åñêóþ, ïîñòîÿííî ìîäèôèöèðóþùóþñÿ ñèñòåìó, ñêîîðäèíèðîâàííóþ ñ áîëüøèíñòâîì êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Ñ äðóãîé ñòîðîíû ðàçâèòèå ìåòîäîâ ïðîòåîìèêè è ãåíîìèêè êà÷åñòâåííî èçìåíèëè â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ñèòóàöèþ âî âñåõ îáëàñòÿõ áèîõèìèè, âêëþ÷àÿ è ìåìáðàíîëîãèþ, ïðèâåëè ê îáíàðóæåíèþ íîâûõ, ðàíåå íå èçâåñòíûõ ìåìáðàííûõ áåëêîâ: òðàíñïîðòåðîâ, ðåöåïòîðîâ, ðåãóëÿòîðîâ, â ÷àñòíîñòè, ðåãóëÿòîðîâ ñîñòàâà è ðàñïîëîæåíèÿ èíäèâèäóàëüíûõ êëàññîâ ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ, 36 ãëèêîôîñôîëèïèäîâ, õîëåñòåðèíà. Ýòè áåëêè êîíòðîëèðóþò ïðîöåññû íå òîëüêî áèîñèíòåçà ÔË, íî è äåàöèëèðîâàíèÿ (ôîñôîëèïàçàìè À) ñ ïîñëåäóþùèì èçáèðàòåëüíûì àöèëèðîâàíèåì (ò.í. "ðåìîäåëèðîâàíèå"), à òàêæå ñóùåñòâåííîå äëÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ìåìáðàíû òðàíñáèñëîéíîå ïåðåìåùåíèå ("ôëèï-ôëîï") ìîëåêóë ÔË. 2.1. Ñòðîåíèå áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí Ñîãëàñíî æèäêîìîçàè÷íîé ìîäåëè, ïðåäëîæåííîé â 1972 ã. Ñèíãåðîì è Íèêîëñîíîì [2], ôîñôîëèïèäû â ìåìáðàíå ðàñïîëîæåíû â ôîðìå äâîéíîãî ñëîÿ (áèñëîÿ), êîòîðûé îáðàçóåò æèäêóþ èëè òî÷íåå æèäêîêðèñòàëëè÷åñêóþ ìàòðèöó (ðèñ. 2.1.1). Êàæäûé ñëîé ÔË îáðàùåí æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè âíóòðü áèñëîÿ, ôîðìèðóÿ ãèäðîôîáíóþ ôàçó. Ïîëÿðíûå ãèäðîôèëüíûå "ãîëîâêè" ÔË îáðàùåíû íàðóæó è âíóòðü êëåòêè. Áåëêè ïðîíèçûâàþò âñþ ìåìáðàíó èëè "ïëàâàþò" âíóòðè íåå. Òàêàÿ ìåìáðàíà îáëàäàåò îïðåäåëåííîé òåêó÷åñòüþ, îáóñëîâëåííîé ëàòåðàëüíîé äèôôóçèåé ëèïèäíûõ è áåëêîâûõ ìîëåêóë [3]. Ðèñ.2.1.1. Æèäêî-ê êðèñòàëëè÷åñêàÿ ìîäåëü ìåìáðàíû (ïî [215] ñ èçìåíåíèÿìè) Íåñìîòðÿ íà ñóùåñòâåííûå äîñòèæåíèÿ, îñîáåííî â ïîñëåäíèå ãîäû, ïîêàçàâøèå îãðîìíóþ, ïîêà åùå ïîëíîñòüþ íå îáúÿñíåííóþ óñëîæíåííîñòü ìîëåêóëÿðíîé ñòðóêòóðû áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, ñîâðåìåííàÿ ìåìáðàíîëîãèÿ íå îòêàçàëàñü îò æèäêîìîçàè÷íîé ìîäåëè ìåìáðàíû, ïîñòîÿííî äîïîëíÿÿ åå íîâûìè ïîëó÷åííûìè äàííûìè. È â íàñòîÿùåå âðåìÿ ìû, ïî-ïðåæíåìó, ïîëüçóåìñÿ ýòîé ìîäåëüþ ñòðîåíèÿ ìåìáðàíû, íî â óñëîæíåííîé ôîðìå, â êîòîðîé îòðàæåíû íîâûå, ñïåöèôè÷åñêèå, íå èçâåñòíûå ðàíåå çàêîíîìåðíîñòè. Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì, öåíòðàëüíûé ñëîé òàêîé ìåìáðàíû ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé òåêó÷èé ëèïèäíûé áèñëîé ñ âêëþ÷åíèÿìè âíóòðèìåìáðàííûõ áåëêîâ. Ïîëàãàþò, ÷òî 37 àññîöèèðîâàííûå ñ ìåìáðàííîé áåëêè ÿâëÿþòñÿ ãëîáóëÿðíûìè. Íåêîòîðûå èç íèõ ðàñïîëîæåíû íà ïîëÿðíîé ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû èëè ÷àñòè÷íî ïîãðóæåíû â åå ìîíîñëîé êàê ñ íàðóæíîé, òàê è ñ âíóòðåííåé ñòîðîíû. Ýòî, òàê íàçûâàåìûå, ïåðèôåðè÷åñêèå, ôóíêöèîíàëüíî àññîöèèðîâàííûå ñ ìåìáðàíîé áåëêè, óäåðæèâàåìûå íà åå ïîâåðõíîñòè ïðè ïîìîùè íåêîâàëåíòíûõ ñâÿçåé. Äðóãèå, èíòåãðàëüíûå áåëêè ïðîõîäÿò ÷åðåç âñþ òîëùó ìåìáðàíû, â òîì ÷èñëå è ÷åðåç âíóòðåííèå íåïîëÿðíûå åå ñëîè.  èíòåãðàëüíûõ áåëêàõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòü àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ ðàñïðåäåëåíà òàêèì îáðàçîì, ÷òî ãèäðîôîáíûå îñòàòêè àìèíîêèñëîò ôîðìèðóþò ñòðóêòóðû, êîòîðûå ïðîíèçûâàþò ìåìáðàíó, à ãèäðîôèëüíûå - îáðàçóþò ôóíêöèîíàëüíûå äîìåíû íà âíóòðåííåé è/èëè íàðóæíîé ïîâåðõíîñòÿõ ìåìáðàíû. Òàêèì îáðàçîì, ôóíêöèîíàëüíî ðàçíûå áåëêè ìåìáðàíû îáðàçóþò â æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîì áèñëîå ôîñôîëèïèäîâ ñâîåîáðàçíóþ ìîçàè÷íóþ ñòðóêòóðó. Ýòà ìîçàèêà íå ÿâëÿåòñÿ ñòðîãî ôèêñèðîâàííîé, ÷òî ïîçâîëÿåò ðàçíûì êëàññàì ÔË è ìèíîðíûì ëèïèäàì ìåìáðàíû ïðè ëàòåðàëüíîé äèôôóçèè ôîðìèðîâàòü îïðåäåëåííûå êëàñòåðû (ó÷àñòêè ïîâåðõíîñòíîãî ìîíîñëîÿ ìåìáðàíû). Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà ñîäåðæèò ìíîãî ãëèêîëèïèäîâ, ïîëÿðíûå óãëåâîäíûå ÷àñòè êîòîðûõ (îñòàòêè ìîíî- è îëèãîñàõàðèäîâ), ðàñïîëîæåíû íà åå ïîâåðõíîñòè, ÷òî ïîçâîëÿåò èì âûïîëíÿòü ñïåöèôè÷íûå ôóíêöèè, òàêèå êàê ðåöåïöèÿ (êëåòî÷íîå óçíàâàíèå) è èììóíîõèìè÷åñêèå ðåàêöèè. Âûñòóïàþùèå èç áèñëîÿ ãèäðîôèëüíûå îëèãîñàõàðèäíûå ó÷àñòêè ãëèêîëèïèäîâ îáðàçóþò ó ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê ïîäîáèå íàðóæíîé îáîëî÷êè - ãëèêîêàëèêñà. Îïðåäåëåííóþ ðîëü â ñòàáèëèçàöèè ëèïèäíîãî áèñëîÿ èãðàåò è ñëîé âîäû, ïîêðûâàþùèé ñíàðóæè ìîíîñëîé ôîñôîëèïèäîâ è ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Òàêèå ìîíîñëîè âîäû óäåðæèâàþòñÿ íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû çà ñ÷åò âîäîðîäíûõ ñâÿçåé ìåæäó ïîëÿðíûìè "ãîëîâêàìè" ÔË è ìîëåêóëàìè âîäû [4].  áèñëîå èíäèâèäóàëüíûå ëèïèäíûå ìîëåêóëû ìîãóò ïåðåìåùàòüñÿ (ëàòåðàëüíàÿ äèôôóçèÿ), ÷òî îáåñïå÷èâàåò ìåìáðàíå æèäêîñòíîñòü è ãèáêîñòü. Îòäåëüíûå ìîëåêóëû ÔË, â çàâèñèìîñòè îò äëèíû èõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ñïîñîáíû ïåðåìåùàòüñÿ ìåæäó íàðóæíûì è âíóòðåííèì ìîíîñëîåì ìåìáðàíû, èñïîëüçóÿ ìåõàíèçì ôëèïôëîïà. Âñå ýòî óêàçûâàåò íà òî, ÷òî áèñëîéíàÿ ìåìáðàíà ÿâëÿåòñÿ åäèíîé äèíàìè÷íîé è ñàìîðåãóëèðóþùåéñÿ ñèñòåìîé. Íà ðèñ. 2.1.2 ïðåäñòàâëåíà ñîâðåìåííàÿ áîëåå óñëîæíåííàÿ æèäêîìîçàè÷íàÿ ìîäåëü ìåìáðàíû ýóêàðèîòè÷åñêîé êëåòêè. 38 Ðèñ. 2.1.2. Ñîâðåìåííàÿ èíòåðïðåòàöèÿ æèäêî-ì ìîçàè÷íîé ìîäåëè ìåìáðàíû (ïî [215] ñ èçìåíåíèÿìè). Âèäíû âñòðîåííûå â ìåìáðàíó ïåðèôåðè÷åñêèå è èíòåãðàëüíûå áåëêè è ìîëåêóëû õîëåñòåðèíà; ïîêàçàíî âçàèìîäåéñòâèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ ñ âíóòðèêëåòî÷íûìè âîëîêíàìè öèòîñêåëåòà (íèæíÿÿ ÷àñòü ðèñóíêà) è ñ âíåêëåòî÷íûì ìàòðèêñîì, ïðè âîçìîæíîì ó÷àñòèè ñâÿçàííûõ ñ ìåìáðàíîé ãëèêîëèïèäîâ è ãëèêîïðîòåèíîâ (âåðõíÿÿ ÷àñòü ðèñóíêà). Æèäêîìîçàè÷íàÿ ìîäåëü îáúÿñíÿåò ìíîãèå ñâîéñòâà áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, íàïðèìåð, íåîäèíàêîâîå ÷èñëî ìîëåêóë áåëêà íà åäèíèöó ïëîùàäè, àññèìåòðèþ, âîçìîæíîñòü ðàñïîëîæåíèÿ áåëêîâ òîëüêî íà âíóòðåííåé èëè òîëüêî íà íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè, ðàçíóþ òîëùèíó ìåìáðàíû è äð. Ýòà ìîäåëü ïîçâîëÿåò ïîíÿòü âûñîêîå ýëåêòðè÷åñêîå ñîïðîòèâëåíèå ìåìáðàíû, èçáèðàòåëüíóþ ïðîíèöàåìîñòü, èçìåí÷èâîñòü, à òàêæå ëàòåðàëüíóþ äèôôóçèþ - ïåðåìåùåíèå îòäåëüíûõ ëèïèäîâ è áåëêîâ â ïëîñêîñòè íàðóæíîãî ìîíîñëîÿ ñî çíà÷èòåëüíîé ñêîðîñòüþ. Ïîìèìî áåëêîâ è ÔË, âàæíåéøèìè êîìïîíåíòàìè âñåõ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí ÿâëÿþòñÿ ñòåðèíû.  ïðîòèâîïîëîæíîñòü èìåþùåìóñÿ ðàçíîîáðàçèþ ÔË, êëåòêè ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæàò òîëüêî îäèí âàæíåéøèé ñòåðèí - õîëåñòåðèí, êîòîðûé íåîáõîäèì äëÿ èõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè è ïðîëèôåðàöèè [5 - 7]. Ìàêñèìàëüíàÿ ðàñòâîðèìîñòü õîëåñòåðèíà â ôîñôîëèïèäíîì áèñëîå âàðüèðóåò â ïðåäåëàõ 50 - 66 ìîë% â çàâèñèìîñòè îò âèäà äîìèíèðóþùåãî â íåì ëèïèäà [8, 9]. Âñòðàèâàÿñü ìåæäó ìîëåêóëàìè ëèïèäîâ, ÕÑ ó÷àñòâóåò â ðåãóëÿöèè òåêó÷åñòè ìåìáðàíû, ïðåïÿòñòâóÿ ïëîòíîé óïàêîâêå óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé è òåì ñàìûì, ñíèæàÿ òåìïåðàòóðó ïëàâëåíèÿ ëèïèäîâ. Âíåøíå ýòî ïðîÿâëÿåòñÿ â "ðàñøèðåíèè" 39 îáëàñòè ôàçîâîãî ïåðåõîäà â ëèïèäíîì áèñëîå.  æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîì ñîñòîÿíèè ÕÑ ïîâûøàåò ñòåïåíü óïîðÿäî÷åííîé îðèåíòàöèè è ñíèæàåò ñêîðîñòü äâèæåíèÿ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé ÔË [10, 11]. Òàêèì îáðàçîì, ÕÑ è ìåìáðàííûå áåëêè çàìåòíî âëèÿþò íà îðãàíèçàöèþ ëèïèäíîãî áèñëîÿ, óâåëè÷èâàÿ åãî ñòðóêòóðíóþ ãåòåðîãåííîñòü [12]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ñòðóêòóðíàÿ äèíàìèêà áèñëîÿ â öåëîì (ôàçîâûå ïåðåõîäû, ïîääåðæàíèå àñèììåòðèè, òåêó÷åñòü, ëàòåðàëüíàÿ äèôôóçèÿ, "ôëèï-ôëîï" è äð.) èãðàåò êëþ÷åâóþ ðîëü â ðåàëèçàöèè ìåìáðàííûõ è òðàíñìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ.  îñíîâå ñòðóêòóðíîé äèíàìèêè áèñëîÿ ëåæàò ëèïèä/ëèïèäíûå è ëèïèä/áåëêîâûå âçàèìîäåéñòâèÿ èëè, äðóãèìè ñëîâàìè, ïîâåäåíèåì ëèïèäîâ óïðàâëÿåò èõ õèìè÷åñêàÿ ñòðóêòóðà. Òàê, ïðîñòðàíñòâåííàÿ ñòðóêòóðà è ðàçìåð ïîëÿðíîé îáëàñòè ÔË âëèÿþò íà ïëîòíîñòü ìîëåêóëÿðíîé óïàêîâêè, ò.å. íà ïðîñòðàíñòâåííîå ðàñïîëîæåíèå â ìåìáðàíå æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë. Íàïðèìåð, ýòàíîëàìèí êîíôîðìàöèîííî çàíèìàåò ìåíüøèé îáúåì, ÷åì õîëèí (â êîòîðîì àòîìû âîäîðîäà â àìèíîãðóïïå çàìåíåíû áîëüøèìè ïî îáúåìó ìåòèëüíûìè ãðóïïàìè), ÷òî ñîçäàåò âîçìîæíîñòü áîëåå ïëîòíîé óïàêîâêè àöèëüíûõ öåïåé â áèñëîå, ñîäåðæàùåì ÔÝ, ïî ñðàâíåíèþ ñ ÔÕ. Áîëåå òîãî, ÔÝ ìîæåò îáðàçîâûâàòü îáøèðíóþ ñåòü âîäîðîäíûõ ñâÿçåé, êîòîðûå äîïîëíèòåëüíî ïîâûøàþò ïëîòíîñòü óïàêîâêè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé. Õàðàêòåð óïàêîâêè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ÔË â ìåìáðàíå ñóùåñòâåííî çàâèñèò îò èõ õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû. Òàê, â ïîëíîñòüþ íàñûùåííûõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïÿõ ÔË âñå àòîìû óãëåðîäà íàõîäÿòñÿ ïîëíîñòüþ â òðàíñ-êîíôîðìàöèè.  ñëó÷àå äâóõ öåïåé â ìîëåêóëå îíè èìåþò âîçìîæíîñòü ðàñïîëàãàòüñÿ ïàðàëëåëüíî äðóã äðóãó (è ïàðàëëåëüíî àöèëüíûì öåïÿì ñîñåäíèõ ÔË ìîëåêóë). Ïðèìåðîì ýòîãî ìîæåò ñëóæèòü ìîëåêóëà ñôèíãîìèåëèíà, êîòîðîé ñâîéñòâåííû íàèáîëåå íàñûùåííûå àöèëüíûå öåïè - îíà çàíèìàåò â ñðåäíåì îáëàñòü 36 Α° 2. Ââåäåíèå äâîéíîé ñâÿçè ñ öèñ-êîíôîðìàöèåé (à èìåííî â òàêîé êîíôîðìàöèè íàõîäÿòñÿ íåíàñûùåííûå ÆÊ ïðèðîäíûõ ÔË) ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ â æèðíîêèñëîòíîé öåïè ïåðåãèáà (êèíê), ðàçðûõëÿþùåãî ïëîòíóþ óïàêîâêó, âàí-äåð-âààëüñîâñêîå âçàèìîäåéñòâèå ïðè ýòîì îñëàáëÿåòñÿ. Ïîýòîìó ïðèñóòñòâèå õîòÿ áû îäíîé åäèíñòâåííîé äâîéíîé ñâÿçè äîñòàòî÷íî äëÿ òîãî, ÷òîáû îêàçàòü âûðàæåííîå âëèÿíèå íà ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà ÔË. Ïðè íàëè÷èè â ìîëåêóëå ÔË äâóõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé, ñîäåðæàùèõ íåíàñûùåííûå äâîéíûå ñâÿçè (êàê, íàïðèìåð, â 40 äèëèíîëåîèëôîñôàòèäèëõîëèíå - ÄËÔÕ), îáëàñòü, çàíèìàåìàÿ îäíîé ìîëåêóëîé, ïðè äàâëåíèè, ðàâíîì âíóòðèêëåòî÷íîìó äàâëåíèþ, îêàçûâàåìîìó íà áèñëîé (25 äèí/ñì), óâåëè÷èâàåòñÿ ïî÷òè â 2 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîëíîñòüþ íàñûùåííûì ÔË. Ôèçèêî-õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, òî÷íåå òåõ ëèïèäîâ, èç êîòîðûõ ìåìáðàíû ïîñòðîåíû, îïðåäåëÿþò ìíîãèå ôàêòîðû.  íàñòîÿùåå âðåìÿ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî äëÿ îñóùåñòâëåíèÿ ìåìáðàíîé áèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé íåîáõîäèìî îïðåäåëåííîå ñîñòîÿíèå ëèïèäíîé ìàòðèöû, â ÷àñòíîñòè, îïðåäåëåííàÿ ñòåïåíü æèäêîñòíîñòè áèñëîÿ.  îòëè÷èå îò ïåðâûõ ïðåäñòàâëåíèé î ñâîáîäíîé äèôôóçèè ÔË è áåëêîâ â ìåìáðàííîé ñòðóêòóðå, ñîãëàñíî æèäêîìîçàè÷íîé ìîäåëè ìåìáðàíû, â íàñòîÿùåå âðåìÿ óñòàíîâëåíî, ÷òî ëàòåðàëüíàÿ (ïëîñêîñòíàÿ) ñòðóêòóðà ìåìáðàíû áîëåå ñëîæíàÿ, è ÷òî ëèïèäû è ìåìáðàííûå áåëêè â íåé íå èìåþò ïîëíîé ñâîáîäû ïåðåìåùåíèÿ, à ìîãóò áûòü, íàïðèìåð, "çàÿêîðåíû" çà âíóòðåííèå (öèòîïëàçìàòè÷åñêèå) ñòðóêòóðû êëåòêè, òèïà ìèêðîôèëàìåíòîâ [13 - 16]. Íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèé íà èñêóññòâåííûõ ìåìáðàíàõ íåäàâíî áûëà ïðåäëîæåíà ìîäåëü îïðåäåëåííîé ëàòåðàëüíîé ëîêàëèçàöèè ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, òàê íàçûâàåìàÿ ìîäåëü "ñóïåð-ðåøåòêè" èëè ìîäåëü ðåãóëÿðíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ [17]. Ñîãëàñíî ýòîé ìîäåëè ëàòåðàëüíîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ èìååò òåíäåíöèþ ê îïðåäåëåííîìó øàáëîíó èëè ìàòðèöå. Õàðàêòåð ðåãóëÿðíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ îïðåäåëÿåòñÿ: (1) âàí-äåð-âààëüñîâñêèìè ñâÿçÿìè (ãëàâíûì îáðàçîì ïðè ëèïèä/ëèïèäíîì è ëèïèä/áåëêîâîì âçàèìîäåéñòâèÿõ); (2) ñèëàìè ýëåêòðîñòàòè÷åñêîãî îòòàëêèâàíèÿ (íàïðèìåð, ìåæäó îäíîèìåííî çàðÿæåííûìè ïîëÿðíûìè "ãîëîâíûìè" ãðóïïàìè ÔË) è (3) ñòåðè÷åñêèìè ýôôåêòàìè (îáóñëîâëåííûìè, íàïðèìåð, ðàçìåðîì è ôîðìîé ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ÔË). Âîçìîæíîñòü ïðèìåíåíèÿ ìîäåëè "ñóïåð-ðåøåòêè" ê áèîëîãè÷åñêèì ìåìáðàíàì áûëà âïåðâûå èñïûòàíà íà ìåìáðàíå ýðèòðîöèòîâ [18]. Ñîãëàñíî ïðåäñêàçàííîé ìîäåëè "ñóïåððåøåòêè", ëàòåðàëüíîå ðàñïðåäåëåíèå ÔË íà âíåøíåé è âíóòðåííåé ñòîðîíå áèñëîÿ ïðîèñõîäèò â ñîîòâåòñòâèè ñ ðàçìåðîì ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ÔË (õîëèí èëè ýòàíîëàìèí), â ñîîòâåòñòâèè ñ èõ çàðÿäîì (íàïðèìåð, êèñëûå ÔË), èëè ïðèñóòñòâèåì õîëåñòåðèíà, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè õèìè÷åñêîãî àíàëèçà ñîñòàâà ëèïèäîâ ìåìáðàí ýðèòðîöèòîâ [18]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî õîòÿ ëàòåðàëüíîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ â ìåìáðàíå òåîðåòè÷åñêè áûëî ïðåäñêàçàíî ìîäåëüþ 41 "ñóïåð-ðåøåòêè", äëÿ åå ïîäòâåðæäåíèÿ íåîáõîäèìû äîïîëíèòåëüíûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ, îñîáåííî íà ìåìáðàíàõ in vivo. 2.2. Àñèììåòðèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ìåìáðàíå. Ñòðóêòóðíàÿ àñèììåòðèÿ èëè ðàçëè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ ìåæäó âíóòðåííèìè è íàðóæíûìè ìîíîñëîÿìè ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç âàæíåéøèõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû, êîòîðîå ïîçâîëÿåò åé äåéñòâîâàòü äèôôåðåíöèðîâàííî ïî îòíîøåíèþ ê ðàçäåëÿåìûì åþ êëåòî÷íûì êîìïàðòìåíòàì. Èìåííî áëàãîäàðÿ àñèììåòðèè, âíåøíÿÿ ïîâåðõíîñòü ìåìáðàíû õèìè÷åñêè îòëè÷àåòñÿ îò âíóòðåííåé [19, 20]. Àñèììåòðè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ ìåæäó íàðóæíûì è âíóòðåííèì ìîíîñëîÿìè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà îáíàðóæåíî ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ áèîìåìáðàíàõ, â òîì ÷èñëå è âíóòðèêëåòî÷íûõ [21].  íàñòîÿùåå âðåìÿ óæå äîêàçàíî, ÷òî õîëèí-ñîäåðæàùèå ëèïèäû, ÔÕ, ÑÌ ðàñïîëîæåíû ïðåèìóùåñòâåííî íà âíåøíåé ñòîðîíå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû èëè â ïðîñâåòå ñòâîðîê âíóòðåííèõ îðãàíåëë, à àìèíîñîäåðæàùèå ÔË (òàêèå êàê ÔÝ è ÔÑ) - íà öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Äàííûå ïî äðóãèì îñíîâíûì âèäàì ôîñôîëèïèäîâ, òàêèì, êàê ÔÊ, ÔÈ, ÔÈ-4ìîíîôîñôàò (ÐIÐ) è ÔÈ-4,5-äèôîñôàò (ÐIÐ2) ñâèäåòåëüñòâóþò î âîçìîæíîé èõ ëîêàëèçàöèè êàê íà âíåøíåé, òàê è íà âíóòðåííåé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Íàïðèìåð, ìåìáðàíà ýðèòðîöèòîâ íà âíåøíåé ñòîðîíå ìîíîñëîÿ ñîäåðæèò 75-80% ÔÕ è ÑÌ, 20% ÔÝ, ÔÊ, ÔÈ è ÔÈ-4,5-äèôîñôàòà, íî íà ýòîé ñòîðîíå íå îáíàðóæèâàþòñÿ ÔÑ èëè ÔÈ-4-ìîíîôîñôàò [22 - 26]. Àñèììåòðèÿ ìåìáðàííûõ ÔË ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ âûïîëíåíèÿ êëåòêîé îïðåäåëåííûõ ôóíêöèé. Òàê, Kato ñ ñîàâò. [27] ïîêàçàëè ðîëü àñèììåòðèè ìåìáðàí æèðîâûõ êëåòîê â ýêçîöèòîçå: ïðè åå èñêóññòâåííîì íàðóøåíèè ñ ïîìîùüþ ñâåðõýêcïðåññèè òðàíñïîðòíîãî áåëêà ñêðàìáëàçû íàáëþäàëîñü èíãèáèðîâàíèå ýêçîöèòîçà. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïîòåðÿ òðàíñìåìáðàííîé àñèììåòðèè ÔË ñ ïîñëåäóþùèì ïîÿâëåíèåì ÔÑ âî âíåøíåì ìîíîñëîå (ýêñòåðíàëèçàöèÿ) ïðîèñõîäèò êàê â íîðìå (ïðè íåêîòîðûõ êëåòî÷íûõ ñîáûòèÿõ), òàê è ïàòîëîãèè. Íàïðèìåð, ýêñòåðíàëèçàöèÿ ÔÑ èíäóöèðóåòñÿ íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àïîïòîçà êëåòîê [28], à òàêæå íàáëþäàåòñÿ ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ [29] è â àíîìàëüíûõ ýðèòðîöèòàõ [30]. Ýòî ïåðåðàñïðåäåëåíèå ïðèâîäèò ê çíà÷èòåëüíûì èçìåíåíèÿì ïîâåðõíîñòíûõ ñâîéñòâ êëåòêè, èíèöèèðóÿ, íàïðèìåð, ïîâûøåííóþ àäãåçèþ [31, 32], ïîâûøåííóþ 42 àãðåãàöèþ [29], óçíàâàíèå ôàãîöèòàìè [33, 34]. Õîòÿ ýòè ïðîöåññû î÷åíü âàæíû äëÿ íîðìàëüíîãî ðàçâèòèÿ êëåòêè è ãîìåîñòàçà, íåðåãóëèðóåìàÿ ïîòåðÿ àñèììåòðèè ìåìáðàíû ìîæåò â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè ñïîñîáñòâîâàòü ðàçâèòèþ ðÿäà ñåðäå÷íîñîñóäèñòûõ çàáîëåâàíèé, åå ñâÿçûâàþò ñ âûñîêèì ðèñêîì ðàçâèòèÿ äèàáåòà [35, 36].  ïîñëåäíèå ãîäû îïóáëèêîâàíî ìíîãî èíòåðåñíûõ äàííûõ î çíà÷åíèè ëèïèäíîé àñèììåòðèè [37], ðîëè áåëêîâ-òðàíñïîðòåðîâ â åå ïîääåðæàíèè [38, 39] è ïîñëåäñòâèÿõ ïðè ïîòåðå àñèììåòðèè [40 - 42]. Èçâåñòíî, ÷òî ïðîöåññ áèîñèíòåçà ëèïèäîâ ïî ñâîåé ïðèðîäå àñèììåòðè÷åí, òàê êàê ôåðìåíòû, îáåñïå÷èâàþùèå ýòîò ïðîöåññ, ëîêàëèçóþòñÿ, êàê ïðàâèëî, òîëüêî íà îäíîé ñòîðîíå ìåìáðàíû, â êîòîðîé è ïðîèñõîäèò áèîñèíòåç [43]. Òàê, äëÿ îñíîâíûõ âèäîâ ÔË (ÔÑ, ÔÝ, ÔÕ è ÔÈ) ñèíòåç de novo ïðîèñõîäèò íà âíóòðåííåé, öèòîçîëüíîé, ñòîðîíå ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà (ÝÐ) [44]. Èç-çà ñóùåñòâóþùåãî òåðìîäèíàìè÷åñêîãî áàðüåðà, ïðåïÿòñòâóþùåãî ñïîíòàííîìó ñàìîïðîèçâîëüíîìó ïåðåìåùåíèþ ìåæäó ñëîÿìè, ýòè ëèïèäû äîëæíû îñòàâàòüñÿ íà òîé ñòîðîíå, ãäå áûëè ñèíòåçèðîâàíû, ò.å. íà îáîãàùåííîé èìè öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Íåðàâíûé, àñèììåòðè÷íûé ïðèðîñò âíîâü ñèíòåçèðîâàííûõ ÔË â îäíîì ìîíîñëîå, äîëæåí áûë áû íàðóøàòü ñòàáèëüíîñòü ìåìáðàíû [44 46]. Ñóùåñòâóåò ìíîãî äîêàçàòåëüñòâ ìåìáðàííîãî ïåðåðàñïðåäåëåíèÿ ñèíòåçèðîâàííûõ ëèïèäîâ ñ ïîìîùüþ ñïåöèôè÷åñêèõ ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ. Îáíàðóæåíû ëèïèäíûå òðàíñïîðòåðû, êîòîðûå ïåðåìåùàþò ñèíòåçèðîâàííûå ÔË ÷åðåç âñþ ìåìáðàíó ÝÐ, ïîýòîìó â äåéñòâèòåëüíîñòè ìåìáðàíû ÝÐ, ãäå ïðîèñõîäèò ñèíòåç ÔË, è àïïàðàòà Ãîëüäæè ìåíåå àñèììåòðè÷íû, ÷åì ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà [47 - 49]. Òàêèì îáðàçîì, ïîñëå ñèíòåçà ïðîèñõîäèò ïåðåðàñïðåäåëåíèå ÔË êàê âíóòðè ìåìáðàí êëåòêè (ÝÐ, àïïàðàòà Ãîëüäæè), òàê è èõ òðàíñïîðò ê ìåñòó ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèè. ÔÕ, íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûé ìåìáðàííûé ÔË, ëîêàëèçóåòñÿ íà îáåèõ ñòîðîíàõ ìåìáðàíû, ñ ïðåäïî÷òåíèåì ê íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè. Ïðåèìóùåñòâåííàÿ ëîêàëèçàöèÿ íà âíåøíåì ìîíîñëîå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû áîëüøèíñòâà êëåòîê õàðàêòåðíà òàêæå äëÿ ÕÑ. Êðîìå àñèììåòðè÷íîãî ðàñïîëîæåíèÿ ÔË è ÕÑ, æèðíûå êèñëîòû, âõîäÿùèå â ñîñòàâ ÔË òàêæå ðàñïðåäåëÿþòñÿ àñèììåòðè÷íî ñ ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèåé ïðîñòðàíñòâåííî èçîãíóòûõ (è çàíèìàþùèõ ïîýòîìó áîëüøóþ ïëîùàäü) íåíàñûùåííûõ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé âáëèçè íàðóæíîé ñòîðîíû ìåìáðàíû. 43  ïðèíöèïå, èçâåñòíû äâà ìåõàíèçìà, îáóñëàâëèâàþùèå íåðàâíîìåðíîñòü ëîêàëèçàöèè îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË â íàðóæíîì è âíóòðåííåì ñëîÿõ ìåìáðàíû. Îäèí èç íèõ, äàâíî èçâåñòíûé, îñíîâàí íà ðàçëè÷èè êîíôîðìàöèîííûõ ðàçìåðîâ ïîëÿðíûõ "ãîëîâíûõ" ãðóïï. Íàïðèìåð, õîëèí çà ñ÷åò òðåõ ìåòèëüíûõ ãðóïï çàíèìàåò ïðîñòðàíñòâåííî áîëüøå ìåñòà, ÷åì ýòàíîëàìèí, ïîýòîìó áîëåå åñòåñòâåííîé îêàçûâàåòñÿ ëîêàëèçàöèÿ ÔÕ íà âûïóêëîé íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè, ãäå "ãîëîâêà" ìîæåò çàíèìàòü áîëüøóþ ïëîùàäü, ÷åì ñîîòâåòñòâóþùèå åé ïîãðóæåííûå âíóòðü æèðíîêèñëîòíûå õâîñòû. Ìîëåêóëû æå ÔÝ, ñ íåáîëüøîé ýòàíîëàìèíîâîé ïîëÿðíîé "ãîëîâíîé" ãðóïïîé, ìîãóò òåñíåå ðàñïîëàãàòüñÿ âî âíóòðåííåì âîãíóòîì öèòîçîëüíîì ñëîå, ñ íåñêîëüêî ìåíüøåé îáùåé ïëîùàäüþ. Âòîðîé, ïðåäëîæåííûé â ïîñëåäíèå ãîäû ìåõàíèçì òðàíñëîêàöèè ìåáðàííûõ ÔË, ñâÿçàí ñ ó÷àñòèåì áåëêîâïåðåíîñ÷èêîâ. Îáíàðóæåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ ÀÒÔ-çàâèñèìûõ áåëêîâ-ïåðåíîñ÷èêîâ ëèïèäîâ, ïîäòâåðæäàåò ôàêò, ÷òî ñåëåêòèâíîå ïåðåìåùåíèå ëèïèäîâ ÷åðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó òðåáóåò çàòðàòû ýíåðãèè.  íàñòîÿùåå âðåìÿ êàòàëèçèðóåìûé áåëêàìè òðàíñïîðò ñ÷èòàþò îñíîâíûì ìåõàíèçìîì òðàíñëîêàöèè ìåáðàííûõ ÔË. Èìåííî ýòèì, íàïðèìåð, ìîæíî îáúÿñíèòü ðàçëè÷èå ñêîðîñòè ïåðåìåùåíèÿ àìèíî-ÔË â ðàçíûõ êëåòêàõ. Íàïðèìåð, â ôèáðîáëàñòàõ îíà íà ïîðÿäîê âûøå, ÷åì â ýðèòðîöèòàõ [50]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî â ðàçëè÷íûõ ìåìáðàíàõ ñîñóùåñòâóþò ðàçíûå áåëêîâûå òðàíñïîðòåðû, âûçûâàþùèå ðàíäîìèçàöèþ è àñèììåòðèþ ëèïèäîâ. Òàê, ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîêàçàíî, ÷òî ôîðìèðîâàíèå âûñîêî àñèììåòðè÷íîé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû èç áîëåå ñèììåòðè÷íûõ ìåìáðàí ÝÐ è Ãîëüäæè îáåñïå÷èâàþò ÀÒÔ-íåçàâèñèìûå è íåñåëåêòèâíûå ëèïèäíûå òðàíñïîðòåðû ÝÐ â ñî÷åòàíèè ñ ïîäâèæíûìè ñóáñòðàò-ñïåöèôè÷íûìè ÀÒÔçàâèñèìûìè òðàíñïîðòåðàìè, ïåðåìåùàþùèìèñÿ â ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó [53]. Îäíàêî òðàíñïîðò ÔË ñ ïîìîùüþ áåëêîâ-òðàíñïîðòåðîâ ïîêà ìàëî èçó÷åí. Îñòàåòñÿ åùå ìíîãî âîïðîñîâ, ñâÿçàííûõ ñ èõ âíóòðèêëåòî÷íîé ëîêàëèçàöèåé, áèîõèìè÷åñêîé ðåãóëÿöèåé è ò.ä. Èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò ïîçâîëÿþò óòâåðæäàòü, ÷òî áåëêè, ñïîñîáñòâóþùèå ìåìáðàííîìó ïåðåìåùåíèþ ëèïèäîâ, ÿâëÿþòñÿ ãëàâíûìè â ïðîöåññàõ ñîçäàíèÿ è ðàññåèâàíèÿ òðàíñáèñëîéíîé àñèììåòðèè. Ýòè áåëêè êëàññèôèöèðóþò â ñîîòâåòñòâèè ñ èõ ñóáñòðàòíîé ñïåöèôè÷íîñòüþ, ïîòðåáíîñòüþ â ýíåðãèè è íàïðàâëåíèåì òðàíñïîðòà.  íàñòîÿùåå âðåìÿ îïèñàíû äâà âèäà ÀÒÔ-çàâèñèìûõ áåëêîâ 44 ïåðåíîñ÷èêîâ ëèïèäîâ. Èç íèõ íàèáîëåå èçó÷åííàÿ àìèíîôîñôîëèïèäòðàíñëîêàçà èëè "ôëèïàçà", êîòîðàÿ òðàíñïîðòèðóåò ÔÑ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå èç âíåøíåãî ìîíîñëîÿ âî âíóòðåííèé. Äðóãîé áåëîê "ôëîïàçà" òðàíñïîðòèðóåò ëèïèäû â ïðîòèâîïîëîæíîì íàïðàâëåíèè. Èç ñåìåéñòâà "ôëîïàç" â íàñòîÿùåå âðåìÿ íàèáîëåå èçó÷åíû áåëêè, êàòàëèçèðóþùèå òðàíñïîðò êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ ëèïèäîâ èç âíóòðåííåãî ìîíîñëîÿ è ñåëåêòèâíûé âûõîä (efflux) ÔÕ è õîëåñòåðèíà èç ìåìáðàíû. Ñîîáùàåòñÿ òàêæå î òðåõ ÀÒÔ-íåçàâèñèìûõ è ñðàâíèòåëüíî íåñïåöèôè÷íûõ áåëêàõ-ïåðåíîñ÷èêàõ, íàçûâàåìûõ ñêðàìáëàçàìè: (1) Ñà2+-àêòèâèðóåìûé òðàíñïîðòåð ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, è äâà òðàíñïîðòåðà, ñâÿçàííûõ ñ ÝÐ - (2) ñïåöèôè÷íûé ê ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì è (3) ñïåöèôè÷íûé ê ëèïèäàì, ñîäåðæàùèì óãëåâîäíûé ôðàãìåíò [51].  öåëîì, êàê ïîêàçàíî â ðÿäå èññëåäîâàíèé, ñóììàðíîå òðàíñáèñëîéíîå ðàñïðåäåëåíèå ÔË îïðåäåëÿåòñÿ ñïåöèôè÷íîñòüþ ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ, ëîêàëèçîâàííûõ â ìåìáðàíå. Êàæäàÿ èç òðàíñïîðòíûõ àêòèâíîñòåé îòðàæàåò óíèêàëüíóþ ñïåöèôè÷íîñòü èëè íåñïåöèôè÷íîñòü, êîòîðàÿ îïðåäåëÿåò åå ôóíêöèþ â óñòàíîâëåíèè ëèïèäíîé îðãàíèçàöèè [52 - 54]. Âçàèìîäåéñòâèå ìåæäó íåñåëåêòèâíûìè è ñåëåêòèâíûìè òðàíñïîðòåðàìè âåäåò ê ïîääåðæàíèþ, à â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ - ê ãåíåðàöèè òðàíñáèñëîéíîé ëèïèäíîé àñèììåòðèè. Õîòÿ òêàíåâîå ðàñïðåäåëåíèå è ýêñïðåññèÿ íåêîòîðûõ èç ýòèõ òðàíñïîðòåðîâ îãðàíè÷åíà, â öåëîì ëèïèäíàÿ àñèììåòðèÿ ïîääåðæèâàåòñÿ èçáèðàòåëüíûì ïîòîêîì àìèíîôîñôîëèïèäîâ âíóòðü è ïîòîêîì õîëèí- è ñôèíãîëèïèäîâ - íàðóæó. Íåñåëåêòèâíûå ñêðàìáëàçû â ìåìáðàíàõ óðàâíèâàþò ðàñïðåäåëåíèå âíîâü ñèíòåçèðîâàííûõ ëèïèäîâ. ÀÒÔ-çàâèñèìûå òðàíñïîðòåðû èçáèðàòåëüíî ïîääåðæèâàþò àñèììåòðè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Ãðàäèåíòû êîíöåíòðàöèé, ñîçäàííûå ýòèìè òðàíñïîðòåðàìè, ìîãóò íèâåëèðîâàòüñÿ íåñåëåêòèâíîé Ñà2+àêòèâèðóåìîé ñêðàìáëàçîé â îòâåò íà ñòèìóëÿöèþ êëåòêè. Íåñìîòðÿ íà îïðåäåëåííûå óñïåõè â èçó÷åíèè ìåõàíèçìîâ òðàíñïîðòà ÔË áåëêàìè-ïåðåíîñ÷èêàìè è ïîääåðæàíèÿ ñ èõ ïîìîùüþ òðàíñáèñëîéíîé ëèïèäíîé àñèììåòðèè, ïîëíîé èäåíòèôèêàöèè ýòèõ áåëêîâ åùå íåò (òàáë. 2.2.1). Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî íåáîëüøîé âêëàä â ïîääåðæàíèå àñèììåòðèè âíîñèò è ñïîíòàííàÿ òðàíñìåìáðàííàÿ äèôôóçèÿ ÔË, êîòîðàÿ ïðîòåêàåò ñ î÷åíü íèçêîé ñêîðîñòüþ èç-çà âûñîêîé ýíåðãèè àêòèâàöèè ýòîãî ïðîöåññà. Êàê ïîêàçûâàþò èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ äåñÿòèëåòèé, àñèììåòðè÷íûì ìîæåò áûòü è îòäåëüíûé ìîíîñëîé ìåìáðàíû, ãäå 45 Òàáëèöà 2.2.1 Ñïåöèôè÷íîñòü òðàíñáèñëîéíûõ ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ Êëàññ Áåëîê òðàíñïîðòåðà Ôëèïïàçû Ôëîïïàçû Ñïåöèôè÷íîñòü Ññûëêà Ð4-ÀÔÒÔàçà Àìôèïàòè÷åñêèå â -âà 55, 56 Mg2+-ÀÒÔàçà ýðèòðîöèòîâ ÔÑ 57 ÀÂÑ R N-ðåòèíèëèäåí -ÔÝ 58 ÀÂÑ A1 Õîëåñòåðèí 59-63 ÀÂÑ B1 íåò ñïåöèôè÷íîñòè 64 ÀÂÑ B4 ÔÑ 64 ÀÂÑ C1 Êîðîòêî-öåïî÷å÷íûå 65,66 ÔË Ñêðàìáëàçû PL SCR1 Íåò ñïåöèôè÷íîñòè 67,68 ôëèïïàçà ÝÐ Íåò ñïåöèôè÷íîñòè 69, 48. ëèïèäû àññîöèèðóþòñÿ â äîìåíû ðàçëè÷íîãî ñîñòàâà è ñ ðàçëè÷íîé ñïîñîáíîñòüþ ê äèôôóçèè. Òàêàÿ íåîäíîðîäíîñòü ëèïèäíîé ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû èëè ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ âîçíèêàåò ïðè îáðàçîâàíèè ëàòåðàëüíûõ äîìåíîâ. Ýòè äîìåíû õàðàêòåðèçóþòñÿ ñïåöèôè÷åñêîé ñåëåêòèâíîñòüþ ê íåêîòîðûì êîìïîíåíòàì ìåìáðàíû, íàïðèìåð, áåëêàì, êîòîðûå, ïî âñåé âèäèìîñòè, íå ó÷àñòâóþò â ëàòåðàëüíûõ ïåðåìåùåíèÿõ èç-çà îãðàíè÷èâàþùèõ èõ öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ, âíóòðè- è âíåìåìáðàííûõ âçàèìîäåéñòâèé. 2.3. Æèäêîñòíîñòü áèîìåìáðàí êàê ôàêòîð ðåãóëÿöèè ìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ. Ïî ìíîãî÷èñëåííûì äàííûì ðåíòãåíîñòðóêòóðíûõ èññëåäîâàíèé, ÔË ìåìáðàí ïðè ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå èìåþò æèäêîêðèñòàëëè÷åñêóþ ñòðóêòóðó. Ïðè èçìåíåíèè ïàðàìåòðîâ ñðåäû, â ïåðâóþ î÷åðåäü, òåìïåðàòóðû è äàâëåíèÿ, ÔË â ìåìáðàíå ìîãóò ïåðåéòè â (1) òâåðäîå, êðèñòàëëè÷åñêîå ñîñòîÿíèå (ñîñòîÿíèå ãåëÿ) èëè (2) â æèäêîå ñîñòîÿíèå, êîòîðîå ëèøåíî îïðåäåëåííîé ñòðóêòóðû. Èíûìè ñëîâàìè, ëèïèäû ìåìáðàí ìîãóò "çàìåðçíóòü" èëè "ðàñïëàâèòüñÿ". È òî, è äðóãîå ñîñòîÿíèå âëèÿþò íà áèîëîãè÷åñêèå ôóíêöèè ìåìáðàíû. Ñòåïåíü æèäêîñòíîñòè ìåìáðàííûõ ÔË, ò. å. èõ ôèçèêîõèìè÷åñêîå ñîñòîÿíèå ìåæäó òâåðäîé, óïîðÿäî÷åííîé ôàçîé è æèäêîêðèñòàëëè÷åñêèì ñîñòîÿíèåì çàâèñèò îò òîãî, íàñêîëüêî òåìïåðàòóðà ýòîãî ôàçîâîãî ïåðåõîäà îòëè÷àåòñÿ îò ôèçèîëîãè÷åñêîé. Òåìïåðàòóðà ôàçîâîãî ïåðåõîäà (Òô.ï.) (à çíà÷èò è æèäêîñòíîñòü, èëè òåêó÷åñòü ìåìáðàíû) çàâèñÿò îò ðÿäà ôàêòîðîâ: 46 - äëèíû àöèëüíûõ öåïåé ÔË è ñòåïåíè èõ íåíàñûùåííîñòè; - ïðèðîäû è âåëè÷èíû çàðÿäà ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ÔË; - õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû ñòåðèíîâ è ñîîòíîøåíèÿ ÔË/ñòåðèí â ìåìáðàíå (â êëåòêàõ æèâîòíûõ ýòî õîëåñòåðèí, ó ðàñòåíèé ôèòîñòåðèíû); - õàðàêòåðîì âçàèìîäåéñòâèé ìåæäó ÔË è áåëêàìè. Êðîìå òîãî, íà æèäêîñòíîñòü (èëè, íàïðîòèâ, ìèêðîâÿçêîñòü) ìåìáðàí âëèÿþò òàêèå ôàêòîðû, êàê òåìïåðàòóðà, äàâëåíèå, îáúåì (æèäêîñòíîñòü ïðîïîðöèîíàëüíà ñâîáîäíîìó îáúåìó ëèïèäíûõ îñòàòêîâ), ìåìáðàííûé ïîòåíöèàë, êèñëîòíîñòü è èîíû êàëüöèÿ. Ìíîãèå îðãàíèçìû ðåãóëèðóþò æèäêîñòíîñòü ñâîèõ ìåìáðàí ïóòåì àäàïòàöèè ëèïèäíîãî ñîñòàâà ê òåìïåðàòóðå, ÷òî óêàçûâàåò íà âàæíîñòü ýòîãî ïàðàìåòðà äëÿ ìåìáðàííûõ ôóíêöèé. Ôèçè÷åñêîå ñîñòîÿíèå ìåìáðàíû ìîæåò ðåãóëèðîâàòü ìíîãî÷èñëåííûå ðåàêöèè, ïðîòåêàþùèå â îáúåìå ìåìáðàíû èëè/è ñâÿçàííûå ñ ôóíêöèîíèðîâàíèåì âñòðîåííûõ â ìåìáðàíû áåëêîâ. Èìååòñÿ ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ðàáîò è îáçîðîâ, èëëþñòðèðóþùèõ çàâèñèìîñòü àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ îò æèäêîñòíîñòè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ: ïîêàçàíî, íàïðèìåð, ðåçêîå èíãèáèðîâàíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ ïðè ðàçëè÷íûõ âîçäåéñòâèÿõ, ïðèâîäÿùèõ ê ñíèæåíèþ æèäêîñòíîñòè ìåìáðàí. Ê íèì îòíîñÿòñÿ ìîäèôèêàöèÿ ñîñòàâà ëèïèäîâ, äåéñòâèå ôîñôîëèïàç, èëè ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, èçìåíåíèå ñîäåðæàíèÿ ÕÑ èëè äèåòè÷åñêèå ìàíèïóëÿöèè, ïðèâîäÿùèå ê èçìåíåíèþ æèðíîêèñëîòíîãî ñîñòàâà ÔË. Èçìåíåíèå æèäêîñòíîñòè áèîìåìáðàí â îïðåäåëåííûõ ïðåäåëàõ ìîæåò ðåãóëèðîâàòüñÿ ñàìîé êëåòêîé, à èìåííî: ñåíñîðàìè, ñèãíàëüíîé òðàíñäóêöèåé è ãåííîé ðåãóëÿöèåé. Ïðèìåðîì òàêîé ðåãóëÿöèè ìîæåò ñëóæèòü ñèñòåìà äåñàòóðàç ëèïèäîâ â ðàñòåíèÿõ è öèàíîáàêòåðèÿõ. Ñäâèã Òô.ï. îò 34° äî 22° èëè óâåëè÷åíèå ñòåïåíè íåíàñûùåííîñòè ëèïèäîâ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïðè 36° (ò.å. âîçäåéñòâèÿ, ñíèæàþùèå æèäêîñòíîñòü ìåìáðàíû) ïðèâîäÿò óæå ÷åðåç íåñêîëüêî ìèíóò ê ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè ãåíà àöèëëèïèääåñàòóðàçû, ñóáñòðàòîì êîòîðîé ÿâëÿþòñÿ æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè äèãëèöåðèäîâ.  ðåçóëüòàòå â ìîëåêóëàõ ÔË ìåìáðàíû ïîÿâëÿþòñÿ íåíàñûùåííûå ÆÊ, ÷òî ïðèâîäèò ê óìåíüøåíèþ Òô.ï. è óâåëè÷åíèþ ìåìáðàííîé æèäêîñòíîñòè. Ïîâûøåíèå ýêñïðåññèè ýòîãî ãåíà îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç ñëîæíóþ öåïü ðåàêöèé ïåðåäà÷è (ïðåîáðàçîâàíèÿ) ñèãíàëà. Ïåðâîíà÷àëüíî ðåàãèðóþùèé íà èçìåíåíèå æèäêîñòíîñòè ñåíñîð ãèñòèäèíêèíàçà Hik 33 ôîñôîðèëèðóåò ãèñòèäèíêèíàçó Íik19. Ïîñëåäíÿÿ âêëþ÷àåò íåçàâèñèìûé îòâåòíûé ðåãóëÿòîð, ñâÿçûâàþùèé ÄÍÊ è ðåãóëèðóþùèé òðàíñêðèïöèþ ãåíà. 47 Äðóãîé ïóòü ðåãóëÿöèè ôèçè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàíû èçìåíåíèå áèîñèíòåçà õîëåñòåðèíà. Îí îïîñðåäóåòñÿ òðàíñêðèïöèîííûì ôàêòîðîì, âûñâîáîæäàþùèìñÿ èç ÝÐ è íàçûâàåìûì SREBP (stterol regulaatory elementt binding prottein). Âûõîä åãî èç ÝÐ áëîêèðóåòñÿ õîëåñòåðèíîì, êîòîðûé òàêèì ïóòåì ñíèæàåò òðàíñêðèïöèþ áåëêà è òîðìîçèò ñèíòåç ïî ìåõàíèçìó îòðèöàòåëüíîé îáðàòíîé ñâÿçè (ò.í. feedback control -"îáðàòíûé êîíòðîëü"). Ïðè äåôèöèòå ÕÑ â ÝÐ ñíèìàåòñÿ "áëîêèðîâêà" SREBP è âêëþ÷àåòñÿ ïðîöåññ åãî âûõîäà ñ ïîñëåäóþùåé òðàíñêðèïöèåé êëþ÷åâîãî ôåðìåíòà ñèíòåçà ÕÑ - îêñèìåòèëãëóòàðèë-ÑîÀðåäóêòàçû.  ðåãóëÿöèè ïðîöåññà ó÷àñòâóåò òàêæå ÷àñòè÷íûé ïðîòåîëèç òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ â àïïàðàòå Ãîëüäæè. Æèäêîñòíîñòü ìåìáðàíû è âîçìîæíîñòü äèôôóçèè â íåé ëèïèäîâ íåîáõîäèìû äëÿ: (1) ñîõðàíåíèÿ èîííîé ïðîíèöàåìîñòè; (2) äèôôóçèè ìîëåêóë ñóáñòðàòîâ è (3) ñîõðàíåíèÿ àêòèâíîé êîíôîðìàöèè áåëêîâ. Ìíîãèå ïðîöåññû â áèîìåìáðàíàõ, òàêèå êàê òðàíñïîðò âåùåñòâ, òðàíñôîðìàöèÿ ýíåðãèè, áèîñèíòåç, ñàìîñáîðêà è ò. ä., ñîïðÿæåíû ñ äâèæåíèåì ìîëåêóë. Ýòî ìîæåò áûòü êàê òðàíñïîðò ñîåäèíåíèé ÷åðåç ìåìáðàíó, òàê è ïåðåìåùåíèå ìîëåêóë, êîìïîíåíòîâ ìåìáðàíû (áåëêîâ, õîëåñòåðèíà, ôîñôîëèïèäîâ). Ïðè ýòîì äâèæåíèå "ôëèï-ôëîï" - ñ íàðóæíîé ñòîðîíû â öèòîçîëüíóþ ÷àñòü è îáðàòíî - èìååò äëÿ êîìïîíåíòîâ ìåìáðàíû ìåíüøåå çíà÷åíèå, ÷åì ëàòåðàëüíîå ïåðåìåùåíèå â ïðåäåëàõ îäíîãî ìîíîñëîÿ ìåìáðàíû. Ýòî îáúÿñíÿþò âûñîêîé ýíåðãèåé àêòèâàöèè, íåîáõîäèìîé äëÿ ïåðåíîñà, íàïðèìåð, ïîëÿðíîé ãðóïïû ôîñôîëèïèäà ÷åðåç óãëåâîäîðîäíîå ÿäðî áèñëîÿ. Òàê, ýíåðãèÿ àêòèâàöèè äëÿ òðàíñáèñëîéíîãî ïåðåìåùåíèÿ ÔÕ ("ôëèï-ôëîï") ñîñòàâëÿåò ïîðÿäêà 80 êÄæ/ìîëü, â òî âðåìÿ êàê äëÿ ëàòåðàëüíîé äèôôóçèè - 21 êÄæ/ìîëü [70]. 2.4. Ìåìáðàííûå áåëêè. Íà ñîñòîÿíèå ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ âëèÿåò è áåëêîâûé ñîñòàâ ìåìáðàíû, ïðè÷åì ó áîëüøèíñòâà áèîìåìáðàí ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê îí íå ìåíåå ðàçíîîáðàçåí, ÷åì ëèïèäíûé. Ïðî÷íîñòü ñâÿçûâàíèÿ áåëêîâ ñ ëèïèäíûì áèñëîåì â ìåìáðàíàõ âàðüèðóåò â øèðîêèõ ïðåäåëàõ: îò ïðîñòîé ñîðáöèè äî ñòðóêòóð òèïà êàíàëîâ [71].  çàâèñèìîñòè îò ëîêàëèçàöèè è õàðàêòåðà âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ìåìáðàíîé ðàçëè÷àþò â îñíîâíîì äâà òèïà ìåìáðàííûõ áåëêîâ: (1) ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, êîòîðûå îòíîñèòåëüíî ñâîáîäíî àññîöèèðîâàíû â ìåìáðàíå è (2) "âíóòðåííèå" èëè èíòåãðàëüíûå áåëêè, êîòîðûå æåñòêî ñâÿçàíû ñ ìåìáðàíîé. Êîíôîðìàöèÿ áîëüøèíñòâà èíòåãðàëüíûõ è ÷àñòè ïåðèôåðè÷åñêèõ áåëêîâ â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè çàâèñèò îò èõ 48 âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ëèïèäíûì áèñëîåì. Êðîìå òîãî, â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ ñ áèîìåìáðàíàìè ìîãóò âçàèìîäåéñòâîâàòü è íåêîòîðûå âîäîðàñòâîðèìûå, íàïðèìåð, öèòîïëàçìàòè÷åñêèå è ìåæêëåòî÷íûå áåëêè. Ïîýòîìó ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, â ñâîþ î÷åðåäü, ïîäðàçäåëÿþò íà: ñîáñòâåííî ïåðèôåðè÷åñêèå è ïîâåðõíîñòíûå. Ñîáñòâåííî ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, êàê ïðàâèëî, ñâÿçàíû ñ ìåìáðàíîé ýëåêòðîñòàòè÷åñêèìè ñèëàìè è ÷àñòè÷íî ïîãðóæåíû â åå ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü. Ïîâåðõíîñòíûå áåëêè íå ïîãðóæåíû â ìåìáðàíó è ñâÿçàíû ñ íåé ýëåêòðîñòàòè÷åñêèìè ñèëàìè [71]. Îñîáûé èíòåðåñ äëÿ èññëåäîâàòåëåé ïðåäñòàâëÿþò èíòåãðàëüíûå ìåìáðàííûå áåëêè, òàê êàê îíè èãðàþò ÷ðåçâû÷àéíî âàæíóþ ðîëü â êëåòî÷íîé ôèçèîëîãèè è áèîýíåðãåòèêå. Ê íèì îòíîñÿòñÿ ðåöåïòîðû, èîííûå íàñîñû, Na+ è K+ êàíàëû, öèêëàçû è äð. Ñðåäè èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ðàçëè÷àþò "ýêòîïðîòåèíû", êîòîðûå ñãðóïïèðîâàíû â íàïðàâëåíèè ê âíåøíåìó ìîíîñëîþ öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, è "ýíäîïðîòåèíû", ëîêàëèçîâàííûå áëèæå ê åå âíóòðåííåé ñòîðîíå. Êàê ïðàâèëî, èíòåãðàëüíûå ìåìáðàííûå áåëêè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ãëîáóëÿðíûå àìôèôèëüíûå ìàêðîìîëåêóëû, êîòîðûå âçàèìîäåéñòâóþò êàê ñ ãèäðîôîáíûìè, òàê è ñ ãèäðîôèëüíûìè îáëàñòÿìè ìåìáðàíû. Äëÿ íèõ õàðàêòåðíî îáðàçîâàíèå ïðî÷íûõ ñâÿçåé ñ ìåìáðàííûìè ëèïèäàìè èç-çà ïðèñóòñòâèÿ â ïîëèïåïòèäíîé öåïè ôðàãìåíòîâ, ñîñòîÿùèõ èç àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ ñ ãèäðîôîáíûìè áîêîâûìè ãðóïïàìè. Âàæíîé îñîáåííîñòüþ ýòèõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ òàêæå âûñîêîå ñîäåðæàíèå αñïèðàëüíûõ ó÷àñòêîâ è ó÷àñòêîâ ñ êîíôîðìàöèåé ñòàòèñòè÷åñêîãî êëóáêà. Ïîýòîìó ìåìáðàííûå áåëêè ïðåäñòàâëåíû ïðåèìóùåñòâåííî ãëîáóëÿðíûìè, à íå ïëîñêèìè ïðîòÿæåííûìè ñòðóêòóðàìè. Ñòåïåíü ïîãðóæåíèÿ èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ â ëèïèäíûé ìàòðèêñ îïðåäåëÿåòñÿ, êàê ïðàâèëî, èõ àìèíîêèñëîòíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòüþ è òðåõìåðíîé ïðîñòðàíñòâåííîé ñòðóêòóðîé. Òàê, íåêîòîðûå èíòåãðàëüíûå áåëêè (íàïðèìåð, Na+, K+-ÀÒÔàçà, Ñà2+-ÀÒÔàçà, íàòðèåâûé êàíàë è äð.) ïðîíèçûâàþò ìåìáðàíó, îáðàçóÿ ñïåöèôè÷åñêèå äîìåíû êàê íà âíóòðåííåé, òàê è íà íàðóæíîé åå ñòîðîíàõ [71]. Âñòðàèâàíèå áåëêà â ìåìáðàíó âëèÿåò íà ñòðóêòóðó ëèïèäíîãî áèñëîÿ.  îäíèõ ñëó÷àÿõ ïîâûøàåòñÿ óïîðÿäî÷åííîñòü ÔË â áèñëîå, à â äðóãèõ - èíèöèèðóåòñÿ èõ òðàíñáèñëîéíîå ïåðåìåùåíèå. Íàïðèìåð, ìåìáðàííûå áåëêè òðîìáîöèòîâ êàòàëèçèðóþò Ñà2+-çàâèñèìîå òðàíñáèñëîéíîå äâèæåíèå ÔË, âëèÿÿ íà èõ àñèììåòðèþ, ïðè÷åì ýòîò ïðîöåññ ïîâûøàåòñÿ ïðè àêòèâàöèè êëåòîê. Ïîäîáíûé ïðîöåññ íàáëþäàëè è in vitro: 49 äîáàâëåíèå èîíîìèöèíà è Ñà2+ ê ôîñôîëèïèäíûì âåçèêóëàì ñïîñîáñòâîâàëî òðàíñáèñëîéíîìó äâèæåíèþ ôëóîðåñöåíòíî ìå÷åíûõ ÔË [72]. Ìåòîäîì ÝÏÐ ïîêàçàíî, ÷òî áåëîê êàëüäåñìîí (ñâÿçûâàþùèéñÿ ñ êàëüìîäóëèíîì) ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñ ÔË ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ïå÷åíè êðûñû ïîâûøàåò ïîäâèæíîñòü àöèëüíûõ öåïåé, ïðè÷åì àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ìèøåíüþ êàëüäåñìîíà ÿâëÿåòñÿ â îñíîâíîì ÔÑ, íà ÷òî óêàçûâàåò èíãèáèðîâàíèå ðåàêöèè åãî ïðåâðàùåíèÿ â ÔÝ [73]. Âçàèìîäåéñòâèå ñ ìåìáðàííûìè ëèïèäàìè, â ñâîþ î÷åðåäü, îêàçûâàåò âëèÿíèå íà êîíôîðìàöèþ áåëêà. Íàïðèìåð, ïðè âçàèìîäåéñòâèè áåëêà ñ ïîâåðõíîñòüþ ìåìáðàíû âîçìîæíî èçìåíåíèå åãî ïðîñòðàíñòâåííîé ñòðóêòóðû, ïðèâîäÿùåå òàêæå ê èçìåíåíèþ àêòèâíîñòè áåëêà. Ñ ïîìîùüþ ñîâðåìåííûõ âûñîêî÷óâñòâèòåëüíûõ ìåòîäîâ (ÝÏÐ, êîìáèíàöèîííîãî ðàññåèâàíèÿ, ôëóîðåñöåíòíûõ çîíäîâ è äð.) óäàëîñü ïîêàçàòü íàëè÷èå ñëîÿ "èììîáèëèçîâàííûõ" ÔË, îêðóæàþùèõ áåëîê â ìåìáðàíå, íàçûâàåìûõ àííóëÿðíûìè ôîñôîëèïèäàìè. Âî ìíîãèõ ìåìáðàíàõ (íàïðèìåð, ýðèòðîöèòîâ, ÝÐ, ìèåëèíà è äð.) òàêèå èììîáèëèçîâàííûå ëèïèäû ñîñòàâëÿþò çíà÷èòåëüíóþ ÷àñòü îò èõ îáùåãî êîëè÷åñòâà â áèñëîå. Íî èììîáèëèçàöèÿ ÷àñòè ëèïèäîâ â öåëîì íå ñêàçûâàåòñÿ íà îñòàëüíîì áèñëîå, ïîñêîëüêó ñâÿçü ìåæäó àííóëÿðíûìè è îñòàëüíûìè ëèïèäàìè îñóùåñòâëÿåòñÿ, ãëàâíûì îáðàçîì, çà ñ÷åò íåñïåöèôè÷åñêèõ ãèäðîôîáíûõ âçàèìîäåéñòâèé. Èíòåðåñíî îòìåòèòü, ÷òî ïðè óìåíüøåíèè "òåêó÷åñòè" ëèïèäíîãî áèñëîÿ àííóëÿðíûå ëèïèäû ñîõðàíÿþò ñâîþ ïðåæíþþ ïîäâèæíîñòü [74]. Îñíîâûâàÿñü íà äàííûõ ÝÏÐ è ðåçóëüòàòàõ ìîäåëèðîâàíèÿ, Lee ñ ñîàâò. [75] ïîëàãàþò, ÷òî âëèÿíèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ íà ñâîéñòâà îêðóæàþùåãî ëèïèäíîãî áèñëîÿ â îñíîâíîì îãðàíè÷åíî ïðèëåãàþùèì ñëîåì àííóëëÿðíûõ ÔË è íå ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà áîëåå óäàëåííûå ëèïèäíûå ìîëåêóëû. Ïîýòîìó äëÿ àííóëÿðíûõ ÔË õàðàêòåðíû íåêîòîðûå ñïåöèôè÷åñêèå ñâîéñòâà. Îòëè÷èÿ àííóëÿðíûõ ÔË ñâÿçàíû ñ òåì, ÷òî ïîâåðõíîñòü òðàíñìåìáðàííîãî äîìåíà â èíòåãðàëüíîì áåëêå íå ÿâëÿåòñÿ "ãëàäêîé", à èìååò ìíîæåñòâî âûåìîê è âûñòóïîâ. Äëÿ îáåñïå÷åíèÿ äîñòàòî÷íî ïëîòíîé óïàêîâêè áåëêà â ëèïèäíîì áèñëîå, íåîáõîäèìîé äëÿ îáåñïå÷åíèÿ áàðüåðíûõ ñâîéñòâà ìåìáðàíû, æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè ÔË, îêðóæàþùèõ ýòîò áåëîê, äîëæíû ïðîñòðàíñòâåííî "ïðèñïîñàáëèâàòüñÿ" ê ýòèì íåðîâíîñòÿì. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, ñóùåñòâóåò ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî àííóëÿðíàÿ îáëàñòü (èëè àííóëþñ) ðåãóëèðóåò àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ áåëêîâ, â ÷àñòíîñòè, ôåðìåíòîâ, ãëàâíûì îáðàçîì, çà ñ÷åò îðèåíòàöèè è ãåîìåòðèè ñîñòàâëÿþùèõ åãî ëèïèäíûõ ìîëåêóë. Ñëåäîâàòåëüíî, 50 ïðè ðåàëèçàöèè òðàíñìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ ñ ó÷àñòèåì èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ñóùåñòâåííóþ ðîëü èãðàåò ëîêàëüíàÿ ëèïèäíàÿ ðåãóëÿöèÿ, ò.å. èçìåíåíèå ñîñòîÿíèÿ ïîãðàíè÷íûõ ëèïèäîâ [76]. Ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòû, âûïîëíåííûå íà Na+,K+-ÀÒÔàçå, Ñà2+-ÀÒÔàçå, Í+-ÀÒÔàçå, öèòîõðîìîêñèäàçå è äðóãèõ èíòåãðàëüíûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòàõ êàê â ñîñòàâå íàòèâíûõ ìåìáðàí, òàê è â ðåêîíñòðóèðîâàííûõ ñèñòåìàõ ïîäòâåðäèëè íàëè÷èå "èììîáèëèçîâàííûõ ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë" âîêðóã ýòèõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, êîíòðîëèðóþùèõ èõ êàòàëèòè÷åñêóþ è òðàíñïîðòíóþ àêòèâíîñòè. Ìîëåêóëÿðíî-äèíàìè÷åñêîå ìîäåëèðîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî ýíåðãèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ îòäåëüíîé ëèïèäíîé ìîëåêóëû ñ ìåìáðàííûì áåëêîì íå ïîñòîÿííà è ìåíÿåòñÿ âî âðåìåíè. Îíà ïðåäñòàâëÿåò ñóììó ìíîãèõ ñëàáûõ âàí-äåð-âààëüñîâñêèõ è ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ âçàèìîäåéñòâèé. Ïðè ýòîì êàæäàÿ ëèïèäíàÿ ìîëåêóëà íå "çàìîðîæåíà" â åäèíñòâåííîé äîëãî æèâóùåé êîíôîðìàöèè íà ïîâåðõíîñòè áåëêà, à îñòàåòñÿ â îêðóæàþùåé åãî îáîëî÷êå ëèøü â òå÷åíèå î÷åíü êîðîòêîãî ïåðèîäà âðåìåíè, îáû÷íî ñîñòàâëÿþùåãî ïðè 30°Ñ (1-2) õ 10-7ñ. Òàêîé áûñòðûé îáìåí ÔË ìåæäó àííóëÿðíûì êîëüöîì è ìàññîé áèñëîÿ ìîæåò ñóùåñòâåííî óñðåäíÿòü âëèÿíèå áåëêà íà ñòðóêòóðó ÔË. Ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ñëàáûå âçàèìîñâÿçè, êîòîðûå âîçíèêàþò ïðè âçàèìîäåéñòâèè èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ñ ëèïèäàìè, ìîãóò âûçûâàòü êàê "ñòðóêòóðèðîâàíèå", òàê è íàðóøåíèå "óïàêîâêè" áëèçëåæàùèõ ê áåëêó ëèïèäîâ [71]. Òàê, âîêðóã ìîëåêóëû öèòîõðîìîêñèäàçû îáíàðóæåíî ñóùåñòâîâàíèå íåñêîëüêèõ ñëîåâ ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë ñ äåêðåìåíòîì "çàòóõàíèÿ" íàðóøåííîé óïàêîâêè èõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé â ðåçóëüòàòå âàí-äåð-âààëüñîâñêèõ âçàèìîäåéñòâèé. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî êîëüöî àííóëÿðíîãî ëèïèäà "ñæèìàåòñÿ" ïðè ïîâûøåíèè òåìïåðàòóðû, à åãî òîëùèíà ìàêñèìàëüíà ïðè Òô.ï. Óñòàíîâëåíî, ÷òî íåêîòîðûå ôîñôîëèïèäíûå ìîëåêóëû íàñòîëüêî ïëîòíî ñâÿçàíû ñ áåëêîì, ÷òî èãðàþò ðîëü ñêîðåå êîôàêòîðîâ, ÷åì ïðîñòî "ðàñòâîðèòåëÿ" èëè îêðóæåíèÿ áåëêîâîé ãëîáóëû. Òàê, äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà îáíàðóæèëè ñâÿçûâàíèå íåêîòîðûõ ó÷àñòêîâ òðàíñìåìáðàííîãî äîìåíà ôåðìåíòà ñ ôîñôîëèïèäàìè è õîëåñòåðèíîì â ãëóáèíå ùåëåé ìåæäó òðàíñìåìáðàííûìè α-ñïèðàëÿìè [77]. Äëÿ îáîçíà÷åíèÿ òàêèõ ëèïèäîâ ââåëè ñïåöèàëüíûé òåðìèí "íåàííóëÿðíûå ëèïèäû" (íå ïóòàòü ñ îñíîâíîé ìàññîé îáû÷íûõ ëèïèäîâ áèñëîÿ). Ýòè ìîëåêóëû ëèïèäîâ, ñîõðàíÿþùèåñÿ â îáðàçöå ïîñëå 51 îáðàáîòêè äåòåðãåíòàìè, ìîæíî îáíàðóæèòü ïðè âûñîêîðàçðåøàþùåì ñòðóêòóðíîì èññëåäîâàíèè ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Èõ ïëîòíîå ïðèñîåäèíåíèå ê áåëêàì îáåñïå÷èâàåòñÿ, ãëàâíûì îáðàçîì, (1) èììîáèëèçàöèåé ïîëÿðíûõ "ãîëîâíûõ" ãðóïï íà áåëêîâîé ïîâåðõíîñòè è/èëè (2) ãèäðîôîáíûìè âçàèìîäåéñòâèÿìè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ëèïèäîâ ñ îïðåäåëåííûìè ãèäðîôîáíûìè ó÷àñòêàìè íà ïîâåðõíîñòè áåëêà.  îòëè÷èå îò àííóëÿðíûõ ÔË, îáìåí ëèïèäîâ ìåæäó íåàííóëÿðíûìè ìîëåêóëàìè è ìàññîé ëèïèäíîãî áèñëîÿ ïðîèñõîäèò, ïî-âèäèìîìó, ãîðàçäî ìåäëåííåé, à ñâÿçûâàíèå áåëêîâ â ýòèõ ìåñòàõ áîëåå ñïåöèôè÷íî. Êàê óæå îòìå÷àëîñü, ëèïèä-áåëêîâûå âçàèìîäåéñòâèÿ â öåëîì ÿâëÿþòñÿ ñóùåñòâåííûìè äëÿ ïðîÿâëåíèÿ è ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòåé ìåìáðàííûõ áåëêîâ, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî â êàæäîì êîíêðåòíîì ñëó÷àå ïîòðåáíîñòü ýòèõ áåëêîâ â ìåìáðàííûõ ÔË ìîæåò âàðüèðîâàòü êàê â êîëè÷åñòâåííîì, òàê è â êà÷åñòâåííîì îòíîøåíèÿõ [78]. Ìíîãî÷èñëåííûå èññëåäîâàíèÿ, ñâÿçàííûå ñ âûäåëåíèåì ëèïèäçàâèñèìûõ áåëêîâ, èõ äåëèïèäèðîâàíèåì, ïîñëåäóþùåé ðåêîíñòðóêöèåé íà èñêóññòâåííûõ ôîñôîëèïèäíûõ ìåìáðàíàõ ñ ïîëíûì èëè ÷àñòè÷íûì âîññòàíîâëåíèåì àêòèâíîñòåé è ò.ä., ïîçâîëèëè ñäåëàòü ðÿä âàæíûõ çàêëþ÷åíèé î ðîëè ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ â ôóíêöèîíèðîâàíèè áåëêîâ: - ëèïèäû ÿâëÿþòñÿ ýôôåêòèâíûìè àëëîñòåðè÷åñêèìè àêòèâàòîðàìè íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ; - ÷àñòü ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, íàõîäÿùèõñÿ â íåïîñðåäñòâåííîé áëèçîñòè ê ìîëåêóëàì áåëêà, îáðàçóþò âîêðóã èõ ãèäðîôîáíîãî äîìåíà "ëèïèäíîå êîëüöî" èëè "àííóëþñ"; - ìåìáðàííûå ëèïèäû îáðàçóþò âîêðóã ìåìáðàíîñâÿçàííûõ áåëêîâ îáøèðíóþ ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü, ïîäîáíóþ ìèöåëëå, êîòîðàÿ ñîçäàåò íàèáîëåå áëàãîïðèÿòíûå óñëîâèÿ, íàïðèìåð, äëÿ ôåðìåíò-ñóáñòðàòíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ; - ìåìáðàííûå ëèïèäû îáðàçóþò áèñëîéíûå àññîöèàòû, èìåþùèå íåîáõîäèìóþ êðèâèçíó è îðèåíòàöèþ; íåêîòîðûå ìåìáðàííûå áåëêè àñèììåòðè÷íî ðàñïðåäåëÿþòñÿ â íèõ è ïðèíèìàþò òàêóþ îðèåíòàöèþ, êîòîðàÿ íåîáõîäèìà äëÿ ïðîÿâëåíèÿ èõ ñïåöèôè÷åñêîé àêòèâíîñòè. Áëàãîäàðÿ íàçâàííûì ìîäóëÿòîðíûì ýôôåêòàì ëèïèäîâ íà ìåìáðàííûå áåëêè, îáåñïå÷èâàåòñÿ ñòàáèëèçàöèÿ èõ ôóíêöèîíàëüíî-àêòèâíîé êîíôîðìàöèè, íåîáõîäèìûé óðîâåíü ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå îëèãîìåðíûõ ñóáúåäèíè÷íûõ êîìïëåêñîâ), ýôôåêòèâíîå âçàèìîäåéñòâèå ñ íåïîëÿðíûìè ñîåäèíåíèÿìè è äð. Èìååòñÿ ìíîæåñòâî ïðèìåðîâ 52 âëèÿíèÿ ÔË íà àêòèâíîñòü êîíêðåòíûõ áåëêîâ. Íàïðèìåð, ñâÿçûâàíèå ñ ÔË ñòàáèëèçèðóåò êîíôîðìàöèþ ìèòîõîíäðèàëüíîé ÀÒÔàçû [79], âëèÿåò íà àêòèâíîñòü ëåãî÷íîãî ñóðôàêòàíòíîãî áåëêà è åãî äîìåíîâ [80], ìåíÿåò âòîðè÷íóþ ñòðóêòóðó ïåïòèäà ïåíåòðèòèíà, äåéñòâóþùåãî êàê ïåðåíîñ÷èê ãèäðîôèëüíûõ ìîëåêóë [81] è ò. ä. Îäíèì èç ïðîÿâëåíèé ðåãóëÿòîðíîãî âîçäåéñòâèÿ ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ íà àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ "âÿçêîòðîïíûé ýôôåêò": çàâèñèìîñòü ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè ýòèõ áåëêîâ îò ñòåïåíè "ðàçæèææåíîñòè" àöèëüíûõ öåïåé ÔË. Òàêàÿ "âÿçêîòðîïíàÿ" ðåãóëÿöèÿ äîâîëüíî ÷åòêî ïîêàçàíà â ñëó÷àå ñ òðàíñïîðòíûìè ÀÒÔàçàìè, äëÿ êîòîðûõ êîíôîðìàöèîííàÿ ïîäâèæíîñòü ìîëåêóë ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ìîìåíòîì, íåîáõîäèìûì äëÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ [82]. Æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí âëèÿåò íà ìíîãèå ìåìáðàííûå ïðîöåññû, â òîì ÷èñëå è ýíäîöèòîç. Ýòî áûëî ïîêàçàíî, â ÷àñòíîñòè, íà êëåòêàõ äðîææåé, â êîòîðûõ èçìåíåíèÿ ýíäîöèòîçà íàáëþäàëè ïðè ìîäèôèêàöèè ñòðóêòóðû, âêëþ÷àÿ èçìåíåíèå êîíöåíòðàöèè ñòåðèíà â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Ïîëàãàþò, ÷òî â îñíîâå ëîêàëüíîé "âÿçêîòðîïíîé" ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ áåëêîâ ëåæèò ôàçîâîå ñîñòîÿíèå "àííóëÿðíûõ" ëèïèäîâ. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî òåðìîäèíàìè÷åñêîå ðàâíîâåñèå â ñèñòåìå "àííóëÿðíûå ëèïèäû/îáùèé áèñëîé" êîíòðîëèðóåò ðàáîòó îëèãîìåðíûõ ìåìáðàííûõ áåëêîâ, îïðåäåëÿÿ èõ äèñïåðãèðîâàííîå ñîñòîÿíèå â ìåìáðàíå [83]. Íåêîòîðûå áåëêè äëÿ îáåñïå÷åíèÿ íóæíîãî èì ôîëäèíãà, ñòåïåíè ïîãðóæåíèÿ â ìåìáðàíó èëè ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè òðåáóþò âçàèìîäåéñòâèÿ ñî ñïåöèôè÷íûìè ÔË [84]. Òàê, äëÿ ôîëäèíãà ïåðìåàçû ëàêòîçû âî âíóòðåííåé ìåìáðàíå Å. coli ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ âçàèìîäåéñòâèå ñ ÔÝ.  îòñóòñòâèè ýòîãî ÔË â ìåìáðàíó ïîãðóæàåòñÿ íóæíûì îáðàçîì òîëüêî Ñòåðìèíàëüíàÿ ÷àñòü áåëêà, à N-òåðìèíàëüíàÿ - íå ïîãðóæàåòñÿ, ÷òî çíà÷èòåëüíî ñíèæàåò òðàíñïîðò ëàêòîçû. Îòñþäà áûëî âûñêàçàíî ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî ÔÝ âûïîëíÿåò ôóíêöèþ "ëèïîøàïåðîíà", ò.å. ëèïèäíîé ìàòðèöû, îáåñïå÷èâàþùåé íóæíóþ êîíôîðìàöèþ áåëêà. Ìîëåêóëÿðíàÿ îñíîâà ñïåöèôè÷åñêîãî äåéñòâèÿ èíäèâèäóàëüíûõ ÔË íà êîíôîðìàöèþ ìåìáðàííûõ áåëêîâ åùå ïîëíîñòüþ íå ÿñíà. Ïîêàçàíà ñïåöèôè÷åñêàÿ ïîòðåáíîñòü â ÔÑ àêòèâèðóåìîé Ñà2+ ïðîòåèíêèíàçû [85], âîë÷àíî÷íîãî àíòèêîàãóëÿíòà IgG [86], àêòèâàòîðà-èíãèáèòîðà ïëàçìèíîãåíà [87] è ôàêòîðîâ ñâåðòûâàíèÿ êðîâè - VIII, X [88].  ðÿäå ñëó÷àåâ ïîäîáíûé ýôôåêò íàáëþäàåòñÿ â îòíîøåíèè ÔÝ è/èëè ÔÈ. Òàê, èç âñåõ ÔË ñîè ÔÈ âûçûâàë ìàêñèìàëüíîå ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè β-ñóáúåäèíèöû 53 èíñóëèíîâîãî ðåöåïòîðà ïëàöåíòû ïðè àóòîôîñôîðèëèðîâàíèè [89], à àíèîííûå ÔË èëè ñìåñü ÊË ñ ÔÝ ñïîñîáíû àêòèâèðîâàòü äåëèïèäèðîâàííóþ ìàëàòäåãèäðîãåíàçó ìèêîáàêòåðèé [90]. 2.5. Ëàòåðàëüíàÿ ãåòåðîãåííîñòü áèîìåìáðàí. Äîëãîå âðåìÿ ñ÷èòàëîñü, ÷òî ìåìáðàííûå ëèïèäû ÿâëÿþòñÿ äâóìåðíîé ðàñòâîðÿþùåé ôàçîé äëÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Îäíàêî â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ïîëó÷åíû äàííûå ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, êîòîðûå ïðîòèâîðå÷àò ýòîìó óòâåðæäåíèþ [91]. Íàïðèìåð, ïåðâîíà÷àëüíî ïðåäïîëàãàëîñü, ÷òî ÕÑ â ìåìáðàíå, ñîñòîÿùåé èç íåñêîëüêèõ âèäîâ ÔË, äåéñòâóåò êàê ãîìîãåíèçèðóþùèé àãåíò ìåìáðàííîé ìàòðèöû. Ó÷èòûâàÿ, ÷òî êàæäûé èç ýòèõ ÔË èìååò ñâîþ, îòëè÷íóþ îò äðóãèõ Òô.ï., ñ÷èòàëè, ÷òî èìåííî õîëåñòåðèí áëàãîïðèÿòñòâóåò ñìåøèâàíèþ ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ ïðè ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå, ñíèæàÿ äî ìèíèìóìà ðàçëè÷èÿ ìåæäó æèäêèì è ãåëåâûì ñîñòîÿíèÿìè ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ. Íî ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íåðàâíîìåðíîì ðàñïðåäåëåíèè ÕÑ âíóòðè ìåìáðàí, ÷òî ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ äîìåíîâ, îáîãàùåííûõ è îáåäíåííûõ õîëåñòåðèíîì [92].  íàñòîÿùåå âðåìÿ áîëüøîå âíèìàíèå óäåëÿåòñÿ ìíîãèìè èññëåäîâàòåëÿìè ëàòåðàëüíîé (ò.å. îòíîñÿùåéñÿ ê ïëîñêîñòè ìåìáðàíû) ãåòåðîãåííîñòè áåëêîâ è ëèïèäîâ. Ãåòåðîãåííîñòü ëèïèäîâ â ïëîñêîñòè ìåìáðàíû ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì îáðàçîâàíèÿ ðàçëè÷íûõ àññîöèàöèé ëèïèäíûõ ìîëåêóë, ãðóïïèðóþùèõñÿ ñîãëàñíî èõ ôèçèêî-õèìè÷åñêîìó ñîîòâåòñòâèþ. Ïðè ýòîì â îòäåëüíûõ ñëîÿõ ìåìáðàíû (ãëàâíûì îáðàçîì, â íàðóæíîì) âîçíèêàþò ëàòåðàëüíûå ëèïèäíûå äîìåíû, íàçûâàåìûå "ðàôòàìè" (îò àíãëèéñêîãî ñëîâà "raft" - ïëîò). Ýòî ó÷àñòêè ïëîòíî óïàêîâàííûõ ìîëåêóë ñ îòíîñèòåëüíî âûñîêîé ìîëåêóëÿðíîóïîðÿäî÷åííîé ôàçîé, "ïëàâàþùèå" â æèäêî-íåóïîðÿäî÷åííîé ôàçå îñíîâíîãî ëèïèäíîãî ìàòðèêñà. Îðãàíèçàöèþ ëèïèäîâ â ìåìáðàíå ìîæíî îáúÿñíèòü, îñíîâûâàÿñü íà ñâîéñòâàõ ìîëåêóëÿðíîé ñòðóêòóðû âõîäÿùèõ â åå ñîñòàâ èíäèâèäóàëüíûõ ëèïèäîâ, â ÷àñòíîñòè, èõ ñïîñîáíîñòè îáðàçîâûâàòü áîëåå ïëîòíóþ, êîíäåíñèðîâàííóþ, èëè, íàîáîðîò, æèäêóþ, îòíîñèòåëüíî ðàçðûõëåííóþ ñòðóêòóðó [91 - 95]. Èçâåñòíî, ÷òî ñôèíãîëèïèäû èìåþò ãîðàçäî áîëåå âûñîêóþ òåìïåðàòóðó ïëàâëåíèÿ (Òï), ÷åì ãëèöåðîôîñôîëèïèäû. Íàïðèìåð, Òï äëÿ ãàëàêòîçèëöåðàìèäà èç ìîçãà êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ñîñòàâëÿåò 83°Ñ [96]. Áëàãîäàðÿ ïëîòíîé óïàêîâêå è âûñîêîé óïîðÿäî÷åííîñòè â áèñëîå, ñôèíãîëèïèäû èìåþò òàêæå è âûñîêóþ Òô.ï.  ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, Òï äëÿ ïðèðîäíûõ ÔÕ < 0°Ñ. 54 Ñòðóêòóðà ïîëèíåíàñûùåííîé àöèëüíîé öåïè â òàêèõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäàõ, èìåþùàÿ ïåðåãèáû â ìåñòàõ ðàñïîëîæåíèÿ äâîéíîé ñâÿçè, ïðåïÿòñòâóåò ïëîòíîé óïàêîâêå ìîëåêóë, è ïðè ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå îíè íàõîäÿòñÿ â áåñïîðÿäî÷íîì ñîñòîÿíèè "ñâîáîäíîé óïàêîâêè", íàçûâàåìîé æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîé ôàçîé (Lc). Ïåðåõîä ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ â êâàçè-òâåðäóþ âûñîêîóïîðÿäî÷åííóþ ãåëåâóþ ôàçó (Lβ) âîçìîæåí òîëüêî ïðè òåìïåðàòóðå íèæå Òï, êîòîðàÿ, â ñâîþ î÷åðåäü, ìíîãî íèæå ôèçèîëîãè÷åñêîé. Ïîýòîìó ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ òåìïåðàòóðàõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäû è ôîñôîëèïèäíûå áèñëîè õàðàêòåðèçóþòñÿ ìåíåå ïëîòíîé óïàêîâêîé è îòíîñèòåëüíî íèçêîé óïîðÿäî÷åííîñòüþ ïî ñðàâíåíèþ ñî ñôèíãîëèïèäíûìè áèñëîÿìè. Èññëåäîâàòåëè ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî ýòè ðàçëè÷èÿ ìåæäó ñôèíãîëèïèäàìè è ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, çàêëþ÷àþùèåñÿ â îáðàçîâàíèè ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ òåìïåðàòóðàõ áèñëîåâ ñ óïàêîâêîé ÆÊ öåïåé ðàçíîé ïëîòíîñòè, ïðèâîäÿò ê ëàòåðàëüíîìó ðàçäåëåíèþ ôàç â ìåìáðàíå è îáðàçîâàíèþ ãåòåðîãåííûõ äîìåíîâ [91]. Ëàòåðàëüíîìó ðàçäåëåíèþ ôàç â ìåìáðàíå è îáðàçîâàíèþ ãåòåðîãåííûõ äîìåíîâ ñïîñîáñòâóåò òàêæå ïðèñóòñòâèå õîëåñòåðèíà. Äîáàâëåíèå ÕÑ ê ÷èñòûì ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì "ðàçìûâàåò" íîðìàëüíûé òåìïåðàòóðíûé ïåðåõîä ìåæäó Lβ è Lc ôàçàìè, ïðèäàâàÿ ìåìáðàíàì ñâîéñòâà, ïðîìåæóòî÷íûå ìåæäó ãåëåì è æèäêîêðèñòàëëè÷åñêèì ñîñòîÿíèÿìè [92]. Íî âûñîêîå ñðîäñòâî ÕÑ ê ñôèíãîëèïèäàì óñèëèâàåò ðàçäåëåíèå ôàç è ñïîñîáñòâóåò îáðàçîâàíèþ ñïåöèôè÷åñêèõ ìèêðîäîìåíîâ â ìîäåëüíûõ ìåìáðàíàõ [92, 97].  ðåçóëüòàòå ñôèíãîëèïèäû ïðèíèìàþò ïðîìåæóòî÷íóþ ôàçó, îáîçíà÷åííóþ êàê æèäêî-óïîðÿäî÷åííàÿ (Lo) [92].  ýòîé ôàçå æèðíîêèñëîòíûå öåïè ëèïèäà óïàêîâàíû òàê æå ïëîòíî, êàê â ãåëåâîé, íî èìåþò áîëüøóþ ìîáèëüíîñòü, áëàãîäàðÿ âíåäðåíèþ ìîëåêóë ÕÑ ìåæäó ñôèíãîëèïèäàìè. Ïðåäïîëàãàåòñÿ òàêæå, ÷òî õîëåñòåðèí ìîæåò ëîêàëèçîâàòüñÿ âäîëü ãðàíèöû ìåæäó ñôèíãîëèïèäíûìè äîìåíàìè è ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, ñîçäàâàÿ ýíåðãåòè÷åñêè áëàãîïðèÿòíóþ ïðåõîäíóþ çîíó ìåæäó Lo è Lc ôàçàìè [95].  ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ãëèöåðîôîñôîëèïèäû îáðàçóþò Lc ôàçó ñî ñðàâíèòåëüíî íèçêèì ñîäåðæàíèåì ÕÑ, à ñôèíãîëèïèäû îáðàçóþò æèäêîóïîðÿäî÷åííóþ ôàçó, ñèëüíî îáîãàùåííóþ õîëåñòåðèíîì, êîòîðàÿ è ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ðàôòû. Âåðîÿòíî, îíè ñóùåñòâóþò â Lo ôàçå èëè ñîñòîÿíèè, áëèçêîì ê íåé. Ýòè ìèêðîäîìåíû ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê íåáîëüøèå ïîëóæåñòêèå ðàôòû, ïëàâàþùèå â áîëåå æèäêîé, îáîãàùåííîé 55 ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, ìàññå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû. Äðóãèìè ñëîâàìè, îñíîâîé îáðàçîâàíèÿ ðàôòîâ ÿâëÿþòñÿ ðàçëè÷íàÿ ñìåøèâàåìîñòü ëèïèäîâ, ðàçëè÷íàÿ óïàêîâêà èõ ÆÊ öåïåé, à òàêæå òðàíñáèñëîéíàÿ è ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ èõ ìîëåêóë.  îáðàçîâàíèè ðàôòîâ èãðàåò òàêæå ðîëü òðàíñáèñëîéíàÿ è ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ ìîëåêóë îòäåëüíûõ ëèïèäîâ, êîòîðàÿ ó÷èòûâàåò ôîðìó êàæäîãî ìåìáðàííîãî ëèïèäà è âîçìîæíîñòü ñîâìåñòíîãî ñóùåñòâîâàíèÿ âíóòðè ìåìáðàíû ðàçëè÷íûõ ëèïèäíûõ ôàç Lc è Lo [95]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ýòà ñîâðåìåííàÿ èíòåðïðåòàöèÿ ñòðóêòóðû ìåìáðàíû îïðîâåðãàåò òðàäèöèîííîå ïðåäñòàâëåíèå îá îäíîðîäíîì ðàñïðåäåëåíèè ëèïèäîâ è áåëêîâ â ãîìîãåííîì áèñëîå. Ñîâðåìåííûå òåõíîëîãèè, òàêèå êàê àòîìíî-ñèëîâàÿ è ôëóîðåñöåíòíî-ðåçîíàíñíàÿ ìèêðîñêîïèÿ, ïîçâîëèëè óáåäèòüñÿ â ñóùåñòâîâàíèè ðàôòîâ in vivo, êîòîðûå ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ìàëåíüêèå ÷àñòèöû ðàçìåðîì ïðèáëèçèòåëüíî 50-70 íì â äèàìåòðå [98 - 101]. Àíàëèòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ñ îäíèì ðàôòîì ìîæåò áûòü ñâÿçàíî, ïî ìåíüøåé ìåðå, 15 ìîëåêóë "ãëèêîôîñôîèíîçèòèä (GPI)-çàÿêîðåííûõ" áåëêîâ [102, 103]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ðàçìåð ðàôòîâ ìîæåò ìåíÿòüñÿ â çàâèñèìîñòè îò êîíöåíòðàöèè ëèïèäîâ â êëåòêå è âíåøíèõ óñëîâèé. Èçìåíåíèå ýòèõ óñëîâèé ìîæåò ïðèâåñòè ê êîàëåñöåíöèè ðàôòîâ è äèñïåðñèè îêðóæàþùåé èõ íåóïîðÿäî÷åííîé ëèïèäíîé ôàçû, ÷òî, â ñâîþ î÷åðåäü, ïðèâîäèò ê äðàìàòè÷åñêèì ìîäèôèêàöèÿì áèîôèçè÷åñêèõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû. Òàêèå ìîäèôèêàöèè ïðîèñõîäÿò íåïðåðûâíî â õîäå æèçíè êëåòêè. Èññëåäîâàíèÿ ñ ïîìîùüþ ôëóîðåñöåíòíûõ ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë ïîçâîëèëè îïðåäåëèòü íå òîëüêî ðàçìåðû ðàôòîâ, íî è âîçìîæíîå âðåìÿ èõ ñóùåñòâîâàíèÿ (â ñðåäíåì íå áîëåå 1 ìèí.). Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ðàôòû íàõîäÿòñÿ íà îáåèõ ñòîðîíàõ ìåìáðàíû è ñòàáèëèçèðóþòñÿ â ïðèñóòñòâèè ìåìáðàííûõ áåëêîâ, êîòîðûå è îïðåäåëÿþò ñòðóêòóðó ðàôòîâ. Òàê, ïðèñóòñòâèå ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ êàâåîëèíîâ îïðåäåëÿåò îñîáûé òèï ðàôòîâ - êàâåîëÿðíûå ðàôòû, íàçûâàåìûå òàêæå "êàâåîëàìè" [104 - 106]. Êààâåîëû ("ïåùåðû") êàê ñòðóêòóðíûå åäèíèöû êëåòî÷íîé ïîâåðõíîñòè èçâåñòíû ìîðôîëîãàì ñ 1955 ã. [107]. Íî â ïîñëåäíèå ãîäû èçó÷åíèå ìåìáðàííûõ êàâåîë, êàê ìåñò ïðîòåêàíèÿ è ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíûõ ñîó÷àñòíèêîâ ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ, ïðèîáðåëî îñîáîå çíà÷åíèå è ñòàëî áûñòðî ðàñòóùåé îáëàñòüþ èññëåäîâàíèé. Èçíà÷àëüíî áûëè óñòàíîâëåíû ñïîñîáíîñòè êàâåîë òðàíñïîðòèðîâàòü ìîëåêóëû ÷åðåç ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè. Ñîâðåìåííûå ìåòîäè÷åñêèå ïîäõîäû ïîçâîëèëè ðàñøèðèòü ïðåäñòàâëåíèÿ î êàâåîëàõ è óçíàòü ìíîãî 56 íîâîãî îá èõ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè è ó÷àñòèè â êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ. Òàê, áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êàâåîëû îáðàçóþò óíèêàëüíûå ýíäî- è ýêçîöèòîçíûå êîìïàðòìåíòû íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàí áîëüøèíñòâà êëåòîê è ñïîñîáíû êàê èìïîðòèðîâàòü ìîëåêóëû, äîñòàâëÿÿ èõ âíóòðü êëåòêè, òàê è ýêñïîðòèðîâàòü ìîëåêóëû âî âíåêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî. Êàâåîëû ñïîñîáíû êîìïàðòìåíòàëèçîâàòü ðÿä ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ, ò.å. ëîêàëèçîâàòü èõ ïðîòåêàíèå è êîîðäèíèðîâàòü èõ îòäåëüíûå ýòàïû [108]. Ìîðôîëîãè÷åñêè êàâåîëû ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îòäåëüíûå "ìàëûå êàðìàíû", óãëóáëåíèÿ èëè êîëáîîáðàçíûå (íàçûâàåìûå èíîãäà "îìåãà-îáðàçíûìè") èíâàãèíàöèè íà ïîâåðõíîñòè êëåòî÷íîé ìåìáðàíû. Äèàìåòð êàâåîë ñîñòàâëÿåò 50-100 íì. Èõ îáíàðóæèâàþò íà ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ ìíîãèõ âèäîâ æèâîòíûõ êëåòîê. Íàèáîëåå ÷àñòî îíè âñòðå÷àþòñÿ â àäèïîöèòàõ, ôèáðîáëàñòàõ, ìûøå÷íûõ êëåòêàõ (ñêåëåòíûõ, ãëàäêîìûøå÷íûõ è êàðäèàëüíûõ), ýíäîòåëèè êàïèëëÿðîâ, ïíåâìîöèòàõ 1 òèïà. Îïðåäåëÿþò êàâåîëû ëèáî ìîðôîëîãè÷åñêè (ïî èõ ôëàêîíîîáðàçíûì èíâàãèíàöèÿì), ëèáî ïî áèîõèìè÷åñêèì êðèòåðèÿì (â ÷àñòíîñòè, ïî îáîãàùåííîñòè áåëêîì êàâåîëèíîì). Êîëè÷åñòâåííûé ñîñòàâ ðÿäà ëèïèäîâ êàâåîë îòëè÷àåòñÿ îò èõ ñîäåðæàíèÿ â ìåìáðàíå. Òàê, çàíèìàÿ âñåãî 1% ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, îíè ñîäåðæàò 10% ìåìáðàííîãî ÕÑ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ ìîäåëüþ îáðàçîâàíèÿ ìèêðîäîìåíîâ èëè ðàôòîâ â ìåìáðàíå. Êàâåîëû îáîãàùåíû òàêæå ñôèíãîìèåëèíîì (îò 55 äî 96% îò îáùåãî åãî ñîäåðæàíèÿ â ìåìáðàíå) è äðóãèìè, ó÷àñòâóþùèìè â ïåðåäà÷å êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ ("ñèãíàëüíûìè") ëèïèäàìè. Êîëè÷åñòâî ÔÈ, öåðàìèäîâ è äèãëèöåðèäîâ ñîñòàâëÿåò äî 50% îò ñóììàðíîãî ñîäåðæàíèÿ ýòèõ ëèïèäîâ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Î ëàòåðàëüíîé èëè òðàíñáèñëîéíîé îðãàíèçàöèè ëèïèäîâ â êàâåîëÿðíîé ìåìáðàíå, òàê æå êàê è î ëîêàëüíîé æèäêîñòíîñòè êàâåîë (â îòëè÷èå îò äàííûõ ïî öåëüíîé ìåìáðàíå) ïî÷òè íè÷åãî íå èçâåñòíî. Ìåìáðàííûå ôðàêöèè, óñòîé÷èâûå ê äåòåðãåíòàì è îáîãàùåííûå ãëèêîñôèíãîëèïèäàìè, ñôèíãîìèåëèíîì, õîëåñòåðèíîì è GPI-çàÿêîðåííûìè áåëêàìè, òàêæå áûëè âûäåëåíû èç êëåòîê, â êîòîðûõ îòñóòñòâîâàëà ýêñïðåññèÿ êàâåîëèíà è ìîðôîëîãè÷åñêè íå îïðåäåëÿëèñü êàâåîëû [109, 110]. Äëÿ ýòèõ ìèêðîäîìåíîâ åùå íåò îïðåäåëåííîé ñòàíäàðòèçîâàííîé íîìåíêëàòóðû.  ëèòåðàòóðå âñòðå÷àåòñÿ ìíîãî íàçâàíèé òàêèõ ìèêðîäîìåíîâ, íàïðèìåð: íåðàñòâîðèìûå â äåòåðãåíòå îáîãàùåííûå ãëèêîëèïèäàìè ìåìáðàíû; óñòîé÷èâûå ê äåòåðãåíòó ìåìáðàíû; íåðàñòâîðèìûå â äåòåðãåíòå äîìåíû íèçêîé ïëîòíîñòè 57 èëè êàâåîëî-ïîäîáíûå äîìåíû è äð. Îäíàêî, ÷àùå âñåãî â íàó÷íîé ëèòåðàòóðå èñïîëüçóåòñÿ íàçâàíèå "ëèïèäíûé ðàôò" èëè "êàâåîëÿðíûé ðàôò", ïîä êîòîðûì ïîäðàçóìåâàåòñÿ ïëîòíûé ëèïèä-îðãàíèçîâàííûé ìèêðîäîìåí ìåìáðàíû, ïðè÷åì ýòîò ìèêðîäîìåí ìîæåò ñîñòîÿòü êàê èç êàâåîëÿðíûõ ó÷àñòêîâ ìåìáðàíû, òàê è èç ëþáûõ äðóãèõ.  êà÷åñòâå íàèáîëåå èçâåñòíûõ ìàðêåðîâ ëèïèäíûõ ðàôòîâ èñïîëüçóþò ñïåöèôè÷åñêèå "ðàôòîâûå" áåëêè, òàêèå êàê êàâåîëèíû-1-3 [111 - 113], ôëîòèëëèíû-1-2 [114], ãàíãëèîçèäû GM1, GM3 [115, 116], GPI-çàÿêîðåííûå áåëêè [117]. Àíàëèç íàêîïëåííûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ, ïîçâîëÿåò óòâåðæäàòü, ÷òî êàâåîëû íà ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ñëóæàò äëÿ êîìïàðòìåíòàëèçàöèè è èíòåãðàöèè øèðîêîãî ðÿäà ïðîöåññîâ òðàíñäóêöèè ñèãíàëà [118]. Îíè âûïîëíÿþò òàêæå òðàíñïîðòíûå ôóíêöèè, âêëþ÷àÿ âåçèêóëÿðíóþ èíòåðíàëèçàöèþ ìàëûõ ìîëåêóë è òðàíñöèòîçíîå (ìåæêëåòî÷íîå) äâèæåíèå ìàêðîìîëåêóë. Âñå ýòî îòêðûâàåò îïðåäåëåííûå âîçìîæíîñòè äëÿ ôóíäàìåíòàëüíûõ è ïðèêëàäíûõ èññëåäîâàíèé â ôàðìàöåâòè÷åñêîé îáëàñòè, íàïðèìåð, äëÿ ïîèñêà ïóòåé èñïîëüçîâàíèÿ êàâåîëÿðíûõ ìåìáðàííûõ âçàèìîäåéñòâèé äëÿ ðàçâèòèÿ íîâîé ñòðàòåãèè êëåòî÷íîé è òðàíñêëåòî÷íîé äîñòàâêè ëåêàðñòâ [118, 120]. Ñ ìåìáðàííûìè ðàôòàìè ñâÿçàí ðÿä ôèçèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé êëåòêè. Èìåþòñÿ äàííûå â ïîëüçó ó÷àñòèÿ ðàôòîâ âî âíóòðèêëåòî÷íîé ïåðåäà÷å ñèãíàëà, â êëåòî÷íîé àäãåçèè; ñ ðàôòàìè ñåëåêòèâíî ñâÿçûâàþòñÿ ðåöåïòîðû àíòèãåíà Â-êëåòîê.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ñòàíîâèòñÿ âñå áîëåå î÷åâèäíûì, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò îïðåäåëåííóþ ðîëü âî ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ, òàêèõ êàê òðàíñöèòîç, ôîòîöèòîç [119], àëüòåðíàòèâíûõ ýíäîöèòîçó ïóòÿõ [120], â ïðîöåññàõ èíòåðíàëèçàöèè òîêñèíîâ, áàêòåðèé è âèðóñîâ [121 - 123], òðàíñïîðòå õîëåñòåðèíà [124 - 126], ãîìåîñòàçå êàëüöèÿ [127], ñîðòèðîâêå ìåìáðàííûõ áåëêîâ [128 130], òðàíñäóêöèè ìíîæåñòâåííûõ êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [131, 132]. Ïðåäïîëàãàþò òàêæå, ÷òî ðàôòû âîâëå÷åíû â ãåíåðàöèþ ïàòîãåííûõ ôîðì ïðèîíîâûõ áåëêîâ è áåëêîâ, ñâÿçàííûõ ñ áîëåçíüþ Àëüöãåéìåðà [100, 133, 134]. Áèîõèìè÷åñêèé àíàëèç áåëêîâîãî ñîñòàâà âûäåëåííûõ è î÷èùåííûõ ëèïèäíûõ ðàôòîâ èç ìíîæåñòâà êëåòîê ðàçëè÷íûõ âèäîâ ïîêàçàë âûðàæåííóþ êîíöåíòðàöèþ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë âíóòðè ýòèõ ìèêðîäîìåíîâ [105, 135 - 137]. Ïîýòîìó ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò îïðåäåëåííóþ ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â òðàíñäóêöèè êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [138 140]. Ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî îñíîâíûõ ïðè÷èí è óñëîâèé, îáúÿñíÿþùèõ öåëåñîîáðàçíîñòü ó÷àñòèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â 58 ïðîöåññàõ ñèãíàëèçàöèè: 1) Ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò ñïîñîáñòâîâàòü ýôôåêòèâíîé è ñïåöèôè÷åñêîé ïåðåäà÷å ñèãíàëà, îáåñïå÷èâàÿ îäíîâðåìåííîå ôóíêöèîíèðîâàíèå ìíîæåñòâà ðàçëè÷íûõ êîìïîíåíòîâ ñïåöèôè÷åñêèõ ñèãíàëüíûõ ïóòåé. 2) Ðàñïîëîæåíèå ó÷àñòâóþùèõ â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ìîëåêóë âíóòðè è/èëè íà ëèïèäíûõ ðàôòàõ ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü êîíòðîëþ çà ïðîöåññîì ñèãíàëèíãà è âëèÿòü íà ñïîñîáíîñòü êëåòêè îòâå÷àòü íà ðàçäðàæåíèå. 3) Äèôôåðåíöèðîâàííàÿ êîíöåíòðàöèÿ è ëîêàëèçàöèÿ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë â ëèïèäíûõ ðàôòàõ, ïî îòíîøåíèþ êî âñåìó îáúåìó ìåìáðàíû, äàåò âîçìîæíîñòü êîíòðîëèðîâàòü äîñòóï äðóãèõ ñîåäèíåíèé ê êàæäîé ñèãíàëüíîé ìîëåêóëå. Íàïðèìåð, âíóòðè ëèïèäíîãî ðàôòà ïðîèñõîäèò ôîñôîðèëèðîâàíèå ðÿäà áåëêîâ, ïðèâîäÿùåå ê èõ àêòèâàöèè, à ïëîòíàÿ (ñïåöèôè÷åñêàÿ) ñòðóêòóðà ðàôòà çàùèùàåò ýòè áåëêè îò èíàêòèâèðóþùåãî äåéñòâèÿ ìåìáðàííûõ ôîñôàòàç [141]. 4) Óíèêàëüíîå ðàôòîâîå ìèêðîîêðóæåíèå ñïîñîáíî ñïåöèôè÷åñêè âëèÿòü íà êîíôîðìàöèþ è àêòèâíîñòü ñèãíàëüíûõ áåëêîâ [142]. 5) Ìåæäó ðàçëè÷íûìè ñèãíàëüíûìè ïóòÿìè ìîãóò âîçíèêàòü íåîáõîäèìûå äëÿ òðàíñäóêöèè ñïåöèôè÷åñêèå ïåðåêðåñòíûå ñâÿçè òîëüêî â òîì ñëó÷àå, åñëè âîâëå÷åííûå â ýòîò ïðîöåññ ìîëåêóëû ëîêàëèçîâàíû â òîì æå ëèïèäíîì ðàôòå. 6) Êëàñòåðèçàöèÿ èëè ïåðåìåùåíèå ëèïèäíûõ ðàôòîâ ìîæåò áûòü ýôôåêòèâíûì ñðåäñòâîì òðàíñïîðòèðîâêè ïðåäâàðèòåëüíî ñîáðàííûõ ñèãíàëüíûõ êîìïëåêñîâ ê ñïåöèôè÷åñêèì ê äàííîìó ðàçäðàæåíèþ îáëàñòÿì ìåìáðàíû, íàïðèìåð, ó ïîëÿðèçóþùèõñÿ èëè ìèãðèðóþùèõ êëåòîê. 7) Êëàñòåðèçàöèÿ îäíîãî èëè íåñêîëüêèõ òèïîâ ëèïèäíûõ ðàôòîâ ñ îáðàçîâàíèåì âûñîêîîðãàíèçîâàííîãî ñèãíàëüíîãî êîìïëåêñà ìîæåò ïðèâåñòè ê ìîäóëÿöèè ñèãíàëîâ ïóòåì ïðîñòðàíñòâåííîé ðåãóëÿöèè. 8) Ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò, â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè, ïðåðûâàòü èëè îñòàíàâëèâàòü ïåðåäà÷ó îïðåäåëåííûõ ñèãíàëîâ, èçîëèðóÿ ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû â íåàêòèâíîé ôîðìå è ïðåïÿòñòâóÿ èõ àêòèâàöèè (òàê íàçûâàåìàÿ, "íåãàòèâíàÿ" ðåãóëÿöèÿ ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ)  ïîñëåäíèå ãîäû íàêîïëåíî ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ, óêàçûâàþùèõ íà òî, ÷òî, ëèïèäíûå ðàôòû, ïî âñåé âèäèìîñòè, îáåñïå÷èâàþò â êëåòêå ýôôåêòèâíîñòü ïåðåäà÷è ñèãíàëà è åãî ñïåöèôè÷íîñòü. Âïîëíå âåðîÿòíî, ÷òî îïðåäåëåííûå âèäû ðàôòîâ, îáðàçîâàâøèõñÿ íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû îäíîé è 59 òîé æå êëåòêè, ìîãóò áûòü ñïåöèàëèçèðîâàíû äëÿ âûïîëíåíèÿ îïðåäåëåííûõ, î÷åíü òîíêèõ ïðîöåññîâ. Ëèïèäíûå ðàôòû, îáëàäàÿ óíèêàëüíûì áåëêîâûì è ëèïèäíûì ñîñòàâîì, ñîîòâåòñòâóþùèì èõ ñïåöèôè÷åñêèì ôóíêöèÿì, ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â êîìïàðòìåíòàëèçàöèþ ñðàçó íåñêîëüêèõ ïðîöåññîâ èëè ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëà.  îòâåò íà âîçäåéñòâèå îïðåäåëåííîãî ñòèìóëà îíè ñïîñîáíû áûñòðî "ñîáðàòü" âûñîêîóïîðÿäî÷åííûé ñèãíàëüíûé êîìïëåêñ, èëè îáåñïå÷èòü "ïåðåêðåùèâàíèå" íåñêîëüêèõ îäíîâðåìåííî ïðîòåêàþùèõ ñèãíàëüíûõ ïóòåé ("êî-ñòèìóëèðóþùèåñÿ" ñèãíàëû). Êëàñòåðèçàöèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ïðîöåññå ñèãíàëèíãà ìîæåò ðåãóëèðîâàòüñÿ: çàäåðæêîé ïåðåäà÷è ñèãíàëà, èõ ñâÿçüþ ñ öèòîñêåëåòîì è èõ âçàèìîäåéñòâèåì ñ îïðåäåëåííûìè èíäèâèäóàëüíûìè áåëêàìè. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî â ïðîöåññ êëàñòåðèçàöèè âîâëå÷åíû ëèïèäíûå ðàôòû ðàçëè÷íûõ òèïîâ. Îáðàçîâàíèå âûñîêîîðãàíèçîâàííûõ ñèãíàëüíûõ êîìïëåêñîâ êëàñòåðèçàöèåé îäíîãî èëè íåñêîëüêèõ òèïîâ ëèïèäíûõ ðàôòîâ ìîæåò ïðèâåñòè ê ìîäóëÿöèè ñèãíàëîâ ïóòåì ïðîñòðàíñòâåííîé ðåãóëÿöèè. Íà ñåãîäíÿøíèé äåíü ïîëó÷åíû äîêàçàòåëüñòâà, ïîäòâåðæäàþùèå ñóùåñòâîâàíèå ðàçíîîáðàçíûõ ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëà ñ ïîìîùüþ ëèïèäíûõ ðàôòîâ, ñîïðÿæåííûõ ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè áèîëîãè÷åñêèìè ýôôåêòàìè. Ñþäà âõîäèò ó÷àñòèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ðåöåïòîðàìè, ñâÿçûâàþùèìè G-áåëîê [143, 144], ðåöåïòîðàìè ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (EGFR) [145 - 147], ðàçëè÷íûìè GPI-"çàÿêîðåííûìè" áåëêàìè [148 - 150]. Êðîìå òîãî, áûëè ïîëó÷åíû èçîëèðîâàííûå ñèãíàëû â îòâåò íà èíñóëèí [151] è ôàêòîð ðîñòà ôèáðîáëàñòîâ-2 (FGF-2) [152]. Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî, íåñìîòðÿ íà íåäîñòàòî÷íîñòü äàííûõ î ìåõàíèçìàõ ðåãóëÿöèè ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ, ñåãîäíÿ ìîæíî óòâåðæäàòü, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò âàæíåéøóþ ðîëü â ýòèõ ïðîöåññàõ, ìîäóëèðóÿ ïðîöåññû ñèãíàëèíãà ðàçëè÷íûìè, â òîì ÷èñëå è åùå íåèçâåñòíûìè ïóòÿìè. Òàê êàê ðàôòû ñïîñîáíû ëàòåðàëüíî äèôôóíäèðîâàòü â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ïîäîáíî ïëàâàþùèì "÷åëíîêàì" ("øàòòëàì"), îíè ñïîñîáíû ïåðåíîñèòü è ñîçäàâàòü óñëîâèÿ äëÿ ñâÿçûâàíèÿ ìåæäó àêòèâèðîâàííûìè ðåöåïòîðàìè è ìîëåêóëàìè òðàíñäüþñåðàìè [153]. Èññëåäîâàòåëÿìè áûëà ïðåäëîæåíà "îáúåäèíåííàÿ" ìîäåëü òðàíñäóêöèè ñèãíàëà èììóííîé êëåòêîé [154, 155]. Íàïðèìåð, â ïîêîÿùèõñÿ æèðîâûõ êëåòêàõ ðåöåïòîð èììóíîãëîáóëèíà Å - FcεR è áåëîê Lyn ëîêàëèçîâàíû íà âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàííîãî ðàôòà.  ïðîöåññå îáðàçîâàíèÿ àíòèãåíîâîãî êîìïëåêñà Ag-IgE, Lyn è 60 FcεRI ïåðåìåùàþòñÿ â ñïåöèôè÷åñêèå ðàôòû. Îáúåäèíåíèå ýòèõ ðàôòîâ èíäóöèðóåòñÿ ïîëèâàëåíòíûì àíòèãåíîì, êîòîðûé, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ FcεRI è Lyn, çàïóñêàåò, òàêèì îáðàçîì, ïðîöåññ ïåðåäà÷è ñèãíàëà: êî-êîìïàðòìåíòàöèþ FcεRI-ðåöåïòîðîâ ñ ðàôòñâÿçàííîé Lyn-òèðîçèíêèíàçîé, îáåñïå÷èâàÿ ïðîñòðàíñòâåííîå ñáëèæåíèå, íåîáõîäèìîå äëÿ ôîñôîðèëèðîâàíèÿ FcεRI ñ îáðàçîâàíèåì àêòèâèðîâàííîãî ìîòèâà (ITAM). Ýòîò ìîòèâ, â ñâîþ î÷åðåäü, çàïóñêàåò ñèãíàëüíûé êàñêàä, êîòîðûé ïðèâîäèò ê âûñâîáîæäåíèþ ìåäèàòîðîâ àëëåðãè÷åñêîãî îòâåòà. Òàêèì îáðàçîì, àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî íåêîòîðûå êîìïîíåíòû, ó÷àñòâóþùèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëà, ìîãóò áûòü ïðåäâàðèòåëüíî, äî íà÷àëà ïðîöåññà, "ñîáðàíû" â ëèïèäíûõ ðàôòàõ ìåìáðàí ïîêîÿùèõñÿ êëåòîê, ñïîñîáñòâóÿ, òåì ñàìûì, áûñòðîé è ýôôåêòèâíîé èõ àêòèâàöèè íà íà÷àëüíîì ýòàïå ñèãíàëèíãà. Ïðåäïîëàãàåòñÿ òàêæå ó÷àñòèå ðàôòîâûõ ìèêðîäîìåíîâ ìåìáðàí íå òîëüêî â ñèãíàëèíãå, íàïðàâëåííîì âíóòðü êëåòêè, íî è â ñèãíàëèíãå èç êëåòêè íàðóæó, êîîðäèíèðóþùåì ôîðìèðîâàíèå íàðóæíîãî êîíòàêòà ìåæäó êëåòêîé è êëåòî÷íûì ìàòðèêñîì, â êîòîðîì ó÷àñòâóåò ñåìåéñòâî áåëêîâ, íàçûâàåìûõ èíòåãðèíàìè. Ñ÷èòàþò, ÷òî èíòåãðèí-ëèãàíäíûå âçàèìîäåéñòâèÿ ðåãóëèðóþòñÿ ñèãíàëüíûìè ìîëåêóëàìè (â îñíîâíîì êèíàçàìè cåìåéñòâà Src , ÔÈ-3-êèíàçîé, ïðîòåèíêèíàçîé Ñ è ñâÿçàííûìè ñ ÃÒÔàçîé ïåïòèäàìè Rho-ñåìåéñòâà). Ëèïèäíûå ðàôòû ñïîñîáñòâóþò îáðàçîâàíèþ êëàñòåðîâ íåêîòîðûõ êîíòàêòíûõ áåëêîâ è ñîçäàþò â ìåìáðàíå ñïåöèàëèçèðîâàííûå áåëîê-ëèïèäíûå êîìïëåêñû; ñ ðàôòàìè ñâÿçàíà êëàñòåðèçàöèÿ ðåöåïòîðîâ àäãåçèè.  ïðîöåññàõ äâèæåíèÿ êëåòîê ðàôòû íóæíû äëÿ ïðîñòðàíñòâåííîé ëîêàëèçàöèè ïñåâäîïîäèé â ó÷àñòêå ìåìáðàíû, ñîîòâåòñòâóþùåì íàïðàâëåíèþ êëåòî÷íîé ìèãðàöèè, ÷òî îïðåäåëÿåò ýôôåêòèâíîñòü ìèãðàöèè [156]. Âîïðîñû î òîì, ó÷àñòâóþò ëè ðàôòû â îáðàçîâàíèè àññîöèàòîâ (àíñàìáëåé, êîìïëåêñîâ) íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, íåîáõîäèìûõ äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ìåæêëåòî÷íîãî êîíòàêòà, ÿâëÿþòñÿ ïðåäìåòîì ñïåöèàëüíûõ èññëåäîâàíèé [156 - 159].  öåëîì, ðàôòû ìîæíî íàçâàòü ñîðòèðóþùåé ìîëåêóëû "ìàøèíîé" èëè "ïëàòôîðìîé", ñïîñîáíîé êîîðäèíèðîâàòü ïðîñòðàíñòâåííî-âðåìåííóþ îðãàíèçàöèþ ïóòåé òðàíñäóêöèè ñèãíàëà âíóòðè ñåëåêòèâíûõ îáëàñòåé ("ñèãíàëîñîìàõ") ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû.  ðÿäå ðàáîò, îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ øèðîêèì äèàïàçîíîì ïàòîãåíîâ, âêëþ÷àÿ âèðóñû, ïàðàçèòû, áàêòåðèè è èõ òîêñèíû, äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ â êëåòêó [160 - 161].  ýòîò ïðîöåññ 61 ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â êà÷åñòâå îñíîâíûõ èëè âñïîìîãàòåëüíûõ ðåöåïòîðîâ êàê ðàñïîëîæåííûå íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàí êëåòîê GPI-çàÿêîðåííûå áåëêè, òàê è ðàôòîâûå ëèïèäû. Íàïðèìåð, õîëåðíûé òîêñèí ñâÿçûâàåòñÿ ñ ãàíãëèîçèäîì GM1 [160], òîêñèí Shiga - ñ íåéòðàëüíûì ãëèêîëèïèäîì Gb3 [161], ìèêîáàêòåðèè - ñ õîëåñòåðèíîì, à E.coli ÷åðåç àäãåçèí FimH ïðèñîåäèíÿåòñÿ ê GPIçàÿêîðåííîìó áåëêó CD48 [162 - 164]. Áîëüøîé èíòåðåñ âûçûâàåò âçàèìîäåéñòâèå òîêñèíîâ ñòîëáíÿêà è áîòóëèçìà ñ íåðâíîé êëåòêîé. Ýòè íåéðîòîêñèíû ïðèñîåäèíÿþòñÿ ê íåêîòîðûì äè- è òðè-ñèàëîãàíãëèîçèäàì (â îñíîâíîì GD1a, GD1b è GT1b) íà ïîâåðõíîñòè ïðåñèíàïòè÷åñêîé ìåìáðàíû [121]. Îäíàêî ïðè âûñîêèõ óðîâíÿõ òîêñè÷íîñòè, äîñòèãàåìûõ ñóáïèêîìîëÿðíûìè êîíöåíòðàöèÿìè òîêñèíîâ, àôôèííîñòü ïîñëåäíèõ ê ýòèì ãàíãëèîçèäàì îêàçàëàñü íåîæèäàííî íèçêîé. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ ýòîãî ïàðàäîêñà Montecucco [165] ïðåäëîæèë ìîäåëü "äâîéíîãî ðåöåïòîðà". Ñîãëàñíî ýòîé ìîäåëè, îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííàÿ ïîâåðõíîñòü ïðåñèíàïòè÷åñêîé ìåìáðàíû ñîäåðæèò âûñîêèå êîíöåíòðàöèè ãàíãëèîçèäíûõ ðåöåïòîðîâ, ê êîòîðûì òîêñèí ïðèñîåäèíÿåòñÿ ÷åðåç íèçêîàôôèííîå âçàèìîäåéñòâèå. Ýòó ìîäåëü óáåäèòåëüíî ïîäòâåðæäàåò èäåíòèôèêàöèÿ áåëêà 58 êÄà, êîòîðûé ñâÿçûâàåò íåéðîòîêñèíû áîòóëèçìà è ñòîëáíÿêà òîëüêî â ïðèñóòñòâèè GT1b èëè GD1a [166].  ïðåäëîæåííîé ñõåìå òðåáóåò äîêàçàòåëüñòâ ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî ïðèñîåäèíåíèå ê ãàíãëèîçèäàì èíäóöèðóåò òàêèå êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ ñòðóêòóðû òîêñèíà, êîòîðûå óâåëè÷èâàþò åãî àôôèííîñòü ê áåëêîâîìó ðåöåïòîðó. Ýòà ìîäåëü îñîáåííî èíòåðåñíà òåì, ÷òî èëëþñòðèðóåò ðàçíîîáðàçíûå ñâîéñòâà ëèïèäíûõ ðàôòîâ ïî îòíîøåíèþ ê ðàçëè÷íûì ïàòîãåíàì è òîêñèíàì: (1) ðàôòû îáåñïå÷èâàþò îêðóæåíèå ïàòîãåíîâ è òîêñèíîâ áîëüøèì êîëè÷åñòâîì íèçêî-àôôèííûõ ðåöåïòîðîâ, êîòîðûå ñòàáèëèçèðóþò "çàõâàò" íà ïîâåðõíîñòè êëåòêè; (2) ðàôòû ñïîñîáíû ïåðåìåùàòü ïàòîãåíû è òîêñèíû ê ñîîòâåòñòâóþùèì âûñîêîàôôèííûì ðåöåïòîðàì, è (3) ñïåöèôè÷åñêèå ëèïèäû â ðàôòàõ ìîãóò äåéñòâîâàòü êàê øàïåðîíû, èíäóöèðóÿ êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ â ñòðóêòóðå áåëêîâ ïàòîãåíîâ è òîêñèíîâ, êîãäà îíè ñáëèæåíû ñ âûñîêî-àôôèííûìè ðåöåïòîðàìè. Íåäàâíî áûëî ïîêàçàíî [167], ÷òî ýòà ìîäåëü ñîãëàñóåòñÿ ñ ðåàêöèåé ñëèÿíèÿ, îïèñàííîé äëÿ ïðîöåññà èíôèöèðîâàíèÿ êëåòîê âèðóñîì èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà 1 (ÂÈ×-1).  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ, êîìïîíåíòû ðàôòîâ, óçíàâàåìûå òîêñèíàìè, ýòî ðàôòîâûå ëèïèäû - õîëåñòåðèí è/èëè ñôèíãîìèåëèí.  ñëó÷àå òîêñèíà Shiga, ãëèêîëèïèäíûé ðåöåïòîð 62 (Gb3) ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì íå òîëüêî äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ñàéòà ñâÿçûâàíèÿ íà ïîâåðõíîñòè êëåòêè, íî òàêæå äëÿ òðàíñïîðòèðîâêè òîêñèíà â ÝÐ [168, 169]. Èíòåðåñíî, ÷òî íåêîòîðûå ïàòîãåíû è èõ òîêñèíû èñïîëüçóþò îáû÷íûå ôóíêöèè ëèïèäíûõ ðàôòîâ (íàïðèìåð, âíóòðèêëåòî÷íûé òðàíñïîðò) äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ âíóòðü êëåòêè [170].  ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâèëîñü ìíîãî îáçîðîâ, ïîñâÿùåííûõ èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ èíôèöèðîâàíèÿ êëåòêè âèðóñàìè ÂÈ×-1.  íèõ ïîêàçàíà âàæíåéøàÿ ðîëü ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ïðîöåññå ñëèÿíèÿ âèðóñà ÂÈ×-1 ñ êëåòêîé è â äàëüíåéøåì ðàçâèòèè áîëåçíè [171 - 177]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî â ñëèçèñòîé êèøå÷íèêà ëèïèäíûå ðàôòû âîâëå÷åíû â ïåðåíîñ ÂÈ×-1 âèðèîíà ÷åðåç èíòàêòíóþ ýïèòåëèàëüíóþ êëåòêó è â ïàòîãåíåç ÂÈ×-1 ýíòåðîïàòèè. Ïîêàçàíà ðîëü ëèïèäíûõ ðàôòîâ â êîíâåðñèè ïðèîíîâûõ áåëêîâ, è ðàçâèòèè áîëåçíè Àëüöãåéìåðà [178 - 180]. Óñòàíîâëåíèå ìåõàíèçìîâ ñâÿçûâàíèÿ ðàôòîâûìè ëèïèäàìè íåêîòîðûõ ýêçîãåííûõ áåëêîâ è èõ òðàíñëîêàöèè â ñïåöèôè÷åñêèå ñàéòû íà ïîâåðõíîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, à òàêæå ìåõàíèçìîâ èíèöèàöèè íåîáõîäèìûõ êîíôîðìàöèîííûõ èçìåíåíèé â ïåðåìåùåííûõ áåëêàõ îòêðûâàåò íîâûå îáëàñòè â ìîëåêóëÿðíîé ìåäèöèíå [100]. Íàïðèìåð, óæå ñåãîäíÿ ðàçðàáîòàíû íîâûå ñèíòåòè÷åñêèå ðàñòâîðèìûå àíàëîãè ãàëàêòîçèëöåðàìèäà (GalCer), êîòîðûå ñâÿçûâàþòñÿ ñ V3-ïåòëåé gp120 (áåëêà âèðóñà ÂÈ×-1) è èíãèáèðóþò ñëèÿíèå âèðóñà ñ êëåòêîé [181, 182]. Äëÿ àíòèàäãåçèâíîé òåðàïèè âèðóñíûõ è áàêòåðèàëüíûõ òîêñèíîâ ðàçðàáîòàíû è â íàñòîÿùåå âðåìÿ èñïûòûâàþòñÿ ìîíîè ïîëèâàëåíòíûå ïðîèçâîäíûå îëèãîñàõàðèäîâ (ãëèêîäåíäðèìåðû) [183, 184]. Ïåðñïåêòèâíûì íàïðàâëåíèåì â òåðàïèè ïðèîíîâûõ, Àëüöãåéìåðà è äðóãèõ çàáîëåâàíèé, âûçâàííûõ äåôåêòíûì ôîëäèíãîì áåëêîâ, ÿâëÿåòñÿ ðàçðàáîòêà ïåïòèäîâ, ñïîñîáíûõ ðàçðóøèòü β-ñòðóêòóðó â ìîëåêóëå ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ, êîòîðûå â ïðîöåññå èíôèöèðîâàíèÿ ïðèñîåäèíÿþòñÿ ê ïðèîíîâûì (PrP) è àìèëîèäíûì ïåïòèäàì, òåì ñàìûì ñòàáèëèçèðóÿ èõ åñòåñòâåííóþ êîíôîðìàöèþ [185, 186]. Ýêñïåðèìåíòàëüíî áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñíèæàþùèå õîëåñòåðèí àãåíòû (ñòàòèíû), ñíèæàþò ó ÷åëîâåêà âåðîÿòíîñòü çàáîëåâàíèÿ áîëåçíüþ Àëüöãåéìåðà [187]. Ó æèâîòíûõ ëå÷åíèå ñòàòèíàìè òàêæå ñíèæàåò óðîâíü β-àìèëîèäíîãî ïåïòèäà, ÷òî ñîîòâåòñòâóåò êëþ÷åâîé ðîëè ÕÑ â îáðàçîâàíèè àìèëîèäíûõ áëÿøåê. Ïðèçíàíèå ó÷àñòèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ðàçëè÷íûõ èíôåêöèîííûõ è íåèíôåêöèîííûõ ïàòîëîãèÿõ, áåç ñîìíåíèÿ, îòêðîåò â áëèæàéøåì áóäóùåì íîâûå âîçìîæíîñòè êàê äëÿ äàëüíåéøèõ ôóíäàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé, òàê è äëÿ ðàçðàáîòêè 63 íîâûõ òåðàïåâòè÷åñêèõ ñðåäñòâ. 2.6. Ñîñòàâ è ìîëåêóëÿðíàÿ îðãàíèçàöèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè. Ëèïîïðîòåèíû ïëàçìû êðîâè ïîäðàçäåëÿþò íà òðè îñíîâíûõ êëàññà - âûñîêîé (ËÂÏ), íèçêîé (ËÍÏ) è î÷åíü íèçêîé ïëîòíîñòè (ËÎÍÏ). Íåñìîòðÿ íà ðàçëè÷èÿ â ðàçìåðå, ñîäåðæàíèè ëèïèäîâ, íàëè÷èè îïðåäåëåííûõ áåëêîâ (àïîïðîòåèíîâ) è ìåòàáîëè÷åñêîì ïîâåäåíèè, âñå òðè êëàññà ëèïîïðîòåèíîâ ïîñòðîåíû ïî îáùåìó ïðèíöèïó. Îíè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ãëîáóëû (ìèöåëëû) íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ - òðèãëèöåðèäîâ è ýôèðîâ ÕÑ - ïîêðûòûå ìîíîìîëåêóëÿðíûì ñëîåì ôîñôîëèïèäîâ ñ áåëêîâûìè âêëþ÷åíèÿìè (ðèñ. 2.6.1). Ñòðîåíèå è ôóíêöèè ëèïîïðîòåèíîâ è èõ àïîïðîòåèíîâ Ðèñ.2.6.1. Ñòðîåíèå ëèïîïðîòåèíîâ ïîäðîáíî îïèñàíû âî ìíîãèõ îáçîðàõ [188 - 192].  îñíîâå ôóíêöèè ÔË â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè ëåæèò òîò æå ïðèíöèï ñòðîåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ, ÷òî è â áèîìåìáðàíàõ - èõ àìôèôèëüíîñòü. Ïðè ýòîì ÔË â ëèïîïðîòåèíàõ òàêæå èãðàþò ðîëü ïîãðàíè÷íîãî ñëîÿ ìåæäó âîäíîé ñðåäîé ïëàçìû êðîâè è ãèäðîôîáíîé ãëîáóëîé íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ. Òàêîå íàçíà÷åíèå ëèïîïðîòåèíîâûõ ôîñôîëèïèäîâ è îáóñëàâëèâàåò õàðàêòåð èõ îðãàíèçàöèè â âèäå îðèåíòèðîâàííîãî ê íàðóæíîé âîäíîé ôàçå ïîâåðõíîñòíîãî ìîíîñëîÿ ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" è óñòðåìëåííûõ ê öåíòðó 64 æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé. Ïðèíöèï ìîëåêóëÿðíîé îðãàíèçàöèè ýòîãî ìîíîñëîÿ ñõîäåí ñ òàêîâûì äëÿ íàðóæíîãî ñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê: ðàñïîëîæåíèå áåëêîâ ìîçàè÷íî, è ñòåïåíü ïîãðóæåííîñòè áåëêîâûõ ìîëåêóë â ëèïèäû çàâèñèò îò èõ ãèäðîôîáíîñòè è íàëè÷èÿ α-ñïèðàëüíûõ ôðàãìåíòîâ. Òàê, àïîïðîòåèí À1 (àïîÀ1) îñíîâíîé áåëîê ËÂÏ - ëîêàëèçóåòñÿ öåëèêîì íà ïîâåðõíîñòè ãëîáóëû, âçàèìîäåéñòâóÿ ïðåèìóùåñòâåííî ñ ïîëÿðíûìè "ãîëîâêàìè" ÔË. Çíà÷èòåëüíàÿ åãî îáëàñòü ñîïðèêàñàåòñÿ ñ îêðóæàþùåé âîäíîé ôàçîé. Ýòî îáóñëàâëèâàåò åãî îòíîñèòåëüíóþ ïîäâèæíîñòü âïëîòü äî ñïîñîáíîñòè ïîêèäàòü "ìàòåðèíñêóþ" ëèïîïðîòåèíîâóþ ÷àñòèöó â ïðîöåññå òðàíñôîðìàöèè ëèïîïðîòåèíîâ â êðîâÿíîì ðóñëå. Äðóãîé æå áåëîê òåõ æå ËÂÏ àïîïðîòåèí ÀII, ãëóáæå ïîãðóæåí â ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü ëèïîïðîòåèíà èç-çà íàëè÷èÿ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ôîñôîëèïèäîâ - è âñëåäñòâèå ýòîãî îòäåëÿåòñÿ îò ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû ñ òðóäîì, òîëüêî â óñëîâèÿõ in vitro, ïðè äåéñòâèè äåòåðãåíòîâ. Åùå áîëüøåé ãèäðîôîáíîñòüþ îáëàäàåò îñíîâíîé áåëîê ËÍÏ - àïîïðîòåèí Â, ÷àñòü ôðàãìåíòîâ êîòîðîãî âçàèìîäåéñòâóåò íå òîëüêî ñ îñòàòêàìè æèðíûõ êèñëîò ÔË, íî è â íåêîòîðîé ñòåïåíè ñ íåïîëÿðíûìè ãèäðîôîáíûìè ëèïèäàìè îêðóæåíèÿ ÿäðà ("core") ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû, ñîñòîÿùåãî èç ýôèðîâ õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ. Ðàçìåðîì ýòîãî ãèäðîôîáíîãî ÿäðà, ðàçíîãî äëÿ êàæäîãî êëàññà ëèïîïðîòåèíîâ, è îïðåäåëÿåòñÿ îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâåííîå ñîäåðæàíèå ôîñôîëèïèäîâ. Èç ïðîñòûõ ãåîìåòðè÷åñêèõ ñîîáðàæåíèé ÿñíî, ÷òî ïðè îäèíàêîâîé òîëùèíå ôîñôîëèïèäíîãî ìîíîñëîÿ (òî åñòü äëèíå æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ÔË) äîëÿ åãî îáúåìà ïî îòíîøåíèþ êî âñåé ÷àñòèöå âîçðàñòàåò ñî ñíèæåíèåì äèàìåòðà ÿäðà. Ïîýòîìó ïðîöåíò ôîñôîëèïèäîâ ìèíèìàëåí (515%) â ñàìûõ êðóïíûõ ÷àñòèöàõ - õèëîìèêðîíàõ (äèàìåòðîì îò 200 äî 1000 íì) è ËÎÍÏ (40 - 60 íì), â êîòîðûõ ïðåîáëàäàþò íåéòðàëüíûå ëèïèäû, è ìàêñèìàëåí äëÿ îòíîñèòåëüíî ìåëêèõ ËÂÏ (äèàìåòðîì 4 - 5 íì) (~ 30%) [191, 193]. Òàêàÿ æå íàïðàâëåííîñòü, íî âûðàæåííàÿ åùå â áîëüøåé ñòåïåíè - ñâîéñòâåííà è äðóãîìó êîìïîíåíòó ïîâåðõíîñòè ëèïîïðîòåèíîâ - áåëêàì. Èõ ñîäåðæàíèå âîçðàñòàåò îò 2% â õèëîìèêðîíàõ äî 55% â íàèáîëåå ìåëêîé ïî ðàçìåðó è ïëîòíîé ïîäôðàêöèè ËÂÏ (ËÂÏ3). Ïðè ýòîì ÷àñòü ïîâåðõíîñòè ëèïîïðîòåèíà, çàíÿòàÿ àïîïðîòåèíàìè, è çàìåíÿþùàÿ òåì ñàìûì ôîñôîëèïèäû, òàêæå âëèÿåò íà îáùèé ïðîöåíò ïîñëåäíèõ â ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöå. Ýòî îñîáåííî õàðàêòåðíî äëÿ áîãàòûõ áåëêîì ïîäôðàêöèé ËÂÏ. ËÂÏ3 ìåíüøå ïî äèàìåòðó, ÷åì ïðîäóêò 65 èõ ÷àñòè÷íîé òðàíñôîðìàöèè â ïëàçìå êðîâè - ËÂÏ2, ïîýòîìó îòíîñèòåëüíàÿ äîëÿ ïîâåðõíîñòíîãî ìîíîñëîÿ (îò âñåé ìàññû ÷àñòèöû) â ËÂÏ3 ìàêñèìàëüíà. Íî âñëåäñòâèå âûñîêîãî ïðîöåíòà áåëêà íà ñâîáîäíóþ îò íåãî çîíó ôîñôîëèïèäàì îñòàåòñÿ ìåíüøàÿ ÷àñòü ïîâåðõíîñòè, ÷òî è îáúÿñíÿåò íåñêîëüêî ìåíüøèé (â ñðåäíåì ~25%) ïðîöåíò ÔË â íåé ïî ñðàâíåíèþ ñ áîëåå êðóïíûìè ËÂÏ2 (~33%). Ïî äàíûì Rye è Duong [194] êîëè÷åñòâî ôîñôîëèïèäîâ â ËÂÏ âíîñèò îñíîâíîé âêëàä â èõ ðàçìåð è ñòðóêòóðó. Ïðè äåéñòâèè ôîñôîëèïàçû À2, ãèäðîëèçóþùåé ÔË ïðîèñõîäèò çíà÷èòåëüíîå óìåíüøåíèå ðàçìåðà ðåêîìáèíèðîâàííûõ ËÂÏ. Ñâîáîäíûé õîëåñòåðèí (ïðîöåíò êîòîðîãî â ëèïîïðîòåèíàõ, â îòëè÷èå îò ìåìáðàí êëåòîê, íåâåëèê è ñîñòàâëÿåò âñåãî 5-15 %) ëîêàëèçóåòñÿ â îñíîâíîì â ïîâåðõíîñòíîì ìîíîñëîå, ðàñïîëàãàÿñü ìåæäó ìîëåêóëàìè ôîñôîëèïèäîâ, êàê è â íàðóæíîì ñëîå áèîìåìáðàí èëè ëèïîñîì. Çíà÷åíèÿ ìîëÿðíîãî îòíîøåíèÿ "õîëåñòåðèí-ôîñôîëèïèäû", âàæíîãî äëÿ ñòðóêòóðû ôîñôîëèïèäíîãî ìîíîñëîÿ, â ËÎÍÏ è ËÍÏ áëèçêî ê òàêîâîìó äëÿ áèîìåìáðàí - 0,7-0,8, à äëÿ ïîäôðàêöèé ËÂÏ - âäâîå íèæå. Ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâûõ ÔË ïîäîáåí ñîñòàâó íàðóæíîãî ñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê, äëÿ êîòîðîãî, õàðàêòåðíà ïðåèìóùåñòâåííàÿ ëîêàëèçàöèÿ õîëèíñîäåðæàùèõ ôîñôîëèïèäîâ, ÔÕ è ÑÌ (òàáë. 2.6.1) [195-199].  ëèïîïðîòåèíàõ, ãäå âíóòðåííåãî ìåìáðàííîãî ñëîÿ íåò, ïî÷òè íåò è àìèíîñîäåðæàùèõ ôîñôîëèïèäîâ, ÷òî, âîçìîæíî, ñâÿçàíî ñ êîíóñîîáðàçíîé ôîðìîé èõ ìîëåêóë, íå ñîîòâåòñòâóþùåé âûïóêëîé ñôåðè÷åñêîé ïîâåðõíîñòè ëèïîïðîòåèíîâ. Áîëåå 90% îò âñåõ ÔË ïðèõîäèòñÿ íà ÔÕ, ÑÌ è ëèçîÔÕ.  îñíîâíîì ýòî ÔÕ, äîëÿ êîòîðîãî â ñðåäíåì âäâîå âûøå, ÷åì â áèîìåìáðàíàõ. Òàêîé ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâ ìîæåò áûòü ñâÿçàí è ñ îñîáåííîñòÿìè èõ ñèíòåçà è ñåêðåöèè ìåìáðàíàìè ãåïàòîöèòîâ [200]. Êàê âèäíî èç òàáëèöû 2.6.1, ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå ÔË ìåæäó îòäåëüíûìè êëàññàìè ëèïîïðîòåèíîâ âûðàæåíû íå î÷åíü ðåçêî; íàèáîëåå ñóùåñòâåííàÿ ñïåöèôè÷åñêàÿ îñîáåííîñòü - ýòî íåñêîëüêî áîëüøèé ïðîöåíò ñôèíãîìèåëèíà â áîãàòûõ õîëåñòåðèíîì ËÍÏ ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè êëàññàìè ëèïîïðîòåèíîâ, ÷òî ÿâëÿåòñÿ åùå îäíèì ïðîÿâëåíèåì êîìïëåìåíòàðíîñòè ñôèíãîìèåëèíà è õîëåñòåðèíà. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå ÔË ìåæäó ëèïîïðîòåèíàìè â ïðèíöèïå íåâîçìîæíû èç-çà ïîñòîÿííî èäóùèõ â êðîâÿíîì ðóñëå ïðîöåññîâ ïðåâðàùåíèÿ ëèïîïðîòåèíîâ, òðàíñïîðòà è ïåðåõîäà àïîïðîòåèíîâ è ëèïèäîâ, âêëþ÷àÿ èíäèâèäóàëüíûå ÔË, ñ ó÷àñòèåì ôîñôîëèïèä-òðàíñïîðòíîãî 66 Òàáëèöà 2.6.1. Ñîñòàâ ôîñôîëèïèäîâ ëèïîïðîòåèíîâ ïëàçìû êðîâè [197 - 199] (â % îò îáùåãî ñîäåðæàíèÿ ôîñôîëèïèäîâ) Êëàññû ôîñôîëèïèäîâ Ôîñôàòèäèëõîëèí ËÎÍÏ [197] 76,2 ± 1,6 ËÍÏ [198] 66,0 ± 0,2 [197] 79,2 ± 2,91 ËÂÏ [199] 67,3 ± 3,8 Ñôèíãîìèåëèí 13,1 ± 0,4 29,2 ± 0.6 13,5 ± 0,21 15,6 ± 0,1 4,7 ± 0,2 16,2 ± 0,1* ÐËÎÍÏ <0.05 ÐËÂÏ <0.05 3,6 ± 0,4 Ôîñôàòèäèë ýòàíîëàìèí Ôîñôàòèäèëñåðèí 4,8 ± 0,2** 2,3± 2,19 - 0,13 ± 0,03 0,7 ± 0,1 - 0,06 ± 0,02*** - Ôîñôàòèäèëèíîçèò 0,41 ± 0,04 0,4 ± 0,1 - 2,81 ± 0,04 - 2,1 + 0,1. - 0,14 ± 0,08 - 0,77 ± 0,08 - 0,4 ± 0,06*** - Ëèçîôîñôàòèäèë õîëèí 3,2 ± 0,1 Êàðäèîëèïèí + 0,42 ± 0,04 ôîñôàòèäèëãëèöåðèí [197] 77,1 ± 2,1 * ÐËÎÍÏ, ÐËÎÍÏ - äîñòîâåðíîñòü ïî îòíîøåíèþ ê ïðîöåíòó â ËÎÍÏ è ËÂÏ [197]; ** -ÔÝ âìåñòå ñ ïëàçìàëîãåíîì *** - äàííûå Deguchi H. Et al. [196] (-) - èçìåðåíèÿ íå ïðîâîäèëèñü áåëêà (ÔËÒÁ), à òàêæå îáìåíà ôîñôîëèïèäîâ ìåæäó ëèïîïðîòåèíàìè è ìåìáðàíàìè êëåòîê [201 - 203]. Ïðèñóòñòâèå â ëèïîïðîòåèíàõ, íàðÿäó ñ õîëèíñîäåðæàùèìè ÔË, îïòèìàëüíûìè äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ âûïóêëîãî ìîíîñëîÿ, òàêæå è äðóãèõ êëàññîâ ôîñôîëèïèäîâ ñâÿçàíî, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, ñ îñîáåííîñòÿìè ôîðìèðîâàíèÿ ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû â ïå÷åíè, êîãäà ïîä âëèÿíèåì ñèíòåçèðîâàííûõ â êëåòêå àïîïðîòåèíîâ ñåêâåñòèðóåòñÿ îïðåäåëåííàÿ îáëàñòü ìåìáðàíû ÝÐ ãåïàòîöèòîâ ñî âñåìè íàõîäÿùèìèñÿ â íåé ôîñôîëèïèäàìè. Ïî ìíåíèþ Vance è Vance [200] äëÿ ñåêðåöèè ëèïîïðîòåèíîâ ãåïàòîöèòàìè èñïîëüçóþòñÿ ñïåöèôè÷åñêèå ïóëû ÔË, ÷òî ñâÿçàíî ñ ïóòÿìè èõ áèîñèíòåçà. Ïðè ýòîì ýôôåêòèâíûì ïðåäøåñòâåííèêîì ôîñôîëèïèäîâ ëèïîïðîòåèíîâ îêàçûâàåòñÿ íå ÔÝ, à ÔÕ. Âçàèìîäåéñòâèå ó÷àñòêà ìåìáðàíû ÝÐ ãåïàòîöèòà ñ àïîïðîòåèíîì ÀI è/èëè ÀÏ ïðèâîäèò ê ñåêâåñòèðîâàíèþ è ñåêðåöèè ó÷àñòêà ìèêðîñîìàëüíîãî ìåìáðàííîãî áèñëîÿ, ïðèíèìàþùåãî ôîðìó ïëîñêîãî äèñêà ñ àïîïðîòåèíàìè íà ïåðèôåðèè [204, 205] (íàçûâàåìîãî â ïîñëåäíåå âðåìÿ ïî ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ïðå-β-ËÂÏ).  ïëàçìå îíè ïðèîáðåòàþò ïðàêòè÷åñêè ñðàçó ñôåðè÷åñêóþ ôîðìó, çà ñ÷åò êàòàëèçèðóåìîãî ËÕÀÒ îáðàçîâàíèÿ ýôèðîâ õîëåñòåðèíà, 67 ôîðìèðóþùèõ ñôåðè÷åñêîå ãèäðîôîáíîå ÿäðî ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû [206, 207].  ïîñëåäíåå âðåìÿ ïîÿâèëèñü äîâîäû â ïîëüçó äðóãîãî, âíåêëåòî÷íîãî ïóòè ôîðìèðîâàíèÿ ïðå-β-ËÂÏ. Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî àïîÀ1 ìîæåò ñåêðåòèðîâàòüñÿ èç ïå÷åíè â ñâîáîäíîì ñîñòîÿíèè, èëè ñ î÷åíü íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì ôîñôîëèïèäîâ, à îñòàëüíûå ÔË çàáèðàþòñÿ èì ñ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê ñ ïîìîùüþ ÀÒÔñâÿçûâàþùåãî òðàíñïîðòåðíîãî ìåìáðàííîãî áåëêà ÀÂÑ À1 [208, 209]. Ýòèì ìîæíî îáúÿñíèòü ïîäîáèå ñîñòàâà ôîñôîëèïèäíîãî ìîíîñëîÿ ëèïîïðîòåèíîâ è íàðóæíîãî ñëîÿ ìåìáðàí êëåòîê. Ïðè îáðàçîâàíèè æå ËÎÍÏ, êàê è õèëîìèêðîíîâ â êèøå÷íèêå, ÔË âìåñòå ñ íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì àïîïðîòåèíîâ ñîçäàþò ïîêðûâàþùóþ ïîâåðõíîñòü äëÿ âûñîêî ãèäðîôîáíûõ òðèãëèöåðèäîâ, îáåñïå÷èâàÿ èõ ñåêðåöèþ â êðîâü â âèäå ñòàáèëüíûõ ÷àñòèö. ×òî êàñàåòñÿ òîïîãðàôèè îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË íà ïîâåðõíîñòè ëèïîïðîòåèíà, òî îíè ðàñïîëîæåíû íå áåñïîðÿäî÷íî, à â âèäå ñåãðåãèðîâàííûõ äîìåíîâ, ÷òî áûëî ïîêàçàíî ñ èñïîëüçîâàíèåì ôëóîðåñöåíòíî ìå÷åííûõ ôîñôîëèïèäîâ - ÔÕ è ÑÌ [210]. Òàêæå áûëà ïîêàçàíà âûñîêàÿ ìèêðîâÿçêîñòü ïðèìûêàþùèõ ê àïîïðîòåèíó ìèêðîîáëàñòåé ÔË. Îäíîé èç ïðè÷èí ýòîãî ìîæåò áûòü ýëåêòðîñòàòè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ïîëÿðíûõ àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ áåëêà ñ ôîñôîõîëèíîâûì ôðàãìåíòîì ÔÕ. Ðàáîòàìè ïîñëåäíèõ ëåò ïîêàçàíà ïëàñòè÷íîñòü ñòðóêòóðû ëèïîïðîòåèíîâ, îñîáåííî ËÂÏ, â êîòîðûõ àìôèïàòè÷åñêèå α-ñïèðàëüíûå äîìåíû îñíîâíîãî áåëêà àïîïðîòåèíà À1, âçàèìîäåéñòâóþò ñ ôîñôîëèïèäàìè [211, 212]. ×àñòèöû ËÂÏ â ïëàçìå âûñîêî äèíàìè÷íû è ïîäâåðãàþòñÿ ïîñòîÿííîìó ðåìîäåëèðîâàíèþ ñ ó÷àñòèåì ñïåöèôè÷åñêèõ òðàíñïîðòíûõ è ôåðìåíòíûõ áåëêîâ ïëàçìû êðîâè è áèîìåìáðàí.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ìåòîäîì ÿäåðíî-ìàãíèòíîãî ðåçîíàíñà (ßÌÐ) áûëà ïîëó÷åíà ïîäðîáíàÿ èíôîðìàöèÿ î áåëîê-ôîñôîëèïèäíûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ â ËÂÏ, âêëþ÷àÿ âçàèìîäåéñòâèÿ è ñ äðóãèìè àïîïðîòåèíàìè (ÑI, ÑII) [213]. Äëÿ áîëåå êðóïíûõ ëèïîïðîòåèíîâ ËÍÏ, íåäàâíî ïðåäëîæåíà íîâàÿ ñòðóêòóðíàÿ ìîäåëü "òðåõñëîéíàÿ", â êîòîðîé, ïîìèìî ïîâåðõíîñòè è ÿäðà, îòìå÷àåòñÿ ïðèñóòñòâèå ïðîìåæóòî÷íîãî ñëîÿ [214]. Àâòîðû îòìå÷àþò âàæíîñòü âêëàäà β-ñêëàä÷àòîé ñòðóêòóðû áåëêà (àïîïðîòåèíà Â) è ïîëÿðíûõ ãîëîâîê ôîñôàòèäèëõîëèíà â ôîðìèðîâàíèå ÷åòâåðòè÷íîé ñòðóêòóðû áåëêà. Ïðè ýòîì ïîä÷åðêèâàþòñÿ èçìåíåíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ õàðàêòåðèñòèê è áåëîê-ëèïèäíûõ âçàèìîäåéñòâèé â ìîäèôèöèðîâàííûõ, íàèáîëåå àòåðîãåííûõ ÷àñòèöàõ ËÍÏ. 68 ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 2. 1. Killian J.A., van Meer G. The "double life" of membrane lipids. EMBO Reports. 2001, 21, 91-95. 2. Singer S., Nicolson G. The fluid mosaiñ model of the structure of cell membranes. Science. 1972, 175, 720-731. 3. Íàêàãàêè Ì. Ôèçè÷åñêàÿ õèìèÿ ìåìáðàí. Ìèð, Ì. 1991, 60. 4. Ho C., Slater S.J., Stubbs C.D., Slater S.J., Stubbs C.D. Hydration and order in lipid bilayers. Biochemistry. 1995, 34, 6188-6195. 5. Ëîïóõèí Þ.Ì., Àð÷àêîâ À.È., Âëàäèìèðîâ Þ.À., Êîãàí Ý.Ì. Õîëåñòåðèíîç (Õîëåñòåðèí áèîìåìáðàí. Òåîðåòè÷åñêèå è êëèíè÷åñêèå àñïåêòû). Ìåäèöèíà, Ì. 1983. 6. Dahl C., Dahl J. In: Biology of cholesterol (Yagle P.L. ed). CRC Press, Boca Raton (Fl., USA). 1988, 147-172. 7. Ohvo-Rekila H., Ramsted B., Leppimaki P., Slotte P. Cholesterol interaction with phospholipids in membranes. Progr Lipid Res. 2002, 41, 66-97. 8. Barenholz Y. In: Physiology of membrane fluidity (Shinitzky M.ed). CRC Press, Boca Raton (Fl., USA). 1984, 131-173. 9. Huang J., Buboltz J.T., Feigenson G.W. Maximum solubility of cholesterol in phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine bilayers. Biochim Biophys Acta. 1999, 1417, 89-100. 10. Stockton B.W., Smith I.C.P. A deuterium nuclear magnetic resonance study of the condensing effect of cholesterol on egg phosphatidylcholine bilayer membranes. I. Perdeuterated fatty acid probes. Chem Phys Lipids. 1976, 17, 251-263. 11. Yeagle P.L Cholesterol and the cell membrane. Biochim Biophys Acta.1985, 822, 267-287. 12. Yeagle P.L. In: Cholesterol in membrane models (Finegold L. ed). Boca Raton (Fl., USA), CRC Press. 1993, 1-12. 13. Sackmann E. In: Structure and dynamics of membranes-from cells to vesicles (Lipowsky R., Sackmann E. eds). North-Holland. 1995, 1-65. 14. Jacobon K., Sheets E.D., Simson R. Revisiting the fluid mosaic model of membranes. Science. 1995, 268, 1441-1442. 15. Sheets E.D., Lee G.M., Simson R., Jacobson K. Transient confinement of a glycosylphosphatidylinositol-anchored protein in the plasma membrane. Biochemistry. 1997, 36, 12449-12458. 16. Roper K., Corbeil D., Huttner W.B. Retention of prominin in microvilli reveals distinct cholesterol-based lipid microdomains in the apical plasma membrane. Nat. Cell Biol. 2000, 2, 582-592. 17. Somerharju P., Virtanen J.A., Cheng K.H. Lateral organisation of membrane lipids. The superlattice view. Biochim Biophys Acta. 1999, 1440, 32-48. 69 18. Virtanen J.A., Cheng K.H., Somerharju P. Phospholipid composition of the mammalian red cell membrane can be rationalized by a superlattice model. Proc Nat Acad Sci USA. 1998, 95, 4964-4969. 19. Boon J.M., Smith B.D. Chemical control of phospholipid distribution across bilayer membranes. Review. Med Res Rev. 2002, 22, 251-281. 20. Kol M.A., van Laak Rijkers, Killian J.A. Phospholipid flop induced by transmembrane peptides in model membranes is modulated by lipid composition. Biochemistry. 2003, 42, 231-237. 21. Okeley N.M., Gelb M. H. A designed probe for acidic phospholipids reveals the unique enriched anionic character of the cytosolic face of the mammalian plasma membrane. J Biol Chem. 2004, 279, 2183321840. 22. Op den Kamp J.A.F. Lipid asymmetry in membranes. Annu Rev Biochem. 1979, 48, 47-71. 23. Rothman J.E., Lenard J. Membrane asymmetry. Science. 1977, 195, 743-753. 24. Bretscher M.S. Phosphatidylethanolamine: differential labelling in intact cells and cell ghosts of human erythrocytes by a membraneimpermeable reagent. J Mol Biol. 1972, 71, 523-528. 25. Gascard P., Tran D., Sauvage M., Sulpice J.-C., Fukami K., Takenawa T., Claret M., Giraud F. Asymmetric distribution of phosphoinositides and phosphatidic acid in the human erythrocyte membrane. Biochim Biophys Acta. 1991, 1069, 27-36. 26. Butikofer P., Lin Z.W, Chiu D.T-Y., Kuypers F.A. Transbilayer distribution and mobility of phosphatidylinositol in human red blood cells. J Biol Chem. 1990, 265, 16035-16038. 27. Kato N., Nakanishi M., Hirashima N. Transbilayer asymmetry of phospholipids in plasma membrane rergulates exocytotic release in mast cells. Biochemistry. 2002, 41, 8068-8074. 28. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton D.L., Henson P.M. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J Immunol. 1992, 148, 2207-2216. 29. Bevers E.M., Comfurius P., van Rijn J.L., Hemker H.C., Zwaal R.F. Generation of prothrombin-converting activity and the exposure of phosphatidylserine at the outer surface of platelets. Eur J Biochem. 1982, 122, 429-436. 30. Lubin B., Chiu D., Bastacky J., Roelofsen B., van Deenen L.L. Abnormalities in membrane phospholipid organization in sickled erythrocytes. J Clin Invest. 1981, 67, 1643-1649. 31. Schlegel R.A., McEvoy L., Williamson P. Membrane phospholipid asymmetry and the adherence of loaded red blood cells. Bibl Haematol. 1985, 51, 150-156. 70 32. Wali R.K., Jaffe S., Kumar D., Sorgente N., Kalra V.K. Increased adherence of oxidant treated human and bovine erythrocytes to cultured endothelial cells. J Cell Physiol. 1987, 133, 25-33. 33. Fadok V.A., Bratton D.L., Henson P.M. Phagocyte receptors for apoptotic cells: recognition, uptake, and consequences. J Clin Invest. 2001, 108, 957-962. 34. Fadok V.A., Bratton D.L., Frasch S.C., Warner M.L., Henson P.M. The role of phosphatidylserine in recognition of apoptotic cells by phagocytes. Cell Death Differ. 1998, 5, 551-562. 35. Wilson M.J., Richter-Lowney K., Daleke D.L. Hyperglycemia induces a loss of phospholipid asymmetry in human erythrocytes. Biochemistry. 1993, 32, 11302-1131. 36. Wali R.K., Jaffe S., Kumar D., Kalra V.K. Alterations in organization of phospholipids in erythrocytes as a factor in adherence to endothelial cells in diabetes mellitus. Diabetes. 1988, 37, 104-111. 37. Pomorski T., Hrafnsdottir S., Devaux P.F., van Meer G. Lipid distribution and transport across cellular membranes. Semin Cell Dev Biol. 2001, 12, 139-148. 38. Borst P., Zelcer N., van Helvoort A. ABC transporters in lipid transport. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 128-144. 39. Borst P., Elferink R.O. Mammalian abc transporters in health and disease. Annu Rev Biochem. 2002, 71, 537-592. 40. Bevers E.M., Comfurius P., Dekkers D.W., Zwaal R. F. Lipid translocation across the plasma membrane of mammalian cells. Biochim Biophys Acta. 1999, 1439, 317-330. 41. Zwaal R.F., Schroit A.J. Pathophysiologic implications of membrane phospholipid asymmetry in blood cells. Blood. 1997, 89, 11211132. 42. Schlegel R.A., Williamson P. Phosphatidylserine, a death knell. Cell Death Differ. 2001, 8, 551-563. 43. Voelker D.R. New perspectives on the regulation of intermembrane glycerophospholipid traffic. J Lipid Res. 2003, 44, 441-449. 44. Bell R. M., Ballas L.M., Coleman R.A. Lipid topogenesis. J Lipid Res. 1981, 22, 391-403. 45. Daleke D.L., Huestis W.H. Incorporation and translocation of aminophospholipids in human erythrocytes. Biochemistry. 1985, 24, 5406-5416. 46. Ferrell J.E., Lee K. J., Huestis W.H. Membrane bilayer balance and erythrocyte shape: a quantitative assessment. Biochemistry. 1985, 24, 2849-2857. 47. Bishop W.R., Bell R.M. Assembly of the endoplasmic reticulum phospholipid bilayer: The phosphatidylcholine transporter. Cell. 1985, 42, 51-60. 71 48. Buton X., Morrot G., Fellmann P., Seigneuret M. Ultrafast glycerophospholipid-selective transbilayer motion mediated by a protein in the endoplasmic reticulum membrane. J Biol Chem. 1996, 271, 66516657. 49. Zachowski A. Phospholipids in animal eukaryotic membranes: transverse asymmetry and movement. Biochem J. 1993, 294, 1-14. 50. Pomorski T., Muller P., Zimmermann B., Burger K., Devaux P.F., Herrmann A. Transbilayer movement of fluorescent and spin-labeled phospholipids in plasma membrane of human fibroblasts: a quantitative approach. J Cell Sci. 1996, 109, 687-698. 51. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry. J Lipid Res. 2003, 44, 233-242. 52. Wang L., Beserra C., Garbers D.L. A novel aminophospholipid transporter exclusively expressed in spermatozoa is required for membrane lipid asymmetry and normal fertilization. Dev Biol. 2004, 267, 203-215. 53. Oram J.F., Wolfbauer G., Vaughan A.M., Tang C., Albers J.J. Phospholipid transfer protein interacts with and stabilizes ATP-binding cassette transporter A1 and enhances cholesterol efflux from cells. J Biol Chem. 2003, 278, 52379-52385. 54. Paterson J., Zimmerman M., Lyles J., Lee C-W., Halleck M., Williamson P., Schlegel R., Daleke D.L. Lipid specificity of candidate flippases. Biophys J. 2001, 80, 256. 55. Tang X., Halleck M.S., Schlegel R.A., Williamson P. A subfamily of P-type ÀTPases with aminophospholipid transporting activity. Science. 1996, 272, 1495-1497. 56. Ding J., Wu Z., Crider B.P., Ma Y., Li X., Slaughter C., Gong L., Xie X.S. Identification and functional expression of four isoforms of ATPase II, the putative aminophospholipid translocase. Effect of isoform variation on the ATPase activity and phospholipid specificity. J Biol Chem. 2000, 275, 23378-23386. 57. Morrot G., Zachowski A., Devaux P.F. Partial purification of the human erythrocyte Mg2+-ATPase. A candidate aminophospholipid translocase. FEBS Lett. 1990, 266, 29-32. 58. Allikmets R., Shroyer N.F., Singh N., Seddon J.M., Lewis R.A., Bernstein P.S., Peiffer A., Zabriskie N.A., Li Y., Hutchinson A., Dean M., Lupski J.R., Leppert M. Mutation of the Stargardt disease gene (ABCR) in age-related macular degeneration. Science. 1997, 277, 1805-1807. 59. Oram J.F., Lawn R.M. ABCA1: the gatekeeper for eliminating excess tissue cholesterol. J Lipid Res. 2001, 42, 1173-1174. 60. Attie A.D., Kastelen J.P., Heyden M.R. Pivotal role of ABCA1 in reverse cholesterol transport. J Lipid Res. 2001, 42, 1717-1726. 61. Santamarina-Foyo S., Remaley A.T., Neufeld E.B., Brewer H.B. 72 Regulation and intracellular trafficking of the ABCA1 transporter. J Lipid Res. 2001, 42, 1339-1345. 62. Wang Nan, Silver D.L., Thiele C., Tall A.R. ATP-binding Cassette Transporter A1 (ABCA1) Functions as a Cholesterol Efflux Regulatory Protein. J Biol Chem. 2001, 276, 23742-23747. 63. Hovingh G.K., van Wijland M.J.A., Drownlie A., Bisoendial R.J., Heyden M.R. The role of ABCA1 transporter and cholesterol efflux in familial hypoalphalipoproteinemia. J Lipid Res. 2003, 44, 1251-1255. 64. van Helvoort A., Smith A.J., Sprong H., Fritzsche I., Schinkel A.H., Borst P., van Meer G. MDR1 P-glycoprotein is a lipid translocase of broad specificity, while MDR3 P-glycoprotein specifically translocates phosphatidylcholine. Cell. 1996, 87, 507-517. 65. Dean M., Hamon Y., Chimini G. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. J Lipid Res. 2001, 42, 1007-1017. 66. Smit, J.J., Schinkel A.H., Mol C.A., Majoor D., Mooi W.J., Jongsma A.P., Lincke C.R., Borst P. Tissue distribution of the human MDR3 P-glycoprotein. Lab. Invest. 1994, 71, 638-649. 67. Zhou Q., Zhao J., Stout J.G., Luhm R.A., Wiedmer T., Sims P.J. Molecular cloning of human plasma membrane phospholipid scramblase. A protein mediating transbilayer movement of plasma membrane phospholipids. J Biol Chem.1997, 272, 18240-18244. 68. Sims P.J., Wiedmer T. Unraveling the mysteries of phospholipid scrambling. Thromb Haemost. 2001, 86, 266-275. 69. Chang Q.L., Gummadi S.N., Menon A.K. Chemical modification identifies two populations of glycerophospholipid flippase in rat liver ER. Biochemistry. 2004, 43, 10710-10718. 70. Êàãàâà ßñóî. Áèîìåìáðàíû. Âûñø. Øê., Ì. 1985, 52-55. 71. Êðàâöîâ À.Â., Àëåêñååíêî È.Ð. Ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè âåêòîðíûõ ôåðìåíòîâ áèîìåìáðàí. Êèåâ, Íàóêîâà Äóìêà. 1990. 72. Comfurius P., Williamson P., Smeets E.F., Schlegel E.A., Bevers E.M., Zwaal R.F. Reconstitution of phospholipid scramblase activity from human blood platelets. Biochemistry. 1996, 35, 7631-7634. 73. Makowski P., Makush R., Sikorski A.F., Jezierski A., Pikula S., Dabrowska R. Interaction of caldesmon with ER membrane: effect on the mobility of phospholipids in membrane and on the phosphatidylserine base-exchange reaction. Biochem J. 1997, 328, 509-505. 74. Wilschut I., Duzgunes N., Hoekstra D., Papahadjopoulos B. Modulation of membrane fusion by membrane fluidity: temperature dependens of divalent cation induced fusion of phosphatidylserine vesicles. J Biochemistry. 1985, 24, 8-14. 75. Lee A.G. Lipid-protein interactions in biological membranes: a structural perspective. Biochim Biophys Acta. 2003, 1612, 1-40. 76. May S., Ben-Shaul A. Molecular theory of lipid-protein interac73 tion and the L -HII transition. Biophys J. 1999, 76, 751-767. 77. Santiago-Garcia J., Delgado-Coello B.A., Mas-Oliva J. Thermal analysis of the plasma membrane Ca2+-ATPase. Mol Cell Biochem. 2000, 209, 105-112. 78. Hatch G.M. Cell biology of cardiac mitochondrial phospholipids. Biochem Cell Biol. 2004, 82, 99-112. 79. Laird D.M., Parce J.W., Montgomery R.I., Cunningham C.C. Effect of phospholipids on the catalytic subunits of the mitochondrial F0.F1-ATPase. J Biol Chem. 1986, 261, 14851-14856. 80. Ross G.F., Notter R.H., Meuth J., Whitsett J.A. Phospholipid binding and biological activity of pulmonary surfactant-associated protein (SAP)-35 and its non-collagenous COOH-terminal domains. J Biol Chem. 1986, 261, 14283-14291. 81. Magzoub M., Eriksson L.E., Graslund A. Conformational states pf the cell-penetrating peptide penetretin when interacting with phospholipid vesicles: effect of surface charge and peptide concentration. Biochim Biophys Acta. 2002, 1563, 53-63. 82. Knoll W., Frank C.W., Heibel C., Naumann R., Offenhausser A., Ruhe J., Schmidt E.K., Shen W.W., Sinner A. Functional tethered lipid bilayers. J Biotechnol. 2000, 74, 137-158. 83. Äåðãóíîâ À.Ä., Êàïðåëüÿíö À.Ñ., Îñòðîâñêèé Ä.Í. Áåëîêëèïèäíûå âçàèìîäåéñòâèÿ è ôóíêöèîíèðîâàíèå ìåìáðàíîñâÿçàííûõ ôåðìåíòîâ. Óñïåõè áèîë õèìèè. 1984, 25, 89109. 84. Bogdanov M., Dowhan W., Lipid-assisted protein folding. J Biol Chem. 1999, 274, 36827-36830. 85. Kaibuchi K., Takai Y., Nishizuka Y. Cooperative role of various membrane phospholipids in the activation of Ca-activated, phospholipid dependent proteinkinase. J Biol Chem. 1981, 256, 7146-7149. 86. Rao L.V., Hoang A.D., Rapaport S.I. Mechanism of effects of the binding of lupus anticoagulant JgG and protrombin to surface phospholipid. Blood. 1996, 88, 4173-4182. 87. Lambers J.W., Cammenga M., Konig B.W., Mertens K., Pannekoek H, van Mourik J.A. Activation of human entothelal cell-type plasminogen activator inhibitor (PAI-1) by negative charged phospholipids. J Biol Chem. 1987, 262, 17492-17496. 88. Gilbert G.E., Furie B.C., Furie B. Binding of human factor VIII to phospholipid vesicles. J Biol Chem. 1990, 265, 815-822. 89. Sweet L.J., Dudley D.T., Pessin J.E., Spector A.A. Phospholipid activation of the insulin receptor kinase by phosphatidylinositol. FASEB J. 1987, 1, 55-59. 90. Imai T., Kageyama Y., Tobari J. Mycobacterium smegmatis malate dehydrogenase: activation of the lipid-dependent enzyme by 74 anionic phospholipids and phosphatidylethanolamine. Biochim Biophys Acta. 1995, 1246, 189-196. 91. Brown R.E. Sphingolipid organization in biomembranes: what physical studies of model membranes reveal. J Cell Sci. 1998, 111, 1-9. 92. Brown D.A., London E. Structure and function of sphingolipidand cholesterol-rich membrane rafts. J Biol Chem. 2000, 275, 1722117224. 93. Simons K., Ikonen E. Functional rafts in cell membranes. Nature. 1997, 387, 569-572. 94. Brown D.A., London E. Functions of lipid rafts in biological membranes. Annu Rev Cell Dev Biol. 1998, 14, 111-136. 95. Rietveld A., Simons K. The differential miscibility of lipids as the basis for the formation of functional membrane rafts. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 467-479. 96. Israelachvili J.N., Marcelja S., Horn R.G. Physical principles of membrane organization. Q Rev Biophys. 1980, 13, 121-200. 97. Brugger B., Sandhoff R., Wegehingel S., Gorgas K., Malsam J., Helms J.B., Lehmann W.D., Nickel W., Wieland F.T. Evidence for segregation of sphingomyelin and cholesterol during formation of COPIcoated vesicles. J Cell Biol. 2000, 151, 507-518. 98. London E., Brown D.A. Insolubility of lipids in triton X-100: physical origin and relationship to sphingolipid/cholesterol membrane domains (rafts). Biochim Biophys Acta. 2000, 1508, 182-195. 99. Pralle A., Keller P., Florin E-L., Simons K., Horber J. K. H. Sphingolipid-cholesterol rafts diffuse as small entities in the plasma membrane of mammalian cells. J Cell Biol. 2000, 148, 997-1008. 100. Jacques F., Garmy N., Mahfoud R., Yahi N. Lipid rafts: structure, function and role in HIV, Alzheimer's and prion diseases. Cambridge University Press. 2002. 101. Pike L.J. Lipid rafts: bringing order to chaos. J Lipid Res. 2003, 44, 655-667. 102. Friedrichson T., Kurzchalia T. V. Microdomains of GPIanchored proteins in living cells revealed by crosslinking. Nature. 1998, 394, 802-805. 103. Varma R., Mayor S. GPI-anchored proteins are organized in submicron domains at the cell surface. Nature. 1998, 394, 798-801. 104. Galbiati F., Razani B., Lisanti M. P. Emerging themes in lipid rafts and caveolae. Cell. 2001, 106, 403-411. 105. Zajchowski L.D., Robbins S.M. Lipid rafts and little caves. Compartmentalized signalling in membrane microdomains. Eur J Biochem. 2002, 269, 737-752. 106. Gargalovic P., Dory L. Caveolins and macrophage lipid metabolism. J Lipid Res. 2003, 44, 11-21. 75 107. Dupree P., Parton R. G., Raposo G.,. Kurzchalia T. V., Simons K. Caveolae and sorting in the trans-Golgi network of epithelial cells. EMBO J. 1993, 12, 1597-1605. 108. Anderson R.G.W. The caveolae membrane system. Annu Rev Biochem. 1998, 67, 199-225. 109. Mirre C., Monlauzeur L., Garcia M., Delgrossi M.-H., Le Bivic A. Detergent-resistant membrane microdomains from Caco-2 cells do not contain ñaveolin. Am. Physiol. 1996, 271, 887-894. 110. Riddell D.R, Christie G., Hussain I., Dingwall C. Compartmentalization of beta-secretase (Asp2) into low-buoyant density, noncaveolar lipid rafts. Curr Biol. 2001, 11, 1288-1293. 111. Rothberg K.G., Heuser J.E., Donzell W.C., Ying Y.-S., Glenney J.R., Anderson R.G.W. Caveolin, a protein component of caveolae membrane coats. Cell. 1992, 68, 673-682. 112. Scherer P.E., Okamoto T., Chum M., Nishimoto I., Lodish H.F., Lisanti M.P. Identication, sequence, and expression of caveolin-2 genes a caveolin gene family. Proc Natl Acad Sci USA. 1996, 93, 131-135. 113. Tang Z., Scherer P.E., Okamoto T., Song K., Chu C., Kohtz S., Nishimoto I., Lodish H.F., Lisanti M.P. Molecular cloning of caveolin-3, a novel member of the caveolin gene family expressed predominantly in muscle. J Biol Chem. 1996, 271, 2255-2261. 114. Bickel P.E., Scherer P.E., Schnitzer J.E., Oh P., Lisanti M.P., Lodish H.F. Flotillin and epidermal surface antigen a new family of caveolae-associated integral membrane proteins. J Biol Chem. 1997, 272, 13793-13802. 115. Harder T., Schei.ele P., Verkade P., Simons K. Lipid domain structure of the plasma membrane revealed by patching of membrane components. J Cell Biol. 1998, 141, 929-942. 116. Iwabuchi K., Handa K., Hakomori S. Separation of 'glycosphingolipid signaling domain' from caveolin-containing membrane fraction in mouse melanoma B16 cells and its role in cell adhesion coupled with signalling. J Biol Chem. 1998, 273, 33766-33773. 117. Chan B.L., Chao M.V., Saltiel A.R. Nerve growth factor stimulates the hydrolysis of glycosyl-phosphatidylinositol in PC-12 cells: a mechanism of protein kinase C regulation. Proc Natl Acad Sci USA. 1989, 86, 1756-1760. 118. Gumbleton M., Abulrob A.G., Campbell L. Caveolae: an alternative membrane transport compartment. Pharm Res. 2000, 17, 10351048. 119. Shin J.S., Abraham S.N. Caveolae as portals of entry for microbes. Microbes Infect. 2001, 3, 755-761. 120. Mukherjee S., Maxfield F.R. Role of membrane organization and membrane domains in endocytic lipid trafficking. Traffic. 2000, 1, 20376 211. 121. Swaminathan S., Eswaramoorthy S. Structural analysis of the catalytic and binding sites of Clostridium botulinum neurotoxin B. Nat Struct Biol. 2000, 7, 693-699. 122.Triantafilou K., Triantafilou M. Lipid-raft-dependent Coxsackievirus B4 internalization and rapid targeting to the Golgi. Virology. 2004, 326, 6-19. 123. Bavari S., Bosio C.M., Wiegand E., Ruthel G., Will AB., Geisbert T.W., Hevey M., Schmaljohn C., Schmaljohn A., Aman M.J. Lipid raft microdomains: a gateway for compartmentalized trafficking of Ebola and Marburg viruses. J Exp Med. 2002, 195, 593-602. 124. Hao M., Mukherjee S., Maxfield F.R. Cholesterol depletion induces large scale domain segregation in living cell membranes. Proc Natl Acad Sci. USA. 2001, 98, 13072-13077. 125. Tall A.R., Costet P., Wang N. Regulation and mechanisms of macrophage cholesterol efflux. J Clin Invest. 2002, 110, 899-904. 126. Fielding C.J., Fielding P.E. Cholesterol and caveolae: structural and functional relationships. Biochim Biophys Acta. 2000, 1529, 210222. 127. Isshiki M., Anderson R.G.W. Calcium signal transduction from caveolae. Cell Calcium. 1999, 26, 201-208. 128. Slimane T.A., Trugnan G. Mechanisms of sorting and transport of proteins to tw membrane domains of epithelial cells. J Soc Biol. 2003, 197, 211-216. 129. Brown D.A., Rose J.K. Sorting of GPI-anchored proteins to glycolipid-enriched membrane subdomains during transport to the apical cell surface. Cell. 1992, 68, 533-544. 130. Van Ijzendoorn S.C.D., Hoekstra D. The sub-apical compartment: a novel sorting center? Trends Cell Biol. 1999, 9, 144-149. 131. Simons K., Toomre D. Lipid rafts and signal transduction. Nat Rev Mol Cell Biol. 2000, 1, 31-41. 132. Drevot P., Langlet C., Guo X-J., Bernard A-M., Colard O., Chauvin J-P., Lasserre R., He H-T. TCR signal initiation machinery is pre-assembled and activated in a subset of membrane rafts. EMBO J. 2002, 21, 1899-1908. 133. Sanghera N., Pinheiro T.J. Binding of prion protein to lipid membranes and implications for prion conversion. J Mol Biol. 2002, 315, 1241-1256. 134. Kakio A., Nishimoto S., Yanagisawa K., Kozutsumi Y., Matsuzaki K. Interactions of amyloid beta-protein with various gangliosides in raftlike membranes: importance of GM1 ganglioside-bound form as an endogenous seed for Alzheimer amyloid. Biochemistry. 2002, 41, 7385-7390. 77 135. Wu C., Butz S., Ying Y., Anderson R.G.W. Tyrosine kinase receptors concentrated in caveolae-like domains from neuronal plasma membrane. J Biol Chem.1997, 272, 3554-3559. 136. Hope H.R., Pike L.J. Phosphoinositides and phosphoinositideutilizing enzymes in detergent-insoluble lipid domains. Mol Biol Cell. 1996, 7, 843-851. 137. Helms J.B., Zurzolo C. Lipids as targeting signals: lipid rafts and intracellular trafficking. Traffic. 2004, 5, 247-254. 138. Muppidi J.R., Tschopp J., Siegel R.M. Life and death decisions: secondary complexes and lipid rafts in TNF receptor family signal transduction. Immunity. 2004, 21, 461-465. 139. Langlet C., Bernard A. M., Drevot P., He H. T. Membrane rafts and signaling by the multichain immune recognition receptors. Curr Opin Immunol. 2000, 12, 250-255. 140. Leo A., Schraven B. Adapters in lymphocyte signalling. Curr Opin Immunol. 2001, 13, 307-316. 141. Inagaki N., Ito M., Nakano T., Inagaki M. Spatio-temporal distribution of protein kinase and phosphatase activities. Trends Biochem Sci. 1994, 19, 448-452. 142. Lin J., Weiss A., Finco T.S. Localization of LAT in glycolipidenriched microdomains is required for T cell activation. J Biol Chem. 1999, 274, 28861-28864. 143. Chun M., Liyanage U.K., Lisanti M.P., Lodish H.F. Signal transduction of a G protein-coupled receptor in caveolae: colocalization of endothelin and its receptor with caveolin. Proc Natl Acad Sci USA. 1994, 91, 11728-11732. 144. Moffett S., Brown D.A., Linder M.E. Lipid-dependent targeting of G proteins into rafts. J Biol Chem. 2000, 275, 2191-2198. 145. Yamabhai M., Anderson R.G.W. Second cysteine-rich region of EGFR contains targeting information for caveolae/rafts. J Biol Chem. 2002, 277, 24843-24846. 146. Waugh M.G., Lawson D., Hsuan J.J. Epidermal growth factor receptor activation is localized within low buoyant density, non-caveolar membrane domains. Biochem J. 1999, 337, 591-597. 147. Pike L. J., Casey L. Cholesterol levels modulate EGF receptormediated signaling by altering receptor function and trafficking. Biochemistry. 2002, 41, 10315-10322. 148. Chatterjee S., Smith E.R., Hanada K., Stevens V.L., Mayor S. GPI anchoring leads to sphingolipid-dependent retention of endocytosed proteins in the recycling endosomal compartment. EMBO J. 2001, 20, 1583-1592. 149. Lipardi C., Nitsch L., Zurzolo C. Detergent-insoluble GPIanchored proteins are apically sorted in Fischer rat thyroid cells, but 78 interference with cholesterol or sphingolipids differentially affects detergent insolubility and apical sorting. Mol Biol Cell. 2000, 11, 531542. 150. Millan J., Alonso M.A. MAL, a novel integral membrane protein of human T lymphocytes, associates with glycosylphosphatidylinositol anchored proteins and Src-like tyrosine kinases. Eur J Immunol. 1998, 28, 3675-3684. 151. Gustavsson J., Parpal S., Karlsson M., Ramsing C., Thorn H., Borg M., Lindroth M., Holmgren P.K., Magnusson K.-E., Stralfors P. Localization of the insulin receptor in caveolae of adipocyte plasma membrane. FASEB J. 1999, 13, 1961-1971. 152. Davy A., Feuerstein C., Robbins S.M. Signaling within a caveolae-like membrane microdomain in human neuroblas-toma cells in response to fibroblast growth factor. J Neurochem. 2000, 74, 676-683. 153. Prieschl E.E., Baumruker T. Sphingolipids: second messengers, mediators and raft constituents in signaling. Immunol Today. 2000, 21, 555-560. 154. Alonso M. A., Millan J. The role of lipid rafts in signalling and membrane trafficking in T lymphocytes. J Cell Sci. 2001, 114, 3957-3965. 155. Janes P.W., Ley S.C., Magee A.I., Kabouridis P.S. The role of lipid rafts in T cell antigen receptor (TCR) signaling. Semin. Immunol. 2000, 12, 23-34. 156. Schmidt C.E., Horwitz A.F., Lauffenburger D.A., Sheetz M.P. Integrin-cytoskeletal interactions in migrating fibroblasts are dynamic, asymmetric, and regulated. J Cell Biol. 1993, 123, 977-991. 157. Adams J.C. Molecular organisation of cellmatrix contacts: essential multiprotein assemblies in cell and tissue function. Expert Rev Mol Med, 2002, Feb., 1-24. 158. Brown D.A., London E. Functions of lipid rafts in biological membranes. Annu Rev Cell Dev Biol. 1998, 14, 111-136. 159. Maines S., Mira E., Ga³mez-Mout³n C., Lacalle R.A., Keller P., Labrador J.P., Martinez A.C. Membrane raft microdomains mediate front-rear polarity in migrating cells. EMBO J. 1999, 18, 6211-6220. 160. Wolf A.A., Fujinaga Y., Lencer W.I. Uncoupling of the cholera toxin-G(M1) ganglioside receptor complex from endocytosis, retrograde Golgi trafficking, and downstream signal transduction by depletion of membrane cholesterol. J Biol Chem. 2002, 277, 16249-16256. 161. Kovbasnjuk O., Edidin M., Donowitz M. Role of lipid rafts in Shiga toxin 1 interaction with the apical surface of Caco-2 cells. J Cell Sci. 2002, 114, 4025-4031. 162. Keller P., Simons K. Cholesterol is required for surface transport of influenza virus hemagglutinin. J Cell Biol. 1998, 140, 1357-1367. 163. Bomsel M., Alfsen A. Entry of viruses through the epithelial bar79 rier: pathogenic trickery. Nat Rev Mol Cell Biol. 2003, 4, 57-68. 164. Simons K., Ehehalt R. Cholesterol, lipid rafts, and disease. J Clin Invest. 2002, 110, 597-603. 165. Montecucco C. How do tetanus and botulinum toxins bind to neuronal membranes? Trends Biochem Sci. 1986, 11, 314-317. 166. Nishiki T., Tokuyama Y., Kamata Y., Nemoto Y., Yoshida A., Sato K., Sekiguchi M., Takahashi M., Kozaki S The high-affinity binding of Clostridium botulinum type B neurotoxin to synaptotagmin II associated with gangliosides GT1b/GD1a. FEBS Lett. 1996, 378, 253-257. 167. Fantini J., Hammache D., Pieroni G., Yahi N. Role of glycosphingolipid microdomains in CD4-dependent HIV-1 fusion. Glycoconj J. 2000, 17, 199-204. 168. Lingwood C.A. Glycolipid receptors for verotoxin and Helicobacter pylori: role in pathology. Biochim Biophys Acta. 1999, 1455, 375-386. 169. Falguieres T., Mallard F., Baron C., Hanau D., Lingwood C., Goud B. Salamero J., Johannes L. Targeting of Shiga toxin B-subunit to retrograde transport route in association with detergent-resistant membranes. Mol Biol Cell. 2001, 12, 2453-2468. 170. Bagnat M., Keranen S., Shevchenko A., Simons K. Lipid rafts function in biosynthetic delivery of proteins to the cell surface in yeast. Proc Natl Acad Sci USA. 2000, 97, 3254-3259. 171. Hammache D., Yahi N., Maresca M., Pieroni G., Fantini J. Human erythrocyte glycosphingolipids as alternative cofactors for human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) entry: evidence for CD4-induced interactions between HIV-1 gp120 and reconstituted membrane microdomains of glycosphingolipids (Gb3 and GM3). J Virol. 1999, 73, 5244-5248. 172. Puri A., Hug P., Jernigan K., Barchi J., Kim H.Y., Hamilton J., Wiels J., Murray G.J., Brady R.O., Blumenthal R. The neutral glycosphingolipid globotriaosylceramide promotes fusion mediated by a CD4dependent CXCR4-utilizing HIV type 1 envelope glycoprotein. Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 14435-14440. 173. Hug P., Lin H.M., Korte T., Xiao X., Dimitrov D.S., Wang J.M., Puri A., Blumenthal R. Glycosphingolipids promote entry of a broad range of human immunodeficiency virus type 1 isolates into cell lines expressing CD4, CXCR4, and/or CCR5. J Virol. 2000, 74, 6377-6385. 174. Kozak S.L., Heard J.M., Kabat D. Segregation of CD4 and CXCR4 into distinct lipid microdomains in T lymphocytes suggests a mechanism for membrane destabilization by human immunodeficiency virus. J Virol. 2002, 76, 1802-1815. 175. Manes S., del Real G., Lacalle R.A., Lucas P., Gomez-Mouton C., Sanchez-Palomino S., Delgado R., Alcami J., Mira E., Martinez A.C. 80 Membrane raft microdomains mediate lateral assemblies required for HIV-1 infection. EMBO Repors. 2000, 1, 190-196. 176. Liao Z., Cimakasky L.M., Hampton R., Nguyen D.H., Hildreth J.E. Lipid rafts and HIV pathogenesis: host membrane cholesterol is required for infection by HIV type 1. AIDS Res Hum Retroviruses. 2001, 17, 1009-1019. 177. Popik W., Alce T.M., Au W.C. Human immunodeficiency virus type 1 uses lipid raft-colocalized CD4 and chemokine receptors for productive entry into CD4(+) T cells. J Virol. 2002, 76, 4709-4722. 178. Meng G., Wei X., Wu X., Sellers M.T., Decker J.M., Moldoveanu Z., Orenstein J.M., Graham M.F., Kappes J.C., Mestecky J., Shaw G.M., Smith P.D. Primary intestinal epithelial cells selectively transfer R5 HIV-1 to CCR5+ cells. Nat Med. 2002, 8, 150-156. 179. Fantini J., Maresca M., Hammache D., Yahi N., Delezay O. Glycosphingolipid (GSL)microdomains as attachment platforms for host pathogens and their toxins on intestinal epithelial cells: activation of signal transduction pathways and perturbations of intestinal absorption and secretion. Glycoconj J. 2000, 17, 173-179. 180. Clayton F., Kotler D.P., Kuwada S.K., Morgan T., Stepan C., Kuang J., Le J., Fantini J. Gp120-induced Bob/GPR15 activation: a possible cause of human immunodeficiency virus enteropathy. Am J Pathol. 2001, 159, 1933-1939. 181. Fantini, J., Hammache D., Delezay O., Yahi N., Andre-Barres Ñ., Rico-Lattes I., Lattes A. 1997 Synthetic soluble analogs of galactosylceramide (GalCer) bind to the V3 domain of HIV-1 gp120 and inhibit HIV-1-induced fusion and entry. J Biol Chem. 2001, 272, 7245-7252. 182. Fantini J. Synthetic soluble analogs of glycolipids for studies of virus-glycolipid interactions. Methods Enzymol. 2000, 311, 626-638. 183. Mulvey G., Kitov P.I., Marcato P., Bundle D.R., Armstrong G.D. Glycan mimicry as a basis for novel anti-infective drugs. Biochimie. 2001, 83, 841-847. 184. Mylvaganam M., Lingwood C.A. Adamantyl globotriaosyl ceramide: a monovalent soluble mimic which inhibits verotoxin binding to its glycolipid receptor. Biochem Biophys Res Commun. 1999, 257, 391-394. 185. Soto C. Plaque busters: strategies to inhibit amyloid formation in Alzheimer's disease. Mol Med Today. 1999, 5, 343-350. 186. Soto C., Kascsak R.J., Saborio G.P., Aucouturier P., Wisniewski T., Prelli F., Kascsak R., Mendez E., Harris DA., Ironside J., Tagliavini F., Carp R.I., Frangione B. Reversion of prion protein conformational changes by synthetic beta-sheet breaker peptides. Lancet. 2000, 355, 192-197. 187. Golde T.E., Eckman C.B. Cholesterol modulation as an emerging 81 strategy for the treatment of Alzheimer's disease. Drug Discov Today. 2001, 6, 1049-1055. 188. Scanu A. Phospholipids in serum lipoproteins. In: Phospholipids and atherosclerosis (Avogaro H., Catapano A. eds). Raven Press, N.Y. 1983, 91-97. 189. Pownall H.J., Gotto A.M. Structure and function of plasma lipoproteins. In: Phospholipids and atherosclerosis (Avogaro H., Catapano A. eds). Raven Press, N.Y. 1983, 99-114. 190. Êëèìîâ À.Í. Àòåðîñêëåðîç.  êí. Ïðåâåíòèâíàÿ êàðäèîëîãèÿ (ðåä. Ã.È. Êîñèöêèé). Ìåäèöèíà, Ì. 1987, 239-315. 191. Êëèìîâ À.Í., Íèêóëü÷åâà Í.Ã. Îáìåí ëèïèäîâ è ëèïîïðîòåèäîâ è åãî íàðóøåíèÿ. Ïèòåð, Ñ.-Ï. 1999, 137-239. 192. Griffin J.H., Fernandez J.A., Deguchi H. Plasma lipoproteins, hemostasis and thrombosis. Thromb Haemost. 2001, 86, 386-94. 193. Carpentier Y.A., Scruel O. Changes in the concentration and composition of plasma lipoproteins during the acute phase response. Curr Opin Clin Nutr Metab Care. 2002, 5, 153-158. 194. Rye K.-A., Duong My Ngan. Influence of phospholipid depletion on the size, structure, and remodeling of reconstituted high density lipoproteins. J Lipid Res. 2000, 41, 1640-1650. 195. Zhang W., Asztalos B., Roheim P., Wong L. Characterization of phospholipids in pre- HDL: selective phospholipid efflux with apo A1. J Lipid Res. 1998, 39, 1601-1607. 196. Deguchi H., Fernandez J., Hackeng T., Banka C., Griffin J. Cardiolipin is a normal component of human plasma lipoproteins. Proc Natl Acad Sci USA. 2000, 97, 1743-1748. 197. Subbaiah P.V. In: Book of lipoprotein testing. (Rifai N., Warnik G. eds). AACC, Washington, DC. 1997, 415-429. 198. Sommer À., Prernner E., Gorges R., Stutz H., Grillhofer H., Kostner G.M., Paltauf F., Hermetter A. Organization of phosphatidylcholine and sphingomyelin in surface monolayer of LDL and lipoprotein(a) as determined by time-resolved fluorometry. J Biol Chem. 1992, 267, 24217-24222. 199. Îçåðîâà È.Í., Ïàðàìîíîâà È.Â., Îëôåðüåâ À.Ì., Àõìåäæàíîâ Í.Ì., Àëåêñàíäðîâà Ì.À., Ïåðîâà Í.Â. Âëèÿíèå ñèìâàñòàòèíà íà ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâ âûñîêîé ïëîòíîñòè ó ïàöèåíòîâ ñ ãèïåðõîëåñòåðèíåìèåé. Áþëë Ýêñï Áèîë Ìåä. 2001, 132, 178-180. 200. Vance J.E., Vance D.E. Specific pools of phospholipids are used for lipoprotein secretion by cultured hepatocytes. J Biol Chem. 1986, 261, 4486-4491. 201. Tall A. Plasma lipid transfer proteins. Annu Rev Biochem. 1995, 64, 235-257. 82 202. Rao R., Albers J.J., Wolfbauer G., Pownall H.J. Molecular and macromolecular specifity of human plasma phospholipid transfer protein. Biochemistry. 1997, 36, 3645-3653. 203. Oka T., Kujiraoka T., Ito M., Egashira T., Takahashi S., Nanjee M.N., Miller N.E., Metso J., Olkonnen V.M., Ehnholm C., Jauhiainen M., Hattori H. Distribution of phospholipid transfer protein in human plasma. J Lipid Res. 2000, 41, 1651-1657. 204. Pownal H., Massey J., Sparrow J., Gotto A. Lipid-protein interactions and lipoprotein reassembly. In: Plasma lipoproteins (Gotto A.M. ed). Elsevie, N.-Y. 1987, 95-127. 205. Wang M., Briggs M.R. HDL: the metabolism, function, and therapeutic importance. Chem Rev. 2004, 104, 119-137. 206. Barter P., Kastelein J., Nunn A., Hobbs R. Future Forum Editorial Board. High density lipoproteins (HDLs) and atherosclerosis: the unanswered questions. Atherosclerosis. 2003, 168, 195-211. 207. Glomset J. The plasma lecithin: cholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res.1968, 9, 155-167. 208. Frikke-Schmidt R., Nordestgaard B.G., Jensen G.B., TybjaergHansen A. Genetic variation in ABC transporter A1 contributes to HDL cholesterol in the general population. J Clin Invest. 2004, 114, 13431353. 209. Wang N., Silver D., Thiele C., Tall A., ATP-binding cassete transporter A1 (ABCA1) functions as a cholesterol efflux regulatory protein. J Biol Chem. 2001, 276, 23742-23747. 210. Áåðãåëüñîí Ë.Ä., Ìîëîòêîâñêèé Þ.Ã., Ãåðàñèìîâà Å.Í. Õèìè÷åñêèå ïîäõîäû ê èçó÷åíèþ òîïîãðàôèè ôîñôîëèïèäîâ â ËÂÏ. ËÂÏ è àòåðîñêëåðîç. Ìàòåðèàëû ñèìïîçèóìà. Ìåäèöèíà, Ì. 1983, 67-79. 211. Segrest J.P., Li L., Anantharamaiah G.M., Harvey S.C., Liadaki K.N., Zannis V. Structure and function of apolipoprotein A-I and highdensity lipoprotein. Curr Opin Lipidol. 2000, 11, 105-115. 212. Lund-Katz S., Liu L., Thuahnai S.T., Phillips M.C. High density lipoprotein structure. Front Biosci. 2003, 8, 1044-1054. 213. Cushley R.J., Okon M. NMR studies of lipoprotein structure. Annu Rev Biophys Biomol Struct. 2002, 31, 177-206. 214. Hevonoja T., Pentikainen M.O., Hyvonen M.T., Kovanen P.T., Ala-Korpela M. Structure of low density lipoprotein (LDL) particles: basis for understanding molecular changes in modified LDL. Biochim Biophys Acta. 2000, 1488, 189-210. 215. Cell Structure and Function: Lipid Membranes. http://scidiv.bcc.ctc.edu/rkr/Biology101/lectures/pdfs. 83 ÃËÀÂÀ 3. ÔÓÍÊÖÈÎÍÀËÜÍÀß ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÊËÅÒÊÅ Âûøå áûëè ðàññìîòðåíû ñòðóêòóðîîáðàçóþùèå ñâîéñòâà ÔË, êàê "ñòðîèòåëüíûõ" ýëåìåíòîâ, ôîðìèðóþùèõ âñå áåç èñêëþ÷åíèÿ áèîìåìáðàíû. Äîëãîå âðåìÿ ýòà ôóíêöèÿ ñ÷èòàëàñü åäèíñòâåííîé, òàê êàê àìôèôèëüíîñòü ôîñôîëèïèäîâ è îáóñëîâëåííàÿ åþ ñïîñîáíîñòü ñòðóêòóðèðîâàòüñÿ â âîäíîé ñðåäå ñ îáðàçîâàíèåì ñëîèñòûõ àãðåãàòîâ íå áåç îñíîâàíèÿ ïîçâîëÿëà ñ÷èòàòü ÔË êàê áû ñïåöèàëüíî ïðåäíàçíà÷åííûìè ïðèðîäîé äëÿ åñòåñòâåííîãî êîíñòðóèðîâàíèÿ áèîìåìáðàí êëåòêè è åå êîìïàðòìåíòîâ. Òàêîé, êàê òåïåðü âèäíî, íåïîëíûé âçãëÿä íà ðîëü ÔË íå ïðîòèâîðå÷èë âñåì ïîñëåäîâàòåëüíî ðàçâèâàâøèìñÿ ìîäåëÿì ñòðóêòóðû ìåìáðàí, âêëþ÷àÿ ìîçàè÷íóþ ìîäåëü Ñèíãåðà (ñì. ãëàâó 2) [1].  òî æå âðåìÿ, â òå÷åíèå ìíîãèõ ëåò îñòàåòñÿ íåÿñíûì âîïðîñ î ïðè÷èíå ñòîëü øèðîêîãî ðàçíîîáðàçèÿ âèäîâ ìåìáðàííûõ ÔË - âåäü òîëüêî äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ áèñëîÿ äîñòàòî÷íî, êàçàëîñü áû, îäíîãî, íàïðèìåð, ÔÕ, â ñî÷åòàíèè ñ õîëåñòåðèíîì, äàþùåãî in vitro áèñëîéíûå ëèïèäíûå ìåìáðàíû, ïîñòðîåííûå òàê æå, êàê è ìåìáðàíû êëåòîê. Òàê çà÷åì æå ïðèðîäå ïîíàäîáèëîñü òàêîå ðàçíîîáðàçèå, òðåáóþùåå ðàáîòû ìíîæåñòâà ôåðìåíòíûõ ñèñòåì è ýíåðãåòè÷åñêè çàòðàòíûõ áèîñèíòåòè÷åñêèõ ðåàêöèé? Ïåðâûå îòâåòû íà ýòè âîïðîñû ïîÿâèëèñü îäíîâðåìåííî ñ èññëåäîâàíèÿìè ñòðóêòóðû ìåìáðàí ôèçèêî-õèìè÷åñêèìè ìåòîäàìè, êîòîðûå ïîçâîëèëè ââåñòè ïîíÿòèå ìåìáðàííîé æèäêîñòíîñòè (ñì. ãëàâó 2).  ìíîãî÷èñëåííûõ ðàáîòàõ, â îñíîâíîì êîíöà 70-õ - íà÷àëà 80-õ ãîäîâ ïðîøëîãî âåêà, ïîêàçàíî ðàçëè÷íîå âëèÿíèå ÔÕ è ÑÌ íà æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí è àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ áåëêîâ.  òî æå âðåìÿ ðîëü àìèíî-ÔË, ëèçîÔË è àíèîííûõ ÔË äîëãî îñòàâàëàñü íåÿñíîé. Îäíàêî èññëåäîâàíèÿ ñâîéñòâ îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË è îñîáåííîñòåé èõ âçàèìîäåéñòâèé ñ áåëêàìè - êàê âñòðîåííûìè â ìåìáðàíó, òàê è îáðàòèìî ñâÿçûâàþùèìèñÿ ñ îáåèìè åå ñòîðîíàìè - ïðèâåëè ê ñóùåñòâåííîìó ðàñøèðåíèþ ïîíèìàíèÿ ðîëè êîíêðåòíûõ ÔË â ôóíêöèîíèðîâàíèè ìåìáðàíû è êëåòêè â öåëîì. Ïîñòåïåííî ñêëàäûâàëîñü è ïîäòâåðæäàëîñü ïðåäñòàâëåíèå î òîì, ÷òî ÔË áèîìåìáðàíû ÿâëÿþòñÿ íå òîëüêî åå "ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè", íî òàêæå è àêòèâíûìè ó÷àñòíèêàìè ìíîãèõ âàæíåéøèõ äëÿ æèçíåîáåñïå÷åíèÿ êëåòêè ïðîöåññîâ. 3.1. Ôîñôàòèäèëõîëèí (ÔÕ) ÔÕ - îñíîâíîé, íàèáîëåå óíèâåðñàëüíûé ôîñôîëèïèä, ìàêñèìàëüíî ïðåäñòàâëåííûé â ìåìáðàíàõ ðàçëè÷íûõ êëåòîê è òêàíåé (35-50% îò âñåõ ÔË), à òàêæå â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè (7084 75%). [2]. Ýòî èìåííî òîò ÔË, äëÿ êîòîðîãî ïåðâîñòåïåííîé ÿâëÿåòñÿ ñòðóêòóðîîáðàçóþùàÿ ôóíêöèÿ. Íî íàðÿäó ñ ýòèì îí âûïîëíÿåò òàêæå ðÿä äðóãèõ ôóíêöèé, â ÷àñòíîñòè - ñëóæèò ìåòàáîëè÷åñêèì ïðåäøåñòâåííèêîì äëÿ äâóõ äðóãèõ âàæíåéøèõ âèäîâ ÔË - ÔÝ è ÑÌ, à òàêæå èñòî÷íèêîì öåëîãî ðÿäà ëèïèäíûõ ìåññåíäæåðîâ è áèîàêòèâíûõ ñîåäèíåíèé: ëèçîÔÕ, äðóãèõ ëèçîÔË, äèãëèöåðèäîâ, ôàêòîðà àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ è àðàõèäîíîâîé êèñëîòû [3 - 5]. Èíãèáèðîâàíèå ÖÄÔ-õîëèí-çàâèñèìîãî ïóòè ñèíòåçà ÔÕ èëè, íàîáîðîò, ñâåðõýêñïðåññèÿ ìåòèëèðîâàíèÿ ÔÝ â ÔÕ â ïå÷åíè â áîëüøèíñòâå æèâîòíûõ êëåòîê ìîæåò ïðèâåñòè ê íàðóøåíèþ ëèïèäíîãî ãîìåîñòàçà, çàäåðæêå ðîñòà èëè äàæå ãèáåëè êëåòîê [6 - 8]. Èçó÷åíèå êëåòêè â ïðîöåññå äåëåíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âíóòðèêëåòî÷íûé ñèíòåç ÔÕ ñòðîãî êîíòðîëèðóåòñÿ. Âàæíîñòü ðåãóëÿöèè ýòîãî ïðîöåññà äëÿ êëåòî÷íîé ôèçèîëîãèè î÷åâèäíà, òàê êàê äàæå íåáîëüøîå íåñîâïàäåíèå íàêîïëåíèÿ ÔÕ ñ êëåòî÷íûì öèêëîì ïðèâåëî áû ê ïðîäóöèðîâàíèþ àíîìàëüíûõ êëåòîê, ñ èçáûòêîì èëè ñ äåôèöèòîì ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè è/èëè âíóòðèêëåòî÷íîìó íàêîïëåíèþ ëèïèäîâ. Âàæíàÿ è íåçàìåíèìàÿ ðîëü ÔÕ, êàê îñíîâíîãî ìåìáðàííîãî ÔË, â ôóíêöèîíèðîâàíèè, ðîñòå è ðàçâèòèè êëåòîê ïðîÿâëÿåòñÿ âî âñåõ òêàíÿõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà, ÷òî îáóñëîâëåíî áèîëîãè÷åñêîé çíà÷èìîñòüþ ìåìáðàí â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è îðãàíèçìà â öåëîì [9 - 11]. Ýòî îñîáåííî âàæíî äëÿ îòíîñèòåëüíî áûñòðî îáíîâëÿþùèõñÿ êëåòîê êðîâè, à òàêæå äëÿ êëåòîê ïå÷åíè âñëåäñòâèå èõ âûñîêîé ìåòàáîëè÷åñêîé, â òîì ÷èñëå áèîñèíòåòè÷åñêîé àêòèâíîñòè, êîãäà ÷àñòü ìåìáðàííîãî ìàòåðèàëà ÝÐ ïîñòîÿííî ðàñõîäóåòñÿ íà ñåêðåöèþ â êðîâü ëèïîïðîòåèíîâ. ÔÕ â ýòîì ïðîöåññå, âñëåäñòâèå ñâîåé àìôèôèëüíîñòè è ïîâåðõíîñòíîàêòèâíûõ ñâîéñòâ, èãðàåò ðîëü ñâÿçóþùåãî çâåíà ìåæäó àïîïðîòåèíîì è ïîñòóïèâøèìè (èëè ñèíòåçèðîâàííûìè â êëåòêå) íåéòðàëüíûìè ëèïèäàìè. Òàêèì îáðàçîì, ÔÕ ó÷àñòâóåò òàêæå è â ïîñòðîåíèè ëèïîïðîòåèíîâûõ ÷àñòèö (ñì. ãëàâó 2 ðàçäåë 2.6). Ïîäîáíûé ïðîöåññ ïðîèñõîäèò è â ýïèòåëèàëüíûõ êëåòêàõ êèøå÷íèêà, ãäå ÔÕ âìåñòå ñ àïîïðîòåèíîì "îáâîëàêèâàåò" æèðîâûå êàïëè, îáåñïå÷èâàÿ îáðàçîâàíèå ïîñòóïàþùèõ â êðîâü õèëîìèêðîíîâ. Áëàãîäàðÿ ñâîèì ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûì ñâîéñòâàì, ÔÕ âìåñòå ñ íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì äðóãèõ ÔË è æåë÷íûõ êèñëîò â ïå÷åíè ó÷àñòâóåò â îáðàçîâàíèè æåë÷è, îáåñïå÷èâàÿ òåì ñàìûì ïðîöåññû ýêñêðåöèè, â òîì ÷èñëå âûâåäåíèå õîëåñòåðèíà è åãî ìåòàáîëèòîâ. Îòìå÷åíà êëþ÷åâàÿ ðîëü â ýòîì ïðîöåññå ÔÕ êàíàëèêóëÿðíûõ ìåìáðàí ïå÷åíè [12]. Ïîêàçàíî, ÷òî ÔÕ ñîñòàâëÿåò 95% 85 ôîñôîëèïèäîâ æåë÷è [13]. Êðîìå ýòîãî, â êëåòêàõ ïå÷åíè ÔÕ ó÷àñòâóåò â ôóíêöèîíèðîâàíèè öèòîõðîìà Ð450, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, òåñíî âçàèìîäåéñòâóÿ ñ íèì ïî òèïó "íåàííóëëëÿðíûõ" ëèïèäîâ.  êëåòêàõ ìîçãà ÔÕ ñëóæèò èñòî÷íèêîì õîëèíà, íåîáõîäèìîãî äëÿ ïîääåðæàíèÿ èõ íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ [14].  ëåãêèõ ÔÕ (ñ äâóìÿ æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè Ñ16:0) âûïîëíÿåò ôóíêöèþ ñóðôàêòàíòà, ïîêðûâàÿ ïîâåðõíîñòü àëüâåîë è ïðåïÿòñòâóÿ èõ ñëèïàíèþ â ìîìåíò âûäîõà [15]. 3.2. Ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí (ÔÝ) Àìèíîôîñôîëèïèäû, â ÷àñòíîñòè, ÔÝ, ïðèíèìàþò ó÷àñòèå â ðåãóëÿöèè ðÿäà ïðîöåññîâ, òàêèõ êàê ñâåðòûâàíèå êðîâè [16], êëåòî÷íàÿ àäãåçèÿ [17 - 20] è ýíäîöèòîç [21, 22]. Ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, íà îñóùåñòâëåíèå ýòèõ ôóíêöèé îêàçûâàåò âëèÿíèå ïðîñòðàíñòâåííàÿ "êîíóñîîáðàçíàÿ" ôîðìà ìîëåêóë ÔÝ, â êîòîðîé àöèëüíûå öåïè øèðå, ÷åì ïîëÿðíàÿ "ãîëîâêà". Ïîýòîìó îíè èìåþò òåíäåíöèþ îáðàçîâûâàòü íåáèñëîéíûå ñòðóêòóðû, òàêèå êàê îáðàùåííàÿ ãåêñàãîíàëüíàÿ ôàçà èëè êóáè÷åñêàÿ ôàçà, êîòîðûå âîâëå÷åíû â ïðîöåññû ñëèÿíèÿ ìåìáðàí èëè ôîðìèðîâàíèå ýíäîöèòîçíûõ âåçèêóë. Ðàñïîëàãàÿñü æå â ìåìáðàíå, ñôîðìèðîâàííîé â îñíîâíîì èç ÔÕ, îíè "âûíóæäåíû" ïðèíèìàòü ïëîñêîñòíóþ ñòðóêòóðó, ÷òî ñîçäàåò íàïðÿæåíèå â ãèäðîôîáíîé îáëàñòè áèñëîÿ. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî òàêèå ñâîéñòâà ìåìáðàíû ìîãóò ðåãóëèðîâàòü ôîëäèíã áåëêà, êîíòðîëèðóÿ ñòåïåíü ïîãðóæåíèÿ åãî â ìåìáðàíó è òåì ñàìûì, îáåñïå÷èâàÿ êîíôîðìàöèþ, íåîáõîäèìóþ äëÿ ïðîÿâëåíèÿ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè [23]. Íàëè÷èå â ìåìáðàíå ÔÝ, ëîêàëèçîâàííîãî âî âíóòðåííåì ìîíîñëîå, è åãî îïðåäåëåííîå ñîîòíîøåíèå ñ îñíîâíûì ìåìáðàííûì ôîñôîëèïèäîì, ÔÕ, ñîçäàåò, ïî-âèäèìîìó, óñëîâèÿ, âëèÿþùèå íà ôîðìó ìåìáðàíû. 3.3. Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû. 3.3.1. Îáù ùèå ôóíêö öèè àíèîííûõ ÔË è èõ âëèÿÿíèå íàà àêòèâíîñòü âíåìåìáðààííûõ áåëêîâ. Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû, ê êîòîðûì îòíîñÿòñÿ ÔÑ, ÔÊ, ÔÃ, ÊË è ÔÈ, îáëàäàþò ðÿäîì áèîëîãè÷åñêèõ àêòèâíîñòåé, âëèÿþùèõ êàê íà âíóòðèêëåòî÷íûå ôóíêöèè, òàê è íà âçàèìîäåéñòâèå êëåòêè ñ âíåêëåòî÷íûìè áåëêàìè. Èõ ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà (1), âíóòðèìåìáðàííûå è (2) ïîâåðõíîñòíî-ìåìáðàííûå, êîòîðûå âëèÿþò íà ñâîéñòâà ïðèëåãàþùèõ ê ìåìáðàíå ñ îáåèõ ñòîðîí áåëêîâ âîäíîé ôàçû. Òàê, àíèîííûå ÔË èãðàþò ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â îïðåäåëåíèè 86 òîïîëîãèè âñòðîåííûõ â ìåìáðàíó áåëêîâ. Ñ÷èòàþò, ÷òî îðèåíòàöèÿ ìíîãèõ èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ è îáðàçîâàíèå áåëêîâûõ àññàìáëåé â ìåìáðàíå òåñíî ñâÿçàíû ñ àñèììåòðè÷íûì ðàñïðåäåëåíèåì àíèîííûõ ÔË âíóòðè ýòîé ìåìáðàíû è çàâèñÿò îò ïðîñòðàíñòâåííîãî ñîïðÿæåíèÿ ïîëîæèòåëüíî çàðÿæåííûõ ó÷àñòêîâ áåëêà (äîìåíîâ) ñ îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííûìè "ãîëîâêàìè" àíèîííûõ ÔË.  ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü àíèîííûõ ÔË ñòèìóëèðîâàòü òàê íàçûâàåìóþ "òðàíñëîêàöèþ" âîäîðàñòâîðèìûõ áåëêîâ, ñîçäàþùóþ óñëîâèÿ äëÿ èõ àêòèâàöèè. Èçâåñòíî, ÷òî ïðèñîåäèíåíèå ñïåöèôè÷åñêîãî áåëêà ê ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû ñâÿçàíî ñ êîíôîðìàöèîííûìè èçìåíåíèÿìè åãî ìîëåêóëû, èíèöèèðóþùèìè ïåðåõîä áåëêà â àêòèâíîå ñîñòîÿíèå. Íàèáîëåå èçó÷åííûå âíóòðèêëåòî÷íûå ôåðìåíòû, ðåãóëèðóåìûå ïóòåì òðàíñëîêàöèè ê ôîñôîëèïèäíîé ïîâåðõíîñòè: öèòîçîëüíàÿ ôîñôîëèïàçà À2 (cPLA2) [24, 25], ïðîòåèíêèíàçà Ñ (ÐÊ Ñ) [26, 27] è ÖÒÔ-ôîñôîõîëèí öèòèäèëòðàíñôåðàçà (ÖÒ) [28, 29]. Ñâÿçûâàíèå ôåðìåíòîâ ñ ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòüþ èíîãäà áûâàåò òðóäíî îòëè÷èòü îò êëàññè÷åñêîãî ôåðìåíò-ñóáñòðàòíîãî ñâÿçûâàíèÿ ñ ëîêàëèçîâàííûìè â ìåìáðàíå ñóáñòðàòàìè. Íàïðèìåð, ïîêàçàíî, ÷òî â ñëó÷àå ñåêðåòîðíûõ ôîñôîëèïàç À2 (sPLA2) ôåðìåíò, ñâÿçàííûé ñ àíèîííûìè ôîñôîëèïèäíûìè âåçèêóëàìè, ìîæåò ýôôåêòèâíî îòùåïëÿòü æèðíûå êèñëîòû, îñòàâàÿñü íà ôîñôîëèïèäíîé ïîâåðõíîñòè â òå÷åíèå ìíîãèõ êàòàëèòè÷åñêèõ öèêëîâ. Ñ÷èòàþò, ÷òî ñâÿçûâàíèå òàêèõ ôåðìåíòîâ ñ ïîâåðõíîñòüþ ìåìáðàíû - îäíî èç óñëîâèé, îáåñïå÷èâàþùèõ èõ êàòàëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü. Àíèîííûå ÔË îáðàçóþò íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííóþ îáëàñòü, êîòîðàÿ ìîæåò ôîðìèðîâàòü ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå ñâÿçè ñ êàòèîííûìè îáëàñòÿìè áåëêà èëè ïåïòèäà, ðàñïîëîæåííîãî âáëèçè ìåìáðàíû. Âëèÿíèå àíèîííûõ ÔË íà ïîâåðõíîñòü ìåìáðàíû ñâÿçàíî ñ èõ ñïîñîáíîñòüþ îáðàçîâûâàòü êàê ïîëÿðíûå, òàê è íåïîëÿðíûå ñâÿçè. Ïðåäïîëàãàþò [29], ÷òî íà íà÷àëüíîì ýòàïå ïðèìåìáðàííûé áåëîê çà ñ÷åò îáðàçîâàíèÿ ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ ñâÿçåé âçàèìîäåéñòâóåò ñ åå ïîâåðõíîñòüþ. Ýòî â äàëüíåéøåì ïðèâîäèò ê ïðîíèêíîâåíèþ áåëêà âãëóáü ìåìáðàíû, â êîòîðîì âàæíóþ ðîëü èãðàþò ãèäðîôîáíûå âçàèìîäåéñòâèÿ. Äëÿ èíèöèèðîâàíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêîãî îòâåòà (ò.å. äëÿ èçìåíåíèÿ àêòèâíîñòè ïðèñîåäèíèâøåãîñÿ ê ìåìáðàíå "òðàíñëîöèðîâàííîãî" áåëêà) îáû÷íî òðåáóåòñÿ îïðåäåëåííûé ïîðîãîâûé óðîâåíü ïëîòíîñòè àíèîííûõ çàðÿäîâ íà ìåìáðàíå, ñïîñîáíûé îáåñïå÷èòü íåîáõîäèìóþ ñòåïåíü ýëåêòðîñòàòè÷åñêîãî 87 âçàèìîäåéñòâèÿ. Êàê ïðàâèëî, äëÿ ýòîãî àíèîííûå ÔË äîëæíû ñîñòàâëÿòü 10-20% îò îáùèõ ÔË ìåìáðàíû.  ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíî, ÷òî êðèâàÿ çàâèñèìîñòè àêòèâàöèè ïðèìåìáðàííîãî áåëêà îò êîíöåíòðàöèè àíèîííûõ ÔË èìååò ñèãìîîáðàçíûé õàðàêòåð, ò.å., äîéäÿ äî êàêîãî-òî ìàêñèìóìà, ñîîòâåòñòâóþùåãî îïòèìàëüíîé, àêòèâíîñòü áåëêà ñíîâà ñíèæàåòñÿ. Ïðè ýòîì ñïåöèôè÷íîñòü â îòíîøåíèè ïîëÿðíûõ ãðóïï àíèîííûõ ÔË íåâåëèêà, è ýôôåêòû ÔÑ, Ôà è ÔÈ áëèçêè äðóã äðóãó. Èç àíèîííûõ ÔË íàèâûñøóþ àêòèâíîñòü â ñâÿçûâàíèè áåëêîâ ïðîÿâëÿþò ÔÊ è êàðäèîëèïèí. Ïîðîãîâûé óðîâåíü äëÿ ýòèõ ÔË îáû÷íî ìåíåå 10 ìîë%, ÷òî ñâÿçàíî ñ ïðèñóòñòâèåì â ìîëåêóëå äâóõ ôîñôàòíûõ ãðóïï. Ïîäîáíûå æå ñâîéñòâà â îòíîøåíèè íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâÿçûâàíèÿ ïðîÿâëÿþò ïîëèàíèîííûå ôîñôîèíîçèòèäû - äè- è òðèôîñôàòû ÔÈ. Ñâÿçûâàíèå áåëêà ñ ïîâåðõíîñòüþ ìåìáðàíû çàâèñèò îò ïëîòíîñòè ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà ìåìáðàíû, îáåñïå÷èâàþùåé ìíîæåñòâåííûå ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ ìåæäó ôîñôîëèïèäíîé ïîâåðõíîñòüþ è ðàçëè÷íûìè ó÷àñòêàìè ìîëåêóëû áåëêà. Ïîìèìî ìåæôàçîâûõ ïîâåðõíîñòíûõ ýôôåêòîâ, àíèîííûå ÔË ìîãóò ñïîñîáñòâîâàòü âñòðàèâàíèþ ãèäðîôîáíûõ ïåïòèäîâ è áåëêîâ â áèîëîãè÷åñêóþ ìåìáðàíó [30, 31].  ìîäåëüíûõ èññëåäîâàíèÿõ ïîêàçàíî, ÷òî åñëè ãèäðîôîáíîñòü ïåïòèäà íèæå ïîðîãîâîãî óðîâíÿ, ïðè êîòîðîì îí ìîæåò ñïîíòàííî âõîäèòü â ìåìáðàíó, òî åãî âçàèìîäåéñòâèþ ñ ìåìáðàíîé ñïîñîáñòâóþò ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå ñèëû, îáåñïå÷èâàåìûå àíèîííûìè ÔË [32]. Îòìå÷àþò îñîáóþ ðîëü îñòàòêîâ àðîìàòè÷åñêèõ àìèíîêèñëîò, â ÷àñòíîñòè, òðèïòîôàíà â îáåñïå÷åíèè ïîâåðõíîñòíîãî ñâÿçûâàíèÿ áåëêîâ è ïåïòèäîâ ñ ìåìáðàíîé [33 - 35]. Íà îñíîâàíèè êèíåòè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé áûëà îïðåäåëåíà âîçìîæíàÿ ðîëü àíèîííûõ ÔË, â ÷àñòíîñòè ÔÈ, â ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ðÿäà ôåðìåíòîâ, îáëàäàþùèõ áîëüøèì ñðîäñòâîì ê àíèîííûì ïîâåðõíîñòÿì è ïîãðàíè÷íîå ñâÿçûâàíèå ÿâëÿåòñÿ äëÿ íèõ îäíèì èç ýòàïîâ ôåðìåíòàòèâíîãî ïðîöåññà. Ê òàêèì íàèáîëåå èçó÷åííûì ôåðìåíòàì îòíîñÿòñÿ íèçêîìîëåêóëÿðíûå sPLA2 [24, 36 - 40] è ÖÒÔ-ôîñôîõîëèí-öèòèäèëòðàíñôåðàçû [41]. Ñâÿçûâàíèå ñ àíèîííûìè ÔË ìåìáðàíû ïîêàçàíî òàêæå äëÿ äâóõ äîìåíîâ óíèâåðñàëüíîãî ñèãíàëüíîãî ôåðìåíòà ÐÊ Ñ, íî, â îòëè÷èå îò PLA2, îíî ñïåöèôè÷íî è îñóùåñòâëÿåòñÿ òîëüêî ñ ôîñôàòèäèëñåðèíîì. 3.3.2. Ñïåö öèôè÷åñêèå ôóíêö öèè èíäèâèäóààëüíûõ àíèîííûõ ôîñôîëèïèäîâ. Ôîñôààòèäèëñåðèí - àíèîííûé ÔË, ñîñòàâëÿþùèé äî 10% îò êîëè÷åñòâà ÔË â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è ìåìáðàíàõ ÝÐ. 88 Ïîýòîìó ñðåäè àíèîííûõ ÔË îí âíîñèò íàèáîëüøèé âêëàä â ìåæôàçíûå ýôôåêòû, âêëþ÷àÿ ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ ïðè ïîâåðõíîñòíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ, â ðåãóëÿöèþ èõ àêòèâíîñòè è äðóãèå ñïåöèôè÷åñêèå ïðîöåññû. Ïðè ýòîì îí ìîæåò îêàçûâàòü äâà âèäà ýôôåêòîâ: (1) íà âíóòðèêëåòî÷íûå ðåàêöèè çà ñ÷åò ñâîåé ëîêàëèçàöèè íà âíóòðåííåì ñëîå ìåìáðàíû â îáû÷íîì ñîñòîÿíèè êëåòêè; (2) íà âíåêëåòî÷íûå ïðîöåññû ïðè íàðóøåíèè íîðìàëüíîé ìåìáðàííîé àñèììåòðèè è ïîÿâëåíèè åãî â íàðóæíîì ñëîå, ÷òî èìååò ìåñòî ïðè íåêîòîðûõ ñïåöèôè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ êëåòêè. Èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ýôôåêòîâ ÔÑ íàèáîëåå èçó÷åíî åãî âçàèìîäåéñòâèå ñ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ. Ñâÿçûâàíèå ÐÊ Ñ ñ ìåìáðàíûì ÔÑ îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç Ñ2-äîìåíû ôåðìåíòà. Èäåíòèôèöèðîâàíû ñïåöèôè÷åñêèå êàòèîííûå àìèíîêèñëîòíûå îñòàòêè áåëêîâûõ äîìåíîâ, íåïîñðåäñòâåííî âçàèìîäåéñòâóþùèå ñ ÔÑ ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, ïðè÷åì ñâÿçûâàíèå ÿâëÿåòñÿ ñòåõèîìåòðè÷åñêèì: ïîêàçàíî ó÷àñòèå âîñüìè ìîëåêóë ÔÑ â ïðèñîåäèíåíèå ìîëåêóëû áåëêà (ÐÊ Ñ-βII) [42].  îïûòàõ in vitro ïîêàçàíî, ÷òî ñòåïåíü àêòèâàöèè ÐÊ Ñ çàâèñèò îò ìîëÿðíîãî ïðîöåíòà ÔÑ [42]. Ïðè ñðàâíåíèè èçîìåðîâ, L- è D-ÔÑ â ðåàêöèÿõ ñâÿçûâàíèÿ ôåðìåíòà àêòèâíûì îêàçàëñÿ ëèøü L-èçîìåð, ÷òî ãîâîðèò î âàæíîé ðîëè ñòðóêòóðû ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ýòîãî ôîñôîëèïèäà â ïðîöåññàõ ñâÿçûâàíèÿ. Åùå îäíà ãðóïïà áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ÔÑ ñâÿçàíà ñ åãî ïîÿâëåíèåì íà íåñâîéñòâåííîé äëÿ íîðìàëüíîé ëîêàëèçàöèè, âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Êàê èçâåñòíî, âíåøíèé ÔË ìîíîñëîé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ýëåêòðîíåéòðàëåí è ìîæåò ïðèîáðåñòè îòðèöàòåëüíûé çàðÿä òîëüêî ïðè íåêîòîðûõ îñîáûõ ñîñòîÿíèÿõ êëåòêè. Íàïðèìåð, âûõîä ÔÑ (ñî ñâîåé àíèîííîé ãðóïïîé) âî âíåøíèé ìîíîñëîé ÿâëÿåòñÿ õàðàêòåðíûì ïðîöåññîì ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ [43] èëè ïðè àïîïòîçå [44]. Ïðè ýòîì ïîâåðõíîñòü êëåòêè ìîäèôèöèðóåòñÿ, âñëåäñòâèå ÷åãî "óçíàåòñÿ" áåëêàìè ñâåðòûâàíèÿ êðîâè è ìàêðîôàãàìè [45]. Íåñêîëüêî áîëåå ïðîòèâîðå÷èâûå äàííûå ïîëó÷åíû ïðè èçó÷åíèè âûõîäà ÔÑ ê ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè â ïðîöåññàõ ñòàðåíèÿ êëåòêè. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî ïîÿâëåíèå ÔÑ íà ïîâåðõíîñòè ñòàðåþùèõ ýðèòðîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ "çíàêîì" äëÿ èõ óäàëåíèÿ ìàêðîôàãàìè [46, 47]. Îäíàêî ýòîãî íå íàáëþäàåòñÿ, íàïðèìåð, ïðè ìíîãèõ ôîðìàõ ãåìîëèòè÷åñêîé àíåìèè. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ñóùåñòâóåò çàâèñèìîñòü ìåæäó ïðîöåññàìè ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ, îêèñëåíèåì ÔÑ è åãî òðàíñëîêàöèåé, ïðè÷åì â îòëè÷èå îò äðóãèõ ÔË, îêèñëåíèå ÔÑ íå ïðåäîòâðàùàåòñÿ àíòèîêñèäàíòàìè òèïà âèòàìèíà Å [48]. 89 Ïîëàãàþò, ÷òî ñ ïàòîëîãè÷åñêèìè ïîñëåäñòâèÿìè ïîÿâëåíèÿ àíèîííûõ ÔË, â ÷àñòíîñòè, ÔÑ, íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû ñâÿçàíû èììóííûå íàðóøåíèÿ, íàçûâàåìûå "àíòèôîñôîëèïèäíûì ñèíäðîìîì". Ïðè ýòîì êëåòêè ìîãóò ýêñïðåññèðîâàòü íà ïîâåðõíîñòè ÔÑ, êîòîðûé ñâÿçûâàåòñÿ ñ β2-ãëèêîïðîòåèíîì, ÷òî ïðèâîäèò ê óäàëåíèþ òàêèõ êëåòîê ìàêðîôàãàìè ñ ïîìîùüþ ðåöåïòîðîâ, ñïåöèôè÷åñêèõ ê ÔÑ [45]. Ñóùåñòâåííûé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿåò ñâÿçûâàíèå ÔÑ ñ áåëêîì àííåêñèíîì V, îòíîñÿùèìñÿ ê ãðóïïå Ñà2+-íåçàâèñèìûõ ôîñôîëèïèä-ñâÿçûâàþùèõ áåëêîâ (àííåêñèíîâ). Àííåêñèí V ñîñóäèñòûé àíòèêîàãóëÿíò, îáëàäàþùèé âûñîêèì ñðîäñòâîì ê ÔÑ. ×åðåç âçàèìîäåéñòâèå ñ ÔÑ àííåêñèí V òðàíñëîöèðóåòñÿ ê ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè, ñ îáðàçîâàíèåì êàëüöèåâûõ "ìîñòèêîâ" [49, 50]. Ýòî ñâÿçûâàíèå âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíûé îòâåò ïóòåì èíãèáèðîâàíèÿ PLA2. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ìåõàíèçì èíãèáèðîâàíèÿ ýòîé ôîñôîëèïàçû ñâÿçàí ñî ñïîñîáíîñòüþ àííåêñèíîâ îáðàçîâûâàòü êëàñòåðû íà ïîâåðõíîñòè ìîíîñëîÿ, ïðåäîòâðàùàÿ òåì ñàìûì äîñòóï PLA2 ê ïîâåðõíîñòíûì ôîñôîëèïèäàì [51 - 53]. Ïðè àêòèâàöèè êëåòîê àííåêñèí òðàíñïîðòèðóåòñÿ ê ÿäåðíûì ìåìáðàíàì. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî âîçìîæåí è àëüòåðíàòèâíûé âàðèàíò - îáðàçîâàíèå â ÿäåðíîé ìåìáðàíå âûñîêî ñïåöèôè÷íîãî ê àííåêñèíó ôîñôîëèïèäíîãî äîìåíà. Äëÿ àïîïòîòè÷åñêèõ êëåòîê õàðàêòåðíî áûñòðîå ñâÿçûâàíèå ñ ýòèì áåëêîì, êîòîðîå ïðîèñõîäèò óæå ïðè 6 ìîë% ÔÑ [54, 55]. Ôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ÔÊ). Ðîëü ôîñôàòèäíîé êèñëîòû â ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè êëåòêè ÿâëÿåòñÿ â ïîñëåäíèå ãîäû îáëàñòüþ èíòåíñèâíûõ èññëåäîâàíèé è ãèïîòåç. Ýòîò ÔË îáû÷íî ïðèñóòñòâóåò â î÷åíü íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ â êëåòî÷íûõ ìåìáðàíàõ ìëåêîïèòàþùèõ: <5 ìîë% îò ñîäåðæàíèÿ ÔÕ. Áóäó÷è âàæíûì áèîñèíòåòè÷åñêèì èíòåðìåäèàòîì, ÔÊ ìîæåò ñèíòåçèðîâàòüñÿ in situ èç äðóãèõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ ïðè äåéñòâèè ôîñôîëèïàçû D. Ïîëàãàþò, ÷òî ÔÊ ÿâëÿåòñÿ äèàíèîíîì (ðÊà2 = 7,6) â áèñëîÿõ, îáðàçîâàííûõ èç ÔÕ [55]. Äîáàâëåíèå åå ê ÔÕ âåçèêóëàì ïîâûøàåò ÷óâñòâèòåëüíîñòü ïîñëåäíèõ ê âûçûâàåìîé Ñà2+ àãðåãàöèè è ñëèÿíèþ (ôóçèè). Ýòî ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñî ñòèìóëèðóåìîé Ñà2+ êëàñòåðèçàöèåé ÔÊ â ìåìáðàíå [56], ïðèâîäÿùåé ê ôîðìèðîâàíèþ ôîñôîëèïèäíîãî äîìåíà. Ïîêàçàíî, ÷òî ÔÊ ñïîñîáíà ñòèìóëèðîâàòü ãèäðîëèç ÔÕâåçèêóë sPLA2: ïðåäâàðèòåëüíàÿ îáðàáîòêà âåçèêóë ôîñôîëèïàçîé D ïðèâîäèò ê óñèëåíèþ èõ ãèäðîëèçà sPLA2 [57]. Âîçìîæíî, çäåñü èãðàåò ðîëü íåêîòîðîå ðàçðûõëåíèå óïàêîâêè ÔË â ìåìáðàíå çà ñ÷åò îáðàçóþùåéñÿ ÔÊ, è ýòî, â ñâîþ î÷åðåäü, ïîâûøàåò äîñòóïíîñòü ñóáñòðàòà äëÿ sPLA2. 90 Âûñêàçûâàëèñü ïðåäïîëîæåíèÿ, ÷òî ÔÊ ìîæåò ïîä äåéñòâèåì ýòèõ ôîñôîëèïàç ãåíåðèðîâàòüñÿ âî âíåøíåì ìîíîñëîå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïðè âîñïàëèòåëüíîì îòâåòå êëåòîê îðãàíèçìà [58, 59], êîãäà sPLA2 ñòàíîâèòñÿ ïðîâîñïàëèòåëüíûì ôàêòîðîì [60]. Ïîêàçàíà âûñîêàÿ àêòèâíîñòü òàêîé ðåàêöèè ïðè ñåïòè÷åñêîì øîêå, ïðè êîòîðîì óðîâåíü sPLA2 â êðîâè ÷åëîâåêà âîçðàñòàåò â ñòî ðàç, äîñòèãàÿ âåëè÷èíû ïîðÿäêà 1ìêã/ìë, äîñòàòî÷íîé äëÿ ãèäðîëèçà êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Ïî-âèäèìîìó, â îáðàçîâàíèè ÔÊ íà íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ìåìáðàí ó÷àñòâóåò è ôîñôîëèïàçà D.  ñûâîðîòêå êðîâè áûëà îáíàðóæåíà ñïåöèôè÷íàÿ ê ãëèêîçèëôîñôàòèäèëèíîçèòó ôîñôîëèïàçà D, ñïîñîáñòâóþùàÿ ãåíåðàöèè ÔÊ â íåñâîéñòâåííîì ýòîìó ÔË ïîâåðõíîñòíîì ìîíîñëîå ìåìáðàí êëåòîê, ÷òî ìîæåò in vivo ñòèìóëèðîâàòü âîñïàëèòåëüíûé îòâåò. Îáíàðóæåíî, ÷òî ÔÊ ïðèñóòñòâóåò â ìèêðîâåçèêóëàõ, îáðàçóþùèõñÿ ïðè "øåäèíãå" ìåìáðàí (ÿâëåíèè "îòïî÷êîâûâàíèÿ" è îòäåëåíèÿ îò ìåìáðàíû ó÷àñòêîâ åå íàðóæíîãî ñëîÿ), âîçìîæíî, ó÷àñòâóÿ â ýòîì ïðîöåññå. Íà ýòî óêàçûâàåò îáðàçîâàíèå ëèçîôîñôàòèäíîé êèñëîòû (ëèçîÔÊ) ïðè äåéñòâèè sPLA2 ÷åëîâåêà íà ýòè ìèêðîâåçèêóëû [61]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ëèçîÔÊ ïðèñóòñòâóåò â àðòðèòíîé ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè, ãäå âûñîêà àêòèâíîñòü sPLA2. ÔÊ ñâÿçàíà ñ íåêîòîðûìè ïðîöåññàìè â àïïàðàòå Ãîëüäæè [62]. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ÔÊ ìîæåò áûòü âêëþ÷åíà â ïðîöåññû ïåðåäà÷è ñèãíàëà, õîòÿ íåïîñðåäñòâåííàÿ åå ðîëü êàê ëèïèäíîé ñèãíàëüíîé ìîëåêóëû íå äîêàçàíà [63 - 65]. Áîëåå îïðåäåëåííîé â ôóíêöèîíàëüíîì îòíîøåíèè ÿâëÿåòñÿ ðîëü ÔÊ êàê ïðåäøåñòâåííèêà ëèçîÔÊ, êîòîðàÿ èãðàåò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ïðîöåññàõ ïåðåäà÷è êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ. ÔÊ è ëèçîÔÊ îêàçûâàþò ïðîòèâîïîëîæíûå ýôôåêòû íà êðèâèçíó ìåìáðàíû è ïðîöåññ ñëèÿíèÿ ìåìáðàí ïðè îáðàçîâàíèè âåçèêóë, ÷òî ñâÿçûâàþò ñ àêòèâíîñòüþ ëèçîôîñôàòèäèë-àöèëòðàíñôåðàçû [66]. Çàìåíà êîíóñîîáðàçíîãî ëèïèäà (ÔÊ) íà ëèïèä ñ êîíôîðìàöèåé ïåðåâåðíóòîãî êîíóñà (ëèçîÔÊ) óñèëèâàåò îòðèöàòåëüíóþ ìåìáðàííóþ êðèâèçíó, ñïîñîáñòâóþùóþ ñëèÿíèþ ìåìáðàí. Ôîñôîèíîçèòèäû (ÔÈ È). Èçâåñòíî, ÷òî èíîçèò-ñîäåðæàùèå ÔË èãðàþò ðîëü êàê â ïîâåðõíîñòíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ, òàê è â ãåíåðàöèè âàæíûõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë. Áóäó÷è ïîëèàíèîíàìè, ôîñôîèíîçèòèäû çà ñ÷åò àíèîííîãî çàðÿäà âûñîêîé ïëîòíîñòè ýôôåêòèâíû â ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ ëèïèä-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ äàæå ïðè îòíîñèòåëüíî íèçêîì ñîäåðæàíèè èõ â ìåìáðàíå [66]. Ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ è ñïåöèôè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ÔÈ ñ áåëêîâûìè äîìåíàìè, íàïðèìåð, ñ òàê íàçûâàåìûìè ÐÍ-äîìåíàìè. 91 Âïåðâûå îíè áûëè èäåíòèôèöèðîâàíû â ïëåêñòðèíå êàê ïîâòîðÿþùèéñÿ áåëêîâûé ìîäóëü, íàñ÷èòûâàþùèé îêîëî 120 àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ, ïîñëå ÷åãî áûëè îáíàðóæåíû òàêæå áîëåå ÷åì ó 100 ýóêàðèîòè÷åñêèõ áåëêîâ. Ýòè äîìåíû, íàçûâàåìûå ïëåêñòðèí-ãîìîëîãè÷íûìè, îáëàäàþò ñõîäíîé òðåòè÷íîé ñòðóêòóðîé è ìîãóò ñëóæèòü ìåäèàòîðàìè â áåëîê-ëèïèäíûõ èëè áåëîê-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ. Ëèãàíäàìè äëÿ íèõ ÿâëÿþòñÿ ðàçëè÷íûå ôîñôîðèëèðîâàííûå ÔÈ. Áîëüøèíñòâî áåëêîâ, ñîäåðæàùèõ ÐÍ-äîìåíû, òðåáóþò äëÿ âûïîëíåíèÿ ñâîèõ ôóíêöèé ïðèñîåäèíåíèÿ ê ìåìáðàíå, êîòîðîå è îñóùåñòâëÿþò ñ ïîìîùüþ ýòèõ ó÷àñòêîâ. Ïðèìåðîì áåëêîâ, âçàèìîäåéñòâóþùèõ ñ ìåìáðàíîé ïîñðåäñòâîì ÐÍ-äîìåíîâ, ÿâëÿåòñÿ ôîñôîëèïàçà Ñ-δ1 [67]. Êðîìå òîãî, âûÿâëåí ðÿä äðóãèõ áåëêîâûõ äîìåíîâ, óçíàþùèõ ðàçëè÷íûå ôîñôîðèëèðîâàííûå ÔÈ, â ÷àñòíîñòè, â íåäàâíî îòêðûòîì ôóíêöèîíàëüíî âàæíîì ôåðìåíòå ôîñôîèíîçèòèä-3-êèíàçå [68]. ÔÈ ó÷àñòâóþò â ïîääåðæàíèè ñòðóêòóðû GPI-çàÿêîðåííûõ áåëêîâ, èìåþòñÿ òàêæå äàííûå î èõ ðîëè â ôóíêöèîíèðîâàíèè áåëêîâ öèòîñêåëåòà [69]. Íàèáîëåå âàæíóþ ðîëü ÔÈ èãðàåò â ìåìáðàíàõ, îñîáåííî â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå êëåòîê. Ýòî ñâÿçàíî ñ ó÷àñòèåì ÔÈ â ïðîöåññàõ òðàíñäóêöèè ñèãíàëà, â õîäå êîòîðîé âíóòðåííèå ñòðóêòóðû êëåòêè "óçíàþò" î êàêèõ-ëèáî âíåêëåòî÷íûõ ñîáûòèÿõ íàïðèìåð, î ïðèñîåäèíåíèè áåëêîâ, ãîðìîíîâ, è äð. ÔÈ, ïðèñóòñòâóÿ â ìåìáðàíå â ìèíîðíûõ êîëè÷åñòâàõ, ïîäâåðæåí àêòèâíîìó ìåòàáîëèçìó, ñòðîãî êîíòðîëèðóåìîìó è ðåàãèðóþùåìó íà âíåêëåòî÷íûå âîçäåéñòâèÿ. Ìåõàíèçìàì ó÷àñòèÿ ÔÈ â ïðîöåññàõ ïåðåäà÷è ñèãíàëà ïîñâÿùåíû ìíîãèå îáçîðû [70, 71]. Êðàòêî, ÔÈ ïîäâåðãàåòñÿ ïîñëåäîâàòåëüíîìó ôîñôîðèëèðîâàíèþ äî ÔÈ-4,5-äèôîñôàòà (ñ ó÷àñòèåì ÀÒÔ è ðÿäà êèíàç) è àêòèâàöèè (â îòâåò íà âíåøíèå ñòèìóëû - âêëþ÷àÿ àíòèãåíû) ôîñôîëèïàçû Ñ, ïîä äåéñòâèåì êîòîðîé îáðàçóåòñÿ äèãëèöåðèä è èíîçèòòðèôîñôàò-1,4,5. Êàæäîå èç ýòèõ ñîåäèíåíèé ìîæåò ñëóæèòü âòîðè÷íûì ìåññåíäæåðîì, "âêëþ÷àþùèì" êàñêàä áèîëîãè÷åñêè âàæíûõ ðåàêöèé. Íàïðèìåð, äèãëèöåðèä àêòèâèðóåò ÐÊ Ñ, à èíîçèò-òðèôîñôàò-1,4,5 èíäóöèðóåò âûõîä âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+. ÔÈ èãðàþò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ ôóíêöèÿõ. Èõ âíóòðèêëåòî÷íûé óðîâåíü ñòðîãî ðåãóëèðóåòñÿ ñïåöèôè÷åñêèìè ÔÈ êèíàçàìè, ôîñôàòàçàìè è ôîñôîëèïàçàìè. Ñàì ôîñôàòèäèëèíîçèò ðàññìàòðèâàåòñÿ êàê ïðåäøåñòâåííèê äðóãèõ ÔÈ (ïîëè-ÔÈ), îáðàçîâàíèå êîòîðûõ ïðîèñõîäèò ñ ïîìîùüþ ïîñëåäîâàòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ ÔÈ ñïåöèôè÷åñêèìè êèíàçàìè. Ìåòàáîëèçì ÔÈ â êëåòêå ñòðîãî êîíòðîëèðóåòñÿ. Îíè 92 äåéñòâóþò ëèáî êàê ïðåäøåñòâåííèêè âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ, òàêèõ êàê èíîçèò-òðèôîñôàò-1,4,5 è äèãëèöåðèä, èëè íåïîñðåäñòâåííî - ïóòåì âçàèìîäåéñòâèÿ ñ áåëêàìè è ïðîñòðàíñòâåííî-âðåìåííûì êîîðäèíèðîâàíèåì ïóòåé âíåêëåòî÷íîé ïåðåäà÷è ñèãíàëà ("ñèãíàëèíãà") [2, 72]. Ïîêàçàíî ó÷àñòèå ÔÈ â ðÿäå ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, âêëþ÷àÿ êëåòî÷íóþ ïðîëèôåðàöèþ, ðåãóëÿöèþ ïåðåäâèæåíèÿ ñ ó÷àñòèåì áåëêîâ öèòîñêåëåòà, ïåðåìåùåíèå âíóòðèêëåòî÷íûõ âåçèêóë, êëåòî÷íûé ìåòàáîëèçì è, íàêîíåö, ãèáåëü êëåòêè. Ïîýòîìó äèñôóíêöèè â êîíòðîëå èõ óðîâíÿ ÷àñòî âåäóò ê ïàòîëîãèÿì [71, 73]. ÔÈ-3,4,5-òðèôîñôàò è ÔÈ-3,4-äèôîñôàò ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ìèíîðíûå ÔÈ, áûñòðî ïðîäóöèðóåìûå â îòâåò íà ðàçëè÷íûå ñòèìóëÿöèè êëåòêè. ÔÈ-3,4,5-òðèôîñôàò ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëüíîé ìîëåêóëîé, ñïîñîáíîé âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ âûñîêèì ñðîäñòâîì ñ íåêîòîðûìè áåëêàìè, ñîäåðæàùèìè ÐÍ-äîìåí. Ïîêàçàíî, ÷òî ËÍÏ êðîâè ñïîñîáíû ñòèìóëèðîâàòü êàòàáîëèçì ÔÈ ñ ãåíåðàöèåé âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ, äèãëèöåðèäà è èíîçèò-1,4,5-òðèôîñôàòà, è ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé ïðîòåèíêèíàçû Ñ è âûñâîáîæäåíèåì Ñà2+ èç âíóòðèêëåòî÷íîãî äåïî [74, 75]. Ôîñôààòèäèëãëèö öåðèí (Ôà Ã) è êààðäèîëèïèí (ÊË). Ôà - ãëàâíûé êîìïîíåíò ÔË áàêòåðèàëüíûõ ìåìáðàí, íî ìèíîðíûé ÔË â òêàíÿõ æèâîòíûõ. Îí ïðèñóòñòâóåò â îñíîâíîì â ëåãî÷íîì ñóðôàêòàíòå, ãäå ôóíêöèè åãî íå ÿñíû - ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îí èãðàåò ðîëü â ñâÿçûâàíèè ñóðôàêòàíòíûõ áåëêîâ. Ïîêàçàíà ðîëü Ôà êàê ôèçèîëîãè÷åñêîãî àêòèâàòîðà ÿäåðíîé ïðîòåèíêèíàçû Ñ [76]. ÊË ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì â ìèòîõîíäðèÿõ, ãäå ëîêàëèçóåòñÿ âî âíóòðåííåé ìåìáðàíå. Ïîëàãàþò, ÷òî ÊË èãðàåò ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â ôóíêöèîíèðîâàíèè ìèòîõîíäðèé çà ñ÷åò âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ðÿäîì ìèòîõîíäðèàëüíûõ áåëêîâ. ÊË ìîæåò ó÷àñòâîâàòü â äîñòàâêå áåëêîâ âíóòðü ìèòîõîíäðèé [32]. 3.4. Ñôèíãîìèåëèí è äðóãèå ñôèíãîëèïèäû. Ñôèíãîìèåëèí (ÑÌ) êàê ñòðóêòóðíûé ýëåìåíò êëåòî÷íûõ ìåìáðàí ïðèâëåêàåò âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé óæå ïî÷òè 100 ëåò, íî òîëüêî íåäàâíî áûëè ïîëó÷åíû äîêàçàòåëüñòâà åãî ðåãóëÿòîðíîé ðîëè â âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ [77 - 81].  ïîñëåäíèå ãîäû ïðåäñòàâëåíèÿ î ðîëè ÑÌ è åãî ìåòàáîëèòîâ â îáåñïå÷åíèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ áèîìåìáðàí çíà÷èòåëüíî ðàñøèðèëèñü. Ïðè ýòîì èçó÷àëàñü ðîëü íå òîëüêî ñàìîãî ÑÌ, íî è ðÿäà åãî ìåòàáîëèòîâ, òàêèõ êàê öåðàìèäû è ðàçëè÷íûå ïðîèçâîäíûå ñôèíãîçèíîâîãî îñíîâàíèÿ. Êàê èçâåñòíî, ïðèñóòñòâèå â ìåìáðàíàõ ÑÌ, ñ åãî 93 äëèííîöåïî÷å÷íûì îñíîâàíèåì è íàñûùåííîé æèðíîé êèñëîòîé, ïðèäàåò ìåìáðàíå æåñòêîñòü. Âîçìîæíî, èìåííî ñ ýòèì ñâÿçàíî ïðåèìóùåñòâåííîå ðàñïðåäåëåíèå ýòîãî ÔË â òêàíÿõ ñîñóäîâ è íåðâíûõ âîëîêíàõ, òêàíÿõ ñ íàèáîëüøèìè òðåáîâàíèÿìè ê ìåõàíè÷åñêîé ïðî÷íîñòè ñîñòàâëÿþùèõ èõ êëåòîê. Ñ îñîáåííîñòÿìè ýòèõ òêàíåé ñîïðÿæåíî, âåðîÿòíî, è äðóãîå ñâîéñòâî ÑÌ - âûñîêàÿ àôèííîñòü ê õîëåñòåðèíó. Ïîêàçàíî íàëè÷èå òåñíîé âçàèìîñâÿçè ñôèíãîìèåëèíà ñ õîëåñòåðèíîì â êëåòêàõ, ÷òî ïîäòâåðæäàåòñÿ ïîâûøåííûì èõ ñîäåðæàíèåì â îäíèõ è òåõ æå êëåòî÷íûõ êîìïàðòìåíòàõ - ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è àïïàðàòå Ãîëüäæè [82]. Íàêîïëåíî ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ, äîêàçûâàþùèõ ó÷àñòèå íåêîòîðûõ ñôèíãîëèïèäîâ, â ÷àñòíîñòè, ñôèíãîìèåëèíà è åãî ìåòàáîëèòîâ, â ðåãóëÿöèè ðÿäà âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ [83, 84]. Ïîêàçàíà ðîëü ñôèíãîëèïèäîâ â ïðîöåññàõ àïîïòîçà, ìèãðàöèè, êëåòî÷íîé àäãåçèè, â ðåãóëÿöèè òîíóñà ñîñóäîâ, àíãèîãåíåçå, â ïàòîãåíåçå àòåðîñêëåðîçà è åãî îñëîæíåíèé, â ïðîÿâëåíèÿõ êàðäèîòîêñè÷íîñòè, âûçâàííûõ àíòðàöèêëèíàìè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÑÌ ÷åðåç àêòèâàöèþ ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû ó÷àñòâóåò â ðåãóëÿöèè îáðàçîâàíèÿ NO, êîòîðîå ïðèâîäèò ê çàâèñèìîé îò ýíäîòåëèÿ âàçîðåëàêñàöèè [79, 85]. Íà ðàçëè÷íûõ òèïàõ êëåòîê ðàçëè÷íûõ âèäîâ æèâîòíûõ ïîêàçàíî, ÷òî ñôèíãîëèïèäû ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â ïðîöåññû ðåãóëÿöèè ðîñòà è ïðîëèôåðàöèè êëåòîê â êà÷åñòâå êëþ÷åâûõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë [77]. Îáíàðóæåíà ðàíåå íåèçâåñòíàÿ ñïîñîáíîñòü ñôèíãîëèïèäîâ óñèëèâàòü âîçäåéñòâèå íåêîòîðûõ âíåêëåòî÷íûõ ýôôåêòîðîâ [86]. Íàïðèìåð, ñôèíãîëèïèäû ó÷àñòâóþò â ñèãíàëüíûõ ïðîöåññàõ, èíèöèèðîâàííûõ öèòîêèíàìè, ôàêòîðàìè ðîñòà è ëèïîïðîòåèíàìè, êîòîðûå èãðàþò êëþ÷åâóþ ðîëü â àíãèîãåíåçå, à â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ è â ðàçâèòèè ñîñóäèñòîé ïàòîëîãèè. Òàê, ýêñïåðèìåíòàëüíî áûëî ïîêàçàíî, ÷òî âîçäåéñòâèå òàêèõ ïîâðåæäàþùèõ àãåíòîâ, êàê TNF, îêèñëåííûõ ËÍÏ, èíòåðëåéêèíà-1 è 2, è äð. âûçûâàåò â ýíäîòåëèàëüíûõ, ãëàäêîìûøå÷íûõ êëåòêàõ, òðîìáîöèòàõ è êàðäèîìèîöèòàõ ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ, ÑÔ, S1P è äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ ñôèíãîëèïèäîâ [87]. Ðåçóëüòàòû ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèé ïîñëåäíèõ ëåò ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî òàêèå ïðîèçâîäíûå ñôèíãîëèïèäîâ, êàê öåðàìèäû, ñôèíãîçèí è ñôèíãîçèí-1-ôîñôàò ÿâëÿþòñÿ âòîðè÷íûìè ìåññåíäæåðàìè ìíîãèõ âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Íàïðèìåð, óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðîëèôåðàöèÿ [88], äèôôåðåíöèðîâêà [89] èëè àïîïòîç êëåòîê [90] ìîãóò áûòü 94 èíèöèèðîâàíû ãèäðîëèçîì ÑÌ ñ ïîñëåäóþùèì íàêîïëåíèåì öåðàìèäîâ. Òàêæå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî åùå äî ïðîÿâëåíèÿ íà÷àëüíûõ ýòàïîâ àòåðîñêëåðîòè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ ïðîëèôåðàöèè ãëàäêîìûøå÷íûõ êëåòîê ñîñóäîâ - óâåëè÷èâàåòñÿ àêòèâíîñòü ñôèíãîìèåëèíàçû (ÑÌàçû), ñîïðîâîæäàþùàÿñÿ îáðàçîâàíèåì ñôèíãîëèïèäíûõ ìåòàáîëèòîâ [91]. Êðîìå òîãî, öåðàìèäû èëè ïðîäóêòû èõ ìåòàáîëèçìà ÿâëÿþòñÿ ìåäèàòîðàìè íåêîòîðûõ ìåæêëåòî÷íûõ ðåãóëÿòîðîâ, òàêèõ êàê öèòîêèíû, ôàêòîðû ðîñòà, ñòðåññîðíûå àãåíòû. Ïîêàçàíî, ÷òî âîçäåéñòâèå ýòèõ ðåãóëÿòîðîâ íà êëåòêó ïðèâîäèò ê ãåíåðàöèè â íåé öåðàìèäà è åãî ïðîèçâîäíûõ. Äîáàâëåíèå ýêçîãåííûõ ïðîèçâîäíûõ ñôèíãîëèïèäîâ ê êóëüòóðå êëåòîê èìèòèðóåò áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû öèòîêèíîâ è ôàêòîðîâ ðîñòà [92, 93]. "Âìåøàòåëüñòâî" âî âíóòðèêëåòî÷íûé ñèíòåç ñôèíãîëèïèäíûõ ìåäèàòîðîâ ìåíÿåò áèîëîãè÷åñêèé îòâåò êëåòêè íà âíåøíèå ñòèìóëû [94, 95]. Îáðàçîâàíèå ñôèíãîëèïèäíûõ ìåäèàòîðîâ è ïóòè èõ àêòèâàöèè óíèâåðñàëüíû â ïðèðîäå: îíè ïðèñóòñòâóþò êàê â êëåòêàõ ïðîêàðèîò (äðîææåé), òàê è âûñøèõ ýóêàðèîò (÷åëîâåêà). Ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî íàêîïëåíèå öåðàìèäà â êëåòêå ÿâëÿåòñÿ õàðàêòåðíûì ïðîÿâëåíèåì àïîïòîçà - ïðîãðàììèðóåìîé ãèáåëè êëåòêè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî âûçûâàþùèå àïîïòîç ìíîãî÷èñëåííûå ñòðåññîâûå âîçäåéñòâèÿ îêðóæàþùåé ñðåäû ïðèâîäÿò ê âíóòðèêëåòî÷íîé ãåíåðàöèè öåðàìèäîâ. Ïðè ýòîì òðàíñëîêàöèÿ ÑÌ â ðàôòàõ îáåñïå÷èâàåò â äàëüíåéøåì ó÷àñòèå îáðàçîâàííûõ èç íåãî öåðàìèäîâ â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ïðè àïîïòîçå. Àïîïòîòè÷åñêèé "ðàçäðàæèòåëü" èíäóöèðóåò ïîòåðþ àñèììåòðèè â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Ôîñôàòèäèëñåðèí ïðè ýòîì îêàçûâàåòñÿ íà íåñâîéñòâåííîé åìó âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû, à ÑÌ, íàîáîðîò, ìåäëåííî âûòåñíÿåòñÿ èç íåå, ïåðåäâèãàÿñü íà öèòîïëàçìàòè÷åñêóþ ñòîðîíó, ãäå âåðîÿòíî, è ïðîõîäèò åãî ãèäðîëèç ÑÌàçîé è îáðàçîâàíèå öåðàìèäà [96]. Òàêèå ïðîöåññû, êîãäà âíåøíèé ìîíîñëîé ëèøàåòñÿ ñâîåãî ÑÌ íå òîëüêî çà ñ÷åò åãî òðàíñëîêàöèè, íî è çà ñ÷åò ãèäðîëèçà, îêàçûâàþò âëèÿíèå íà ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ìåìáðàíû. Ìåíÿåòñÿ æèäêîñòíîñòü ìèêðîäîìåíîâ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí, ïðîèñõîäèò ïåðåðàñïðåäåëåíèå õîëåñòåðèíà ïî íàïðàâëåíèþ ê âíóòðåííåé ÷àñòè êëåòêè èëè ê âíåêëåòî÷íîìó àêöåïòîðó (ëèïîïðîòåèíó). Âñå ýòè èçìåíåíèÿ ïðèâîäÿò ê àêòèâàöèè ïðîöåññîâ àïîïòîçà [97]. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî òàêèì ïîâåðõíîñòíûì èçìåíåíèÿì ïðåïÿòñòâóåò äîáàâëåíèå ÑÌ ê àïîïòîçíîé êëåòêå, íà îñíîâàíèè ÷åãî ïðåäïîëîæèëè, ÷òî îïðåäåëÿþùèì ôàêòîðîì ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â àïîïòîçíîé êëåòêå ÿâëÿåòñÿ íå 95 îáðàçîâàíèå öåðàìèäà, à óõîä ñ ïîâåðõíîñòè ÑÌ è åãî ãèäðîëèç [96]. Õîòÿ ïðåäñòàâëåíèÿ î òîì, íàñêîëüêî âàæíîé ÿâëÿåòñÿ ñâÿçü ìåæäó àïîïòîçîì è îáðàçîâàíèåì öåðàìèäîâ â êëåòêå, îêîí÷àòåëüíî íå ñôîðìèðîâàëèñü, áîëüøèíñòâî èññëåäîâàòåëåé ïîäòâåðæäàþò åå ñóùåñòâîâàíèå. Íàïðèìåð, êëåòêè ýíäîòåëèÿ ëåãêèõ, òîíêîãî êèøå÷íèêà è ñïèííîãî ìîçãà ó ìûøåé, ëèøåííûõ ÑÌàçû (è íå ïðîäóöèðóþùèõ öåðàìèä), îêàçàëèñü óñòîé÷èâûìè ê èíäóöèðîâàííîìó ðàäèàöèåé àïîïòîçó, à äîáàâëåíèå öåðàìèäà ê íèì ñïîñîáñòâîâàëî èíäóêöèè àïîïòîçà [98 - 100]. Âûÿâëåíà ñâÿçü àïîïòîçà ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ñ ãåíåðàöèåé öåðàìèäà ïðè âûçâàííîì ëèïîïîëèñàõàðèäîì ñåïòè÷åñêîì øîêå [101]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî öåðàìèäû èãðàþò ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â àïîïòîçå êàðäèîìèîöèòîâ, èíäóöèðîâàííîì ïðîòèâîîïóõîëåâûì àíòèáèîòèêîì äîêñîðóáèöèíîì, àêòèâèðóþùèì ÑÌàçó. Èíãèáèðîâàíèå àêòèâàöèè ÑÌàçû L-êàðíèòèíîì, áëîêèðóþùèì ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ, ïðåäîòâðàùàëî ïîâðåæäåíèå êàðäèîìèîöèòîâ è ñíèæàëî àïîïòîç [102]. Ïóòè ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ, âîâëå÷åíûõ â èíäóöèðîâàííûé ñôèíãîëèïèäàìè àïîïòîç, âêëþ÷àþò èíãèáèðîâàíèå ñâÿçàííûõ ñ âûæèâàíèåì êëåòîê ïðîöåññîâ, òàêèõ êàê äåéñòâèå PKB/Akt (ñåðèí-òðåîíèíîâàÿ ïðîòåèí-êèíàçà Â) è/èëè ïðîöåññîâ àêòèâàöèè êëàññè÷åñêèõ êàñêàäîâ êàñïàç [103, 104]. Àïîïòîç ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, èíäóöèðîâàííûé ýêçîãåííûìè öåðàìèäàìè, ìîæíî ïðåäîòâðàòèòü äîáàâëåíèåì ýíäîòåëèàëüíîãî âàñêóëÿðíîãî ôàêòîðà ðîñòà [104, 105] èëè ãåíåðàöèåé S1P [106]. Âåðîÿòíî, òàê æå, êàê è äëÿ äðóãèõ òèïîâ êëåòîê [107], ñîîòíîøåíèå èëè áèîñòàòóñ öåðàìèä/S1P ìîæåò ìîäóëèðîâàòü àïîïòîç ñîñóäèñòûõ êëåòîê, ëèáî ïîääåðæèâàåò èõ æèçíåñïîñîáíîñòü çà ñ÷åò òîíêîé ðåãóëÿöèè êëþ÷åâûõ ôåðìåíòîâ ìåòàáîëèçìà ñôèíãîëèïèäîâ [108 - 110]. Îäíèì èç íàèáîëåå ïîäðîáíî èçó÷åííûõ ïðîöåññîâ ñ ó÷àñòèåì ñôèíãîëèïèäíîé ðåãóëÿöèè êëåòî÷íîãî ñèãíàëà ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ôàêòîðîì íåêðîçà îïóõîëè - α-TNF.  2002 ã. S.Malagarie-Cazenave è äð. [111] ïðåäëîæèëè ñõåìó ñôèíãîëèïèäíîãî ñèãíàëèíãà, íåêîòîðûå ýëåìåíòû êîòîðîé ìîãóò èìåòü îáùèå ÷åðòû è ñ äðóãèìè ïðîöåññàìè ïåðåäà÷è ñèãíàëà ñ ó÷àñòèåì ñôèíãîëèïèäîâ. α-TNF (tumor necrosis factor) - îòíîñèòñÿ ê ñåìåéñòâó öèòîêèíîâ; îí ìîæåò ñâÿçûâàòüñÿ ñ ìíîæåñòâîì ðîäñòâåííûõ ðåöåïòîðîâ, àêòèâàöèÿ êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìûì óñëîâèåì òàêèõ âàæíåéøèõ äëÿ æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè ïðîöåññîâ, êàê ïðîëèôåðàöèÿ, äèôôåðåíöèðîâêà, àïîïòîç. ×àùå âñåãî àêòèâàöèþ ýòèõ ïðîöåññîâ ñâÿçûâàþò ñ ïðèñóòñòâèåì â êëåòêå äâóõ òèïîâ 96 ðåöåïòîðîâ ê α-TNF - TNFR1 è TNFR2. Ñèãíàëüíûå ïóòè, îïîñðåäóþùèå ýôôåêòû α−TNF, åùå ïîëíîñòüþ íå èçó÷åíû, íî èçâåñòíî, ÷òî îíè âêëþ÷àþò ôîñôîðèëèðîâàíèå è äåôîñôîðèëèðîâàíèå ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ, àêòèâàöèþ ÑÌàç, íåêîòîðûõ òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ è îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà. Ðàííèå íàáëþäåíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî TNF ñïîñîáåí çàïóñêàòü äåãðàäàöèþ ÑÌ è ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ [89] â ðàçëè÷íûõ òèïàõ êëåòîê. Íàïðèìåð, äîáàâëåíèå α-TNF ê êóëüòóðå êëåòîê ôèáðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà âûçûâàëî â ïîñëåäóþùèå 50-60 ìèíóò àêòèâàöèþ íåéòðàëüíîé ÑÌàçû, ãèäðîëèç ÑÌ è ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ â êëåòêàõ. Ýòè æå ïðîöåññû, íî ñî ñêîðîñòüþ â 10 ðàç âûøå, íàáëþäàëèñü â êóëüòóðå îïóõîëåâûõ êëåòîê U937. Êðîìå òîãî, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñèíòåç öåðàìèäîâ àêòèâèðóåòñÿ ñ ó÷àñòèåì ðåöåïòîðà ê α-TNF - TNFR1 [112 - 114]. Ñîãëàñíî Malagarie-Cazenave è äð. [111], âçàèìîäåéñòâèå ñôèíãîëèïèäîâ ñ ýôôåêòîðàìè è ðåöåïòîðàìè α-TNF â ïðîöåññå àïîïòîçà ïðîèñõîäèò ïî ñëåäóþùåé ñõåìå: - ïðè ñâÿçûâàíèè α-TNF ïðîèñõîäèò òðèìåðèçàöèÿ TNFðåöåïòîðà (TNFR1), ÷òî èíäóöèðóåò ìîáèëèçàöèþ íåêîòîðûõ áåëêîâ ê öèòîïëàçìåííîìó äîìåíó ðåöåïòîðà, îáîçíà÷åííîìó êàê DD ("äîìåí ñìåðòè", "death domain"). - îáðàçóþùèéñÿ êîìïëåêñ ñëóæèò àäàïòîðíûì áåëêîì, ñïîñîáíûì àêòèâèðîâàòü êèñëóþ ÑÌàçó; - äðóãîé ôðàãìåíò àêòèâèðîâàííîãî ðåöåïòîðà (NSD) ó÷àñòâóåò â àêòèâàöèè íåéòðàëüíîé ÑÌàçû; - îáðàçóþùèéñÿ ïðè âîçäåéñòâèè ÑÌàç íà ñôèíãîìèåëèí öåðàìèä äåéñòâóåò íà ñïåöèôè÷åñêèå áåëêè - êàñïàçû, âûçûâàþùèå àïîïòîç (ñì. ãëàâó 4). Òàêîé ìåõàíèçì ïîäòâåðæäàåòñÿ òåì, ÷òî ñèíòåç öåðàìèäîâ áëîêèðóåòñÿ â êëåòêàõ, óñòîé÷èâûõ ê öèòîòîêñè÷åñêîìó ýôôåêòó TNF, à íàñëåäñòâåííûé äåôåêò èëè èíãèáèðîâàíèå ÑÌàç ðàçîáùàåò àïîïòîç. Ïîëàãàþò, ÷òî â äàëüíåéøåì ýòè ðåçóëüòàòû, ïî-âèäèìîìó, ñìîãóò íàéòè êëèíè÷åñêîå ïðèìåíåíèå, òàê êàê íåêîòîðûå ïàòîëîãè÷åñêèå ñîñòîÿíèÿ ÷åëîâåêà õàðàêòåðèçóþòñÿ àíîìàëüíîé ïðîäóêöèåé TNF èëè èçìåíåíèåì åãî âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ðåöåïòîðîì (ñåïòè÷åñêèé øîê, áîëåçíü Êðîíà, ðÿä âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ). Ïîìèìî àïîïòîçà ñôèíãîëèïèäû è èõ ïðîèçâîäíûå ó÷àñòâóþò â ðåàëèçàöèè è äðóãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ α-TNF: äèôôåðåíöèðîâêè ìîíîöèòîâ, ïðîëèôåðàöèè ôèáðîáëàñòîâ, ýêñïðåññèè àäãåçèâíûõ ìîëåêóë è ðåçèñòåíòíîñòè ê èíñóëèíó. 97 Íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå öåðàìèäîâ, èíäóöèðîâàííîå áàêòåðèàëüíîé ÑÌàçîé èëè ôàêòîðîì íåêðîçà îïóõîëè, âûçûâàåò Å-ñåëåêòèí-çàâèñèìóþ àäãåçèþ íåéòðîôèëîâ ê ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì ÷åëîâåêà [115, 116].  äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [117] ïîêàçàíî, ÷òî ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè èíäóöèðóåò àêòèâíîñòü ñôèíãîçèí-êèíàçû è íàêîïëåíèå S1P, ïðèâîäÿùåå ê óâåëè÷åíèþ ñïåöèôè÷åñêèõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë, Å-ñåëåêòèíà è VCAM-1 (vascular cell adhesive molecule), ýêñïðåññèðóåìûõ ÷åðåç àêòèâàöèþ NFκB è MAPK [118, 119]. 3.5. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ëèçîôîñôîëèïèäîâ. Âàæíîå ìåñòî â ìåòàáîëèçìå ÔË çàíèìàþò ëèçîÔË, êîòîðûì ïðèíàäëåæèò è ñóùåñòâåííàÿ äîëÿ ðåãóëÿòîðíûõ ôóíêöèé ôîñôîëèïèäîâ [120]. ËèçîÔË ñîñòîÿò èç áîëüøîé ãèäðîôèëüíîé ïîëÿðíîé "ãîëîâêè", ïðèêðåïëåííîé ê ãëèöåðèíîâîìó èëè ñôèíãîçèíîâîìó "ñêåëåòó", è îäíîé äëèííîé ãèäðîôîáíîé óãëåâîäîðîäíîé öåïè - îñòàòêà æèðíîé êèñëîòû äëÿ ëèçîãëèöåðîÔË, èëè ñôèíãîèäíîãî îñíîâàíèÿ äëÿ ëèçîÑÔË.  áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ ëèçîÔË ïðèñóòñòâóþò, êàê ïðàâèëî, â î÷åíü íèçêèõ êîëè÷åñòâàõ (0,5-6% îáùåãî âåñà ëèïèäîâ ìåìáðàí), ÷òî îáúÿñíÿþò îñîáåííîñòÿìè èõ õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû. Íàëè÷èå áîëåå ãèäðîôèëüíîé ïîëÿðíîé "ãîëîâêè", ÷åì â îáû÷íûõ ÔË, è òîëüêî îäíîé äëèííîé óãëåâîäîðîäíîé öåïè, ïðèäàþò ëèçîÔË áîëåå âûðàæåííûå ñóðôàêòàíòíûå è äåòåðãåíòíûå ñâîéñòâà. Âûñîêèå êîíöåíòðàöèè ëèçîÔË íàðóøàþò öåëîñòíîñòü ìåìáðàí, âîçäåéñòâóþò íà àêòèâíîñòè ìíîãèõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ è ìîãóò äàæå ïðèâîäèòü ê ëèçèñó êëåòîê [120]. Íåñìîòðÿ íà íèçêèå êîíöåíòðàöèè, ëèçîÔË øèðîêî ðàñïðîñòðàíåíû â æèâîòíûõ òêàíÿõ è ëèïîïðîòåèíàõ.  êðîâè ëèçîÔË îáíàðóæèâàþòñÿ â ñâÿçàííîì ñ àëüáóìèíîì âèäå. Êîíöåíòðàöèÿ ëèçîÔË ïîâûøàåòñÿ ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ, ïðè ïîâðåæäåíèè òêàíåé, âîñïàëåíèè è íåîïëàçèè. Áèîëîãè÷åñêèå ôóíêöèè ëèçîÔË ñîïðÿæåíû ñ ðîñòîì êëåòêè, âêëþ÷àÿ ïðîëèôåðàöèþ, äèôôåðåíöèðîâêó è ïðîöåññû åå âûæèâàíèÿ, à òàêæå ñ ïîäàâëåíèåì àïîïòîçà. Ïðè íèçêèõ íå òîêñè÷íûõ êîíöåíòðàöèÿõ ëèçîÔË ìîãóò äåéñòâîâàòü êàê ëèïèäíûå âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû, ïðåîáðàçóÿ ñèãíàëû, ïîëó÷åííûå îò ìåìáðàííûõ ðåöåïòîðîâ, à òàêæå ïðîÿâëÿÿ ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå àêòèâíîñòè. Ëèçîôîñôîëèïèäíûå ìåäèàòîðû ãåíåðèðóþòñÿ â ìåìáðàíàõ êëåòîê â õîäå ñïåöèôè÷åñêîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ðàñùåïëåíèÿ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ è ñôèíãîëèïèäîâ. 98 3.5.1. Ëèçîñôèíãîëèïèäû. Ëèçîñôèíãîëèïèäû îáðàçóþòñÿ ïðè ãèäðîëèçå ÑÌ ñ ïîñëåäóþùèì îáðàòèìûì ðàñùåïëåíèåì öåðàìèäà äî ñôèíãîçèíà è äàëüíåéøèì âîçìîæíûì ôîñôîðèëèðîâàíèåì ïîñëåäíåãî äî S1P.  ïîñëåäíèå ãîäû ýòî ñîåäèíåíèå ïðèâëåêàåò âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé èç-çà âûÿâëåííîé âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè.  ýêñïåðèìåíòàõ in vitro íà ìîäåëüíûõ ñèñòåìàõ ïîêàçàíà âàæíàÿ ðåãóëÿòîðíàÿ ðîëü S1P â àíãèîãåíåçå [121 - 123]. Îí ñïîñîáåí óâåëè÷èâàòü ïðîëèôåðàöèþ è õåìîòàêñèñ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, ñòèìóëèðîâàòü îáðàçîâàíèå êàïèëëÿðîâ â êóëüòóðå êëåòîê, ðàñòóùèõ íà êîëëàãåíîâîì ãåëå [123, 124], óñèëèâàòü äåéñòâèå ôàêòîðà ðîñòà ôèáðîáëàñòîâ íà òêàíè ðîãîâîãî ñëîÿ ó ìûøåé [125]. Ñóùåñòâóåò òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî èìåííî S1P, ïîñòóïàþùèé â êëåòêó ïîñëå âûñâîáîæäåíèÿ èç òðîìáîöèòîâ, èëè âíîñèìûé â íåå îêèñëåííûìè ËÍÏ, à òàêæå ñèíòåçèðîâàííûé âíóòðè êëåòêè, ìîæåò ó÷àñòâîâàòü â ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ñîñóäèñòîé ñòåíêè, âûçûâàÿ åå óòîëùåíèå è ñòàáèëèçàöèþ àòåðîñêëåðîòè÷åñêîé áëÿøêè [126]. Óðîâåíü S1P êîíòðîëèðóåòñÿ â êëåòêå ïóòåì ñòðîãîé êîîðäèíèðîâàííîé ðåãóëÿöèè íåñêîëüêèõ ôåðìåíòîâ - ñôèíãîçèíêèíàçû, S1P-ôîñôàòàçû è S1P-ëèàçû [127]. Ïîêàçàíî, ÷òî èç-çà îòíîñèòåëüíîé âîäîðàñòâîðèìîñòè S1P ìîæåò ïîêèäàòü êàê ìåìáðàíó, òàê è ñàìó êëåòêó. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû S1P ðàçëè÷íû è ñâÿçàíû ñ åãî ëîêàëèçàöèåé âíóòðè èëè âíå êëåòêè [128]. Ïîìèìî S1P, â ïîñëåäíèå ãîäû áûë îòêðûò åùå îäèí àêòèâíûé ëèçîñôèíãîëèïèäíûé ðåãóëÿòîð - ñôèíãîçèë-ôîñôîðèëõîëèí (SPC), ïðîäóêò äåàöèëèðîâàíèÿ ÑÌ. Íåêîòîðûå ýôôåêòû SPC ñâÿçûâàþò ñ åãî ïðåäïîëàãàåìîé ñïîñîáíîñòüþ ê àêòèâàöèè NOñèíòàçû è äåéñòâèåì íà ñâÿçàííûé ñ íåé ìåòàáîëè÷åñêèé ïóòü [85]. Âìåñòå ñ S1P SPC áûë îáíàðóæåí â ËÍÏ, îñîáåííî â èõ îêèñëåííûõ ôîðìàõ. Ïîêàçàíî, ÷òî è S1P, è SPC ÿâëÿþòñÿ êëþ÷åâûìè ñèãíàëüíûìè ìîëåêóëàìè, âîâëå÷åííûìè â ñòèìóëÿöèþ êëåòî÷íîãî ðîñòà [129]. Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî, ïî êðàéíåé ìåðå, ÷àñòü ìèòîãåííîãî è àòåðîãåííîãî ýôôåêòîâ ËÍÏ îáóñëîâëåíû ñâÿçàííûìè ñ íèìè S1P è SPC [130, 131]. Ïîêàçàíî, ÷òî ñôèíãîçèí, S1P è SPC ÿâëÿþòñÿ ïîòåíöèàëüíûìè êàëüöèé-ìîáèëèçóþùèìè àãîíèñòàìè: S1P óñèëèâàåò èíèöèèðóåìîå ñôèíãîçèíîì âûñâîáîæäåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+ [132], à SPC ìîæåò ìîáèëèçîâàòü Ñà2+ â ãëàäêîìûøå÷íûõ è ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ [133, 134]. Ðåãóëÿòîðíûå âîçäåéñòâèÿ ëèçîñôèíãîëèïèäîâ ÷àñòî 99 ñî÷åòàþòñÿ ñ äåéñòâèÿìè ëèçîÔË, îñîáåííî ëèçîÔÊ, ïîýòîìó â ïîñëåäíåå âðåìÿ óäåëÿåòñÿ áîëüøîå âíèìàíèå êîìïëåêñíîìó äåéñòâèþ ýòèõ ëèçîÔË. 3.5.2. Ëèçîãëèö öåðîôîñôîëèïèäû. Íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäîì â êëåòî÷íîé ìåìáðàíå ÿâëÿåòñÿ ëèçîÔÕ; îí ïðåäñòàâëåí òàêæå â ËÍÏ êðîâè, îñîáåííî â îêèñëåííî ìîäèôèöèðîâàííûõ ËÍÏ, à òàêæå â áåçëèïîïðîòåèíîâîé ôðàêöèè ñûâîðîòêè â êîìïëåêñå ñ àëüáóìèíîì. ËèçîÔÕ ñîñòàâëÿåò â ñðåäíåì 6 - 9% îò âñåõ ÔË ñûâîðîòêè. Äðóãèå ëèçîÔË ïðèñóòñòâóþò â ñûâîðîòêå è â ëèïîïðîòåèíàõ â çíà÷èòåëüíî ìåíüøèõ, íå îïðåäåëÿåìûõ ïðè îáû÷íîì ôîñôîëèïèäíîì àíàëèçå êîëè÷åñòâàõ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êîíöåíòðàöèè ëèçîÔÊ è S1P â íîðìàëüíîé ñûâîðîòêå ìîãóò ñîñòàâëÿòü ïðèáëèçèòåëüíî 10 ìêÌ è 0,5 ìêÌ ñîîòâåòñòâåííî [135, 136]. Óâåëè÷åíèå óðîâíÿ ëèçîÔË â ðåçóëüòàòå èçìåíåííîãî ìåòàáîëèçìà ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ ñâÿçàíî ñ ðàçâèòèåì ðÿäà çàáîëåâàíèé, òàêèõ, êàê èøåìèÿ è àðèòìèÿ ìèîêàðäà, èøåìèÿ è äåìèåëèíèçàöèÿ ïåðèôåðè÷åñêèõ íåðâîâ. Äîëãîå âðåìÿ ðàçëè÷íûå ýôôåêòû ëèçîÔË îáúÿñíÿëè â îñíîâíîì èõ ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûìè èëè äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè. Èñïîëüçîâàíèå íîâûõ ìåòîäè÷åñêèõ ïîäõîäîâ (âûñîêîðàçðåøàþùèõ îïòè÷åñêèõ ìåòîäîâ, ðàçëè÷íûõ çîíäîâ, ìîäåëüíûõ ìåìáðàííûõ ñèñòåì è äð.) ïîçâîëèëî èññëåäîâàòåëÿì äîáèòüñÿ ñóùåñòâåííûõ óñïåõîâ â âûÿñíåíèè ðîëè è ó÷àñòèÿ ýòèõ ñîåäèíåíèé â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è, îñîáåííî, â òðàíñäóêöèè êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ.  ñâÿçè ñ áîëüøåé äîñòóïíîñòüþ ëèçîÔÕ ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè ëèçî-ïðîèçâîäíûìè, áîëüøèíñòâî èññëåäîâàíèé áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ â òå÷åíèå ðÿäà ëåò ïðîâîäèëè èìåííî íà ýòîì ëèçîÔË. Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî, âîçäåéñòâóÿ íà ãåííóþ ýêñïðåññèþ, ëèçîÔÕ îêàçûâàåò âëèÿíèå íà êëåòî÷íûå îòâåòû. ËèçîÔÕ ó÷àñòâóåò â ïðîÿâëåíèè íåêîòîðûõ áèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé ëèïîïðîòåèíîâ, ñòèìóëèðóåò ðîñò ìàêðîôàãîâ, îáóñëàâëèâàåò îïîñðåäîâàííûå ïðîòåèíêèíàçîé Ñ àêòèâàöèþ Òëèìôîöèòîâ è äèôôåðåíöèàöèþ HL-60 êëåòîê â ìàêðîôàãè [137]. Ïîëó÷åíû äàííûå, ÷òî ëèçîÔÕ îêàçûâàåò ìèòîãåííûé ýôôåêò íà ìàêðîôàãè ìûøåé, èíäóöèðóÿ ýêñïðåññèþ ãåíîâ ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ, âîâëå÷åííûõ â àòåðîãåíåç è âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû. Îí ìîæåò ðåãóëèðîâàòü ýêñïðåññèþ ìîëåêóë àäãåçèè íà ïîâåðõíîñòè ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, ìîäóëèðîâàòü çàâèñèìóþ îò ýíäîòåëèÿ àðòåðèàëüíóþ ðåëàêñàöèþ, ïðîÿâëÿÿ, òàêèì îáðàçîì, âàçîàêòèâíûå ñâîéñòâà [138]. 100 ËèçîÔÕ ìîæåò òàêæå óñèëèâàòü èììóííûå îòâåòû. Íàïðèìåð, îí ñòèìóëèðóåò ôàãîöèòîç ìàêðîôàãîâ è ëåéêîöèòîâ. Ïîëàãàþò, ÷òî ëèçîÔÕ, ëèáî èç ËÍÏ, ëèáî èç ìåìáðàííûõ ÔË ïîâðåæäåííûõ êëåòîê, èãðàåò îïðåäåëåííóþ ðîëü íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àòåðîñêëåðîçà è â âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññàõ. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî ëèçîÔÕ è åãî ïðîèçâîäíûå ïðîÿâëÿþò ïðîòèâîîïóõîëåâûå ñâîéñòâà è áàêòåðèöèäíóþ àêòèâíîñòü. Ïðè âêëþ÷åíèè ëèçîÔÕ â ìåìáðàíû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà íàáëþäàëè ñíèæåíèå àêòèâíîñòè Ñà2+-ÀÒÔàçû áåç èçìåíåíèÿ ïîäâèæíîñòè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé [139]. Àâòîðû ïðåäïîëîæèëè, ÷òî â îñíîâå ñíèæåíèÿ àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ëåæàò èçìåíåíèÿ ïîâåðõíîñòíûõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû, âëèÿþùèå íà êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ Ñà-ÀÒÔàçû, à òàêæå äåéñòâèå ëèçîÔÕ îïîñðåäîâàííîå ñèãíàëüíîé òðàíñäóêöèåé. Äðóãèì âûñîêî àêòèâíûì ëèçîãëèöåðîÔË ÿâëÿåòñÿ ëèçîÔÊ, ñîäåðæàùàÿ - êàê è ëèçîñôèíãîëèïèäû - îäíó äëèííóþ óãëåâîäîðîäíóþ öåïü è ôîñôàòíî-ãèäðîêñèëüíóþ ïîëÿðíóþ "ãîëîâêó".  êëåòî÷íûõ ìåìáðàíàõ ïðèñóòñòâóþò ìèíîðíûå, åäâà îïðåäåëÿåìûå êîëè÷åñòâà ñâîáîäíîé ëèçîÔÊ, ÷òî, âîçìîæíî, ñâÿçàíî ñ îáðàòíûì ïðåâðàùåíèåì åå â ÔÊ ïîä äåéñòâèåì ëèçîÔÊàöèëòðàíñôåðàçû, èëè áûñòðûì ðàñùåïëåíèåì ñ ïîìîùüþ ëèçîôîñôîëèïàç. Ýòîò ïðîñòåéøèé ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèä ÿâëÿåòñÿ ìóëüòèôóíêöèîíàëüíûì ôîñôîëèïèäîì, ñïîñîáíûì âûçûâàòü ðàçëè÷íûå áèîëîãè÷åñêèå îòâåòû, âêëþ÷àÿ àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, ñîêðàùåíèå ãëàäêîé ìóñêóëàòóðû, ïðîëèôåðàöèþ è äèôôåðåíöèðîâêó êëåòîê, ñîêðàùåíèå àêñîíîâ, àññîöèàöèþ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë è äð.  ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíî ó÷àñòèå ëèçîÔÊ â îïóõîëåâîì ðîñòå, à òàêæå, âìåñòå ñ ïðîñòàãëàíäèíàìè è ãàíãëèîçèäàìè, â àíãèîãåíåçå [140-146]. Ñóùåñòâåííûé ïîäúåì óðîâíÿ ëèçîÔÊ îáíàðóæåí â ñûâîðîòêå êðîâè æåíùèí, ñòðàäàþùèõ êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ, ïðè÷åì ýòîò ïîäúåì íàáëþäàëñÿ óæå íà ïåðâîé ñòàäèè áîëåçíè. Ïîýòîìó áûëî ïðåäëîæåíî èñïîëüçîâàòü ëèçîÔÊ â êà÷åñòâå íîâîãî ìàðêåðà ïðè îïóõîëè ÿè÷íèêîâ [140]. Êðîìå òîãî, îíà èíäóöèðóåò ïðîëèôåðàöèþ è ìèòîãåííûé ñèãíàëèíã êëåòîê ðàêà ïðîñòàòû [141]. Ïðèñóòñòâèå ëèçîÔÊ ïîêàçàíî è â ôîëëèêóëÿðíîé æèäêîñòè ÿè÷íèêîâ çäîðîâûõ æåíùèí [142]. Ýòîò ôàêò ïîçâîëèë ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ëèçîÔÊ, êàê áèîëîãè÷åñêèé ìåäèàòîð ãåíåðèðóåòñÿ ðåïðîäóêòèâíûìè òêàíÿìè, èãðàÿ, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, ìíîæåñòâåííóþ ðîëü è â ìóæñêîé, è â æåíñêîé ðåïðîäóêòèâíîé ôèçèîëîãèè è ïàòîëîãèè [141]. 101 Òàêèì îáðàçîì, ëèçîÔÊ, S1P è SPÑ ðàññìàòðèâàþòñÿ ñåé÷àñ êàê âàæíûå âíåêëåòî÷íûå ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû, êîòîðûì ñâîéñòâåííû ðàçëè÷íûå ýôôåêòû [143], âêëþ÷àÿ ìèòîãåíåç, äèôôåðåíöèðîâêó, ìèãðàöèþ êëåòîê, àïîïòîç, à òàêæå ðåãóëÿöèþ òàêèõ ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, êàê àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ, ñîñóäîñóæèâàþùàÿ àêòèâíîñòü, çàæèâëåíèå ðàí, èììóíîìîäóëÿöèÿ è àíãèîãåíåç. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ýòè ñîåäèíåíèÿ êàê ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû ó÷àñòâóþò â ðåãóëÿöèè òàêèõ ïðîöåññîâ, êàê ìîáèëèçàöèÿ êàëüöèÿ, èíãèáèðîâàíèå àäåíèëàòöèêëàçû è àêòèâàöèÿ ìèòîãåí-àêòèâèðóþùåé ïðîòåèíêèíàçû (ÌÀPK). S1P òàêæå âîâëå÷åí â öåðåáðàëüíûé âàçîñïàçì. Ïîêàçàíî, ÷òî ëèçîÔË ñïîñîáñòâóþò ïîâûøåíèþ óðîâíåé èíîçèò-1,4,5-òðèôîñôàòà, äèãëèöåðèäà, ôîñôàòèäíîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò. Íåêîòîðûå ëèçîÔË èíèöèèðóþò è ðåãóëèðóþò ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê ñ ïîìîùüþ ìåõàíèçìîâ, èìåþùèõ ñõîäñòâî ñ ïðîöåññàìè, èíèöèèðóåìûìè îñíîâíûìè ïîëèïåïòèäíûìè ôàêòîðàìè ðîñòà [141, 144 - 146]. Ïðè ýòîì ïîìèìî èíèöèèðóåìûõ ðîñòîâûõ ýôôåêòîâ, ëèçî-ïðîèçâîäíûå â êëåòêå ôóíêöèîíèðóþò êàê ìåäèàòîðû ìíîæåñòâåííûõ êëåòî÷íûõ îòâåòîâ. Ëèçîôîñôîëèïèäû, áëàãîäàðÿ áîëüøèì ïîëÿðíûì "ãîëîâêàì", îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ èíèöèèðîâàòü ôóíêöèîíèðîâàíèå ìåìáðàííûõ Ê+-êàíàëîâ (ò.í. TREK-êàíàëîâ), âûñîêèé óðîâåíü ýêñïðåññèè êîòîðûõ îòìå÷åí â öåíòðàëüíîé è ïåðèôåðè÷åñêîé íåðâíîé ñèñòåìå (íî íå îáíàðóæåí â ñåðäöå). Ýòè êàíàëû ðåãóëèðóþòñÿ ôîñôîðèëèðîâàíèåì è îòêðûâàþòñÿ ïîä äåéñòâèåì ðàçëè÷íûõ ôèçè÷åñêèõ è õèìè÷åñêèõ ñòèìóëîâ (ëèçîÔË, ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû è ëåòó÷èå àíåñòåòèêè) [147, 148]. 3.5.3. Ñî÷åòààííîå äåéñòâèå ñôèíãîëèïèäîâ è ëèçîÔË íàà êëåòî÷íûå ïðîö öåññû.  ïðîöåññàõ áèîñèíòåçà ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ è ñôèíãîëèïèäîâ è îñóùåñòâëÿåìûõ ñ èõ ó÷àñòèåì ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëà ïðîÿâëÿþòñÿ ìíîãî÷èñëåííûå âçàèìîäåéñòâèÿ ìåæäó ýòèìè ãðóïïàìè ÔË. Ïðè ýòîì áèîõèìè÷åñêèå ðåàêöèè áèîñèíòåçà, ðàñùåïëåíèÿ è ñèãíàëèíãà òåñíî âçàèìîñâÿçàíû è ñòðîãî êîîðäèíèðîâàíû äðóã ñ äðóãîì. Ïðåäëîæåíî òðè îñíîâíûõ ìåõàíèçìà, ïî êîòîðûì ïðîèñõîäèò óñèëåíèå ñèíòåçà ôîñôàòèäíîé êèñëîòû ïðè ó÷àñòèè ñôèíãîçèíà, S1P è ëèçîÔÊ [77, 135, 149, 150]: (1) óâåëè÷åíèå ñ ïîìîùüþ ÑÌàçû îáðàçîâàíèÿ ÔÊ. Ýòî îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ñîçäàíèÿ â ìåìáðàíå áëàãîïðèÿòíûõ óñëîâèé äëÿ ðàñùåïëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ ôîñôîëèïàçîé D; 102 (2) ñòèìóëÿöèÿ àêòèâíîñòè ôîñôîëèïàçû D ëèçîôîñôàòèäíîé êèñëîòîé [150]; (3) ðåãóëÿöèÿ ñ ïîìîùüþ ñôèíãîçèíà è S1P âçàèìîïðåâðàùåíèÿ ÔÊ è äèãëèöåðèäà çà ñ÷åò ñòèìóëèðîâàíèÿ îáðàçîâàíèÿ ÔÊ è èíãèáèðîâàíèÿ ìåòàáîëè÷åñêèõ ïóòåé åå ðàñùåïëåíèÿ (îáðàçîâàíèå ëèçîÔÊ è ïîñëåäóþùåå åå ðàñùåïëåíèå äî ìîíîãëèöåðèäîâ). Âçàèìîäåéñòâèÿ ëèçîÔÊ è S1P ìîãóò áûòü êàê êîîïåðàòèâíûìè, òàê è àíòàãîíèñòè÷åñêèìè. Íàïðèìåð, ñôèíãîçèí è S1P èíãèáèðóþò êàòàëèçèðóåìîå ôîñôîëèïàçîé Ñ îáðàçîâàíèå ìîíî- è äèãëèöåðèäîâ, ïîäàâëÿÿ òåì ñàìûì ñòèìóëÿöèþ ïðîòåèíêèíàçû Ñ, â òî âðåìÿ, êàê ëèçîÔÊ ñòèìóëèðóåò ýòîò ïðîöåññ. Èíèöèàöèÿ ïðîöåññîâ ñèãíàëèíãà ñ ïîìîùüþ ëèçîÔË íà÷èíàåòñÿ ñ èõ ïðèñîåäèíåíèÿ ê íåäàâíî îòêðûòûì ñïåöèôè÷åñêèì ðåöåïòîðàì (íàçûâàåìûì Edg-ðåöåïòîðàìè). Áóäó÷è âñòðîåíûìè â ìåìáðàíó, îíè âçàèìîäåéñòâóþò ñ óíèâåðñàëüíûìè ðåãóëÿòîðíûìè G-áåëêàìè. Edg-ðåöåïòîðû ÿâëÿþòñÿ ãðóïïîé ñîïðÿæåííûõ ñ G-áåëêàìè ðåöåïòîðîâ, GPCRðåöåïòîðîâ (G-protein coupled receptors), àêòèâèðîâàíèå êîòîðûõ ïðèâîäèò ê "çàïóñêó" ðÿäà âíóòðèêëåòî÷íûõ ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ [151, 152]. C ïîìîùüþ ýòèõ ïðîöåññîâ ëèçîÔË, êàê óíèêàëüíûå ìåäèàòîðû àêòèâíîñòè Edg-ðåöåïòîðîâ, ñïîñîáñòâóþò ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè áèîëîãè÷åñêè âàæíûõ áåëêîâ, îêàçûâàÿ âëèÿíèå íà èõ ñîäåðæàíèå è/èëè àêòèâíîñòü è, òåì ñàìûì, íà ìíîãèå êëåòî÷íûå ïðîöåññû, òàêèå êàê: ïîâûøåíèå ÿäåðíûõ òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ, ïîäàâëåíèå àêòèâíîñòè êàñïàç ïðè àïîïòîçå, ïîâûøåíèå ìåìáðàííîãî ñîäåðæàíèÿ ãåïàðèí-ñâÿçûâàþùåãî ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Ýôôåêòèâíî ïðèñîåäèíÿÿñü ê îäíîìó è áîëåå ðåöåïòîðàì, ëèçîÔË ìîãóò âûçûâàòü ïîìèìî ðîñòîâûõ, ìíîæåñòâî äðóãèõ êëåòî÷íûõ îòâåòîâ [135]. Ìíîãî÷èñëåííûå áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ñôèíãîëèïèäîâ è ëèçîÔË äàþò îñíîâàíèÿ äëÿ ïðåäñêàçàíèÿ âîçìîæíîñòè ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ èõ àãîíèñòîâ èëè àíòàãîíèñòîâ, âîçäåéñòâóþùèõ íà íåêîòîðûå êîíòðîëèðóåìûå ýòèìè ÔË ïðîöåññû. Íàïðèìåð, áûëà ïðîèçâåäåíà ïîïûòêà ëîêàëüíîãî èñïîëüçîâàíèÿ öåðàìèäà: ïîêðûòûé èì áàëëîíîâûé êàòåòåð ñíèæàë â ýêñïåðèìåíòå íåîèíòèìàëüíóþ ãèïåðïëàçèþ ïîñëå ïîâðåæäåíèÿ ñîííîé àðòåðèè êðîëèêà [153]. Ñïîñîáíîñòü ëèçîÔÊ è S1P ê ïîäàâëåíèþ àïîïòîçà ìîæåò áûòü â ïðèíöèïå èñïîëüçîâàíà, íàïðèìåð, äëÿ ïðîäëåíèÿ æèçíè òðàíñïëàíòèðîâàííîãî îðãàíà, çàùèòû êàðäèîìèîöèòîâ, ïîâðåæäåííûõ ïðè èøåìèè [135]. Ëîêàëüíàÿ äîñòàâêà àãîíèñòîâ 103 ëèçîÔË ìîãëà áû áûòü âûãîäíà ïðè âîññòàíîâëåíèè òêàíåé è àíãèîãåíåçå, â òî âðåìÿ êàê â äðóãèõ ñèòóàöèÿõ ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû àíòàãîíèñòû ëèçîÔË ðåöåïòîðîâ, íàïðèìåð, äëÿ ñíèæåíèÿ êëåòî÷íîé ïðîëèôåðàöèè ñ öåëüþ îãðàíè÷åíèÿ ñêëåðîçà è ôóíêöèîíàëüíî ðàçðóøèòåëüíîãî ôèáðîçà.  òî æå âðåìÿ íåîáõîäèìî ïîíèìàòü, ÷òî ðîñò-ñòèìóëèðóþùàÿ àêòèâíîñòü ëèçîÔÊ è S1P ìîæåò òàêæå ñïîñîáñòâîâàòü ðàçâèòèþ è ðàñïðîñòðàíåíèþ îïóõîëè. Ïîýòîìó äëÿ âîçìîæíîñòè âìåøàòåëüñòâà â ýòó ñèñòåìó ëèçîôîñôîëèïèäíîé ðåãóëÿöèè íåîáõîäèìî áîëåå ãëóáîêîå ïîíèìàíèå ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ëèçîôîñôîëèïèäíûõ ðåöåïòîðîâ, âûÿñíåíèå ïóòåé ñèãíàëèíãà è èõ âçàèìîäåéñòâèé. 3.6. Ôóíêöèè æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ Ñóùåñòâåííàÿ äîëÿ ôóíêöèé ÔË ñâÿçàíà ñ îñîáûì çíà÷åíèåì èõ äëèííîöåïî÷å÷íûõ æèðíûõ êèñëîò ðàçíîé ñòåïåíè íåíàñûùåííîñòè. Òàê êàê âíóòðåííåå ãèäðîôîáíîå ïðîñòðàíñòâî ìåìáðàíû ìåæäó åå íàðóæíûì è âíóòðåííèì ñëîåì çàíèìàþò ãèäðîôîáíûå öåïè, òî èìåííî îíè âî ìíîãîì îïðåäåëÿþò êàê æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí, òàê è õàðàêòåð áåëîê-ëèïèäíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ äëÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Êðîìå òîãî, æèðíûå êèñëîòû, îòùåïëÿÿñü îò ÔË ñ ïîìîùüþ ôîñôîëèïàç, ñàìè ñòàíîâÿòñÿ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûìè ðåãóëÿòîðàìè - ïóòåì ãåíåðàöèè ïðîñòàãëàíäèíîâ è ëåéêîòðèåíîâ. Îáðàçóþùèåñÿ ïðîñòàãëàíäèíû, ëåéêîòðèåíû è ðÿä äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ ìîãóò â ìèíèìàëüíûõ êîíöåíòðàöèÿõ îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû [154-156]. Áîëüøîå âíèìàíèå â ïîñëåäíèå ãîäû óäåëÿåòñÿ, â ÷àñòíîñòè, ïîëèíåíàñûùåííûì æèðíûì êèñëîòàì, îñîáåííî ëèíîëåâîé è àðàõèäîíîâîé. Âàæíîå çíà÷åíèå ïðèäàåòñÿ ïîëèíåíàñûùåííûì æèðíûì êèñëîòàì ðÿäà n-3 êàê ïðåäøåñòâåííèêàì ïðîñòàãëàíäèíîâ. Îáðàçóþùèåñÿ ïðîñòàãëàíäèíû, ëåéêîòðèåíû è ðÿä äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ ìîãóò â ìèíèìàëüíûõ êîíöåíòðàöèÿõ îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû [157-159]. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 3. 1. Singer S.J., Nicolson G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science. 1972, 175, 720-731. 2. Vance J.E., Vance D.E. Specific pools of phospholipids are used for lipoprotein secretion by cultured hepatocytes. J Biol Chem. 1986, 261, 4486-4491. 3. Thompson W., MacDonald G. Isolation and characterization of 104 cytidine diphosphate diglyceride from beef liver. J Biol Chem. 1975, 250, 6779-6785. 4. Lambeth J.D., Ryu S.H. Glycerolipids in signal transduction. In: Biochemistry of lipids, lipoproteins and membranes. (Vance D.E, Vance J.E. eds.). Elsevier Science, Amsterdam. 1996, 237-255. 5. Merrill A.H.J., Sweely C.C. Sphingolipid: metabolism and cell signalling. In: Biochemistry of lipids, lipoproteins and membranes. (Vance D.E., Vance J.E. eds). Elsevier Science, Amsterdam. 1996, 1-34. 6. Cui Z., Houwelin M. Phosphatidylcholine and cell death. Biochim Biophys Acta. 2002, 1585, 87-96. 7. Terce F., Brun H., Vance D.E. Requirement of phosphatidylcholine for normal progression through the cell cycle in C3H/10T1/2 fibroblasts. J Lipid Res. 1994, 35, 2130-2142. 8. Jackowski S.A. Cell cycle regulation of membrane phospholipid metabolism. J Biol Chem. 1996, 271, 20219-20222. 9. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Íàóêà, Ì. 1982. 10. Killian J.A., van Meer G. The ”double life” of membrane lipids. Workshop: A lipid milestone. EMBO Reports. 2001, 21, 91-95. 11. Pomorski T., Hrafnsdottir S., Devaux P.F., van Meer G. Lipid distribution and transport across cellular membranes. Semin Cell Dev Biol. 2001, 12, 139-148. 12. Ahmed H.A., Jazrawi R.P., Goggin P.M., Dormandy J., Northfield T.C. Intrahepatic biliary cholesterol and phospholipid transport in humans: effect of obesity and cholesterol cholelithiasis. J Lipid Res. 1995, 36, 2562-2573. 13. Moschetta A., vanBerge-Henegouwen G.P., Portincasa P., Palasciano G., van Erpecum K.J. Cholesterol crystallization in model biles: effects of bile salt and phospholipid species composition. J Lipid Res. 2001, 42, 1273-1281. 14. Zeisel S.H. Choline: needed for normal development of memory. J Am Coll Nutr. 2000, 19, 528-531. 15. Veldhuizen R., Possmayer F. Phospholipid metabolism in lung surfactant. Subcell Biochem. 2004, 37, 359-388. 16. Bevers E.M, Comfurius P., Zwaal R.F. Changes in memdrane phospholipid distribution during platelet activation. Biochim Biophys Acta. 1983, 736, 57-66. 17. Tanaka Y., Schroit A.J. Insertion of fluorescent phosphatidylserine into the plasma membrane of red blood cells. Recognition by autologous macrophages. J Biol Chem. 1983, 258, 11335-11343. 18. Schlegel R.A., Prendegrast T.W., Williamson P. Membrane phospholipid asymmetry as a factor in erythrocyte-endothelial cell interactions. J Cell Physiol, 1985, 123, 215-218. 19. Schwartz R.S., Tanaka Y., Fidler I.J., Chiu D.T., Lubin B., Schroit A.J. Increased adherence of sickled and phosphatidylserine-enriched human erythrocytes to cultured human peripheral blood monocytes. J Clin Invest. 1985, 75, 1965-1972. 20. McEvoy L., Williamson P., Schlegel R.A. Membrane phospho105 lipid asymmetry as a determinant of erythrocyte recognition by macrophages. Proc Natl Acad Sci USA. 1986, 83, 3311-3315. 21. Devaux P.F. Static and dynamic lipid asymmetry in cell membranes. Biochemistry. 1991, 30, 1163-1173. 22. Farge E., Ojcius D.M., Subtil A., Dautry-Varsat A. Enhancement of endocytosis due to aminophospholipid transport across the plasma membrane of living cells. Am J Physiol. 1999, 276, 725-733. 23. Bogdanov M., Dowhan W. Lipid-assisted protein folding. J Biol Chem. 1999, 274, 36827–36830. 24. Clark J.D., Schievella A.R., Nalefski E.A., Lin L.L. Cytosolic phospholipase A2. J Lipid Mediat Cell Signal. 1995, 12, 83-117. 25. Leslie C.C. Properties and regulation of cytosolic phospholipase A2. J Biol Chem. 1997, 272, 16709-16712. 26. Newton A.C., Johnson J.J. Protein kinase C: a paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting modules. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 155-172. 27. Newton A.C. Protein kinase C: structure, function, and regulation. J Biol Chem. 1995, 270, 28495-28498. 28. Kent C. CTP:phosphocholine cytidylyltransferase. Biochim Biophys Acta. 1997, 1348, 79-90. 29. Buckland A.G., Wilton D.C. Anionic phospholipids, interfacial binding and the regulatiojn of cell functions. Biochim Biophys Acta. 2000, 1483, 199-216. 30. de Kruijff B. Anionic phospholipids and protein translocation. FEBS Lett. 1994, 346, 78-82. 31. van Klompenburg W., de Kruijff B. The role of anionic lipids in protein insertion and translocation in bacterial membranes. J Membr Biol. 1998, 162, 1-7. 32. Liu L.P., Deber C.M. Anionic phospholipids modulate peptide insertion into membranes. Biochemistry. 1997, 36, 5476-5482. 33. Wimley W.C., White. S.H. Experimentally determined hydrophobicity scale for proteins at membrane interfaces. Nat Struct Biol. 1996, 3, 842-848. 34. Yau W.M., Wimley W.C., Gawrish K., White S.H. The preference of tryptophan for membrane interfaces. Biochemistry. 1998, 37, 14713-14718. 35. White S.H., Wimley W.C. Hydrophobic interactions of peptides with membrane interfaces. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 339-352. 36. Leslie C.C., Channon J.Y. Anionic phospholipids stimulate an arachidonoyl-hydrolyzing phospholipase A2 from macrophages and reduce the calcium requirement for activity. Biochim Biophys Acta. 1990, 1045, 261-270. 37 Mosior M., Six D.A., Dennis. E.A. Affinity and specificity to phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate resulting in dramatic increases in activity. J Biol Chem. 1998, 273, 2184-2191. 38. Scott D.L, Mandel A.M., Sigler P.B., Honig B. The electrostatic basis for the interfacial binding of secretory phospholipases A2. Biophys J. 1994, 67, 493-504. 106 39. Snitko Y., Koduri R.S., Han S.K., Othman R., Baker S.F., Molini B.J., Wilton D.C., Gelb M.H., Cho W.H. Mapping the interfacial binding surface of human secretory group IIa phospholipase A2. Biochemistry. 1997, 36, 14325-14333. 40. Koduri R.S., Baker S.F., Snitko Y., Han S.K., Cho W.H., Wilton D.C., Gelb M.H. Action of human group IIa secreted phospholipase A2 on cell membranes. Vesicle but not heparinoid binding determines rate of fatty acid release by exogenously added enzyme. J Biol Chem. 1998, 273, 32142-32153. 41. Cornell R.B. How cytidylyltransferase uses an amphipathic helix to sense membrane phospholipid composition. Biochem Soc Trans. 1998, 26, 539-544. 42. Mosior M., Newton A.C. Mechanism of the apparent cooperativity in the interaction of protein kinase C with phosphatidylserine. Biochemistry. 1998, 37, 17271-17279. 43. Zwaal R.F., Comfurius P., Bewers E.M. Lipid-protein interactions in blood coagulation. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 433-453. 44. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton D.L., Henson P.M. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J Immunol. 1992, 148, 2207-2216. 45. Bazzi M.D., Youakim A., Nelsestuen G.L. Importance of phosphatidylethanolamine for association of protein kinase C and other cytoplasmic proteins with membranes. Biochemistry. 1992, 31, 11251134 46. Boas F.F., Forman L., Beutler E. Phosphatidylserine exposure and red cell viability in red cell aging and in hemolytic anemia. Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 3077-3081. 47. Kagan V.E., Borisenko G.G., Serinkan B.F., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Jiang J., Liu S.X., Shvedova A.A., Fabisak J.P, Uthaisang W., Fadeel B. Appetizing rancidity of apoptotic cells for macrophages: oxidation, externalization and recognition of phosphatidylserine. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2003, 285, 1-17. 48. Fabisiak J.P., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Lazo J.S., Kagan V.E. Random versus selective membrane phospholipid oxidation in apoptosis: role of phosphatidylserine. Biochemistry. 1998, 37, 13781-13790. 49. Gerke V., Moss S.E. Annexins and membrane dynamics. Biochim Biophys Acta. 1997, 1357, 129-154. 50. Swairjo M.A., Concha N.O., Kaetzel M.A., Dedman J.R., Seaton.B.A. Ca(2+)-bridging mechanism and phospholipid head group recognition in the membrane-binding protein annexin V. Nat Struct Biol. 1995, 2, 968-974. 51. Davidson F.F., Dennis E.A., Powell M., Glenney J.R. Inhibition of phospholipase A2 by “lipocortins” and calpactins. An effect of binding to substrate phospholipids. J Biol Chem. 1987, 262, 1698-1705. 52. Aarsman A.J., Mynbeek G., van den Bosh H., Rothut B., Prieur B., Comera C., Jordan L., Russo-Marie F. Lipocortin inhibition of extracellular and intracellular phospholipases A2 is substrate concentration 107 dependent. FEBS Lett. 1987, 219, 176-180. 53. Buckland A.G., Wilton D.C. Inhibition of secreted phospholipases A2 by annexin V. Competition for anionic phospholipid interfaces allows an assessment of the relative interfacial affinities of secreted phospholipases A2. Biochim Biophys Acta. 1998, 1391, 367-376. 54. Stuart M.A., Reutelingspeger C.M., Frederik P.M. Binding of annexin V to bilayers with various phospholipid compositions using glass beads in a flow cytometer. Cytometry. 1998, 33, 414-419. 55. Swairjo M.A., Roberts M.F., Campos M.B., Dedman J.R., Seaton B.A. Annexin V binding to the outer leaflet of small unilamellar vesicles leads to altered inner-leaflet properties: 31P- and 1H-NMR studies. Biochemistry. 1994, 33, 10944-10950. 56. Geng D., Chura J., Roberts M.F. Activation of phospholipase D by phosphatidic acid. Enhanced vesicle binding, phosphatidic acidCa2+ interaction, or an allosteric effect? J Biol Chem. 1998, 273, 1219512202. 57. Kinkaid A.R., Othman R., Voysey J., Wilton D.C. Phospholipase D and phosphatidic acid enhance the hydrolysis of phospholipids in vesicles and in cell membranes by human secreted phospholipase A2. Biochim Biophys Acta. 1998, 1390, 173-185. 58. Balsinde J., Balboa M.A., Insel P.A., Dennis E.A. Regulation and inhibition of phospholipase A2. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1999, 39, 175-189. 59. Murakami M., Kambe T., Shimbara S., Kudo I. Functional association of type IIA secretory phospholipase A(2) with the glycosylphosphatidylinositol-anchored heparan sulfate proteoglycan in the cyclooxygenase-2-mediated delayed prostanoid-biosynthetic pathway. J Biol Chem. 1999, 274, 3103-3115. 60. Murakami M., Nakatani Y., Atsumi G., Inoue K., Kudo I. Regulatory functions of phospholipase A2. Crit Rev Immunol. 1997, 17, 225-283. 61. Fourcade O., Le Balle F., Fauvel J., Simon M.F., Chap H. Regulation of secretory type-II phospholipase A2 and of lysophosphatidic acid synthesis. Adv Enzyme Regul. 1998, 38, 99-107. 62. Stamnes M., Schiavo C., Stenbeck G., Sollner T.H., Rothman J.E. ADP-ribosylation factor and phosphatidic acid levels in Golgi membranes during budding of coatomer-coated vesicles. Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 13676-13680. 63. Hodgkin M.N., Pettit T.R., Martin A., Michell R.H., Pemberton A.J., Wakelam M.J. Diacylglycerols and phosphatidates: which molecular species are intracellular messengers? Trends Biochem Sci. 1998, 23, 200-204. 64. Exton J.H. Phospholipase D: enzymology, mechanisms of regulation, and function. Physiol Rev. 1997, 77, 303-320. 65. Exton J.H. Phospholipase D. Biochim Biophys Acta. 1998, 1436, 105-115 66. Schmidt A., Wolde M., Thiele C., Fest W., Kratzin H., Podteleinikov A.V., Witke W., Huttner W.B., Soling H.D. Endophilin I 108 mediates synaptic vesicle formation by transfer of arachidonate to lysophosphatidic acid. Nature. 1999, 401, 133-141. 67. Stauffer T.P., Ahn S., Meyer T. Receptor-induced transient reduction in plasma membrane PtdIns(4,5)P2 concentration monitored in living cells. Curr Biol. 1998, 8, 343-346. 68. Fruman D.A., Rameh L.E., Cantley L.C. Phosphoinositide binding domains: embracing 3-phosphate. Cell. 1999, 97, 817-820. 69. Hsuan J.J., Minogue S., dos Santos M. Phosphoinositide 4- and 5kinases and the cellular roles of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate. Adv Cancer Res. 1998, 74, 167-216. 70. Toker A. Phosphoinositides and signal transduction. Cell Mol Life Sci. 2002, 59, 761-779. 71. Pendaries C., Tronchere H., Plantavid M., Payrastre B. Phosphoinositide signaling disorders in human diseases FEBS Lett. 2003, 546, 25-31 72. Sattler M., Verma S., Pride Y.B., Salgia R., Rohrschneider L.R., Griffin J.D. SHIP1, an SH2 domain containing polyinositol-5-phosphatase, regulates migration through two critical tyrosine residues and forms a novel signaling complex with DOK1 and CRKL. J Biol Chem. 2001, 276, 2451-2458. 73. Raucher D., Stauffer T., Chen W., Shen K., Guo S., York J.D., Sheetz M.P., Meyer T. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate functions as a second messenger that regulates cytoskeleton-plasma membrane adhesion. Cell. 2000, 100, 221-228. 74. Breitschopf K., Zeiher A.M., Dimmeler S. Pro-atherogenic factors induce telomerase inactivation in endothelial cells through an Aktdependent mechanism. FEBS Lett. 2001, 493, 21-25. 75. Cerbon J., Falcon A., Hernandez-Luna C., Segura-Cobos D. Inositol phosphoryl ceramide synthase a regulator of intracellular levels of diacylglcerol and ceramide during the G1 to S transition in Saccharomyces cerevisae. Biochem J. 2004, Nov 24; [Epub ahead of print]. 76. Murray N.R., Fields A.P. Phosphatidylglycerol is a physiologic activator of nuclear protein kinase C. J Biol Chem. 1998, 273, 1151411520. 77. Spiegel S., Merrill A.H. Sphingolipid metabolism and cell growth regulation. FASEB J. 1996, 10, 1388–1397. 78. Hannun Y.A., Luberto C. Ceramide in the eukaryotic stress response. Trends Cell Biol. 2000, 10, 73–80. 79. Levade T., Auge N. Sphingolipid mediators in cardiovascvular cell biology and pathology. Circulation Res. 2001, 89, 957-977. 80. van Meer G., Holthuis J.C. Sphingolipid transport in eukaryotic cells. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 145–170. 81. Koval M., Pagano R.E. Intracellular transport and metabolism of sphingomyelin. Biochim Biophys Acta. 1991, 1082, 113–125. 82. Yeagle P.L. Cholesterol and the cell membrane. Biochim Biophys Acta. 1985, 822, 267-287. 83. Holthuis J.C., Pomorski T., Raggers R.J., Sprong H., van Meer G. 109 The organizing potential of sphingolipids in intracellular membrane transport. Physiol Rev. 2001, 81, 1689-1723. 84. Wu J., Spiegel S., Sturgill T.W. Sphingosine 1-phosphate rapidly activates the mitogen-activated protein kinase pathway by a G protein–dependent mechanism. J Biol Chem. 1995, 270, 11484–11488. 85. Fogli S., Nieri P., Breschi M.C. The role of nitric oxide in anthracycline toxicity and prospects of pharmacological prevention of cardiac damage. FASEB J. 2004, 18, 664-675. 86. Lopez-Marure R., Ventura J.L., Sanchez L., Montano L.F., Zentella A. Ceramide mimics TNF in the induction of cell cycle arrest in endothelial cells. Eur J Biochem. 2000, 267, 4325–4333. 87. Masamune A., Igarashi Y., Hakomori S. Regulatory role of ceramide in interleukin (IL)-1-ß-induced E-selectin expression in human umbilical vein endothelial cells. J Biol Chem. 1996, 271, 9368–9375. 88. Boucher L.M., Wiegmann K., Futterer A., Pfeffer K., Machleidt T., Schutze S., Mak T.W., Kronke M. CD28 signals through acidic sphingomyelinase. J Exp Med. 1995, 181, 2059-2068. 89. Kim M.Y., Linardic C., Obeid L., Hannun Y. Identification of sphingomyelin turnover as an effector mechanism for the action of tumor necrosis factor alpha and gamma-interferon. Specific role in cell differentiation. J Biol Chem. 1991, 266, 484-489. 90. Obeid L.M., Linardic C.M., Karolak L.A., Hannun Y.A. Programmed cell death induced by ceramide. Science. 1993, 259, 17691771. 91. Auge N., Nikolova-Karakashian M., Carpentier S., Parthasarathy S., Negre-Salvayre A., Salvayre R., Merrill A.H.Jr., Levade T. Role of sphingosine 1-phosphate in the mitogenesis induced by oxidized low density lipoprotein in smooth muscle cells via activation of sphingomyelinase, ceramidase, and sphingosine kinase. J Biol Chem. 1999, 74, 21533-21538. 92. Hannun Y.A., Luberto C., Argraves K.M. Enzymes of sphingolipid metabolism: from modulator to integrative signaling. Biochemistry. 2001, 40, 4893-4903. 93. Levade T., Jaffrezou J.P. Signaling sphingomyelinases: which, where, how and why? Biochim Biophys Acta. 1999, 1438, 1-17. 94. Zhu K., Baudhuin L.M., Hong G., Williams F.S., Cristina K.L., Kabarowski J.H., Witte O.N., Xu Y. Sphingosylphosphorylcholine and Lysophosphatidylcholine are ligands for the G protein-coupled receptor GPR4. J Biol Chem. 2001, 276, 41325-41335. 95. Ozaki H., Hla T., Lee M.J. Sphingosine-1-phosphate signaling in endothelial activation. J Atheroscler Thromb. 2003, 10, 125-131. 96. Dbaibo G.S., El-Assaad W., Krikorian A., Liu B., Diab K., Idriss N.Z., El-Sabban M., Driscoll T.A., Perry D.K., Hannun Y.A. Ceramide generation by two distinct pathways in TNF induced cell death. FEBS Lett. 2001, 503, 7-12. 97. O’Brien N.W., Gelling N.M., Guo M., Barlow S.B., Glembotski C.C., Sabbadini R.A. Factors associated with neutral sphingomyelinase 110 activation and its role in cardiac cell death. Circ Res. 2003, 92, 589-591. 98. Santana P., Pena L.A., Haimovitz-Friedman A., Martin S., Green D., McLoughlin M., Cordon-Cardo C., Schuchman E.H., Fuks Z., Kolesnick R. Acid sphingomyelinase-deficient human lymphoblasts and mice are defective in radiation-induced apoptosis. Cell. 1996, 86, 189–199. 99. Pena L.A., Fuks Z., Kolesnick R.N. Radiation-induced apoptosis of endothelial cells in the murine central nervous system: protection by fibroblast growth factor and sphingomyelinase deficiency. Cancer Res. 2000, 60, 321–332. 100. Paris F., Fuks Z., Kang A., Capodieci P., Juan G., Ehleiter D., Haimovitz-Friedman A., Cordon-Cardo C., Kolesnick R. Endothelial apoptosis as the primary lesion initiating intestinal radiation damage in mice. Science. 2001, 293, 293–297. 101. Haimovitz-Friedman A., Cordon-Cardo C., Bayoumy S., Garzotto M., McLoughlin M., Gallily R., Edwards C.K., Schuchman E.H., Fuks Z., Kolesnick R. Lipopolysaccharide induces disseminated endothelial apoptosis requiring ceramide generation. J Exp Med. 1997, 186, 1831–1841. 102. Andrieu-Abadie N., Jaffrezou J.P., Hatem S., Laurent G., Levade T., Mercadier J.J. L-Carnitine prevents doxorubicin-induced apoptosis of cardiac myocytes: role of inhibition of ceramide generation. FASEB J. 1999, 13, 1501–1510. 103. Lawlor M., Alessi D. PKB/Akt: a key mediator of cell proliferation, survival and insulin responses? J Cell Sci. 2001, 114, 2903-2910. 104. Harada-Shiba M., Kinoshita M., Kamido H., Shimokado K. Oxidized low density lipoprotein induces apoptosis in cultured human umbilical vein endothelial cells by common and unique mechanisms. J Biol Chem. 1998, 273, 9681–9687. 105. Deigner H.P., Claus R., Bonaterra G.A., Gehrke C., Bibak N., Blaess M., Cantz M., Metz J., Kinscherf R. Ceramide induces aSMase expression: implications for oxLDL-induced apoptosis. FASEB J. 2001, 15, 807–814. 106. Xia P., Wang L., Gamble J.R., Vadas M.A. Activation of sphingosine kinase by TNF inhibits apoptosis in human endothelial cells. J Biol Chem. 1999, 274, 34499–34505. 107. Cuvillier O., Pirianov G., Kleuser B., Vanek P.J., Coso O.A., Gutkind J.S., Spiegel S. Suppression of ceramide-mediated programmed cell death by sphingosine-1-phosphate. Nature. 1996, 381, 800–803. 108. Hisano N., Yatomi Y., Satoh K., Akimoto S., Mitsumata M., Fujino M.A., Ozaki Y. Induction and suppression of endothelial cell apoptosis by sphingolipids: a possible in vitro model for cell-cell interactions between platelets and endothelial cells. Blood. 1999, 93, 4293–4299. 109. Lee M.J., Thangada S., Claffey K.P., Ancellin N, Liu C.H., Kluk M., Volpi M., Sha’afi R.I., Hla T. Vascular endothelial cell adherens junction assembly and morphogenesis induced by sphingosine-1-phosphate. Cell. 1999, 99, 301–312. 111 110. Kwon Y.G., Min J.K., Kim K.M., Lee D.J., Billiar T.R., Kim Y.M. Sphingosine-1-phosphate protects human umbilical vein endothelial cells from serum-deprived apoptosis by nitric oxide production. J Biol Chem. 2001, 276, 10627–10633. 111. Malagarie-Cazenave S., Andrieu-Abadie N., Segui B., Gouaze V., Tardy C., Cuvillier O., Levade T. Sphingolipid signalling: molecular basis and role in TNF - induced cell death. Expert Rev Mol Med. 2002, 20, 1-15. 112. Henis Y.I., Moustakas A., Lin H.Y., Lodish H.F. The types II and III transforming growth factor-beta receptors form homooligomers. J Cell Biol. 1994, 126, 139-154. 113. Gilboa L., Wells R.G., Lodish H.F., Henis Y.I. Oligomeric structure of type I and type II transforming growth factor beta receptors: homodimers form in the ER and persist at the plasma membrane. J Cell Biol. 1998, 140, 767-777. 114. Yanaga F., Watson S.P. TNF-alpha stimulates sphingomyelinase through the 55 kDa receptor in HL-60 cells. FEBS Lett. 1992, 314, 297300. 115. Modur V., Zimmerman G.A., Prescott S.M., McIntyre T.M. Endothelial cell inflammatory responses to TNF. J Biol Chem. 1996, 271, 13094–13102 116. Kim I., Moon S.O., Kim S.H., Kim H.J., Koh Y.S., Koh G.Y. Vascular endothelial growth factor expression of intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1), and E-selectin through nuclear factor-B. J Biol Chem. 2001, 276, 7614–7620. 117. Slowik M.R., De Luca L.G., Min W., Pober J.S. Ceramide is not a signal for TNF-induced gene expression but does cause programmed cell death in human vascular endothelial cells. Circ Res. 1996, 79, 736–747. 118. Xia P., Gamble J.R., Rye K.A., Wang L., Hii C.S., Cockerill P., Khew-Goodall Y., Bert A.G., Barter P.J., Vadas M.A. TNFα induces adhesion molecule expression through the sphingosine kinase pathway. Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 14196–14201. 119. Xia P., Wang L., Gamble J.R., Vadas M.A. Activation of sphingosine kinase by TNFα inhibits apoptosis in human endothelian cell. J Biol Chem. 1999, 274, 34499-34505. 120. Wang A., Dennis E.A. Mammalian lysophospholipases. Biochim Biophys Acta. 1999, 1439, 1-16. 121. Yatomi Y., Ohmori T., Rile G., Kazama F., Okamoto H., Sano T., Satoh K., Kume S., Tigyi G., Igarashi Y., Ozaki Y. Sphingosine-1phosphate as a major bioactive lysophospholipid that is released from platelets and interacts with endothelial cells. Blood. 2000, 96, 3431–3438. 122. English D., Welch Z., Kovala A.T., Harvey K., Volpert O.V., Brindley D.N., Garcia J.G. Sphingosine-1-phosphate released from platelets during clotting accounts for the potent endothelial cell chemotactic activity of blood serum and provides a novel link between hemo112 stasis and angiogenesis. FASEB J. 2000, 14, 2255–2265. 123. Lee O.H., Kim Y.M., Lee Y.M., Moon E.J., Lee D.J., Kim J.H., Kim K.W., Kwon Y.G. Sphingosine-1-phosphate induces angiogenesis: its angiogenic action and signaling mechanism in human umbilical vein endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun. 1999, 264, 743–750. 124. Wang F., Van Brocklyn J.R., Hobson J.P., Movafagh S., Zukowska-Grojec Z., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate stimulates cell migration through a Gi-coupled cell surface receptor. J Biol Chem. 1999, 274, 35343–35350. 125. Olivera A., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate as second messenger in cell proliferation induced by PDGF and FCS mitogens. Nature. 1993, 365, 557-560. 126. Sano T., Baker D., Virag T., Wada A., Yatomi Y., Kobayashi T., Igarashi Y., Tigyi G. Multiple mechanisms linked to Platelet Activation result in Lysophosphatidic Acid and Sphingosine 1-Phosphate generation in blood. J Biol Chem. 2002, 227, 21197–21206. 127. Pyne S., Pyne N.J. Sphingosine-1-phosphate signalling in mammalian cells. Biochem J. 2000, 349, 385–402. 128. Hla T., Lee M.J., Ancellin N., Liu C.H., Thangada S., Thompson B.D., Kluk M. Sphingosine-1-phosphate: extracellular mediator or intracellular second messenger? Biochem Pharmacol. 1999, 58, 201–207. 129. Spiegel S., Milstein S. Sphingosine-1-phosphate, a key cell signaling molecule. J Biol Chem. 2002, 277, 25851-25854. 130. Sachinidis A., Kettenhofen R., Seewald S., Gouni-Berthold I., Schmitz U., Seul C., Ko Y., Vetter H. Evidence that lipoproteins are carriers of bioactive factors. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1999, 19, 2412-2421. 131. Gouni-Berthold I., Sachinidis A. Does the coronart risk factor low density lipoprotein alter growth and signaling in vascular smooth muscle cells? FASEB J. 2002, 16, 1477-1488. 132. Ghosh T.K., Bian J., Gill D.L. Intracellular calcium release mediated by sphingosine derivatives generated in cells. Science. 1990, 248, 1653–1656. 133. van Koppen C.J., Meyer Zu Heringdorf D., Laser K.T., Zhang C., Jakobs K.H. Bunemann M., Pott L. Activation of a high affinity Gi protein-coupled plasma membrane receptor by sphingosine-1-phosphate. J Biol Chem. 1996, 271, 2082–2087. 134. Nakajima N., Cavalli A.L., Biral D., Glembotski C.C., McDonough P.M., Ho P.D., Betto R., Sandona D., Palade P.T., Dettbarn C.A., Klepper R.E., Sabbadini R.A. Expression and characterization of Edg-1 receptors in rat cardiomyocytes: calcium deregulation in response to sphingosine-1-phosphate. Eur J Biochem. 2000, 267, 5679–5686. 135. Goetzl E.J., An S. Diversity of cellular receptors and functions for the lysophospholipid growth factors lysophosphatidic acid and sphingosine 1-phosphate. FASEB J. 1998, 12, 1589-1598. 136. Chun J., Goetzl E.J., Hla T., Igarashi Y., Lynch K.R., Moolenaar 113 W., Pyne S., Tigyi G. International Union of Pharmacology. XXXIV. Lysophospholipid receptor nomenclature. Pharmacol Rev. 2002, 54, 265-269. 137. Ïðîêàçîâà Í.Â., Çâåçäèíà Í.Ä., Êîðîòàåâà À.À. Âëèÿíèå ëèçîôîñôàòèäèëõîëèíà íà ïåðåäà÷ó òðàíñìåìáðàííîãî ñèãíàëà âíóòðü êëåòêè. Áèîõèìèÿ. 1998, 63, 38-46. 138. Silliman C.C., Elzi D.J., Ambruso D.R., Musters R.J., Hamiel C., Harbeck R.J., Paterson A.J., Bjornsen A.J., Wyman T.H., Kelher M., England K.M., McLaughlin-Malaxecheberria N., Barnett C.C., Aiboshi J., Bannerjee A. Lysophosphatidylcholines prime the NADPH oxidase and stimulate multiple neutrophil functions through changes in cytosolic calcium. J Leucoc Biol. 2003, 73, 511-524. 139. Hunter G., Bigelow D., Squier T. Lysophosphatidylcholine modulates catalytically important motions of Ca-ATPase phosphorylation domain. Biochemistry. 1999, 38, 4604-4612. 140. Fang X., Gaudette D., Furui T., Mao M., Estrella V., Eder A., Pustilnik T., Sasagawa T., Lapushin R., Yu S., Jaffe R.B., Wiener J.R., Erickson J.R., Mills G.B. Lysophospholipid growth factors in the initiation, progression, metastases, and management of ovarian cancer. Ann N Y Acad Sci. 2000, 905, 188-208. 141. Budnik L.T., Mukhopadhyay A.K.. Lisophosphatidic acid and its role in reproduction. Biol Reprod. 2002, 66, 859-865. 142. Tokumura A., Miyake M., Nishioka Y., Yamano S., Aono T., Fukuzawa K. Production of lysophosphatidic acids by lysophospholipase D in human follicular fluids of In vitro fertilization patients. Biol Reprod. 1999, 61, 195-199. 143. Galaria I., Fegley A.J., Nicholl S.M., Roztocil E., Davies M.G. Differential regulation of ERK1/2 and p38(MAPK) by components of the Rho signaling pathway during sphingosine-1-phosphate-induced smooth muscle cell migration. J Surg Res. 2004, 122, 173-179. 144. Santos W.L., Rossi J.A., Boggs S.D., MacDonald T.L. The molecular pharmacology of lysophosphatide signaling. Ann N Y Acad Sci. 2000, 905,233–241. 145. Sorensen S.D., Nicole O., Peavy R.D., Montoya L.M., Lee C.J., Murphy T.J., Traynelis S.F., Hepler J.R. Common signaling pathways link activation of murine PAR-1, LPA, and S1P receptors to proliferation of astrocytes. Mol Pharmacol. 2003, 64, 1199-1209. 114 ÃËÀÂÀ 4. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄΠ ÏÐÎÖÅÑÑÀÕ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈß ÊËÅÒÊÈ Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè íàêîïëåíî ìíîãî äàííûõ î ðîëè ôîñôîëèïèäîâ â ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è ôóíêöèîíèðîâàíèè êëåòêè. Ýòî âàæíî äëÿ èçó÷åíèÿ è ïîíèìàíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ ïàòîëîãèé, ìíîãèå èç êîòîðûõ, êàê ïðàâèëî, ñîïðîâîæäàþòñÿ èçìåíåíèÿìè âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è öåëîñòíîñòè áèîìåìáðàí è, â òîé èëè èíîé ñòåïåíè, ïîâðåæäåíèÿìè êëåòêè â öåëîì. Íàðóøåíèå ôóíêöèé îäíèõ êëåòîê ìîæåò áûòü ïåðâîïðè÷èíîé ðàçâèòèÿ áîëåçíè, à ñîçäàâøèåñÿ íåáëàãîïðèÿòíûå èçìåíåíèÿ â îðãàíèçìå âëåêóò çà ñîáîé íàðóøåíèå ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê äðóãèõ òêàíåé è äàëüíåéøåå ðàçâèòèå ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà. Íàïðèìåð, ãèáåëü êëåòîê ñåðäå÷íîé ìûøöû ïðè èíôàðêòå ìèîêàðäà ìîæåò ïðèâåñòè ê ãèïîêñèè è íàðóøåíèþ ôóíêöèé êëåòîê äðóãèõ îðãàíîâ: ïî÷åê, ìîçãà, ïå÷åíè [1-5]. Ïðîöåññû, ïðèâîäÿùèå ê ïîâðåæäåíèþ êëåòêè, äàâíî ïðèâëåêàëè âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé.  ñåðåäèíå ïðîøëîãî âåêà îñíîâíûì êðèòåðèåì ïîâðåæäåíèÿ áûëî ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè êëåòî÷íîé ìåìáðàíû [6,7]. Ïîçäíåå, (â 70õ- 80õ ãîäàõ), ñ óñîâåðøåíñòâîâàíèåì ìåòîäîâ âûäåëåíèÿ, àíàëèçà è êîíñòðóèðîâàíèÿ ìåìáðàí, áûëî ïîëó÷åíî ìíîæåñòâî äàííûõ, ñâèäåòåëüñòâóþùèõ î ïåðâè÷íîñòè ìåìáðàííûõ íàðóøåíèé åäâà ëè íå âî âñåõ âèäàõ êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé [8].  ïîñëåäíèå ãîäû ðàçâèòèå òàêèõ íàïðàâëåíèé ñîâðåìåííîé áèîõèìèè, êàê ãåíîìèêà è ïðîòåîìèêà, ïîçâîëèëî ãëóáæå ïîíÿòü ìíîãèå ìîëåêóëÿðíûå ïðîöåññû, ïðîòåêàþùèå â êëåòêå, â òîì ÷èñëå è ìåõàíèçìû åå ïîâðåæäåíèÿ [9]. Îäíîâðåìåííûé ìîíèòîðèíã ìíîãèõ òèïîâ ìîëåêóë äàë âîçìîæíîñòü èçó÷àòü êëåòî÷íûå îòâåòû íà ìîëåêóëÿðíûå ïîâðåæäåíèÿ, âêëþ÷àÿ ýâîëþöèîííî çàêðåïëåííûå ñèñòåìû èíäóöèðóåìîé ìîëåêóëÿðíîé çàùèòû. Âñå ýòî ïîçâîëèëî âûÿâèòü íîâûå áèîìàðêåðû, äåéñòâèÿ êîòîðûõ îñíîâàíû íà ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìàõ êëåòî÷íîãî îòâåòà íà ïîâðåæäåíèÿ [9].  ìíîãî÷èñëåííûõ ðàáîòàõ, îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû è ñâÿçàííûõ ñ ïîâåäåíèåì êëåòêè â ðàçëè÷íûõ ïîâðåæäàþùèõ óñëîâèÿõ (êàê in vitro, òàê è in vivo, âêëþ÷àÿ ïàòîëîãè÷åñêîå ñîñòîÿíèå îðãàíèçìà è âíåøíèå âîçäåéñòâèÿ), ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ ñèñòåì êëåòêè çàíèìàþò ñóùåñòâåííîå ìåñòî ëèáî êàê ïåðâàÿ ïîâðåæäàåìàÿ ìèøåíü, ëèáî êàê ñèñòåìà, îïðåäåëÿþùàÿ âî ìíîãîì äàëüíåéøóþ ñóäüáó êëåòêè [1, 2, 10]. 115 4.1. Îñíîâíûå èçìåíåíèÿ â êëåòêàõ ïðè ïîâðåæäåíèè 4.1.1. Ðåààêö öèÿÿ êëåòêè íàà èçìåíåíèÿÿ óñëîâèé.  óñëîâèÿõ íîðìàëüíîãî ãîìåîñòàçà ñóùåñòâîâàíèå êëåòêè îãðàíè÷åíî äîâîëüíî óçêèì äèàïàçîíîì ôóíêöèîíàëüíûõ è ñòðóêòóðíûõ õàðàêòåðèñòèê, îïðåäåëÿåìûõ åå ãåíåòè÷åñêîé ïðîãðàììîé ìåòàáîëèçìà, äèôôåðåíöèàöèè è ñïåöèàëèçàöèè, îêðóæåíèåì ñîñåäíèõ êëåòîê, à òàêæå äîñòóïíîñòüþ ìåòàáîëè÷åñêèõ ñóáñòðàòîâ. Ïðè íåêîòîðîì èçìåíåíèè óñëîâèé èëè êàêèõ-ëèáî ïàòîëîãè÷åñêèõ ñòèìóëàõ âîçìîæåí ðÿä ôèçèîëîãè÷åñêèõ è ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé, ïðè êîòîðûõ äîñòèãàåòñÿ íîâîå ñòàöèîíàðíîå ñîñòîÿíèå, çàùèùàþùåå æèçíåñïîñîáíîñòü êëåòêè è âíîñÿùåå íåêîòîðûå èçìåíåíèÿ â åå ôóíêöèè â îòâåò íà âíåøíèå ñòèìóëû. Òàêîå ñîñòîÿíèå íàçûâàþò àäàïòàöèåé êëåòîê. Îíà, íàïðèìåð, ìîæåò âêëþ÷àòü îáîãàùåíèå ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ ÏÍÆÊ ïðè ïîíèæåííûõ òåìïåðàòóðàõ [11]. Ýòî ïðåïÿòñòâóåò ñíèæåíèþ æèäêîñòíîñòè ìåìáðàíû, èëè ñíèæåíèþ ýêñïðåññèè ãåíîâ, êîäèðóþùèõ SREBP áåëêè, ó÷àñòâóþùèå â áèîñèíòåçå õîëåñòåðèíà â îòâåò íà åãî èçáûòî÷íîå ïîñòóïëåíèå â êëåòêó [12, 13] è ò.ä. Åñëè àäàïòàöèîííûå âîçìîæíîñòè êëåòêè ïðåâûøåíû, âîçíèêàåò ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ñîáûòèé, íàçûâàåìàÿ ïîâðåæäåíèåì. Äî êàêîãî-òî ìîìåíòà ïîâðåæäåíèå ìîæåò áûòü îáðàòèìûì, íî åñëè âîçäåéñòâèå ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà îêàçûâàåòñÿ äëèòåëüíûì èëè óñèëèâàåòñÿ, ïîâðåæäåíèå ñòàíîâèòñÿ íåîáðàòèìûì, è êëåòêà ãèáíåò. Ðåàêöèÿ êëåòêè íà ïîâðåæäåíèå çàâèñèò êàê îò õàðàêòåðà ïîâðåæäàþùåãî ñòèìóëà, òàê è îò ñâîéñòâ ñàìîé êëåòêè. Òàê, êëåòêè ñ âûñîêîé ñêîðîñòüþ ìåòàáîëèçìà (íåéðîíû, êëåòêè ñåðäå÷íîé ìûøöû) â íàèáîëüøåé ñòåïåíè ïîäâåðæåíû ïîâðåæäåíèÿì (èøåìèÿ ïðè ãèïîêñè÷åñêèõ âîçäåéñòâèÿõ) [14]. Êðîìå òîãî, ïîäâåðæåííîñòü êëåòîê è òêàíåé (îñîáåííî ïå÷åíè) ïîâðåæäàþùåìó ôàêòîðó ìîæåò çàâèñåòü îò ñîñòîÿíèÿ èëè îñîáåííîñòåé îðãàíèçìà. Òàê, ãîëîäàíèå ïîâûøàåò ãåïàòîòîêñè÷íîñòü ÑÑ14, à èíäèâèäóàëüíàÿ íåïåðåíîñèìîñòü ê àãåíòàì (íàïðèìåð, ê àëêîãîëþ èëè êàêèì-ëèáî ëåêàðñòâàì) óñèëèâàåò èõ ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå [15]. Ëþáîé ïàòîëîãè÷åñêèé ïðîöåññ, êàêîé áû ñòåïåíüþ ôóíêöèîíàëüíûõ íàðóøåíèé îí íå ñîïðîâîæäàëñÿ, íà÷èíàåòñÿ íà óðîâíå óëüòðàñòðóêòóð èëè áèîõèìè÷åñêèõ ñèñòåì êëåòêè, è òîëüêî ïîñëå äîñòèæåíèÿ íåêîòîðîãî óðîâíÿ èõ äåçîðãàíèçàöèè â ïîâðåæäåííîé êëåòêå íà÷èíàþò ïðîÿâëÿòüñÿ ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ. 4.1.2. Ïðè÷èíû, âûçûâààþù ùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè. Âñå ïðè÷èíû, âûçûâàþùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè è ñâÿçàííûå ñ 116 âîçäåéñòâèåì êàê íà îðãàíèçì â öåëîì, òàê è íåïîñðåäñòâåííî íà êëåòêè, ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà íåñêîëüêî îñíîâíûõ êàòåãîðèé. 1) Íåäîñòàòîê êèñëîðîäà, íàïðèìåð, ïðè èøåìèè, ñåðäå÷íîé èëè äûõàòåëüíîé íåäîñòàòî÷íîñòè, àíåìèè, èëè îòðàâëåíèè îêèñüþ óãëåðîäà. 2) Ôèçè÷åñêèå âîçäåéñòâèÿ, ê êîòîðûì îòíîñÿòñÿ ìåõàíè÷åñêàÿ òðàâìà, ðåçêîå èçìåíåíèå òåìïåðàòóðû, âíåçàïíûå èçìåíåíèÿ àòìîñôåðíîãî äàâëåíèÿ, ðàäèàöèÿ, ýëåêòðè÷åñêèé øîê, è ò.ä. 3) Õèìè÷åñêèå àãåíòû, ê êîòîðûì îòíîñÿò: (à) îáû÷íûå ñóáñòðàòû òèïà ãëþêîçû èëè ñîëè, íî â ïîâûøåííûõ (ãèïåðòîíè÷åñêèõ) êîëè÷åñòâàõ; (á) òîêñè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ, â òîì ÷èñëå òÿæåëûå ìåòàëëû, ðàñòâîðèòåëè, ÿäû, ãîðìîíû, (â) ëåêàðñòâà è äð. 4) Èíôåêöèîííûå àãåíòû (âèðóñû, áàêòåðèè); 5) Àíàôèëàêòè÷åñêèå è àóòîèììóííûå ðåàêöèè (è èçìåíåííûå èììóííûå îòâåòû âîîáùå). 6) Ãåíåòè÷åñêèå íàðóøåíèÿ êàê â îòäåëüíûõ ãåíàõ, òàê è àíîìàëèè â õðîìîñîìàõ. 7) Ïèòàòåëüíûé äèñáàëàíñ, ñâÿçàííûé ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ (èëè, íàîáîðîò, ñ èçáûòî÷íîñòüþ) ïîñòóïëåíèÿ â îðãàíèçì áåëêîâ, âèòàìèíîâ. 8) Ñòàðåíèå, äåéñòâèå êîòîðîãî ìîæåò ïðîÿâëÿòüñÿ èëè ñïåöèôè÷åñêè, èëè â êîìáèíàöèè ñ âûøå íàçâàííûìè ôàêòîðàìè. Ñòðóêòóðíûå è áèîõèìè÷åñêèå àññîöèàöèè â êëåòêå íàñòîëüêî âçàèìîñâÿçàíû, ÷òî êàêèì áû íè áûë ëîêóñ ïåðâîíà÷àëüíîé ïîâðåæäàþùåé àòàêè, îíà âñå ðàâíî ïðèâîäèò ê øèðîêîìó ðÿäó âòîðè÷íûõ ýôôåêòîâ. 4.2. Àïîïòîç è íåêðîç - äâà âàðèàíòà ãèáåëè ïîâðåæäåííîé êëåòêè. Ìîðôîëîãè÷åñêèå ðàçëè÷èÿ ôèçèîëîãè÷åñêîé è ïàòîëîãè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè âïåðâûå ïîäðîáíî áûëè îïèñàíû áîëåå 50 ëåò íàçàä [16], à òåðìèí "àïîïòîç", êàê îáîçíà÷åíèå ôîðìû ãèáåëè êëåòêè, ðàäèêàëüíî îòëè÷àþùåéñÿ îò íåêðîçà, ïðî÷íî óêîðåíèëñÿ â 70-õ ãîäàõ ïðîøëîãî âåêà [17]. Ñ òåõ ïîð ñ÷èòàåòñÿ îáùåïðèçíàííûì ñóùåñòâîâàíèå äâóõ îñíîâíûõ ôîðì êëåòî÷íîé ãèáåëè, îäèíàêîâûõ ïî ðåçóëüòàòó (ïðåêðàùåíèå áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè êëåòêè è ôàãîöèòîç åå îñòàòêîâ), íî îòëè÷àþùèõñÿ ïî ìîëåêóëÿðíî-áèîõèìè÷åñêèì, ìîðôîëîãè÷åñêèì è êëèíè÷åñêèì êðèòåðèÿì. Ê ìîðôîëîãè÷åñêèì êðèòåðèÿì àïîïòîçà îòíîñÿòñÿ öåëîñòíîñòü ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, êîíäåíñàöèÿ õðîìàòèíà, íàáóõàíèå 117 ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû. Îñòàòêè êëåòêè ôàãîöèòèðóþòñÿ ìàêðîôàãàìè èëè ñîñåäíèìè êëåòêàìè, ïîýòîìó êëåòî÷íîå ñîäåðæèìîå íå ïîïàäàåò â ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî è íå âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè. Ïðè íåêðîçå, íàïðîòèâ, êëåòêè íàáóõàþò, èõ ìèòîõîíäðèè è äðóãèå îðãàíåëëû óâåëè÷èâàþòñÿ â îáúåìå, ðàçðûâàþòñÿ âíóòðèêëåòî÷íûå è ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíû.  ðåçóëüòàòå àêòèâèðóþòñÿ ëèçîñîìàëüíûå ôåðìåíòû, à âíóòðèêëåòî÷íîå ñîäåðæèìîå, ïîïàäàÿ âî âíåêëåòî÷íóþ ñðåäó, âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû (ðèñ.4.2.1) [4, 18, 19 ]. Ðèñ. 4.2.1. Ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ êëåòêè ïðè àïîïòîçå è íåêðîçå (ïî [22] ñ èçìåíåíèÿìè) 1 - íîðìàëüíàÿ êëåòêà, 2 - àïîïòîòè÷åñêîå ñìîðùèâàíèå êëåòêè ñ îáðàçîâàíèåì ïóçûð÷àòûõ âûðîñòîâ, 3 - ôðàãìåíòàöèÿ êëåòêè ñ îáðàçîâàíèåì àïîïòîòè÷åñêèõ òåëåö, 4 - íàáóõàíèå êëåòêè ïðè íåêðîçå, 5 - íåêðîòè÷åñêàÿ äåçèíòåãðàöèÿ êëåòêè. Ïóòü ãèáåëè, "âûáèðàåìûé" ïîâðåæäàåìîé êëåòêîé, çàâèñèò îò ìíîãèõ ôàêòîðîâ, âêëþ÷àÿ òèï êëåòêè, åå ýíåðãåòè÷åñêèé ñòàòóñ (ò.å. óðîâåíü ñèíòåçà ÀÒÔ), õàðàêòåð è ñòåïåíü ïîâðåæäåíèÿ, ñîñòîÿíèå èììóííîé ñèñòåìû îðãàíèçìà, â ÷àñòíîñòè àêòèâíîñòè êëåòîê Ò-êèëëåðîâ, è äð. [20, 21]. 4.2.1. Àïîïòîç. Àïîïòîç - ïðîöåññ "çàïðîãðàììèðîâàííîé ãèáåëè êëåòîê", êîòîðûé â çäîðîâîì îðãàíèçìå ñáàëàíñèðîâàí èõ ôèçèîëîãè÷åñêîé ðåãåíåðàöèåé [23].  õîäå àïîïòîçà âíóòðåííèå èëè âíåøíèå ôàêòîðû, àêòèâèðóÿ ïîñðåäñòâîì ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ ãåíåòè÷åñêóþ ïðîãðàììó, âûçûâàþò ãèáåëü êëåòêè è åå ýôôåêòèâíîå óäàëåíèå èç òêàíè [20, 21]. Ïî âûðàæåíèþ Ñêóëà÷åâà Â.Ï. [24], "Àïîïòîç ñëóæèò ìîëåêóëÿðíûì 118 ìåõàíèçìîì, îáåñïå÷èâàþùèì ñòàðåíèå è ñìåðòü æèâîãî îðãàíèçìà, ÷òî, âîçìîæíî, íå î÷åíü ïîëåçíî äëÿ èíäèâèäà, íî ÷ðåçâû÷àéíî âàæíî äëÿ ñòàáèëüíîñòè ïîïóëÿöèè". Åæåäíåâíî îêîëî 5% êëåòîê â îðãàíèçìå ïîäâåðãàþòñÿ àïîïòîçó, èñ÷åçàÿ áåññëåäíî â òå÷åíèå 15 120 ìèíóò, à èõ ìåñòî çàíèìàþò íîâûå [25]. Òàêèì îáðàçîì, àïîïòîç ãåíåòè÷åñêè êîíòðîëèðóåìûé áèîëîãè÷åñêèé ìåõàíèçì, îòâåòñòâåííûé çà ïîääåðæàíèå ïîñòîÿíñòâà ÷èñëåííîñòè è âûáðàêîâêó äåôåêòíûõ êëåòîê. Ñðåäè ìîëåêóëÿðíî-áèîõèìè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ àïîïòîçà âàæíåéøèìè ÿâëÿþòñÿ: (1) Ýíåðãîçàâèñèìîñòü.  îòëè÷èå îò íåêðîçà, àïîïòîç òðåáóåò îáÿçàòåëüíîãî íàëè÷èÿ ÀÒÔ, èçìåíåíèå åãî óðîâíÿ ìîæåò îïðåäåëèòü íàïðàâëåíèå êëåòî÷íîé ãèáåëè. Ïî ìíåíèþ íåêîòîðûõ èññëåäîâàòåëåé, ðåøàþùèì ìîæåò ÿâëÿòüñÿ äàæå íå àáñîëþòíîå ñîäåðæàíèå ÀÒÔ, à îòíîøåíèå ÀÒÔ/ÀÄÔ â êëåòêå [26]. (2) Ðàñùåïëåíèå ÿäåðíîé ÄÍÊ ñ ôîðìèðîâàíèåì êðóïíûõ ôðàãìåíòîâ, êðàòíûõ, êàê ïðàâèëî, 180-200 ïàð íóêëåîòèäîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê ôîðìèðîâàíèþ ÄÍÊîâîé "ëåñòíèöû" íà ýëåêòðîôîðåãðàììå; (3) Óìåíüøåíèå îáúåìà êëåòêè. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àïîïòîçà êëåòêà ñìîðùèâàåòñÿ, òåðÿÿ äî 1/3 ñâîåãî îáúåìà çà íåñêîëüêî ìèíóò. (4) Àêòèâàöèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ öèñòåèíîâûõ ïðîòåàç (êàñïàç) è, ñîîòâåòñòâåííî, äåãðàäàöèÿ áåëêà â êëåòêå. (5) Ïîÿâëåíèå (ýêñòåðíàëèçàöèÿ) ôîñôàòèäèëñåðèíà íà íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû êëåòêè è îáðàçóþùèõñÿ èç íåå àïîïòîòè÷åñêèõ òåëåö, ÷òî ñïîñîáñòâóåò èõ óçíàâàíèþ ìàêðîôàãàìè è ôàãîöèòîçó. Àïîïòîç ÿâëÿåòñÿ ðåçóëüòàòîì äåéñòâèÿ ðàçëè÷íûõ âíåøíèõ è âíóòðåííèõ ôàêòîðîâ. Íåñïåöèôè÷åñêèå âíåøíèå ôàêòîðû ñïîñîáíû èíäóöèðîâàòü àïîïòîç, êîòîðûé ïðè óâåëè÷åíèè âîçäåéñòâèÿ ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà ìîæåò ïåðåéòè â íåêðîç êëåòêè [27]. Ê ôèçèîëîãè÷åñêèì ôàêòîðàì àïîïòîçà îòíîñÿò êàê âíóòðèêëåòî÷íûå ñèãíàëû, òàê è âíåøíèå, îïîñðåäóþùèå ñâîå äåéñòâèå ÷åðåç ðåöåïòîðíûå ñèñòåìû. Ñðåäè íèõ íàèáîëüøèé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿþò ãîðìîíû. Îíè ìîãóò âûñòóïàòü êàê èíäóêòîðàìè, òàê è èíãèáèòîðàìè ãèáåëè êëåòêè, â çàâèñèìîñòè îò ñòàäèè åå äèôôåðåíöèðîâêè (íàïðèìåð, ïîëîâûå ãîðìîíû) [28, 29]. Äðóãèì ôèçèîëîãè÷åñêèì ðåãóëÿòîðîì àïîïòîçà ÿâëÿþòñÿ öèòîêèíû, ïðåäñòàâëÿþùèå îáøèðíóþ ãðóïïó ïðîäóöèðóåìûõ êëåòêàìè ïîëèôóíêöèîíàëüíûõ ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, äåéñòâóþùèõ ïðè ñâÿçûâàíèè ñî ñïåöèôè÷åñêèìè ðåöåïòîðàìè íà êëåòêàõìèøåíÿõ [30].  çàâèñèìîñòè îò ñòðóêòóðû è ôóíêöèè öèòîêèíû 119 ïîäðàçäåëÿþò íà òðè áîëüøèå ãðóïïû: ðîñòîâûå ôàêòîðû, ñåìåéñòâî TNF è ñïèðàëüíûå öèòîêèíû (èíòåðëåéêèíû, èíòåðôåðîíû). Ýôôåêò öèòîêèíîâ íà êëåòêè íåîäíîçíà÷åí: äëÿ îäíèõ êëåòîê îíè âûñòóïàþò â ðîëè èíäóêòîðîâ, äëÿ äðóãèõ èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà. Ýòî çàâèñèò îò òèïà êëåòêè, ñòàäèè åå äèôôåðåíöèðîâêè è ôóêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ è ò.ä. [31]. Îäíîâðåìåííîå ïðèñóòñòâèå â êëåòêå èíäóêòîðîâ è èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî ïðîãðàììèðóåìàÿ ãèáåëü êëåòêè íàïðÿìóþ çàâèñèò îò ñîîòíîøåíèÿ ýòèõ ðåãóëÿòîðîâ. Ðàçëè÷àþò íåñêîëüêî ôàç àïîïòîçà èëè ïðîãðàììèðîâàííîé ãèáåëè êëåòêè: (1) èíèöèàöèÿ àïîïòîçà; (2) òðàíñäóêöèÿ (ïðîâåäåíèå) àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíàëà; (3) àêòèâàöèÿ êàñïàç; (4) àêòèâàöèÿ ýíäîíóêëåàç è ñïåöèôè÷åñêàÿ äåãðàäàöèÿ ÄÍÊ, êîòîðàÿ è ïðèâîäèò ê ãèáåëè êëåòêè. 4.2.2. Èíèö öèààöèÿÿ è òðààíñäóêö öèÿÿ àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíààëàà.  çàâèñèìîñòè îò ñòèìóëîâ, èíèöèèðóþùèõ àïîïòîç, ìîæíî âûäåëèòü äâà ãëàâíûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ àïîïòîçíûõ ñèãíàëüíûõ êàñêàäà: ìèòîõîíäðèàëüíûé è ðåöåïòîðíûé, îïîñðåäîâàííûé ñïåöèôè÷åñêèìè "ðåöåïòîðàìè ñìåðòè" ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû. Ïîñëåäíèå ÿâëÿþòñÿ ÷àñòüþ ñóïåðñåìåéñòâà ðåöåïòîðîâ TNF. Ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ñîáûòèé ïîñëå ñòèìóëÿöèè àïîïòîçà íàèáîëåå èçó÷åíà â íàñòîÿùåå âðåìÿ äëÿ ðåöåïòîðà Fas (Fas-R), òàêæå íàçûâàåìîãî CD95 [20, 25, 32]. Öèòîïëàçìàòè÷åñêèé äîìåí Fas-R îáîãàùåí öèñòåèíîì, à èíòåãðàëüíàÿ (ìåìáðàííàÿ) ÷àñòü, ñîäåðæèò äîìåí ñìåðòè DD, êîòîðûé âîâëåêàåòñÿ â áåëîêáåëêîâîå âçàèìîäåéñòâèå, ãåíåðèðóÿ ñèãíàë ñìåðòè. Ëèãàíä ýòîãî ðåöåïòîðà (Fas-L) - öèòîêèí èç ñåìåéñòâà áåëêîâ TNF, ýêñïðåññèðóþùèéñÿ, ãëàâíûì îáðàçîì, íà àêòèâèðîâàííûõ Òëèìôîöèòàõ è åñòåñòâåííûõ êèëëåðàõ. Ñâÿçûâàíèå ëèãàíäà Fas-L ñ ðåöåïòîðîì (Fas-R/Fas-L) ïðèâîäèò ê îëèãîìåðèçàöèè ïîñëåäíåãî è ôîðìèðîâàíèþ ñèãíàëüíîãî êîìïëåêñà, èíèöèèðóþùåãî êàñêàä ðåàêöèé, âûçûâàþùèõ àïîïòîç.  îëèãîìåðèçàöèè Fas ó÷àñòâóþò: (1) öèòîïëàçìàòè÷åñêèé DD-äîìåí ðåöåïòîðà, (2) "àäàïòîðíûé" áåëîê FADD (Fas-àññîöèèðîâàííûé DD, ñîäåðæàùèé DED ýôôåêòîðíûé äîìåí ñìåðòè) è (3) ïðîêàñïàçû-8. Îáðàçîâàíèå êîìïëåêñà ýòèõ áåëêîâ àêòèâèðóåò êàñïàçó-8, è ðàçâèâàåòñÿ õàðàêòåðíûé äëÿ àïîïòîçà êàñêàä àêòèâàöèîííûõ ïðîöåññîâ [32]. Èíòåðåñíî, ÷òî ó íåêîòîðûõ îïóõîëåâûõ êëåòîê àêòèâíîñòü êàñïàçû-8 ìîæåò áûòü èíãèáèðîâàíà ñïåöèàëüíûì FLIP (FLICE inhibitory protein; FLICE - FADD-Like Interleukin Converting Enzyme) áåëêîì, êîòîðûé, ñâÿçûâàÿñü ñ ñèãíàëüíûì êîìïëåêñîì, ïðåïÿòñòâóåò àïîïòîçó [33]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ìóòàöèè â ãåíàõ Fas 120 èëè Fas-L ïðèâîäÿò ê ðàçâèòèþ àóòîèììóííûõ çàáîëåâàíèé [25]. Îïèñàí àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ñâÿçûâàíèåì ðåöåïòîðîâ ñåìåéñòâà TNF, êîòîðûå òàêæå ñîäåðæàò äîìåíû DD (TNF-R) ñ ëèãàíäîì TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand). Èõ îëèãîìåðèçàöèÿ ïðè ñâÿçûâàíèè, àíàëîãè÷íà Fas-R/Fas-L è îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ó÷àñòèåì FADD è ñõîäíîãî ñ íèì áåëêà TRADD (TNF-R-àññîöèèðîâàííîãî DD) [34, 35]. Êààñïààçû , ñïåöèôè÷åñêèå öèñòåèíîâûå ïðîòåàçû, êàòàëèçèðóþùèå îãðàíè÷åííîå ðàñùåïëåíèå êëåòî÷íûõ áåëêîâ, ñ÷èòàþò êëþ÷åâûìè ôåðìåíòàìè â ðàçâèòèè àïîïòîçà [36]. Êàñïàçû ðàñùåïëÿþò ïåïòèäíóþ ñâÿçü ïî êàðáîêñèëüíîìó êîíöó îñòàòêà àñïàðàãèíîâîé êèñëîòû (Asp), ÷òî ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè èëè èíàêòèâàöèè áåëêà [36, 37]. Âñåãî èäåíòèôèöèðîâàííî 14 êàñïàç. Îíè ñèíòåçèðóþòñÿ â âèäå çèìîãåíîâ áîëüøåãî ìîëåêóëÿðíîãî âåñà - ïðîêàñïàç, êîòîðûå çàòåì àêòèâèðóþòñÿ ïóòåì ïðîòåîëèòè÷åñêîãî ïðîöåññèðîâàíèÿ [36-38]. Ïî ôóíêöèîíàëüíûì ñâîéñòâàì ñåìåéñòâî êàñïàç ïîäðàçäåëÿþò íà äâà ãëàâíûõ ïîäñåìåéñòâà. Êàñïàçû -1, -4 è -5 ó÷àñòâóþò â àêòèâàöèè (ñîçðåâàíèè) öèòîêèíîâ, òàêèõ êàê èíòåðëåéêèí-1β, èíòåðëåéêèí-18, óñèëèâàÿ èõ ïðîâîñïàëèòåëüíûå ñâîéñòâà. Îñòàëüíûå êàñïàçû, ó÷àñòâóþùèå â àïîïòîçíîì ôåðìåíòàòèâíîì êàñêàäå, ïîäðàçäåëÿþòñÿ íà ýôôåêòîðû, ò.å. ôåðìåíòû, íåïîñðåäñòâåííî ãèäðîëèçóþùèå ñòðóêòóðíûå áåëêè êëåòêè, è èíäóêòîðû - ïðèíèìàþùèå è ïåðåäàþùèå àïîïòîòè÷åñêèé ñèãíàë. Ñòðóêòóðíûå îñîáåííîñòè è êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ êàñïàç â ïðîöåññàõ èíèöèàöèè è àêòèâàöèè àïîïòîçà ïîäðîáíî îïèñàíû â ðàçëè÷íûõ îáçîðàõ [36, 37, 39-41]. Ñðåäè ìîëåêóëÿðíûõ ìèøåíåé ýôôåêòîðíûõ êàñïàç èçâåñòíû ìíîãèå áåëêè, äåãðàäàöèÿ êîòîðûõ âûçûâàåò ðàçâèòèå íåîáðàòèìûõ ïðîöåññîâ, õàðàêòåðíûõ äëÿ àïîïòîçà. Ê íèì îòíîñÿòñÿ ìåìáðàííûå áåëêè, áåëêè öèòîïëàçìû è ÿäåðíîé ëàìèíû [42, 43]. Ðåãóëÿöèÿ àêòèâíîñòè êàñïàç â èíòàêòíîé êëåòêå ïðîèñõîäèò çà ñ÷åò: (1) âçàèìîäåéñòâèÿ èíäóêòîðà àïîïòîçà ñî ñïåöèôè÷åñêèìè ðåöåïòîðàìè (íàïðèìåð, àêòèâàöèÿ êàñïàçû 8 â Fas/Fas-L ñèñòåìå); (2) îáðàçîâàíèÿ ãåòåðîäèìåðîâ êàñïàç ñî ñïåöèôè÷íûìè ðåãóëÿòîðíûìè áåëêàìè ñåìåéñòâà Bcl-2; (3) âçàèìîäåéñòâèÿ êàñïàç ñ ñåðèíîâîé ïðîòåàçîé - ãðàíçèìîì  (GrB) (íàïðèìåð, ïðè âîçäåéñòâèè íà êëåòêó öèòîòîêñè÷åñêèõ Ò-ëèìôîöèòîâ) [44].  íàñòîÿùåå âðåìÿ åùå íå äî êîíöà ïîíÿòî, êàêèì îáðàçîì ýôôåêòîðíûå êàñïàçû àêòèâèðóþòñÿ ïîñëå ñâÿçûâàíèÿ ðåöåïòîðîâ êëåòî÷íîé ãèáåëè. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî âîçäåéñòâèå êàñïàç íà áåëêè öèòîñêåëåòà 121 ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ôîðìû êëåòêè.  ïîñëåäíåå âðåìÿ ïîëó÷åíû äîêàçàòåëüñòâà òîãî, ÷òî èíãèáèòîðû êàñïàç íå ïîëíîñòüþ áëîêèðóþò íåêîòîðûå ìîðôîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ àïîïòîçà, íàïðèìåð, ñìîðùèâàíèå êëåòîê [45]. Ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ, óêàçûâàþùèõ, ÷òî êàñïàçû íå îõâàòûâàþò âñå àñïåêòû àïîïòîçà ó ìëåêîïèòàþùèõ, è èññëåäîâàòåëè ïðîäîëæàþò ïðåäëàãàòü íîâûå àäåêâàòíûå, íåçàâèñèìûå îò êàñïàç, êëåòî÷íûå ìîäåëè àïîïòîçà. Íàïðèìåð, ïîñðåäñòâîì àêòèâàöèè íóêëåàçû ïðè ïîìîùè âûñâîáîæäàåìîãî èç ìèòîõîíäðèé áåëêà - ôàêòîðà, èíäóöèðóþùåãî àïîïòîç (apoptosis inducing factor, AIF) [46]. 4.2.3. Ìèòîõîíäðèààëüíûé ïóòü àïîïòîçàà. Íåêîòîðûå èíäóêòîðû àïîïòîçà ñïîñîáíû âûçâàòü óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí ìèòîõîíäðèé, âîçäåéñòâóÿ íà íèõ ëèáî íåïîñðåäñòâåííî, ëèáî ÷åðåç àêòèâàöèþ äðóãèõ ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ [47]. Íàïðèìåð, àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà (ÀÔÊ), îêñèä àçîòà, íåêîòîðûå òîêñèíû, âèðóñíûå áåëêè, ëåêàðñòâà âûçûâàþò àïîïòîòè÷åñêóþ ãèáåëü êëåòîê íåçàâèñèìî îò àêòèâàöèè äðóãèõ èíèöèàòîðíûõ ñèñòåì, òàêèõ, êàê "ðåöåïòîðû ñìåðòè" [19, 20, 47-51]. Äåéñòâèå ýòèõ èíäóêòîðîâ àïîïòîçà ïðèâîäèò ê ðåçêîìó ñíèæåíèþ âåëè÷èíû ýëåêòðîõèìè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé ∆µΗ+ è ñîïðîâîæäàåòñÿ âûõîäîì èç íèõ öèòîõðîìà ñ. Ïîñëåäíèé, âûñâîáîæäàÿñü â öèòîïëàçìó, èíèöèèðóåò àêòèâàöèþ êàñïàç [20, 32]. Íàðÿäó ñ öèòîõðîìîì ñ âîçìîæíî âûñâîáîæäåíèå â öèòîïëàçìó è äðóãèõ ëîêàëèçîâàííûõ â ìèòîõîíäðèÿõ ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ìåäèàòîðîâ - ïðîêàñïàçû-2, -3 è -9, AIF, ýíäîíóêëåàçû G è äð. [45]. Ñ÷èòàþò, ÷òî èõ âûõîä èç ìèòîõîíäðèé êîíòðîëèðóåòñÿ ñïåöèàëüíûìè áåëêàìè ñåìåéñòâà Bcl-2 [52]. Áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2 ÿâëÿþòñÿ ñàìûìè èçâåñòíûìè âíóòðèêëåòî÷íûìè ðåãóëÿòîðàìè àïîïòîçà è õàðàêòåðèçóþòñÿ íàëè÷èåì ãîìîëîãè÷íûõ äîìåíîâ, íàçûâàåìûõ ÂÍ 1-4-äîìåíàìè. Ôóíêöèîíàëüíî ÷ëåíû Âñ1-2 ñåìåéñòâà ðàçäåëÿþòñÿ íà àíòèàïîïòîòè÷åñêèå (Bcl-2, Bñl-õ, Mcl-1) ñ äîìåíàìè ÂÍ 1, 2 è 4, è ïðîàïîïòîòè÷åñêèå (Âid, Bad, Bax, Bim) ñ äîìåíîì ÂÍ 3 [18, 53]. Íàïðèìåð, áåëîê Âid (tBid), âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ìèòîõîíäðèàëüíûìè ëèïèäàìè, èíäóöèðóåò âûñâîáîæäåíèå èç ýòèõ îðãàíåëë ýíäîíóêëåàçû G [54, 55] è âíåäðåíèå ëèçîôîñôîëèïèäîâ (îñîáåííî ëèçîÔÕ) â ìåìáðàíó ìèòîõîíäðèé ñ âîçìîæíûì ïîñëåäóþùèì åå ðàçðûâîì [56]. Ýòè ýôôåêòû, êàê ïðåäïîëàãàþò, îáóñëîâëåíû òåì, ÷òî Ñêîíöåâûå äîìåíû ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ áåëêîâ Bcl-2 "çàÿêîðåíû" â ìåìáðàíå, ÷òî ñïîñîáñòâóåò èõ âîçäåéñòâèþ íà ìåìáðàíû ÝÐ èëè ìèòîõîíäðèé [18] ñ âîçìîæíûì âîâëå÷åíèåì â ôîðìèðîâàíèå ïîð [18, 52]. Áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2 ìîãóò îáðàçîâûâàòü êàê ãîìîäèìåðû, òàê 122 è ãåòåðîäèìåðû èç áåëêîâ, îáëàäàþùèõ ðàçíîíàïðàâëåííûì äåéñòâèåì. Ïðè ýòîì êàæäûé èç íèõ ñïîñîáåí ïîäàâëÿòü ôóíêöèþ äðóãîãî. Ñ÷èòàþò, ÷òî ñîîòíîøåíèå áåëêîâ ñåìåéñòâà Bcl-2 â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè îïðåäåëÿåò ïðåäðàñïîëîæåííîñòü èëè óñòîé÷èâîñòü êëåòêè ê àïîïòîçó [57, 58]. Ìíîãèå èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ÷òî äëÿ áîëüøèíñòâà òèïîâ êëåòîê îáùåé ÷åðòîé àïîïòîçà ÿâëÿåòñÿ äåïîëÿðèçàöèÿ ìèòîõîíäðèé, êîòîðàÿ ñîïðÿæåíà ñ ãëóáîêèìè èçìåíåíèÿìè ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí, ñ îáðàçîâàíèåì ãèãàíòñêèõ òðàíçèòíûõ ïîð - ìåãàêàíàëîâ (permeability transition pore, PTP) [59, 60-63]. Îäíèì èç âèäîâ ÐÒÐ ÿâëÿåòñÿ, íàïðèìåð, íåñïåöèôè÷åñêèé êàíàë, îáðàçóþùèéñÿ ïðè îêèñëåíèè SHãðóïïû Cys-56 â àäåíèííóêëåîòèäòðàíñëîêàçå - áåëêå âíóòðåííåé ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé, îñóùåñòâëÿþùåì àíòèïîðò ÀÒÔ/ÀÄÔ) [46]. Îáðàçóþùèé ïîðû êîìïëåêñ ñîäåðæèò ìíîæåñòâî ìèøåíåé äëÿ âíåøíåãî âîçäåéñòâèÿ è ðåãóëèðóåòñÿ ìíîãèìè ýíäîãåííûìè ôàêòîðàìè, òàêèìè êàê îêñèä àçîòà, ÀÔÊ, êîíöåíòðàöèåé èîíîâ (Ca2+ è Mg2+), èçìåíåíèÿ ∆µΗ+, êîíöåíòðàöèÿ ÀÄÔ è ÀÒÔ, ëèïèäîâ è îïðåäåëåííûõ áåëêîâ, èçìåíåíèå ñîîòíîøåíèÿ áåëêîâ Bcl-2 è äð. [59-64]. Ñóäÿ ïî âñåìó, ãèãàíòñêàÿ ïîðà èíòåãðèðóåò ðàçëè÷íûå îòâåòíûå ðåàêöèè êëåòêè íà ñòðåññ, è ïî÷òè ïðè âñåõ ïðîöåññàõ êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðîèñõîäèò åå ðàñêðûòèå, èçìåíÿþùåå ìèòîõîíäðèàëüíóþ ïðîíèöàåìîñòü. Åñëè íà÷àëüíûå ôàçû àïîïòîçà ðàçëè÷àþòñÿ â çàâèñèìîñòè îò òèïà êëåòîê è îò èíäóöèðóþùåãî ñèãíàëà, òî ýòàï äåãðàäàöèè ÄÍÊ óíèâåðñàëåí äëÿ áîëüøèíñòâà êëåòîê. Ýòà ôàçà ÿâëÿåòñÿ ïåðåõîäîì ê íåîáðàòèìîé - òåðìèíàëüíîé ñòàäèè àïîïòîçà, êîòîðóþ òàêæå êîíòðîëèðóþò áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2, êîäèðóåìûå îäíîèìåííûìè ãåíàìè. Äåãðàäàöèÿ ÄÍÊ ïðè àïîïòîçå îñóùåñòâëÿåòñÿ ýíäîíóêëåçàìè, âêëþ÷àÿ âûñâîáîæäàåìóþ èç ìåæìåìáðàííîãî ïðîñòðàíñòâà ìèòîõîíäðèé ýíäîíóêëåàçó G [65, 66]. Ê èçó÷åííûì áåëêàì - ðåãóëÿòîðàì àïîïòîçà îòíîñÿò ôàêòîð òðàíñêðèïöèè ð53, êîòîðûé ñïîñîáåí áëîêèðîâàòü ïðîöåññû äåëåíèÿ êëåòêè ñ ïîâðåæäåííîé ÄÍÊ, "çàïóñêàÿ" àïîïòîç [25, 67]. Ýòîò áåëîê ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 53 êÄà ëîêàëèçîâàí â ÿäðå êëåòêè. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ ïîâðåæäåíèÿ ÄÍÊ åãî ýêñïðåññèÿ ïîâûøàåòñÿ, áëîêèðóÿ êëåòî÷íûé öèêë â ôàçå G1 è G2, äî ðåïëèêàöèè ÄÍÊ è ìèòîçà. Ýòî äàåò âîçìîæíîñòü ðåïàðèðîâàòü ïîâðåæäåííóþ ÄÍÊ, ïðåäîòâðàùàÿ òåì ñàìûì ïîÿâëåíèå ìóòàíòíûõ êëåòîê. Åñëè àêòèâíîñòü ðåïàðàöèîííûõ ñèñòåì íåäîñòàòî÷íà è ïîâðåæäåíèÿ â ÄÍÊ ñîõðàíÿþòñÿ, òî â òàêèõ êëåòêàõ èíäóöèðóåòñÿ àïîïòîç. Íàêîïëåíèå â êëåòêå áåëêà ð53 âîçìîæíî ïðè îáîèõ ïóòÿõ àïîïòîçà [67, 68].  òî æå âðåìÿ ó áîëåå 123 ÷åì 50% èçó÷åííûõ âèäîâ îïóõîëåâûõ êëåòîê ãåí ð53 èíàêòèâèðîâàí, ñâÿçàííàÿ ñ íèì ðåãóëÿöèÿ êëåòî÷íîãî ãîìåîñòàçà íàðóøåíà; ñëåäñòâèåì ÷åãî îêàçûâàåòñÿ íàêîïëåíèå ìóòèðîâàííûõ êëåòîê [69-71]. Âàæíûì êîìïîíåíòîì èíäóêöèè àïîïòîçà âî ìíîãèõ òèïàõ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ óðîâåíü ñâîáîäíîãî èîíèçèðîâàííîãî êàëüöèÿ â öèòîïëàçìå. Ïîëàãàþò, ÷òî ïîâûøåíèå óðîâíÿ Ca2+ â êëåòêå ñïîñîáñòâóåò "çàïóñêó" ìèòîõîíäðèàëüíîãî àïîïòîçíîãî ñèãíàëüíîãî êàñêàäà, èíèöèèðóÿ îáðàçîâàíèå òðàíçèòíûõ ïîð [72], âûõîä öèòîõðîìà ñ è ýíäîíóêëåàçû G, [73].  âûñâîáîæäåíèè Ca 2+ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ äåïî ó÷àñòâóþò âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû - äèãëèöåðèä è èíîçèòîë-1,4,5òðèôîñôàò (IP3), ãåíåðàöèÿ êîòîðûõ â êëåòêå ñâÿçàíà ñ àêòèâàöèåé ðàçëè÷íûõ èçîôîðì ôîñôîëèïàçû Ñ. Íåêîòîðûå òîêñèíû òàêæå ñïîñîáíû ñòèìóëèðîâàòü àïîïòîç ïóòåì íàðóøåíèÿ íîðìàëüíîãî ãîìåîñòàçà êàëüöèÿ, íî ïðè óñëîâèè ñîõðàíåíèÿ îñíîâíîãî ïóëà ÀÒÔ; èíà÷å êëåòêà ìîæåò ïåðåéòè ê íåêðîçó [26].  ïðîöåññå àïîïòîçà ìîæåò ó÷àñòâîâàòü öèòîçîëüíàÿ ôîñôîëèïàçà À 2 (cPLÀ 2 ). Òàê, äëÿ Fas-èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà cPLÀ 2 ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì êàñïàçû-2 è -8 [74]. Âîçìîæíî, ÷òî èíàêòèâàöèÿ cPLÀ 2 ïðèâîäèò ê ñíèæåíèþ ñèíòåçà ïðîâîñïàëèòåëüíûõ ïðîñòàãëàíäèíîâ, îáðàçóþùèõñÿ èç àðàõèäîíîâîé êèñëîòû. Ïîñëåäíÿÿ, êàê èçâåñòíî, ÿâëÿåòñÿ ïðîäóêòîì ãèäðîëèçà ôîñôîëèïèäîâ cPLÀ2 [75].  òî æå âðåìÿ, äëÿ TNF-èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà áûëà ïîêàçàíà àêòèâàöèÿ cPLÀ2 êàñïàçîé-3, ÷òî, êàê ñ÷èòàþò, íåîáõîäèìî äëÿ âûõîäà äðóãèõ êàñïàç [76]. Zhao ñ ñîàâò. [77] îòìå÷àþò, ÷òî ó÷àñòèå ôîñôîëèïàçû À2 óñèëèâàåò ïîâðåæäåíèå ëèçîñîì, ðîëü êîòîðûõ â ïðîãðàììèðóåìîé ãèáåëè êëåòîê àêòèâíî îáñóæäàåòñÿ â ïîñëåäíèå ãîäû. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî âûñâîáîæäåíèå ìèòîõîíäðèÿìè ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ôàêòîðîâ ìîæåò áûòü ñëåäñòâèåì ïðåäøåñòâóþùåé äåñòàáèëèçàöèè ëèçîñîì ñ ó÷àñòèåì ôîñôîëèïàçû À 2 [78, 79]. Àâòîðû ïðåäïîëàãàþò ñóùåñòâîâàíèå "ëèçîñîìíî-ìèòîõîíäðèàëüíîé îñè" àïîïòîçà, îïðåäåëÿþùåé è êîîðäèíèðóþùåé ýôôåêò êàñïàç, ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç è ãåíåðàöèþ ìèòîõîíäðèÿìè ÀÔÊ. Îêîí÷àòåëüíàÿ ðåàëèçàöèÿ òîãî èëè èíîãî àïîïòîçíîãî ñèãíàëüíîãî êàñêàäà îïðåäåëÿåòñÿ ïóòåì ïåðåêðåñòíûõ ñîïðÿæåííûõ äðóã ñ äðóãîì ðåàêöèé ("cross-talk") ìåæäó âçàèìîâëèÿþùèìè ýôôåêòîðàìè [77]. Âàæíàÿ ðîëü ëèçîñîì â ðåàëèçàöèè àïîïòîçà îòìå÷àåòñÿ è äðóãèìè àâòîðàìè [80]. Íà 124 Ðèñ. 4.2.2. Íåêîòîðûå ïóòè ïåðåäà÷è àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ â êëåòêå (ïî [46] ñ èçìåíåíèÿìè) Àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà (ÀÔÊ) ñïîñîáñòâóþò ðàñêðûòèþ â ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå ïîð (ÐÒÐ), ÷åðåç êîòîðûå â öèòîïëàçìó âûõîäèò öèòîõðîì ñ, àêòèâèðóþùèé êàñêàä êàñïàç, ïðèâîäÿùèé ê àïîïòîçó. Ðåöåïòîð TNF, ïîñëå âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ëèãàíäîì, òàêæå àêòèâèðóåò êàñïàçó-3 ïîñðåäñòâîì êàñïàçû-8. Ïîñëåäíÿÿ ìîæåò èíèöèèðîâàòü öåïü ñîáûòèé, âåäóùèõ ê ðàñêðûòèþ ÐÒÐ è âûõîäó ìèòîõîíäðèàëüíûõ àïîïòîòè÷åñêèõ áåëêîâ áåç ó÷àñòèÿ ÀÔÊ. Ôîñôàòèäèëñåðèí (ÔÑ) âíóòðåííåãî ñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïåðåõîäèò íà âíåøíèé, ÷àñòè÷íî îêèñëÿÿñü (ÔÑîê) ñ ó÷àñòèåì ÀÔÊ, ÷òî ñëóæèò ñèãíàëîì äëÿ óçíàâàâíèÿ è óäàëåíèÿ àïîïòîçíîé êëåòêè (ïî [46]) ðèñ. 4.2.2. ñõåìàòè÷åñêè ïðåäñòàâëåíû íåêîòîðûå ïóòè ïåðåäà÷è àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ â êëåòêå [46]. 4.2.4. Àïîïòîç è ôîñôîëèïèäû. Êîíå÷íûì ýòàïîì àïîïòîçà ñ÷èòàþò ôðàãìåíòàöèþ êëåòîê íà "àïîïòîòè÷åñêèå òåëüöà" è ïîãëîùåíèå èõ ñîñåäíèìè êëåòêàìè èëè ìàêðîôàãàìè. Íà ýòîì ýòàïå íàèáîëåå ñóùåñòâåííûå ïðîöåññû ïðîòåêàþò â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Òàê, â ìåìáðàíå íàáëþäàåòñÿ ïåðåðàñïðåäåëåíèå ÔË, ýêñòåðíàëèçàöèÿ ÔÑ âî âíåøíèé ìîíîñëîé ìåìáðàíû [81, 82] è ïîñëåäóþùåå åãî îêèñëåíèå [83]. Òðàíñëîêàöèÿ ÔÑ ïðè àïîïòîçå îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ó÷àñòèåì Ñà2+-àêòèâèðóåìîé ñêðàìáëàçû [84] èëè ïðè ñâîáîäíîðàäèêàëüíîì îêèñëåíèè êàðäèîëèïèíà ìèòîõîíäðèé [85]. Ïåðåìåùåíèå ÔÑ ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëîì ("eat me") äëÿ ïîãëîùåíèÿ ïîâðåæäåííîé êëåòêè îêðóæàþùèìè êëåòêàìè ñ ó÷àñòèåì "ðåöåïòîðà âíåøíåãî ÔÑ", ëîêàëèçîâàííîãî â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå [46, 84]. Ïî ìíåíèþ Henson ñ ñîàâò. [84], ðåöåïòîð ÔÑ ýêñïðåññèðóåòñÿ â ðàçëè÷íûõ êëåòêàõ è òêàíÿõ, áëàãîäàðÿ ÷åìó àïîïòîòè÷åñêèå êëåòêè èëè "òåëüöà" ìîãóò çàõâàòûâàòüñÿ è ïåðåâàðèâàòüñÿ íå òîëüêî ôàãîöèòàìè, íî è ïðîñòûìè êëåòêàìè. Ïðè ýòîì ðåöåïòîðû ê ÔÑ îêàçûâàþò òàêæå è 125 ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå, ïîäàâëÿÿ èììóííóþ ðåàêöèþ ôàãîöèòèðóþùåé êëåòêè. Îòìå÷àþò, ÷òî â àïîïòîòè÷åñêîé êëåòêå âîçðàñòàåò ãåíåðàöèÿ ëèçîÔÕ, êîòîðûé â äàííîì ñëó÷àå ÿâëÿåòñÿ õåìîòàêñè÷åñêèì ôàêòîðîì (èñòî÷íèêîì ñèãíàëà "seak me"), ñòèìóëèðóþùèì ïðèòîê ôàãîöèòîâ ê àïîïòîçíîé îáëàñòè [82].  ðÿäå ðàáîò ïîñëåäíèõ ëåò ïðîäåìîíñòðèðîâàíà ñïåöèôè÷åñêàÿ ðîëü ìåìáðàííûõ ðàôòîâ (ñì. ãëàâó 2) â ïðîöåññàõ àïîïòîçà [86, 87], êîòîðàÿ, â ÷àñòíîñòè, ñâÿçàíà ñ ðåãóëÿöèåé èîííûõ êàíàëîâ è îðãàíèçàöèåé ("ñáîðêîé") ñèãíàëüíûõ êîìïëåêñîâ. Ïðè ýòîì, ñòèìóëû àïîïòîçà âûçûâàþò ðåîðãàíèçàöèþ ðàôòîâ, èõ óêðóïíåíèå â áîëüøèå, îáîãàùåííûå öåðàìèäàìè ìåìáðàííûå ïëàòôîðìû [86].  êà÷åñòâå ñèãíàëüíûõ âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ â ïðîöåññû àïîïòîçà âîâëå÷åíû òàêèå ïðîèçâîäíûå ÔË, êàê öåðàìèäû, ñôèíãîçèí è S1P (ñì. ÷àñòü 3) [88], êîòîðûå ñïîñîáíû ðåãóëèðîâàòü âûæèâàíèå èëè ãèáåëü êëåòêè [89]. Òàê, öåðàìèä, îáðàçóþùèéñÿ â êëåòêàõ èç ñôèíãîìèåëèíà ìåìáðàí â îòâåò íà ðàçëè÷íûå ñòðåññîâûå ñèãíàëû (öèòîêèíîâàÿ àòàêà, ðàäèàöèÿ è äð.), äåéñòâóÿ êàê âòîðè÷íûé ìåññåíäæåð àïîïòîçà, ñïîñîáåí àêòèâèðîâàòü åãî êëþ÷åâûå ðåãóëÿòîðû. Îáðàçîâàíèå öåðàìèäà âî âíåøíåì ñëîå êëåòî÷íîé ìåìáðàíû, âûçûâàåò ïîëÿðíîå ïåðåðàñïðåäåëåíèå è îëèãîìåðèçàöèþ ("îáðàçîâàíèå øàïêè") ðåöåïòîðà Fas [90]. Ïðè ýòîì íà öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ñòîðîíå ìåìáðàíû ôîðìèðóåòñÿ ñóïåðêàòàëèòè÷åñêèé äîìåí, óñèëèâàþùèé Fas-îïîñðåäîâàííûé àïîïòîç. Öåðàìèä ñïîñîáåí òàêæå óñèëèòü äåñòàáèëèçàöèþ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí è âûñâîáîæäåíèå àïîïòîãåííûõ ôàêòîðîâ. Íàïðèìåð, óñèëèâàÿ Âàõ-èíäóöèðîâàííóþ ïðîíèöàåìîñòü ìåìáðàíû, öåðàìèä èíèöèèðóåò ôîðìèðîâàíèå íåñïåöèôè÷íûõ "öåðàìèäíûõ" ïîð, êîòîðûå ïîâûøàþò ïðîíèöàåìîñòü íàðóæíîé ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé è óñèëèâàþò âûñâîáîæäåíèå öèòîõðîìà ñ [91]. Ñôèíãîçèí, îáðàçóþùèéñÿ èç öåðàìèäà ïîä äåéñòâèåì öåðàìèäàç, òàêæå ñïîñîáåí óñèëèâàòü àïîïòîç, èíãèáèðóÿ ïðîòåèíêèíàçó Ñ [92]. Èç öåðàìèäà îáðàçóåòñÿ òàêæå S1P - ñèãíàëüíûé ëèïèä, îáëàäàþùèé àíòèàïîïòîòè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè (ñì. ãëàâó 3) [93]. Åãî ýôôåêòû ðåàëèçóþòñÿ ðàçíûìè ìåõàíèçìàìè: (1) S1P àêòèâèðóåò àíòèàïîïòîòè÷åñêèå ñèãíàëüíûå ïóòè (NFkB, êèíàçà ERK - Extracellular signal Regulated Kinase); (2) â ëèìôîöèòàõ S1P ñíèæàåò ýêñïðåññèþ ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ Bcl-2 (Bax), áëîêèðóÿ àïîïòîç; (3) S1P ìîæåò îêàçûâàòü àíòèàïîïòîòè÷åñêîå äåéñòâèå, ïðåäîòâðàùàÿ èíäóöèðîâàííûå ñòðåññîì ïðîöåññû â ìèòîõîíäðèÿõ (íàïðèìåð, áëîêèðóÿ âûñâîáîæäåíèå èç íèõ öèòîõðîìà ñ è ïðåäîòâðàùàÿ àêòèâàöèþ 126 êàñïàç); (4), â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ S1P áëîêèðóåò àïîïòîç, ïîâûøàÿ ïðîäóêöèþ NO [93, 94]. Òàêèì îáðàçîì, àïîïòîç èëè çàïðîãðàìèðîâàííàÿ ãèáåëü êëåòêè ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñëîæíûé, ãåíåòè÷åñêè êîíòðîëèðóåìûé ìíîãîñòàäèéíûé áèîõèìè÷åñêèé ïðîöåññ, íå âñå ñòîðîíû êîòîðîãî ïîëíîñòüþ âûÿñíåíû. Õîòÿ ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû íå ÿâëÿåòñÿ ïåðâîïðè÷èíîé àïîïòîçà, â íàñòîÿùåå âðåìÿ ïîêàçàíî, ÷òî ìåìáðàíà ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ó÷àñòíèêîì ñëîæíûõ àïîïòîçíûõ ðåàêöèé. Èìåííî â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ïðîèñõîäèò îëèãîìåðèçàöèÿ è íóæíàÿ îðèåíòàöèÿ àïîïòîçíûõ ðåöåïòîðîâ, à òàêæå ëîêàëèçàöèÿ ìíîãèõ àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ, â òîì ÷èñëå è ñèãíàëà "eat me", ñâÿçàííîãî ñ ýêñòåðíàëèçàöèåé ÔÑ. Äëÿ äðóãîé ôîðìû ãèáåëè êëåòêè - íåêðîçà - ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàíû è ñâÿçàííîå ñ íèìè âîçðàñòàíèå èîííîé ïðîíèöàåìîñòè ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûìè â ìåõàíèçìàõ êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé. 4.3. Íåêðîç è ïîâðåæäåíèå áèîìåìáðàí. Íåêðîç, â ïðîòèâîïîëîæíîñòü àïîïòîçó, - ïàññèâíàÿ ôîðìà áûñòðîé ãèáåëè êëåòîê ïîä âëèÿíèåì èíòåíñèâíûõ âíåøíèõ âîçäåéñòâèé, íà êîòîðûå êëåòêà íå ìîæåò èëè æå íå óñïåâàåò îòðåàãèðîâàòü ñ ïîìîùüþ ñâîèõ çàùèòíûõ ñèñòåì, è îíè âûçûâàþò íàðóøåíèå ôóíêöèé êëåòî÷íûõ îðãàíåëë, â ïåðâóþ î÷åðåäü, íàðóæíîé ìåìáðàíû êëåòîê. Âñå ìíîãîîáðàçèå ôàêòîðîâ, âûçûâàþùèõ íåêðîç, óñëîâíî ìîæíî ðàçäåëèòü íà ôèçè÷åñêèå, õèìè÷åñêèå è áèîãåííûå. Ê ïîñëåäíèì îòíîñÿòñÿ áàêòåðèàëüíûå è âèðóñíûå èíôåêöèè, àëëåðãè÷åñêèå, àóòîèììóííûå ôàêòîðû è ò. ä. Êëåòîê, óñòîé÷èâûõ ê ôàêòîðàì, âûçûâàþùèì íåêðîç, íåò, õîòÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê íèì ðàçëè÷íà. Íåêðîç, â îòëè÷èå îò àïîïòîçà, îáÿçàòåëüíî ñîïðîâîæäàåòñÿ àâòîëèçîì êëåòêè [1, 2, 19] (ðèñ. 4.2.1), â õîäå êîòîðîãî êëåòêà ëèçèðóåòñÿ, åå ñîäåðæèìîå èçëèâàåòñÿ â ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî, ñîçäàâàÿ îáëàñòü âîñïàëåíèÿ, ÿâëÿþùóþñÿ îòëè÷èòåëüíîé ÷åðòîé íåêðîçà. Ìåõàíèçìû ðàçâèòèÿ íåêðîçà ñëîæíû è îïðåäåëÿþòñÿ õàðàêòåðîì ïàòîãåííûõ âîçäåéñòâèé, ñòðóêòóðíîôóíêöèîíàëüíûìè îñîáåííîñòÿìè òêàíè, íàñëåäñòâåííîêîíñòèòóöèîíàëüíûìè ôàêòîðàìè îðãàíèçìà.  çàâèñèìîñòè îò ìåõàíèçìà äåéñòâèÿ ïàòîãåííîãî ôàêòîðà ðàçëè÷àþò ïðÿìîé íåêðîç, îáóñëîâëåííûé íåïîñðåäñòâåííûì âîçäåéñòâèåì (òðàâìàòè÷åñêèé è òîêñè÷åñêèé íåêðîçû), è íåïðÿìîé âîçíèêàþùèé îïîñðåäîâàííî ÷åðåç ñîñóäèñòóþ è íåéðîýíäîêðèííóþ ñèñòåìû. Ìîðôîëîãè÷åñêè íåêðîòè÷åñêàÿ êëåòêà ñóùåñòâåííî îòëè÷àåòñÿ îò àïîïòîçíîé. Íàáëþäàåòñÿ ðàñïàä ÿäðà íà îòäåëüíûå 127 ôðàãìåíòû (ãëûáêè, clumps) - êàðèîðåêñèñ è åãî ëèçèñ (êàðèîëèçèñ). Ìèòîõîíäðèè íàáóõàþò, ïîâðåæäàåòñÿ èõ âíóòðåííÿÿ ìåìáðàíà, ïðîèñõîäèò ëèçèñ è äåçèíòåãðàöèÿ êðèñò [95]. Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà âûïÿ÷èâàåòñÿ, îáðàçóÿ ïóçûðè ("áëåááèíã" ìåìáðàíû).  öèòîïëàçìå ïðîèñõîäÿò äèññîöèàöèÿ è äèñïåðãèðîâàíèå ïîëèðèáîñîì, çà ñ÷åò ÷åãî óâåëè÷èâàåòñÿ åå âÿçêîñòü è ïîÿâëÿåòñÿ ãðàíóëÿðíàÿ íåîäíîðîäíîñòü. Ïðîèñõîäèò äåíàòóðàöèÿ è êîàãóëÿöèÿ áåëêîâ, íàáóõàíèå è ôðàãìåíòàöèÿ öèñòåðí øåðîõîâàòîãî ÝÐ è àïïàðàòà Ãîëüäæè [2, 96]. Ðàçðóøåíèå ìåìáðàííûõ ñòðóêòóð êëåòêè âåäåò ê åå ãèäðàòàöèè, íàñòóïàåò ïëàçìîëèç (ãèäðîëèòè÷åñêîå "ðàñïëàâëåíèå" öèòîïëàçìû), êîòîðûé â îäíèõ ñëó÷àÿõ îõâàòûâàåò âñþ êëåòêó (öèòîëèç), â äðóãèõ - ëèøü åå ÷àñòü (ôîêàëüíûé êîëëèêâàöèîííûé íåêðîç, èëè áàëëîííàÿ äèñòðîôèÿ). Ïðè ôîêàëüíîì íåêðîçå ìîæåò ïðîèçîéòè ïîëíîå âîññòàíîâëåíèå íàðóæíîé ìåìáðàíû êëåòêè. Åñëè âîçäåéñòâèå ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà ïðîäîëæàåòñÿ, ïðîèñõîäèò ëèçèñ êëåòêè è íåîáðàòèìûå èçìåíåíèÿ ìåæêëåòî÷íîãî âåùåñòâà, åãî âîëîêíèñòûõ ñòðóêòóð. Îáùèì ìîðôîëîãè÷åñêèì ïðèçíàêîì íåêðîçà, â îòëè÷èå îò àïîïòîçà, ÿâëÿåòñÿ íàáóõàíèå êëåòêè, ïðèâîäÿùåå ê ðàçðûâó åå ìåìáðàíû. Ìîðôî- è ïàòîãåíåç íåêðîçà õîðîøî èçó÷åíû è ïîäðîáíî îïèñàíû â ëèòåðàòóðå [1, 3, 14, 19, 20, 97 è äð.].  îòëè÷èå îò àïîïòîçà, ïîðàæàþùåãî åäèíè÷íûå, áåñïîðÿäî÷íî ðàñïîëîæåííûå êëåòêè, íåêðîç, êàê ïðàâèëî, ðàçâèâàåòñÿ îäíîâðåìåííî â áîëüøîé ãðóïïå êëåòîê, ïîäâåðãàþùèõñÿ îáùèì èíòåíñèâíûì âîçäåéñòâèÿì. Çíà÷åíèå íåêðîçà îïðåäåëÿåòñÿ åãî ñóùíîñòüþ êàê "ìåñòíîé ñìåðòüþ" è âûêëþ÷åíèåì èç ôóíêöèè çîí òêàíè, ïîýòîìó íåêðîç æèçíåííî âàæíûõ îðãàíîâ, îñîáåííî êðóïíûõ èõ ó÷àñòêîâ, íåðåäêî âåäåò ê ñìåðòè. Òàêîâû èíôàðêòû ìèîêàðäà, èøåìè÷åñêèå íåêðîçû ãîëîâíîãî ìîçãà, íåêðîçû êîðêîâîãî âåùåñòâà ïî÷åê, ïðîãðåññèðóþùèé íåêðîç ïå÷åíè, îñòðûé ïàíêðåàòèò, îñëîæíåííûé ïàíêðåîíåêðîçîì. Íåðåäêî îìåðòâåíèå òêàíè ÿâëÿåòñÿ ïðè÷èíîé òÿæåëûõ îñëîæíåíèé ìíîãèõ çàáîëåâàíèé. Êëèíè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ íåêðîçà îòëè÷àþòñÿ áîëüøèì ðàçíîîáðàçèåì [98]. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî íåêðîç âíîñèò îïðåäåëåííûé âêëàä â ïàòîãåíåç ìíîãèõ çàáîëåâàíèé ÷åëîâåêà, åãî ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû îñòàþòñÿ íåäîñòàòî÷íî èçó÷åííûìè. Ýòî îò÷àñòè îáóñëîâëåíî òåì, ÷òî íåêðîç, â îòëè÷èå îò àïîïòîçà, ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñóììó íåïðîãðàììèðóåìûõ, ìàêñèìàëüíî äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ [99].  òî æå âðåìÿ èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò, ïðîâåäåííûå íà ðàçëè÷íûõ æèâîòíûõ, ïîçâîëèëè âûÿâèòü íåêîòîðûå îáùèå 128 áèîõèìè÷åñêèå çàêîíîìåðíîñòè êëåòî÷íîé äåñòðóêöèè ïðè íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè. Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì, "áûëî áû îøèáêîé ðàññìàòðèâàòü íåêðîç êàê ìåíåå óïîðÿäî÷åííûé è ðåãóëèðóåìûé ïðîöåññ, ÷åì àïîïòîç" [100]. Íåñìîòðÿ íà ñõîäñòâî íåêîòîðûõ äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ ïðè àïîïòîçå è íåêðîçå (ïîâðåæäåíèå ìèòîõîíäðèé, íàðóøåíèå ãîìåîñòàçà Ñà2+, ãåíåðàöèÿ ÀÔÊ), ïðèíöèïèàëüíûì îòëè÷èåì íåêðîçà, ïîìèìî îòñóòñòâèÿ çàâèñèìîñòè îò ýíåðãåòè÷åñêîãî ñòàòóñà êëåòêè, ÿâëÿåòñÿ îòñóòñòâèå ãåíåòè÷åñêîãî êîíòðîëÿ è ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ-ðåãóëÿòîðîâ íåêðîòè÷åñêîãî ïðîöåññà; âìåñòî ýòîãî - ïîä÷èíåíèå áèîõèìè÷åñêèì çàêîíîìåðíîñòÿì ñîïðÿæåííûõ äðóã ñ äðóãîì ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíûõ ïðîöåññîâ, äåéñòâóþùèõ â ñîîòâåòñòâèè ñ îáùåé çàêîíîìåðíîñòüþ âîçðàñòàíèÿ ýíòðîïèè. 4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîö öåññû ïðè íåêðîçå. Îòìå÷àþò íåñêîëüêî âàæíåéøèõ áèîõèìè÷åñêèõ êàñêàäîâ, îáùèõ äëÿ íåêðîòè÷åñêîãî ïóòè ãèáåëè êëåòêè, íåñìîòðÿ íà ðàçíóþ ïðèðîäó ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà: - íàðóøåíèå îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ (ñèíòåçà ÀÒÔ) è ãëèêîëèçà; - íàðóøåíèå ãîìåîñòàçà Ñà2+ (íàêîïëåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+) [101]; - óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è ìåìáðàí âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë; - ãåíåðàöèÿ ÀÔÊ è ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ; - íåîáðàòèìîå ðàçðóøåíèå ìèòîõîíäðèé; ïîâðåæäåíèå ÿäðà êëåòêè, àêòèâàöèÿ ýíäîíóêëåàç, äåïîëèìåðèçàöèÿ íóêëåèíîâûõ êèñëîò (äåçèíòåãðàöèÿ ÄÍÊ è ÐÍÊ). Ïî ìíåíèþ B.Padanilam [20], îïðåäåëÿþùèìè äåòåðìèíàíòàìè íåêðîçà ÿâëÿþòñÿ ìåõàíèçìû èîííîãî ãîìåîñòàçà. Ïðè ïðÿìîì ïîâðåæäåíèè êëåòêè ïðîèñõîäèò ïîâðåæäåíèå öåëîñòíîñòè ìåìáðàíû, è èçìåíåíèå ãîìåîñòàçà êëåòêè íå âûçûâàåò ñîìíåíèé.  ñëó÷àå íåïðÿìîãî íåêðîçà, íàïðèìåð, ïðè èøåìèè, ïðîèñõîäèò, ïðåæäå âñåãî, ðåçêîå ýíåðãåòè÷åñêîå "èñòîùåíèå" êëåòêè âñëåäñòâèå ðàçîáùåíèÿ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ïðîöåññîâ îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ. Ïðè ýòîì ñóùåñòâåííî ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ÀÒÔ, íàðóøàåòñÿ ðàáîòà ÀÒÔ-çàâèñèìûõ èîííûõ êàíàëîâ, ïðîèñõîäèò ïîòåðÿ ðåãóëÿöèè èîííîãî ãîìåîñòàçà, ðàçðóøåíèå áåëêîâ öèòîñêåëåòà [102]. Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà òåðÿåò ñïîñîáíîñòü ðåãóëèðîâàòü êëåòî÷íûé îáúåì è èîííóþ ïðîíèöàåìîñòü. Óñèëåííûé òðàíñïîðò èîíîâ ïðèâîäèò ê ïîòåðå îñìîòè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ, óâåëè÷åíèþ êîíöåíòðàöèè Na+ â 129 öèòîçîëå. Ýòî àêòèâèðóåò Na+-K+-ÀÒÔàçó, èñòîùàÿ åùå áîëüøå çàïàñû ÀÒÔ â êëåòêå è ñïîñîáñòâóÿ íàáóõàíèþ ìèòîõîíäðèé è êëåòêè â öåëîì (îòåê êëåòêè).  íà÷àëüíîé ñòàäèè ïîâðåæäåíèÿ èîííûé ãîìåîñòàç â êëåòêå åùå ïîääåðæèâàåòñÿ îäíîâðåìåííûì îòòîêîì Ê+. Îäíàêî ïî ìåðå ñíèæåíèÿ óðîâíÿ ÀÒÔ èîííûå íàñîñû áëîêèðóþòñÿ, è ïðèòîê â êëåòêó Na+ è âîäû óâåëè÷èâàåòñÿ.  ïîñëåäíèå ãîäû íà ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóðàõ óñòàíîâëåíû ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ è ðîëü òàêèõ èîííûõ íàñîñîâ è òðàíñìåìáðàííûõ èîííûõ êàíàëîâ, êàê Na+/K+-íàñîñ, Na+/H+ è Na+/Ca2+ èîííûå êàíàëû, Na+-K+-2Cl--êîòðàíñïîðòåð [103, 104]. Îäíàêî ìåõàíèçìû, âûçûâàþùèå ðåçêîå óâåëè÷åíèå ïðèòîêà Na+ â öèòîçîëü ïðè íåêðîçå, äî ñèõ ïîð íåèçâåñòíû [20]. Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè Na+ â êëåòêå ïðèâîäèò ê âûêëþ÷åíèþ ñèñòåìû Na+/Ca2+ îáìåíà ÷åðåç êëåòî÷íóþ ìåìáðàíó, ê ïîâûøåíèþ îñìîòè÷åñêîãî äàâëåíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ è êëåòêå è èõ íàáóõàíèþ. Çà ñ÷åò óâåëè÷åíèÿ ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàíû ïðîèñõîäèò âûðàâíèâàíèå êîíöåíòðàöèé èîíîâ âíóòðè è âíå êëåòêè. Êîíöåíòðàöèÿ Ca2+ â öèòîïëàçìå óâåëè÷èâàåòñÿ îò 10-8-107 Ì (â íîðìå) äî 10-6-10-5 Ì [101]. Ýòîìó ñïîñîáñòâóþò òàêæå (à) óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàí, óñèëèâàþùèå ïðèòîê Ca2+ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ êîìïàðòìåíòîâ (íàïðèìåð, èç ÝÐ) [2, 105], ñ ó÷àñòèåì ïðîòåèíêèíàçû Ñ è èíîçèòîë-òðèôîñôàòà, è (á) ðàçâèâàþùèéñÿ îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ [106]. Ê íàêîïëåíèþ Ñà2+ â öèòîïëàçìå ïðèâîäèò è îêèñëåíèå SÍãðóïï ðÿäà ìåìáðàííûõ áåëêîâ, âûçûâàþùåå ïîÿâëåíèå â ìåìáðàíàõ äåôåêòîâ, ÷åðåç êîòîðûå èîíû Ñà2+ ïî ãðàäèåíòó äèôôóíäèðóþò â êëåòêó. Âûñîêèå óðîâíè Ca2+, â ñâîþ î÷åðåäü, àêòèâèðóþò: - Ca2+-ÀÒÔàçó, óâåëè÷èâàÿ ïîòðåáëåíèå ÀÒÔ è âûçûâàÿ äåïîëÿðèçàöèþ ìèòîõîíäðèé [105, 107]; - ýíäîíóêëåàçû (ãèäðîëèçóþùèå ÄÍÊ) è ñïåöèôè÷åñêèå êëåòî÷íûå ïðîòåàçû, òàêèå êàê êàëüïàèí, ñóáñòðàòîì êîòîðûõ ñëóæàò íåêîòîðûå ñòðóêòóðíûå è ñèãíàëüíûå áåëêè êëåòêè [108]; - ãåíåðàöèþ ìèòîõîíäðèÿìè ÀÔÊ, ñîïðÿæåííóþ ñ èçìåíåíèÿìè ñòðóêòóðû êàðäèîëèïèíà ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí [85] è àêòèâàöèåé PLA2 [75, 105]; - ðÿä "äåñòðóêòèâíûõ", â òîì ÷èñëå ëèçîñîìàëüíûõ, ôåðìåíòîâ, òàêèõ êàê: (1) ôîñôîëèïàçû, ãèäðîëèçóþùèå ìåìáðàííûå ÔË; (2) ñïåöèôè÷åñêèå ïðîòåàçû, óñèëèâàþùèå äåñòðóêöèþ ìåìáðàí, âêëþ÷àÿ ïðîòåàçû, ðàçðóøàþùèå ìåñòà ïðèêðåïëåíèÿ ôèëàìåíòîâ öèòîñêåëåòà ê êëåòî÷íîé ìåìáðàíå, ÷òî ïðèâîäèò ê îñëàáëåíèþ ôèêñàöèè ïîñëåäíåé è èçìåíåíèþ ôîðìû ïîâåðõíîñòè êëåòîê; (3) ÀÒÔàçû, óâåëè÷èâàþùèå ïîòåðþ ÀÒÔ â êëåòêå è, (4) ýíäîíóêëåàçû, 130 ñïîñîáñòâóþùèå ôðàãìåíòàöèè õðîìàòèíà. Íàêàïëèâàþùèåñÿ ñâîáîäíûå æèðíûå êèñëîòû è èîíû Ca2+ àêòèâèðóþò PLA2, ÷òî ïðèâîäèò ê ãèäðîëèçó ÔË, è äåñòðóêöèÿ ïðèîáðåòàåò àâòîêàòàëèòè÷åñêèé õàðàêòåð [105]. Ëàâèíîîáðàçíûé êàñêàä âçàèìíî óñèëèâàþùèõ äðóã äðóãà äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ äåëàåò ïîâðåæäåíèÿ íåîáðàòèìûìè, ïðèâîäÿ ê àóòîëèçó êëåòêè, ðàçðûâó ìåìáðàíû, ñ âûñâîáîæäåíèåì âíóòðèêëåòî÷íîãî ñîäåðæèìîãî. Ïðè ýòîì èç ÔË ðàçðóøåííûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàí âîçìîæíî îáðàçîâàíèå ìèåëèíîâûõ ñòðóêòóð, êîòîðûå ìîãóò ëèáî ïîãëîùàòüñÿ äðóãèìè êëåòêàìè, ëèáî ïîäâåðãàòüñÿ äàëüíåéøåé äåãðàäàöèè ñ îáðàçîâàíèåì ñâîáîäíûõ æèðíûõ êèñëîò. Ïîñëåäíèå, îáðàçóÿ ñîëè ñ Ñà2+, ñïîñîáñòâóþò äàëüíåéøåé íåêðîòèçàöèè òêàíè. Ïîñëå ãèáåëè êëåòêè ïðîäîëæàåòñÿ äåãðàäàöèÿ åå êîìïîíåíòîâ. Âûñâîáîæäåíèå âìåñòå ñ ñîäåðæèìûì êëåòêè â ìåæêëåòî÷íóþ ñðåäó åå ôåðìåíòîâ è ïîñëåäóþùåå îáíàðóæåíèå èõ â êðîâè ñëóæèò âàæíûì êëèíè÷åñêèì ïðèçíàêîì ãèáåëè êëåòîê (â ÷àñòíîñòè ïðè èíôàðêòå ìèîêàðäà èëè çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè). Íåñïîñîáíîñòü êëåòî÷íûõ ìåìáðàí ïîääåðæèâàòü íèçêóþ êîíöåíòðàöèþ Ñà2+ â öèòîïëàçìå è ðåãóëÿöèþ ãîìåîñòàçà ìèòîõîíäðèàëüíîãî Ca2+ Brookes ñ ñîàâò. [72] ñ÷èòàþò ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì â ðàçâèòèè íåîáðàòèìûõ ïîâðåæäåíèé, ëåæàùèì â îñíîâå ìåõàíèçìà íåêðîçà êëåòîê ïðè öåëîì ðÿäå ïàòîëîãèé (èøåìèÿ, àóòîèììóííûå ïðîöåññû è ò. ä.), à òàêæå öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ìíîãèõ õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé. Âûñîêèå êîíöåíòðàöèè Ca2+ â öèòîïëàçìå äåéñòâóþò íà ìèòîõîíäðèè, ñïîñîáñòâóÿ ðàñêðûòèþ â íèõ (êàê è ïðè àïîïòîçå) òðàíçèòíûõ ïîð (ÐÒÐ), îñîáåííî â óñëîâèÿõ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà [59-63, 109]. Ïðè âûðàæåííîì îáðàçîâàíèè ÐÒÐ íàðóøàåòñÿ îñìîòè÷åñêèé áàëàíñ ìåæäó ìàòðèêñîì è ìåæìåìáðàííûì ïðîñòðàíñòâîì ìèòîõîíäðèé, âîäà íà÷èíàåò ïîñòóïàòü â ìàòðèêñ, âûçûâàÿ åãî íàáóõàíèå è ðàçðûâ íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû.  ïîâðåæäåííîé ìèòîõîíäðèè ãåíåðàöèÿ ÀÒÔ ðåçêî ñíèæàåòñÿ. Îòêðûòèå ÐÒÐ ïðèâîäèò òàêæå ê ñíèæåíèþ ìèòîõîíäðèàëüíîãî òðàíñìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà [110]. Ýòî ñî÷åòàåòñÿ ñ äåïîëÿðèçàöèåé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, ïðèâîäÿ ê äåãðàäàöèè Na+,Ê+-ÀÒÔàçû è åùå áîëüøå óñèëèâàÿ ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû [59, 111]. Ñ÷èòàþò, ÷òî îòêðûòèå ÐTP ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ôàêòîðîì â ïàòîãåíåçå íåêðîçà ïîñëå èøåìèè è ðåïåðôóçèè [109]. Ðàñêðûòèå ïîð è óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí êîíòðîëèðóåòñÿ íåêîòîðûìè (ñïåöèôè÷íûìè) âòîðè÷íûìè ìåññåíäæåðàìè è ïðîàïîïòîçíûìè áåëêàìè, âêëþ÷àÿ ñåìåéñòâî Bcl-2.  îáû÷íîé êëåòêå áåëîê BNIP3, 131 îòíîñÿùèéñÿ ê ýòîìó ñåìåéñòâó, ñëàáî àññîöèèðîâàí ñ ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíîé, íî ïðè àêòèâàöèè ïîâðåæäàþùèõ ñòèìóëîâ îí ïîëíîñòüþ èíòåãðèðóåòñÿ â íàðóæíóþ ìåìáðàíó ìèòîõîíäðèé, óâåëè÷èâàÿ åå ïðîíèöàåìîñòü, ñïîñîáñòâóÿ äèñôóíêöèè ìèòîõîíäðèé è ó÷àñòâóÿ, òàêèì îáðàçîì, â íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè. Äàííûé ìåõàíèçì ìîæåò èìåòü âàæíîå çíà÷åíèå, â ÷àñòíîñòè, ïðè ãèïîêñè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè êëåòêè, âûçûâàþùåì ýêñïðåññèþ BNIP3 [112]. Ðåïåðôóçèÿ èøåìèçèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ ãëèêîëèòè÷åñêèì ñóáñòðàòîì, ñïîñîáñòâóþùàÿ âîññòàíîâëåíèþ óðîâíÿ ÀÒÔ, ïðåäîòâðàùàåò íåêðîç äàæå ïîñëå îòêðûòèÿ ÐÒÐ, è âìåñòî íåêðîçà âêëþ÷àåòñÿ èíäóöèðîâàííûé êàñïàçàìè àïîïòîç [109]. Òî åñòü, îäíèì èç ãëàâíûõ ôàêòîðîâ, îïðåäåëÿþùèõ "âûáîð" ìåæäó íåêðîçîì è àïîïòîçîì êëåòêè, îêàçûâàåòñÿ óðîâåíü âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÒÔ. Ïîâûøåííûé ðàñõîä ÀÒÔ â ïîâðåæäåííîé êëåòêå ìîæåò áûòü âûçâàí íåîáõîäèìîñòüþ ðåñèíòåçà ÍÀÄ+ â ñâÿçè ñ àêòèâàöèåé òðåáóþùèõ ÍÀÄ+ ôåðìåíòîâ [112].  òî æå âðåìÿ òàêàÿ òî÷êà çðåíèÿ ïðîòèâîðå÷èò äàííûì Yu ñ ñîâò. [113], ïîêàçàâøèì, ÷òî ðàñõîä ÍÀÄ+ ñëóæèò òîëüêî ñèãíàëîì äëÿ òðàíñëîêàöèè â öèòîçîëü ìåæìåìáðàííîãî ìèòîõîíäðèàëüíîãî áåëêà AIF (apoptos inducing factor), àêòèâèðóþùåãî íóêëåàçû [46], è ðàñõîä ÀÒÔ îïðåäåëÿåòñÿ ýíåðãåòè÷åñêèìè ïîòðåáíîñòÿìè êëåòêè. Óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû èç-çà îòêðûòèÿ òðàíçèòíûõ ïîð ñ ïîñëåäóþùèì ðàçðóøåíèåì ìèòîõîíäðèé è èíãèáèðîâàíèåì äûõàíèÿ ïîêàçàíî â ñëó÷àå öèòîëèòè÷åñêîãî ãåïàòèòà [114, 115].  öåëîì, âñåìè àâòîðàìè îòìå÷àåòñÿ, ÷òî ðåçêî âûðàæåííàÿ ïîòåðÿ ÀÒÔ, îñîáåííî ñîïðÿæåííàÿ ñ îòêðûòèåì ÐÒÐ [62], ïðèâîäèò ê íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè. Ýòî, êàê ñ÷èòàþò, âûçâàíî âëèÿíèåì âîçíèêàþùåãî äåôèöèòà ÀÒÔ íà ìíîãèå ñèñòåìû êëåòêè, â ÷àñòíîñòè: - ñíèæàåòñÿ àêòèâíîñòü ìåìáðàííîãî ýíåðãîçàâèñèìîãî íàòðèåâîãî íàñîñà, ÷òî ïðèâîäèò ê âíóòðèêëåòî÷íîé îñìîòè÷åñêîé ïåðåãðóçêå; - èçìåíÿåòñÿ ýíåðãåòè÷åñêèé ìåòàáîëèçì â êëåòêå. Ïîâûøåííàÿ ñêîðîñòü àýðîáíîãî ãëèêîëèçà ïðèâîäèò ê áûñòðîìó èñòîùåíèþ çàïàñà ãëèêîãåíà è ñíèæåíèþ âíóòðèêëåòî÷íîãî ðÍ. Ðàçâèâàþùèéñÿ àöèäîç, â ñâîþ î÷åðåäü, ñïîñîáñòâóåò âûõîäó â öèòîïëàçìó ôåðìåíòîâ, ëîêàëèçîâàííûõ â ëèçîñîìàõ (êàòåïñèíû, íóêëåàçû, ãèàëóðîíèäàçà, êèñëàÿ ôîñôàòàçà è äð.), êîòîðûå ñïîñîáíû ãèäðîëèçîâàòü ñîáñòâåííûå êîìïîíåíòû êëåòêè, âêëþ÷àÿ êëåòî÷íûå ìåìáðàíû.  öåëîì, ïðè ëþáûõ ïîâðåæäåíèÿõ êëåòêè ñóäüáà ìèòîõîíäðèé âî ìíîãîì îïðåäåëÿåò âîçìîæíîñòü åå âûæèâàíèÿ, à òàêæå ïóòü 132 ãèáåëè (àïîïòîç èëè íåêðîç) [59]. Îáåñïå÷èâàÿ êëåòêó ýíåðãèåé (ñèíòåç ÀÒÔ), ìèòîõîíäðèè ÿâëÿþòñÿ òàêæå è èñòî÷íèêîì îáðàçóþùèõñÿ â ýòèõ ïðîöåññàõ ÀÔÊ, êîòîðûå â ñëó÷àå ãèïåðïðîäóêöèè è íàðóøåíèÿ ãîìåîñòàçà â êëåòêå, ñòàíîâÿòñÿ èñòî÷íèêîì åå ïîâðåæäåíèÿ è ãèáåëè.  íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ äîïóñòèìûé óðîâåíü ÀÔÊ â ìèòîõîíäðèÿõ ïîääåðæèâàåòñÿ ðàçâèòîé ñèñòåìîé çàùèòû, âêëþ÷àþùåé öèòîõðîìîêñèäàçó, ñóïåðîêñèääèñìóòàçó è ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçó è äð. Åñëè æå êîíöåíòðàöèÿ ÀÔÊ ïðîäîëæàåò íàðàñòàòü, ïðîèñõîäèò îòêðûòèå ÐÒÐ, ñ âûõîäîì â öèòîïëàçìó ÀÔÊ è öèòîõðîìà ñ, ÷òî ñäåðæèâàåò äàëüíåéøóþ ãåíåðàöèþ ÀÔÊ. Ïðîäîëæåíèå îòêðûòèÿ ÐÒÐ ïðè èçáûòêå ÀÔÊ âûçûâàåò ãèáåëü ìèòîõîíäðèé (íàçûâàåìóþ "ìèòîïòîçîì"), êîòîðàÿ, çà ñ÷åò âûõîäà ìèòîõîíäðèàëüíûõ áåëêîâ (öèòîõðîìà ñ, AIF) ìîæåò ïðèâåñòè ê àïîïòîçó, èëè (ïðè íåõâàòêå ÀÒÔ) ê íåêðîçó [46]. Ãèáåëü êëåòîê, âûçâàííóþ îñëàáëåíèåì ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ìèòîõîíäðèé è äåôèöèòîì ÀÒÔ, ñ÷èòàþò ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì â ðàçâèòèè ìíîãèõ ïàòîëîãèé (àòåðîñêëåðîç, äèàáåò, íåéðîäåãåíåðàòèâíûå çàáîëåâàíèÿ, ñòàðåíèå) [116]. 4.3.2. Îáðààòèìîñòü ïîâðåæäåíèé. Ñòðóêòóðíûå è ôóíêöèîíàëüíûå èçìåíåíèÿ ìèòîõîíäðèé ìîãóò áûòü îáðàòèìûìè, íàïðèìåð, ïðè íåðåçêî âûðàæåííîé ðàäèàöèè, âêëþ÷àþùåé èîíèçèðóþùåå è ÓÔ-èçëó÷åíèå, îñîáåííî â òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé ñâîéñòâåííà è äðóãèì ñóáêëåòî÷íûì ñòðóêòóðàì, òàêèì, êàê ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà è ÝÐ [117]. Îáðàòèìûì ñ÷èòàþò ñàìî ÿâëåíèå ôîðìèðîâàíèÿ òðàíçèòíûõ ïîð [59, 118], îäíàêî êîíêðåòíûå óñëîâèÿ èõ âîçìîæíîãî çàêðûòèÿ íå îïèñàíû. In vitro ïðè ãèïåðîñìîòè÷åñêîì âîçäåéñòâèè, âûçûâàþùåì ôðàãìåíòàöèþ ìèòîõîíäðèàëüíîé ñåòè, ïîêàçàíà îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé ìèòîõîíäðèé: ÷åðåç 1 ÷àñ ïîñëå çàìåíû ãèïåðòîíè÷åñêîé ñðåäû íà èçîòîíè÷åñêóþ íàáëþäàëîñü âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû [119]. Âîçìîæíîñòü îáðàòèìîñòè ïîâðåæäåíèé, îñîáåííî íà íà÷àëüíûõ ýòàïàõ, ïîêàçàíà è äëÿ öåëüíûõ êëåòîê. Ïåðâàÿ, îáðàòèìàÿ ñòàäèÿ - ýòî íåñïåöèôè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ, ñâîéñòâåííàÿ ëþáîìó ðàçäðàæåíèþ. Îíà õàðàêòåðèçóåòñÿ óâåëè÷åíèåì ïðîíèöàåìîñòè êëåòî÷íûõ ìåìáðàí äëÿ èîíîâ, â ÷àñòíîñòè, Ñà2+, ñ ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé âíóòðèêëåòî÷íûõ ãèäðîëàç. Ïðè ýòîì îòíîñèòåëüíî ìÿãêèå óñòîé÷èâûå ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí, ïðîÿâëÿþùèåñÿ â íåáîëüøîì èçìåíåíèè ñîñòàâà ëèïèäîâ è ìèêðîâÿçêîñòè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ, ïðèâîäÿò íå ê ãèáåëè êëåòêè, à ê ðàçâèòèþ ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé. Íàïðèìåð, 133 âîçðàñòàíèå äîëè õîëåñòåðèíà â ìåìáðàíàõ ïðè íàðóøåíèÿõ ëèïèä-òðàíñïîðòíîé ñèñòåìû, ñâÿçàííûõ ñ àòåðîñêëåðîçîì è/èëè ñòàðåíèåì, èëè ÷àñòè÷íî êîìïåíñèðóåìûå ïðîöåññû ÏÎË ïðè ñàõàðíûì äèàáåòå [120]. Ïàòîëîãèè, ñâÿçàííûå ñ òàêèìè íàðóøåíèÿìè, ìîãóò ïðîòåêàòü äëèòåëüíîå âðåìÿ, âûçûâàÿ õðîíè÷åñêîå íàêîïëåíèå äåôåêòîâ ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ôóíêöèé.  òî æå âðåìÿ, ïî ïðåêðàùåíèþ äåéñòâèÿ ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ (èøåìèè, ðàäèàöèè, òîêñè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ è äð.) îãðàíè÷åííîå (ëîêàëüíîå) ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû ìîæåò áûòü âîññòàíîâëåíî. Òàê, îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé â êëåòêàõ íàáëþäàëè ïðè èøåìèè ìèîêàðäà ñ ïîñëåäóþùåé ðåïåðôóçèåé [121]. Ïðè îòíîñèòåëüíî íåáîëüøîé èøåìèè âîçìîæíà àäàïòàöèÿ êëåòêè, ñîïðîâîæäàþùàÿñÿ íåêîòîðûìè èçìåíåíèÿìè ñîîòíîøåíèÿ ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ (íàñûùåííûõ è íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò, èíäèâèäóàëüíûõ êëàññîâ ÔË, õîëåñòåðèíà) è ñâÿçàííûìè ñ ýòèì íåáîëüøèìè ïîñòåïåííûìè ïîâðåæäåíèÿìè. Ðåçêàÿ æå èëè äëèòåëüíàÿ èøåìèÿ ïðèâîäèò óæå ê ãëóáîêîìó ïîâðåæäåíèþ êëåòêè è ðàçâèòèþ íåêðîçà èëè àïîïòîçà. Îòìå÷àþò äâà ôàêòîðà, îáóñëàâëèâàþùèå íåîáðàòèìîñòü êëåòî÷íîãî ïîâðåæäåíèÿ ïðè èøåìèè: (1) ìèòîõîíäðèàëüíàÿ äèñôóíêöèÿ êëåòêè ñ ðåçêèì äåôèöèòîì ÀÒÔ è (2) ðàçâèòèå âûðàæåííûõ ïîâðåæäåíèé ôóíêöèé ìåìáðàí. Ïðè íàëè÷èè ýòèõ ôàêòîðîâ âîçíèêøåå ïîâðåæäåíèå â îñòàâøèõñÿ êëåòêàõ îáîñòðÿåòñÿ ïîñëå ðåïåðôóçèè åùå áîëüøå, âûçûâàÿ, òàê íàçûâàåìûå, "èøåìè÷åñêèåðåïåðôóçèîííûå" ïîâðåæäåíèÿ. Äî ñèõ ïîð íåò óíèâåðñàëüíîé îöåíêè, õàðàêòåðèçóþùåé "ïîãðàíè÷íûé" ñòàòóñ ïåðåõîäà ïîâðåæäåííîé êëåòêè èç îáðàòèìîãî ñîñòîÿíèÿ ê íåîáðàòèìîìó. Âåðîÿòíî, ýòî è íåâîçìîæíî èç-çà ñîâîêóïíîñòè ìíîæåñòâåííîãî âëèÿíèÿ èíäèâèäóàëüíûõ êëåòî÷íûõ ôàêòîðîâ. Lieberthal ñ ñîàâò. [122] ïðîâåëè ðàñ÷åò çàâèñèìîñòè îáðàòèìîñòè èëè íåîáðàòèìîñòè ïîâðåæäåíèÿ êëåòêè (óõîäà â àïîïòîç èëè íåêðîç) îò åå îáåñïå÷åííîñòè ÀÒÔ. Ïî èõ äàííûì, àïîïòîç ðàçâèâàåòñÿ ïðè äåôèöèòå ÀÒÔ â 25-70 % îò åãî íîðìàëüíîãî óðîâíÿ, à íåêðîç - â ñëó÷àå ïðåâûøåíèÿ ýòîãî ïîðîãà. Ñëåäîâàòåëüíî, åñëè äåôèöèò ÀÒÔ ìåíüøå ~ 20%, òî óñïåâøèå ðàçâèòüñÿ èçìåíåíèÿ, âêëþ÷àÿ ïåðâè÷íûå ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàíû, ÿâëÿþòñÿ îáðàòèìûìè è ó êëåòêè åñòü "øàíñ" âûæèòü. Âàæíóþ ðîëü â íîðìàëèçàöèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòêè èãðàþò, òàê íàçûâàåìûå, "áåëêè òåïëîâîãî øîêà" (heat shock proteins, hsp), êîòîðûå ñïîñîáñòâóþò îïòèìàëüíîìó ôîëäèíãó áåëêîâ è âîññòàíîâëåíèþ èõ ïîñëå ïîâðåæäåíèé [46, 123]. Âçàèìîñâÿçü ðàññìîòðåííûõ âûøå áèîõèìè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, 134 Ðèñ. 4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû ïðè íåêðîòè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè êëåòêè ïðèâîäÿùèõ ê íåêðîçó êëåòêè ìîæíî ïðåäñòàâèòü ñõåìîé (Ðèñ.4.3.1). [19]. Òàêèì îáðàçîì, â áèîõèìè÷åñêîì ìåõàíèçìå íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè êëþ÷åâóþ ðîëü èãðàþò òðè òèïà ñîïðÿæåííûõ ïðîöåññîâ: (1) ðåçêîå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè èîíîâ Ñà2+ â öèòîçîëå; (2) ðàçîáùåíèå äûõàíèÿ è îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ (ñ èñòîùåíèåì êëåòî÷íîãî ÀÒÔ); (3) âîçðàñòàíèå ïðîíèöàåìîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è åå ïîâðåæäåíèå. Ýòè äåñòðóêòèâíûå ïðîöåññû, êàæäûé èç êîòîðûõ óñèëèâàåòñÿ ãåíåðàöèåé ÀÔÊ è ðàçâèâàþùèìñÿ îêèñëèòåëüíûì ñòðåññîì, ïðîòåêàþò îäíîâðåìåííî è âçàèìîñâÿçàíî [3, 8, 105-107]. Òîðìîæåíèå èëè áëîêèðîâàíèå íà îïðåäåëåííûõ ñòàäèÿõ ýòèõ äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ, îñîáåííî â ñî÷åòàíèè ñ íàïðàâëåííîé ðåïàðàöèåé ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí, è ÿâëÿåòñÿ îñíîâîé òåðàïåâòè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ íà ïàòîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû, ñîïðîâîæäàþùèåñÿ ðàçâèòèåì íåêðîçîâ.  ïîñëåäíèå ãîäû ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü ñìåøàííûõ ïóòåé êëåòî÷íîé ñìåðòè, à èìåííî, íåêðîòè÷åñêàÿ ãèáåëü êëåòîê ìîæåò ñîäåðæàòü íåêîòîðûå ýëåìåíòû àïîïòîçà (íî íå íàîáîðîò) [100]. Íàïðèìåð, íåîáðàòèìàÿ ãèáåëü êëåòîê ïî÷å÷íîé òêàíè, èíäóöèðîâàííàÿ èøåìèåé, òîêñèíàìè èëè îñòðîé ïî÷å÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïðîèñõîäèò ïóòåì àïîïòîçà è íåêðîçà îäíîâðåìåííî [20]. Îòíîñèòåëüíûé âêëàä ýòèõ äâóõ ìåõàíèçìîâ â ãèáåëü êëåòîê çàâèñèò îò èõ òèïà è ñòåïåíè ïîâðåæäåíèÿ [124, 125]. Ïî ìíåíèþ Zeiss [100], ñóùåñòâóåò, òàê íàçûâàåìûé, "àïîïòîçîíåêðîçíûé êîíòèíóóì", îïðåäåëÿåìûé ïåðåêðåñòíûìè âçàèìîäåéñòâèÿìè (cross-talk) ìåæäó ðåàêöèÿìè ãèáåëè êëåòêè è 135 ñîõðàíåíèÿ ãîìåîñòàçà. Ýòè ïðîöåññû ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü êàê â òêàíè, òàê è â îäíîé êëåòêå. Íà êóëüòóðå êëåòîê áûëî ïîêàçàíî, ÷òî âíåñåíèå ãëþêîçû êàê ýíåðãåòè÷åñêîãî ñóáñòðàòà ñäâèãàåò áàëàíñ â ñòîðîíó àïîïòîçà [26]. Ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ, ñâèäåòåëüñòâóþùèõ îá ó÷àñòèè â ïðîöåññàõ íåêðîçà â êëåòêå íå òîëüêî ìèòîõîíäðèàëüíûõ ïîð (ÐÒÐ), íî è íåêîòîðûõ êàñïàç (â ÷àñòíîñòè êàñïàçû-1) [126], èëè "Fas-àññîöèèðîâàííîãî äîìåíà ñìåðòè" (FADD) [127]. Íà êóëüòóðå êëåòîê 293Ò ïîêàçàí "íåàïîïòîòè÷åñêèé" òèï ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé ñìåðòè - ñ ÷àñòè÷íî àïîïòîçíîé ìîðôîëîãèåé, íî ñ íàáóõàíèåì ìèòîõîíäðèé è áåç ôðàãìåíòàöèè ÿäðà - íàçâàííûé àâòîðàìè "ïàðàïòîçîì" [128]. Äëÿ ãèáåëè íåéðîíîâ òàêæå îòìå÷åíû "íåêðîçî-ïîäîáíûå ôåíîòèïû" (àïîíåêðîç) [14].  èññëåäîâàíèÿõ ex vivo íà àöèíàðíûõ êëåòêàõ ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ìÿãêàÿ (óìåðåííàÿ) ôîðìà ïàíêðåàòèòà ñîïðÿæåíà ïðåèìóùåñòâåííî ñ àïîïòîçîì, à ïðè îñòðîì âûðàæåííîì ïàíêðåàòèòå íàáëþäàëñÿ íåêðîç ñ î÷åíü ìàëûì âêëþ÷åíèåì àïîïòîçíûõ êëåòîê [19]. Òàêèì îáðàçîì, ðàçíîîáðàçíûå âíåøíèå è âíóòðåííèå ïîâðåæäàþùèå ôàêòîðû èíèöèèðóþò â êëåòêå îòâåò â âèäå àïîïòîçà è/èëè íåêðîçà - äâóõ ôîðì êëåòî÷íîé ãèáåëè, ðàçëè÷àþùèõñÿ ïî êëèíèêî-ìîðôîëîãè÷åñêèì è áèîõèìè÷åñêèì ïðèçíàêàì. Ïðåäñòàâëåíèÿ î ïåðâè÷íîñòè ìåìáðàííûõ íàðóøåíèé ïðè äåéñòâèè íà êëåòêó ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ, õàðàêòåðíûå äëÿ 70-80-õ ã.ã. ïðîøëîãî âåêà, áëàãîäàðÿ ïîëó÷åííûì ìíîãî÷èñëåííûì äîêàçàòåëüñòâàì, íåñêîëüêî èçìåíèëèñü. Äëÿ àïîïòîçà õàðàêòåðíî èçìåíåíèå ôóíêöèé ìåìáðàí íà çàêëþ÷èòåëüíûõ ýòàïàõ ãèáåëè êëåòêè, à äëÿ íåêðîçà ýòîò ýòàï ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç êëþ÷åâûõ, îïðåäåëÿþùèõ îáðàòèìîñòü ðàçâèâàþùèõñÿ ïîâðåæäåíèé. 4.4. Ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí êàê îáðàòèìûé ýòàï íåêðîçà. 4.4.1.Îáù ùèå áèîõèìè÷åñêèå ìåõààíèçìû ïîâðåæäåíèÿÿ ìåìáðààíû. Íåñìîòðÿ íà ìíîãîîáðàçèå ôàêòîðîâ, âûçûâàþùèõ íåêðîòè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå êëåòêè, ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî îñíîâíûõ ìåõàíèçìîâ íàðóøåíèÿ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ìåìáðàí êëåòîê è èõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Ê ÷èñëó íàèáîëåå âàæíûõ ïåðâè÷íûõ ïðîöåññîâ îòíîñÿò [105]: (1) ÏÎË, ñîïðîâîæäàþùååñÿ îêèñëèòåëüíîé ìîäèôèêàöèåé ìåìáðàííûõ áåëêîâ è èçìåíåíèåì ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ â êëåòêå; (2) àêòèâàöèÿ ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç è ýíäîãåííûõ ôîñôîëèïàç. Ýòè äåñòðóêòèâíûå ïðîöåññû â êëåòêå ñîïðÿæåíû ñ (3) äåòåðãåíòíûìè ýôôåêòàìè 136 íàêàïëèâàþùèõñÿ ïðîäóêòîâ ðàñùåïëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ (ñâîáîäíûõ æèðíûõ êèñëîò, ëèçîôîñôîëèïèäîâ); (4) ïîâðåæäåíèì öèòîñêåëåòà è "îòñîåäèíåíèåì" åãî îò êëåòî÷íîé ìåìáðàíû, ÷òî äåëàåò ìåìáðàíó áîëåå äîñòóïíîé ê ðàñòÿæåíèþ è ðàçðûâó.  òîé èëè èíîé ñòåïåíè êàæäûé èç óêàçàííûõ ìåõàíèçìîâ ÿâëÿåòñÿ óíèâåðñàëüíûì è èãðàåò ðîëü â ïàòîãåíåçå ìíîãèõ çàáîëåâàíèé. Âîçìîæíû âîçäåéñòâèÿ è ðÿäà èíûõ, áîëåå ñïåöèôè÷åñêèõ, ìåìáðàíî-ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ, íàïðàâëåííûõ íåïîñðåäñòâåííî íà áåëêîâûå êîìïîíåíòû (òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå èîíîâ òÿæåëûõ ìåòàëëîâ, áàêòåðèàëüíûõ òîêñèíîâ, íåêîòîðûõ ÿäîâ è äð.), ÷òî ïîäðîáíî îïèñàíî â ëèòåðàòóðå [1, 3]. 4.4.2. Ñâîáîäíî-ð ðàäèêààëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ. Ñâîáîäíîðàäèêàëüíîå èëè ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ, áëàãîäàðÿ âîçðîñøåìó èíòåðåñó ê åãî ìíîãî÷èñëåííûì ýôôåêòàì, ñòàëî ôàêòè÷åñêè îòäåëüíîé îáëàñòüþ áèîõèìèè, êîòîðîé ïîñâÿùåíî îãðîìíîå êîëè÷åñòâî ëèòåðàòóðû [129 - 137], íà÷èíàÿ ñî ñòàâøåé óæå êëàññè÷åñêîé êíèãè À.È. Àð÷àêîâà è Þ.À. Âëàäèìèðîâà "Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ" [130].  íàñòîÿùåì îáçîðå ïðåäïîëàãàåòñÿ ðàññìîòðåòü ëèøü ìåìáðàííî-ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ÏÎË, â îñíîâíîì çà ñ÷åò îáðàçóþùèõñÿ ïåðåêèñíûõ ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé (îáîçíà÷àåìûõ â ëèòåðàòóðå êàê LOOH) è äðóãèõ ðîäñòâåííûõ èì èíòåðìåäèàòîâ (ïðîìåæóòî÷íûõ ñîåäèíåíèé ðåàêöèé ÏÎË).  èíèöèèðîâàíèè ïðîöåññîâ ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîãî ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ âåäóùóþ ðîëü èãðàþò àêòèâíûå ôîðìû ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà. Ê èõ ÷èñëó îòíîñÿòñÿ ñèíãëåòíûé êèñëîðîä (1Î2), ñóïåðîêñèäíûå ðàäèêàëû (Î2•- ), ïåðåêèñü âîäîðîäà Í2Î2 è íàèáîëåå ðåàêöèîííî àêòèâíûå ãèäðîêñèëüíûå (ÎÍ•) è ïåðîêñèäíûå (ÍΕ2) ðàäèêàëû. ×ðåçâû÷àéíî ðåàêöèîííîñïîñîáíûé ñèíãëåòíûé êèñëîðîä (1Î2) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ýëåêòðîííî-âîçáóæäåííóþ ôîðìó ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà [138].  îòëè÷èå îò îáû÷íîé ìîëåêóëû Î2, â êîòîðîé äâà íåñïàðåííûõ ýëåêòðîíà ñ ïàðàëëåëüíûìè ñïèíàìè íàõîäÿòñÿ íà ðàçðûõëÿþùèõ îðáèòàëÿõ (îáîçíà÷àåìûõ êàê π*x,z), â ñèíãëåòíîì êèñëîðîäå ïðîèñõîäèò èçìåíåíèå ñîñòîÿíèÿ îäíîãî èç ýëåêòðîíîâ ïóòåì åãî ïåðåõîäà íà äðóãóþ îðáèòàëü ñ îäíîâðåìåííîé èíâåðñèåé ñïèíà (ò.å. íàïðàâëåíèÿ âðàùåíèÿ). Îáðàçîâàíèå ñèíãëåòíîãî êèñëîðîäà, îáëàäàþùåãî äèàìàãíèòíûìè è âûðàæåííûìè ýëåêòðîííî-àêöåïòîðíûìè ñâîéñòâàìè, ñîïðÿæåíî ñ ïîãëîùåíèåì ñâîáîäíîé ýíåðãèè (400 ÊÄæ/ìîëü). 137  îðãàíèçìå ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ 1Î2 îáðàçóåòñÿ êàê ïîáî÷íûé ïðîäóêò ïðè òàêèõ ðåàêöèÿõ, êàê ðàñïàä îðãàíè÷åñêèõ ãèäðîïåðåêèñåé, äèñìóòàöèÿ ñóïåðîêñèäíûõ àíèîíîâ è ïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ, âçàèìîäåéñòâèÿõ Í2Î2 ñ -ÎÑl, êàòàëèçèðóåìûõ õëîðïåðîêñèäàçîé. Ïîêàçàíî îáðàçîâàíèå 1Î2 ïðè ïåðåêèñíîì îêèñëåíèè ìèêðîñîìàëüíûõ ëèïèäîâ, ðåàêöèÿõ áèîñèíòåçà ïðîñòàãëàíäèíîâ, è äð. [131]. Íàïðèìåð, ïðè ðàçëîæåíèè Í2Î2 êàòàëàçîé 0,5% îáðàçóþùåãîñÿ êèñëîðîäà íàõîäèòñÿ â ñèíãëåòíîì ñîñòîÿíèè. Èç-çà âûñîêîé ðåàêöèîííîé ñïîñîáíîñòè âðåìÿ æèçíè 1Î2 â ìåìáðàíàõ ÷ðåçâû÷àéíî êîðîòêîå (ïîðÿäêà 10-6 ñåê), ïîýòîìó åãî êîíöåíòðàöèÿ â ìåìáðàíàõ íå ïðåâûøàåò 10-6 Ì [134]. Ñèíãëåòíûé êèñëîðîä ñ÷èòàþò îäíèì èç ñàìûõ ñèëüíûõ îêñèäàíòîâ, öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå êîòîðîãî ñâÿçàíî, ïðåæäå âñåãî, ñ îêèñëèòåëüíîé ìîäèôèêàöèåé ìåìáðàííûõ áåëêîâ çà ñ÷åò îêèñëåíèÿ Trp, His, Tyr, Met è Cys, ñ äàëüíåéøåé èíèöèàöèåé äðóãèõ îêèñëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ. Ñëåäñòâèåì òàêîãî îêèñëåíèÿ îêàçûâàåòñÿ èíàêòèâàöèÿ áåëêîâ è èõ àãðåãàöèÿ ñ îáðàçîâàíèåì ïîïåðå÷íûõ ñøèâîê [138-140]. Ïîêàçàíî, ÷òî äåéñòâèå 1Î2 ðàçîáùàåò ñèãíàëüíûå ïðîöåññû â êëåòêå, è âûçûâàåò çàùèòíûé êëåòî÷íûé îòâåò, âêëþ÷àþùèé àêòèâàöèþ ÌÀÐÊ [141]. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè íå ñ÷èòàþò îïðåäåëÿþùèì âêëàä ýíäîãåííîãî 1Î2 â îáùåå öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÀÔÊ [134, 142], â áîëüøèíñòâå ðàáîò ñàìûõ ïîñëåäíèõ ëåò îòìå÷àåòñÿ çíà÷åíèå ñèíãëåòíîãî êèñëîðîäà êàê ìîùíîãî ôàêòîðà ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ [138, 139]. Êëþ÷åâûìè â äåéñòâèè ÀÔÊ ÿâëÿþòñÿ òàêæå ïåðâè÷íûå, ñóïåðîêñèäíûå ðàäèêàëû (Î2•-), êîòîðûå îáðàçóþòñÿ ïðè ó÷àñòèè ýëåêòðîí-òðàíñïîðòíûõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì â ìèòîõîíäðèÿõ îñîáåííî èíòåíñèâíî ïðè "êèñëîðîäíîì âçðûâå", ñâÿçàííîì ñ àêòèâàöèåé ÍÀÄÔÍ-îêñèäàçû [143]. Ñêîðîñòü ãåíåðàöèè (Î2•-) ìîæåò óâåëè÷èâàòüñÿ ïðè ïîïàäàíèè â êëåòêè òàêèõ ñîåäèíåíèé, êàê áèïèðèäèëû èëè àíòðàöèêëèíû, êîòîðûå ïðèíèìàþò èëè îòäàþò ýëåêòðîíû íà óðîâíå ôëàâèíîâûõ èëè õèíîíîâûõ ïåðåíîñ÷èêîâ è çàòåì àóòîîêèñëÿþòñÿ, ïîâûøàÿ âûõîä êèñëîðîäíîãî ðàäèêàëà [133]. Èç íèõ îáðàçóþòñÿ âòîðè÷íûå ñâîáîäíûå ðàäèêàëû - ðàäèêàëû ãèäðîêñèëà (ÎÍ•), ïåðîêñèäà (ÍÎ2•) è ðàäèêàëû ëèïèäîâ - êàê ïðîäóêòû ðåàêöèé ñóïåðîêñèäà (Î2•-), ïîä äåéñòâèåì ïðèñóòñòâóþùèõ â îðãàíèçìå èîíîâ ìåòàëëîâ ïåðåìåííîé âàëåíòíîñòè, â ïåðâóþ î÷åðåäü Fe2+ [8, 106, 130, 134, 137]. Ñóïåðîêñèä (Î2•-) ðåàãèðóåò êðàéíå áûñòðî ñ äðóãèì, ñëàáî îêèñëÿþùèìñÿ ðàäèêàëîì, îêñèäîì àçîòà (NO•), îáðàçóÿ ïåðîêñèíèòðèò (ÎNOÎ) èëè ïåðîêñèíèòðîêèñëîòó (ÎNOÎÍ) ñèëüíûé îêñèäàíò è íèòðèðóþùèé àãåíò [144]. Âñå ýòè ïðîäóêòû 138 îêàçûâàþò ðàçðóøèòåëüíîå äåéñòâèå íà êëåòî÷íûå ñòðóêòóðû, èíèöèèðóÿ ðåàêöèè öåïíîãî îêèñëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ ìåìáðàí. Èíèöèèðîâàíèå öåïíîé ðåàêöèè íà÷èíàåòñÿ ñ âíåäðåíèÿ â ìåìáðàíó ñâîáîäíîãî ðàäèêàëà (â ïåðâóþ î÷åðåäü ÎÍ•), ñïîñîáíîãî èç-çà íåáîëüøîãî ðàçìåðà ïðîíèêàòü â òîëùó ãèäðîôîáíîãî ëèïèäíîãî ñëîÿ è âñòóïàòü â õèìè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ñ ïîëèíåíàñûùåííûìè æèðíûìè êèñëîòàìè ÔË, ðàçðûâàÿ Ñ-Í-ñâÿçè îêîëî ñîñåäíåãî ñ äâîéíîé ñâÿçüþ àòîìà óãëåðîäà (-ÑÍ=ÑÍ-CÍ2-), ñ ïîñëåäóþùèì îáðàçîâàíèåì ëèïèäíûõ ðàäèêàëîâ, èíèöèèðóþùèõ, â ñâîþ î÷åðåäü, ñëåäóþùóþ ðåàêöèþ. Ýòîò, ïîäðîáíî îïèñàííûé â ëèòåðàòóðå ïðîöåññ, ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ øèðîêîãî ñïåêòðà ïðîäóêòîâ äåãðàäàöèè ÔË, âûçûâàþùèõ èçìåíåíèÿ ñâîéñòâ áèîìåìáðàí [8, 130, 134].  ïðîöåññå îêèñëåíèÿ ìîæåò ïðîèñõîäèòü, â ÷àñòíîñòè, îáðàçîâàíèå ìåìáðàíîàêòèâíûõ ëèçîÔË. Ãèäðîîêñèäû ÔË è ëèçîÔË, îáëàäàÿ âûðàæåííûìè äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, ñïîñîáíû âûçâàòü äåçîðãàíèçàöèþ ëèïèäíîãî áèñëîÿ, ïðîÿâëÿþùóþñÿ â óâåëè÷åíèè òîëùèíû ìåìáðàíû, ôðàãìåíòàöèè ìåìáðàííûõ âåçèêóë, âûòåñíåíèè ìåìáðàííûõ áåëêîâ èç ãèäðîôîáíîé çîíû áèñëîÿ â ïîâåðõíîñòíóþ ïîëÿðíóþ îáëàñòü.  áèîìåìáðàíàõ öåïü îêèñëåíèÿ ìîæåò ñîñòîÿòü èç äåñÿòè è áîëåå çâåíüåâ.  êîíöå êîíöîâ, öåïü îáðûâàåòñÿ â ðåçóëüòàòå âçàèìîäåéñòâèÿ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ ñ àíòèîêñèäàíòàìè, èîíàìè ìåòàëëîâ ïåðåìåííîé âàëåíòíîñòè (íàïðèìåð, Fe2+) èëè äðóã ñ äðóãîì [8, 130, 137]. Îêèñëåíèþ ÔË ñïîñîáñòâóåò áîëåå âûñîêàÿ (â 7-8 ðàç) ðàñòâîðèìîñòü ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà â ëèïèäíîé ôàçå, ÷åì â âîäå è ãèäðîôèëüíûõ ó÷àñòêàõ êëåòêè. Äëÿ ðàçâèòèÿ ïðîöåññà âàæíà ñòåïåíü íàñûùåííîñòè òêàíåé êèñëîðîäîì, ïîâûøàþùàÿ êîëè÷åñòâî ðàäèêàëîâ â âèäå âòîðè÷íûõ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà. Ïîýòîìó õîðîøî ñíàáæàåìûå êðîâüþ è íàñûùåííûå êèñëîðîäîì òêàíè (ëåãêèå, ñåðäöå, ãîëîâíîé ìîçã) ÿâëÿþòñÿ áîëåå ÷óâñòâèòåëüíûìè ê ïîâðåæäàþùåìó äåéñòâèþ àêòèâàòîðîâ ÏÎË. Îêèñëåíèþ ïîäâåðæåíû â ïåðâóþ î÷åðåäü íåíàñûùåííûå ÔË, ñîäåðæàùèå â sn-2 ïîëîæåíèè ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû - àðàõèäîíîâóþ, ëèíîëåâóþ è äð., ÿâëÿþùèåñÿ îñíîâíîé ìèøåíüþ ÏÎË. Íàïðèìåð, ïðè èíäóêöèè ÏÎË â ìåìáðàíàõ ÝÐ ïðîèñõîäèò èçáèðàòåëüíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ïîëèåíîâûõ æèðíûõ êèñëîò ÔÝ. Ñîäåðæàíèå ÔÕ òàêæå ñíèæàåòñÿ è óâåëè÷èâàåòñÿ êîíöåíòðàöèÿ áîëåå ïîëÿðíûõ ëèïèäîâ, ñ íàñûùåííûìè æèðíûìè êèñëîòàìè - ëèçîÔÕ è ÑÌ. Ïðè ýòîì óðîâåíü àðàõèäîíîâîé êèñëîòû ñíèæàåòñÿ áîëåå ÷åì âäâîå, à äîêîçîãåêñàåíîâàÿ êèñëîòà (22:6) èñ÷åçàåò ïî÷òè ïîëíîñòüþ [145]. 139 Èçâåñòíî, ÷òî ÔË ðàñïðåäåëåíû â ìåìáðàíå àñèììåòðè÷íî ñ ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèåé àìèíîñîäåðæàùèõ ëèïèäîâ ñ ïîëèíåíàñûùåííûìè ÆÊ âî âíóòðåííåì ìîíîñëîå [146] (ñì. ãëàâó 3). Èìåííî ýòè ÔË íàèáîëåå ïîäâåðæåíû ïåðåêèñíîìó îêèñëåíèþ, ïðèâîäÿùåìó â èòîãå ê åùå áîëüøåé àñèììåòðèè ìåìáðàíû è èçìåíåíèþ åå ñâîéñòâ, ñîïðÿæåííûõ ñ æèäêîñòíîñòüþ è ïðîíèöàåìîñòüþ, ÷òî è íàáëþäàåòñÿ ïðè ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ ðàçëè÷íîé ýòèîëîãèè.  ïðîöåññ âîâëåêàþòñÿ ÔË, êàê ôîðìèðóþùèå áèñëîé, òàê è âõîäÿùèå â ìèêðîîêðóæåíèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Ðåöåïòîðû ìàêðîôàãîâ ìîãóò "óçíàâàòü" ìåìáðàíû êëåòîê, ïîâðåæäåííûõ ÏÎË çà ñ÷åò ïðèñóòñòâèÿ íà âíåøíåì ìîíîñëîå îêèñëåííûõ ôîñôîëèïèäîâ è ÔÑ, òðàíñëîöèðîâàííîãî èç âíóòðåííåé îáëàñòè ìåìáðàíû (ñì. àïîïòîç) [83]. ÔË, ëîêàëèçîâàííûå â ìåìáðàííûõ ðàôòàõ, ìåíåå ïîäâåðæåíû ÏÎË èç-çà íèçêîãî ñîäåðæàíèÿ â íèõ íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò. Ïåðåêèñíîìó îêèñëåíèþ ïîäâåðãàåòñÿ òàêæå è ìåìáðàííûé õîëåñòåðèí, ïðè ýòîì îáðàçóþòñÿ 5α-, 6α-, 7α- è 6β-ãèäðîïåðåêèñè õîëåñòåðèíà [147].  íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ èç-çà ñòðîãîãî êîíòðîëÿ ñïåöèôè÷åñêèõ ðåãóëÿòîðíûõ ñèñòåì êëåòêè ñêîðîñòü ÏÎË íåâåëèêà. Óâåëè÷åííîå îáðàçîâàíèå ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ â îðãàíèçìå è ñâÿçàííîå ñ ýòèì óñèëåíèå ïðîöåññîâ ÏÎË (îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ) ñîïðîâîæäàåòñÿ ðÿäîì íàðóøåíèé ñâîéñòâ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí è ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòêè â öåëîì [101, 148 - 150]. Íåïîñðåäñòâåííûì ðåçóëüòàòîì ÏÎË ÿâëÿåòñÿ ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàíû, ÷òî ìîæåò áûòü îáóñëîâëåíî: (1) èçìåíåíèåì çàðÿäà íà ïîâåðõíîñòè ðàçäåëà ìåìáðàíàîêîëîìåìáðàííàÿ ñðåäà; (2) èçìåíåíèåì êîíôîðìàöèè ìåìáðàííûõ ëèïîïðîòåèíîâûõ êîìïëåêñîâ; (3) ïîÿâëåíèåì ãèäðîôèëüíûõ ó÷àñòêîâ â ãèäðîôîáíîì ñëîå ìåìáðàíû. Îáðàçîâàíèå òàêèõ ãèäðîôèëüíûõ ñàéòîâ ìîæåò ïðèâåñòè ê ôîðìèðîâàíèþ âîäíûõ ïîð, ðåçêî íàðóøèòü ñòàáèëüíîñòü ñëîÿ ìåìáðàíû, âïëîòü äî åå ïîëíîãî ðàçðûâà [130, 137 14]. Ðåçóëüòàòîì ÏÎË îêàçûâàåòñÿ è óìåíüøåíèå ñòàáèëüíîñòè ëèïèäíîãî áèñëîÿ, ÷òî ìîæåò ïðèâåñòè, â ñâîþ î÷åðåäü, ê èçìåíåíèþ ýëåêòðè÷åñêèõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû, è, êàê ñëåäñòâèå - ïîòåðå ìåìáðàíîé åå áàðüåðíûõ ôóíêöèé. Îñîáîå âíèìàíèå â ëèòåðàòóðå ïîñëåäíèõ ëåò óäåëÿåòñÿ äåéñòâèþ NO• è ãåíåðèðóþùèõ åãî NO-ñèíòàç (îñîáåííî ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû - eNOS) [151-153], â ÷àñòíîñòè, ðîëè NO• â ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññàõ. Ýòà, ïðîíèêàþùàÿ ÷åðåç ìåìáðàíó ìîëåêóëà, îáíàðóæåííàÿ â áèîëîãè÷åñêèõ ñèñòåìàõ â 140 1980-õ ãîäàõ, îêàçàëàñü âàæíûì ñèãíàëüíûì ðåãóëÿòîðîì ìíîãèõ ïðîöåññîâ, âêëþ÷àÿ ìèòîõîíäðèàëüíîå äûõàíèå è îáðàçîâàíèå ÀÔÊ. NO• ñ áîëüøèì ñðîäñòâîì, ÷åì êèñëîðîä, ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîêñèäàçîé, èíãèáèðóÿ òåì ñàìûì ìèòîõîíäðèàëüíûé àýðîáíûé ìåòàáîëèçì è êîíòðîëèðóÿ ñêîðîñòü âõîäà êèñëîðîäà â äûõàòåëüíóþ öåïü. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî èìåííî áëàãîäàðÿ ýòîìó ñâîéñòâó NO• ïðè îêèñëèòåëüíîì ñòðåññå â íåêîòîðîé ñòåïåíè ñäåðæèâàþòñÿ ïðîöåññû îêèñëåíèÿ. Êðîìå òîãî, ïðè èíòåíñèâíîé ãåíåðàöèè ÀÔÊ, NO•, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ðàäèêàëàìè, ñïîñîáñòâóåò ãåíåðàöèè ðåàêöèîííîñïîñîáíîãî ïåðîêñèíèòðèòà [153]. Ïðè òÿæåëûõ ïàòîëîãèÿõ (íàïðèìåð, ñåïñèñ) NO• è ÀÔÊ, íàêàïëèâàÿñü â êëåòêå â áîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ, èíàêòèâèðóþò êîìïîíåíòû ìèòîõîíäðèàëüíîé äûõàòåëüíîé öåïè, áëîêèðóÿ êëåòî÷íîå äûõàíèå è èíèöèèðóÿ íåêðîç [154]. Ïîýòîìó ñåïñèñ â ïîñëåäíåå âðåìÿ îòíîñÿò ê "ìèòîõîíäðèàëüíûì áîëåçíÿì", òåðàïèÿ êîòîðûõ ìîæåò áûòü ñâÿçàíà ñ âîçäåéñòâèåì íà äûõàòåëüíûå ôåðìåíòû ìèòîõîíäðèé [155]. Ëèïèäíûå ðàäèêàëû èíèöèèðóþò ïîâðåæäåíèÿ íå òîëüêî ôîñôîëèïèäîâ ìåìáðàíû, íî è ìåìáðàííûõ áåëêîâ [156, 157], óñóãóáëÿÿ òåì ñàìûì îáùèå ìåìáðàííûå ïîâðåæäåíèÿ. Ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå ìèêðîâÿçêîñòè ìåìáðàí, èçìåíåíèå èõ ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà, óìåíüøåíèå ãèäðîôîáíîãî îáúåìà, óâåëè÷åíèå ïîëÿðíîñòè ëèïèäíîé ôàçû. Íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ïóñêîâûì ìåõàíèçìîì îêèñëèòåëüíîãî ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ ðåàêöèÿ ñóëüôãèäðèëüíûõ (SH) ãðóïï àìèíîêèñëîòû öèñòåèíà ñî ñâîáîäíûìè ðàäèêàëàìè. Ïðè ýòîì îáðàçóþòñÿ ðàäèêàëû ñ ëîêàëèçàöèåé íåñïàðåííîãî ýëåêòðîíà îêîëî àòîìà ñåðû (-S•), êîòîðûå çàòåì âçàèìîäåéñòâóþò äðóã ñ äðóãîì ñ îáðàçîâàíèåì äèñóëüôèäîâ, ëèáî îêèñëÿþòñÿ êèñëîðîäîì äî ïðîèçâîäíûõ ñóëüôîíîâîé êèñëîòû. Êëàññè÷åñêèì ïðèìåðîì òàêîãî ïðîöåññà ÿâëÿåòñÿ ñâÿçàííîå ñ ÏÎË ïîâðåæäåíèå áåëêîâ è îáðàçîâàíèå áåëêîâûõ àãðåãàòîâ â õðóñòàëèêå ãëàçà, ïðèâîäÿùåå ê åãî ïîìóòíåíèþ. Ýòîò ïðîöåññ èãðàåò âàæíóþ ðîëü â ðàçâèòèè êàòàðàêòû ó ÷åëîâåêà. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî ÔË ñ îêèñëåííûìè ôðàãìåíòàìè àðàõèäîíîâîé êèñëîòû â ìåìáðàíàõ ôîòîðåöåïòîðíûõ äèñêîâ ìîãóò âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ εàìèíîãðóïïîé îñòàòêîâ ëèçèíà, ìîäèôèöèðóÿ áåëêè ñåò÷àòêè [145]. Ïîìèìî Cys, îêèñëåíèþ ïîäâåðãàþòñÿ His, Ser, Pro, Arg, Met, Phe è Tyr [130]. Íàðÿäó ñ îêèñëåíèåì ýòèõ àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ ñèíãëåòíûì êèñëîðîäîì [131, 138], ïðîöåññû ÏÎË òàêæå ïðèâîäÿò ê ïîÿâëåíèþ îêèñëåííûõ ãåì-ñîäåðæàùèõ áåëêîâ è 141 ïðîèçâîäíûõ àìèíîêèñëîò.  ìåìáðàííûõ áåëêàõ ïîä äåéñòâèåì ÀÔÊ âîçìîæíî ôîðìèðîâàíèå êîìïëåêñîâ "îêèñëåííûé ëèïèä áåëîê", ïîëèìåðèçàöèÿ áåëêîâûõ ìîëåêóë, ðàçðóøåíèå áîêîâûõ ãðóïï àìèíîêèñëîò (â ïåðâóþ î÷åðåäü, ñîäåðæàùèõ SH-ãðóïïû). Ðåçóëüòàòîì îêèñëåíèÿ àìèíîêèñëîò ìîæåò áûòü íàðóøåíèå âòîðè÷íîé è òðåòè÷íîé ñòðóêòóðû áåëêîâ, îáëåã÷àþùåå äàëüíåéøåå îêèñëåíèå àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ, è äåíàòóðàöèÿ áåëêîâûõ ìîëåêóë, â ðåçóëüòàòå ÷åãî íàðóøàþòñÿ èõ ôóíêöèè, â ÷àñòíîñòè, íåîáðàòèìî èíàêòèâèðóþòñÿ ôåðìåíòû. Íàðóøåíèå ñòðóêòóðû áåëêîâ äåëàåò èõ äîñòóïíûìè äëÿ ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ. Ê ýòîìó äîáàâëÿåòñÿ äåéñòâèå ñïåöèôè÷åñêèõ ïðîòåàç, ãèäðîëèçóþùèõ îêèñëåííûå áåëêè, äëÿ êîòîðûõ îêèñëåííûå àìèíîêèñëîòíûå îñòàòêè ÿâëÿþòñÿ ìàðêåðàìè [158]. Ñ÷èòàþò, ÷òî â îñíîâå îáðàçîâàíèÿ êîìïëåêñîâ áåëêîâ ñ îêèñëåííûìè ëèïèäàìè ëåæàò, ïî êðàéíåé ìåðå, äâà ìåõàíèçìà: (1) îáðàçîâàíèå êîâàëåíòíîé ñâÿçè ìåæäó ñâîáîäíûìè SH-ãðóïïàìè àìèíîêèñëîò è àëüäåãèäàìè èëè êàðáîêñèëüíûìè ãðóïïàìè îêèñëåííûõ ëèïèäîâ è, (2) îáðàçîâàíèå ïîëèìåðíûõ ïðîäóêòîâ çà ñ÷åò ôîðìèðîâàíèÿ ïîïåðå÷íûõ ñâÿçåé ("ñøèâîê") â áåëêîâûõ ìîëåêóëàõ. Ýòè ïðî÷íûå íåðàñòâîðèìûå ïîïåðå÷íîñøèòûå ñîåäèíåíèÿ íå ðàçðóøàþòñÿ ôåðìåíòàìè ëèçîñîì. Îáðàçîâàíèå ìîëåêóëÿðíûõ ñøèâîê ñïîñîáñòâóåò äàëüíåéøåé àãðåãàöèè áåëêîâ.  ïîñëåäíèå ãîäû ê èçâåñòíûì ïîâðåæäàþùèì ýôôåêòàì ÀÔÊ ïðèáàâèëîñü èõ ó÷àñòèå â òðàíñäóêöèè ñèãíàëîâ îò ìåìáðàííûõ ðåöåïòîðîâ âî ìíîãèõ ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ [159, 160]. Ïðè ýòîì ÀÔÊ è NO• îáû÷íî ãåíåðèðóþòñÿ ïðè ó÷àñòèè òàêèõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì, êàê ÍÀÄÔÍ-îêñèäàçà è NOS ñîîòâåòñòâåííî, îáåñïå÷èâàÿ ñèñòåìó "ðåäîêñ-ðåãóëÿöèè" [106]. Ïðè íàðóøåíèè ýòîé ñèñòåìû ïîâûøåííîå îêèñëèòåëüíîå äåéñòâèå âûçûâàåò ïîâðåæäåíèÿ ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, ñ âîçìîæíûìè èõ ôóíêöèîíàëüíûìè èçìåíåíèÿìè, ÷òî âíîñèò ñâîé âêëàä â ïîâðåæäåíèå êëåòêè. 4.4.3. Ïîâðåæäåíèå ìåìáðààí ïðîòåèíààçààìè è ôîñôîëèïààçààìè. Ïðè ìíîãèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ â ïîâðåæäåííûõ êëåòêàõ ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ëèçîñîì ñ ïîñëåäóþùèì âûñâîáîæäåíèåì ëîêàëèçîâàííûõ â íèõ ôåðìåíòîâ, âêëþ÷àÿ ïðîòåèíàçû è ôîñôîëèïàçû, êîòîðûå îêàçûâàþò ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå íà ìåìáðàíû [161]. Ñóùåñòâóåò äàæå òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî èìåííî âûñâîáîæäåíèå äåñòðóêòèâíûõ ôåðìåíòîâ èç ëèçîñîì, îêàçûâàåòñÿ òåì êëþ÷åâûì ìåõàíèçìîì, êîòîðûé çàïóñêàåò öåïü ïîñëåäóþùåãî íåêðîòè÷åñêîãî ïîâðåæäåíèÿ êëåòêè [97]. Òàê, 142 ïîâðåæäåíèÿ ëèçîñîìàëüíîãî àïïàðàòà ïå÷åíè, ñ âûñâîáîæäåíèåì ãèäðîëàç, ïîêàçàíû â ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ïðè èíòîêñèêàöèè æèâîòíûõ ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè, íàïðèìåð, òåòðàõëîðìåòàíîì (ÑÑ14), ãàëàêòîçàìèíîì, àôëàòîêñèíàìè, çìåèíûì ÿäîì, õëîðïðîìàçèíîì è äð. Ïîêàçàíî, ÷òî çàðàæåíèå ìûøåé âèðóñàìè ìûøèíîãî ãåïàòèòà è îñïîâàêöèíû âûçûâàåò àêòèâàöèþ ðÿäà ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç (γ-ãëþêóðîíèäàçû, êèñëîé ïðîòåèíàçû, ÄÍÊàçû è ÐÍÊàçû) â ëèçîñîìàëüíîé è íàäîñàäî÷íîé ôðàêöèÿõ ãîìîãåíàòà ïå÷åíè æèâîòíûõ. Ìåòîäîì ýëåêòðîííîãî ìèêðîñêîïèðîâàíèÿ áûëî îáíàðóæåíî ðàçðóøåíèå ìåìáðàí ëèçîñîì è âîçäåéñòâèå îñâîáîäèâøèõñÿ ãèäðîëàç íà ìèòîõîíäðèè. Ïðèçíàêè àêòèâàöèè ëèçîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ íàáëþäàëè è â òêàíåâûõ êóëüòóðàõ ïðè ðåïðîäóêöèè ðàçëè÷íûõ âèðóñîâ, â òîì ÷èñëå âèðóñà ìûøèíîãî ãåïàòèòà. Íà îñíîâàíèè ýòîãî ïîëàãàþò, ÷òî öèòîïàòè÷åñêîå äåéñòâèå âèðóñîâ ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ ïîâðåæäåíèåì ëèçîñîìàëüíîé ìåìáðàíû [162].  öåëîì, ïî ìíåíèþ Înî ñ ñîàâò. [87], óðîâåíü àêòèâíîñòè ëèçîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ â öèòîçîëå êëåòêè îïðåäåëÿåò ñòåïåíü ïîâðåæäåíèÿ åå ìåìáðàíû. Àêòèâàöèÿ ëèçîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ, ñâÿçàííàÿ ñ ðàçðóøàþùèì äåéñòâèåì æåë÷íûõ êèñëîò íà ìåìáðàíû ëèçîñîì, îòìå÷åíà ïðè õîëåñòàçå, ÷òî è îáóñëàâëèâàåò íåêðîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ ïðè ýòîì çàáîëåâàíèè [163]. Ëàáèëèçàòîðàìè ëèçîñîì ìîãóò áûòü èîíû Ñà2+, Mg2+, K+, âèòàìèíû À è Å, ôîñôîëèïàçà, ïðîãåñòåðîí, òåñòîñòåðîí è äð. [164], à òàêæå ïðîäóêòû ÏÎË [130, 165]. Âûñâîáîæäåíèå è àêòèâàöèÿ êèñëûõ ëèïàç è ôîñôîëèïàç èç ïîâðåæäåííûõ ëèçîñîì, ïðèâîäèò, â èòîãå, ê ôåðìåíòàòèâíîìó ãèäðîëèçó âíóòðèêëåòî÷íûõ êîìïîíåíòîâ, âêëþ÷àÿ íóêëåîïðîòåèíû, ãëèêîãåí è ñîäåðæèìîå ÿäðà. Âàæíûì çâåíîì â ìåõàíèçìå ïîâðåæäåíèÿ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí ÿâëÿåòñÿ ãèäðîëèç ôîñôîëèïèäîâ, ñâÿçàííûé ñ àêòèâàöèåé ôîñôîëèïàç, îñîáåííî ÐLA2, îòùåïëÿþùèõ æèðíóþ êèñëîòó ôîñôîëèïèäîâ â sn-2 ïîëîæåíèè [75] (ñì. ãëàâó 1). Îáðàçóþùèåñÿ ïðè äåéñòâèè ýíäîãåííûõ ôîñôîëèïàç À ëèçîÔË õîðîøî ðàñòâîðèìû â âîäíîé ôàçå è ïðè êîíöåíòðàöèÿõ âûøå 0,1% îò îáùåé ñóììû ÔË îêàçûâàþò ìåìáðàíîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå. Êàê óæå îòìå÷àëîñü, ëèçîÔË, îáëàäàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, íàðóøàþò óïîðÿäî÷åííóþ ñòðóêòóðó ìåìáðàíû, îáðàçóÿ â íåé ðûõëûå ó÷àñòêè, âûçûâàþò ïîÿâëåíèå "äûðîê" â ìåìáðàíàõ è äàëüíåéøèé èõ ðàçðûâ.  ïðèñóòñòâèè ëèçîÔË ìåìáðàíû ñòàíîâÿòñÿ óòîëùåííûìè, ãèäðàòèðîâàííûìè, à èõ ïðîíèöàåìîñòü äëÿ ðàçëè÷íûõ âåùåñòâ ðåçêî âîçðàñòàåò. Òàê, ïðè ãèïîêñèè â ðåçóëüòàòå íàêîïëåíèÿ ëèçîÔË íàáóõàþò ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé, 143 íàðóøàåòñÿ èõ ôóíêöèîíàëüíàÿ àêòèâíîñòü è ñïîñîáíîñòü àêêóìóëèðîâàòü êàëüöèé, ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ìàêðîýíåðãåòè÷åñêèõ ôîñôàòîâ. ËèçîÔÕ ïðåïÿòñòâóåò àêêóìóëÿöèè Ñà2+ ñàðêîïëàçìàòè÷åñêèì ðåòèêóëóìîì, è çà ñ÷åò ïîâûøåíèÿ ïðîíèöàåìîñòè ïðîèñõîäèò âûñâîáîæäåíèå åãî èç âåçèêóë.  íàñòîÿùåå âðåìÿ, â çàâèñèìîñòè îò íóêëåîòèäíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè êîäèðóþùèõ ãåíîâ, ðàçëè÷àþò êàê ìèíèìóì 10 ãðóïï ÐLA2 (I-X), îäíàêî ïîêà ÷àùå èñïîëüçóåòñÿ ïðåäøåñòâóþùàÿ êëàññèôèêàöèÿ, îñíîâàííàÿ íà ëîêàëèçàöèè PLA2 â êëåòêå è åå ïîòðåáíîñòè äëÿ ïðîÿâëåíèÿ êàòàëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè â Ñà2+. Òàê, ðàçëè÷àþò: (à) ôîñôîëèïàçó, ñåêðåòèðóåìóþ èç êëåòîê èëè ñåêðåòîðíóþ (sPLA2), c ìàññîé 14-18 êÄ, (á) öèòîçîëüíóþ Ñà2+-çàâèñèìóþ (ñPLA2, 85-100 êÄ) è (â) öèòîçîëüíóþ Ñà2+-íåçàâèñèìóþ (iPLA2, 29-85 êÄ). Èçîôîðìû sPLA2 òðåáóþò äëÿ ïðîÿâëåíèÿ àêòèâíîñòè ìèëëèìîëÿðíûõ êîíöåíòðàöèé Ñà2+ è íå ïðîÿâëÿþò ñïåöèôè÷íîñòè ê îòùåïëÿåìîé æèðíîé êèñëîòå; ñPLA2 ïðèñóòñòâóþò â öèòîçîëå, òðåáóþò ìèêðîìîëÿðíîãî óðîâíÿ Ñà2+ äëÿ òðàíñëîêàöèè ê ìåìáðàííûì ÔË è ñåëåêòèâíû ê ÔË ñ àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé. iPLA2 ëîêàëèçîâàíû êàê â öèòîçîëå, òàê è â ìåìáðàííûõ ôðàêöèÿõ. Àêòèâíîñòü sPLA2, è ñPLA2 êîíòðîëèðóåòñÿ àíèîííûìè ÔË ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû [166]. Äëÿ iPLA2 ïîêàçàíî íåñêîëüêî âàðèàíòîâ ãåíà, ïðèâîäÿùèõ ê ýêñïðåññèè äâóõ èçîôîðì. Ñïîñîáíîñòü âñåõ PLA2 âûñâîáîæäàòü àðàõèäîíîâóþ êèñëîòó (ñóáñòðàò äëÿ ïðîñòàãëàíäèí Í-ñèíòàçû) îáóñëàâëèâàåò èõ ó÷àñòèå â ïðîöåññàõ âîñïàëåíèÿ.  ïîñëåäíèå ãîäû ïîêàçàíî, ÷òî èçîôîðìû PLA2 ÿâëÿþòñÿ ìîäóëÿòîðàìè êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé, âûçâàííûõ èøåìèåé/ðåïåðôóçèåé, îêñèäàíòàìè, ëåêàðñòâàìè è òîêñèêàíòàìè. Ðîëü PLA2 â àïîïòîçå è íåêðîçå çàâèñèò îò èçîôîðìû PLA2, òèïà êëåòêè è õàðàêòåðà ïîâðåæäàþùåãî ñòèìóëà. Ìíîãîëåòíèå èññëåäîâàíèÿ ðîëè ôîñôîëèïàçû A2 â ïîâðåæäåíèè êëåòîê ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü ìåõàíèçì, ñîãëàñíî êîòîðîìó ïðè ïîâðåæäåíèè óâåëè÷èâàåòñÿ ãèäðîëèç ôîñôîëèïèäîâ ñ ïîìîùüþ PLA2, ÷òî ïðèâîäèò ê ïîâûøåíèþ ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí è âûçûâàåò êëåòî÷íûé ëèçèñ. Ïðàâîìî÷íîñòü òàêîãî ìåõàíèçìà áûëà ïîêàçàíà ñ èñïîëüçîâàíèåì èíãèáèòîðîâ PLA2 [167]. Îäíàêî, â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî â òî âðåìÿ ìíîãî÷èñëåííûå èçîôîðìû PLA2 íå áûëè èçâåñòíû, èñïîëüçîâàííûå èíãèáèòîðû íå îòëè÷àëèñü ñïåöèôè÷íîñòüþ. Ïîýòîìó ðÿä ïðåæíèõ ïîëîæåíèé â ïîñëåäíèå ãîäû áûë ïåðåñìîòðåí [75]. Íàïðèìåð, ôòîð-ñîäåðæàùèé èíãèáèòîð ñPLA2 (è âûõîäà àðàõèäîíîâîé êèñëîòû) íå èíãèáèðîâàë sPLA2 è iPLA2 â ïî÷å÷íûõ êëåòêàõ. Òîëüêî ñ èñïîëüçîâàíèåì êîìïëåêñà 144 èíãèáèòîðîâ è ìîíèòîðèíãà àêòèâíîñòè PLA2 áûëî ïîêàçàíî ó÷àñòèå ñPLA2 â íåêðîòè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè ("îíêîçå" [168]) ýòîãî òèïà êëåòîê [169]. Ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî ñPLÀ2, îñîáåííî â ñî÷åòàíèè ñ ÀÔÊ, îêàçûâàåò ñóùåñòâåííîå ìåìáðàíîïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ïðè íåêðîçå è àïîïòîçå [170]. Ñ÷èòàþò, ÷òî â ýòèõ ïðîöåññàõ êëþ÷åâóþ ðîëü èãðàåò ïîâûøåíèå óðîâíÿ öèòîçîëüíîãî Ñà2+ è, ñîîòâåòñòâåííî, ñâÿçûâàíèå åãî ñ Ñà2+ëèïèä-ñâÿçûâàþùèì äîìåíîì ñPLA2, ÷òî èíèöèèðóåò òðàíñëîêàöèþ ôåðìåíòà ê âíóòðèêëåòî÷íûì ìåìáðàíàì. Ïî ìíåíèþ Ñummings c ñîàâò. [75], âîçìîæíîñòü ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ PLA2 îïðåäåëÿåòñÿ ëîêàëèçàöèåé è òèïîì ìåìáðàííûõ ÔË, èçîôîðìàìè PLA2 è õàðàêòåðîì ïîâðåæäàþùèõ ñòèìóëîâ. Òàê, ïîâðåæäåíèÿ, âûçûâàåìûå Í2Î2 èëè äðóãèìè òîêñèêàíòàìè, óñèëèâàþòñÿ áëàãîäàðÿ äåéñòâèþ ñPLA2, è â ýòîì ýôôåêòå ñóùåñòâåííàÿ ðîëü ïðèíàäëåæèò èîíàì Ñà2+. Ðåçóëüòàòîì äåéñòâèÿ PLA2 íà ëèïèäû áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí ÿâëÿåòñÿ âûñâîáîæäåíèå íåíàñûùåííûõ ÆÊ, â òîì ÷èñëå àðàõèäîíîâîé. Ïîñëåäíÿÿ ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì öèêëîîêñèãåíàçû, ïîä äåéñòâèåì êîòîðîé ïðîèñõîäèò îáðàçîâàíèå â îðãàíèçìå ýéêîçàíîèäîâ (ïðîñòàãëàíäèíîâ, òðîìáîêñàíîâ, ïðîñòàöèêëèíîâ). Ïîä âëèÿíèåì äðóãîãî ôåðìåíòà - 5-ëèïîêñèãåíàçû, àðàõèäîíîâàÿ êèñëîòà ïðåâðàùàåòñÿ â ëåéêîòðèåíû, êîòîðûå ðåãóëèðóþò ñîñóäèñòóþ ïðîíèöàåìîñòü è ÿâëÿþòñÿ õèìèîàòðàêòàíòàìè íåéòðîôèëîâ. Îêàçàëîñü, ÷òî â ìåìáðàíàõ äåéñòâèþ sPLA2 ïîäâåðãàþòñÿ ñïåöèôè÷åñêèå ÔË. Íàïðèìåð, öèòîëèòè÷åñêèé ýôôåêò ðåêîìáèíàíòíûõ sPLA2 ÷åëîâåêà è sPLA2 èç çìåèíîãî ÿäà ïî îòíîøåíèþ ê ýðèòðîöèòàì ÷åëîâåêà, ýðèòðîëåéêåìè÷åñêèì è U937 êëåòêàì âîçðàñòàåò â ïðèñóòñòâèè ýêçîãåííûõ ëèïîñîìàëüíûõ ÔË (ÔÕ è ÔÝ). [171]. Ïðè ýòîì öèòîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå sPLA2 ÷åëîâåêà ïðîÿâëÿëîñü òîëüêî â ïðèñóòñòâèè ÔÝ. Ïîëàãàþò, ÷òî òàêàÿ ñïåöèôè÷íîñòü sPLA2 ñâÿçàíà ñ ïîâûøåíèåì òðàíñïîðòà îêèñëåííûõ ÔË ïðè ïîâðåæäåíèè ê íàðóæíîé ñòîðîíå ìåìáðàíû, ÷òî äåëàåò èõ áîëåå äîñòóïíûìè äëÿ ôåðìåíòà. Ïîêàçàíî, ÷òî sPLÀ2 âûñâîáîæäàåòñÿ èç êëåòîê ïðè ðÿäå âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ è îáíàðóæèâàåòñÿ â ïëàçìå êðîâè âî ôðàêöèÿõ ëèïîïðîòåèíîâ [172]. Ñåêðåòîðíàÿ PLÀ2 ðàñùåïëÿåò â îñíîâíîì îêèñëåííûå ÔË è èãðàåò òåì ñàìûì àíòèîêñèäàíòíóþ ñêýâåíäæåðíóþ ðîëü [173]. Ñóáñòðàòîì åå ÿâëÿåòñÿ, â îñíîâíîì, ôàêòîð àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ (ÔÀÒ, PAF) è ðîäñòâåííûå åìó ïî ñòðîåíèþ ñîåäèíåíèÿ ôîñôîëèïèäíîé ïðèðîäû, ïðåäñòàâëÿþùèå ñîáîé ïðîäóêòû êàê îêèñëèòåëüíîãî, òàê è ÷àñòè÷íîãî ýíçèìàòè÷åñêîãî ðàñùåïëåíèÿ ÔË. Ýòî áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå 145 ñîåäèíåíèÿ (áîëåå 150), ÷ðåçâû÷àéíî òîêñè÷íûå (LD50 äëÿ êðîëèêà - 0,005 ìã/êã; äëÿ ñîáàêè - 0,07 ìã/êã), âûçûâàþùèå ïðè âíóòðèâåííîì ââåäåíèè øîêîïîäîáíîå ñîñòîÿíèå (îñòðûé, íåêóïèðóåìûé êîëëàïñ, áðîíõîñïàçì è äð.).  íîðìå íàêîïëåíèþ ýòèõ ñîåäèíåíèé â îðãàíèçìå è ïðåïÿòñòâóåò sPLÀ2. Èçó÷åíèå ðîëè PLA2 â ðàçâèòèè ïðîöåññîâ àïîïòîçà êëåòêè ïîêàçàëî, ÷òî ëèçîÔÕ, îáðàçóþùèéñÿ â ðåçóëüòàòå ãèäðîëèçà ÔË ìåìáðàíû iPLA2, ÿâëÿåòñÿ õåìîòàêñè÷åñêèì ìåññåíäæåðîì äëÿ ìàêðîôàãîâ. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ëèçîÔÕ âûñâîáîæäàåòñÿ èç ìíîãèõ âèäîâ àïîïòîçíûõ êëåòîê ñ ïîìîùüþ Ñà2+-íåçàâèñèìîé iPLA2, àêòèâèðîâàííîé êàñïàçîé-3 [174].  öåëîì, ñðåäè îòìå÷åííûõ âûøå ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí â ïðîöåññàõ ðàçâèâàþùåãîñÿ àïîïòîçà èëè íåêðîçà êëåòîê êëþ÷åâûìè ÿâëÿþòñÿ ÏÎË, óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ, àêòèâàöèÿ ôîñôîëèïàç è ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç.  çàâèñèìîñòè îò ðÿäà ôàêòîðîâ, â òîì ÷èñëå è îò ôîðìû êëåòî÷íîé ãèáåëè, îäèí èç ýòèõ ïðîöåññîâ ñòàíîâèòñÿ îñíîâíûì, èíäóöèðóþùèì ðàçâèòèå îñòàëüíûõ. 4.4.4. Ìåõààíèçìû ïîâðåæäåíèé. çààùèòû êëåòîê îò îêèñëèòåëüíûõ Ïðè íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ ìåõàíèçìû àíòèîêñèäàíòíîé çàùèòû ñîçäàþò óñòîé÷èâîå ñòàöèîíàðíîå ñîñòîÿíèå ñ ñèñòåìàìè, ïðîäóöèðóþùèìè àêòèâíûé êèñëîðîä. Ñèñòåìà ýíçèìàòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ çàùèòû êëåòêè îò îêèñëèòåëüíûõ ïîâðåæäåíèé âêëþ÷àåò: ñóïåðîêñèääèñìóòàçó, êàòàëàçó, ãëóòàòèîí-çàâèñèìûå ôåðìåíòû [8, 133, 134]. Èìåþòñÿ äàííûå î âîçìîæíûõ äðóãèõ ìåõàíèçìàõ çàùèòû îò èçáûòî÷íîãî ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî â òðîìáîöèòàõ ïðèñóòñòâèå ïëàçìàëîãåíîâ (â ìîëåêóëàõ êîòîðûõ âìåñòî æèðíûõ êèñëîò ïðèñóòñòâóåò óãëåâîäîðîäíàÿ öåïü ñ êåòîíîâîé ãðóïïîé), çàùèùàåò îñòàëüíûå ÔË îò îêèñëåíèÿ. Ïîñëå èõ óäàëåíèÿ ÔË àêòèâíåå ïîäâåðãàþòñÿ îêèñëåíèþ [175].  äðóãîé ðàáîòå [176] áûëà ïîêàçàíà âàæíàÿ ðîëü ïåðîêñèäàçû è ôîñôîëèïàçû â ðåïàðàöèè îêèñëèòåëüíî ïîâðåæäåííûõ ôîñôîëèïèäîâ áèîìåìáðàí. Àâòîðû îêèñëÿëè ÔË ïå÷åíè êðûñû êàê â ãîìîãåíàòå òêàíè, òàê è â ëèïîñîìàõ, ïðèãîòîâëåííûõ èç ýêñòðàãèðîâàííûõ ëèïèäîâ, è àíàëèçèðîâàëè ñ ïîìîùüþ ÂÝÆÕ îáðàçóþùèåñÿ ãèäðîïåðåêèñè ÔÕ è ÔÝ. Ïðè îêèñëåíèè ãîìîãåíàòà òêàíè íàáëþäàëè îáðàçîâàíèå îêèñëåííûõ ñâîáîäíûõ æèðíûõ êèñëîò, îòñóòñòâóþùèõ ïðè îêèñëåíèè ëèïîñîì, ÷òî óêàçûâàåò íà äåéñòâèå òêàíåâûõ ôîñôîëèïàç. Åñëè ê ãîìîãåíàòó äîáàâëÿëè ýêçîãåííûé îêèñëåííûé ÔÕ, òî ñîäåðæàùèåñÿ â íåì ïåðåêèñíûå ãðóïïû âîññòàíàâëèâàëèñü ñ 146 îáðàçîâàíèåì îêñè-ÔÕ, ñ ïîñëåäóþùèì ãèäðîëèçîì äî ñâîáîäíûõ æèðíûõ îêñèêèñëîò. Òî åñòü, ïðèñóòñòâóþùèå â òêàíè ôåðìåíòû "î÷èùàþò" ìîëåêóëó ÔË îò îêèñëåííûõ æèðíûõ êèñëîò. Îñíîâíîé àíòèîêñèäàíòíûé ôåðìåíò, ñóïåðîêñèääèñìóòàçà, êàòàëèçèðóåò ðåàêöèþ âçàèìîäåéñòâèÿ (äèñìóòàöèè) äâóõ ñóïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ ñ îáðàçîâàíèåì ïåðåêèñè âîäîðîäà è ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà [133, 134].  äåòîêñèêàöèè LÎÎÍ ó÷àñòâóþò òðè âíóòðèêëåòî÷íûõ ãëóòàòèîí-ñîäåðæàùèõ ôåðìåíòà - ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçà, ÔË-ïåðîêñèä-ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçà è ñåëåí-íåñîäåðæàùàÿ ãëóòàòèîí-SH-S-òðàíñôåðàçà òèï α, îñóùåñòâëÿþùèå äâóõýëåêòðîííîå âîññòàíîâëåíèå LÎÎÍ [133]. Äëÿ ãèäðîïåðåêèñåé ÔË (LÎÎÍ) óäàëåíèå ìîæåò âêëþ÷àòü: (1) ïîñëåäîâàòåëüíîå äåéñòâèå ïåðîêñèä/Ñà2+-ñòèìóëèðóåìîé PLA2 è ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçû ïî ñõåìå "ãèäðîëèç - âîññòàíîâëåíèå ðåïàðàöèÿ", èëè (2) ïîñëåäîâàòåëüíîå äåéñòâèå ÔË-ïåðîêñèäãëóòàòèîíïåðîêñèäàç è ôîñôîëèïàçû À2, (ò.å. "âîññòàíîâëåíèå ãèäðîëèç - ðåïàðàöèÿ"), ÷òî â îáîèõ ñëó÷àÿõ ïðèâîäèò ê ðåàöèëèðîâàíèþ îáðàçóþùèõñÿ ëèçîÔË.  óñëîâèÿõ äèñáàëàíñà ìåæäó ýíäîãåííûìè îêñèäàíòàìè è àíòèîêñèäàíòàìè âîçìîæíî èçáûòî÷íîå îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ êèñëîðîäíûõ ìåòàáîëèòîâ, êîòîðîå îïðåäåëÿþò êàê îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ [134, 177].  ïîñëåäíèå ãîäû âûçûâàåò çíà÷èòåëüíûé èíòåðåñ îêèñëèòåëüíî-ñòðåññîðíûé ñèãíàëèíã, êîòîðûé ìîæåò ñîïðîâîæäàòü ÏÎË è äîñòèãàòü êóëüìèíàöèè ïðè àïîïòîçå. Òàê ïîêàçàíî, ÷òî ýêçî- èëè ýíäîãåííûå ïåðîêñèäû ìîãóò çàïóñêàòü àïîïòîòè÷åñêèé êàñêàä â ëåéêåìè÷åñêèõ êëåòêàõ [133]. Ñóäüáà êëåòêè ïîñëå âîçäåéñòâèÿ íà íåå îêñèäàíòîâ ñ âûçâàííûìè èìè ïîâðåæäåíèÿìè ìåìáðàí, ìîæåò áûòü äâîÿêîé: âûæèâàíèå èëè ãèáåëü ÷åðåç àïîïòîç èëè íåêðîç. Ïî ìíåíèþ Girotti [133], ýòî îïðåäåëÿåòñÿ ñòåïåíüþ îêèñëèòåëüíûõ ïîâðåæäåíèé. Âî ìíîãèõ ðàáîòàõ ïîêàçàíî, ÷òî æèâîòíûå êëåòêè â îòâåò íà óãðîæàþùèé óðîâåíü îêñèäàíòîâ ñïîñîáíû ïîñðåäñòâîì ñèãíàëèíãà ïðîäóöèðîâàòü èçáûòîê àíòèîêñèäàíòîâ è àêòèâèðîâàòü ôåðìåíòíûå çàùèòíûå ñèñòåìû - âîññòàíîâëåííûé ãëóòàòèîí (GSH), ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçó, êàòàëàçó, ñóïåðîêñèääèñìóòàçó, ãåìîêñèãåíàçó-1, ôåððèòèí è äð.[106, 133, 178]. Ïîêàçàíî, ÷òî îêñèäàíò-èíäóöèðîâàííûé ñèãíàëèíã [178] ñòèìóëèðóåò ýêñïðåññèþ ãåíîâ, ñâÿçàííûõ ñ öèòîïðîòåêöèåé, àïîïòîçîì èëè äðóãèìè êëåòî÷íûìè îòâåòàìè, ïðè÷åì â ýòîì ñèãíàëèíãå âàæíóþ ðîëü èãðàåò àêòèâàöèÿ íåêîòîðûõ ïðîòåèíêèíàç è ôîñôîëèïàç. Òàê, îòìå÷àþò îñîáóþ ðîëü â ýòèõ ïðîöåññàõ ïðîòåèíêèíàçû Ñ, ÌÀÐÊ è ãèäðîëàç - ôîñôîëèïàçû Ñ (PLC) è àêòèâèðóåìîé Ñà2+ PLÀ2. Ïîëó÷åíû äàííûå â ïîëüçó òîãî, 147 ÷òî íåêîòîðûå LÎÎÍ ÿâëÿþòñÿ ðàííèìè èíòåðìåäèàòàìè â ñòèìóëÿöèè ýòèõ ïóòåé, è ÷òî îíè ìîãóò áûòü "ìèìåòèêàìè" ýôôåêòîâ íåêîòîðûõ ôàêòîðîâ ðîñòà, (íàïðèìåð TNF-α), öèòîêèíîâ èëè äðóãèõ ïðèðîäíûõ àãîíèñòîâ. Âñå ýòè ôàêòû âûçâàëè èíòåðåñ èññëåäîâàòåëåé ê îêñèäàíòíûì ïðîèçâîäíûì êàê âîçìîæíûì âòîðè÷íûì ìåññåíäæåðàì [179]. Îêñèäàíòíàÿ àêòèâàöèÿ PLÀ2 ÷åðåç âûñâîáîæäåíèå àðàõèäîíîâîé êèñëîòû èíèöèèðóåò îáðàçîâàíèå ýéêîçàíîèäíûõ ëèïèäíûõ ìåäèàòîðîâ, à òàêæå ëèçîÔË. Ïîñëåäíèå ìîãóò ïðîÿâëÿòü ïðÿìûå ýôôåêòû èëè ìåòàáîëèçèðîâàòüñÿ äî PAF è äðóãèõ ýôôåêòîðîâ. Èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ PLÀ2 íà ìåìáðàííûå ôîñôîëèïèäû ïîêàçàëè, ÷òî ãèäðîëèòè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ýòèõ ôåðìåíòîâ âîçðàñòàëà êàê ôóíêöèÿ ñîäåðæàíèÿ ïåðîêñèäîâ ÔË â ìåìáðàíå. Äàííûé ýôôåêò, íàáëþäàâøèéñÿ è â ýêñïåðèìåíòàõ ñ ëèïîñîìàìè, ñîäåðæàùèìè îêèñëåííûå ÔË, îáúÿñíÿëè èçìåíåíèÿìè óïàêîâêè ÔË, îäíîâðåìåííî ñ óâåëè÷åíèåì ñâÿçûâàíèÿ Ñà2+. Àâòîðû ïîä÷åðêèâàþò, ÷òî ñêîðîñòü ãèäðîëèçà îêèñëåííûõ ÔË çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàëà ñêîðîñòü ãèäðîëèçà íåîêèñëåííûõ ÔË, ÷òî ïðèâîäèëî ê áîëåå áûñòðîìó âûñâîáîæäåíèþ îêèñëåííûõ ÆÊ [180]. Âîçìîæåí è äðóãîé ìåõàíèçì àêòèâàöèè, êîòîðûé îòíîñèòñÿ òîëüêî ê cPLA2, äåéñòâóþùåé ïðåäïî÷òèòåëüíî íà àðàõèäîíîèëÔË, è âêëþ÷àåò êàòàëèçèðóåìîå ïðîòåèíêèíàçîé Ñ ôîñôîðèëèðîâàíèå ôåðìåíòà è åãî òðàíñëîêàöèþ ê ìåìáðàíå [181].  ýòîì ìåõàíèçìå ìåìáðàííûå îêèñëåííûå ÔË àêòèâèðóþò ïðîòåèíêèíàçó Ñ, ÷òî, â ñâîþ î÷åðåäü, âûçûâàåò ôîñôîðèëèðîâàíèå/àêòèâàöèþ cPLA2 â êëåòêàõ, âîçìîæíî ÷åðåç àêòèâàöèþ ÌÀÐÊ [181, 182]. Ýòîò ìåõàíèçì, â îòëè÷èå îò ïåðâîãî, ìåíåå çàâèñèì îò Ñà2+, è, ñëåäîâàòåëüíî, ìîæåò âêëþ÷àòüñÿ ïðè îòíîñèòåëüíî íèçêîì óðîâíå ÏÎË, ò.å. äî òîãî, êàê íà÷èíàåòñÿ ñóùåñòâåííîå íàêîïëåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+. Ñîïðÿæåíèå ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ ñ ðàçëè÷íûìè ñïåöèôè÷åñêèìè íàðóøåíèÿìè ìåòàáîëèçìà â êëåòêå ïðè ìíîãèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé. 4.5. Èçìåíåíèÿ ñîñòàâà ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ òêàíåé ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ. Çíà÷èìîñòü ìåìáðàííûõ èçìåíåíèé äëÿ êëåòêè è îðãàíèçìà â öåëîì ïîäòâåðæäàåòñÿ îáøèðíûì ôàêòîëîãè÷åñêèì ìàòåðèàëîì îá èçìåíåíèè ñîñòàâà ÔË ìåìáðàí ðÿäà êëåòîê è òêàíåé ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãèÿõ. Íå âñåãäà ÿñíî, êàê ýòè èçìåíåíèÿ ñâÿçàíû ñ ïàòîãåíåçîì áîëåçíè, ÿâëÿþòñÿ ëè îíè ïðè÷èíîé èëè, íàîáîðîò, ïðîÿâëåíèåì êàêîãî-ëèáî èç åå ïîñëåäñòâèé. Íàïðèìåð, ñíèæåíèå 148 àêòèâíîñòè ôîñôîëèïàçû À2 â ìîçãå ÷åëîâåêà ïðè áîëåçíè Àëüöãåéìåðà ðàññìàòðèâàþò êàê íåîáõîäèìûå êîìïåíñàòîðíûå èçìåíåíèÿ, ñíèæàþùèå ñêîðîñòü ïîòåðè ÔË [183]. Íàáëþäàåìîå ïðè ýòîì âîçðàñòàíèå êîëè÷åñòâà ãëèöåðîôîñôîðèëõîëèíà è óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè ëèçîôîñôîëèïèä-àöèëòðàíñôåðàçû ñâÿçûâàþò ñ èçìåíåíèåì ìåòàáîëèçìà õîëèí-ñîäåðæàùèõ ÔË ñ ó÷àñòèåì àìèëîèäíûõ ïåïòèäîâ [184]. Ïðè èçó÷åíèè ëèïèäîâ ìîçãà ó áîëüíûõ øèçîôðåíèåé èëè èõ ïîòîìêîâ íàáëþäàëè ñíèæåíèå óðîâíÿ ôîñôîìîíîýôèðîâ - ìåòàáîëèòîâ ñèíòåçà ÔË. Èõ óðîâåíü ìîæåò óêàçûâàòü íà ðèñê ðàçâèòèÿ øèçîôðåíèè [185, 186]. Ïðè ýòîì çàáîëåâàíèè îòìå÷àþò òàêæå èçìåíåíèå ñîñòàâà ïîëèíåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ÔË ìîçãà, òàêèõ êàê 20:4, 20:5 è 22:6 [187]. Èçó÷àÿ ñâîéñòâà ìåìáðàíû íåéðîíà ïðè ðàçëè÷íûõ çàáîëåâàíèÿõ ìîçãà, Haag [188] ïðèøåë ê âûâîäó, ÷òî æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ ìåìáðàííûõ ÔË è àêòèâíîñòü PLÀ2 èìåþò ïåðâîñòåïåííîå çíà÷åíèå â ðàçâèòèè äèñôóíêöèè íåéðîíîâ. Ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì àòåðîñêëåðîçå ó êðîëèêîâ, èøåìè÷åñêîé áîëåçíè ñåðäöà è öèððîçå ïå÷åíè ó ÷åëîâåêà ïîêàçàíî âîçðàñòàíèå îòíîøåíèÿ õîëåñòåðèí/ÔË â ìåìáðàíàõ ýðèòðîöèòîâ, ñîïðîâîæäàåìîå ðåçêèì ñíèæåíèåì àêòèâíîñòè Na+, K+-ÀÒÔàçû è äåôîðìèðóåìîñòè ýðèòðîöèòà. Ïðè ýòîì ó êðîëèêîâ íàáëþäàëèñü ïàðàëëåëüíûå èçìåíåíèÿ è â òêàíè àîðòû [189, 190]. Âïîñëåäñòâèè â ìåìáðàíàõ ýðèòðîöèòîâ áîëüíûõ èøåìè÷åñêîé áîëåçíüþ ñåðäöà áûëî îáíàðóæåíî âîçðàñòàíèå äîëè ñôèíãîìèåëèíà, ÔÑ, ÔÝ è ëèçîÔÕ, ïðè ñîîòâåòñòâóþùåì ñíèæåíèè äîëè ÔÕ [191]. Ñíèæåíèå óðîâíÿ ÔÕ (è â ìåíüøåé ñòåïåíè ÔÝ è ÔÈ) íàáëþäàëè â òêàíÿõ ñåðäöà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ ïðè åãî ïîâðåæäåíèè, âûçâàííîì èøåìèåé ðåïåðôóçèåé [192]. Ïðè ýòîì áûëî îòìå÷åíî, ÷òî â ïîâðåæäåííîì ìèîêàðäå ñóùåñòâåííî èçìåíÿëñÿ ïðîöåññ "äåàöèëèðîâàíèÿ ðåàöèëèðîâàíèÿ" ÔË. Ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ ÔË ìåìáðàí ýðèòðîöèòîâ îáíàðóæåíû ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå. Òàê, ó áîëüíûõ ïîêàçàíî ïðèñóòñòâèå 9-îêñèëèíîëåâîé êèñëîòû, êàê ïðîäóêòà îêèñëåíèÿ ìåìáðàííûõ ÔË [193]. Ó òó÷íûõ áîëüíûõ ñ ãèïåðèíñóëèíåìèåé áåç äèàáåòà êîëè÷åñòâî ìåìáðàííîãî ÑÌ ïîëîæèòåëüíî êîððåëèðîâàëî ñ óðîâíåì èíñóëèíà ïëàçìû, ÷òî ñîïðîâîæäàëîñü èçìåíåíèåì âÿçêîñòè ìåìáðàí [194, 195]. Àâòîðû ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ìåìáðàííûé ÑÌ ýðèòðîöèòîâ ìîæåò áûòü íåçàâèñèìûì ïðåäèêòîðîì óðîâíÿ èíñóëèíà. Åùå îäíèì ïîêàçàòåëåì ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàí ÿâëÿåòñÿ ñòåïåíü ýêñïîíèðîâàíèÿ ÔÑ íà èõ ïîâåðõíîñòè (ò.å. íàðóøåíèå 149 ìåìáðàííîé àñèììåòðèè) [146]. Ó òó÷íûõ áîëüíûõ ýòîò ïîêàçàòåëü êîððåëèðîâàë ñ àäãåçèâíîñòüþ ýðèòðîöèòîâ è íàëè÷èåì âîñïàëèòåëüíûõ ìàðêåðîâ [196]. Ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì ñàõàðíîì äèàáåòå ó êðûñ óñòàíîâëåíî ñíèæåíèå óðîâíÿ ÔÕ è ÔÑ â ìåìáðàíàõ ÿäåð êëåòîê ïå÷åíè, ÷òî îáúÿñíÿþò ó÷àñòèåì èíñóëèíà â ðåãóëÿöèè ñîäåðæàíèÿ ÿäåðíûõ ÔË [197]. Èçìåíåíèÿ ÔË áûëè íàéäåíû è â áðîíõî-àëüâåîëÿðíîé æèäêîñòè áîëüíûõ, â òîì ÷èñëå äåòåé, ñ ëåãî÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè, ÷òî ñâÿçàíî ñ íàðóøåíèÿìè ïîêðûâàþùåãî àëüâåîëû ëåãî÷íîãî ñóðôàêòàíòà, ñîñòîÿùåãî â îñíîâíîì èç ÄÏÔÕ. Ïðè ýòîì ó âçðîñëûõ áîëüíûõ ñ àñòìîé íàáëþäàëè ñíèæåíèå ýòîãî ÔË, êîððåëèðóþùåå ñ îñëàáëåíèåì ëåãî÷íîé ôóíêöèè [198], à ó äåòåé ñ ëåãî÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè, âêëþ÷àÿ àñòìó è èíôåêöèîííûå çàáîëåâàíèÿ, áûëî îáíàðóæåíî óâåëè÷åíèå óðîâíÿ (êîíöåíòðàöèè) ÔË, ñ íàêîïëåíèåì àãðåãàòîâ, ÷òî ñâÿçûâàþò ñ âûõîäîì ðàçðóøåííîãî ìåìáðàííîãî ìàòåðèàëà èç âîñïàëåííûõ êëåòîê [199]. Ïðè óìåðåííîì ïîòðåáëåíèè àëêîãîëÿ â ìåìáðàíàõ ðÿäà êëåòîê íàáëþäàëè âîçðàñòàíèå ïîêàçàòåëåé îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà [200], à ïðè àëêîãîëüíîé àáñòèíåíöèè - ñíèæåíèå èíòåíñèâíîñòè è âðåìåíè ðåëàêñàöèè ßÌÐ ñèãíàëà ÔË áåëîãî âåùåñòâà ìîçãà, ðàñöåíèâàåìîå êàê ïðèçíàê ñíèæåíèÿ êîíöåíòðàöèè è ïîäâèæíîñòè ÔË [201].  òêàíè ìåòàñòàçèðóþùåé êèøå÷íîé êàðöèíîìû êðûñ íàáëþäàëè âîçðàñòàíèå óðîâíÿ ÔÝ [202], à â êëåòêàõ ñëèçèñòîé êèøå÷íèêà ÷åëîâåêà ïðè ïåïòè÷åñêîé ÿçâå ñ èíôèöèðîâàíèåì Helicobacter i., íàîáîðîò, áûëî ïîêàçàíî, ñíèæåíèå óðîâíÿ ýòîãî ÔË. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ IV 1. Maeshima Y., Makino H. Molecular mechanism of cell injury. Contrib Nephrol. 2003, 139, 32-43. 2. Paschen W., Doutheil J. Disturbance of endoplasmic reticulum functions: a key mechanism underlying cell damage? Acta Neurochir Suppl. 1999, 73, 1-5. 3. Êóöåíêî Ñ. À. Îñíîâû òîêñèêîëîãèè. Ñ-Ï. 2002. 4. Takemura G., Fujiwara H. Role of apoptosis in remodeling after myocardial infarction. Pharmacol Ther. 2004, 104, 1-16. 5. Arakawa N., Nakamura M., Endo H., Sugawara S., Suzuki T., Hiramori K. Brain natriuretic peptide and cardiac rupture after acute myocardial infarction. Intern Med. 2001, 40, 232-236. 6. Òàðóñîâ Á.Í. Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ èîíèçèðóþùèõ èçëó÷åíèé. Óñï ñîâð áèîë. 1957, 44, 171185. 7. Ýììàíóýëü Í.Ì., Ëèï÷èíà Ë.Ï. Ëåéêîç ó ìûøåé è 150 îñîáåííîñòè åãî ðàçâèòèÿ ïðè âîçäåéñòâèè èíãèáèòîðîâ öåïíûõ ðåàêöèé. Äîêë ÀÍ ÑÑÑÐ. 1958, 121, 141-144. 8. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ è ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Áèîôèçèêà. 1987, 32, 830-844. 9. MacGregor J.T. The future of regulatory toxicology: impact of the biotechnology revolution. Toxicol Sci. 2003, 75, 236-248. 10. Wright M.M., Howe A.G., Zaremberg V. Cell membranes and apoptosis: role of cardiolipin, phosphatidylcholine, and anticancer lipid analogues. Biochem Cell Biol. 2004, 82, 18-26. 11. Haque M.A., Russell N.J. Strains of Bacillus cereus vary in the phenotypic adaptation of their membrane lipid composition in response to low water activity, reduced temperature and growth in rice starch. Microbiology. 2004, 150, 1397-1404. 12. Brown M.S., Goldstein J.L. The SREBP pathway: regulation of cholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor. Cell. 1997, 89, 331-340. 13. Worgall T.S., Johnson R.A., Seo T., Gierens H., Deckelbaum R.J. Unsaturated fatty acid-mediated decreases in sterol regulatory elementmediated gene transcription are linked to cellular sphingolipid metabolism. J Biol Chem. 2002, 277, 3878-3885. 14. Yakovlev A.G., Faden A.I. Mechanisms of neural cell death: implications for development of neuroprotective treatment strategies. J.Amer Soc Exper Neuro Therapeutics. 2004, 1, 5-16. 15. Thrall K.D., Vucelick M.E., Gies R.A., Zangar R.C., Weitz K.K., Poet T.S., Springer D.L., Grant D.M., Benson J.M. Comparative metabolism of carbon tetrachloride in rats, mice, and hamsters using gas uptake and PBPK modeling. J Toxicol Environ Health. 2000, 60, 531548. 16. Glucksmann A. Cell death in normal vertebrate ontogeny. Biol Rev. 1951, 26, 59-86. 17. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer. 1972, 26, 239-257. 18. Yeh E.T.H. Life and death in the cardiovascular system. Circulation. 1997, 95, 782-786. 19. Bhatia M. Apoptosis versus necrosis in acute pancreatitis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2004, 286, 189-196. 20. Padanilam B.J. Cell death induced by acute renal injury: a perspective on the contributions of apoptosis and necrosis. Am J Physiol Renal Physiol. 2003, 284, 608-627. 21. Green D.R. Overview: apoptotic signaling pathways in the immune system. Immunol Rev. 2003, 193, 5-9. 151 22. Ñàìóèëîâ Â.Ô. Áèîõèìèÿ ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé ñìåðòè (àïîïòîçà) ó æèâîòíûõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 2001, 7, 18-25. 23. Ranganath R.M., Nagashree N.R. Role of programmed cell death in development. Int Rev Cytol. 2001, 202, 159-242. 24. Ñêóëà÷åâ Â.Ï. Çàêîíû áèîýíåðãåòèêè. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1997, 1, 9-14. 25. Israels L.G., Israels E.D. Apoptosis. Stem Cells. 1999, 17, 306-313. 26. Leist M., Single B., Castoldi A., Kuhnle S., Nicotera P. Intracellular Adenosine Triphosphate (ATP) concentration: a switch in the decision between apoptosis and necrosis. J Exp Ved. 1997, 185, 1481-1486. 27. Afford S., Randhawa S. Apoptosis. Mol Pathol. 2000, 53, 55-63. 28. Gompel A., Chaouat M., Hugol D., Forgez P. Steroidal hormones and proliferation, differentiation and apoptosis in breast cells. Maturitas. 2004, 49, 16-24. 29. Øèðøåâ Ñ.Â., Êóêëèíà Å.Ì., ßðèëèí À.À. Ðîëü ðåïðîäóêòèâíûõ ãîðìîíîâ â êîíòðîëå àïîïòîçà Ò-ëèìôîöèòîâ. Áèîõèìèÿ. 2003, 68, 470-475. 30. Walker A., Ward C., Dransfield I., Haslett C., Rossi A.G. Regulation of granulocyte apoptosis by hemopoietic growth factors, cytokines and drugs: potential relevance to allergic inflammation. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2003, 2, 339-347. 31. Kharroubi I., Ladriere L., Cardozo A.K., Dogusan Z., Cnop M., Eizirik D.L. Free fatty acids and cytokines induce pancreatic beta-cell apoptosis by different mechanisms: role of nuclear factor-kappaB and endoplasmic reticulum stress. Endocrinology. 2004, 145, 5087-5096. 32. Kaufmann S.H., Hengartner M.O. Programmed cell death: alive and well in the new millennium. Trends Cell Biol. 2001, 11, 526-534. 33. Roth W., Reed J.C. FLIP protein and TRAIL-induced apoptosis. Vitam Horm. 2004, 67, 189-206. 34. MacEwan D.J. TNF ligands and receptors - a matter of life and death. Brit J Pharmacol. 2002, 135, 855-875. 35. Rudner J., Jendrossek V., Lauber K., Daniel P.T., Wesselborg S., Belka C. Type I and type II reactions in TRAIL-induced apoptosis results from dose-response studies. Oncogene. 2005, 24, 130-140. 36. Creagh E.M., Martin S.J. Caspases: cellular demolition experts. Biochem Soc Trans. 2001, 29, 696-702. 37. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrates and functions during apoptosis. Ann Rev Biochem. 1999, 68, 383-424. 38. Kruidering M., Schouten T., Evan G.I., Vreugdenhil E. Caspasemediated cleavage of the Ca2+ dependent protein kinase-like kinase 152 facilitates neuronal apoptosis. J Biol Chem. 2001, 276, 38417-38425. 39. Strasser A., O'Konnor L., Dixit V.M. Apoptosis signaling. Ann Rev Biochem. 2000, 69, 217-245. 40. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within. Science. 1998, 281, 1312-1316. 41. Tibbetts M.D., Zheng L., Lenardo M.J. The death effector domain protein family: regulators of cellular homeostasis. Nat Immun. 2003, 4, 404-409. 42. Gruenbaum Y., Goldman R.D., Meyuhaus R., Mills E., Margalit A., FridkinA., Dayani Y., Prokocimer M., Enosh A. The nuclear lamina and its functions in the nucleus. Int Rev Cytol. 2003, 226, 1-62. 43. Nagase H., Fukuyama H., Tanaka M., Kawane K., Nagata S. Mutually regulated expression of caspase-activated DNase and its inhibitor for apoptotic DNA fragmentation. Cell Death Differ. 2003, 10, 142-143. 44. Goping I.S., Barry M., Liston P., Sawchuk T., Constantinescu G., Michalak K.M., Shostak I., Roberts D.L., Hunter A.M., Korneluk R., Bleackley R.C. Granzyme B-induced apoptosis requires both direct caspase activation and relief of caspase inhibition. Immunity. 2003, 18, 355-365. 45. Bortner C.D., Cidlowski J.A. Caspase independent/dependent regulation of K(+), cell shrinkage, and mitochondrial membrane potential during lymphocyte apoptosis. J Biol Chem. 1999, 274, 21953-21962. 46. Ñêóëà÷åâ Â.Ï. ßâëåíèÿ çàïðîãðàììèðîâàííîé ñìåðòè. Ìèòîõîíäðèè, êëåòêè è îðãàíû: ðîëü àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 2001, 7, 4-10. 47. Desagher S., Martinou J.C. Mitochondria as the central control point of apoptosis. Trends Cell Biol. 2000, 10, 369-377. 48. Bellamy C.O., Makcomson R.D., Harrison D.J., Wyllie A.H. Cell death in health and disease: the biology and regulation of apoptosis. Semin Cancer Biol. 1995, 6, 3-16. 49. Hengartner M.G. The biochemistry of apoptosis. Nature. 2000, 407, 770-775. 50. Boonstra J., Post J.A. Molecular events associated with reactive oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells. Gene. 2004, 337, 1-13. 51. Villialba J.M., Navas P. Plasma membrane redox system in the control of stress-induced apoptosis. Antiox Redox Signal. 2000, 2, 213-230. 52. Willis S., Day C.L., Hinds M.G., Huang D.C.S. The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. J Cell Science. 2003, 116, 4053-4056. 53. Zha H., Aime-Sempre C., Sato T., Reed J.C. Proapoptotic protein Bax heterodimerizes with Dcl2 and homodimerizes with Bax via a novel domain (BH3) distinct from BH1 and BH2. J Biol Chem. 1996, 271, 7440-7444. 153 54. van Loo G., Schotte P., van Gurp M., Demol H., Hoorelbeke B., Gevaert K., Rodriguez I., Ruiz-Carrillo A., Vandekerckhove J., Declercq W., Beyaert R., Vandenabeele P. Endonuclease G: a mitochondrial protein released in apoptosis and involved in caspase-independent DNA degradation. Cell Death Differ. 2001, 8, 1136-1142. 55. Liang Y., Eid M.A., Lewis R.W., Kumar M.V. Mitochondria from TRAIL-resistant prostate cancer cells are capable of responding to apoptotic stimuli. Cell Signal. 2005, 17, 243-251. 56. Goonesinghe A., Mundy E.S., Smith M., Khosravi-Far R., Martinou J.C., Esposti M.D. Pro-apoptotic Bid induces membrane perturbation by inserting selected lysolipids into the bilayer. Biochem J. 2005, 387, 109-118. 57. Tsujimoto Y. Bcl-2 family of proteins: life-or-death switch in mitochondria. Biosci Rep. 2002, 22, 47-58. 58. Adams J.M., Cory S. Life or death decisions by the Bcl-2 protein family. Trends in Biochem Sci. 2001, 26, 61-66. 59. Bernardi P., Scorrano L., Colonna R., Petronilli V., Di Lisa F. Mitochondria and cell death. Mechanistic aspects and methodological issues. Eur J Biochem. 1999, 264, 687-701. 60. Szewczyk A., Wojtczak L. Mitochondria as a pharmacological target. Pharmacol Rev. 2002, 54, 101-127. 61. Kim J.S., Qian T., Lemasters J.J. Mitochondrial permeability transition in the switch from necrotic to apoptotic cell death in ischemic rat hepatocytes. Gastroenterology. 2003, 124, 494-503. 62. Lemasters J.J., Qian T., He L., Kim J.S., Elmore S.P., Cascio W.E., Brenner D.A. Role of mitochondrial inner membrane permeabilization in necrotic cell death, apoptosis, and autophagy. Antioxid Redox Signal. 2002, 4, 769-781. 63. Petrolini V., Penzo D., Scorrano L., Bernardi P., Di Lisa F. The mitochondrial permeability transition, release of cytochrome c and cell death. Correlation with the duration of pore opening in situ. J Biol Chem. 2001, 276, 12030-12034. 64. Henry-Mowatt J., Dive C., Martinou J.C., James D. Role of mitochondrial membrane permeabilization in apoptosis and cancer. Oncogene. 2004, 23, 2850-2860. 65. Sakahira H., Takemura Y., Nagata S. Enzymatic active site of caspase-activated DNase (CAD) and its inhibition. Arch Biochem Biophys. 2001, 388, 91-99. 66. Li L.Y., Luo X., Wang X. Endonuclease G is an apoptotic DNase when released from mitochondria. Nature. 2001, 412, 95-97. 67. Seluanov A., Gorbunova V., Falcovitz A., Sigal A., Milyavsky M., Zurer I., Shohat G., Goldfinger N., Rotter V. Change of the death pathway in senescent human fibroblasts in response to DNA damage is 154 caused by an inability to stabilize p53. Mol Cellular Biol. 2001, 21, 1552-1564. 68. Scoggins C.R., Meszoely I.M., Wada M., Means A.I., Yang L., Leach SD. p53-dependent acinar cells apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancrease. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2000, 279, 827-836. 69. Lain S., Xirodimas D., Lane D.P. Accumulating active p53 in the nucleus by inhibition of nuclear export: a novel strategy to promote the p53 tumor suppressor function. Exp Cell Res. 1999, 253, 315-324. 70. Gil J., Esteban M. Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent proteinkinase R (PKR): mechanism of action. Apoptosis. 2000, 5, 107-114. 71. Iordanov M.S., Ryabinina O.P., Schneider P., Magun B.E. Two mechanisms of caspase 9 processing in double-stranded RNA- and virus-triggered apoptosis. Apoptosis. 2005, 10, 153-166. 72. Brookes P.S., Yoon Y., Robotham J.L., Anders M.W., Sheu S.S. Calcium, ATP, and ROS: a mitochondrial love-hate triangle. Am J Physiol Cell Physiol. 2004, 287, 817-833. 73. Davies A.M., Hershman S., Stabley G.J., Hoek J.B., Peterson J., Cahil A. A Ca2+ induced mitochondrial permeability transition causes complete release of rat liver endonuclease G activity from its exclusive location within the mitochondrial intermembrane space. Identification of a novel endo-exonuclease activity residing within the mitochondrial matrix. Nucleic Acids Res. 2003, 31, 1364-1373. 74. Luchen S., Ussat S., Kronke M., Adam-Klages S. Cleavage of human cytosolic phospholiase A2 by caspase-1 (ICE) and caspase-8 (FLICE). Biochem Biophys Res Commun. 1998, 253, 92-98. 75. Cumming D.S., Mchowat J., Schnellmann R.G. Phospholipase À2s in cell injury and death. J Pharmacol Experim Therapeutic. 2000, 294, 793-799. 76. Wissing D., Mouritzen H., Egeblad M., Poirer G.G, Jattela M. Involvement of caspase-dependent activation of cytosolic phospholipase À2 in tumor necrosis factor-induced apoptosis. Pros Natl Acad Sci USA. 1997, 94, 5073-5077. 77. Zhao M., Antunes F., Eaton J.W., Brunk U.T. Lysosomal enzymes promote mitochondrial oxidant production, cytochrome ñ release sand apoptosis. Eur J Biochem. 2003, 270, 3778-3786. 78. Brunk U.T., Neuzil J., Eaton J.W. Lysosomal involvement in apoptosis. Redox Report. 2001, 6, 91-97. 79. Salvesen G.S. A lysosomal protease enters the death scene. J Clin Invest. 2001, 107, 21-22. 80. Ono K., Kim S.O., Han J. Susceptibility of lysosomes to rupture is a determinant for plasma membrane disruption in tumor necrosis fac155 tor alpha-induced cell death. Mol Cell Biol. 2003, 23, 665-676. 81. Fabisiak J.P., Borisenko G.G., Kagan V.E. Quantitative method of measuring phosphatidylserine externalization during apoptosis using electron paramagnetic resonance spectroscopy and annexin-conjugated iron. Methods Mol Biol. 2005, 291, 457-464. 82. Fadeel B. Plasma membrane alterations during apoptosis: role in corpse clearance. Antiox Redox Signal. 2004, 6, 269-275. 83. Kagan V.E., Borisenko G.G., Serinkan B.F., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Jiang J., Liu S.X., Shvedova A.A., Fablsiak J.P., Uthaisang W., Fadeel B. Appetizing rancidity of apoptotic cells for macrophages: oxidation, externalization, and recognition of phosphatidylserine. Am J Physiol Lunp Cell Mol Physiol. 2003, 285, l-17. 84. Henson P.M., Bratton D.L., Fadok V.A. The phosphatidylserine receptor: a crucial molecular switch? Nature Rev Mol Cell Biol. 2001, 2, 627-633. 85. Kagan V.E., Borisenko G.G., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Jiang J., Potapovich A., Kini V., Amoscato A.A., Fuji Y. Oxidative lipidomics of apoptosis: rådox catalytic interactions of cytochrome c with cardiolipin and phosphatidylserine. Free Rad Biol Med. 2004, 37, 1963-1985. 86. Szabo I., Adams C., Gulbins E. Ion channels and membrane rafts in apoptosis. Pflugers Arch. 2004, 448, 304-312. 87. Eramo A., Vitani L.R., Sargiacomo M., Peschle, De Maria R. CD95 signaling is initiated in lipid rafts. The Third European Workshop on cell death. Salobreca (Spain). 2002, abstr. 8. 88. Gomez-Munoz A., Kong J.Y., Salh B., Steinbrecher U.P. Ceramide-1-phosphate blocks apoptosis through inhibition of acid sohingomyelinase in macrophages. J Lipid Res. 2004, 45, 99-105. 89. Hannun Y.A., Obeid L.M. Mechanisms of ceramide-mediated apoptosis. Adv Exp Med Biol. 1997, 407, 145-149. 90. Cremesti A., Paris F., Grassme H., Holler N., Tschopp J., Fuks Z., Gulbins E., Kolesnick R Ceramide enables fas to cap and kill. J Biol Chem. 2001, 276, 23954-23961. 91. Novgorodov S.A., Szulc Z.M., Luberto C., Jones J.A., Bielawski J., Bielawska A., Hannun Y.A., Obeid L.M. Positively charged ceramide is a potent inducer of mitochondrial permeablization. J Biol Chem. 2005, 280, 16096-16105. 92. Cuvillier O., Nava V.E., Murthy S.K., Edsall L.C., Levade T., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine generation, cytochrome c release, and activation of caspase-7 in doxorubicin-induced apoptosis of MCF7 breast adenocarcinoma cells.Cell Death Differ. 2001, 8, 162-171. 93. Payne S.G., Milstein S., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate: dual messenger functions. FEBS Lett. 2002, 531, 54-57. 94. Spiegel S., Milstein S. Sphingosine-1-phosphate, a key signaling 156 molecule. J Biol Chem. 2002, 277, 25851-25854. 95. Laio K.U., Shelburne J.D., Trump B.F. Observation on cell volume, ultrastructure, mitochondrial conformation and vital-dye uptake in Ehrlich ascites tumor cells. Effects of inhibiting energy production and function of the plasma membrane. Am J Pathol. 1971, 65, 203-230. 96. Trump B.F., Goldblatt P.J., Stowell R.E. Studies of necrosis in vitro of mouse hepatic parenchimal cells. Ultrastructural alterations in endoplasmatic reticulum, Golgi apparatus, plasma membrane and lipid droplets. Lab Invest. 1965, 14, 2000-2028. 97. Syntichaki P., Tavernakis N. Death by necrosis. Uncontrollable catastrophe, or is there order behind the haos? EMBO Reports. 2002, 3, 604-609. 98. Äàí÷åíêî Å.Î. Âëèÿíèå ïðåïàðàòîâ æåë÷íûõ êèñëîò íà áèîñèíòåç ÄÍÊ, àïîïòîç è íåêðîç ãåïàòîöèòîâ in vitro. Âîïð. ìåä. õèìèè. 2001, 47, 236-242. 99. Ray S.D., Lam T.S., Rotollo J.A., Phadke S., Patel C., Dontabhaktuni A., Mohammad S., Lee H., Strika S., Dobrogowska A., Bruculeri C., Chou A., Patel S., Patel R., Manolas T., Stohs S. Oxidative stress is the master operator of drug and chemically-induced programmed and unprogrammed cell death: Implications of natural antioxidants in vivo. Biofactors. 2004, 21, 223-232. 100. Zeiss Ñ.J. The apoptosis-necrosis continuum: insights from genetically altered mice. Vet Pathol. 2003, 40, 481-495. 101. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Êàëüöèåâûå íàñîñû æèâîé êëåòêè. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1998, 3, 20-27. 102. Barros L.F., Hermosilla T., Castro J. Necrotic volume increase and the early physiology of necrosis. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2001, 130, 401-409. 103. Carini R., Bellomo G., Dianzani M.U., Albano E. The operation of Na+/Ca2+ exchanger prevents intracellular Ca2+ overload and hepatocytes killing following iron-induced lipid peroxidation. Biochem Biophys Res Commun. 1995, 208, 813-818. 104. Levitsky J., Gurell D., Frishman W.H. Sodium ion/hydrogen ion exchange inhibition: a new pharmacological approach to myocardial ishemia and reperfusion injury. J. Clin Pharmacol. 1998, 38, 887898. 105. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Íàðóøåíèå áàðüåðíûõ ñâîéñòâ âíóòðåííåé è íàðóæíîé ìåìáðàí ìèòîõîíäðèé, íåêðîç è àïîïòîç. Áèîëîãè÷åñêèå ìåìáðàíû. 2002, 19, 356-377. 106. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev. 2001, 82, 47-95. 107. Ermak G., Davies K.J. Calcium and oxidative stress: from cell signaling to cell death. Mol Immunol. 2002, 38, 713-721. 157 108. Wang K.K. Calpain and caspases: can you tell the difference? Trends Neurosci. 2000, 23, 20-26. 109. Kim J.S., He L., Qian T., Lemasters J.J. Role of the mitochondrial permeability transition in apoptotic and necrotic death after ischemia/reperfusion injury to hepatocytes. Curr Mol Med. 2003, 3, 527-535. 110. Ly J.D., Grubb D.R., Lawen A. The mitochondrial membrane potential (deltapsi(m)) in apoptosis; an update. Apoptosis. 2003, 8, 115128. 111. Dussmann H., Rehm M., Kogel D., Prehn J.H. Outer mitochondrial membrane permeabilization during apoptosis triggers caspase-independent mitochondrial and caspase-dependent plasma membrane potential depolarization: a single-cell analysis. J Cell Sci. 2003, 116, 525-536. 112. Guo K., Searfoss G., Krolikowski D., Pagnoni M., Franks C., Clark K., Yu K.T., Jaye M., Ivashenko Y. Hypoxia induces the expression of the proapoptotic gene BNIP3. Cell Death Differ. 2001, 8, 367376. 113. Yu S.W., Wang H., Poitras M.F., Coombs C., Bowers W.J., Fedoroff H.J., Poirier G.G., Dawson T.M., Dawson V.L. Mediation of poly(ADP-ribose) polymerase-1-dependent cell eath by apoptosis inducing factor. Science. 2002, 297, 259-263. 114. Pessayre D., Mansouri A., Haouzi D., Fromenty B. Hepatotoxicity due to mitochondrial dysfunction. Cell Biol Toxicol. 1999, 15, 367-373. 115. Hatano E., Bradham C.A., Stark A., Iimuro Y., Lemasters J.J., Brenner D.A. The mitochondrial permeability transition augments Fasinduced apoptosis in mouse hepatocytes. J Biol Chem. 2000, 275, 1181411823. 116. Fosslien Å. Mitochondrial medicine-molecular pathology of defective oxidative phosphorylation. Ann Clin Lab Sci. 2001, 31, 25-67. 117. Somosy Z. Radiation response of cell organelles. Micron. 2000, 31, 165-181. 118. Rodriguez-Enriquez S., He L., Lemasters J.J. Role of mitochondrial permeability transition pores in mitochondrial autophagy. Int J Biochem Cell Biol. 2004, 36, 2463-2472. 119. Copp J., Wiley S., Ward M.W., van der Geer P. Hypertonic shock inhibits growth factor receptor signaling, induces caspase-3 activation, and causes reversible fragmentation of the mitochondrial network. Am J Physiol Cell Physiol. 2005, 288, 403-415. 120. Davi G., Falco A., Patrono C. Lipid peroxidation in diabetes mellitus. Antioxid Redox Signal. 2005, 7, 256-268. 121. Asano G., Takashi E., Ishiwata T., Onda M., Yokoyama M., Naito Z., Ashraf M., Sugisaki Y. Pathogenesis and protection of 158 ischemia and reperfusion injury in myocardium. J Nippon Med Sch. 2003, 70, 384-392. 122. Lieberthal W., Menza S.A., Levine J.S. Graded ATP depletion can cause necrosis or apoptosis of cultured mouse proximal tubular cells. Am J Physiol. 1998, 274, 315-327. 123. Bruemmer-Smith S., Stuber F., Schroeder S. Protective functions of intracellular heat-shock protein (HSP) 70-expression in patients with severe sepsis. Intensive Care Med. 2001, 27, 1835-1841. 124. De Broe M.E. Apoptosis in acute renal failure. Nephrol Dial Transplant. 2001, 16, 23-26. 125. Lieberthal W., Levine J.S. Mechanism s of apoptosis and its potåntial rolå in renal tubular epithelial cell injury. Am J Physiol Renal Fluid Electrolyte Physiol. 1996, 271, 477-488. 126. Edelstein C.L., Shi Y., Schrier R.W. Role of caspases in hypoxia-induced necrosis of rat renal proximal tubules. J Am Soc Nephrol. 1999, 10, 1940-1949. 127. Vanden Berghe T., van Loo G., Saelens X., Van Gurp M., Brouckaert G., Kalai M., Declercq W., Vandenabeele P. Differential signaling to apoptotic and necrotic cell death by Fas-associated death domain protein FADD. J Biol Chem. 2004, 279, 7925-7933. 128. Wang Y., Li X., Wang L., Ding P., Zhang Y., Han W., Ma D. An alternative form of paraptosis-like cell death, triggered by TAJ/TROY and enhanced by PDCD5 overexpression. J Cell Sci. 2004, 117, 15251532. 129. Skulachev V.P. How proapoptotic proteins can escape from mitochondria? Free Radic Biol Med. 2000, 29, 1056-1059. 130. Âëàäèìèðîâ Þ.À., Àð÷àêîâ À.È. Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ. Íàóêà, Ì. 1972. 131. Archakov A.I., Bachmanova G.I. Cytochrome P-450 and active oxygen. Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990. 132. Îñèïîâ À.Í., Àçèçîâà Î.À., Âëàäèìèðîâ Þ.À. Àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà è èõ ðîëü â îðãàíèçìå. Óñïåõè.áèîë.õèìèè. 1990, 31, 180-208. 133. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems. J Lipid Res. 1998, 39, 1529-1542. 134. Çåíêîâ Í.Ê., Ëàíêèí Â.Ç., Ìåíüùèêîâà Å.Á. Îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ. Áèîõèìè÷åñêèé è ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèé àñïåêòû. ÌÀÈÊ, Íàóêà/Èíòåðïåðèîäèêà, Ì. 2001. 135. Montine T.J., Neely M.D., Quinn J.F., Beal M.F., Markesbery W.R., Roberts L.J., Morrow J.D. Lipid peroxidation in aging brain and Alzheimer's disease. Free Radic Biol Med. 2002, 33, 620-626. 136. Spiteller G. Are lipid peroxidation processes induced by changes in the cell wall structure and how are these processes connected with dis- 159 eases? Med Hypotheses. 2003, 60, 69-83. 137. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíûå ðàäèêàëû â áèîëîãè÷åñêèõ ñèñòåìàõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. Áèîëîãèÿ. 2000, 12, 13-19. 138. Davies M.J. Singlet oxygen-mediated damage to proteins and its consequences. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 305, 761-770. 139. Davies M.J. Reactive species formed on proteins exposed to singlet oxygen. Photochem Photobiol Sci. 2004, 3, 17-25. 140. Kim S.Y, Kim E.J., Park J.W. Control of singlet oxygen-induced oxidative damage in Escherichia coli. J Biochem Mol Biol. 2002, 35, 353-357. 141. Klotz L.O., Kroncke K.D., Sies H. Singlet oxygen-induced signaling effects in mammalian cells. Photochem Photobiol Sci. 2003, 2, 88-94. 142. Kehrer J.P. Free radicals as mediators of tissue injury and disease. Crit Rev Toxicol. 1993, 23, 21-48. 143. Forman H.J., Torres M. Reactive oxygen species and cell signaling: respiratory burst in macrophage signaling. Am J Respir Crit Care Med. 2002, 166, 4-8. 144. Stamler J.S., Single D., Loscalzo J. Biochemistry of nitric oxide and its redox-activated forms. Science. 1992, 258, 1898-1902. 145. Gu X., Sun M., Gugiu B., Hazen S., Crabb J.W., Salomon R.G. Oxidatively truncated docosahexaenoate phospholipids: total synthesis, generation, and Peptide adduction chemistry. J Org Chem. 2003, 68, 3749-3761. 146. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry. J Lipid Res. 2003, 44, 233-242. 147. Korytowski W., Zareba M., Girotti A.W. Inhibition of free radical-mediated cholesterol peroxidation by diazeniumdiolate-derived nitric oxide: effect of release rate on mechanism of action in a membrane system. Chem Res Toxicol. 2000, 13, 1265-1274. 148. Kunsch C., Medford R. Oxidative stress as a regulator of gene expression in vasculature. Circ Res. 1999, 85, 753-766. 149. Bowie A., O'Neill L.A. Oxidative stress and nuclear factorkappaB activation: a reassessment of the evidence in the light of recent discoveries. Biochem Pharmacol. 2000, 59, 13-23. 150. Eligini S., Brambilla M., Banfi C., Camera M., Sironi L., Barbieri S.S., Auwerx J., Tremoli E., Colli S. Oxidized phospholipids inhibit cyclooxygenase-2 in human macrophages via nuclear factorkappaB/IkappaB- and ERK2-dependent mechanisms. Cardiovasc Res. 2002, 55, 406-415. 151. Sakoda T., Hirata K., Kuroda R. Myristoylation of endothelial cells nitric oxide synthase is important for extracellular release of nitric 160 oxide. Mol and Cell Biochem. 1995, 152, 143-148. 152. Ïðîñêóðÿêîâ Ñ.ß., Êîíîïëÿíèêîâ À.Ã., Èâàíèêîâ À.È., Ñêâîðöîâ Â.Ã. Áèîëîãèÿ îêèñè àçîòà. Óñïåõè ñîâð. Áèîëîãèè. 1999, 119, 380-395. 153. Stuart-Smith K. Demystified. Nitric oxide. Mol Pathol. 2002, 55, 360-366. 154. Brown G.C., Borutaite V. Nitric oxide, mitochondria, and cell death. IUBMB Life. 2001, 52, 189-195. 155. Lopez M.F., Melov S. Applied proteomics: mitochondrial proteins and effect on function. Circ Res. 2002, 90, 380-389. 156. Àð÷àêîâ À.È., Ìîõîñîåâ È.Ì. Ìîäèôèêàöèÿ áåëêîâ àêòèâíûìè ôîðìàìè êèñëîðîäà è èõ äåãðàäàöèÿ. Áèîõèìèÿ. 1989, 54, 179-186. 157. Resmi H., Akhunlar H., Temiz Artmann A., Guner G. In vitro effects of high glucose concentrations on membrane protein oxidation, G-actin and deformability of human erythrocytes. Cell Biochem Funct. 2004, 23,163-168. 158. Ernst A., Stolzing A., Sandig G., Grune T. Protein oxidation and the degradation of oxidized proteins in the rat oligodendrocyte cell line OLN 93-antioxidative effect of the intracellular spin trapping agent PBN. Brain Res Mol Brain Res. 2004, 122, 126-132. 159. Toledano M.B., Leonard W.J. Modulation of transcription factor NFkB binding activity by oxidation -reduction in vitro. PNAS USA. 1991, 88, 4328-4332. 160. Lo Y.Y., Wong J.M., Cruz T.F. Reactive oxygen species mediate cytokine activation of c-Jun NH2-terminal kinases. J Biol Chem. 1996, 271, 15703-15707. 161. Liddil J.D., Dorr R.T., Scuderi P. Association of lysosomal activity with sensitivity and resistance to tumor necrosis factor in murine L929 cells. Canser Res. 1989, 49, 2722-2728. 162. Jensen K.D., Kopeckova P., Kopecek J. Antisense oligonucleotides delivered to the lysosome escape and actively inhibit the hepatitis B virus. Bioconjug Chem. 2002, 13, 975-984. 163. Canbay A., Guicciardi M.E., Higuchi H., Feldstein A., Bronk S.F., Rydzewski R., Taniai M., Gores G.J. Cathepsin B inactivation attenuates hepatic injury and fibrosis during cholestasis. J Clin Invest. 2003, 112, 152-159. 164. Futerman A.H., van Meer G. The cell biology of lysosomal storage disorders. Nat Rev Mol Cell Biol. 2004, 5, 554-565. 165. Takahashi T., Kitaoka K., Ogawa Y., Kobayashi T., Seguchi H., Tani T., Yoshida S. Lysosomal dysfunction on hydrogen peroxideinduced apoptosis of osteoarthritic chondrocytes. Int J Mol Med. 2004, 14, 197-200. 161 166. Balsinde J. Roles of various phospholipases A2 in providing lysophospholipid acceptors for fatty acid phospholipid incorporation and remodelling. Biochem J. 2002, 364, 695-702. 167. Sevanian A. Lipid damage and repair. In: Oxidative Damage and Repair: Clinical, Biological and Medical Aspects. (Davies RJA ed). Pergamon Press, N-Y. 1988, 543-549. 168. Krysko O., De Ridder L., Cornelissen M. Phosphatidylserine exposure during early primary necrosis (oncosis) in JB6 cells as evidenced by immunogold labeling technique. Apoptosis. 2004, 9, 495500. 169. Kohjimoto Y., Kennington L., Scheid C.R., Honeyman T.W. Role of phospholipase A2 in the cytotoxic effects of oxalate in cultured renal epithelial cells. Kidney Int. 1999, 56, 1432-1441. 170. Sapirstein A., Spech R.A., Witzgall R., Bonventre J.V. Cytosolic phospholipase A2 (PLA2), but not secretory PLA2, potentiates hydrogen peroxide cytotoxicity in kidney epithelial cells. J Biol Chem. 1996, 271, 21505-21513. 171. Vadas P. Group II phospholipases A2 are indirectly cytolytic in the presence of exogenous phospholipid. Biochim Biophys Acta. 1997, 1346, 193-197. 172. Tselepis A., Chapman M. Inflammation, bioàctive lipids and atherosclerosis: potential role of LP-associated phospholipase A2, PAFacetylhydrolase. Atherîsclerosis. 2002, Supplement 3, 57-68. 173. Granata F., Balestrieri B., Petraroli A., Giannattasio G., Marone G., Triggiani M. Secretory phospholipases a(2) as multivalent mediators of inflammatory and allergic disorders. Int Arch Allergy Immunol. 2003, 131, 153-163. 174. Lauber K., Bohn E., Krober S.M., Xiao Y.J., Blumenthal S.G., Lindemann R.K., Marini P., Wiedig C., Zobywalski A., Baksh S., Xu Y., Autenrieth I.B., Schulze-Osthoff K., Belka C., Stuhler G., Wesselborg S. Apoptotic cells induce migration of phagocytes via caspase-3-mediated release of a lipid attraction signal.Cell. 2003, 113, 717-730. 175. Leray C., Cazenave J.P., Gachet C. Platelet phospholipids are differentially protected against oxidative degradation by plasmalogens. Lipids. 2002, 37, 285-290. 176. Kambayashi Y., Yamashita S., Ntki E., Yamamoto Y. Oxidation of rat liver phospholipids: comparison of pathways in homogeneous solution, in liposomal suspension and in whole tissue homogenates. J. Biochem. (Tokyo). 1997, 121, 425-431. 177. Nedeljkovic Z.S., Gokce N., Loscalzo J. Mechanisms of oxidative stress and vascular Postgrad Med J. 2003, 79, 195-199. 178. Klotz L.O. Oxidant-induced signaling: effects of peroxynitrite and singlet oxygen. Biol Chem. 2002, 383, 443-456. 162 179. Suzuki Y.J., Forman H.F., Sevanian A. Oxidants as stimulators of signal transduction. J Free Rad Biol Med. 1997, 22, 269-285. 180. Rashba-Step J., Tatopyan A., Du R., Ann D., Pushpa-Rehka T.R., Sevanian A. Phospholipid peroxidation induces cytosolic phospholipase A2 activity: membrane effects versus enzyme phosphorylation. Arch Biochem Biophys. 1997, 343, 44-54. 181. Clark J.D., Schievella A.R., Nalefski E.A., Lin L.L. Cytosolic phospholipase A2. J Lipid Mediators Cell Signal. 1995, 12, 83-117. 182. Newton A.C., Johnson J.J. Protein kinase C: a paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting modules.Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 155-172. 183. Ross B.M., Moszczynska. A., Erlich J., Kish S.J. Phospholipidmetabolizing enzymes in Alzheimer's disease: increased lysophospholipid acyltransferase activity and decreased phospholipase A2 activity. J Neurochem. 1998, 70, 786-793. 184. Mulder C., Wahlund L.O., Teerlink T., Blomberg M., Veerhuis R., Van Kamp G.J., Scheltens P., Scheffer P.G. Decreased lysophsphatidylcholine/ phosphatidylchoine ratio in cerebrospinal fluid in Alzheimer' s disease. J Neural Transm. 2003, 110, 949-955. 185. Stanley J.A., Williamson P.C., Drost D.J., Carr T J., Rylett R.J., Morrison-Stewartr S., Thompson R.T. Membrane phospholipid metabolism and schizophrenia: an in vivo 31P-MR spectroscopy study. Schizophr Res. 1994, 13, 209-215. 186. Keshavan M.S., Stanley J.A., Montrose D.M., Minshew N.J., Pettegrew J.W. Prefrontal membrane phospholipid metabolism of child and adolescent offspring at risk for schizophrenia or schizoaffective disorder: an in vivo (31)P MRS study. Mol Psychiatry. 2003, 8, 316-323. 187. Mahadik S.P., Evans D.R. Is schizophrenia a metabolic brain disorder? Membrane phospholipid dysregulation and its therapeutic implications. Psychiatr Clin North Am. 2003, 26, 85-102. 188. Haag M. Essential fatty acids and the brain. Can J Psychiatry. 2003, 48, 195-203. 189. Salvioli G. Relationship between lipid composition of erythrocytes and their deformability. In: Phospholipids and Atherosclerosis (Avogaro P.et al. eds.) Raven Press, New York. 1983, 99-114. 190. Ëîïóõèí Þ.Ì., Àð÷àêîâ À.È., Âëàäèìèðîâ Þ.À., Êîãàí Ý.Ì. Õîëåñòåðèíîç (Õîëåñòåðèí áèîìåìáðàí. Òåîðåòè÷åñêèå è êëèíè÷åñêèå àñïåêòû.) Ìåäèöèíà. Ì. 1983. 191. Wei X.D., Li L., Bai J. Effect of Salvia miltiorrhizae Composita on erythrocyte membrane phospholipid in patients with coronary heart disease. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1997, 17, 336-338. 192. Das D.K., Engelman R.M., Rousou J.A., Breyer R.H., Otani H., Lemeshow S. Role of membrane phospholipids in myocardial injury 163 induced by ischemia and reperfusion. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1986, 251, 71-79. 193. Inouye M., Mio T., Sumino K. Formation of 9-hydroxy linoleic acid as a product of phospholipid peroxidation in diabetic erythrocyte membranes. Biochim Biophys Acta. 1999, 1438, 204-212. 194. Candiloros H., Zeghari N., Ziegler O., Donner M., Drouin P. Hyperinsulinemia is related to erythrocyte phospholipid composition and membrane fluidity changes in obese nondiabetic women. J Clin Endocrinol Metab. 1996, 81, 2912-2918. 195. Brown R.E. Sphingolipid organization in biomembranes: what physical studies of model membranes reveal. J Cell Sci. 1998, 111, 1-9. 196. Samocha-Bonet D., Lichtenberg D., Tomer A., Deulsch V., Mardi T., Goldin Y., Abi Abeid S., Shenkerman G., Patshornik H., Shapira I., Berliner S. Enhanced erythrocyte adhesiveness/aggregation in obesity corresponded to low-grade inflammation. Obes Res. 2003, 1, 403-407. 197. Zendzian-Piotrowska M., Bucki R., Gorska M., Gorski J. Diabetes affects phospholipid content in the nuclei of the rat liver. Horm Metab Res. 2000, 32, 386-389. 198. Wright S.M., Hockey P.M., Enhorning G., Strong P., Reid K.B., Holgate S.T., Djukanovic R., Postle A.D. Altered airway surfactant phospholipid composition and reduced lung function in asthma. J AppI Physiol. 2000, 89, 1283-1292. 200. Mander A., Langton-Hewer S., Bernhard W., Warner J.O., Postle A.D. Altered phospholipid composition and aggregate structure of lung surfactant is associated with impaired lung function in young children with respiratory infections. Am J Respir Cell Mol Blol. 2002, 27, 714-721. 201. Rigamonti C., Mottaran E., Reale E., Rolla R., Cipriani V., Capelli F., Boldorini R., Vidali M., Sartori M., Albano E. Moderate alcohol consumption increases oxidative stress in patients with chronic hepatitis C. Hepatology. 2003, 38, 42-49. 202. Estilaei M.R., Matson G.B., Payne G.S., Leach M.O., Fein G., Meyerhoff D.J. Effects of abstinence from alcohol on the broad phospholipid signal in human brain: an in vivo 31P magnetic resonance spectroscopy study. Alcohol Clin Exp Res. 2001, 25, 1213-1220. 203. Li S., Yu B., An P., Liang Z., Yuan S., Cai H. Variations of cellular membrane phospholipids with genesis and hepatic metastasis of large intestine cancer. Zhonghua Wai Ke Za Zhi. 2002, 4, 561-563. 164 ÃËÀÂÀ 5. ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÉ ÊËÅÒÎÊ ÏÅ×ÅÍÈ. ÌÅÕÀÍÈÇÌÛ ÃÅÏÀÒÎÒÎÊÑÈ×ÍÎÑÒÈ. Ïðîÿâëåíèå ðàññìîòðåííûõ âûøå ìåõàíèçìîâ êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé èìååò ðÿä ñïåöèôè÷åñêèõ îñîáåííîñòåé â ïå÷åíè. Õîðîøî èçâåñòíî, ÷òî ïå÷åíü - ýòî îñíîâíîé îðãàí, ãäå ïðîèñõîäèò ìåòàáîëèçì ÷óæåðîäíûõ ñîåäèíåíèé (êñåíîáèîòèêîâ). Áëàãîäàðÿ ýòèì óíèêàëüíûì ôóíêöèÿì, êëåòêè ïå÷åíè ïîñòîÿííî íàõîäÿòñÿ ïîä âîçäåéñòâèåì ìíîæåñòâà ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ è ÿâëÿþòñÿ îñíîâíîé ìèøåíüþ äëÿ òîêñèêàíòîâ, êñåíîáèîòèêîâ, ïðîäóêòîâ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà è ò.ä. [1-3]. Êëåòêè ïå÷åíè î÷åíü ÷óâñòâèòåëüíû ê ãèïîêñèè, îñîáåííî ïðè íèçêîì ñîäåðæàíèåì ãëèêîãåíà.  ýòèõ óñëîâèÿõ â ãåïàòîöèòàõ ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ÀÒÔ, áëîêèðóþòñÿ ÀÒÔ-çàâèñèìûå ìåòàáîëè÷åñêèå ïðîöåññû (ãëþêîíåîãåíåç, ñèíòåç æèðíûõ êèñëîò), â ðåçóëüòàòå ÷åãî ãèïîêñèÿ, ñîïðÿæåííàÿ ñ èíãèáèðîâàíèåì ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé è ðàçðóøåíèåì ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ, èíèöèèðóåò íåêðîç êëåòîê. Ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ðàçëè÷íû â çàâèñèìîñòè îò ïðèðîäû òîêñèêàíòà, äîçû, äëèòåëüíîñòè âîçäåéñòâèÿ è ò.ä. Íåçàâèñèìî îò ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà ôîðìèðóåòñÿ îãðàíè÷åííîå êîëè÷åñòâî ïàòîëîãè÷åñêèõ ðåàêöèé, ñðåäè êîòîðûõ âàæíåéøèìè ÿâëÿþòñÿ: ñòåàòîç, íåêðîç, õîëåñòàç, ôèáðîç (öèððîç), êàíöåðîãåíåç. Âûäåëÿþò 4 îñíîâíûõ êëèíè÷åñêèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñèíäðîìà ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè: 1. Ñèíäðîì öèòîëèçà (ò.å. ïðîÿâëåíèå íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê), êîòîðûé îáóñëîâëåí íàðóøåíèåì ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ è èõ îðãàíåëë è õàðàêòåðèçóåòñÿ âûäåëåíèåì âíóòðèêëåòî÷íîãî ñîäåðæèìîãî â ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî è â êîíå÷íîì èòîãå - â êðîâü. Äëÿ öèòîëèçà õàðàêòåðíû ïîâûøåíèå â êðîâè à) àêòèâíîñòè èíäèêàòîðíûõ ôåðìåíòîâ íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê (ÀëÀÒ, ÀñÀÒ, àëüäîëàçû, ãëóòàìàòäåãèäðîãåíàçû, ËÄÃ), á) êîíöåíòðàöèè áèëèðóáèíà, â) âèòàìèíà Â12 è æåëåçà. 2. Ñèíäðîì õîëåñòàçà, îáóñëîâëåííûé íàðóøåíèåì æåë÷åâûäåëèòåëüíîé ôóíêöèè ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ñ íàðóøåíèåì îáðàçîâàíèÿ æåë÷íîé ìèöåëëû è ïîðàæåíèåì ìåëü÷àéøèõ æåë÷íûõ ïðîòîêîâ. Ìîðôîëîãè÷åñêè õîëåñòàç, êàê ïðàâèëî, ñâÿçàí ñ íàðóøåíèÿìè öèòîñêåëåòà ãåïàòîöèòîâ, êîòîðûå ïðèâîäÿò ê èñ÷åçíîâåíèþ ìèêðîâîðñèíîê íà àïèêàëüíîé ïîâåðõíîñòè ýòèõ êëåòîê, ñíèæåíèþ ñîêðàòèìîñòè êàíàëèêóëÿðíîé ìåìáðàíû, à òàêæå ìîãóò ñëóæèòü ïðè÷èíîé ïðîíèöàåìîñòè ìåæêëåòî÷íûõ ïëîòíûõ êîíòàêòîâ è ïðèâîäÿò ê îáðàòíîìó òîêó æåë÷è â ñèíóñîèäû [4]. Äðóãèì âîçìîæíûì ìåõàíèçìîì õîëåñòàçà ÿâëÿåòñÿ íàðóøåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî òðàíñïîðòà âåçèêóë, êîòîðîå òàêæå ñâÿçàíî ñ ñîñòîÿíèåì öèòîñêåëåòà ãåïàòîöèòîâ. Ñèíäðîì õîëåñòàçà 165 ñîïðîâîæäàåòñÿ: (à) ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû, ëåéöèíàìèíîïåïòèäàçû, γ-ãëóòàìèëòðàíñïåïòèäàçû, 5'íóêëåîòèäàçû; (á) ãèïåðõîëåñòåðèíåìèåé; (â) ïîâûøåíèåì óðîâíÿ ôîñôîëèïèäîâ è æåë÷íûõ êèñëîò; (ã) ãèïåðáèëèðóáèíåìèåé. 3. Ñèíäðîì ïå÷åíî÷íî-êëåòî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, êîòîðûé îòðàæàåò èçìåíåíèÿ îñíîâíûõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñâîéñòâ ïå÷åíè: ñèíòåòè÷åñêîé è ìåòàáîëèçèðóþùåé. Ïå÷åíî÷íî-êëåòî÷íàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü âêëþ÷àåò: ïå÷åíî÷íóþ ãèïåðàçîòåìèþ; íåäîñòàòî÷íîñòü ñèíòåòè÷åñêîé ôóíêöèè ïå÷åíè è ïàäåíèå àêòèâíîñòè õîëèíýñòåðàçû â ñûâîðîòêå êðîâè. 4. Èììóíîâîñïàëèòåëüíûé ñèíäðîì, îáóñëîâëåííûé ñåíñèáèëèçàöèåé èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòîê è àêòèâàöèåé ðåòèêóëîãèñòèîöèòàðíîé ñèñòåìû. Äëÿ íåãî õàðàêòåðíî: (à) ïîâûøåíèå óðîâíÿ γ- è β-ãëîáóëèíîâ; (á) îáùåãî áåëêà ñûâîðîòêè êðîâè; (â) èììóíîãëîáóëèíîâ À, G, Ì; (ã) ïîÿâëåíèå íåñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë, â òîì ÷èñëå ê ÄÍÊ, áåëêàì ãëàäêîìûøå÷íûõ âîëîêîí, ìèòîõîíäðèé; (ä) èçìåíåíèå êîëè÷åñòâà è ñîîòíîøåíèÿ ñóáïîïóëÿöèé ëèìôîöèòîâ (õåëïåðîâ, ñóïðåññîðîâ).  çàâèñèìîñòè îò ðÿäà ôàêòîðîâ (ïðèðîäû ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà, äëèòåëüíîñòè è õàðàêòåðà ïîâðåæäåíèÿ è ò.ä.) ïàòîãåíåç ïîâðåæäåíèé â ïå÷åíè ñîïðîâîæäàåòñÿ èíäóöèðîâàííûì àïîïòîçîì, íåêðîçîì, ñòåàòîçîì è êàíöåðîãåíåçîì. Òîêñè÷åñêèå ãåïàòîïàòèè, êàê ïðàâèëî, íîñÿò ñìåøàííûé õàðàêòåð. Ê ïîâðåæäàþùèì ôàêòîðàì, âûçûâàþùèì íàèáîëüøèé èíòåðåñ ó èññëåäîâàòåëåé, îòíîñÿò âèðóñíûå, òîêñèêîëîãè÷åñêèå (â òîì ÷èñëå è ëåêàðñòâåííûå) è èììóíîëîãè÷åñêèå [5, 6 ]. Ãåïàòîòîêñèíû ìîãóò îêàçûâàòü êàê ïðÿìîå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå, òàê è îïîñðåäîâàííîå, ÷åðåç ïðîìåæóòî÷íûå ïðîäóêòû èõ ìåòàáîëèçìà. Îáëèãàòíûå ãåïàòîòîêñèíû âûçûâàþò íåîáðàòèìûå íåêðîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ (íàïðèìåð, òîêñèíû áëåäíîé ïîãàíêè). Ôàêóëüòàòèâíûå ãåïàòîòîêñèíû ñàìè ïî ñåáå íå âûçûâàþò íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, à â ïðîöåññå áèîòðàñôîðìàöèé ïðåîáðàçîâûâàþòñÿ â ìåòàáîëèòû, îáëàäàþùèå âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ (÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä, ïîëèöèêëè÷åñêèå àðîìàòè÷åñêèå óãëåâîäîðîäû è ò. ä.) [7]. Ãåïàòîöèòû ïîäâåðæåíû âîçäåéñòâèþ ââîäèìûõ â îðãàíèçì ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé, ïîñòóïàþùèõ â ïå÷åíü íåïîñðåäñòâåííî îò îðãàíîâ ÆÊÒ è ñåëåçåíêè ÷åðåç âîðîòíóþ âåíó, äîñòàâëÿþùóþ îêîëî 75% ïå÷åíî÷íîé êðîâè. Òàêèå "ýêñòðåìàëüíûå" óñëîâèÿ, â êîòîðûõ ïîñòîÿííî íàõîäÿòñÿ êëåòêè ïå÷åíè, ñ îäíîé ñòîðîíû, â êàêîé-òî ñòåïåíè êîìïåíñèðóþòñÿ èõ óíèêàëüíîé ñïîñîáíîñòüþ ê ðåãåíåðàöèè. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, àêòèâíàÿ ðåãåíåðàöèÿ è ïðîëèôåðàöèÿ 166 ãåïàòîöèòîâ, ìàñêèðóÿ èíäóöèðîâàííûå ðàçëè÷íûìè ôàêòîðàìè ïîâðåæäåíèÿ, äåëàåò ïå÷åíü îñîáåííî óÿçâèìîé äëÿ êàíöåðîãåíåçà.  íàñòîÿùåå âðåìÿ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî, êàê è ó ëþáîé ýóêàðèîòè÷åñêîé êëåòêè, ïîâðåæäåíèÿ ãåïàòîöèòîâ èíäóöèðóþò àïîïòîç è/èëè íåêðîç, êîòîðûå â öåëîì ñîîòâåòñòâóþò ïðèâåäåííûì âûøå îáùèì ñõåìàì (ñì. ãëàâó 4). Ìîðôîëîãè÷åñêèå è êëèíè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè ïîä äåéñòâèåì ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ ïîäðîáíî èçó÷åíû è îïèñàíû [2, 8]. Íî áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû ðåàëèçàöèè ýòèõ ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè, êàê áûëî îòìå÷åíî, èìåþò íåêîòîðûå ñïåöèôè÷åñêèå îñîáåííîñòè, êîòîðûå åùå íå äî êîíöà âûÿñíåíû [9]. Âàæíîñòü èçó÷åíèÿ ýòèõ ìåõàíèçìîâ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé ñ îäíîé ñòîðîíû, â ñâÿçè ñ âîçðàñòàþùèì óðîâíåì çàáîëåâàåìîñòè âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè â ìèðå [10, 11], à ñ äðóãîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ è ñâÿçàííîé ñ íåé âîçðàñòàþùåé ñìåðòíîñòüþ [12, 13]. Ñðåäè ýíäîãåííûõ ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ, èíèöèèðóþùèõ àïîïòîç è ñâÿçàííûõ ñ ôóíêöèîíàëüíûìè îñîáåííîñòÿìè ïå÷åíè, ñóùåñòâåííîå ìåñòî çàíèìàþò æåë÷íûå êèñëîòû. 5.1. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè êèñëîòàìè Ïðè íàðóøåíèÿõ ñåêðåöèè æåë÷è â æåë÷íûé ïóçûðü, â ïå÷åíè íàêàïëèâàþòñÿ ãèäðîôîáíûå æåë÷íûå êèñëîòû, îáëàäàþùèå âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ [14, 15]. Èõ íàêîïëåíèå âíóòðè ãåïàòîöèòîâ è çàäåðæêà ýêñêðåöèè æåë÷è ñîïðÿæåíû ñ àïîïòîçîì êëåòîê [16, 17].  îñîáî îñòðûõ ñëó÷àÿõ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü æåë÷íûõ êèñëîò ìîæåò ïðèâîäèòü ê ïîâðåæäåíèþ ïå÷åíè, ðàçâèòèþ öèððîçà è ñìåðòè îò ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè [18, 19]. Íà êóëüòóðå êëåòîê ãåïàòîöèòîâ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ôèçèîëîãè÷åñêèå êîíöåíòðàöèè (20-100 ìêÌ) ãèäðîôîáíîé ãëèêîõåíîäåîêñèõîëåâîé (ÃÕÄÕ) æåë÷íîé êèñëîòû èíäóöèðóþò àïîïòîç. Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ ñæàòèåì êëåòêè è ÿäðà, àêòèâàöèåé êàñïàç, ôðàãìåíòàöèåé ÄÍÊ è ýêñòåðíàëèçàöèåé ôîñôàòèäèëñåðèíà â íàðóæíûé ìîíîñëîé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû [20] (ñì. ãëàâó 4).  ãåïàòîöèòàõ æåë÷íûå êèñëîòû èíèöèèðóþò íå ìèòîõîíäðèàëüíûé, à ïîâåðõíîñòíî-ðåöåïòîðíûé ïóòü àïîïòîçà, âêëþ÷àþùèé Fas è TRAIL-R2 ðåöåïòîðû [21, 22]. Èçâåñòíî, ÷òî êëåòêè ïå÷åíè îáîãàùåíû òàêèìè "ðåöåïòîðàìè ñìåðòè", êàê Fas, TNF-R1, à òàêæå TRAIL-R1 è -R2, ñîäåðæàùèìè "äîìåí ñìåðòè", êîòîðûé ñïîñîáåí ñâÿçûâàòü ñõîäíóþ ñ êàñïàçîé-8 "ïðîòåàçó ñìåðòè" (death protease). Ñâÿçûâàíèå ñîîòâåòñòâóþùèõ 167 ëèãàíäîâ ñ ýòèìè ðåöåïòîðàìè è îëèãîìåðèçàöèÿ îáðàçóþùèõñÿ êîìïëåêñîâ èíèöèèðóþò àïîïòîç. Æåë÷íûå êèñëîòû ñòèìóëèðóþò òðàíñëîêàöèþ Fas èç öèòîïëàçìû [23] èëè èç âåçèêóë, îáðàçîâàííûõ ïðè ó÷àñòèè àïïàðàòà Ãîëüäæè, ÷åðåç ñèñòåìó ìèêðîòðóáî÷åê ê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå [22], ãäå Fasðåöåïòîðû, (âîçìîæíî, ñ ó÷àñòèåì ìåìáðàííûõ ðàôòîâ) çàïóñêàþò àïîïòîçíûé ìåõàíèçì êëåòî÷íîé ñìåðòè [23].  òî æå âðåìÿ, â ãåïàòîöèòàõ ìûøåé ñ îòñóòñòâèåì ãåíîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ Fas, ÷àñòè÷íî ñîõðàíÿëàñü (íà 50%) óñòîé÷èâîñòü ê èíäóöèðîâàííîìó æåë÷íûìè êèñëîòàìè àïîïòîçó, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ñóùåñòâîâàíèè àëüòåðíàòèâíûõ ìåõàíèçìîâ, íåçàâèñèìûõ îò Fas [21, 24]. Äåéñòâèòåëüíî, â äàëüíåéøåì ó òàêèõ ìûøåé ïðè íàêîïëåíèè æåë÷íûõ êèñëîò áûëà âûÿâëåíà ïîâûøåííàÿ ýêñïðåññèÿ è îëèãîìåðèçàöèÿ TRAIL-R2 [25, 26]. Àíàëîãè÷íûé ðåçóëüòàò áûë ïîëó÷åí íà äðóãîé ìîäåëè ìûøåé, ñ ïåðåâÿçàííûì æåë÷íûì ïóçûðåì, ïðè ââåäåíèè ýêçîãåííîãî TRAIL. Ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, ãåíåðàöèÿ TRAIL in vivo, îñóùåñòâëÿåìàÿ â îñíîâíîì àêòèâèðîâàííûìè êóïôåðîâñêèìè êëåòêàìè [27], óñèëèâàåò àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ è õîëåñòàòè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå ïå÷åíè.  íîðìå ó÷àñòèå TRAIL â àïîïòîçå êîíòðîëèðóåòñÿ, íî ïðè õîëåñòàçàõ ýêñïðåññèÿ ýòîãî áåëêà ïîâûøàåòñÿ, è îí ñòàíîâèòñÿ ãåïàòîòîêñè÷íûì [28]. Èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò ïîêàçàëè, ÷òî æåë÷íûå êèñëîòû íå òîëüêî èíèöèèðóþò ëèãàíä-çàâèñèìóþ è ëèãàíä-íåçàâèñèìóþ îëèãîìåðèçàöèþ "ðåöåïòîðîâ ñìåðòè", íî òàêæå ìîäóëèðóþò Bidçàâèñèìûå ñèãíàëüíûå ïóòè (ñì. ãëàâó 4), âûçûâàþùèå äèñôóíêöèþ ìèòîõîíäðèé â ãåïàòîöèòàõ, íàêîïëåíèå ÀÔÊ è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ [21, 29, 30]. Áîëåå òîãî, áûë óñòàíîâëåí èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè êèñëîòàìè íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, âûçûâàåìûé ãëóáîêîé äèñôóíêöèåé ìèòîõîíäðèé, ñ îáðàçîâàíèåì ïîð è âûõîäîì öèòîõðîìà ñ [19, 31]. Àâòîðû îòìå÷àþò, ÷òî âûáîð ìîëåêóë-ìèøåíåé - ýôôåêòîðîâ ìèòîõîíäðèàëüíîãî ïóòè àïîïòîçà ãåïàòîöèòîâ (íàïðèìåð, òàêèõ, êàê êàñïàçû 8/10, FADD, Bid è äð.), áóäåò ñïîñîáñòâîâàòü ïîèñêó íàèáîëåå ýôôåêòèâíûõ èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà ïðè õîëåñòàçàõ. Cëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ñóùåñòâåííîå çíà÷åíèå â öèòîòîêñè÷åñêîì äåéñòâèè æåë÷íûõ êèñëîò èìååò ãèäðîôîáíîñòü, îïðåäåëÿþùàÿ èõ ñïîñîáíîñòü âñòðàèâàòüñÿ â ìåìáðàíó. Íàïðèìåð, íà êóëüòóðå êëåòîê Hep G2 ãåïàòîöèòîâ ÷åëîâåêà áûëî ïîêàçàíî, ÷òî õåíîäåçîêñèõîëåâàÿ êèñëîòà âûçûâàåò àïîïòîç êëåòîê. Åå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå óñèëèâàåòñÿ óðñîäåçîêñèõîëåâîé êèñëîòîé, ïî-âèäèìîìó, çà ñ÷åò óâåëè÷åíèÿ ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû, ÷òî âûçûâàåò íåêðîç ãåïàòîöèòîâ. 168 Äðóãàÿ æåë÷íàÿ êèñëîòà - òàóðîäåçîêñèõîëåâàÿ òàêîãî äåéñòâèÿ íå îêàçûâàåò [32].  ãåïàòîöèòàõ ñóùåñòâóþò ìåõàíèçìû çàùèòû îò ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ æåë÷íûõ êèñëîò. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî âîçðàñòàíèå óðîâíÿ õîëåñòåðèíà è ñôèíãîìèåëèíà â êàíàëèêóëÿðíûõ ìåìáðàíàõ ó êðûñ, âûçâàííîå ââåäåíèåì äèîñãåíèíà, îêàçûâàëî çàùèòíîå äåéñòâèå íà ìåìáðàíû ïðè ïîñëåäóþùåì âíóòðèâåííîì ââåäåíèè òàóðîõîëàòà. Àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îáîãàùåííàÿ "æåñòêèìè" ëèïèäàìè ìåìáðàíà çàùèùàåò êëåòêó îò ïîâðåæäåíèé, èíäóöèðóåìûõ æåë÷íûìè êèñëîòàìè [33]. 5.2. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ. Òðàäèöèîííî ñ÷èòàëîñü, ÷òî âèðóñû âûçûâàþò ãèáåëü êëåòîê â ðåçóëüòàòå áëîêèðîâàíèÿ âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåõàíèçìîâ òðàíñêðèïöèè è òðàíñëÿöèè, à òàêæå ðàçðóøåíèÿ êëåòî÷íîé ìåìáðàíû, ïðèâîäÿ â èòîãå ê íåêðîçó ïàðåíõèìû. Íî îòêðûòèå àïîïòîçà ïîçâîëèëî ïåðåñìîòðåòü âçãëÿäû íà ïàòîãåíåç õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ (ÕÂÃ). Áîëüøèíñòâî èññëåäîâàòåëåé ñ÷èòàþò, ÷òî èìåííî àïîïòîç ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì ìåõàíèçìîì êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðè õðîíè÷åñêèõ ïîðàæåíèÿõ ïå÷åíè, â òîì ÷èñëå ïðè èíôåêöèè ãåïàòîòðîïíûìè âèðóñàìè [34, 35]. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ïîñëåäíèõ ëåò ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî: (1) ó ïàöèåíòîâ ñ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè  è Ñ êîëè÷åñòâî àïîïòîçíûõ ãåïàòîöèòîâ íàìíîãî áîëüøå, ÷åì ó çäîðîâûõ; (2) ýêñïðåññèÿ Fas-R ñóùåñòâåííî ïîâûøåíà íà ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ, èíôèöèðîâàííûõ âèðóñàìè  è Ñ, è òåñíî êîððåëèðóåò ñ èõ ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ; (3) óðîâåíü ýêñïðåññèè Fasàíòèãåíà â ãåïàòîöèòàõ òàêèõ áîëüíûõ êîððåëèðóåò ñî ñòåïåíüþ âîñïàëåíèÿ ïå÷åíè; (4) ðàçâèòèå ôóëüìèíàíòíîãî ãåïàòèòà ïðè èíôèöèðîâàíèè âèðóñàìè ãåïàòèòîâ Ñ è  ñîïðîâîæäàåòñÿ îáøèðíûì àïîïòîçîì ãåïàòîöèòîâ, à åãî èíãèáèðîâàíèå (íà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ìîäåëÿõ) ïîçâîëÿåò îñòàíîâèòü âîñïàëåíèå [36-39]. Ýòè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ õðîíè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè, â òîì ÷èñëå ïðè èíôåêöèè ãåïàòîòðîïíûìè âèðóñàìè, îñíîâíûì ìåõàíèçìîì ãèáåëè êëåòîê ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç. Çà ìíîãî ëåò äî îòêðûòèÿ àïîïòîçà áûë îïèñàí õàðàêòåðíûé ãèñòîëîãè÷åñêèé ïðèçíàê âèðóñíîãî ãåïàòèòà - îêðóãëûå ãîìîãåííûå ýîçèíîôèëüíûå îáðàçîâàíèÿ, ÷àñòî ñîäåðæàùèå ïèêíîòè÷íîå ÿäðî.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ÿñíî, ÷òî ýòè îáðàçîâàíèÿ, íàçâàííûå òåëüöàìè Êàóíñèëüìåíà, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé íå ÷òî èíîå, êàê ãåïàòîöèòû â ñîñòîÿíèè àïîïòîçà [40]. Àïîïòîç, êàê ñ÷èòàþò ìíîãèå èññëåäîâàòåëè, ÿâëÿåòñÿ 169 çàùèòíûì ìåõàíèçìîì êëåòêè-õîçÿèíà ïðîòèâ âèðóñíîé èíôåêöèè. Íî äëÿ òîãî ÷òîáû ýôôåêòèâíî èñïîëüçîâàòü æèâóþ êëåòêó, âèðóñ äîëæåí èìåòü ìåõàíèçìû âîçäåéñòâèÿ íà ïðîöåññû, ðåàëèçóþùèå çàïðîãðàììèðîâàííóþ ãèáåëü èíôèöèðîâàííîé êëåòêè. Íàêîïëåííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî âèðóñû ñïîñîáíû êàê óñèëèâàòü, òàê è áëîêèðîâàòü àïîïòîç, íî ÷àùå âñåãî îíè, âñòðàèâàÿñü â åñòåñòâåííûé ïðîöåññ àïîïòîçà, "ïðèñïîñàáëèâàþò" åãî ïîä ñâîè çàäà÷è. Ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî ìåõàíèçìîâ âîçäåéñòâèÿ âèðóñà íà ïðîöåññ àïîïòîçà â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå. 1. Âîçäåéñòâèå íà îïðåäåëåííûé êðèòè÷åñêèé ýòàï àïîïòîçà ñ ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé èëè èíãèáèðîâàíèåì ýòîãî ïðîöåññà. Íàïðèìåð, (à) áëîêèðîâàíèå Fas-ðåöåïòîðîâ íà ïîâåðõíîñòè èíôèöèðîâàííîé êëåòêè; (á) âîçäåéñòâèå íà ãåíîì êëåòêè ñ öåëüþ èíãèáèðîâàíèÿ ýêñïðåññèè ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, "çàïóñêàþùèõ" àïîïòîç, òàêèõ, êàê ïðîòåèíêèíàçû R (PKR, dsRNA-dependent serine/threonine protein kinase) [41] èëè, (â) ñòèìóëÿöèÿ àïîïòîçà è âêëþ÷åíèå âèðóñà â àïîïòîçíûå òåëüöà. 2. Ãåíåðàöèÿ ìíîæåñòâà âèðèîíîâ äî ñôîðìèðîâàíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêîãî îòâåòà â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå. 3. Îòñóòñòâèå îòâåòà êëåòêè èç-çà ñïîñîáíîñòè âèðóñà ê ëàòåíòíîìó ñóùåñòâîâàíèþ. Äàëüíåéøàÿ äèññèìèëÿöèÿ âèðóñà ìîæåò, ïî-âèäèìîìó, îñóùåñòâëÿòüñÿ, áëàãîäàðÿ ôàãîöèòàðíîìó äåéñòâèþ ñîñåäíèõ êëåòîê è ò.ä. [34, 42].  íàñòîÿùåå âðåìÿ èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ïî êðàéíåé ìåðå, äâà ìåõàíèçìà, ñ ïîìîùüþ êîòîðûõ âèðóñû ãåïàòèòà  è Ñ èíèöèèðóþò àïîïòîç: (1) ïóòåì ïðÿìîãî ïðîàïîïòîçíîãî äåéñòâèÿ ñïåöèôè÷íûõ âèðóñíûõ áåëêîâ, îáðàçóþùèõñÿ â ïðîöåññå ðåïëèêàöèè âèðóñà (Õ-áåëêè âèðóñà ãåïàòèòà  è âíóòðåííèå coreáåëêè âèðóñà ãåïàòèòà Ñ) [43-46] è (2) ïóòåì ñâåðõýêñïðåññèè íà ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ ðåöåïòîðîâ, ïåðåäàþùèõ ñèãíàë ê èíäóêöèè àïîïòîçà, íàïðèìåð, Fas-ðåöåïòîðîâ (Fas-R, APO1/CD95) è óâåëè÷åíèÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòè êëåòîê ê ðàçëè÷íûì ïðîàïîïòîòè÷åñêèì ñòèìóëàì, â ÷àñòíîñòè, ê TNF-α [47, 48]. Èç-çà îòñóòñòâèÿ êîððåëÿöèè ìåæäó êîíöåíòðàöèåé âèðóñà (óðîâíåì âèðåìèè) è èíäåêñîì ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè (ÈÃÀ) èëè àêòèâíîñòüþ ôåðìåíòîâ - ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüøèíñòâî ãåïàòîëîãîâ äî ñèõ ïîð âûñêàçûâàþò ñîìíåíèÿ îòíîñèòåëüíî öèòîïàòè÷åñêîé àêòèâíîñòè âèðóñà ãåïàòèòà Ñ è îñîáåííî âèðóñà ãåïàòèòà  â ðàçâèòèè òÿæåëîãî ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè [49]. Ñóùåñòâîâàíèå õðîíè÷åñêèõ íîñèòåëåé âèðóñîâ  è Ñ ñ íîðìàëüíîé èëè áëèçêîé ê íîðìàëüíîé ãèñòîëîãèåé ïå÷åíè ïðè âûñîêîì óðîâíå âèðóñíîé ðåïëèêàöèè òàêæå ñòàâèò ïîä 170 ñîìíåíèå çíà÷èìîñòü ýòèõ âèðóñîâ â ïîâðåæäåíèè ãåïàòîöèòîâ. Îäíàêî åñëè èñõîäèòü èç òîãî, ÷òî ïðåîáëàäàþùèì âèäîì êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðè âèðóñíûõ ïîðàæåíèÿõ ïå÷åíè ÿâëÿåòñÿ èìåííî àïîïòîç, ïðîòåêàþùèé áåç ðàçðóøåíèÿ êëåòî÷íîé ìåìáðàíû è âûñâîáîæäåíèÿ òðàíñàìèíàç (ñì. ãëàâó 4), òî îòñóòñòâèå êîððåëÿöèè ìåæäó áèîõèìè÷åñêèìè ïàðàìåòðàìè ñûâîðîòêè êðîâè è ãèñòîëîãè÷åñêèìè ïîêàçàòåëÿìè ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïðåäñòàâëÿåòñÿ åñòåñòâåííûì è íå îïðîâåðãàåò ïðåäñòàâëåíèé î âìåøàòåëüñòâå âèðóñîâ â ïðîöåññû àïîïòîçà. Èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âèðóñîâ ãåïàòèòîâ  è Ñ, à òàêæå âçàèìîäåéñòâèþ âèðóñ-"õîçÿèí" â ïîñëåäíèå ãîäû ïîñâÿùåíî ìíîãî ðàáîò, íî äî êîíöà ýòè ïðîöåññû åùå íå èçâåñòíû. Ñâÿçàíî ýòî êàê ñ òîíêèìè è çàïóòàííûìè ìîëåêóëÿðíûìè ìåõàíèçìàìè âçàèìîäåéñòâèÿ âèðóñà è èíôèöèðîâàííîé êëåòêè, òàê è ñ îòñóòñòâèåì àäåêâàòíûõ ìîäåëåé äëÿ ëàáîðàòîðíûõ èññëåäîâàíèé. Òåì íå ìåíåå, îñíîâíàÿ òåíäåíöèÿ öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âèðóñîâ ãåïàòèòîâ  è Ñ (HBV è HCV) ïî ìíåíèþ ìíîãèõ èññëåäîâàòåëåé çàêëþ÷àåòñÿ âî âíåäðåíèè âèðóñîâ ñ ïîìîùüþ êîäèðóåìûõ èìè áåëêîâ â êëþ÷åâûå êëåòî÷íûå ïðîöåññû è ìîäóëÿöèÿ, â çàâèñèìîñòè îò ðÿäà ôàêòîðîâ, ïðî- èëè àíòèàïîïòîçíûõ ïðîöåññîâ. Òàê, â ðÿäå ýêñïåðèìåíòîâ áûëî ïîêàçàíî èíãèáèðîâàíèå àïîïòîçà â êëåòêàõ ïå÷åíè âèðóñàìè HCV è HÂV, êîòîðîå îáúÿñíÿëîñü ñïîñîáíîñòüþ êîäèðóåìûõ èìè áåëêîâ ïîäàâëÿòü ôóíêöèè ïðîàïîïòîãåííîãî áåëêà ð53, èíàêòèâèðîâàòü êàñïàçû è âûçûâàòü óñèëåííóþ ýêñïðåññèþ áåëêîâ ñåìåéñòâà bcl-2 - èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà [50, 51]. Ýòè âûâîäû ïîäòâåðäèëèñü ïðè èçó÷åíèè îòäåëüíîãî âëèÿíèÿ íà àïîïòîç îáîëî÷å÷íûõ (envelope) áåëêîâ êàïñèä è âíóòðåííèõ (core) áåëêîâ âèðóñîâ. Òàê, Kountouras ñ ñîàâò. [39] îáíàðóæèëè ïðî- è àíòèàïîïòîçíûå ñâîéñòâà êîð-áåëêà âèðóñà ãåïàòèòà Ñ, ïîêàçàâ, ÷òî ýòîò áåëîê ñïîñîáåí ñâÿçûâàòüñÿ ñ ïåðåäàþùåé ñèãíàë îáëàñòüþ âíóòðèêëåòî÷íîãî äîìåíà "ðåöåïòîðîâ ñìåðòè" è ìîäóëèðîâàòü ïåðåìåùåíèå ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë, èíèöèèðóþùèõ àïîïòîç. Ýòîìó ñïîñîáñòâóåò âîçìîæíîñòü ëîêàëèçàöèè êîð-áåëêà HCV â ìåìáðàíàõ ÝÐ è ìèòîõîíäðèé â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå [52]. Ïî ìíåíèþ Basu ñ ñîàâò. [53], ýòîò áåëîê îêàçûâàåò âëèÿíèå íà êëåòî÷íóþ ðåãóëÿöèþ è, êàê áûëî ïîêàçàíî äëÿ êîð-áåëêà ãåíîòèïà 1à HCV, èíèöèèðóåò "âûæèâàíèå" àïîïòîçíûõ ãåïàòîöèòîâ, ñòèìóëèðóÿ ãåïàòîêàíöåðîãåíåç. Òàêæå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî âíóòðåííèå áåëêè HCV ñïîñîáíû îñëàáëÿòü àïîïòîç, âûçâàííûé öåðàìèäîì [54, 58] èëè ôàêòîðîì ðîñòà TGF-β è ïðîÿâëÿþò îíêîãåííûå ñâîéñòâà [55]. Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êîð-áåëîê HCV èíãèáèðóåò 171 èíäóöèðîâàííîå TNF ðàñùåïëåíèå ïîëè(ÀÄÔ-ðèáîçî)ïîëèìåðàçû (òàê íàçûâàåìîãî "ñóáñòðàòà ñìåðòè"). Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îí èíãèáèðóåò àïîïòîç ïóòåì àêòèâàöèè ÿäåðíîãî ôàêòîðà NFκB, ìîäóëèðóÿ ñèãíàëüíûå ïóòè, ÷òî ñîõðàíÿåò õðîíè÷åñêîå óñòîé÷èâîå ñîñòîÿíèå èíôèöèðîâàííîé êëåòêè [56]. Èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå íà àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé TNF è áóòèðàòîì, áûëî ïîêàçàíî äëÿ "íåñòðóêòóðíîãî áåëêà 5À" HCV, êîòîðûé âîçäåéñòâîâàë íà êàñïàçó-8, íî íå âëèÿë íà NFκB [57]. Ïîêàçàíû òàêæå äðóãèå àíòèàïîïòîçíûå ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ âíóòðåííåãî áåëêà HCV, íàïðèìåð, íà ìèòîõîíäðèàëüíîì óðîâíå, ÷åðåç ñíèæåíèå ýêñïðåññèè Bcl-x, ïðèâîäÿùåå ê èíãèáèðîâàíèþ àêòèâàöèè êàñïàçû-3 [58], èëè ÷åðåç àêòèâàöèþ áåëêà, ñâÿçûâàþùåãî ð53, èíãèáèðóÿ òåì ñàìûì àïîïòîç íà ãåííîì óðîâíå (ñì. ãëàâó 4) [50]. Chou ñ ñîàâò. [59] ïîêàçàëè, ÷òî êîð-áåëîê HCV â êóëüòóðå êëåòîê êàðöèíîìû ÷åëîâåêà Huh7 èíèöèèðóåò TRAIL(íî íå Fas)-çàâèñèìûé àïîïòîç ïî ìåõàíèçìó àêòèâàöèè êàñïàçû-8, ãèäðîëèçà (èëè ðàñùåïëåíèÿ) Bid è íàðóøåíèÿ ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé (ñì. ãëàâó 4).  öåëîì, â îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû ðàáîòàõ ïîä÷åðêèâàåòñÿ ïîëèôóíêöèîíàëüíîñòü êîð-áåëêà HCV. Îí ñïîñîáåí êàê èíãèáèðîâàòü TNF-èíäóöèðîâàííûé àïîïòîç, òàê è ñòèìóëèðîâàòü åãî, ïðèâîäÿ ê ïåðñèñòåíöèè âèðóñà è, âîçìîæíî, ê ãåïàòîêàíöåðîãåíåçó [60]. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ òàêîãî ðåãóëÿòîðíîãî âëèÿíèÿ êîð-áåëêà HCV íà ïðîöåññû àïîïòîçà êëåòîê ïå÷åíè ðàññìàòðèâàåòñÿ åãî âëèÿíèå íà ÿäåðíûé ôàêòîð NFκB, äëÿ êîòîðîãî, â ñâîþ î÷åðåäü, â ðàçíûõ ðàáîòàõ ïîëó÷åíû ïðîòèâîðå÷èâûå äàííûå [41, 62 - 64]. Òàê, Chiao ñ ñîàâò. ïðåäïîëàãàþò âîçìîæíîñòü êàê àêòèâàöèè, òàê è èíãèáèðîâàíèÿ àïîïòîçà ýòèì ÿäåðíûì ôàêòîðîì, ÷òî òðåáóåò äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèé [64]. Êàê ñ÷èòàþò Bantel ñ ñîàâò. [61], ìåõàíèçìû, ëåæàùèå â îñíîâå ïðîòèâîïîëîæíî íàïðàâëåííûõ âëèÿíèé âèðóñíûõ áåëêîâ åùå íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíû, è â öåëîì ìîãóò áûòü îáîçíà÷åíû êàê "äèñðåãóëÿöèÿ". Îáîëî÷å÷íûé áåëîê HCV òàêæå âêëþ÷àåòñÿ â ïðîöåññû àïîïòîçà, íî åãî âëèÿíèå áîëåå îäíîçíà÷íî è ñâÿçàíî ñ èíäóêöèåé ãèáåëè êëåòêè [65], òàê æå êàê è äëÿ îáîëî÷å÷íîãî áåëêà âèðóñà ÂÈ× 1. Ïîëàãàþò, ÷òî ýòè ýôôåêòû ñâÿçàíû ñ ôîñôîðèëèðîâàíèåì áåëêà ð53 [66]. Àíòèàïîïòîçíûìè ýôôåêòàìè îáëàäàåò è âèðóñ ãåïàòèòà À ïðè âîçäåéñòâèè íà ïóòè, ñâÿçàííûå ñ PK R è dsÐÍÊ (äâóõöåïî÷å÷íîé ÐÍÊ) [41]. Èíòåðåñíî, ÷òî íà ïîçäíåé ñòàäèè èíôåêöèè â êëåòêå íàêàïëèâàåòñÿ ñîáñòâåííàÿ âèðóñíàÿ dsÐÍÊ, êîòîðàÿ ìîæåò àêòèâèðîâàòü PK R, òåì ñàìûì êàê áû íèâåëèðóÿ äåéñòâèå âèðóñà. 172 Ïðîòèâîäåéñòâóÿ ýòîìó, âèðóñ îñëàáëÿåò ðåïëèêàöèþ, à òåì ñàìûì è ãåíåðàöèþ ñîáñòâåííîé dsÐÍÊ. Ðåïëèêàöèÿ ïðèîáðåòàåò óìåðåííûé õàðàêòåð, èíãèáèðóÿ àíòèâèðóñíûå ìåõàíèçìû è ïîääåðæèâàÿ ïåðñèñòåíòíîå ñîñòîÿíèå èíôåêöèè âèðóñíîãî ãåïàòèòà À [67]. Äëÿ Õ-áåëêà HÂV ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü èíäóöèðîâàòü àïîïòîç â êóëüòóðå êëåòîê ãåïàòîöèòîâ ïóòåì àêòèâàöèè áåëêîâ êëåòî÷íîãî ñòðåññà JNK (c-Jun N-terminal kinase) è p38 MAPK [68], à òàêæå êàëüöèé-çàâèñèìûõ ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ [69]. Îáíàðóæåíî âëèÿíèå ãåíîòèïà HÂV è ìóòàöèé Õ-áåëêà íà ýòè ïðîöåññû [70]. Ïîìèìî ïðÿìîé èëè êîñâåííîé èíäóêöèè àïîïòîçà âèðóñàìè, íåïîñðåäñòâåííî äåéñòâóþùèìè íà êëåòêè ïå÷åíè, äðóãèì, íå ìåíåå ñóùåñòâåííûì ìåõàíèçìîì ãèáåëè èíôèöèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé êëåòî÷íûì èììóííûì îòâåòîì, â îñîáåííîñòè, îïîñðåäîâàííûé öèòîòîêñè÷åñêèìè Ò-ëèìôîöèòàìè è NK-êëåòêàìè [71-77]. Èììóííîå ïîâðåæäåíèå ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ïðè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ áîëåçíÿõ ïå÷åíè îáóñëîâëåíî, âî-ïåðâûõ, ïðèñóòñòâèåì â íèõ àíòèãåíîâ âèðóñîâ, âî-âòîðûõ - òðàíñôîðìàöèåé êëåòîê ïîä äåéñòâèåì ïå÷åíî÷íûõ àóòîàíòèãåíîâ, ê ÷èñëó êîòîðûõ îòíîñÿòñÿ ÿäåðíûé "å"-àíòèãåí (HBeAg) è ïîâåðõíîñòíûé àíòèãåí (HBsAg) âèðóñà ãåïàòèòà Â. Ðåàëèçàöèÿ èììóííîãî öèòîëèçà ãåïàòîöèòîâ ïðîèñõîäèò â âèäå ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà. Ëèìôîòîêñè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü Ò-êèëëåðîâ íàïðàâëåíà ïðîòèâ HBeAg, à ãåïàòîöèòû, ïîçèòèâíûå ê HBsAg îáû÷íî îêðóæåíû CD8+-ëèìôîöèòàìè, îáåñïå÷èâàþùèìè ôîêàëüíûé íåêðîç èíôèöèðîâàííûõ êëåòîê. Ñ÷èòàþò, ÷òî öèòîòîêñè÷åñêèå Ò-ëèìôîöèòû (ÖÒË), ñ îäíîé ñòîðîíû èíäóöèðóþò àïîïòîç èíôèöèðîâàííûõ êëåòîê, à ñ äðóãîé - âîçäåéñòâóþò íà ïðîöåññû òðàíñêðèïöèè è ðåïëèêàöèè âèðóñà â êëåòêå, ñòèìóëèðóÿ ñåêðåöèþ ðÿäà öèòîêèíîâ, íàïðèìåð, èíòåðôåðîíà-γ (ÈÔÍ-γ), TNF-α è äð. [78 72], ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê êîòîðûì â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå ïîâûøåíà [79-81].  ÷àñòíîñòè, ñâÿçûâàíèå ÈÔÍ ñî ñïåöèôè÷åñêèìè ðåöåïòîðàìè êëåòêè ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ôåðìåíòîâ, íàïðèìåð, 2',5'-îëèãîàäåíèëàòñèíòàçû, è ýôôåêòîðíûõ áåëêîâ, êîòîðûå, â ñâîþ î÷åðåäü, àêòèâèðóþò âíóòðèêëåòî÷íûå ðèáîíóêëåàçû, ðàçðóøàþùèå âèðóñíóþ ÐÍÊ. ÈÔÍ èíãèáèðóþò òàêæå ïðîöåññû "ðàçäåâàíèÿ", òðàíñëÿöèè è ñáîðêè âèðóñîâ â ïðîöåññå ðåïëèêàöèè. Îäèí èç íàèáîëåå èçâåñòíûõ ÈÔÍ-èíäóöèðóåìûõ áåëêîâ, PK R, ñòèìóëèðóåò àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ìíîãèìè ðàçëè÷íûìè ýôôåêòîðàìè, âêëþ÷àÿ TNF-α è âèðóñû. Èçó÷åíèå ìåõàíèçìîâ èíäóêöèè àïîïòîçà èíòåðôåðîíîâîé PK R íåîáõîäèìî 173 äëÿ ðàöèîíàëüíîé îïòèìèçàöèè ñõåì êëèíè÷åñêîé èíòåðôåðîíîòåðàïèè [41]. Ñ÷èòàþò, ÷òî ÖÒË èíèöèèðóþò àïîïòîç â èíôèöèðîâàííûõ êëåòêàõ ïå÷åíè äâóìÿ ïóòÿìè. Ïåðâûé ðåàëèçóåòñÿ çà ñ÷åò âûáðîñà èç Ò-êëåòîê ïåðôîðèíà, êîòîðûé îáðàçóåò ïîðû â ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ ãåïàòîöèòîâ. ×åðåç íèõ â êëåòêè ïðîíèêàþò ãðàíçèìû ïðîòåàçû Ò-ëèìôîöèòàðíûõ ãðàíóë, âûçûâàþùèå ðàñùåïëåíèå ðÿäà âíóòðèêëåòî÷íûõ ôåðìåíòîâ, â òîì ÷èñëå êàñïàç, çàïóñêàþùèõ àïîïòîçíûé êàñêàä (ñì. ãëàâó 4). Âòîðîé ïóòü ñâÿçàí ñ ïîâûøåíèåì ýêñïðåññèè Fas- ðåöåïòîðîâ íà ïîâåðõíîñòè èíôèöèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ ïîä âîçäåéñòâèåì àêòèâèðîâàííûõ Ò-ëèìôîöèòîâ. Êàê óæå óïîìèíàëîñü, Fas-R óñèëåííî ýêñïðåññèðóåòñÿ íà ìåìáðàíå èíôèöèðîâàííûõ âèðóñàìè ãåïàòîöèòîâ, íî îñîáåííî ÷àñòî èõ îáíàðóæèâàþò íà ãåïàòîöèòàõ, îêðóæåííûõ ëèìôîöèòàìè íà ãðàíèöå ñòóïåí÷àòîãî íåêðîçà è ïàðåíõèìû [37].  ñâîþ î÷åðåäü, íà ñîîòâåòñòâóþùèõ ëèìôîöèòàõ âûÿâëÿåòñÿ ïîâûøåííàÿ ýêñïðåññèÿ Fas-L, ÷òî ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ çàïóñêà àïîïòîçíîãî êàñêàäà. Èçâåñòíî, ÷òî Fas-R (APO-1/CD95) ýêñïðåññèðóåòñÿ â ïå÷åíè íà ãåïàòîöèòàõ, õîëàíãèîöèòàõ, àêòèâèðîâàííûõ çâåçä÷àòûõ ðåòèêóëîýíäîòåëèîöèòàõ è êóïôåðîâñêèõ êëåòêàõ è ñóùåñòâóåò â ìåìáðàíîñâÿçàííîé è ðàñòâîðèìîé ôîðìàõ. Ðàñòâîðèìàÿ ôîðìà Fas-R, âåðîÿòíî, ñëóæèò äëÿ ñâÿçûâàíèÿ Fas-L íå òîëüêî íà ÑD8+öèòîòîêñè÷åñêèõ ëèìôîöèòàõ è NK-êëåòêàõ, íî è ÑD4+-Òëèìôîöèòàõ-õåëïåðàõ 1-ãî òèïà, êîòîðûå, êàê áûëî íåäàâíî óñòàíîâëåíî, òàêæå ìîãóò ïðîÿâëÿòü öèòîòîêñè÷åñêèå ñâîéñòâà [82]. Ýêñïðåññèÿ Fas-R íà ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ èíäóöèðóåòñÿ ðÿäîì ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ, òàêèõ êàê èíòåðëåéêèíû (IL-1, -2, -6), èíòåðôåðîíû (ÈÔÍ-γ), ôàêòîðû íåêðîçà îïóõîëè (TNF-α) è äð., ñåêðåöèÿ êîòîðûõ ñòèìóëèðóåòñÿ öèòîòîêñè÷åñêèìè ëèìôîöèòàìè. Òàêèì îáðàçîì, âåðîÿòíî, ÷òî âîñïàëåíèå ëþáîé ïðèðîäû ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü Fas-R-çàâèñèìîìó ïîâðåæäåíèþ ïå÷åíè. Áîëåå òîãî, öèòîêèíû ñòèìóëèðóþò óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ìîëåêóë Fas-L íà Ò- è NK-ëèìôîöèòàõ. Îñíîâíûì ìåõàíèçìîì èíèöèàöèè êàê ôèçèîëîãè÷åñêîãî, òàê è ïàòîëîãè÷åñêîãî àïîïòîçà êëåòîê ïå÷åíè ñ÷èòàþò ïîñëåäîâàòåëüíûé ïðîöåññ ñâÿçûâàíèÿ FasR, îëèãîìåðèçàöèþ êîìïëåêñà è àêòèâàöèþ àäàïòîðíîãî áåëêà FADD, ÷òî âûçûâàåò àêòèâàöèþ êàñïàçû-8. Íà ýòîì ýòàïå äàëüíåéøåå ðàçâèòèå àïîïòîçà ìîæåò áûòü çàáëîêèðîâàíî àêòèâàöèåé ðÿäà ôàêòîðîâ, òàêèõ êàê I-FLICE (ýíäîãåííàÿ äîìèíàíòíî-íåãàòèâíàÿ ôîðìà êàñïàçû-8), bcl-2 è äð.[24, 40, 83] (ñì. ãëàâó 4). 174 Èíòåðåñíûå äàííûå áûëè ïîëó÷åíû â ðàáîòå, â êîòîðîé êóëüòóðó êðûñèíûõ ãåïàòîöèòîâ ïîäâåðãàëè âîçäåéñòâèþ àêòèâèðîâàííûõ èíòåðëåéêèíîì-2 NK-êëåòîê è ýêñïåðèìåíòàëüíûõ èíãèáèòîðîâ êàñïàç. Ïîäàâëåíèå àêòèâíîñòè êàñïàç ïðåäîòâðàùàëî àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, íî ïðè ýòîì óñèëèâàëàñü èõ ãèáåëü ïîñðåäñòâîì íåêðîçà, ÷òî óêàçûâàåò íà îïðåäåëåííûé áàëàíñ ìåæäó ýòèìè ïóòÿìè ýëèìèíàöèè êëåòîê, îñóùåñòâëÿåìûìè èììóííîé ñèñòåìîé [24, 84]. Åùå îäíèì èíäóêòîðîì àïîïòîçà è îáùèì ìåäèàòîðîì öèòîòîêñè÷íîñòè Ò-ëèìôîöèòîâ è ýíäîòîêñèíîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè ÿâëÿåòñÿ TNF-γ. Ïîêàçàíà èíòåíñèâíàÿ ýêñïðåññèÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî äîìåíà åãî ðåöåïòîðà, TNF-R1, â ãåïàòîöèòàõ è êóïôåðîâñêèõ êëåòêàõ, ïðè ãåïàòèòå ëþáîé ýòèîëîãèè (âèðóñíûé, àëêîãîëüíûé, àóòîèììóííûé è äð.) [85]. Àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ñâÿçûâàíèåì TNF-γ ñ TNF-R1, ïîäîáíî âçàèìîäåéñòâèþ Fas-R - Fas-L, òðåáóåò îëèãîìåðèçàöèè ðåöåïòîðà è ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ÷åðåç ïóòü FADD - êàñïàçà-8, à òàêæå ñõîäíûé ñ íèì áåëîê TRADD (ñì ãëàâó 4). Èíòåðåñíî, ÷òî ãèïåðýêñïðåññèÿ TRADD âåäåò íå òîëüêî ê çàïóñêó ïðîöåññîâ àïîïòîçà, íî è ê àêòèâàöèè ÿäåðíîãî ôàêòîðà NFêÂ, êîòîðûé ïðåäîòâðàùàåò TNF-èíäóöèðîâàííóþ ãèáåëü êëåòêè [62, 86]. Îòìå÷àþò, ÷òî äàæå â çäîðîâîé ïå÷åíè NK- è CD8+-T-ëèìôoöèòû ïå÷åíî÷íûõ ñèíóñîèäîâ ñîäåðæàò áîëüøå ìÐÍÊ IL-15, -18, TNF-α, ÈÔÍ-γ ïî ñðàâíåíèþ ñ ïåðèôåðè÷åñêèìè êëåòêàìè, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîâûøåííîé ãîòîâíîñòè ê îñóùåñòâëåíèþ àïîïòîçà ãåïàòîöèòîâ â ñëó÷àå âîçíèêíîâåíèÿ èõ èçìåíåíèé, íàïðèìåð, ïðè èíôèöèðîâàíèè âèðóñîì [8]. 5.3. Õåìîêèíû, ìîëåêóëû àäãåçèè è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ ïðè âîñïàëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè. Cóùåñòâåííàÿ ðîëü â ïîâðåæäåíèè ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ïðèíàäëåæèò âîñïàëèòåëüíûì ïðîöåññàì, ñîïðîâîæäàþùèì ìíîãèå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè, òàêèå, êàê àëêîãîëüíûé è òîêñè÷åñêèé ãåïàòèòû, èøåìè÷åñêîå/ðåïåðôóçèîííîå ïîâðåæäåíèÿ, ñåïñèñ è äð. Ïðè ýòîì ìàêðîôàãè è íåéòðîôèëû òðàíñïîðòèðóþòñÿ â ñèñòåìó êðîâåíîñíûõ ñîñóäîâ ïå÷åíè, ÷òî ñîïðÿæåíî ñ ðàçâèòèåì ëîêàëüíûõ ïîâðåæäåíèé òêàíè èç-çà ïîñòîÿííîãî âîçäåéñòâèÿ ìåäèàòîðîâ âîñïàëåíèÿ (òàêèõ, êàê TNF-α, èíòåðëåéêèíû, ôàêòîðû êîìïëåìåíòà, PAF è äð.), âëèÿþùèõ íà ðåãóëÿöèþ β2-èíòåãðèíîâ íåéòðîôèëîâ [88] è ãåíåðàöèþ ãåïàòîöèòàìè ðàçëè÷íûõ õåìîêèíîâ (ÑÕÑ, ÑÑ, Ñ è äð.) [89]. Õåìîêèíû - íèçêîìîëåêóëÿðíûå áåëêè, ðåãóëÿòîðû âîñïàëåíèÿ, õåìîòàêñèñà ëåéêîöèòîâ è äèôôåðåíöèðîâêè èììóííûõ êëåòîê [90]. Õåìîêèíû è èõ 175 ðåöåïòîðû ÿâëÿþòñÿ âàæíûìè ðåãóëÿòîðàìè èììóíèòåòà, îñîáåííî ïðè ìèãðàöèè è ëîêàëèçàöèè öèðêóëèðóþùèõ ëåéêîöèòîâ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðàêòè÷åñêè ïðè ëþáûõ ïàòîëîãèÿõ ïå÷åíè íàáëþäàåòñÿ ãèïåðýêñïåññèÿ ðàçëè÷íûõ âèäîâ ýòèõ áåëêîâ â çàâèñèìîñòè îò îïðåäåëåííîãî ïîäêëàññà ëåéêîöèòîâ. Âûñîêèé óðîâåíü õåìîêèíîâ îïðåäåëåí â òêàíÿõ è ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ àëêîãîëüíûì ãåïàòèòîì, àëêîãîëüíûì öèððîçîì è âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè [91]. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àëêîãîëüíîãî ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè äîìèíèðóþò ÑÕÑ èëè α-õåìîêèíû â ñî÷åòàíèè ñ íåéòðîôèëàìè, íà áîëåå ïîçäíåé ñòàäèè âîçðàñòàåò óðîâåíü ÑÑ èëè β-õåìîêèíîâ [92, 93]. Òàê, Biosvert ñ ñîàâò. [94] ïîêàçàëè, ÷òî íà êîíå÷íîé ñòàäèè HCV-èíôåêöèè â ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè ïðèñóòñòâîâàëè èíôèëüòðèðîâàííûå ëèìôîöèòû, íà êîòîðûõ áûëè îáíàðóæåíû â îñíîâíîì ðåöåïòîðû õåìîêèíîâ CCR5, CXCR3 è CXCR6. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòè âîñïàëèòåëüíûå õåìîêèíû êîíòðîëèðóþò èíôèëüòðàöèþ Ò-êëåòîê, Â-êëåòîê è NK-êëåòîê â ïîðàæåííóþ ïå÷åíü [94]. Èçâåñòíî, ÷òî íåéòðîôèëû â ïå÷åíè àêêóìóëèðóþòñÿ â ñèíóñîèäàõ, àäãåçèðóÿ ê ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì ñîñóäîâ; ïîêàçàíà âûñîêàÿ öèòîòîêñè÷íîñòü òàêèõ íåéòðîôèëîâ, ñâÿçàííàÿ ñ èõ ñïîñîáíîñòüþ â îòâåò íà õåìîòàêòè÷åñêèé ñèãíàë ìèãðèðîâàòü â ìåæñèíóñîèäàëüíóþ (subsinusoidal) îáëàñòü, âûçûâàÿ ïîâðåæäåíèå òêàíè. Öèòîòîêñè÷íîñòü íåéòðîôèëîâ ïî îòíîøåíèþ ê ãåïàòîöèòàì îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ó÷àñòèåì ñïåöèôè÷åñêèõ ìîëåêóë àäãåçèè (ICAM, VCAM, E-ñåëåêòèíà è äð.) [95], êîòîðûå âëèÿþò íà îòäåëüíûå ýòàïû àäãåçèè è òðàíñìèãðàöèè íåéòðîôèëîâ. [96]. Ïðè ýòîì ðàçëè÷íûì òèïàì ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ñâîéñòâåííà ðàçíàÿ ýêñïðåññèÿ êëåòî÷íî-àäãåçèâíûõ ìîëåêóë (ÑÀÌ's) è ðàçíûé õàðàêòåð èíäóêöèè öèòîêèíîâ [95]. Òàê, äëÿ ñèíóñîèäàëüíûõ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê àêòèâàöèÿ íåéòðîôèëîâ ïðè òðàíñìèãðàöèè ñîïðÿæåíà ñ ýêñïðåññèåé Å-ñåëåêòèíà.  êëåòêàõ ïîñòñèíóñîèäàëüíûõ âåíóë äâèæåíèå è àäãåçèÿ íåéòðîôèëîâ çàâèñÿò îò Ð- èëè L-ñåëåêòèíà è ICAM-1. Äëÿ ëåéêîöèòîâ âàæíóþ ðîëü â ïîâðåæäåíèÿõ, èíäóöèðîâàííûõ íåéòðîôèëàìè, èãðàþò ñîåäèíåíèÿ ñåìåéñòâà β2(ÑD18)-èíòåãðèíîâ, à äëÿ ãåïàòîöèòîâ òðàíñìèãðàöèÿ è àäãåçèÿ íåéòðîôèëîâ ïðîèñõîäèò ñ ó÷àñòèåì öèòîêèíîâ LFA-1 (CD11a/CD18) è Mac-1 (CD11b/CD18). Íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýòèõ öèòîêèíîâ, â ÷àñòíîñòè, óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ Mac-1, ñïîñîáñòâóåò ïîâûøåíèþ àäãåçèè íåéòðîôèëîâ ê êëåòêàììèøåíÿì ÷åðåç ýòîò òðèããåð, à, ñëåäîâàòåëüíî, è ïîâûøåíèþ èõ öèòîòîêñè÷íîñòè [95]. Ìåõàíèçìû ãåïàòîòîêñè÷íîñòè íåéòðîôèëîâ äî êîíöà íå 176 âûÿñíåíû. Ïîëàãàþò, ÷òî îíè ìîãóò áûòü ñâÿçàíû ñ äåéñòâèåì ïðîòåàç (íàïðèìåð, ñåðèíîâîé ïðîòåàçû 4) [97] èëè îáðàçîâàíèåì ÀÔÊ. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî ãåíåðèðóåìûå íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ, ìîãóò âûçûâàòü îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ â ãåïàòîöèòàõ, "çàïóñêàÿ" íåêðîç êëåòîê ìåíåå, ÷åì çà 1 ÷àñ [98]. Ìåõàíèçì ïîâðåæäåíèé ìîæåò âêëþ÷àòü óâåëè÷åíèå ìåìáðàííîé ïðîíèöàåìîñòè, îòêðûòèå òðàíçèòíûõ ïîð è ðàçðûâ ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû (ñì. ãëàâó 4) [99]. Êðîìå òîãî, ïðîäóöèðîâàííûå íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ ñïîñîáñòâóþò ðàçâèòèþ âîñïàëåíèÿ â ïå÷åíè ÷åðåç àêòèâàöèþ òðàíñêðèïöèîííîãî ÿäåðíîãî ôàêòîðà NFκB, êîíòðîëèðóþùåãî îáðàçîâàíèå öèòîêèíîâ, õåìîêèíîâ è ìîëåêóë àäãåçèè [88, 95]. Öèòîòîêñè÷åñêàÿ ðîëü íåéòðîôèëîâ îò÷åòëèâî âûðàæåíà ïðè àëêîãîëüíûõ ãåïàòèòàõ, êîãäà àïîïòîçíûå ãåïàòîöèòû îêàçûâàþòñÿ ñîëîêàëèçîâàííûìè ñ íåéòðîôèëàìè, ÷òî êîððåëèðóåò ñî ñòåïåíüþ âûðàæåííîñòè òêàíåâîãî ïîðàæåíèÿ [100].  ñâÿçè ñ ýòèì èññëåäîâàòåëè ïîëàãàþò, ÷òî, ýêñòðàâàçàöèÿ íåéòðîôèëîâ è àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿþòñÿ êëþ÷åâûìè ïðîöåññàìè â àëêîãîëüíîì ïîðàæåíèè ïå÷åíè. Êóïôåðîâñêèå êëåòêè èãðàþò âàæíóþ ðîëü â ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè. Îíè âìåñòå ñ íåéòðîôèëàìè àêòèâèðóþòñÿ ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ îðãàíèçìà. Õîðîøåé ìîäåëüþ äëÿ èçó÷åíèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ ýòèõ òèïîâ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ ñåïòè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå, ïðè êîòîðîì îòìå÷àþò ñëåäóþùóþ ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ñîáûòèé: (1) ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè ïîñòóïèâøåãî ÷åðåç âîðîòíóþ âåíó ýíäîòîêñèíà; (2) àêòèâàöèÿ êóïôåðîâñêèõ êëåòîê è âûñâîáîæäåíèå èç íèõ ïðîâîñïàëèòåëüíûõ ìåäèàòîðîâ, òàêèõ êàê õåìîêèíû, öèòîêèíû, âêëþ÷àÿ èíòåðëåéêèíû, ëåéêîòðèåí Â4 è äð.; (3) âûõîä íåéòðîôèëîâ èç êðîâÿíîãî ðóñëà; (4) ïðèñîåäèíåíèå àêòèâèðîâàííûõ íåéòðîôèëîâ ê ñèíóñîèäàëüíûì ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì; ïðè ýòîì ìîëåêóëû àäãåçèè ICAM-1 è ÅÑÀÌ-1 ñïîñîáñòâóþò ìèãðàöèè ëåéêîöèòîâ â ïàðåíõèìó ïå÷åíè; (5) ãåíåðàöèÿ àêòèâèðîâàííûìè íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ, âûçûâàþùèõ ïîâðåæäåíèÿ ðàçíîãî òèïà, â òîì ÷èñëå àêòèâàöèþ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ â ìåìáðàíàõ; (6) ïðîäóöèðîâàíèå ìàêðîôàãàìè ïå÷åíè ðàçëè÷íûõ òîêñè÷åñêèõ ìåäèàòîðîâ, âûçûâàþùèõ àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê ìèêðîòðîìáîçàì; (7) ïîÿâëåíèå â óçêèõ ñèíóñîèäàõ òðîìáîâ (àãðåãàòîâ èç íåéòðîôèëîâ è òðîìáîöèòîâ) è ðàçâèòèå ëîêàëüíîé ãèïîêñèè; (8) ïîÿâëåíèå ëîáóëÿðíûõ íåêðîòè÷åñêèõ ïîðàæåíèé [101].  öåëîì, öèòîòîêñè÷íîñòü ðÿäà ãóìîðàëüíûõ ôàêòîðîâ ñâÿçàíà ñ îñîáåííîñòÿìè ñèíóñîèäàëüíûõ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, êîòîðûå, â îòëè÷èå îò êëåòîê äðóãèõ âèäîâ ýíäîòåëèÿ, ôåíåñòðèðîâàíû è íå èìåþò áàçàëüíîé ìåìáðàíû. 177 Ïðè íåêîòîðûõ ïîðàæåíèÿõ ïå÷åíè (âåíîçíî-îêêëþçèîííûå çàáîëåâàíèÿ, ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ) ïîâðåæäåíèå ñèíóñîèäàëüíûõ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ íà÷àëüíûì ýòàïîì èììóííîé ðåàêöèè, îïîñðåäîâàííîé Ò-ëèìôîöèòàìè. Ñóæåíèå ìàëûõ âíóòðèïå÷åíî÷íûõ âåí ñ ðàçâèòèåì ìèêðîòðîìáîçîâ âåäåò ê íàðóøåíèþ îòòîêà êðîâè è ðàçâèòèþ èøåìèè ïå÷åíè ñ âòîðè÷íûì ïîâðåæäåíèåì ãåïàòîöèòîâ. Òàêèì îáðàçîì, âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû, ñîïðîâîæäàþùèå ìíîãèå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè, ÷åðåç àêòèâàöèþ ëèìôîöèòîâ, íåéòðîôèëîâ, åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ è ñòèìóëÿöèþ ñèíòåçà ñîîòâåòñòâóþùèõ ìåäèàòîðîâ (öèòîêèíîâ, õåìîêèíîâ) óñóãóáëÿþò ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè, âûçâàííûå ïåðâîíà÷àëüíî âèðóñàìè, ýíäî- èëè ýêçîòîêñèíàìè. Ýòè ïîâðåæäåíèÿ ìîãóò ïðèâîäèòü ê íåêðîçó êëåòîê ïå÷åíè, îñîáåííî åñëè â íèõ âîâëå÷åíû àêòèâèðîâàííûå íåéòðîôèëû, âëèÿíèþ êîòîðûõ íà ãåïàòîöèòû ñïîñîáñòâóþò ìîëåêóëû àäãåçèè. Ïîýòîìó òåðàïèÿ, íàïðàâëåííàÿ íà êîððåêöèþ èììóííîé ñèñòåìû, ìîæåò îêàçàòü âûðàæåííîå äåéñòâèå ïðè çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè, ñíèæàÿ êëåòî÷íûå ïîâðåæäåíèÿ è ïðåäîòâðàùàÿ íåêðîç ãåïàòîöèòîâ. 5.4. Ãåïàòîòîêñè÷íîñòü, âûçûâàåìàÿ äèñôóíêöèåé ìèòîõîíäðèé. Ñðåäè ðàçëè÷íûõ ôîðì ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè îïðåäåëåííîå ìåñòî çàíèìàþò ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç (æèðîâàÿ äèñôóíêöèÿ), íåàëêîãîëüíûé ñòåàòîãåïàòèò è öèòîëèòè÷åñêèé ãåïàòèò [102, 103]. Ýòè ïîâðåæäåíèÿ ñâÿçàíû ñ ïåðâè÷íûìè è âòîðè÷íûìè äèñôóíêöèÿìè ìèòîõîíäðèé. Íàðóøåíèå ìèòîõîíäðèàëüíîãî βîêèñëåíèÿ ÆÊ â ãåïàòîöèòàõ âûçûâàåò ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç, õàðàêòåðèçóþùèéñÿ íàêîïëåíèåì â öèòîïëàçìå ìåëü÷àéøèõ ëèïèäíûõ âåçèêóë òðèãëèöåðèäîâ. Ïîñëåäíèå îáðàçóþòñÿ âñëåäñòâèå íàêîïëåíèÿ (èç-çà äåôèöèòà îêèñëåíèÿ) ñâîáîäíûõ ÆÊ, êîòîðûå, ñ îäíîé ñòîðîíû, ýòåðèôèöèðóþòñÿ â òðèãëèöåðèäû, à ñ äðóãîé, - îáëàäàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, ñïîñîáñòâóþò ýìóëüãèðîâàíèþ îáðàçóþùèõñÿ íåïîëÿðíûõ òðèãëèöåðèäîâ, "îêðóæàÿ" èõ è ñîáèðàÿ â ìåëêèå ëèïèäíûå âåçèêóëû. Ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç ÿâëÿåòñÿ ãèñòîëîãè÷åñêèì ìàðêåðîì âûðàæåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé, ñâÿçàííûõ ñ îñëàáëåíèåì ñèíòåçà ÀÒÔ ìèòîõîíäðèÿìè. Èòîãîì äåôèöèòà ýíåðãåòè÷åñêèõ ñóáñòðàòîâ ìîæåò áûòü ïî÷å÷íîå âîñïàëåíèå, ïàíêðåàòèò, êîìà è ñìåðòü. Ýòîìó ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü è ñîïóòñòâóþùåå ðàçâèòèå íåàëêîãîëüíîãî ñòåàòîãåïàòèòà, ñîïðîâîæäàþùåãîñÿ, ïîìèìî íàçâàííûõ íàðóøåíèé, àêòèâàöèåé ÏÎË [104]. Ðåçêîå ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè âíóòðåííåé ìåìáðàíû 178 ìèòîõîíäðèé äëÿ ýëåêòðîëèòîâ è íèçêîìîëåêóëÿðíûõ ìîëåêóë îáû÷íî ñî÷åòàåòñÿ ñ êëåòî÷íûì íåêðîçîì, íåçàâèñèìî îò âíóòðåííåé êîíöåíòðàöèè ÀÒÔ. Íåñïåöèôè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû ÷àùå âñåãî âûçûâàåòñÿ àêòèâàöèåé ÏÎË èëè äåéñòâèåì ôîñôîëèïàç (ñì. ãëàâó 4). Ìèòîõîíäðèàëüíûå öèòîïàòèè ÷àñòî ñâÿçàíû ñ ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ ðÿäà ëåêàðñòâ, òàêèõ, êàê àíòèáèîòèêè òåòðàöèêëèíîâîãî ðÿäà (äîêñèöèêëèí, õëîðòåòðàöèêëèí, ìåòàöèêëèí), àíàëîãè íóêëåîçèäîâ, ïðèìåíÿåìûå äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ èíôåêöèé (äèäàíîçèí, çàëüöèòàáèí, çèäîâóäèí, âàëüïðîàò íàòðèÿ). Ìåõàíèçì äàííîãî òèïà ëåêàðñòâåííîãî ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè îáóñëîâëåí, â îñíîâíîì, òîêñè÷åñêèì äåéñòâèåì ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íà ìèòîõîíäðèè, à òî÷íåå áëîêàäîé ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè. Íåïîñðåäñòâåííûé ìåõàíèçì ïîäàâëåíèÿ ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè ó ïåðå÷èñëåííûõ âûøå ïðåïàðàòîâ ðàçëè÷åí: îò ïðÿìîãî ïîäàâëåíèÿ (2-ïðîïèëïåíòàíîåâîé êèñëîòîé, ìåòàáîëèòîì âàëüïðîàòà íàòðèÿ) äî îïîñðåäîâàííîãî (ïðîòèâîâèðóñíûå àíàëîãè íóêëåîçèäîâ). 5.5. Òîêñè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè. Îñíîâíûå ôîðìû òîêñè÷åñêîãî ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè ìîãóò áûòü îñòðûìè è õðîíè÷åñêèìè. Îíè ïðîÿâëÿþòñÿ öèòîòîêñè÷åñêèì è õîëåñòàòè÷åñêèì ýôôåêòàìè. Êëèíèêîìîðôîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ òîêñè÷åñêèõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè âåñüìà ìíîãîîáðàçíû è ïîäðîáíî îïèñàíû â ëèòåðàòóðå [2, 10 - 12, 101, 105 è äð.]. Öèòîëèòè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ, êàê ïðàâèëî, ñîïðîâîæäàþòñÿ ñòåàòîçîì è íåêðîçîì ãåïàòîöèòîâ, à õîëåñòàòè÷åñêèå - ãåïàòîêàíàëèêóëÿðíîé èëè êàíàëèêóëÿðíîé æåëòóõîé. Õðîíè÷åñêèå ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ïðîÿâëÿþòñÿ õðîíè÷åñêèì àêòèâíûì ãåïàòèòîì, ñòåàòîçîì, ôîñôîëèïèäîçîì, öèððîçîì, âåíî-àêêëþçèîííûì ñîñòîÿíèåì, îïóõîëÿìè è ò.ä. Òîêñè÷åñêèå, â òîì ÷èñëå ëåêàðñòâåííûå, ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè ñîñòàâëÿþò îêîëî 5% âñåõ åå âîñïàëèòåëüíûõ ïîðàæåíèé, íî çàíèìàþò ëèäèðóþùèå ïîçèöèè ñðåäè ïðè÷èí îñòðîé íåäîñòàòî÷íîñòè ïå÷åíè. Ñåãîäíÿ äîêàçàíà ñïîñîáíîñòü ïîâðåæäàòü ïå÷åíü ó áîëåå ÷åì òðåõñîò ìåäèêàìåíòîâ è íåñêîëüêèõ ìèëëèîíîâ õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé. Âñå êñåíîáèîòèêè, âûçûâàþùèå ïîðàæåíèå ïå÷åíè, óñëîâíî ïîäðàçäåëÿþò íà îáëèãàòíûå è ôàêóëüòàòèâíûå. Ïåðâûå ñïîñîáíû ïîâðåæäàòü ïàðåíõèìó ïå÷åíè â ñòàíäàðòíûõ äîçàõ; óâåëè÷åíèå äîçû ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîâûøåíèåì òîêñè÷íîñòè. Ê òàêèì ñîåäèíåíèÿì îòíîñÿòñÿ ÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä, ïðåïàðàòû ôîñôîðà, õëîðîôîðì, ìóñêàðèí è äð. Ê îáëèãàòíûì ãåïàòîòîêñèíàì îòíîñÿòñÿ òàêæå ñîåäèíåíèÿ, íå 179 îáëàäàþùèå ïðÿìûì òîêñè÷åñêèì äåéñòâèåì íà ïå÷åíü, íî ñïîñîáíûå: (1) âûçûâàòü ãåïàòîìåãàëèþ çà ñ÷åò èíäóêöèè ïå÷åíî÷íûõ ôåðìåíòîâ (ôåíîáàðáèòàë); (2) âûçûâàòü ñòåàòîç èëè æèðîâóþ èíôèëüòðàöèþ ïå÷åíè (êîðòèçîí); (3) òðàíñôîðìèðîâàòüñÿ â ïðîöåññå ìåòàáîëèçìà â ïðîìåæóòî÷íûå ñîåäèíåíèÿ, îáëàäàþùèå âûñîêîé òîêñè÷íîñòüþ (íàïðèìåð, ñàëèöèëàòû, ïîëèöèêëè÷åñêèå óãëåâîäîðîäû è äð. [106]). Äåéñòâèå íà ïå÷åíü ôàêóëüòàòèâíûõ ñîåäèíåíèé íåçàâèñèìî îò äîçû âûçûâàåò èììóíîîïîñðåäîâàííûå ðåàêöèè, êîòîðûå ëåæàò â îñíîâå èäèîñèíêðàçèè (íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè ñ÷èòàþò ýòî àëëåðãè÷åñêîé ðåàêöèåé íà ëåêàðñòâà èëè õèìè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ). Ê ëåêàðñòâåííûì ïðåäñòàâèòåëÿì ýòîé ãðóïïû îòíîñÿò òàêèå èçâåñòíûå ñîåäèíåíèÿ, êàê ôòîðîòàí, ìåòèëäîôà, äîïåãèò, àìèíàçèí, òåòðàöèêëèí, ýðèòðîìèöèí, ôëóêëîêñàöèëëèí, òðèìåòîïðèì (êîìïîíåíò áèñåïòîëà), ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûå ñðåäñòâà (èçîíèàçèä, îñîáåííî â ñî÷åòàíèè ñ ðèôàìïèöèíîì) è äð. Íà÷àëüíûì ýòàïîì èäèîñèíêðàçèè êàê ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè íà óðîâíå ãåïàòîöèòà ÿâëÿåòñÿ ñâÿçü ëåêàðñòâåííûõ âåùåñòâ èëè èõ êîìïîíåíòîâ ñ ìåìáðàíîé. Äàëåå ìåìáðàííûå áåëêè (â ò.÷., öèòîõðîì Ð450), ìîäèôèöèðîâàííûå ïîä äåéñòâèåì ýòèõ ñîåäèíåíèé, âîñïðèíèìàþòñÿ îðãàíèçìîì â êà÷åñòâå àíòèãåíà, çàïóñêàþùåãî èììóííûé îòâåò. Îòìå÷åíî, ÷òî ïîäîáíûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ðàçâèâàþòñÿ ó ëèö ñ ïîâûøåííîé ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ, â òîì ÷èñëå îáóñëîâëåííîé ãåíåòè÷åñêè.  ñëó÷àå èäèîñèíêðàçèè, îòìå÷àþò íåñêîëüêî îñíîâíûõ ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè èììóíîîïîñðåäîâàííûìè ðåàêöèÿìè: (1) àêòèâàöèÿ öèòîëèòè÷åñêèõ ëèìôîöèòîâ è NKêëåòîê, îáðàçîâàíèå êëåòî÷íûõ àññîöèàöèé (íàïðèìåð, àäãåçèÿ íåéòðîôèëîâ ê ñèíóñîèäàëüíûì ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì, àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ è äð.); (2) îáðàçîâàíèå íåîàíòèãåíîâ è àóòîàíòèòåë (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå íîâûõ àíòèãåííûõ äåòåðìèíàíò ïðè îêèñëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè áåëêîâ, ÷òî ìîæåò èíèöèèðîâàòü îáðàçîâàíèå öèðêóëèðóþùèõ àíòèòåë); (3) äåéñòâèå ìåäèàòîðîâ (öèòîêèíû, õåìîêèíû, îêñèä àçîòà); (4) àêòèâàöèÿ ñèñòåìû êîìïëåìåíòà. Ìåòàáîëèçì êñåíîáèîòèêîâ â ïå÷åíè ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà òðè ôàçû: 1. Ìåòàáîëèçì ñîåäèíåíèé ñ ó÷àñòèåì ôåðìåíòîâ ÝÐ (ìèêðîñîìàëüíîé ôðàêöèè ãåïàòîöèòîâ), ìîíîîêñèãåíàç, öèòîõðîì ñ-ðåäóêòàçû è öèòîõðîìà Ð450, à òàêæå âîññòàíîâëåííîãî ÍÀÄÔ â êà÷åñòâå êîôàêòîðà. 2. Áèîòðàíñôîðìàöèÿ êñåíîáèîòèêîâ èëè èõ ìåòàáîëèòîâ, êîòîðàÿ çàêëþ÷àåòñÿ â êîíúþãàöèè ñîåäèíåíèé ñ ýíäîãåííûìè ìîëåêóëàìè. Ïðîöåññû êîíúþãàöèè êàòàëèçèðóþò ÷àùå âñåãî 180 ÓÄÔ-ãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçà è ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçà. Ïîñëåäíÿÿ îñîáåííî âàæíà äëÿ íåñòàáèëüíûõ ýëåêòðîôèëüíûõ ìîëåêóë. Ãëþêóðîíèçàöèÿ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì âèäîì êîíúþãàöèè ïðè äåòîêñèêàöèè ñîåäèíåíèé. Ñóëüôàòèðîâàíèå, êàê ïðàâèëî, îáåñïå÷èâàåò ñíèæåíèå òîêñè÷íîñòè è óñêîðåíèå âûâåäåíèÿ êñåíîáèîòèêîâ. Ìèêðîñîìàëüíàÿ ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçà òåñíî ñâÿçàíà ñ ñèñòåìîé öèòîõðîìà Ð450, ÷òî ñïîñîáñòâóåò áûñòðîé èíàêòèâàöèè ðåàêöèîííûõ ìåòàáîëèòîâ êñåíîáèîòèêîâ. 3. Àêòèâíûé òðàíñïîðò è ýêñêðåöèÿ áèîòðàíñôîðìèðîâàííûõ ïðîäóêòîâ ñ æåë÷üþ è ìî÷îé. Ïðÿìîå òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå êñåíîáèîòèêîâ èëè èõ àêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ íà ïå÷åíî÷íûå êëåòêè âûçûâàåò íåêðîç, ðåæå àïîïòîç êëåòîê, è/èëè íàðóøåíèå îáìåíà áèëèðóáèíà íà âñåõ ýòàïàõ åãî ñèíòåçà èç ãåìà äî ýêñêðåöèè â æåë÷íûå ïðîòîêè, äèëàòàöèþ ñèíóñîèäîâ èëè âåíîîêêëþçèþ. Ãåíåç ëåêàðñòâåííûõ ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè ÷àñòî ñîïðÿæåí ñ ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, èíäóöèðóþùèì õàðàêòåðíûå ìåìáðàííûå, à çàòåì è êëåòî÷íûå íàðóøåíèÿ, âêëþ÷àÿ àêòèâàöèþ ôîñôîëèïàç è ïðîòåàç, ñ ïîâðåæäåíèåì ìèêðîôèëàìåíòîâ çà ñ÷åò íàðóøåíèÿ èõ ôèêñàöèè ê ìåìáðàíå è ðåñòðóêòóðèçàöèè àêòèíà, ïðèâîäÿùèå ê íåêðîòè÷åñêîìó ïîâðåæäåíèþ êëåòêè (ñì. ãëàâó 4). Ïî òàêîìó ìåõàíèçìó äåéñòâóþò ìíîãèå òîêñè÷íûå ñîåäèíåíèÿ, ìåòàáîëèçèðóåìûå ñ ó÷àñòèåì ýòàíîë-èíäóöèðóåìîé ôîðìû öèòîõðîìà Ð450 2Å1 (CYP2E1), ÷òî ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà ÷åðåç ãåíåðàöèþ ÀÔÊ. Ïîãèáøèå ãåïàòîöèòû è êóïôåðîâñêèå êëåòêè îêàçûâàþòñÿ äàëüíåéøèìè èñòî÷íèêàìè ýíäîòîêñèíîâ.  ïîâðåæäåíèå ïå÷åíè ïîä âëèÿíèåì ýòàíîëà è äðóãèõ òîêñèêàíòîâ ìîæåò âíîñèòü âêëàä àêòèâàöèÿ áèîñèíòåçà êîëëàãåíà ñòåëëàòíûìè êëåòêàìè, ñïîñîáñòâóþùàÿ ðàçâèòèþ ôèáðîçà. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòà àêòèâàöèÿ îñóùåñòâëÿåòñÿ ïóòåì ãåíåðèðèðîâàíèÿ ìåäèàòîðîâ, äèôôóíäèðóþùèõ èç ãåïàòîöèòîâ, à òàêæå â ðåçóëüòàòå èíäóöèðîâàííîé ýêñïðåññèè öèòîõðîìà Ð450 (CYP2E1) [107, 108]. Äëÿ òîêñèêàíòîâ, ñïîñîáíûõ îáðàçîâûâàòü áåëêîâûå àääóêòû (íàïðèìåð, àöåòàìèíîôåí), âîçìîæåí è äðóãîé ìåõàíèçì öèòîòîêñè÷íîñòè, ñîïðÿæåííûé ñ íèòðèðîâàíèåì òèðîçèíà ïåðîêñèíèòðèòîì, îáðàçóþùèìñÿ â ðåàêöèÿõ îêñèäà àçîòà c ñóïåðîêñèäíûì ðàäèêàëîì (ñì. ãëàâó 4). Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ãåïàòîöèòû è ñòåëëàòíûå êëåòêè ñïîñîáíû ýêñïðåññèðîâàòü èíäóöèáåëüíóþ NO-ñèíòàçó (iNOS) [109], ïðè÷åì àöåòîìèíîôåí èíäóöèðîâàë ýòîò ôåðìåíò â ãåïàòîöèòàõ êðûñ. Ýòîò ïðîöåññ ñóììèðóåòñÿ ñ ýêñïðåññèåé ýíäîòåëèàëüíûìè êëåòêàìè äðóãîé 181 ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû (åNOS) è ãåíåðàöèåé ñóïåðîêñèäíîãî ðàäèêàëà, ÷òî ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ ïåðîêñèíèòðèòà, ñïîñîáíîãî îêèñëÿòü ìîëåêóëû, âûçûâàÿ ìíîæåñòâåííûå êëåòî÷íûå ïîâðåæäåíèÿ. NO ìîæåò èíäóöèðîâàòü ëèáî ìåõàíèçì èíòîêñèêàöèè, ëèáî äåòîêñèêàöèè [110, 111]. Ñ ãåïàòîòîêñèíàìè, ïîäîáíûìè àöåòàìèíîôåíó, áðîìáåíçîëó, õëîðîôîðìó, àëëèëüíûì ñïèðòàì, êîòîðûå èñòîùàþò ñîäåðæàíèå ãëóòàòèîíà â ïå÷åíî÷íûõ êëåòêàõ, ïåðîêñèíèòðèò ïðîÿâëÿåò ñâîéñòâà ïðîìîòîðà òîêñè÷íîñòè. Îäíàêî ñ ãåïàòîòîêñèíàìè, èíäóöèðóþùèìè ÏÎË, íî íå îêàçûâàþùèìè âëèÿíèå íà ñîäåðæàíèå ãëóòàòèîíà (íàïðèìåð, CCl4), NO ìîæåò íåéòðàëèçîâàòü ñóïåðîêñèä (ñì. ãëàâó 4), îáðàçóÿ ïåðîêñèíèòðèò, êîòîðûé çàòåì îáåçâðåæèâàåòñÿ ãëóòàòèîíîì. Íåäàâíî ïîêàçàíî, ÷òî àêòèâàöèÿ èçîôîðìû iNOS ïðîèñõîäèò òàêæå â óñëîâèÿõ âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ, è ýòî ïðèâîäèò ê ïîâûøåíèþ ðàñùåïëåíèÿ ÄÍÊ è ÷àñòîòû ìóòàöèé ãåíîâ â ãåïàòîöèòàõ, ÷òî ñ÷èòàþò ñóùåñòâåííûì â ïðîãðåññèðîâàíèè çàáîëåâàíèÿ [112]. Òàêèì îáðàçîì, â çàâèñèìîñòè îò õèìè÷åñêîãî ñòðîåíèÿ òîêñèêàíòà, à òàêæå äîçû, êðàòíîñòè è äëèòåëüíîñòè âîçäåéñòâèÿ, ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ìîãóò áûòü ðàçëè÷íûìè. Äåéñòâóÿ â âûñîêîé äîçå, êñåíîáèîòèê ìîæåò âûçâàòü îñòðîå öèòîòîêñè÷åñêîå ïîðàæåíèå ïå÷åíè. Ïîäîñòðîå, õðîíè÷åñêîå äåéñòâèå òîêñèêàíòà ñîïðîâîæäàåòñÿ ôîðìèðîâàíèåì âÿëîòåêóùåãî ïðîöåññà, ïðèâîäÿùåãî íåðåäêî ê ôèáðîçó, ðóáöîâûì èçìåíåíèÿì â îðãàíå, íîâîîáðàçîâàíèÿì. 5.6. Ëåêàðñòâåííàÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü.  ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå ñîîáùåíèé î ãåïàòîòîêñè÷íîñòè ðÿäà ëåêàðñòâ, ÷òî ïðèâîäèò äàæå ê èõ îòçûâó ñ ðûíêà è ñíÿòèþ ñ ïðîèçâîäñòâà. Ïîýòîìó äàííîé ïðîáëåìå â ïîñëåäíèå ãîäû óäåëÿåòñÿ âñå áîëüøå âíèìàíèÿ [1, 12, 13, 113, 114]. Äëÿ ìíîãèõ ëåêàðñòâ ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè íàáëþäàþòñÿ ðåäêî. Îíè âîçìîæíû òîëüêî â ñëó÷àÿõ èíäèâèäóàëüíîé íåïåðåíîñèìîñòè (èäèîñèíêðàçèè), êîòîðàÿ ïðè ïðèìåíåíèè ëåêàðñòâà â òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ, âñòðå÷àåòñÿ ñ ÷àñòîòîé îò 1 íà 1000 ïàöèåíòîâ äî 1 íà 100 000 ïàöèåíòîâ. Äëÿ ðÿäà ëåêàðñòâ íàáëþäàåòñÿ ëàòåíòíûé ïåðèîä ïðîÿâëåíèÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòè (îò 5 äî 90 äíåé). Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ñîñòàâëÿþò îêîëî 10% îò âñåõ ïîáî÷íûõ ðåàêöèé îðãàíèçìà, ñâÿçàííûõ ñ ïðèìåíåíèåì ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ. Íàïðèìåð, â ÑØÀ îíè ÿâëÿþòñÿ ïðè÷èíîé 2,5-3,0% âñåõ ñëó÷àåâ îñòðî ðàçâèâøåéñÿ æåëòóõè, â Åâðîïå ýòîò ïîêàçàòåëü íåñêîëüêî âûøå è ñîñòàâëÿåò 3,0-4,0%. 182 Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ñîñòàâëÿþò 25-28% âñåõ ñëó÷àåâ ôóëüìèíàíòíîé ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, çàíèìàÿ âòîðîå ìåñòî ïîñëå âèðóñíûõ çàáîëåâàíèé. Ïîñêîëüêó ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç îñíîâíûõ çâåíüåâ áèîòðàíñôîðìàöèè ëåêàðñòâ, ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ åå âñòðå÷àþòñÿ, ïî-âèäèìîìó, äàæå ÷àùå, ÷åì ïî äàííûì îôèöèàëüíîé ìåäèöèíñêîé ñòàòèñòèêè. Ýòî îáóñëîâëåíî ðÿäîì ôàêòîðîâ, ñðåäè êîòîðûõ: âîçìîæíîñòü ëàòåíòíîãî òå÷åíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè, íåàäåêâàòíàÿ òðàêòîâêà êëèíè÷åñêîé ñèìïòîìàòèêè è êëèíèêîëàáîðàòîðíûõ ïîêàçàòåëåé, íåäîñòàòî÷íî âíèìàòåëüíûé ñáîð è àíàëèç àíàìíåçà è äð. Ðåàêöèÿ ïå÷åíè íà ëåêàðñòâî çàâèñèò îò ìíîãèõ ôàêòîðîâ, òàêèõ, íàïðèìåð, êàê âîçðàñò è ïîë áîëüíîãî, äîçèðîâêà ïðåïàðàòà, ñïîñîáû ââåäåíèÿ, èñõîäíîå ñîñòîÿíèå ôóíêöèè ïå÷åíè, íàñëåäñòâåííîñòü è ò.ä. Õîòÿ ïðè áîëüøèíñòâå ãåïàòîòîêñè÷åñêèõ ðåàêöèé íàáëþäàåòñÿ íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, ðÿä ëåêàðñòâ ïîâðåæäàþò æåë÷íûå êàíàëüöû èëè ïðîòîêè, âûçûâàÿ õîëåñòàç áåç ñåðüåçíîãî èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ. Äðóãèå ëåêàðñòâåííûå ñðåäñòâà ïîâðåæäàþò ñèíóñîèäàëüíûå èëè ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè, ÷òî ïðèâîäèò ê âåíîîêêëþçèîííîé áîëåçíè è ñïîñîáñòâóåò ôîðìèðîâàíèþ ôèáðîçà ïå÷åíè. Ïðè êîìïëåêñíîé òåðàïèè áèîòðàíñôîðìàöèÿ îäíîãî ëåêàðñòâà ìîæåò íàñëàèâàòüñÿ íà áèîòðàíñôîðìàöèþ äðóãîãî, ïîýòîìó ëåêàðñòâåííûå êîìáèíàöèè îáóñëàâëèâàþò âûñîêèé ðèñê áîëåå ñåðüåçíûõ òîêñè÷åñêèõ ðåàêöèé (íàïðèìåð, èçîíèàçèä - ðèôàìïèöèí, àìîêñèöèëëèí êëàâóëèíîâàÿ êèñëîòà).  ïàòîãåíåçå ïîâðåæäåíèå èíäóêöèè ôåðìåíòîâ öèòîõðîìà Ð450 îäíèì èç ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ ïðèâîäèò ê áûñòðîìó ôîðìèðîâàíèþ òîêñè÷åñêèõ ìåòàáîëèòîâ äðóãîãî ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà. Ñîãëàñíî Lee [12], ê íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àþùèìñÿ ìåõàíèçìàì ëåêàðñòâåííîãî ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè îòíîñÿò: 1) Äåãðàäàöèÿ ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ñ ó÷àñòèåì öèòîõðîìà Ð450 è îáðàçîâàíèå ðåàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ, ñïîñîáíûõ îáðàçîâûâàòü êîíúþãàòû ñ âíóòðèêëåòî÷íûìè áåëêàìè, âûçûâàÿ äèñôóíêöèþ âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, íàðóøåíèå èîííîãî ãðàäèåíòà (ãîìåîñòàçà), ñíèæåíèå óðîâíÿ ÀÒÔ, äåãðàäàöèþ àêòèíà, íàáóõàíèå è ëèçèñ êëåòêè (íåêðîç). 2) Âîçäåéñòâèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íà òðàíñïîðòíûå áåëêè êàíàëèêóëÿðíîé ìåìáðàíû è èíèöèàöèÿ õîëåñòàçà ñ ïîñëåäóþùåé ñòèìóëÿöèåé àïîïòîçà ãåïàòîöèòîâ. 3) Îáðàçîâàíèå àääóêòîâ - êîâàëåíòíîå ïðèñîåäèíåíèå ìåòàáîëèòîâ, îáðàçóþùèõñÿ â ïðîöåññå äåãðàäàöèè ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ê ìîëåêóëå öèòîõðîìà Ð450, èíàêòèâèðóþùåå ôåðìåíò. 183 4) Ìèãðàöèÿ àääóêòîâ ê êëåòî÷íîé ïîâåðõíîñòè è èíèöèèðîâàíèå èììóííûõ ðåàêöèé (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå ãàïòåíîâ è àíòèòåë, ïðÿìîå öèòîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå NK- è Òêëåòîê). 5) Ðàçâèòèå âòîðè÷íîãî öèòîêèíîâîãî îòâåòà, êîòîðûé, â ñâîþ î÷åðåäü, èíèöèèðóåò âîñïàëåíèå è äîïîëíèòåëüíûé êàñêàä èììóííîîïîñðåäîâàííûõ ðåàêöèé, ïðèâîäÿùèõ ê àïîïòîçó ãåïàòîöèòîâ ñ ó÷àñòèåì Fas è TNF. 6) Âîçäåéñòâèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íåïîñðåäñòâåííî íà ìèòîõîíäðèè, èíèöèèðóþùåå ðàçîáùåíèå ðåàêöèé îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ, èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà ÀÒÔ è îêèñëåíèÿ æèðíûõ êèñëîò ñ ïîñëåäóþùèì ðàçâèòèåì àöèäîçà è âíóòðèêëåòî÷íîãî íàêîïëåíèÿ òðèãëèöåðèäîâ â âèäå ìèêðîâåçèêóë. Äî ñèõ ïîð íå âïîëíå ÿñíî, ïî÷åìó ëåêàðñòâî, ïðîâåðåííîå ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì òðåáîâàíèÿì è ÿâëÿþùååñÿ áåçâðåäíûì äëÿ áîëüøèíñòâà ïàöèåíòîâ, âäðóã îêàçûâàåòñÿ äëÿ êîãî-òî ãåïàòîòîêñè÷íûì.  êà÷åñòâå ïðè÷èí îòìå÷àþò âîçìîæíûå ãåíåòè÷åñêèå âàðèàöèè â èçîôåðìåíòàõ, ñïîñîáñòâóþùèå îáðàçîâàíèþ òîêñè÷íûõ ïîáî÷íûõ ïðîäóêòîâ, èëè êîíôîðìàöèîííûå âàðèàöèè íåêîòîðûõ áåëêîâ, ñïîñîáñòâóþùèå îáðàçîâàíèþ àääóêòîâ. Òàê, ïðè÷èíó ðàçâèòèÿ èäèîñèíêðàçèè íà ââîäèìûé ïðåïàðàò ÷àñòè÷íî îáúÿñíÿþò âûÿâëåííûìè â ïîñëåäíåå âðåìÿ ãåíåòè÷åñêèìè ðàçëè÷èÿìè â êàòàëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè Ð450 [115]. Íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ôàðìàêîãåíîìíûé ïîäõîä â áóäóùåì ïîçâîëèò èñêëþ÷èòü âîçìîæíûé ðèñê èäèîñèíêðàçèè íà òî èëè èíîå ëåêàðñòâî [12, 116].  íàñòîÿùåå æå âðåìÿ åäèíñòâåííûì ïóòåì îêàçûâàåòñÿ ñíÿòèå ñ ðûíêà ëåêàðñòâ ñ ÷àñòûìè ãåïàòîòîêñè÷åñêèìè ïîñëåäñòâèÿìè, ðåãóëÿðíûé êîíòðîëü ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (ïî ìîíèòîðèíãó àìèíîòðàíñôåðàç ñûâîðîòêè), íàðÿäó ñ èñïîëüçîâàíèåì ãåïàòîïðîòåêòîðîâ.  öåëîì, ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå óíèêàëüíóþ ñïîñîáíîñòü ïå÷åíè ê ðåãåíåðàöèè, îòìå÷àþò, ÷òî îñòðàÿ ïå÷åíî÷íàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ðàçëè÷íûõ ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ âîçíèêàåò îáû÷íî â óñëîâèÿõ äèñáàëàíñà ìåæäó ðåãåíåðàöèåé è ãèáåëüþ êëåòîê [117, 118]. Ñòåïåíü âûðàæåííîñòè ïîðàæåíèÿ, îñòðîòà âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè çàâèñÿò îò òîãî, ïî êàêîìó ïóòè èäåò ïîâðåæäåíèå êëåòêè - àïîïòîçà èëè íåêðîçà. Ïîâðåæäåíèå è ãèáåëü êëåòîê ïå÷åíè îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç êîìïëåêñ ñëîæíûõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ è ñóùåñòâåííî óñèëèâàåòñÿ èììóíîëîãè÷åñêèìè, âîñïàëèòåëüíûìè êîìïîíåíòàìè, à òàêæå êñåíîáèîòèêàìè, â òîì ÷èñëå è ëåêàðñòâàìè 184 [114, 119]. Òåì íå ìåíåå, ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá îáðàòèìîñòè êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé. Ðåãåíåðàöèÿ êëåòêè ÷àñòî çàâèñèò îò òåõ æå ïðîöåññîâ, êîòîðûå âîâëå÷åíû â åå ïîâðåæäåíèå, è íàèáîëåå ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì â âîññòàíîâëåíèè ôóíêöèé ãåïàòîöèòîâ è ïå÷åíè â öåëîì ÿâëÿåòñÿ ðåãåíåðàöèÿ è ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí. Ïîíèìàíèå ìåõàíèçìîâ ýòèõ ïðîöåññîâ ñïîñîáñòâóåò íàïðàâëåííîé ðàöèîíàëüíîé òåðàïèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 5 1. Lee W.M., Drug-induced hepatotoxity. New Engl J Med. 1995, 333, 118-127. 2. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. Ìåäèöèíà. Ì.1993. 3. Áóåâåðîâ À.Î. Îêñèäàòèâíûé ñòðåññ è åãî ðîëü â ïîâðåæäåíèÿõ ïå÷åíè. Ðîñ æóðí ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë êîëîïðîêòîë. 2002, 4, 21-25. 4. Trauner M., Fickert P., Zollner G. Genetic disorders and molecular mechanisms in cholestatic liver disease-a clinical approach. Semin Gastrointest Dis. 2001, 12, 66-88. 5. Ìèíóøêèí Î.Í. Íåêîòîðûå ãåïàòîïðîòåêòîðû â ëå÷åíèå çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Ëå÷àùèé âðà÷. 2002, 6, 55-58. 6. Ëîïàòêèíà Ò.Í. Êëèíèêà ãåïàòèòà Ñ. Âèðóñíûå ãåïàòèòû: äîñòèæåíèÿ è ïåðñïåêòèâû. 1997, 1, 12-16. 7. Òîïîðêîâ À.Ñ. Àëãîðèòì äèàãíîñòèêè è ëå÷åíèÿ òîêñè÷åñêèõ è àëêîãîëüíûõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè. ÐÌÆ. 2004, 12, 445-447. 8. Syntichaki P., Tavernakis N. Death by necrosis. Uncontrollable catastrophe, or is there order behind the chaos? EMBO Reports. 2002, 3, 604-609. 9. ×èðêèí À.Â. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè. www.NATURE. ru/db/msg.html. 10. Ó÷àéêèí Â.Ô. Âèðóñíûå ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì. 1994, 89-96. 11. Ëîãèíîâ À.Ñ., Áëîê Þ.Å. Õðîíè÷åñêèå ãåïàòèòû è öèððîçû ïå÷åíè. Ìåäèöèíà. Ì. 1987. 12. Lee W.M. Drug-induced hepatotoxity. New Engl J Med. 2003, 349, 474-485. 13. Lazarou J., Pomeranz B.H., Corey P.N. Incidence of adverse drug reactions in hospitalized patients. JAMA. 1998, 279, 1200-1205. 14. Rolo A.P., Palmeira C.M., Holy J.M., Wallace KB. Role of mitochondrial dysfunction in combined bile acid-induced cytotoxicity: the switch between apoptosis and necrosis. Toxicol Sci. 2004, 79, 196-204. 15. Granato A., Gores G., Vilei M.T., Tolando R., Ferraresso C., Muraca M. Bilirubin inhibits bile acid induced apoptosis in rat hepatocytes. Gut. 2003, 52, 1774-1778. 185 16. Patel T., Gores G.J. Inhibition of bile-salt-induced hepatocyte apoptosis by the antioxidant lazaroid U83836E. Toxicol Appl Pharmacol. 1997, 142, 116-122. 17. Patel T., Roberts R.L., Jones B.A., Gores G.J. Dysregulation of apoptosis as a mechanism of liver disease: an overview. Semin Liver Dis. 1998, 18, 105-114. 18. Guicciardi M.E., Gores G.J. Bile acid-mediated hepatocyte apoptosis and cholestatic liver disease. Dig Liver Dis. 2002, 34, 387-392. 19. Higuchi H., Gores G.J. Bile acid regulation of hepatic physiology: IV. Bile acids and death receptors. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2003, 284, G734-738. 20. Patel T., Bronk S.F., Gores G.J. Increases of intracellular magnesium promote glycodeoxycholate-induced apoptosis in rat hepatocytes. J Clin Invest. 1994, 94, 2183-2192. 21. Miyoshi H., Rust C., Roberts P.J., Burgart L.J., Gores G.J. Hepatocyte apoptosis after bile duct ligation in the mouse involves Fas. Gastroenterology. 1999, 117, 669-677. 22. Sodeman T., Bronk S.F., Roberts P.J., Miyoshi H., Gores G.J. Bile salts mediate hepatocyte apoptosis by increasing cell surface trafficking of Fas. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2000, 278, G992-999. 23. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I., Hinson J.A., Pessayre D., Lemasters J.J. Mechanisms of hepatotoxicity. Toxicol Sci. 2002, 65, 166-176. 24. Faubion W.A., Gores G.J. Death receptors in liver biology and pathobiology. Hepatology. 1999, 29, 1-4. 25. Higuchi H., Bronk S.F., Takikawa Y., Werneburg N., Takimoto R., El-Deiry W., Gores G.J. The bile acid glycochenodeoxycholate induces trail-receptor 2/DR5 expression and apoptosis. J Biol Chem. 2001, 276, 38610-38618. 26. Higuchi H., Bronk S.F., Taniai M., Canbay A., Gores G.J. Cholestasis increases tumor necrosis factor-related apoptotis-inducing ligand (TRAIL)-R2/DR5 expression and sensitizes the liver to TRAILmediated cytotoxicity. J Pharmacol Exp Ther. 2002, 303, 461-467. 27. Fischer R., Cariers A., Reinehr R., Haussinger D. Caspase 9dependent killing of hepatic stellate cells by activated Kupffer cells. Gastroenterology. 2002, 123, 845-861. 28. Gores G.J., Kaufmann S.H. Is TRAIL hepatotoxic? Hepatology. 2001, 34, 3-6. 29. Sokol R.J., Straka M.S., Dahl R., Devereaux M.W., Yerushalmi B., Gumpricht E., Elkins N., Everson G. Role of oxidant stress in the permeability transition induced in rat hepatic mitochondria by hydrophobic bile acids. Pediatr Res. 2001, 49, 519-531. 30. Fang Y., Han S.I., Mitchell C., Gupta S., Studer E., Grant S., 186 Hylemon P.B., Dent P. Bile acids induce mitochondrial ROS, which promote activation of receptor tyrosine kinases and signaling pathways in rat hepatocytes. Hepatology. 2004, 40, 961-971. 31. Borgognone M., Perez L.M., Basiglio C.L., Ochoa J.E., Roma M.G. Signaling modulation of bile salt-induced necrosis in isolated rat hepatocytes. Toxicol Sci. 2005, 83, 114-125. 32. Schoemaker M.H., Conde de la Rosa L., Buist-Homan M., Vrenken T.E., Havinga R., Poelstra K., Haisma H.J., Jansen P.L., Moshage H. Tauroursodeoxycholic acid protects rat hepatocytes from bile acid-induced apoptosis via activation of survival pathways. Hepatology. 2004, 39, 1563-1573. 33. Amigo L., Mendoza H., Zanlungo S., Miquel J.F., Rigotti A., Gonzalez S., Nervi F. Enrichment of canalicular membrane with cholesterol and sphingomyelin prevents bile salt-induced hepatic damage. J Lipid Res. 1999, 40, 533-542. 34. Äìèòðèåâà Å.Â., Ìîñêàëåâà Å.Þ., Ñåâåðèí Å.Ñ. Ðîëü àïîïòîçà â ïàòîãåíåçå õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ  è Ñ. Ðîñ æóðí ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë êîëîïðîêòîë. 2003, 5, 7-12. 35. Brake A., Gores J., Gores G. Physiology and pathophysiology of apoptosis in epithelial cells of liver, pancreas and intestine. Am J Physiol. 1997, 273, 1174-1188. 36. Liu D., Huang Z. Synthetic peptides and non-peptidic molecules as probes of structure and function of Bcl-2 family proteins and modulators of apoptosis. Apoptosis. 2001, 6, 453-462. 37. Hayashi N., Mita E. Fas system and apoptosis in viral hepatitis. J Gastroenterol Hepatol. 1997, 12, 223-226. 38. Rivero M., Crespo J., Fabrega E., Casafont F., Mayorga M., Gomez-Fleitas M., Pons-Romero F. Apoptosis mediated by the Fas system in the fulminant hepatitis by hepatitis B virus. J Viral Hepat. 2002, 9, 107-113. 39. Kountouras J., Zavos C., Chatzopoulos D. Apoptosis in hepatitis C. J Viral Hepat. 2003, 10, 335-342. 40. Àðóèí Ë.È. Àïîïòîç è ïàòîëîãèÿ ïå÷åíè. Ðîñ æóðí ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë êîëîïðîêòîë. 1998, 2, 6-10. 41. Gil J., Esteban M. Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent proteinkinase R (PKR): mechanism of action. Apoptosis. 2000, 5, 107-114. 42. Freise M., Barth K., Kaul A., Lohman V., Schwarzle V., Bartenschlager R. Hepatitis C virus RNA replication is resistant to tumor necrosis factor-alpha. J Gen Virol. 2003, 84, 1253-1259. 43. Kim H., Lee H., Yun Y. X-gene product of hepatitis B virus induces apoptosis in liver cells. J Biol Chem. 1998, 273, 381-385. 44. Pollicino T., Terradilos O., Lecoeur H. Gougeon M.L., Buendia 187 M.A. Pro-apoptotic effect of the hepatitis B virus X gene. Biomed Pharmacother. 1998, 52, 363-368. 45. Honda M., Kaneko S., Shimazaki T., Matsushita E., Kobayashi K., Ping L.H., Zhang H.C., Lemon S.M. Hepatitis C virus core protein induces apoptosis and impairs cell cycle regulation in stably transformed Chinese hamster ovary cells. Hepatology. 2000, 31, 1351-1359. 46. Kalkeri G., Khalap N., Garry R.F., Fermin C.D., Dash S. Hepatitis C virus protein expression induces apoptosis in HepG2 cells. Virology. 2001, 282, 26-37. 47. Hiramatsu N., Hayashi N., Katayama K. Mochizuki K., Kawanishi Y., Kasahara A., Fusamoto H., Kamada T. Immunohistochemical detection of Fas antigen in liver tissue of patients with chronic hepatitis C. Hepatology. 1994, 19, 1354-1359. 48. Oksuz M., Akkiz H., Isiksal Y.F., Saydaogluc G., Serin M., Kayaselcuk F., Abayli B., Tuncer I. Expression of Fas antigen in liver tissue of patients with chronic hepatitis B and C. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2004, 16, 341-345. 49. Crawford J.M. The liver and the biliary tract. In: Robbins Pathologic Basis of Disease, 6th edition. (Cotran R.S. ed.). W.B.Sanders, Philadelphia. 1999, 845-901. 50. Cao Y., Hamada T., Matsui T., Date T., Iwabuchi K. Hepatitis C core protein interacts with p53-binding protein, 53P2/Bbp/ASPP2, and inhibits p53-mediated apoptosis. Biochem Biophys Res Commun. 2004, 315, 788-795. 51. Zuckerman E., Zuckerman T., Sahar D ., Streichman S., Attias D., Sabo E., Yeshurun D., Rowe J. Bcl-2 and immunoglobulin gene rearrangement in patients with hepatitis C virus infection. Br J Haematol. 2001, 112, 364-369. 52. Basu A., Meyer K., Ray R.B., Ray R. Hepatitis C virus core protein is necessary for the maintenance of immortalized human hepatocytes. Virology. 2002, 20, 298, 53-62. 53. Cheng P.L., Chang M.H., Chao C.H., Lee Y.H. Hepatitis C viral proteins interact with Smad3 and differentially regulate TGFbeta/Smad3-mediated transcriptional activation. Oncogene. 2004, 23, 7821-7838. 54. MacEwan D.J. TNF ligands and receptors-a matter of life and death. Brit J Pharmacol. 2002, 135, 855-875. 55. Miyasaka Y., Enomoto N., Kurosaki M., Sakamoto N., Kanazawa N., Kohashi T., Ueda E., Maekawa S., Watanabe H., Izumi N., Sato C., Watanabe M. Hepatitis C virus nonstructural protein 5A inhibits tumor necrosis factor-alpha-mediated apoptosis in Huh7 cells. J Infect Dis. 2003, 188, 1537-1544. 56. Otsuka M., Kato N., Taniguchi H., Yoshida H., Goto T., Shiratori 188 Y., Omata M. Hepatitis C virus core protein inhibits apoptosis via enhanced Bcl-xL expression.Virology. 2002, 296, 84-93. 57. Schwer B., Ren S., Pietschmann T., Kartenbeck J., Kaehlcke K., Bartenschlager R., Yen T.S., Ott M. Targeting of hepatitis C virus core protein to mitochondria through a novel C-terminal localization motif. J Virol. 2004, 78, 7958-7968. 58. Kim J.S., Ryu J., Hwang S.B., Lee S.Y., Choi S.Y., Park J. Suppression of ceramide-induced cell death by hepatitis C virus core protein. J Biochem Mol Biol. 2004, 37, 192-198. 59. Chou A.H., Tsai H.F., Wu Y.Y., Hu C.Y., Hwang L.H., Hsu P.I., Hsu P.N. Hepatitis C virus core protein modulates TRAIL-mediated apoptosis by enhancing bid cleavage and activation of mitochondria apoptosis signaling pathway. J Immunol. 2005, 174, 2160-2166. 60. Tai D.I., Tsai S.L., Chen Y.M., Chuang Y.L., Peng C.Y., Sheen I.S., Yeh C.T., Chang K.S., Huang SN, Kuo GC, Liaw YF. Activation of nuclear factor kappaB in hepatitis C virus infection: implications for pathogenesis and hepatocarcinogenesis. Hepatology. 2000, 31, 656-664. 61. Bantel H., Schulze-Osthoff K. Apoptosis in hepatitis C virus infection. Cell Death Differ. 2003, 10, 48-58. 62. OsawaY., Nagaki M., Banno Y., Brenner D., AsanoB., Nozawa Y., Mriwaki H., Nakashima S. Tumor necrosis factor alpha-induced interleukin-8 production via NFkB and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathways inhibits cell apoptosis in human hepatocytes. Infect Immun. 2002, 70, 6294-6301 63. Cataldegirmen G., Zeng S., Feirt N., Ippagunta N., Dun H., Qu W., Rong L.L., Hofmann M.A., Kisinger T. Pachydaki S.I., Jenkins D.G., Weinberg A., Lefkowitch J., Rogiers X., Yan S.F., Schmidt A.M., Emond J.C. RAGE limits regeneration after massive liver injury by coordinated suppression of TNF-alpha and NF-kappaB. J Exp Med. 2005, 201, 473484. 64. Chiao P.J., Na R., Niu J., Sclabas G.M., Dong Q., Curley S.A. Role of Rel/NF-kappaB transcription factors in apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells. Cancer. 2002, 95, 1696-1705. 65. Zhu L.X., Liu J., Xie Y.H., Kong Y.Y., Ye Y., Wang C.L., Li G.D., Wang Y. Expression of hepatitis C virus envelope protein 2 induces apoptosis in cultured mammalian cells. World J Gastroenterol. 2004, 10, 2972-2978. 66. Castedo M., Ferri KF., Blanco J., Roumier T., Larochette N., Barretina J., Amendola A., Nardacci R., Metivier D., Este J.A., Piacentini M., Kroemer G. Human immunodeficiency virus 1 envelope glycoprotein complex-induced apoptosis involves mammalian target of rapamycin/FKBP12-rapamycin-associated protein-mediated p53 phosphorylation. J Exp Med. 2001, 194, 1097-1110. 189 67. Brack K., Berk I., Magulski T., Lederer J., Dotzauer A., Vallbracht A. Hepatitis A virus inhibits cellular antiviral defense mechanisms induced by double-stranded RNA. J Virol. 2002, 76, 1192011930. 68. Chang L., Karin M. Mammalian MAP kinase signaling cascades. Nature. 2001, 410, 37-40. 69. Oh J.C., Jeong D.L., Kim IK., Oh S.H. Activatioon of calcium signaling by hepatitis B virus X protein in liver cells. Exp Mol Med. 2003, 35, 3401-3409. 70. Kanda T., Yokosuka O., Imazeki F., Yamada Y., Yamamura T., Fukai K., Nagao K., Saisho H. Hepatitis B virus X protein (HBx)induced apoptosis in HuH-7 cells: influence of HBV genotypeand basal core promoter mutations. Scand J Gastroenterol. 2004, 39, 478-485. 71. Chizari F.V., Ferrari C. Hepatitis B virus immunopathogenesis. Ann Rev Immunol. 1995, 13, 29-60. 72. Koziel M.J. The role of immune response in the pathogenesis of hepatitis C virus infection. J Viral Hepat. 1997, 4, 31-41. 73. Schweyer S., Mihm S., Radzun H.J., Hartmann H., Fayyazi A. Liver infiltrating T lymphocytes express interferon gamma and inducible nitric oxide synthase in chronic hepatisis C virus infections. Gut. 2000, 46, 255-259. 74. Bonder C.S., Kubes P. The future of GI and liver research: editorial perspectives. II. modulating leucocyte recruitment to splanchnic organs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2003, 284, 729-733. 75. Lehoux M., Jacques A., Lusignan S., Lamontagne L. Murine viral hepatitis involves NK cell depletion associated with virus-induced apoptosis. Clin Exp Immunol. 2004, 137, 41-51. 76. Lamontagne L., Lusignan S., Page C. Recovery from mouse hepatitis virus infection depends on recruitment of CD8(+) cells rather than activation of intrahepatic CD4(+)alphabeta(-)TCR(inter) or NK-T cells. Clin Immunol. 2001, 101, 345-356. 77. Jonsson J.R., Edwards-Smith C.J., Catania S.C., Morotomi Y , Hogan P.G., Clouston A.D., Bansal A.S., Lynch SV., Strong R.W., Powell EE. Expression of cytokines and factors modulating apoptosis by human sinusoidal leucocytes. J Hepatol. 2000, 32, 392-398. 78. Rehermann B.B., Lau D., Hoofnage .JH., Chizari F.V. Cytotoxic T lymphocytes responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection. J Clin Invest. 1996, 97, 1655-1665. 79. Su F., Schneider R.J. Hepatitis B virus HBx protein sensitizes cells to apoptotic killing by tumor necrosis factor alpha. Proc Natl Acad Sci USA. 1997, 94, 8744-8749. 80. Terradillos O., Pollicino T., Lecoeur H., Tripodi M., Gougeon M.L., Tiollais P., Buendia M.A. p-53 independent apoptotic effects of 190 the hepatitis B virus HBx protein in vivo and in vitro. Oncogene. 1998, 17, 2115-2123. 81. Zhu N., Khoshnan A., Schneider R., Matsumoto M., Dennert G., Ware C., Lai M.M. Hepatitis C virus core protein binds to cytoplasmic domain of tumor necrosis factor (TNF) receptor 1 and enhances TNFinduced apoptosis. J Virol. 1998, 72, 3691-3697. 82. O'Connell J. Fas ligand and the fate of antitumour cytotoxic T lymphocytes. Immunology. 2002, 105, 263-266. 83. Àááàñîâà Ñ.Ã., Ëèïêèí Â.Ì., Òðàïåçíèêîâ Í.Í., Êóøëèíñêèé Í.Å. Ñèñòåìà FAS-FASL â íîðìå è ïàòîëîãèè. Âîïð áèîë ìåä ôàðì õèìèè. 1999, 3, 3-17. 84. Rust C., Gores G.J. Apoptosis and liver disease. Am J Med. 2000, 108, 567-574. 85. Jo M., Kim T.H., Seol D.W., Esplen J.E., Dorko K., Billiar T.R., Strom S.C. Apoptosis induced in normal human hepatocytes by tumor necrosis factor-related apoptosis-induced ligand. Nat Med. 2000, 6, 564567. 86. Morgan M., Thorburn J., Pandolfi PP., Thorburn A. Nuclear and cytoplasmic shuttling of TRADD indyces apoptosis via different mechanisms. J Cell Biol. 2002, 157, 975-984. 87. Kmiec Z. Cooperation of liver cells in health and disease. Adv Anat Embryol Cell Biol. 2001, 161, 1-151. 88. Jaeschke H., Smith C.W. Mechanism of neutrophyl-induced parenchymal cell injury. J Leukoc Biol. 1997, 61, 647-653. 89. Lawson J.A., Farhood A., Hopper R.D., Bajt M.L., Jaeschke H. The hepatic inflammatory response after acetaminophen overdose. Role of neutrophils. Toxicol Sci. 2000, 54, 509-516. 90. Olson T.S., Ley K. Chemokines and chemokine receptors in leukocyte trafficking. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2002, 283, 7-28. 91. McClain C.J., Song Z., Barve S.S., Hill D.B. Deaciuc I. Recent advances in alcoholic liver disease. IV. Dysregulated cytokine metabolism in alcoholic liver disease. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2004, 287, 497-502. 92. Bone-Larson C.L., Simpson K.J., Colletti L.M., Lukacs N.W, Chen S.C., Lira S., Kunkel S.L., Hogaboam C.M. The role of chemokines in the immunopathology of liver. Immunol Rev. 2000, 177, 8-20. 93. Bautista A.P. Impact of alcohol on the ability of Kupffer cells to produce chemokines and its role in alcoholic liver disease. J Gastroenterol Hepatol. 2000, 15, 349-356. 94. Boisvert J., Kunkel E.J., Campbell J.J., Keeffe E.B., Butcher E.C., Greenberg H.B. Liver-infiltrating lymphocytes in end-stage hepatitis C virus: subsets, activation status, and chemokine receptor phenotypes. J 191 Hepatol. 2003, 38, 67-75. 95. Jaeshke H. Cellular adhesive molecules: regulation and functional significance in the pathogenesis of liver diseases. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 1997, 273, 602-611. 96. Essani N.A., Bajt M.L., Vondervecht S.L., Farhood A., Jaeschke H. Transcriptional activation of vascular ell adhesive molecule-1 (VCAM-1) gene in vivo and its role in the pathophysiology of neutrophil-induced liver injury in murine endotoxin shock. J immunol. 1997, 158, 5941-5948. 97. Patel T., Gores G., Kaufmann S.H. The role of proteases during apoptosis. FASEB J. 1996, 10, 587-597. 98. Shibuya H., Ohkohchi N., Tsukamoto S., Satomi S. Tumor necrosis factor-induced, superoxide-mediated neutrophil accumulation in cold ischemic/reperfused rat liver. Hepatology. 1997, 26, 113-120. 99. Lemasters J.J. V. Necrapoptosis and mitochondrial permeability transition: shared pathways to necrosis and apoptosis. Am J Physiol. 1999, 276, 1-6. 100. Ziol M., Tepper M., Lohez M., Arcangeli G., Ganne N., Christidis C., Trinchet J.C., Beaugrand M., Guillet J.G., Guettier C. Clinical and biological relevance of hepatocyte apoptosis in alcoholic hepatitis. J Hepatol. 2001, 34, 254-260. 101. Losser M.R., Payen D. Mechanisms of liver damage. Semin Liver Dis. 1996, 16, 357-367. 102. Èâàøêèí Â.Ò., Øóëüïåêîâà Þ.Î. Íåàëêîãîëüíûé ñòåàòîãåïàòèò. ÐÌÆ. Áîëåçíè îðãàíîâ ïèùåâàðåíèÿ. 2000, 2, 41-45. 103. James O., Day C.P. Non-alcoholic steatohepatitis (NASH): a disease of emerging identity and importance. J Hepatol. 1998, 29, 495-501. 104. Pessayre D., Berson A., Fromenty B., Mansouri A. Mitochondria in steatohepatitis. Semin Liver Dis. 2001, 21, 57-69. 105. Íèêèòèí È. Ã., Ñòîðîæàêîâ Ã. È. Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè. ÐËÑ. Áîëåçíè ïå÷åíè è æåë÷åâûâîäÿùèõ ïóòåé. Ì. 2002, Èç-âî "Èçäàòåëüñêèé äîì". 106. Øåðëîê Ø., Äóëè Äæ. Çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè è æåë÷íûõ ïóòåé. Ìåäèöèíà, Ì. 1999, 540-548. 107. Mari M., Wu D., Nieto N., Cederbaum A.L. CYP2E1-dependent toxicity and up-regulation of antioxidant genes. J Biomed. 2001, 8, 52-58. 108. Liu H., Jones B.E., Bradham C., Czaja M. Increased cytochrome P-450 2E1 expression sensitizes hepatocytes to c-Jun-mediated cell death from TNF-alpha. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002, 282, 257-266. 109. Muriel P. Regulation of nitric oxide synthesis in the liver. J Appl Toxicol. 2000, 20, 189-195. 192 110. Gumpricht E., Dahl R., Yerushalmi B., Devereaux M.V., Sokol R.J. Nitric oxide ameliorates hydrophobic bile acid-induced apoptosis in isolated rat hepatocytes bynon-mitochondrial pathways. J Biol Chem. 2002, 277, 25823-25830. 111. Kurose I., Miura S., Higuchi Y., Watanabe N., Kamegaya Y., Takaishi M., Tomita K., Fukumura D., Kato S., Ishii H. Increased nitric oxide synthase activity as a cause of mitochondrial dysfunction in rat hepatocytes: roles for tumor necrosis factor alpha. Hepatology, 1996, 24, 1185-1192. 112. Machida K., Cheng K.T., Sung V.M., Lee K.J., Levine A.M., Lai M.M. Hepatitis C virus infection activates the immunologic (type II) isoform of nitric oxide synthase and thereby enhances DNA damage and mutations of cellular genes. J Virol. 2004, 78, 8835-8843. 113. Meadows M. Serious liver injury: Leading reason for drug removals, restrictions. FDA Consum. 2001, 35, 8-9. 114. Bissell D.M., Cores G.J., Laskin D.L., Hoofnage J.H. Druginduced liver injury: mechanism and test systems. Hepatology. 2001, 33, 1009-1013. 115. Morgan E.T. Regulation of cytochrome p450 by inflammatory mediators: why and how? Drug Metab Dispos. 2001, 29, 207-212. 116. Chin K., Kong A.N. Application of DNA microarrays in pharmacogenomics and toxicogenomics. Pharm Res. 2002, 19, 1773-1778. 117. Thomson R.K., Arthur M.J. Mechanisms of liver cell damage and repair. Eur J Gastroenterol Hepatol. 1999, 11, 949-955. 118. Riordan S.M., Williams R. Mechanisms of hepatocyte injury, multiorgan failure, and prognostic criteria in acute liver failure. Semin Liver Dis. 2003, 23, 203-215. 119. Ding W.X., Yin X.M. Dissection of the multiple mechanisms of TNF-alpha-induced apoptosis in liver injury. J Cell Mol Med. 2004, 8, 445-454. 120. Øàãèäóëèí Ì.Þ, Ïðîòèâîèøåìè÷åñêàÿ çàùèòà ïå÷åíî÷íîãî òðàíñïëàíòàíòà ñ ïîìîùüþ ëèïèíà âîäîðàñòâîðèìîãî ïðåïàðàòà ëèïèäíîé ïðèðîäû. Àâòîðåôåðàò äèññ. êàíä. Ì. 2005 ã. 193 6. ÌÅÌÁÐÀÍÍÛÅ ÔÅÐÌÅÍÒÍÛÅ ÑÈÑÒÅÌÛ: ÈÕ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÅ È ÐÅÏÀÐÀÖÈß 6.1. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì áèîìåìáðàí. Ïîâðåæäåíèÿ áèîìåìáðàí è ñîïðÿæåííûõ ñ íèìè ôóíêöèé áîëüøèíñòâà èíòåãðàëüíûõ è ïðèìåìáðàííûõ áåëêîâ, âêëþ÷àÿ ðåöåïòîðû, òðàíñïîðòíûå è ñòðóêòóðîîáðàçóþùèå áåëêè, ôåðìåíòû è ôåðìåíòíûå ñèñòåìû, êàê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, òàê è ìåìáðàí ðàçëè÷íûõ ñóáêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, íàðóøàþò òå÷åíèå ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ è ôóíêöèîíèðîâàíèå êëåòêè â öåëîì.  ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ, äîêàçûâàþùèõ, ÷òî ýôôåêòû ÏÎË ëåæàò â îñíîâå ìíîãèõ ïîâðåæäàþùèõ ìåõàíèçìîâ, âêëþ÷àÿ ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí è âñòðîåííûõ â íèõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Èíòåðåñ ê ýòèì ïðîöåññàì îñîáåííî âîçðîñ â ñâÿçè ñ âûÿñíåíèåì èõ ðîëè â ïàòîãåíåçå ìíîãèõ çàáîëåâàíèé [1]. Îáðàáîòêà ìåìáðàííûõ ïðåïàðàòîâ in vitro ðåàãåíòàìè, óäàëÿþùèìè èëè ïîâðåæäàþùèìè ìåìáðàííûå ôîñôîëèïèäû (ýêñòðàêöèÿ îðãàíè÷åñêèìè ðàñòâîðèòåëÿìè, äåçîêñèõîëàòîì èëè äåéñòâèå ôîñôîëèïàç) ïðèâîäèò ê ðåçêîé èíàêòèâàöèè ìåìáðàííîñâÿçàííûõ ôåðìåíòîâ. In vivo ïîä äåéñòâèåì ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ÏÎË. Âçàèìîäåéñòâèå ïðîäóêòîâ ÏÎË ñ áåëêîâûìè ñòðóêòóðàìè ïðèâîäèò ê èíàêòèâàöèè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ è ôåðìåíòíûõ êîìïëåêñîâ, òàêèõ êàê ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçà, öèòîõðîì Ð450, òðàíñïîðòíûå ÀÒÔ-àçû, àäåíèëàòöèêëàçà, ïåðåíîñ÷èêè ýëåêòðîíîâ äûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé è äð. [2]. Íàèáîëåå ÷óâñòâèòåëüíû ê ïåðåêèñíîìó ïîâðåæäåíèþ ìåìáðàííûå ôåðìåíòû, ñîäåðæàùèå SÍ-ãðóïïû â àêòèâíîì öåíòðå, â ïåðâóþ î÷åðåäü Ca2+-ÀÒÔàçû. Èõ èíàêòèâàöèÿ èãðàåò áîëüøóþ ðîëü â ïàòîëîãèè êëåòêè, òàê êàê âûçûâàåò çàìåäëåíèå "îòòîêà" èîíîâ êàëüöèÿ èç êëåòêè, âûðàâíèâàíèå êîíöåíòðàöèé èîíîâ Ñà2+ âî âíóòðè- è ìåæêëåòî÷íîì ïðîñòðàíñòâå, íàðóøåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî ãîìåîñòàçà è ðàçâèòèå ïîâðåæäåíèé âíóòðèêëåòî÷íûõ è ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàí (ñì. ãëàâó 4).  çàâèñèìîñòè îò îáëàñòè ïîðàæåíèÿ ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà äâå ãðóïïû: (1) ïîâðåæäåíèå ñàìîãî ôåðìåíòíîãî áåëêà è (2) ïîâðåæäåíèå ìèêðîîêðóæåíèÿ ôåðìåíòà, âëèÿþùåãî íà àêòèâíîñòü ïîñëåäíåãî. Ïîìèìî ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, â ïîñëåäíèå ãîäû â êà÷åñòâå ïðè÷èíû ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòíûõ áåëêîâ îòìå÷àþò òàêæå ãëèêèðîâàíèå (íàïðèìåð, ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå) [3]. Ïðè ýòîì â îðãàíèçìå â êà÷åñòâå êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèè ìîæåò íàáëþäàòüñÿ íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ãåíîâ 194 ôåðìåíòîâ è ñîîòâåòñòâåííîå èçìåíåíèå èõ êîëè÷åñòâà.  ÷àñòíîñòè, ýòî ïîêàçàíî äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ìûøå÷íîé òêàíè ïðè àëêîãîëüíîé ìèîïàòèè. Ïàòîëîãè÷åñêîå óâåëè÷åíèå êàê êîëè÷åñòâà, òàê è àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ñâÿçûâàþò ñ êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèåé íà èíäóöèðîâàííûå àëêîãîëåì ìåìáðàííûå ïîâðåæäåíèÿ, âûçâàííûå îáðàçîâàíèåì àääóêòîâ ìåìáðàííûõ áåëêîâ ñ àöåòàëüäåãèäîì [4]. Íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ãåíîâ ôåðìåíòîâ (ñ ñîîòâåòñòâóþùèì ïîâûøåíèåì ñèíòåçà) ïîêàçàíî è äëÿ ïðèìåìáðàííûõ ("çàÿêîðåííûõ") ñåðèíîâûõ ïðîòåàç â óñëîâèÿõ îïóõîëåâîãî ðîñòà.  íîðìàëüíûõ êëåòêàõ àêòèâíîñòü ýòèõ ôåðìåíòîâ íå îáíàðóæèâàåòñÿ [5]. Ïîâðåæäåíèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ íàáëþäàëè â êëåòêàõ ìèîêàðäà ïðè èøåìèè è ðåïåðôóçèè. Ïðè ýòîì ïðîèñõîäèëî ðàçîáùåíèå îñîáåííî âàæíûõ äëÿ ñîêðàòèòåëüíîé äåÿòåëüíîñòè ìèîêàðäà Ñà2+- è Na+,K+-ÀÒÔàç - â ðåçóëüòàòå êàê àíîêñèè, òàê è äåéñòâèÿ ñóïåðîêñèäîâ, ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, è ïåðîêñèíèòðèòîâ, îáðàçóþùèõñÿ ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñóïåðîêñèäîâ ñ îêñèäîì àçîòà [6].  íàñòîÿùåå âðåìÿ âîçäåéñòâèå ÀÔÊ ñ÷èòàþò óíèâåðñàëüíûì ìåõàíèçìîì ïîâðåæäåíèÿ êàê áåëêîâûõ, òàê è ëèïèäíûõ êîìïîíåíòîâ ìåìáðàíû [7] (ñì. ãëàâó 4). Îñîáåííî ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ â ýòîì îòíîøåíèè ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ëåãêî äèôôóíäèðóþùåé ìîëåêóëû Í2Î2. Îêèñëèòåëüíûå ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ñóììèðóþòñÿ ñ èíãèáèðóþùèì äåéñòâèåì íà èõ àêòèâíîñòü èçìåíåíèé ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ ëèïèäíîãî ñëîÿ ìåìáðàí (âêëþ÷àÿ àííóëÿðíûå ëèïèäû), êîòîðûå ïðîèñõîäÿò çà ñ÷åò ïðîöåññîâ ÏÎË è âîçäåéñòâèÿ ýíäîãåííûõ ôîñôîëèïàç [7, 8] (ñì. ãëàâó 4).  îñíîâå íàðóøåíèÿ àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ïðè ïîâðåæäåíèè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ ëåæàò ðàçëè÷íûå ìåõàíèçìû. Îíè çàâèñÿò îò ñëîæíîñòè ñòðîåíèÿ ôåðìåíòà, åãî ëîêàëèçàöèè â ìåìáðàíå, õàðàêòåðà êàòàëèçèðóåìîé ðåàêöèè è äð. Òàê, äëÿ ôåðìåíòîâ, ïðåâðàùàþùèõ ãèäðîôîáíûå ñóáñòðàòû, ôîñôîëèïèäíûé áèñëîé ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìîé ñðåäîé äëÿ ðåàêöèè è åãî èçìåíåíèÿ (íàïðèìåð, óñèëåíèå ðèãèäíîñòè ïîä äåéñòâèåì ÏÎË), ñóùåñòâåííî âëèÿþò íà ýôôåêòèâíîñòü ôåðìåíòàòèâíûõ ðåàêöèé [9]. Äëÿ îëèãîìåðíûõ ôåðìåíòîâ ìåìáðàííàÿ ëèïèäíàÿ ìàòðèöà âûïîëíÿåò ðîëü "îðãàíèçàòîðà" ñóáúåäèíèö, ïîýòîìó åå ïîâðåæäåíèå íàðóøàåò ïðîñòðàíñòâåííîå âçàèìîðàñïîëîæåíèå ïðîòîìåðîâ è êîîðäèíàöèþ îòäåëüíûõ çâåíüåâ ôåðìåíòàòèâíîãî ïðîöåññà. Ýòî ïîêàçàíî, íàïðèìåð, äëÿ ìèêðîñîìàëüíîé ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû, ñîñòîÿùåé èç êàòàëèòè÷åñêîãî è òðàíñïîðòíîãî áåëêîâ, äëÿ ïðîÿâëåíèÿ 195 àêòèâíîñòè êîòîðûõ íåîáõîäèìû ÔÕ è ÔÝ ñîîòâåòñòâåííî; ãèäðîëèç ýòèõ ÔË ôîñôîëèïàçàìè èíàêòèâèðóåò äàííûé ôåðìåíò [10]. Êëàññè÷åñêèì ïðèìåðîì ìåìáðàííîãî ëèïèä-çàâèñèìîãî ôåðìåíòà ÿâëÿåòñÿ Na+,K+-ÀÒÔàçà, õîòÿ òðåáîâàíèÿ ê ëèïèäíîìó îêðóæåíèþ äëÿ íåå íå ñòîëü ñïåöèôè÷íû è îãðàíè÷èâàþòñÿ íåîáõîäèìîñòüþ îáåñïå÷åíèÿ àìôèôèëüíîñòè îêðóæåíèÿ è íèçêîé ìèêðîâÿçêîñòè [11]. Ýòîò ôåðìåíò âêëþ÷àåò êàê âîäîðàñòâîðèìûå, òàê è òðàíñìåìáðàííûå ñóáúåäèíèöû, êîòîðûå ïðè ïîâðåæäåíèÿõ ìåìáðàíû ðàçîáùàþòñÿ, èíàêòèâèðóÿ òåì ñàìûì ôåðìåíò. Íàðóøåíèå ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèÿ ëèïèäíîãî áèñëîÿ ìîæåò òàêæå çàòðóäíÿòü âçàèìîäåéñòâèå ôåðìåíòà ñ ñóáñòðàòàìè, íàõîäÿùèìèñÿ â âîäíîé ôàçå [9]. Âîçìîæíî è ïðÿìîå âîçäåéñòâèå ïîâðåæäåííîãî ó÷àñòêà ìåìáðàíû íà ôåðìåíò, ïðèâîäÿùåå ê èçìåíåíèþ ïîëîæåíèÿ àêòèâíîãî öåíòðà è åãî äîñòóïíîñòè äëÿ ñóáñòðàòà. Ýòîò ôàêò îñîáåííî âàæåí äëÿ òàêèõ èíòåãðàëüíûõ ìåìáðàííûõ áåëêîâ-ôåðìåíîâ, êàê β-ãëþêîöåðåáðîçèäàçà, ÓÄÔãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçà, ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçà, ñòåàðîèë-ÊîÀäåñàòóðàçà è ðÿäà äðóãèõ [12]. Àíàëîãè÷íûì âîçäåéñòâèÿì ïðè ïîâðåæäåíèÿõ ìåìáðàí ïîäâåðãàþòñÿ è äðóãèå ìåìáðàííûå áåëêè, ó÷àñòâóþùèå â òðàíñìåìáðàííîì ïåðåíîñå âåùåñòâ è ëèãàíä-ðåöåïòîðíûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ, ÷òî ïðèâîäèò ê íàðóøåíèþ ôóíêöèè êëåòîê. Íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò âîçìîæíîñòü àäàïòàöèè êëåòêè, âêëþ÷àÿ ðàáîòó ìåìáðàííûõ áåëêîâ, ê òàêèì ïîâðåæäåíèÿì çà ñ÷åò ðåàêöèé, îñóùåñòâëÿåìûõ PK C, ÌÀÐÊ è ìèòîõîíäðèàëüíûìè ÀÒÔ-çàâèñèìûìè êàëüöèåâûìè êàíàëàìè. Îòêðûòèå ýòèõ êàíàëîâ, íàïðèìåð, âûçûâàåò äåïîëÿðèçàöèþ ìèòîõîíäðèé, ñíèæàÿ èçáûòî÷íîå íàêîïëåíèå Ñà2+ ïðè ðåïåðôóçèè, ÷òî ñïîñîáñòâóåò ðåãåíåðàöèè êëåòîê ìèîêàðäà [13].  ñëó÷àå ãëóáîêî çàøåäøåãî ïðîöåññà íàðóøåíèå àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ìîæåò âûçâàòü òàêèå èçìåíåíèÿ êëåòî÷íîãî ìåòàáîëèçìà, êîòîðûå ïðèâåäóò ê íåêðîòè÷åñêîé èëè àïîïòîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè è ðàçâèòèþ ïàòîëîãèè â öåëîì.  ïîñëåäíèå ãîäû îñîáîå âíèìàíèå óäåëÿåòñÿ ðîëè ïðîöåññîâ âíóòðèêëåòî÷íîé ñèãíàëèçàöèè â ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Ýòî ïîêàçàíî, â ÷àñòíîñòè, äëÿ êëþ÷åâîãî ôåðìåíòà ïðîöåññîâ êîàãóëÿöèè êðîâè òðàíñìåìáðàííîãî ãëèêîïðîòåèíà, íàçûâàåìîãî "òêàíåâûì ôàêòîðîì". Ýòîò ôåðìåíò îáíàðóæåí â àäâåíòèöèè êðîâåíîñíûõ ñîñóäîâ è âî âíóòðåííåé îáëàñòè àòåðîñêëåðîòè÷åñêîé áëÿøêè. 196 Òêàíåâûé ôàêòîð, ýêñïðåññèðîâàííûé íà ìåìáðàíàõ ìîíîöèòîâ è ìàêðîôàãîâ, ìîæåò ó÷àñòâîâàòü â âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññàõ è â äåñòàáèëèçàöèè áëÿøêè. Îòìå÷àþò åãî ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê èíãèáèòîðàì, ñèíòåçèðóåìûì ýíäîòåëèàëüíûìè êëåòêàìè ñîñóäîâ â ïðîöåññå ñèãíàëèíãà [14].  áîëüøèíñòâå ðàáîò, îïóáëèêîâàííûõ â îñíîâíîì â 80õ-90-õ ãîäàõ ïðîøëîãî âåêà, ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü âîññòàíîâëåíèÿ àêòèâíîñòè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Íàïðèìåð, äîáàâëåíèå ÔÕ èëè ñìåñè ÔÕ è ëèçîÔÕ ê ïðåïàðàòàì ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñû, îáðàáîòàííûõ in vitro ôîñôîëèïàçàìè À èëè Ñ, âîññòàíàâëèâàëî àêòèâíîñòü Ñà2+-ÀÒÔàçû, Na+,K+-ÀÒÔàçû, ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû, öèòîõðîì b5-ðåäóêòàçû, ÓÄÔ-ãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçû, ñòåàðîèëÊîÀ-äåñàòóðàçû, ëèïàçû, ôåíèëàëàíèíãèäðîêñèëàçû; ïîäîáíûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è äëÿ ñôèíãîìèåëèíàçû ìîçãà, β-îêñèáóòèðàòäåãèäðîãåíàçû ìèòîõîíäðèé ñåðäöà áûêà, àöåòèëõîëèíýñòåðàçû ýðèòðîöèòîâ [15, 16].  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ âîññòàíîâëåíèå ôîñôîëèïèäàìè àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, ïî-âèäèìîìó, íîñèò íåñïåöèôè÷åñêèé õàðàêòåð, ò.å. äëÿ áîëüøèíñòâà ôåðìåíòîâ íå ñóùåñòâóåò ñïåöèôè÷åñêîé ïîòðåáíîñòè â îïðåäåëåííîì òèïå ÔË, è ðåïàðèðóþùóþ ôóíêöèþ ìîãóò âûïîëíÿòü ðàçíûå òèïû ÔË è èõ ñìåñè [17]. Äëÿ àêòèâíîñòè æå íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ îêàçàëñÿ âàæíûì æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ äîáàâëÿåìûõ ÔË, ÷òî áûëî ïîêàçàíî äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà [18]. Àâòîðû ïîëó÷àëè ÷àñòè÷íî î÷èùåííóþ ÀÒÔàçó â êîìïëåêñå ñ ôîñôîëèïèäàìè, à çàòåì ìîäèôèöèðîâàëè âõîäÿùèå â ñîñòàâ êîìïëåêñà ÔË. Ïîêàçàíî, ÷òî çàìåíà ñîáñòâåííûõ ÔË íà ÄÏÔÕ ñíèæàëà àêòèâíîñòü â 8 ðàç ïî ñðàâíåíèþ ñ ÷àñòè÷íî äåëèïèäèðîâàííûì ôåðìåíòîì, à ïðè çàìåíå íà äèîëåîèë-ÔÕ ñêîðîñòü ðåàêöèè, íàîáîðîò, âîçðàñòàëà. Äðóãèå àâòîðû òàêæå îòìå÷àþò ñóùåñòâåííîå òðåáîâàíèå ê âûñîêîé ïîäâèæíîñòè óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, à â ðÿäå ñëó÷àåâ - ê íàëè÷èþ îïðåäåëåííîãî ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà [19].  ýêñïåðèìåíòàõ in vivo áûëà ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü âîññòàíîâëåíèÿ ìåìáðàí êëåòîê ïå÷åíè ñ ïîìîùüþ äèåòû, ñîäåðæàùåé íåíàñûùåííûå ÔË. Òàê, äèåòà ñ ðàñòèòåëüíûì ÔÕ ïðåäîòâðàùàåò ðàçâèòèå ó æèâîòíûõ õîëåñòàçà, âûçâàííîãî öèêëîñïîðèíîì À; åãî äåéñòâèå ñâÿçàíî ñ èíãèáèðîâàíèåì ÀÒÔàç (Na+,K+-, Ca2+-, Mg2+-) [20]. Ïîäîáíûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è äëÿ äðóãèõ, ìåíåå èçó÷åííûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Íàïðèìåð, îòìå÷àåòñÿ àêòèâèðóþùèé ýôôåêò êèñëûõ ôîñôîëèïèäîâ (ÔÑ, ÔÈ è ÔÊ) íà ìèîçèíîâóþ ôîñôàòàçó òêàíè ãîðòàíè [21]. Ïîêàçàíà 197 ñïîñîáíîñòü àíèîííûõ ÔË (îñîáåííî ÔÑ) àêòèâèðîâàòü 5ìîíîäåãèäðîãåíàçó ïëàöåíòû ÷åëîâåêà [22], à òàêæå äåëèïèäèðîâàííóþ ìàëàòäåãèäðîãåíàçó ìèêîáàêòåðèé.  ïîñëåäíåì ñëó÷àå îáðàçóåòñÿ àêòèâíûé êîìïëåêñ ôåðìåíòà ñî ñìåñüþ êàðäèîëèïèíà è ÔÝ [23]. Ñîîáùàåòñÿ òàêæå îá àêòèâèðóþùåì äåéñòâèè àíèîííûõ ÔË íà ïåðèôåðè÷åñêèå ìàêðîôàãè [24]. Íà äîáàâëåíèå ôîñôîëèïèäîâ ðåàãèðóåò è ñîïðÿæåííàÿ ñ G-áåëêîì ðåöåïòîðíàÿ êèíàçà [25]. Òàêèì îáðàçîì, ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí âûçûâàþò èçìåíåíèÿ â àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê íàðóøåíèþ êëåòî÷íûõ ôóíêöèé è ðàçâèòèþ ïàòîëîãèè. Äîáàâëåíèå ôîñôîëèïèäîâ, êàê ïîêàçàíî â ðÿäå ðàáîò, ñïîñîáñòâóåò âîññòàíàâëåíèþ àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. 6.2. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ìåìáðàí ÝÐ êàê ïîêàçàòåëü ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè è èõ ðåïàðàöèÿ ôîñôîëèïèäàìè.  ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ïîêàçàíî ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ðàçëè÷íûõ òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ íà ìåìáðàíû ÝÐ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, êëåòîê ïå÷åíè, è çàùèòíîå äåéñòâèå ÔÕ íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû, â ÷àñòíîñòè íà öèòîõðîì Ð450 - êëþ÷åâîé ôåðìåíò ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû ïå÷åíè, ó÷àñòâóþùåé â äåòîêñèêàöèîííûõ è áèîñèíòåòè÷åñêèõ ïðîöåññàõ. Èçó÷åíèå ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ, âçàèìîñâÿçè ïîâðåæäåíèÿ ôîñôîëèïèäíîãî êîìïîíåíòà è ñîïóòñòâóþùåé èíàêòèâàöèè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøåé ïðåäïîñûëêîé äëÿ ïîèñêà ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí [26 - 31] Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè íàêîïëåíî ìíîãî äàííûõ, ñâèäåòåëüñòâóþùèõ î òîì, ÷òî ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè, ñîïðîâîæäàþùèåñÿ èíàêòèâàöèåé öèòîõðîìà Ð450 è îäíîâðåìåííûì íàðóøåíèåì ïðîöåññîâ ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ ýêçîãåííûõ (ëåêàðñòâà, ÿäû, ïèùåâûå äîáàâêè, êàíöåðîãåíû è ò. ä.) è ýíäîãåííûõ ñóáñòðàòîâ (ñòåðîèäû, õîëåñòåðèí, ïðîñòàãëàíäèíû, æèðíûå êèñëîòû), âûçûâàþò íàðóøåíèå ôóíêöèé ïå÷åíè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ [29, 32-35]. Ìîíîîêñèãåíàçíàÿ ñèñòåìà ïå÷åíè îêàçàëàñü ÷óâñòâèòåëüíîé ê äåéñòâèþ öåëîãî ðÿäà òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ, òàêèõ êàê ÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä (ÑÑl4), ãåëèîòðèí, òèîàöåòàìèä, àëêèëèðóþùèå ñîåäèíåíèÿ, ðàäèàöèÿ è ò. ä. [29, 36-39]. Õðîíè÷åñêîå ââåäåíèå æèâîòíûì ÑÑl4 øèðîêî èñïîëüçóåòñÿ â êà÷åñòâå ìîäåëè ïðè èññëåäîâàíèÿõ ðàçâèòèÿ ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè. Îñîáåííîñòè ïðîÿâëåíèÿ äåéñòâèÿ ýòîãî ÿäà, äàâíî çàèíòåðåñîâàâøèå èññëåäîâàòåëåé, çàêëþ÷àþòñÿ â åãî âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòè. Èçâåñòíî, ÷òî êëþ÷åâûì èëè ðåøàþùèì â ïîâðåæäàþùåì ýôôåêòå ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ 198 âîçäåéñòâèå åãî ìåòàáîëèòîâ, âåðîÿòíåå âñåãî, ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, êàê íàèáîëåå ðåàêöèîííîñïîñîáíûõ ìîëåêóë. Îñíîâíûì ìåõàíèçìîì ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ ýòîãî ÿäà íà ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ óñêîðåííîå îáðàçîâàíèå ïåðåêèñåé ëèïèäîâ. Ïðîöåññû ïðåâðàùåíèÿ ÑÑl4 ïðîòåêàþò â ìåìáðàíàõ ÝÐ ïå÷åíè â ïðèñóòñòâèè ÍÀÄÔÍ [29, 38]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ââåäåííûé ýêñïåðèìåíòàëüíûì æèâîòíûì ÑÑl4 îáíàðóæèâàåòñÿ âî âñåõ ìåìáðàíàõ ïå÷åíî÷íîé êëåòêè, íî íàèáîëüøåå åãî êîëè÷åñòâî íàõîäèòñÿ â ìåìáðàíàõ ÝÐ. ÑÑl4 ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, êàê ñ àïîôåðìåíòîì, òàê è ñ æåëåçîì ãåìà, ïî òèïó ÑÎ. Ñïåêòðàëüíàÿ êîíñòàíòà ñâÿçûâàíèÿ ÑÑl4 ñ ãèäðîôîáíûì ó÷àñòêîì ñîñòàâëÿåò 0,5 ìÌ, à ñ æåëåçîì - 0,4 ìÌ [40]. Ñâÿçûâàíèå ÿäà ñ öèòîõðîìîì Ð450 èìååò ðåøàþùåå çíà÷åíèå â ìåõàíèçìå åãî ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ, òàê êàê ÑÑl4 â ïðèñóòñòâèè ÍÀÄÔÍ âîññòàíàâëèâàåòñÿ äî òðèõëîðìåòèëîâîãî ðàäèêàëà (ÑÑl•3), êîòîðûé èãðàåò ðîëü èíèöèàòîðà ïðîöåññîâ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ÏÍÆÊ â ìåìáðàíàõ. Ïîâðåæäåíèå ñàìîãî öèòîõðîìà Ð450 ïðîèñõîäèò çà ñ÷åò äâóõ âçàèìîäîïîëíÿþùèõ ìåõàíèçìîâ: (1) íåïîñðåäñòâåííîãî ïîâðåæäåíèÿ áåëêà ÑÑl•3 ðàäèêàëàìè è (2) ïîâðåæäåíèÿ åãî ëèïèäíîãî îêðóæåíèÿ â ìåìáðàíå ÝÐ [31, 39]. Ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçîâàííûé íà öèòîõðîìå Ð450 ðàäèêàë ÑÑl•3 ìîæåò àòàêîâàòü äâîéíûå ñâÿçè íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ("ìåòèëåíîâûå ìîñòèêè"), ïðèñîåäèíÿòü àòîì âîäîðîäà, ïåðåõîäÿ ïðè ýòîì â èíåðòíóþ ìîëåêóëó õëîðîôîðìà (ÑÍÑl3) è ãåíåðèðóÿ ëèïèäíûå ðàäèêàëû; ïîñëåäíèå, èíèöèèðóÿ öåïü ïðîöåññîâ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ, ïîâðåæäàþò ìåìáðàíû (ñì. ãëàâó 4) [37]. Î âîññòàíîâëåíèè ÑÑl4 öèòîõðîìîì Ð450 ñ ó÷àñòèåì ÍÀÄÔÍçàâèñèìîé öåïè ïåðåíîñà ýëåêòðîíîâ ñâèäåòåëüñòâóþò ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñïåöèôè÷íûå èíãèáèòîðû öèòîõðîìà Ð450, òàêèå êàê öèàíèä íàòðèÿ èëè SKF-525 À (β,βäèýòèëàìèíîýòèëäèôåíèëïðîïèëàöåòàò), îêàçûâàþò óãíåòàþùåå äåéñòâèå íà ñêîðîñòü ïðåâðàùåíèÿ ÑÑl4 â ïðåïàðàòàõ ìèêðîñîì è â îïûòàõ íà æèâîòíûõ [37, 41]. Òàêæå áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî æèâîòíûå, íàõîäÿùèåñÿ íà ìàëîáåëêîâîé äèåòå, à òàêæå íîâîðîæäåííûå êðûñÿòà è ýìáðèîíû ÷åëîâåêà, â ïå÷åíè êîòîðûõ ñíèæåíî ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450, îáëàäàþò íèçêîé ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ ê äåéñòâèþ ÑÑl4 [42].  òî æå âðåìÿ, èíäóêöèÿ ÍÀÄÔÍ-ñïåöèôè÷íîé ñèñòåìû ìåòàáîëèçìà è óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè öèòîõðîìà Ð450 ïðè ââåäåíèè ôåíîáàðáèòàëà è áåíçïèðåíà, ðåçêî óñèëèâàþò òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÑÑl4 [29, 36, 37]. Ïðîîêñèäàíòíîå äåéñòâèå ðàäèêàëîâ, îáðàçóþùèõñÿ èç ÑÑl4, áûëî ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîäòâåðæäåíî ïðè èññëåäîâàíèè ñêîðîñòè íàêîïëåíèÿ ìàëîíîâîãî äèàëüäåãèäà â ÍÀÄÔÍ- è àñêîðáàò-çàâèñèìûõ ñèñòåìàõ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ÏÍÆÊ â ìèêðîñîìàõ. Ââåäåíèå â èíêóáàöèîííóþ ñìåñü òåòðàõëîðìåòàíà ñîïðîâîæäàëîñü ïîÿâëåíèåì, â ñëó÷àå ÍÀÄÔÍçàâèñèìîé ñèñòåìû ÏÎË, ïåðåêèñíûõ ïðîäóêòîâ âñëåäñòâèå ðåçêîãî 199 óñèëåíèÿ ðåàêöèé ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ÏÍÆÊ ÑÑl•3 ðàäèêàëàìè [32, 33, 35]. Òàêèì îáðàçîì, îäíèì èç âàæíåéøèõ ýôôåêòîâ ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ ïðîîêñèäàíòíîå äåéñòâèå åãî ìåòàáîëèòîâ è èíòåíñèôèêàöèÿ ïðîöåññîâ ÏÎË.  ïå÷åíè óæå â ðàííèå ñðîêè ïîñëå ââåäåíèÿ ÿäà îáíàðóæèâàþòñÿ ïðîäóêòû ðåàêöèé ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ è ðåçêîå ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ àðàõèäîíîâîé è äåêîçîãåêñàåíîâîé êèñëîò â sn-2 ïîëîæåíèè îñíîâíûõ ôîñôîëèïèäíûõ êîìïîíåíòîâ ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà - ÔÕ è ÔÝ. Îêàçàëîñü òàêæå, ÷òî äàæå íåáîëüøîãî ñíèæåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ýòèõ äâóõ íåíàñûùåííûõ êèñëîò (íà 8-10%) äîñòàòî÷íî äëÿ âûðàæåííîãî (50%-íîãî) èíãèáèðîâàíèÿ äðóãîãî ìèêðîñîìàëüíîãî ìåìáðàííîãî ôåðìåíòà - ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû [43]. Ïîêàçàíî, ÷òî ýòîò ôåðìåíò òåðÿåò ñâîþ àêòèâíîñòü ïîä âëèÿíèåì ÑÑl4 êàê in vitro, òàê è in vivo [44], è ýòîò ôàêò ñ÷èòàþò ñëåäñòâèåì íàðóøåíèÿ ñòðóêòóðû ãèäðîôîáíûõ ó÷àñòêîâ ìåìáðàí â ïðîöåññå ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ÔË, êîòîðîå ìîæåò áûòü ÷àñòè÷íî âîññòàíîâëåíî ïóòåì èíêóáàöèè ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäàìè. Òàê, íà ðèñ. 6.2.1 ïîêàçàíî, ÷òî àêòèâíîñòü ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû â ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ñíèæåíà è ñîñòàâëÿåò ~ 25% îò àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ. Èíêóáàöèÿ ìèêðîñîì ïå÷åíè îòðàâëåííûõ æèâîòíûõ ñ ôîñôîëèïèäàìè (ÔÕ) âîññòàíàâëèâàåò àêòèâíîñòü ýòîãî ôåðìåíòà, íî íå ïîëíîñòüþ, à ~ äî 70% îò êîíòðîëÿ [27, 28, 32, 38, 45]. Ðèñ. 6.2.1. Àêòèâíîñòü ãëþêîçî-6 6-ô ôîñôàòàçû ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑI4, è åå âîññòàíîâëåíèå ïîñëå èíêóáàöèè in vitro ñ ôîñôîëèïèäàìè Êðûñàì âíóòðèáðþøèííî îäíîêðàòíî ââîäèëè CCl4 â äîçå 0,1 ìë/100 ã ìàññû. ×åðåç 60 ìèí àíàëîãè÷íî ââîäèëè ôîñôîëèïèäû â âèäå ëèïîñîì â äîçå 10 ìã/100 ã ìàññû. ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè.  ìèêðîñîìàõ îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû, â ñðàâíåíèè ñ òàêîâîé â ìèêðîñîìàõ çäîðîâûõ æèâîòíûõ [45]. 1 - êîíòðîëü; 2 - ââåäåíèå CCl4; 3 - ââåäåíèå CCl4 è ôîñôîëèïèäîâ â âèäå ëèïîñîì. 200 Àíàëèç ðåçóëüòàòîâ èññëåäîâàíèé âëèÿíèÿ ÑÑl4 íà êîìïîíåíòû ýëåêòðîí-òðàíñïîðòíûõ ñèñòåì ïîêàçûâàåò, ÷òî íàèáîëåå ÷óâñòâèòåëüíûì ê äåéñòâèþ äàííîãî ÿäà ÿâëÿåòñÿ öèòîõðîì Ð450. Äðóãèå êîìïîíåíòû ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû, ÍÀÄÔÍçàâèñèìûå ðåäóêòàçû, èçìåíÿþòñÿ â ãîðàçäî ìåíüøåé ñòåïåíè. Ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ó æèâîòíûõ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4, íàñòóïàåò î÷åíü áûñòðî è õîðîøî êîððåëèðóåò ñ ïàäåíèåì åãî äåìåòèëàçíîé àêòèâíîñòè. Òàêîå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå íà öèòîõðîì Ð450 çàâèñèò îò ïðîîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà ÑÑl4, î ÷åì ñâèäåòåëüñòâóåò ïàðàëëåëüíîå íàðàñòàíèå ñîäåðæàíèÿ ïðîäóêòîâ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ [30 - 33]. Îäíàêî, êðîìå ýòîãî ìåõàíèçìà, äîêàçàíà âîçìîæíîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 âñëåäñòâèå ïðÿìîãî âîçäåéñòâèÿ íà íåãî ïðîäóêòîâ ìåòàáîëèçìà ýòîãî ÿäà. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî àíòèîêñèäàíòû, ïðåïÿòñòâóÿ ðàçâèòèþ â ïå÷åíè íåêðîçà è æèðîâîé äèñòðîôèè, íå ïðåäîòâðàùàþò óìåíüøåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 è ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû - ôåðìåíòîâ, êîòîðûå ïåðâûìè ïîäâåðãàþòñÿ äåéñòâèþ äàííîãî ÿäà.  òî æå âðåìÿ SKF 525A íàèáîëåå òèïè÷íûé èíãèáèòîð ìèêðîñîìàëüíîãî ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ è ìåòàáîëèçìà ÑÑl4 - îêàçûâàåò âûðàæåííîå çàùèòíîå äåéñòâèå íà öèòîõðîì Ð450, íî ãîðàçäî ìåíüøåå - íà íåêðîç è æèðîâóþ èíôèëüòðàöèþ. Ýòè äàííûå ìîæíî îáúÿñíèòü òåì, ÷òî äåéñòâèå òåòðàõëîðìåòàíà ñâÿçàíî íå òîëüêî ñ îáðàçîâàíèåì âûñîêîðåàêöèîííûõ ëèïèäíûõ ïåðåêèñåé, íî è ñ ïðÿìûì âëèÿíèåì ìåòàáîëèòîâ ÑÑl4, è, â ïåðâóþ î÷åðåäü, ÑÑl•3 ðàäèêàëà íà ìåìáðàííûå ôåðìåíòû [38, 40, 46]. Òàêèì îáðàçîì, ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè è èõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ïðè îòðàâëåíèè ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ ïðèìåðîì ïàòîëîãèè, ïðè êîòîðîé îáðàçóþùèåñÿ â ìèêðîñîìàëüíîé ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìå ñâîáîäíîðàäèêàëüíûå ïðîäóêòû âûçûâàþò íàðóøåíèÿ ëèïèäíîãî è áåëêîâîãî êîìïîíåíòà ìåìáðàí, âñëåäñòâèå ÷åãî íàðóøàåòñÿ è àêòèâíîñòü âñåé ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû. Íàðóøåíèå àêòèâíîñòè ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû â ñâîþ î÷åðåäü ïðèâîäèò ê äèñôóíêöèè ìåìáðàííûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ ñòðóêòóð ãåïàòîöèòîâ, âêëþ÷àÿ ìèòîõîíäðèè, ÷òî óñèëèâàåò ïîâðåæäåíèå êëåòêè â öåëîì [47] (ñì. ãëàâó 4). Âîçìîæíîñòü ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ ìåòàáîëèòîâ, îáðàçóþùèõñÿ íà öèòîõðîìå Ð450, ïîêàçàíà è äëÿ äðóãîãî ãåïàòîòðîïíîãî ÿäà - ãåëèîòðèíà, êîòîðûé, ïîïàäàÿ ñ çåðíîì õëåáíûõ çëàêîâ â ïèùó ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ, ìîæåò âûçûâàòü òÿæåëûå ãåíåðàëèçîâàííûå îòðàâëåíèÿ è ïîðàæåíèÿ îòäåëüíûõ îðãàíîâ è ñèñòåì, îñîáåííî ïå÷åíè.  ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ââåäåíèå ãåëèîòðèíà ñîïðîâîæäàåòñÿ 201 ðàçâèòèåì òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, à ïðè õðîíè÷åñêîì îòðàâëåíèè öèððîçà ïå÷åíè, ÷òî ñâÿçàíî, êàê è â ñëó÷àå ñ ÑÑl4, ñ ïîâðåæäåíèåì öèòîõðîìà Ð450 [48]. Ïîä äåéñòâèåì ãåëèîòðèíà íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå ÍÀÄÔÍ-çàâèñèìîé ñêîðîñòè îêèñëåíèÿ ðàçëè÷íûõ ñóáñòðàòîâ ýòîãî ôåðìåíòà [39, 48]. Ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ïðè îòðàâëåíèè ãåëèîòðèíîì, òàê æå êàê è ÑÑl4, ïðîèñõîäèò ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà, ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîòåðåé èìè ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè. Ãåëèîòðèí ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, ñ âûñîêîé ñïåêòðàëüíîé êîíñòàíòîé ñðîäñòâà (Ês = 35 ìêÌ). Ïðè ýòîì ïðîèñõîäèò óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè ÏÎË â ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì ïå÷åíè îòðàâëåííûõ æèâîòíûõ [39]. Ñëåäîâàòåëüíî, ñòèìóëÿöèÿ ãåëèîòðèíîì ïðîöåññîâ ÏÎË ìåìáðàí ìîæåò áûòü îäíèì èç ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ è åãî ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû è ïðè èçó÷åíèè äåéñòâèÿ ôåíîáàðáèòàëà - èíäóêòîðà öèòîõðîìà Ð450 [49]. Äàííûå î âëèÿíèè ÑÑl4, ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà, ââåäåííûõ êðûñàì, íà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ñ ïðåâðàùåíèåì åãî â öèòîõðîì Ð420 ïðèâåäåíû íà ðèñ. 6.2.2. Êðûñàì-ñàìöàì (n=4 â êàæäîé ãðóïïå) ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,1 ìë/100 ã ìàññû, èëè ãåëèîòðèí ïî 20 ìã/100 ã, èëè â òå÷åíèå òðåõ äíåé ôåíîáàðáèòàë ïî 8 ìã/êã. ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè [49]. Ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ïðè 37îÑ [52]. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-ÍÑl áóôåðà, ðÍ 7,4. Îá èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ñóäèëè ïî ïîâûøåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè åãî êàðáîêñèêîìïëåêñà ïðè 420 íì. Ìåäëåííîå âîçðàñòàíèå âåëè÷èíû ∆À(420 - 450)/íìîëü Ð450 â ìèêðîñîìàõ êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ (êðèâàÿ 1) ñâèäåòåëüñòâóåò î ñòàáèëüíîñòè öèòîõðîìà Ð450 â íåïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàíàõ. Çäåñü è äàëåå (çà èñêëþ÷åíèåì îñîáî îãîâîðåííûõ ñëó÷àåâ) îøèáêà ñðåäíåé íå ïðåâûøàëà 5%. Ðèñ. 6.2.2. Âëèÿíèå ââåäåíîãî êðûñàì ÑÑl 4, ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà íà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 Îò÷åòëèâî âèäíî, ÷òî ïðè èíêóáàöèè èçîëèðîâàííûõ ìèêðîñîì ïå÷åíè ïðè òåìïåðàòóðå 37°Ñ íàáëþäàåòñÿ îáðàçîâàíèå íåàêòèâíîé ôîðìû ôåðìåíòà - öèòîõðîìà Ð420. Ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ôåðìåíòà ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ÑÑl 4 , ãåëèîòðèí è ôåíîáàðáèòàë, âî ìíîãî ðàç âûøå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè. Òàêèì îáðàçîì, âî âñåõ ñëó÷àÿõ îòðàâëåíèÿ 202 ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 ñëåäóåò ðàññìàòðèâàòü êàê ïîêàçàòåëü ïðîöåññîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí. Ìåòîä èçìåðåíèÿ ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûë â äàëüíåéøåì èñïîëüçîâàí äëÿ ìîíèòîðèíãà ïðîöåññà âîññòàíîâëåíèÿ ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ÝÐ ôîñôîëèïèäàìè [50]. Èñïîëüçîâàíèå ýòîãî òåñòà îêàçàëîñü ïåðñïåêòèâíûì ïðè èññëåäîâàíèè âëèÿíèÿ ðàçëè÷íûõ ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé íà ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó è íà ìåìáðàíû ÝÐ [51]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî èçó÷åíèå ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ÝÐ, âçàèìîñâÿçè ïîâðåæäåíèÿ ôîñôîëèïèäíîãî êîìïîíåíòà ñ ñîïóòñòâóþùåé èíàêòèâàöèåé ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ñîçäàëî ðåàëüíûå ïðåäïîñûëêè äëÿ ïîèñêà ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí. Ñ ïîìîùüþ îïèñàííîãî âûøå ìåòîäà îöåíêè ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûëî äîêàçàíî, ÷òî ëèïèäíûé áèñëîé îêàçûâàåò ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà àêòèâíîñòü ýòîãî ãåìîïðîòåèíà.  ÷àñòíîñòè, îáíàðóæåíî, ÷òî ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè âîññòàíîâëåííîãî öèòîõðîìà Ð450 ðåçêî çàìåäëÿåòñÿ ïðè âñòðàèâàíèè åãî â èñêóññòâåííûé áèñëîé, ñôîðìèðîâàííûé èç ÔÕ èëè èç ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ ôîñôîëèïèäîâ. Íàèáîëåå ñòàáèëüíûì äàííûé ôåðìåíò áûë â ïðèñóòñòâèè âåçèêóë, ïðèãîòîâëåííûõ èç ôîñôîëèïèäîâ ìåìáðàí ìèêðîñîì [28, 52]. Èñõîäÿ èç íåîáõîäèìîñòè ÔË äëÿ àêòèâíîñòè ðÿäà ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, áûëè ïðîâåäåíû ýêñïåðèìåíòû ïî èõ èñïîëüçîâàíèþ äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ÝÐ. Ìåìáðàíî-ðåïàðèðóþùåå äåéñòâèå ÔË îöåíèâàëè ïî èõ ñïîñîáíîñòè çàìåäëÿòü èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450. Îêàçàëîñü, ÷òî èíêóáàöèÿ ìèêðîñîì èç ïå÷åíè êðûñ, ïîäâåðãíóòûõ äåéñòâèþ ÷åòûðåõõëîðèñòîãî óãëåðîäà èëè ãåëèîòðèíà, ñ ôîñôàòèäèëõîëèíîâûìè ëèïîñîìàìè ïðèâîäèò ê ðåçêîìó çàìåäëåíèþ ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè äàííîãî ãåìîïðîòåèíà (ðèñ. 6.2.3) [51]. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, ïðåèíêóáàöèÿ ìèêðîñîì âûäåëåííûõ èç ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl 4 (À) èëè ãåëèîòðèíîì (Á), ñ ëèïîñîìàìè ïî÷òè â 2 ðàçà çàìåäëÿëà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450. Ïîäîáíûì ýôôåêòîì îáëàäàëè òàêæå ëèïîñîìû, ïðèãîòîâëåííûå èç ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ ÔË. Áîëåå òîãî, èíàêòèâèðîâàííûé ïîñëå ýêñòðàêöèè ôîñôîëèïèäîâ 203 Ðèñ. 6.2.3. Äåéñòâèå in vitro ôîñôîëèïèäîâ íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 (À) è ãåëèîòðèíîì (Á). Êðûñàì-ñàìöàì (n=4 â êàæäîé ãðóïïå) ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,1 ìë/100 ã ìàññû, èëè ãåëèîòðèí ïî 20 ìã/100 ã, èëè â òå÷åíèå òðåõ äíåé ôåíîáàðáèòàë ïî 8 ìã/êã. ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè [49]. Ìèêðîñîìû ïðåèíêóáèðîâàëè ñ ÔË â ôîðìå ëèïîñîì, 5 ìã ÔË/íìîëü öèòîõðîìà Ð450, 60 ìèíóò ïðè 4îÑ. Ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ïðè 37îÑ [52]. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-ÍÑl áóôåðà, ðÍ 7,4. Îá èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ñóäèëè ïî ïîâûøåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè åãî êàðáîêñèêîìïëåêñà ïðè 420 íì. Ìåäëåííîå âîçðàñòàíèå âåëè÷èíû ∆À(420 - 450)/íìîëü Ð450 â ìèêðîñîìàõ êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ (êðèâàÿ 1) ñâèäåòåëüñòâóåò î ñòàáèëüíîñòè öèòîõðîìà Ð450 â íåïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàíàõ [51, 52]. öèòîõðîì Ð450 ìèêðîñîì, âîññòàíàâëèâàë ñâîþ àêòèâíîñòü ïðè äîáàâëåíèè ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ ÔË èëè ÔÕ [51]. Ìåìáðàíû ÝÐ ìîãóò áûòü âîññòàíîâëåíû ôîñôîëèïèäàìè íå òîëüêî ïðè èíêóáàöèè âûäåëåííûõ ìèêðîñîì in vitro , íî è ïðè èõ ââåäåíèè æèâîòíûì. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ ãðàôèêîâ (ðèñ 6.2.4), òðåõêðàòíîå âíóòðèáðþøèííîå ââåäåíèå ÔË êðûñàì, îòðàâëåííûì ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè, ïðèâîäèò ê âûðàæåííîìó çàìåäëåíèþ èíàêòèâàöèè ôåðìåíòà, ÷òî îñîáåííî íàãëÿäíî ïðîÿâëÿåòñÿ ïðè îòðàâëåíèè ÑÑl 4 . Õîòÿ ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ó ïîëó÷àâøèõ ÔË æèâîòíûõ íå âîçâðàùàëàñü ïîëíîñòüþ ê íîðìàëüíîìó óðîâíþ, íî îíà âäâîå ñíèçèëàñü ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâîé ó íå ëå÷åííûõ æèâîòíûõ.  îñíîâå ýòîãî ýôôåêòà ëåæèò ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ÑÑl 4 ìåìáðàí ôîñôîëèïèäàìè. Òàêèì îáðàçîì, ÔË, è, â ÷àñòíîñòè, ÔÕ, îáëàäàþò ðåïàðèðóþùèìè ñâîéñòâàìè è, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, ñòàáèëèçèðóþò è åãî, è ñàìó ìåìáðàíó, ÷òî ñíèæàåò ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ôåðìåíòà. Ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëÿþò ñ÷èòàòü ýòîò êëàññ ñîåäèíåíèé ïåðñïåêòèâíûì äëÿ ðåïàðàöèè 204 Ðèñ. 6.2.4. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäîâ in vivo íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ CCl4 (À) èëè ãåëèîòðèíîì (Á) Êðûñàì-ñàìöàì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,2 ìë/100 ã ìàññû (À), èëè ãåëèîòðèí ïî 30 ìã/100 ã (Á). ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ôîñôîëèïèäû â ôîðìå ëèïîñîì â äîçå 20 ìã ÔË/100 ã, â òå÷åíèå òðåõ äíåé. ×åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè, ïîëó÷àëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè. Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 â îáëàñòè 400-500 íì ðåãèñòðèðîâàëè â òå÷åíèå 20 ìèíóò ïðè 37îÑ â ñðåäå, ñîäåðæàùåé 0.33 íìîëü öèòîõðîìà Ð450/ìë, è ðàññ÷èòûâàëè ðàçíèöó ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ àêòèâíîé è íåàêòèâíîé ôîðì öèòîõðîìà [49, 52]. ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí [28, 48, 51, 52]. Íà ýôôåêòèâíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ ÔÕ äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí óêàçûâàëî è åãî ïîçèòèâíîå âëèÿíèå íà àêòèâíîñòü äðóãèõ ôåðìåíòîâ ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 [44, 53]. Òàê, â ýêñïåðèìåíòàõ in vivo íà ìîäåëè ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ÑÑl4 áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ëèïîñîìû èç ÿè÷íîãî ÔÕ ñïîñîáñòâóþò ñòàáèëèçàöèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà ìåìáðàí, çàìåäëåíèþ èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450, íîðìàëèçàöèè åãî ãèäðîêñèëàçíîé àêòèâíîñòè, âîññòàíîâëåíèþ àêòèâíîñòè ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû. Óìåíüøåíèå ãèïåðôåðìåíòåìèè â ñûâîðîòêå êðîâè ïðè ââåäåíèè êðûñàì, îòðàâëåííûì ÑÑl4, ëèïîñîì èç ÔÕ óêàçûâàëî íà ñíèæåíèå íåêðîòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â ïå÷åíè [54, 55].  öåëîì, ìíîãî÷èñëåííûìè èññëåäîâàíèÿìè 60-õ - 90-õ ãîäîâ íà ðàçëè÷íûõ ìîäåëÿõ ãåïàòèòîâ ïîêàçàíî (1) àêòèâíîå âêëþ÷åíèå ââåäåííîãî ÔÕ â ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ, (2) óñòîé÷èâîñòü òàêèõ îáîãàùåííûõ ÔÕ ìåìáðàí ê òîêñè÷åñêèì àãåíòàì (ýòàíîë, ÑÑl4, îðãàíè÷åñêèå ðàñòâîðèòåëè, âûñîêîæèðîâîé ðàöèîí è äð), (3) ñíèæåíèå ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè [51, 54-56]. Òàêèì îáðàçîì, ÔË, â ÷àñòíîñòè, ÔÕ, ìîãóò áûòü ýôôåêòèâíûìè ñðåäñòâàìè äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí. Êàê ïîêàçàëè èññëåäîâàíèÿ, íàèáîëåå ïåðñïåêòèâíûìè äëÿ ðåïàðàöèè 205 ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿþòñÿ ôîñôîëèïèäû ðàñòèòåëüíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ (ñîÿ, õëîï÷àòíèê), ñîäåðæàùèå â áîëüøîì êîëè÷åñòâå ëèíîëåâóþ êèñëîòó [45, 48, 51, 52, 56]. Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî ñïîñîáîâ çàùèòû ìåìáðàííûõ áåëêîâ è ÔË ãåïàòîöèòîâ îò ðàçëè÷íûõ ïîâðåæäåíèé. Ïåðâûé èç íèõ âêëþ÷àåò ïðèìåíåíèå àíòèîêñèäàíòíîé òåðàïèè. Âòîðîé ïðåäóñìàòðèâàåò èñïîëüçîâàíèå SH-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé, è òðåòèé - èñïîëüçîâàíèå ñîáñòâåííî ôîñôîëèïèäîâ äëÿ ðåïàðàöèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà ìåìáðàí è ìèêðîîêðóæåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðèìåíåíèå àíòèîêñèäàíòîâ è SH-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé îêàçûâàåò â îñíîâíîì ïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå, òî åñòü îíè ýôôåêòèâíû, êîãäà SH-ñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ è àíòèîêñèäàíòû ââîäÿòñÿ äî èëè âìåñòå ñ ÿäîì. Òàê êàê ÷àùå âñåãî ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ ìû èìååì äåëî ñ óæå ïîâðåæäåííûìè ìåìáðàíàìè è ôåðìåíòíûìè ñèñòåìàìè ãåïàòîöèòîâ, òî íåîáõîäèìîñòü ïîèñêà ïðåïàðàòîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè óæå ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí î÷åâèäíà. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî â êà÷åñòâå ãåïàòîïðîòåêòîðîâ â íàñòîÿùåå âðåìÿ èñïîëüçóåòñÿ ðÿä ïðåïàðàòîâ ðàçëè÷íûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ãðóïï, òàêèõ, êàê êîðñèë, ãåïòðàë, ëåãàëîí, ãåïàòîôàëüê, ýññåíöèàëå è äð., ýôôåêòèâíîñòü èõ îñòàåòñÿ íåâûñîêîé, ÷òî îïðàâäûâàåò ïîèñê íîâûõ ñîåäèíåíèé äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ ñòðóêòóðû è ôóíêöèé ïîâðåæäåííûõ êëåòîê ïå÷åíè. Íàêîïëåííûå ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè äàííûå î ðîëè áèîìåìáðàí â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è îá óíèâåðñàëüíîì õàðàêòåðå ïîâðåæäåíèé ìåìáðàí ïðè øèðîêîì ñïåêòðå ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé, ïîçâîëÿþò ïðåäïîëàãàòü, ÷òî: 1) ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí, íåçàâèñèìî îò ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà, áóäåò íåñïåöèôè÷íî ïðèâîäèòü ê íîðìàëèçàöèè êëåòî÷íûõ ôóíêöèé; 2) òàêóþ íåñïåöèôè÷íóþ "ìåìáðàííóþ òåðàïèþ" öåëåñîîáðàçíî âêëþ÷àòü â ñõåìó ëå÷åíèÿ ìíîãèõ çàáîëåâàíèé, â êîìáèíàöèè ñ ñîîòâåòñòâóþùåé ñïåöèôè÷åñêîé òåðàïèåé, íàïðàâëåííîé íà ïðåêðàùåíèå äàííîãî ïàòîëîãè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ. Ïðè ýòîì íàèáîëåå óíèâåðñàëüíûì ìåìáðàíî-ðåïàðèðóþùèì àãåíòîì, ñïîñîáíûì âîññòàíàâëèâàòü ëîêàëüíûå äåôåêòû ìåìáðàíû è òåì ñàìûì âîññòàíàâëèâàòü åå ôóíêöèè è ôóíêöèè êëåòêè â öåëîì, ÿâëÿþòñÿ èìåííî ôîñôîëèïèäû - êàê åñòåñòâåííûé ñòðóêòóðîîáðàçóþùèé è ôóíêöèîíàëüíûé êîìïîíåíò âñåõ áèîìåìáðàí, îñîáåííî íåîáõîäèìûé äëÿ òàêîãî îðãàíà êàê ïå÷åíü â ñèëó åå óíèêàëüíîé (âûñîêîé) 206 ðåãåíåðèðóþùåé ñïîñîáíîñòè [46]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, äëÿ ïðàêòè÷åñêîé ìåäèöèíû îäíîé èç àêòóàëüíûõ çàäà÷ ÿâëÿåòñÿ ñîçäàíèå íîâûõ âûñîêîýôôåêòèâíûõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, äëÿ ëå÷åíèÿ òàê íàçûâàåìûõ "ñîöèàëüíî-çíà÷èìûõ" çàáîëåâàíèé, â ÷àñòíîñòè, çàáîëåâàíèé ïå÷åíè, è ïðåæäå âñåãî - âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êàêèì æå äîëæíî áûòü âûñîêîýôôåêòèâíîå ëåêàðñòâî äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ? Ñ îäíîé ñòîðîíû, îíî äîëæíî âîññòàíàâëèâàòü ñòðóêòóðó è öåëîñòíîñòü ïîâðåæäåííûõ ãåïàòîöèòîâ, ñ äðóãîé - îáëàäàòü ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ. Åñëè â îòíîøåíèè ôîñôîëèïèäîâ êàê íàèáîëåå àêòèâíûõ ñîåäèíåíèé, âîññòàíàâëèâàþùèõ ñòðóêòóðó è ôóíêöèþ áèîìåìáðàí, íà îñíîâàíèè ïðèâåäåííûõ âûøå äàííûõ, ñîìíåíèé íå ñóùåñòâóåò, òî â îòíîøåíèè âòîðîãî êîìïîíåíòà ëåêàðñòâà, îáëàäàþùåãî ïðîòèâîâèðóñíûì ýôôåêòîì, òàêîãî ïðîñòîãî ðåøåíèÿ íåò. ×èñëî ñîåäèíåíèé ñ ïðîòèâîâèðóñíûì ýôôåêòîì îãðîìíî [56]. Íàìè íà îñíîâàíèè äåòàëüíîãî àíàëèçà ëèòåðàòóðû, â êà÷åñòâå òàêîâîãî áûëà âûáðàíà ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà, îñîáåííîñòè ñâîéñòâ êîòîðîé ðàññìàòðèâàþòñÿ â ñëåäóþùåé ãëàâå. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 6 1. Tampo Y. Studies on membrane factors in iron-supported lipid peroxidation. Yakugaku Zasshi. 2000, 120, 387-396. 2. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíûå ðàäèêàëû â áèîëîãè÷åñêèõ ñèñòåìàõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 2000, 12, 13-19. 3. Jakus V. The role of nonenzymatic glycation and glyco-oxidation in the development of diabetic vascular complications. Cesk Fysiol. 2003, 52, 51-65. 4. Adachi J., Asano M., Ueno Y., Niemela O., Ohlendieck K., Peters T.J., Preedy V.R. Alcoholic muscle disease and biomembrane perturbations. J Nutr Biochem. 2003, 14, 616-625. 5. Netzel-Arnett S., Hooper J.D., Szabo R., Madison E.L., Quigley J.P., Bugge T.H., Antalis T.M. Membrane anchored serine proteases: a rapidly expanding group of cell surface proteolytic enzymes with potential roles in cancer. Cancer Metastasis Rev. 2003, 22, 237-258. 6. Salvemini D., Cuzzocrea S. Oxidative stress in septic shock and disseminated intravascular coagulation. Free Radic Biol Med. 2002, 33, 1173-1185. 7. Bergamini C.M., Gambetti S., Dondi A., Cervellati C. Oxygen, reactive oxygen species and tissue damage. Curr Pharm Des. 2004, 10, 1611-1626. 8. Palsdottir H., Hunte C. Lipids in membrane protein structures. Biochim Biophys Acta. 2004, 1666, 2-18. 207 9. Lee A.G. How lipids affect the activities of integral membrane proteins. Biochim Biophys Acta. 2004, 1666, 62-87. 10. Gelb M.H., Min J.H., Jain M.K. Do membrane-bound enzymes access their substrates from the membrane or aqueous phase: interfacial versus non-interfacial enzymes. Biochim Biophys Acta. 2000, 1488, 2027. 11. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Íàóêà, Ì. 1982. 12. Êðàâöîâ À.Â., Àëåêñååíêî È.Ð. Ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè âåêòîðíûõ ôåðìåíòîâ áèîìåìáðàí. Êèåâ. 1990. 13. Bracey M.H., Cravatt B.F., Stevens R.C. Structural commonalities among integral membrane enzymes. FEBS Lett. 2004, 567, 159-165. 14. Asano Y., Kim J., Ogai A., Takashima S., Shintani Y., Minamino T., Kitamura S., Tomoike H., Hori M., Kitakaze M. A calcium channel blocker activates both ecto-5'-nucleotidase and NO synthase in HUVEC. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 311, 625-628. 15. Grybauskas P. Role of tissue factor in atherothrombosis. Medicina (Kaunas). 2003, 39, 1165-1170. 16. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic. Publisher Polish Section of European Society of biochemical pharmacology. Szczecin. 1993. 17. Èâêîâ Â.Ã., Áåðåñòîâñêèé Ã.Í. Ëèïèäíûé áèñëîé áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Íàóêà, Ì. 1982. 18. Hidalgo C., Ikemoto N., Gergely J. Role of phospholipids in the calcium-dependent ATPase of the sapcoplasmatic reticulum. J Biol Chem. 1976, 251, 4224-4232. 19. Hjelmstad R.H., Bell R.M. Molecular insights into enzymes of membrane bilayer assembly. Biochemistry. 1991, 30, 1731-1740. 20. Chanussot F., Benkoel L. Prevention by the dietary (n-6) polyunsaturated phosphatidylcholines of intrahepatic cholestasis induced by ciclosporine A in animals. Life Sci. 2003, 73, 381-392. 21. Ito M., Feng J., Tsujino S., Inagaki N., Inagaki M., Tanaka J., Ichikava K., Hartshorne D.J., Nakano T. Interaction of smooth muscle myosin phosphatase with phospholipids. Biochemistry. 1997, 36, 76077614. 22. Santini F., Chopra I.J., Solomon D.H., Chua Teco G.N. Evidence that the human placental monodeiodinase is phospholipid-requiring enzyme. J Clin Endocrinol Metab. 1992, 74, 1366-1371. 23. Imai T., Kageyama Y., Tobari J. Mycobacterium smegmatis malate dehydrogenase: activation of the lipid-depleted enzyme by anionic phospholipids and phosphatidylethanolamine. Biochim Biophys Acta. 1995, 1246, 189-196. 24. Yui S., Yamazaki M. Relationship of ability of phospholipids to 208 stimulate growth and bind to macrophages. J Leukocyte Biol. 1987, 41, 392-399. 25. Carman C.V., Barak L.S., Chen C., Liu-Chen L.-Y., Onorato J.J., Kennedy S.P., Caron M.G., Benovic J.L. Mutational analysis of Gbetagamma and phospholipid interaction with G protein-coupled receptor kinase 2. J Biol Chem. 2000, 275, 10443-10452. 26. Archakov A.I., Bachmanova G.I. Influence of phospholipid bilayer on structure and catalytic properties of cytochromes P-450 and b5. In: Microsomes, drug oxidation and drug toxicity. (Sato R., Kato R. eds). Japan Scientific Press, Wiley-Interscience Tokyo, N.-Y. 1982, 6774. 27. Àð÷àêîâ À.È., Áîðîäèí Å.À. Èíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ Fe-àñêîðáàò-çàâèñèìûì ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ. Áèîëîãè÷åñêèå íàóêè. 1986, 5, 30-34. 28. Àð÷àêîâ À.È., Áîðîäèí Å.À. Âîññòàíîâëåíèå ôîñôîëèïèäàìè ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ Få-àñêîðáàòçàâèñèìûì ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ. Áèîëîãè÷åñêèå íàóêè, 1986, 7, 30-35. 29. Àrchakov A.I., Bachmanova G.I. Cytochrome P450 and active oxygen. Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990. 30. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È., Àäðèàíîâ Í.Â. Öèòîõðîì Ð450 è îêèñëèòåëüíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ìàêðîìîëåêóë. Âåñòíèê ÀÌÍ ÑÑÑÐ. 1990, 2, 21-27. 31. Êàðóçèíà È.È., Àð÷àêîâ À.È. Öèòîõðîì Ð450.  êí: Áåëêè è ïåïòèäû (Èâàíîâà Â.Ò., Ëèïêèíà Â.Ì. ðåä.) Íàóêà. Ì. 1995, 7-29. 32. Karuzina I.I., Archakov A.I. The oxidative inactivation of cytochrome P450 in monooxygenase reactions. Free Radic Biol Med. 1994, 16, 73-97. 32. Karuzina I.I., Archakov A.I. Hydrogen peroxide-mediated inactivation of microsomal cytochrome P450 during monooxygenase reactions. Free Radic Biol Med. 1994, 17, 557-567. 34. Êàðóçèíà È.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Àð÷àêîâ À.È. Ñàìîèíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â êàòàëèòè÷åñêîì öèêëå. Âåñòíèê ÐÀÌÍ. 1995, 2, 17-29. 35. Archakov A. I., Karuzina I. I., Petushkova N.A, Lisitsa A. V., Zgoda V. G. Production of carbon monoxide by cytochrome P 450 during iron-dependent lipid peroxidation. Toxicol In Vitro. 2002, 16, 1-10. 36. McLean A.E. Effect of hexane and carbon tetrachloride on microsomal cytochrome (P450). Biochem Pharmacol. 1967, 16, 20302033. 37. Âëàäèìèðîâ Þ.À., Àð÷àêîâ À.È. Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ. Íàóêà, Ì. 1972. 209 38. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû âçàèìîäåéñòâèÿ ÷åòûðåõõëîðèñòîãî óãëåðîäà ñ ìåìáðàíàìè ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ïå÷åíè. Óñï ãåïàòîëîãèè. 1973, 7, 39-59. 39. Ñàâèí È.Ã., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Êàðóçèíà È.È., Ñêîöåëÿñ Å.Ä., Àíòîíîâà Ã.Í., Æèðíîâ Ã.Ô., Êàðÿêèí À.Â., Àðèïîâ À.Í., Àð÷àêîâ À.È. Âëèÿíèå ãåëèîòðèíà íà ñèñòåìó ìèêðîñîìàëüíîãî îêèñëåíèÿ ïå÷åíè êðûñ. Âîïðîñû ìåä õèìèè. 1983, 29, 49-52. 40. Reiner O., Uehleke H. Bindung of carbon tetrachloride to reduced microsomal cytochrome P-450 and to heme. Hoppe Seylers Z Physiol Chem. 1971, 352, 1048-1052. 41. Rao K.S., Glende E.A., Recknagel R.O. Effect of drug pretreatment on carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation in rat liver microsomal lipids. Exp Mol Pathol. 1970, 12, 324-331. 42. Payne E., Smith J.F., Cope B.C, McGowan L.T. Studies on the role of liver cytochrome P-450 and oestradiol metabolism in the effects of nutrition and phenobarbital on ovulation rate in the ewe. Reprod Fertil Dev. 1991, 3, 725-736. 43. Chaudhury S., Mehendale H.M. Amplification of CCl4 toxicity by chlordecone: destruction of rat hepatic microsomal cytochrome P450 subpopulation. J Toxicol Environ Health. 1991, 32, 277-294. 44. Wills E. Effect of lipid peroxidation on membrane bound enzymes of endoplasmatic reticulum. Biochem J. 1971, 123, 983-987. 45. Áîëäàíîâà Í. Á., Äîáðûíèíà Î. Â., Ìèãóøèíà Â. Ë., Àð÷àêîâ À. È. Çàùèòíûå äåéñòâèÿ ôîñôàòèäèëõîëèíîâûõ ëèïîñîì ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì òîêñè÷åñêîì ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986, 42, 65-67. 46. Archakov A.I. Reconstitution and repair of microsomal monooxygenase system of the liver. In: Physico-chemical aspects of medicine. Amsterdam. 1988, 130-205. 47. Ahr H.J., King H.J., Nastainczyk W., Ullrich V. The mechanism of reductive dehalogenation of halothane by liver cytochrome P-450. Biochem Pharmacol. 1982, 31, 383-390. 48. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I., Hinson J.A., Pessayre D., Lemasters J.J. Mechanisms of hepatotoxity. Òoxicol Sci. 2002, 65, 166-176. 49. Äîáðûíèíà Î.Â., Øàòèíèíà Ñ.Ç., Àð÷àêîâ À.È. Ðåïàðàöèÿ ôîñôàòèäèëõîëèíîì ïîâðåæäåíèÿ ãåëèîòðèíîì ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ. Áþëë ýêñï áèîëîãèè è ìåäèöèíû. 1987, 103, 413-415. 50. Ãðèøàíîâà À.Þ., Ãóòêèíà Í.È., Ìèøèí Â.Ì. Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå èçîëèðîâàííûõ èçîôîðì öèòîõðîìà Ð-450, èíäóöèðóåìûõ ôåíîáàðáèòàëîì è ïåðôòîðäåêàëèíîì. Áèîõèìèÿ. 1988, 53, 368-376. 210 51. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ïîãîäèíà Î.Ê., Äîáðûíèíà Î.Â., Ìèãóøèíà Â.Ë., Ñàâèí È.Ã. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ äåñòðóêöèè ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà êëåòîê ïå÷åíè. Àâòîðñêîå ñâèäåòåëüñòâî ¹1142802 (1.11.1984). 52. Bachmanova G.I., Abdugafurova M.A., Li V.S., Dobrynina O.V., Shatinina S.Z., Archakov A.I. Reparation of damaged rat liver cells, microsomal membranes and cytochrome P450-dependent monooxygenase system by phospholipids. In: Phosphatidylcholine (polyenephosphatidylcholine/PPC): effects on cell membranes and transport of cholesterol. (Archakov A.I., Gunderman K.J. eds). Cologne, wbn-Verlag. Bingen/Rhein. 1989, 137-145. 53. Bachmanova G.I., Kanaeva I.P., Sevrukova I.F., Archakov A.I. Reconstitution of membrane microsomal monooxygenase system from purified enzymes in solutions. Abstr. of 2-nd IUBMB Conference, Biochemistry of Cell Membranes. Bari, Italy. 1993, 272. 54. Archakov A.I., Uvarov V.Yu. Action of phospholipids on hydrophobic microsomal proteins. In: Phosphatidylcholine (polyenephosphatidylcholine/PPC): effects on cell membranes and transport of cholesterol. (Archakov A.I., Gunderman K.J. eds). Cologne, wbnVerlag. Bingen/Rhein. 1989, 127-136. 55. Panos M.Z., Polson R., Johnson R., Portman B., Williams R. Activity of polyunsaturated phosphatidylcholine in HbsAg negative chronic active hepatitis. In: 50th anniversary of phospholipid research (EPL). (Gunderman K.J., Schumacher R. eds). Wbn Press, Bingen/Rhein, 1990, 103-110. 56. Kuntz E. The "essential" phospholipids in hepatology-50 years of experimental and clinical experience. Ibid. 49-69. 57. Magden J., Kaariainen L., Ahola T. Inhibitors of virus replication: recent developments and prospects. Appl Microbiol Biotechnol. 2005, 66, 612-621. 211 ÃËÀÂÀ 7. ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÀß ÊÈÑËÎÒÀ: ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ Â ÊÀ×ÅÑÒÂÅ ÏÐÎÒÈÂÎÂÈÐÓÑÍÎÃÎ ÀÃÅÍÒÀ Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà (ÃÊ) ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì àêòèâíûì êîìïîíåíòîì êîðíÿ ñîëîäêè, èçâåñòíîãî ñâîèìè öåëåáíûìè ñâîéñòâàìè. Îíà ïðèñóòñòâóåò áîëåå ÷åì â 10 ðàçíîâèäíîñòÿõ ñîëîäêè.  Ðîññèè èñòî÷íèêàìè åå ÿâëÿþòñÿ ñîëîäêà ãîëàÿ (Glycyrrhiza glabra L), ñîëîäêà óðàëüñêàÿ (Gl. Uralensis Fish) è ñîëîäêà Êîðæèíñêîãî (Gl.Korshinski G.) [1-8]. Êîðåíü ñîëîäêè èñïîëüçóåòñÿ â ìåäèöèíå óæå áîëåå 3000 ëåò. Ñâåäåíèÿ î íåì íàõîäÿò â äðåâíåéøèõ êèòàéñêèõ êíèãàõ ïî ìåäèöèíå. Êîðåíü ñîëîäêè âûñîêî öåíèëè äðåâíåãðå÷åñêèå è ðèìñêèå âðà÷è. Ñîëîäêà óïîìèíàåòñÿ â äðåâíåéøåé ìåäèöèíñêîé ýíöèêëîïåäèè - ïàïèðóñå Ýáåðñà. Åå øèðîêî èñïîëüçîâàëè â ñâîåé ïðàêòèêå Ãèïïîêðèò è Ãàëåí. Âûñîêî îöåíèâàë ñâîéñòâà êîðíÿ ñîëîäêè Àâèöåííà. Êèòàéñêèå âðà÷è ñ÷èòàþò ñîëîäêó îäíèì èç òðåõ íàèâàæíåéøèõ ëåêàðñòâåííûõ ðàñòåíèé è óíèêàëüíîé ïî áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè. ÃÊ âõîäèò â ñîñòàâ áîëåå 70% ïðåïàðàòîâ òðàäèöèîííîé êèòàéñêîé ìåäèöèíû [9, 10].  Êèòàå ÃÊ âêëþ÷àþò â ñîñòàâ ïðåïàðàòîâ íå òîëüêî èç-çà åå âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè, à òàêæå êàê ñîåäèíåíèå, ñïîñîáíîå óñèëèâàòü äåéñòâèå äðóãèõ êîìïîíåíòîâ, ñíèæàòü èõ òîêñè÷íîñòü è ïîáî÷íûå ýôôåêòû. Òðàäèöèîííî ýêñòðàêò êîðíÿ ñîëîäêè ïðèìåíÿëè â êà÷åñòâå îòõàðêèâàþùåãî, ñëàáèòåëüíîãî, ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî è ñïàçìîëèòè÷åñêîãî ñðåäñòâà.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ýêñòðàêò êîðíÿ ñîëîäêè øèðîêî ïðèìåíÿåòñÿ êàê â ìåäèöèíå (â ñîñòàâå ëå÷åáíûõ è ïðîôèëàêòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ), òàê è â ïèùåâîé ïðîìûøëåííîñòè (êàê ïîäñëàñòèòåëü è ïåíîîáðàçîâàòåëü). Ìåäèöèíñêîå ïðèìåíåíèå ñîëîäêè è âûäåëÿåìûõ èç íåå êîìïîíåíòîâ îñîáåííî øèðîêî ðàçâèòî â ñòðàíàõ þãî-âîñòî÷íîé Àçèè, è èìåííî òàì ïðîâîäÿòñÿ áîëüøèíñòâî ñîâðåìåííûõ èññëåäîâàíèé ïî èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ åå ìíîæåñòâåííûõ áèîëîãè÷åñêèõ àêòèâíîñòåé [11, 12]. Íàèáîëüøèé èíòåðåñ èç êîìïîíåíòîâ êîðíÿ ñîëîäêè âûçûâàåò ãëèöèððèçèí - èíãðåäèåíò, ïðèäàþùèé åé ñïåöèôè÷åñêèé ñëàäêèé âêóñ è ïðåäñòàâëÿþùèé ñîáîé ñìåøàííûå êàëèåâóþ è êàëüöèåâóþ ñîëè òðåõîñíîâíîé ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû [5, 13-17]. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è íàçâàíèå Glycyrrhiza (îò ëàòèíñêîãî) áûëî óñòàíîâëåíî â êîíöå 30-õ ãîäîâ ÕÕ âåêà ÷åøñêèì èññëåäîâàòåëåì Ðóæå÷êîé ñ ñîàâòîðàìè [15]. Îíè ïîêàçàëè, ÷òî ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé âîäîðàñòâîðèìûé òðèòåðïåíîâûé ãëèêîçèä, îáðàçîâàííûé îäíîé ìîëåêóëîé ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (ÃÒ) è äâóìÿ ìîëåêóëàìè ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû (ðèñ. 7.1). 212 Ðèñ. 7.1 Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû Ïðè îòùåïëåíèè óãëåâîäíîãî êîìïîíåíòà (ãëèêàíà), êîòîðîå, â ÷àñòíîñòè, ïðîèñõîäèò ïîä âëèÿíèåì áàêòåðèàëüíîé ôëîðû â êèøå÷íèêå ïðè ïåðîðàëüíîì ïðèåìå ÃÊ, îñòàåòñÿ àãëèêîí (ÃÒ), òàêæå îáëàäàþùèé øèðîêèì ñïåêòðîì áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ [16, 18, 19, 20]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÃÊ îêàçûâàåò ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå, ïðîòèâîàëëåðãè÷åñêîå, ïðîòèâîâèðóñíîå, ãåïàòîïðîòåêòîðíîå, èììóíîìîäóëèðóþùåå, ïðîòèâîÿçâåííîå äåéñòâèÿ, îáëàäàåò àíòèîêñèäàíòíûìè ñâîéñòâàìè [4 - 6, 10, 17, 18]. Êðîìå òîãî, íàëè÷èå â ìîëåêóëå ÃÊ ãèäðîôèëüíîãî (äèãëþêóðîíèäíîãî) è ãèäðîôîáíîãî (òðèòåðïåíîâîãî) ôðàãìåíòîâ ïðèäàåò åé óíèêàëüíûå ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûå è ãåëåîáðàçóþùèå ñâîéñòâà, êîòîðûå îáúÿñíÿþò øèðîêèé äèàïàçîí åå èñïîëüçîâàíèÿ. 7.1. Îñíîâíûå áèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ÃÊ. 7.1.1. Èììóíîìîäóëèðóþù ùèå ñâîéñòâàà ÃÊ. Êàê ïîêàçàíî âî ìíîãèõ ðàáîòàõ, èìóíîìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ñòèìóëÿöèè îáðàçîâàíèÿ Ò-ëèìôîöèòîâ è ïðîòèâîñóïðåññîðíûõ âíå-òèìóñíûõ êëåòîê - åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ (ÅÊ) è Ò-êëåòîê àíòè-òèïà 2, à òàêæå âîçäåéñòâèåì íà ñèñòåìó öèòîêèíîâ. Èíäóêöèÿ Ò-ëèìôîöèòîâ ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè ïðîäóêöèè γ-èíòåðôåðîíà (ÈÔÍ-γ) è îáðàçîâàíèþ àíòèòåë, óñèëåíèþ èììóííûõ ìåõàíèçìîâ êëåòêè. Ïîâûøåíèå ñåêðåöèè ÅÊ è âíå-òèìóñíûõ Ò-êëåòîê, èõ àêòèâàöèÿ òàêæå ñîïðîâîæäàåòñÿ äàëüíåéøåé èíäóêöèåé ñèíòåçà ÈÔÍ-γ. Òåì ñàìûì îðãàíèçì ìîäóëèðóåò íåñïåöèôè÷åñêèé èììóííûé îòâåò, îñîáåííî íà íà÷àëüíûõ ñòàäèÿõ áîëåçíè [4, 5,17, 21-25] (ðèñ. 7.1.1). Èññëåäîâàíèå äåéñòâèÿ ÃÊ íà èììóííóþ ñèñòåìó ó ìûøåé ïîêàçàëî, ÷òî íà 9-é äåíü ïîñëå åå âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ â 213 Ðèñ. 7.1.1. Ìåõàíèçì èììóíîìîäóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. êðîâè æèâîòíûõ ïîâûøàëîñü îáùåå êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ. Ïðè îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè ÃÊ è àíòèãåíà ïîâûøàëñÿ ñïåöèôè÷åñêèé òèòð àíòèòåë è êîëè÷åñòâî òðîìáîöèòîâ è òðîìáîöèò-îáðàçóþùèõ êëåòîê â ñåëåçåíêå. Ýòè èçìåíåíèÿ óêàçûâàþò íà èììóíîìîäóëèðóþùóþ àêòèâíîñòü ÃÊ [26]. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî ââåäåíèå ÃÊ ñïîñîáñòâîâàëî íîðìàëèçàöèè ôîðìóëû êðîâè è êîëè÷åñòâà ëåéêîöèòîâ ïðè àãðàíóëîöèòîçå, ðàçâèâàþùåìñÿ â ðåçóëüòàòå ïîáî÷íîãî äåéñòâèÿ ïðîòèâîòóáåðêóëåçíîé òåðàïèè [27].  ðàáîòå Takahara ñ ñîàâò. [28] ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ ïîäàâëÿåò ñåêðåöèþ áåëêà-àíòèãåíà âèðóñíîãî ãåïàòèòà  - HÂsAg (hepatitis B surface antigen) â êëåòêàõ ãåïàòîêàðöèíîìû ÷åëîâåêà, ëèíèè PLC/PRF/5, ýêñïðåññèðóþùèõ HÂsAg, è âûçûâàåò äîçîçàâèñèìîå íàêîïëåíèå àíòèãåíà â âàêóîëÿõ öèòîïëàçìû â îáëàñòè àïïàðàòà Ãîëüäæè. Ïðè èññëåäîâàíèè ìåõàíèçìà ýòîãî ýôôåêòà íà êëåòêàõ, èíôèöèðîâàííûõ ðåêîìáèíàíòíûì âèðóñîì âåòðÿíîé îñïû, ýêñïðåññèðóþùèì HÂsAg, áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ÃÊ èíãèáèðóåò ñèàëèðîâàíèå HÂsAg. Ïîñêîëüêó äåñèàëèðîâàííûé HÂsAg ïðîÿâëÿåò ëó÷øóþ èììóíîãåííîñòü, óñèëèâàÿ ãåíåðàöèþ ãóìîðàëüíûõ àíòèòåë è êëåòî÷íî-îïîñðåäîâàííîãî îòâåòà, àâòîðû ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÃÊ ìîæåò òàêèì îáðàçîì óëó÷øàòü èììóíîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ áîëüíûõ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè [29]. Abe ñ ñîàâò. [30] îáíàðóæèëè, ÷òî âíóòðèâåííîå ââåäåíèå ÃÊ ìûøàì â äîçå 20 ìã/êã ÷åðåç 2 è 18 ÷àñîâ ïîñëå ââåäåíèÿ äàåò äâà ïèêà èíäóêöèè ÈÔÍ-γ ñ ó÷àñòèåì Ò-êëåòîê è ìàêðîôàãîâ. Ââåäåíèå ÃÒ (àãëèêîíà ÃÊ) â ìåíüøåé äîçå (5 ìã/êã) òàêæå 214 èíäóöèðóåò ñèíòåç ÈÔÍ-γ, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ îäíèì ïèêîì (ìåíåå ÷åì ÷åðåç 2 ÷àñà) ñ âäâîå ìåíüøåé èíòåíñèâíîñòüþ. Ýòî ìîæåò óêàçûâàòü íà áîëåå âûñîêóþ èíòåðôåðîí-èíäóöèðóþùóþ ñïîñîáíîñòü ÃÒ. Ïîäêîæíîå ââåäåíèå ÃÊ ìûøàì âûçûâàëî ýêñòðàòèìè÷åñêóþ äèôôåðåíöèàöèþ Ò-êëåòîê â ïå÷åíè. Äàæå ïðè îäíîêðàòíîì ââåäåíèè ÃÊ ó æèâîòíûõ îòìå÷àëè íå òîëüêî óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòîê â ïå÷åíè, íî òàêæå è ïîâûøåíèå êîëè÷åñòâà ôóíêöèîíàëüíî íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ Ò-êëåòîê.  îòëè÷èå îò äðóãèõ ïðåïàðàòîâ, èñïîëüçîâàííûõ â ýòèõ ýêñïåðèìåíòàõ (ëèìôîòîêñèí è ýñòðîãåí), ÃÊ íå èçìåíÿëà ñîîòíîøåíèå Ò-êëåòîê ðàçëè÷íûõ êëàññîâ â òèìóñå [31]. Ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ ìîæåò ñëóæèòü èíäóêòîðîì CD4+, CD28+, αβÒ-êëåòîê. Òàê, ó ìûøåé ñ ýêñïåðèìåíòàëüíî èíäóöèðîâàííîé ìåòàñòàçèðóþùåé ìåëàíîìîé ëåãêèõ ÃÊ àêòèâèðîâàëà ñèíòåç αβ-Òêëåòîê èìåþùèõ ìàðêåðû CD4+ è CD28+, à òàêæå îïîñðåäîâàííî èíãèáèðîâàëà ñèíòåç öèòîêèíîâ Ò-õåëïåðíûìè êëåòêàìè 2-ãî òèïà [32]. Ó ìûøåé ñ ìîäåëüþ ãåïàòèòà, èíäóöèðîâàííîãî êîíêàíàâàëèíîì À, ÃÊ ïîâûøàëà ïðîäóêöèþ èíòåðëåéêèíà-10 (IL10) äåíäðèòíûìè êëåòêàìè ïå÷åíè [33]. Èçó÷àÿ ìåõàíèçìû èììóíîìîäóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÃÊ, Dai ñ ñîàâò. [34] îáíàðóæèëè åå âëèÿíèå íà èíäóöèðóåìóþ ëèïîïîëèñàõàðèäîì ïðîäóêöèþ ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè ðàçëè÷íûõ òèïîâ IL-12, ïðåäñòàâëÿþùèõ ñîáîé ãåòåðîäèìåð: IL-12 ð40, IL-12 ð70 è äð. Óâåëè÷åíèå ïðîäóêöèè IL-12, îáóñëîâëåííîå óñèëåíèåì òðàíñêðèïöèè ìÐÍÊ IL-12 ð35 è ð40, áûëî ñâÿçàíî ñ ÃÊ-çàâèñèìîé àêòèâàöèåé ÿäåðíîãî ôàêòîðà NF-kB. Òàêîå æå äåéñòâèå ÃÊ îêàçûâàëà è íà ïðîäóêöèþ IL-12 ó ìûøåé, íîêàóòíûõ ïî ÈÔÍ-γ. Ýòè äàííûå óêàçûâàþò íà ñïîñîáíîñòü ÃÊ ïîâûøàòü èíäóöèðîâàííóþ ëèïîïîëèñàõàðèäîì ãåíåðàöèþ IL-12 ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè, êîòîðàÿ íå çàâèñåëà îò ñèíòåçà γèíòåðôåðîíà. Utsonomiya ñ ñîàâò [35] èçó÷àëè âëèÿíèå ÃÊ íà ïðîäóêöèþ IL-12 ó ìûøåé ïîñëå òåðìè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ. ×åðåç 6 äíåé ïîñëå òàêîé îáðàáîòêè ìûøè òåðÿëè ñïîñîáíîñòü ê èíäóöèðîâàííîé ëèïîïîëèñàõàðèäîì ãåíåðàöèè IL-12. Îäíàêî, åñëè ìûøàì ïðåäâàðèòåëüíî ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ÃÊ (10 ìã/êã), òî ó íèõ óðîâåíü IL-12 â ñûâîðîòêå êðîâè ïîñëå òåðìè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ áûë äàæå âûøå, ÷åì ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ. Êðîìå òîãî, îáíàðóæåíî, ÷òî èíîêóëÿöèÿ íîðìàëüíûì ìûøàì Ò-êëåòîê òèïà 2 (ïðîäóöèðóþùèõ IL-4 è IL-10) èç ñåëåçåíêè ìûøåé, ïîäâåðãíóòûõ òåðìè÷åñêîìó âîçäåéñòâèþ, ïîäàâëÿëà ñïîñîáíîñòü ê ñòèìóëèðîâàííîìó ëèïîïîëèñàõàðèäîì ñèíòåçó IL-12.  òî æå 215 âðåìÿ, èíîêóëÿöèÿ CD4+Ò-êëåòîê èç ñåëåçåíêè íîðìàëüíûõ ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ ÃÊ, íàîáîðîò, ïîâûøàëà ãåíåðàöèþ IL-12, ñòèìóëèðîâàííóþ ëèïîïîëèñàõàðèäîì ó ìûøåé, ïîäâåðãíóòûõ òåðìè÷åñêîìó âîçäåéñòâèþ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëèëè àâòîðàì ïðåäïîëîæèòü, ÷òî èíãèáèðîâàííûé â ðåçóëüòàòå òåðìè÷åñêîé îáðàáîòêè ïóòü ñèíòåçà IL-12 âîññòàíàâëèâàåòñÿ, ïîâèäèìîìó, çà ñ÷åò âîçäåéñòâèÿ ÃÊ íà ôàêòîðû, ðåãóëèðóþùèå Òêëåòî÷íûé îòâåò. Àíàëèçèðóÿ çíà÷åíèå äëÿ îðãàíèçìà ñïîñîáíîñòè ÃÊ âëèÿòü íà ãåíåðàöèþ èíòåðëåéêèíîâ, ñëåäóåò èìåòü â âèäó, ÷òî èíòåðëåéêèíû â ïîñëåäíèå ãîäû âûçûâàþò áîëüøîé èíòåðåñ êàê êëþ÷åâûå öèòîêèíû èììóííîé ðåãóëÿöèè. Îíè àêòèâèðóþò åñòåñòâåííûå êèëëåðû è öèòîòîêñè÷åñêèå ëèìôîöèòû è ÿâëÿþòñÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûìè öèòîêèíàìè. Ïîêàçàíà ñîïðÿæåííîñòü ïðîäóêöèè IL-12 è îñíîâíîãî àêòèâàòîðà ìàêðîôàãîâ ÈÔÍ-γ. Ïîñëåäíèé ìîæåò ñòèìóëèðîâàòü ïðîäóêöèþ IL-12 ÷åðåç àêòèâàöèþ êëåòî÷íîãî ñèãíàëà ñ ó÷àñòèåì òèðîçèíîâîé ïðîòåèíêèíàçû [36]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû IL-12, äåéñòâóÿ íà ïîêîÿùèåñÿ êëåòêè ÅÊ, ñòèìóëèðóåò ïðîäóêöèþ èìè ÈÔÍ-γ, ñòèìóëèðóþùåãî, â ñâîþ î÷åðåäü, ôóíêöèè ìàêðîôàãîâ.  ïðèñóòñòâèè IL-12 êëåòêè ÅÊ ñïîñîáíû äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ñóáïîïóëÿöèè - ÅÊ1 è ÅÊ2; ÅK1 ïðîäóöèðóåò ÈÔÍ- γ, à ÅÊ2 äðóãèå èíòåðëåéêèíû (IL-5 è IL-13). ÅK1 áîëåå ÷óâñòâèòåëüíû ê àïîïòîçó è îòâå÷àþò íà IL-12 ÷åðåç àêòèâàöèþ ÿäåðíûõ ôàêòîðîâ [37]. IL-12 òàêæå óñêîðÿåò ïðîëèôåðàöèþ CD30+ ëèìôîöèòîâ Th1 êëåòîê, ïðîäóöèðóþùèõ ÈÔÍ-γ. IL-12 àêòèâèðóåò ïðîëèôåðàöèþ è äèôôåðåíöèðîâêó ÅÊ è Ò-ëèìôîöèòîâ, ïîâûøàåò èõ öèòîòîêñè÷åñêèé ýôôåêò è ïðîäóêöèþ äðóãèõ öèòîêèíîâ. Îñíîâíîé ðåçóëüòàò ýòèõ ïðîöåññîâ - èíäóêöèÿ ñèíòåçà ÈÔÍ-γ.  ñâîþ î÷åðåäü, ÈÔÍ-γ àêòèâèðóåò ìíîæåñòâåííûå çàùèòíûå ôóíêöèè ìàêðîôàãîâ, âêëþ÷àÿ ñèíòåç ñàìîãî IL-12 [38]. ÃÊ ìîæåò âêëþ÷àòüñÿ â ýòîò êàñêàä ðåàêöèé, èíäóöèðóÿ ïðîäóêöèþ IL-12 è òåì ñàìûì è γ-èíòåðôåðîíà [36], èëè íåïîñðåäñòâåííî âëèÿÿ íà Òêëåòêè [35, 39]. Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî îäíîêðàòíîå ââåäåíèå æèâîòíûì íåîìèíîôàãåíà Ñ (ïðåïàðàòà, îñíîâíûì äåéñòâóþùèì íà÷àëîì êîòîðîãî ÿâëÿåòñÿ ÃÊ è êîòîðûé øèðîêî èñïîëüçóåòñÿ â ßïîíèè äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ [40]) àêòèâèðóåò ñèñòåìû ÈÔÍ-γ è IL-12 [39]. Ïðè ââåäåíèè ìûøàì ïðåïàðàòà íàáëþäàëè çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå â ïå÷åíè àêòèâíîñòè êëåòîê ÅÊ è α-TNF. Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî â öåëîì öèòîòîêñè÷åñêàÿ ôóíêöèÿ, ñòèìóëèðóåìàÿ ïå÷åíî÷íûìè ëèìôîöèòàìè, óñèëèâàåòñÿ ïîä äåéñòâèåì ÃÊ [39]. 216 Òàêèì îáðàçîì, îäíèì èç ïðîÿâëåíèé èììóíîìîäóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÃÊ ÿâëÿåòñÿ åå âëèÿíèå íà ïðîäóêöèþ öèòîêèíîâ, â ÷àñòíîñòè IL-12, è, âîçìîæíî, ÷åðåç íèõ - íà ñèñòåìó γèíòåðôåðîíà. 7.1.2. Ïðîòèâîâîñïààëèòåëüíîå äåéñòâèå. Äðóãèì, ÷ðåçâû÷àéíî âàæíûì ñâîéñòâîì ÃÊ, ñîïðÿæåííûì ñ èììóíîìîäóëèðóþùèì ýôôåêòîì è îáóñëàâëèâàþùèì åå øèðîêîå ëåêàðñòâåííîå ïðèìåíåíèå, ÿâëÿåòñÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå. ÃÊ è åå ïðîèçâîäíûå èíãèáèðóþò ãèñòàìèíîâóþ, ñåðîòîíèíîâóþ, áðàäèêèíèíîâóþ, ôîðìàëèíîâóþ è äðóãèå âîñïàëèòåëüíûå ðåàêöèè, óìåíüøàþò ñîñóäèñòóþ ïðîíèöàåìîñòü, îáëàäàþò âûðàæåííûì àíòèïðîëèôåðàòèâíûì äåéñòâèåì è àíòèêèíèíîâûì ýôôåêòîì [5, 10, 17]. Íàïðèìåð, ñîëè ÃÊ â ýêñïåðèìåíòå ñíèæàþò ôîðìàëèíîâûé îòåê êàê ó èíòàêòíûõ, òàê è ó àäðåíîýêòîìèðîâàííûõ æèâîòíûõ [10, 41]. Ïðè âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè ÃÊ ïîäàâëÿåò îáðàçîâàíèå ãðàíóëåìû ó ìîðñêèõ ñâèíîê è îêàçûâàåò ñèëüíîå ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì êîíúþíêòèâèòå ó êðîëèêîâ. Ïîêàçàí ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûé ýôôåêò ÃÊ ó ëàêòèðóþùèõ êîðîâ ïðè èíäóöèðîâàííîì ñòàôèëîêîêêîì ìàñòèòå [42]. Ïî ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîé àêòèâíîñòè Na- è Ê-ñîëè ÃÊ íå óñòóïàþò âîëüòàðåíó [10]. Ïðåäïîëàãàåòñÿ íåñêîëüêî ìåõàíèçìîâ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ. Èçâåñòíî, ÷òî ðåöåïòîðû ëåéêîöèòîâ ÑD4 áëîêèðóþòñÿ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ, ÷òî, â ñâîþ î÷åðåäü, ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ. ÃÊ ñïîñîáíà èíãèáèðîâàòü PK Ñ, âîññòàíàâëèâàÿ èììóííûå ñâîéñòâà èëè èììóííûé îòâåò êëåòêè è ïðåïÿòñòâóÿ òåì ñàìûì ðàçâèòèþ âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà [43]. Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ ñâÿçûâàþò ñ åå ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûì ýôôåêòîì: ÃÊ èíãèáèðóåò 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçó (êàòàëèçèðóþùóþ ïåðåõîä êîðòèçîëà â êîðòèçîí), ÷òî ïðèâîäèò ê óâåëè÷åíèþ êîðòèçîëà â êðîâè è èíàêòèâàöèè èììóíîñóïðåññîðíîãî äåéñòâèÿ êîðòèçîíà [44]. Êðîìå òîãî, â ðÿäå èññëåäîâàíèé ïîêàçàíî, ÷òî ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ áëèçêî ê äåéñòâèþ ãèäðîêîðòèçîíà è ïðåäíèçîëîíà (èç-çà ñõîäñòâà ñî ñòðóêòóðàìè ïîñëåäíèõ). Ïîêàçàíî ñîõðàíåíèå ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ ïðè ââåäåíèè æèâîòíûì â òå÷åíèå 6 ÷àñîâ. ÃÊ ÿâëÿåòñÿ òàêæå ñèíåðãèñòîì ïðåäíèçîëîíîâûõ ïðåïàðàòîâ (èç-çà èíãèáèðîâàíèÿ ðàñùåïëÿþùèõ èõ ôåðìåíòîâ). Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ òàêæå ñâÿçûâàþò ñ 217 èíãèáèðîâàíèåì àêòèâíîñòè PLA â ëèçîñîìàõ, ÷òî, â ñâîþ î÷åðåäü, ïðåïÿòñòâóåò îñâîáîæäåíèþ èç ëèçîñîì ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ è êèñëûõ ôîñôàòàç, íàêîïëåíèå êîòîðûõ â òêàíÿõ ïðèâîäèò ê ïîâðåæäåíèþ êëåòîê è ðàçâèòèþ âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà. Íåäàâíî ïîêàçàíî, ÷òî ñåêðåòîðíàÿ ôîñôîëèïàçà À2 òèïà IIà (sPLA2), î÷èùåííàÿ èç ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè áîëüíûõ ñ ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì, ñïîñîáíà ñâÿçûâàòü ãëèöèððèçèí è ôóíêöèîíèðîâàòü êàê ãëèöèððèçèí-ñâÿçûâàþùèé áåëîê [45]. Ïðè ýòîì ÃÊ èíãèáèðóåò èíèöèèðóåìóþ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ àêòèâíîñòü sPLA2, à ÃÒ â ýòîì îòíîøåíèè îêàçàëàñü â òðè ðàçà àêòèâíåå. Íà ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîì ýôôåêòå îñíîâàíî ïðèìåíåíèå ÃÊ â ôîðìå ãåëÿ äëÿ ëå÷åíèÿ êîæíûõ çàáîëåâàíèé, íàïðèìåð, õðîíè÷åñêîãî äåðìàòèòà [46]. Ðàçðàáîòàíà òàêæå êîìïîçèöèÿ ÃÊ ñ ñîåâûì ÔÕ èëè ãèäðèðîâàííûì ñîåâûì ÔÕ â ëèïîñîìàëüíîé ôîðìå ñ ðàçìåðîì ëèïîñîì 90-120 íì. Óñòàíîâëåíî îïòèìàëüíîå äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ â êîæó ñîîòíîøåíèå ëèïèä:ÃÊ - 4:1 [47]. Sakamoto ñ ñîàâò [48] ïîêàçàëè in vitro èíãèáèðóþùèé ýôôåêò ÃÊ íà ôîñôîðèëèðîâàíèå è ÄÍÊ-ñâÿçûâàþùóþ ñïîñîáíîñòü áåëêîâ HMG1 è HMG2 (high mobility group proteins -1, -2), ñîäåðæàùèõ âûñîêî ðåàêòèâíûå ñàéòû ôîñôîðèëèðîâàíèÿ äëÿ äâóõ ïðîòåèíêèíàç - Ñ è Ê. ÃÊ êîíêóðåíòíî ñâÿçûâàåòñÿ ñ ýòèìè áåëêàìè, ïðåïÿòñòâóÿ èõ ôîñôîðèëèðîâàíèþ è ïðèñîåäèíåíèþ ê ÄÍÊ. Ïî ìíåíèþ àâòîðîâ èíäóöèðîâàííîå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòîé èíãèáèðîâàíèå ôèçèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè HMG1/2 ñïîñîáñòâóåò ïðîÿâëåíèþ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ in vivo [48]. 7.1.3. Àíòèîêñèäààíòíûå ñâîéñòâàà ãëèö öèððèçèíîâîé êèñëîòû. ÃÊ îáëàäàåò àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòüþ [49], êîòîðóþ ñâÿçûâàþò ñ èíãèáèðîâàíèåì PK C, óñèëèâàþùåé ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ (ÏÎË) ÷åðåç ôîñôîðèëèðîâàíèå 5ëèïîêñèãåíàçû. Äåéñòâèå ÃÊ òîðìîçèò ýòîò ïðîöåññ. Êðîìå òîãî ÃÊ ñïîñîáíà ñâÿçûâàòüñÿ ñ ïðîîêñèäàíòîì ïðîñòàãëàíäèíîì Å2.  ãåïàòîöèòàõ ÃÊ ñïîñîáíà èíàêòèâèðîâàòü ôåðìåíòû, èíèöèèðóþùèå ÏÎË, ñ ÷åì ñâÿçûâàþò åå ãåïàòîïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå [50]. 7.1.4. Ãåïààòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâàà. Åùå áîëåå 10 ëåò íàçàä áûë îáíàðóæåí âûñîêèé òðîïèçì ÃÊ ê ïå÷åíè, ãäå ÷åðåç 1-2 ÷àñà ïîñëå âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ îáíàðóæèâàëîñü áîëüøàÿ åå ÷àñòü [15]. Ñêîðîñòü çàõâàòà ÃÊ ïå÷åíüþ çàâèñèò îò ôóíêöèè è ýêñïðåññèè îñîáîãî êëàññà ãåïàòîöåëëþëÿðíûõ áåëêîâ "îðãàíè÷åñêèõ àíèîí218 òðàíñïîðòèðóþùèõ ïîëèïåïòèäîâ", êîäèðóåìûõ ñåìåéñòâîì ãåíîâ SLC21A [51]. Âûñîêàÿ ñêîðîñòü çàõâàòà ÃÊ ïå÷åíüþ ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ ïðîÿâëåíèÿ âûðàæåííîé ãåïàòîïðîòåêòîðíîé àêòèâíîñòè, ñâîéñòâåííîé êàê ÃÊ, òàê è åå àãëèêîíó - ÃÒ [10, 15, 52]. Íà ìîäåëè îòðàâëåíèÿ æèâîòíûõ D-ãàëàêòîçàìèíîì áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñóùåñòâåííî ìåíüøèå äîçû ÃÒ ïî ñðàâíåíèþ ñ ÃÊ îñòàíàâëèâàëè óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè àìèíîòðàíñôåðàç â ñûâîðîòêå êðîâè, ñâÿçàííîå ñ ïîâðåæäåíèåì ãåïàòîöèòîâ [52]. Íèçêèå êîíöåíòðàöèè ÃÒ (5-50 ìêã/ìë) ïðåäîòâðàùàëè âûçâàííûé äåéñòâèåì ÑÑ14 íà ïåðâè÷íóþ êóëüòóðó ãåïàòîöèòîâ âûõîä àìèíîòðàíñôåðàç èç êëåòîê. Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà îêàçûâàëà òàêîé ýôôåêò ïðè êîíöåíòðàöèÿõ íå ìåíåå 1000 ìêã/ìë. Áîëåå âûðàæåííûå ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû àâòîðû ñâÿçûâàþò ñ âûñîêîé åå àäñîðáöèåé íà ãåïàòîöèòàõ [52]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè ïðÿìîì âîçäåéñòâèè òîêñèíîâ (àëëèëôîðìèàò, ÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä, ãàëàêòîçàìèí) ÃÊ ïðåïÿòñòâóåò ïîâðåæäåíèþ ãåïàòîöèòîâ ïå÷åíè êðûñ [15, 53]. Êîìïëåêñ ÃÊ ñ ìåòèîíèíîì èíãèáèðóåò ðàçâèòèå ó æèâîòíûõ õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà. Íà ìûøàõ ñ ìîäåëüþ ãåïàòèòà, èíäóöèðîâàííîãî âåäåíèåì êîíêàíàâàëèíà À, ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü ÃÊ èíãèáèðîâàòü ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀò â êðîâè [54-56]. Íà ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ôèáðîçà ïå÷åíè êðûñ, âûçâàííîãî ïîäêîæíûìè èíúåêöèÿìè ÑCl4, Cai ñ ñîàâò [57] èçó÷àëè âîçäåéñòâèå ÃÊ íà ýêñïðåññèþ ãåíîâ. Ñ ïîìîùüþ RT-PCR-àíàëèçà (reverse transcription - polymerase chain reaction èëè RT-ÏÖÐàíàëèç) áûëî ïîêàçàíî óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè ðÿäà ãåíîâ (smurf2, RTAFR, CYP2D6, FGG), ñâÿçàííûõ ñ âîñïàëåíèåì. Òàêèõ èçìåíåíèé íå íàáëþäàëè ïðè ïàðàëëåëüíîì ñ ãåïàòîòîêñèíîì ââåäåíèè êðûñàì ÃÊ. Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ àâòîðû ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÃÊ ñïîñîáíà îêàçûâàòü àíòèôèáðîçíîå äåéñòâèå [57]. Ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà ÃÊ ïðîÿâëÿþòñÿ òàêæå â ñíèæåíèè óðîâíÿ ñûâîðîòî÷íûõ òðàíñàìèíàç è êîëè÷åñòâà ïðîäóêòîâ ÏÎË â ïå÷åíè. Áîëüøèíñòâî èññëåäîâàòåëåé ñ÷èòàþò, ÷òî ãåïàòîïðîòåêòîðíûé ýôôåêò ÃÊ îáóñëîâëåí åå àíòèîêñèäàíòíûìè ñâîéñòâàìè è îñîáåííîñòüþ õèìè÷åñêîãî ñòðîåíèÿ ìîëåêóëû, à èìåííî, êîíöåâûì ðàñïîëîæåíèåì ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû â óãëåâîäíîé öåïè ìîëåêóëû ãëèêîçèäà [58]. Jeong ñ ñîàâò. [59], èçó÷àÿ ãåïàòîçàùèòíîå äåéñòâèå 18-βãëèöèððåòîâîé êèñëîòû ïðè ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè, èíäóöèðîâàííîì ÑCl4, óñòàíîâèëè èíãèáèðîâàíèå ýêñïðåññèè öèòîõðîìà Ð450 2EI.  äàííîé ðàáîòå ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå æèâîòíûì ÃÒ ñäåðæèâàëî ðîñò àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â 219 ñûâîðîòêå êðîâè, à òàêæå ÏÎË â ïå÷åíè. Ãèäðîêñèëàçíàÿ àêòèâíîñòü öèòîõðîìà Ð450 2EI, âûäåëåííîãî èç ïå÷åíè ìûøåé ïîñëå ââåäåíèÿ ÃÒ, çíà÷èòåëüíî ñíèæàëàñü. Ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà ïðîÿâëÿëà òàêæå àíòèîêñèäàíòíóþ àêòèâíîñòü, ñóùåñòâåííî ñíèæàÿ ÏÎË â ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè ìûøåé, èíäóöèðîâàííîå FeCl2-àñêîðáàòîì. Àâòîðû ïîëàãàþò, ÷òî ÃÊ è åå ìåòàáîëèò - ÃÒ, îáëàäàþò ãåïàòîïðîòåêòîðíûìè ñâîéñòâàìè, îñëàáëÿÿ öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÑCl4 ïóòåì ïîäàâëåíèÿ ýêñïðåññèè è àêòèâíîñòè èçîôîðìû öèòîõðîìà Ð450 2EI, à òàêæå ñïîñîáñòâóÿ óäàëåíèþ îáðàçóåìûõ èì ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ [59]. Kimura ñ ñîàâò. [60] ïîêàçàëè, ÷òî ÃÊ è åå àíàëîãè, îñîáåííî 18α-ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà (18-α-ÃÒ), èíäóöèðóþò ðîñò êóëüòóðû ãåïàòîöèòîâ êðûñû, âîçäåéñòâóÿ íà ðåöåïòîð ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Ýòè ñîåäèíåíèÿ ñòèìóëèðîâàëè ñèíòåç ÄÍÊ è ïðîëèôåðàöèþ ãåïàòîöèòîâ âçðîñëûõ êðûñ â ïåðâè÷íîé êóëüòóðå, à òàêæå ôîñôîðèëèðîâàíèå îñòàòêîâ òèðîçèíà â EGF-ðåöåïòîðå è â ð42 ÌÀÐÊ. Ýôôåêòû ïîäàâëÿëèñü ìîíîêëîíàëüíûìè àíòèòåëàìè ïðîòèâ ðåöåïòîðà ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Ñïåöèôè÷åñêèå èíãèáèòîðû òðàíñäóêöèè ñèãíàëîâ, ñâÿçàííûõ ñ ðîñòîì êëåòîê ãåíèñòåèí, 2-àìèíî-3-ìåòîêñèôëàâîí è ðàïàìèöèí - ïîëíîñòüþ áëîêèðîâàëè èíäóöèðîâàííûé ÃÊ ñèíòåç ÄÍÊ è ïðîëèôåðàöèþ ãåïàòîöèòîâ. Àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ãëèöèððèçèí è íåêîòîðûå åãî àíàëîãè ÿâëÿþòñÿ ìèòîãåíàìè äëÿ êóëüòóðû ãåïàòîöèòîâ. Ìåõàíèçì èõ äåéñòâèÿ, âîçìîæíî, ñâÿçàí ñ ïðèñîåäèíåíèåì ãëèöèððèçèíà è/èëè åãî àíàëîãîâ ê EGF-ðåöåïòîðàì è ïîñëåäóþùåé ñòèìóëÿöèåé êàñêàäà ðåàêöèé ñ ó÷àñòèåì ðåöåïòîðíîé òèðîçèíêèíàçû è ÌÀÐÊ; ïîñëåäíÿÿ èíäóöèðóåò ñèíòåç ÄÍÊ è ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê [60]. Ãåïàòîïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå ÃÊ ïðîäåìîíñòðèðîâàíî è â êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ - ââåäåíèå åå áîëüíûì ñ èíäóöèðîâàííûì ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûìè ëåêàðñòâàìè ãåïàòèòîì, ïðèâîäèëî ê óëó÷øåíèþ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè [61]. 7.1.5. Ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò. ÃÊ ìîæåò îêàçûâàòü ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò, êîòîðûé ïðîÿâëÿåòñÿ â ïîâûøåíèè óðîâíÿ ãëþêîêîðòèêîñòåðîèäîâ è ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäîâ â êðîâè çà ñ÷åò èíãèáèðîâàíèÿ äåéñòâèÿ 11-β-îêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû (òèï 2) è 5-α-ðåäóêòàçû [44, 62]. Èíãèáèðîâàíèå ýòèõ ôåðìåíòîâ ïðèâîäèò ê óâåëè÷åíèþ â êðîâè ñîäåðæàíèÿ êîðòèçîëà è àêòèâàöèè ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäíûõ ðåöåïòîðîâ. Çà ñ÷åò ýòîãî äåéñòâèÿ ÃÊ, âûçâàííîãî, êàê ñ÷èòàþò, ñòðóêòóðíûì ñõîäñòâîì åå àãëèêîíà è 11-êåòî-ñòåðîèäîâ, ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà, ïîäîáíî ãîðìîíàì êîðû íàäïî÷å÷íèêîâ, 220 îêàçûâàåò âëèÿíèå íà âîäíî-ñîëåâîé îáìåí, óñèëèâàÿ çàäåðæêó íàòðèÿ è óìåíüøàÿ ñîäåðæàíèå êàëèÿ â îðãàíèçìå, ÷òî ìîæåò ïðèâîäèòü ê ïîâûøåíèþ êðîâÿíîãî äàâëåíèÿ [63-66]. Ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäíîå äåéñòâèå ÃÊ è åå àãëèêîíà, ïîõîæåå íà ñèíäðîì èçáûòêà ìèíåðàëîêîðòèêîèäíûõ ãîðìîíîâ, ïîëó÷èëî íàçâàíèå "ïñåâäîàëüäîñòåðîíèçì" [65]. Èíãèáèðîâàíèå 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû ïðèâîäèò ê íàêîïëåíèþ êîðòèçîíà â êðîâè, à àêòèâàöèÿ ðåöåïòîðîâ ïðåïÿòñòâóåò èíàêòèâàöèè ãëþêîêîðòèêîèäîâ è ìèíåðàëîêîðòèêîèäîâ, ÷òî âëèÿåò íà áàëàíñ ýëåêòðîëèòîâ â îðãàíèçìå [4, 5, 62, 67-70]. Ýòî, â ñâîþ î÷åðåäü, ñâÿçàíî ñ èíãèáèðîâàíèåì Na+,K+-ÀÒÔàçû, ïîòåðåé Ê+ è çàäåðæêîé Na+, ñìåùåíèåì êèñëîòíî-ùåëî÷íîãî áàëàíñà, óäåðæèâàíèåì âîäû. Ïðè ýòîì íàèáîëüøóþ àêòèâíîñòü (~ â 200 ðàç âûøå) èíãèáèðîâàíèÿ 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû ïðîÿâëÿåò ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà [69]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî äëÿ ðàçâèòèÿ ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíîãî ýôôåêòà íåîáõîäèìî ëèáî 2-3-õ íåäåëüíîå ïîòðåáëåíèå î÷åíü âûñîêèõ äîç ÃÊ (ñâûøå 1,5 ãðàììà â äåíü), ëèáî äëèòåëüíîå, ìíîãî ìåñÿ÷íîå ïîòðåáëåíèå ïðåäåëüíî-äîïóñòèìûõ äîç ÃÊ (700-900 ìã â ñóòêè). Ñ äðóãîé ñòîðîíû, èíãèáèðîâàíèå ïðåâðàùåíèÿ êîðòèçîëà â êîðòèçîí îêàçûâàåò ýôôåêòèâíîå èììóíîìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå, ïîñêîëüêó êîðòèçîí ÿâëÿåòñÿ ñèëüíûì èììóííîñóïðåññîðîì. Íåäàâíî ïîÿâèëèñü äîïîëíèòåëüíûå äàííûå î ìåõàíèçìå ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíîãî ýôôåêòà ÃÊ. Ïîêàçàíî, ÷òî ýòî âëèÿíèå îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç ýêñïðåññèþ ðåöåïòîðîâ 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû è CRF (corticotrophin releasing factor êîðòèêîòðîïèí-ðåëèçèíã ôàêòîð) [71]. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî çàäåðæêà ñîëåé è âîäû ïðè èçáûòî÷íîì ââåäåíèè ÃÊ êðûñàì (200 ìã/êã) ñâÿçàíà, ïî êðàéíåé ìåðå ÷àñòè÷íî, ñ ïîâûøåíèåì ýêñïðåññèè àêâàïîðèíà-2 è -3 â ïî÷êàõ. Ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÃÊ 0.5, 1 è 2 íåäåëè, ñ ïîìîùüþ Âåñòåðí-áëîò àíàëèçà áûëî îáíàðóæåíî óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè àêâàïîðèí-2 è -3 âîäíûõ êàíàëîâ âî âíóòðåííåì è âíåøíåì ìåäóëëÿðíîì ñëîå ïî÷åê [72]. Yoh ñ ñîàâò. [73] ïîêàçàëè ýôôåêò ÃÊ íà ãëþêîêîðòèêîèäíûé ñèãíàëüíûé ïóòü â ãåïàòîöèòàõ. ÃÊ ñíèæàëà àêòèâíîñòü ãëþêîêîðòèêîèäíûõ ðåöåïòîðîâ ãåïàòîöèòîâ êðûñû ÷åðåç ñíèæåíèå ýêñïðåññèè HSP90, íî ïîâûøàëà ýêñïðåññèþ ãëþêîêîðòèêîèäèíäóöèðîâàííîãî ÒÀÒ-ãåíà. 7.1.6. Àíòèêààíö öåðîãåííîå äåéñòâèå ãëèö öèððèçèíîâîé êèñëîòû. Ê ìíîãî÷èñëåííûì ýôôåêòàì ÃÊ íåäàâíî äîáàâèëîñü åùå îäíî - àíòèêàíöåðîãåííîå. Ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ, 18-β-ÃÒ êèñëîòà è 18-α-ÃÒ ìîãóò èíãèáèðîâàòü ðîñò íåêîòîðûõ îïóõîëåé ó ìûøåé [74, 75].  áîëüøèíñòâå ðàáîò ðå÷ü èäåò íå î ïðÿìîì ïðîòèâîîïóõîëåâîì 221 ýôôåêòå, à îá îïîñðåäîâàííîì, çàùèòíîì ýôôåêòå ïðîòèâ äåéñòâèÿ êàíöåðîãåííûõ ñîåäèíåíèé. Òàê, áûëî ïîêàçàíî çàùèòíîå äåéñòâèå ÃÊ ïðîòèâ èíäóöèðîâàííîãî êàíöåðîãåíàìè ïîâðåæäåíèÿ ÄÍÊ, à òàêæå âîçìîæíîñòü ïîíèæàþùåé (down) ðåãóëÿöèè ðåöåïòîðà ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ÷òî âõîäÿùèå â ñîñòàâ ñîëîäêè ïîëèôåíîëû (âêëþ÷àÿ ÃÊ) èíäóöèðóþò àïîïòîç ðàêîâûõ êëåòîê [76]. ÃÊ çàùèùàåò êëåòêè îò èíäóöèðîâàííîãî àôëàòîêñèíîì îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà, ÷òî ìîæåò âíîñèòü âêëàä â åå àíòèêàíöåðîãåííîå äåéñòâèå. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòîò ýôôåêò ñâÿçàí ñî ñïîñîáíîñòüþ ÃÊ èíãèáèðîâàòü ìåòàáîëèçì ãåïàòîòîêñèíà, ïðèâîäÿùèé ê îáðàçîâàíèþ ìåòàáîëèòà, îáëàäàþùåãî êàíöåðîãåííûì ýôôåêòîì [77]. Kobayashi ñ ñîàâò. [78] íàáëþäàëè èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ íà ðàçâèòèå ëåãî÷íûõ ìåòàñòàçîâ ó ìûøåé ïîñëå èíîêóëÿöèè Â16 ìåëàíîìû, êîòîðîå îñóùåñòâëÿåòñÿ, êàê ïîëàãàþò àâòîðû, ÷åðåç ðåãóëÿöèþ Ò-õåëïåðíûõ êëåòîê òèïà 2 (Th2). ÃÊ ðåãóëèðóåò àêòèâíîñòü àêòèâàòîðíîãî áåëêà 1 (ÀÐ-1) ÿäåðíîãî òðàíñêðèïöèîííîãî ôàêòîðà, áëîêèðîâàíèå êîòîðîãî â îïóõîëåâîé êëåòêå ìîæåò èíãèáèðîâàòü èíäóöèðîâàííóþ êëåòî÷íóþ òðàíñôîðìàöèþ. Èçó÷åíèå ìåõàíèçìà àíòèêàíöåðîãåííîãî äåéñòâèÿ ÃÊ â êëåòêàõ Hep G2 è Vero ïîêàçàëî âëèÿíèå ÃÊ íà àêòèâíîñòü ÀÐ-1 [79]. Kao ñ ñîàâò. [80] èçó÷àëè âëèÿíèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà BZYQT, âêëþ÷àþùåãî ðÿä ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé, òàêèõ êàê àñòðàãàëîçèä IV, ãèíçåíîçèä Rb1 è Rg1, càéêîñàïîíèíû à è ñ, ãëèöèððèçèí, íà ïðîëèôåðàöèþ ðàêîâûõ êëåòîê. Ñóùåñòâåííîå èíãèáèðîâàíèå ïðîëèôåðàöèè îòìå÷åíî òîëüêî äëÿ èñõîäíîãî ïðåïàðàòà, òîãäà êàê îòäåëüíûå êîìïîíåíòû, â òîì ÷èñëå è ÃÊ, íå îáëàäàëè ïîäîáíûì äåéñòâèåì. Chan ñ ñîàâò. [81] ïîêàçàëè èíãèáèðîâàíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòîé öèòîòîêñè÷íîñòè, âûçâàííîé àôëàòîêñèíîì Â1 â êëåòêàõ ãåïàòîìû Hep G2. Àôëàòîêñèí Â1 âûçûâàåò îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ è îáðàçîâàíèå ÀÔÊ, à ÃÊ ñòèìóëèðóåò ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè CYP1A1 è ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçû â êóëüòóðå êëåòîê, ïðîÿâëÿÿ òåì ñàìûì çàùèòíûå ñâîéñòâà. Ïðåäâàðèòåëüíàÿ îáðàáîòêà êëåòîê ÃÊ òàêæå îáåñïå÷èâàëà çàùèòíîå äåéñòâèå è ïîâûøàëà âûæèâàíèå êëåòîê. Àâòîðû ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ îáëàäàåò ñâîéñòâàìè, çàùèùàþùèìè êëåòêó îò îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà, âûçûâàåìîãî àôëàòîêñèíîì, à òàêæå, âîçìîæíî, ïðîòèâîîïóõîëåâîé àêòèâíîñòüþ [81]. Ïðîèçâîäíûå ãëèöèððèçèíà â ýêñïåðèìåíòàõ íà êóëüòóðå êëåòîê ñåëåêòèâíî òîðìîçèëè ðîñò îïóõîëåâûõ êëåòîê ÷åëîâåêà 222 [82]. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ è 18-α-ÃÒ ÿâëÿþòñÿ õîðîøèìè àíòèïðîëèôåðàòèâíûìè àãåíòàìè, îñîáåííî íà êëåòêàõ ñ ïîíèæåííîé ñêîðîñòüþ ðåïëèêàöèè. Àíòèïðîëèôåðàòèâíûé ýôôåêò ýòèõ ñîåäèíåíèé áûë ÿâíî âûðàæåí íà ìåäëåííî ðàñòóùåé ëèíèè êëåòîê MCF-7. Ñ ïîìîùüþ ðàçðàáîòàííîãî àâòîðàìè òåñòà áûëî ïîêàçàíî, ÷òî îáðàáîòêà êëåòîê MCF-7 ðàçíûìè äîçàìè ÃÊ è 18-α-ÃÒ âûçûâàëà â íèõ àïîïòîç. Ýòî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî äàííûå ïðèðîäíûå ôèòîýñòðîãåíû ìîæíî ðàññìàòðèâàòü â êà÷åñòâå íîâûõ èíòåðåñíûõ àãåíòîâ äëÿ òåðàïèè ðàêà [82]. 7.1.7. Âëèÿÿíèå íàà îáðààçîâààíèå NO.  ñâÿçè ñ äàííûìè ïîñëåäíèõ ëåò î âàæíîé ôèçèîëîãè÷åñêîé ðîëè NO è îáðàçóþùèõ åãî ôåðìåíòîâ NO-ñèíòàç [83] (ñì. ãëàâó 3), èçó÷àëè âëèÿíèå ÃÊ íà ôóíêöèîíèðîâàíèå ýòîé áèîëîãè÷åñêè âàæíîé ñèñòåìû. Õàðàêòåð âëèÿíèÿ ÃÊ íà ãåíåðàöèþ NO çàâèñåë îò óñëîâèé è ñõåìû ýêñïåðèìåíòà. Òàê, ÃÊ ñòèìóëèðîâàëà ãåíåðàöèþ NO ìàêðîôàãàìè, èíèöèèðîâàííóþ ðàçëè÷íûìè âîçäåéñòâèÿìè, âêëþ÷àÿ ÈÔÍ-γ, ÷òî óñèëèâàëî ñïîñîáíîñòü ìàêðîôàãîâ óáèâàòü îïóõîëåâûå êëåòêè [84]. Èìåþòñÿ äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå îá àêòèâàöèè â ìàêðîôàãàõ 18-β-ãëèöèððåòîâîé êèñëîòîé ýêñïðåññèè èíäóöèáåëüíîé NO-ñèíòàçû (iNOS) [85] è óâåëè÷åíèè ïðîäóêöèè ìÐÍÊ NO-ñèíòàçû. Ïîñêîëüêó òðàíñêðèïöèÿ iNOS íàõîäèòñÿ ïîä êîíòðîëåì ðåãóëÿòîðîâ, àññîöèèðîâàííûõ ñ ÿäåðíûì ôàêòîðîì NFkB, áûëî èçó÷åíî âëèÿíèå ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû íà àêòèâàöèþ ïîñëåäíåãî. Àâòîðû ïîêàçàëè, ÷òî 18-β-ÃÒ àêòèâèðóåò ñâÿçûâàíèå NF-kB ñ áåëêàìè è ÄÍÊ, è ñäåëàëè âûâîä, ÷òî ýòî ïîâûøàåò ýêñïðåññèþ iNOS ÷åðåç òðàíñàêòèâàöèþ NF-kB, ñòèìóëèðóÿ ïðîäóêöèþ NO â ìàêðîôàãàõ [85].  îïûòàõ íà êðîëèêàõ ïîñëå èøåìè÷åñêîãî-ðåïåðôóçèîííîãî ïîâðåæäåíèÿ ìèîêàðäà (ñíèæàþùåãî óðîâåíü NO), ââåäåíèå ÃÊ âîññòàíàâëèâàëî åãî ïðîäóêöèþ è ïîñòóïëåíèå â ïëàçìó. Àâòîðû ðàññìàòðèâàþò ÃÊ â êà÷åñòâå ïðîòåêòèâíîãî ôàêòîðà ñ òî÷êè çðåíèÿ âàçîäèëÿòèðóþùåãî ýôôåêòà NO [86]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, Quaschning ñ ñîàâò. íàáëþäàëè ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà ôåðìåíòíîãî áåëêà ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû (åNOS) â òêàíè àîðòû ó êðûñ ïðè êîðîòêîì êóðñîâîì ââåäåíèè î÷åíü âûñîêèõ äîç ÃÊ (100 ìã/êã, 7 äíåé) [87, 88]. Ýòè ýôôåêòû àâòîðû ñâÿçàëè ñ èíàêòèâàöèåé 11-β-îêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû è ïîêàçàëè âîçìîæíîñòü èõ ïðåäîòâðàùåíèÿ àíòàãîíèñòàìè àëüäîñòåðîíîâûõ ðåöåïòîðîâ (ñïèðîíîëàêòîíîì è ýïëåðåíîíîì). Èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ íà îáðàçîâàíèå NO â ýêñòðåìàëüíûõ äëÿ êëåòêè óñëîâèÿõ íàáëþäàëè â ñòèìóëèðîâàííîé 223 ëèïîïîëèñàõàðèäîì ïåðâè÷íîé êóëüòóðå ãåïàòîöèòîâ êðûñ, êîòîðûì ââîäèëè âàêöèíó ÁÖÆ [89]. Ïðè ýòîì äîáàâëåíèå â ñðåäó ÃÊ ïðåäîòâðàùàëî îáðàçîâàíèå êëåòêàìè èçáûòêà NO, çàùèùàÿ êëåòêè îò àêòèâèðóåìîãî èì îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà ÷åðåç îáðàçîâàíèå ïåðîêñèíèòðèëîâ [90]. Ðåçóëüòàòû ýòèõ èññëåäîâàíèé ïîêàçûâàþò, ÷òî ÃÊ îêàçûâàåò ïîçèòèâíîå âëèÿíèå íà ñèñòåìó ñèíòåçà NO, êîòîðîå, âñëåäñòâèå ìíîãîñòîðîííîñòè áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ïîñëåäíåãî, ìîæåò ïðîÿâëÿòüñÿ ÷åðåç ðàçëè÷íûå ìåõàíèçìû. 7.2. Ïðèìåíåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå. 7.2.1. Ïðîòèâîâèðóñíààÿ àêòèâíîñòü ÃÊ. Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî èññëåäîâàíèé ÃÊ ñâÿçàíî ñ ðàçëè÷íûìè ïðîÿâëåíèÿìè åå ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòè.  ýòîì àñïåêòå ÃÊ â ïîñëåäíèå ãîäû ïðèâëåêàåò áîëüøîå âíèìàíèå íå òîëüêî áèîõèìèêîâ, íî è êëèíèöèñòîâ. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ è åå ñîëè â êîíöåíòðàöèÿõ 0,001 - 5% ïîëíîñòüþ èíãèáèðóþò in vitro ðåïðîäóêöèþ ÄÍÊ è ÐÍÊñîäåðæàùèõ âèðóñîâ è íåêîòîðûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ, òàêèõ êàê öèòîìåãàëîâèðóñû, âèðóñû ãåðïåñà [91], ãåïàòèòîâ À, Â, Ñ, âèðóñ ÂÈ×, à òàêæå âîçáóäèòåëü òóáåðêóëåçà, è ò. ä. [10, 15, 22, 39, 92 - 98]. Îïóáëèêîâàí öåëûé ðÿä ðàáîò, ïîñâÿùåííûõ âëèÿíèþ ÃÊ è åå ïðîèçâîäíûõ íà ðåïðîäóêöèþ âèðóñà èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà (ÂÈ×).  ÷àñòíîñòè, ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ ïîäàâëÿëà ïðîäóêöèþ ÂÈ× â õîäå ïåðâûõ ÷åòûðåõ ïåðåñåâîâ, à ïðè ïîñëåäóþùèõ ïåðåñåâàõ (âïëîòü äî 20) ïðîäóêöèÿ âèðóñà ñíèæàëàñü íà 60% ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì [99]. Ïîêàçàí ýôôåêò ÃÊ íà ðåïëèêàöèþ ÂÈ× â êóëüòóðå ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòîê ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (PBMC) ÷åëîâåêà ñ ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèåé íà ÂÈ× [100]. Ïîêàçàíà àíòèâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ÃÊ ïî îòíîøåíèþ ê âèðóñàì CHIKV è SFV, îòíîñÿùèõñÿ ê òèïó àëüôà-âèðóñîâ [101]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÃÊ ïîäàâëÿåò ðåïëèêàöèþ âèðóñà ÝïøòåéíàÁàððà in vitro â èíôèöèðîâàííûõ êëåòêàõ Raji. Ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ äåéñòâóåò íà ðàííåé ñòàäèè öèêëà ðåïëèêàöèè âèðóñà. Îíà íå âëèÿåò íè íà àäñîðáöèþ âèðóñà, íè íà åãî àêòèâíîñòü. Ïî ìíåíèþ àâòîðîâ, ÃÊ ÿâëÿåòñÿ íîâûì êëàññîì àíòè-Ýïøòåéí-Áàðð-âèðóñíûõ ñîåäèíåíèé ñ ìåõàíèçìîì äåéñòâèÿ, îòëè÷íûì îò èíãèáèðîâàíèÿ âèðóñíîé ÄÍÊ-ïîëèìåðàçû íóêëåîçèäíûìè àíàëîãàìè [102]. Ïîÿâèëèñü òàêæå ñîîáùåíèÿ îá ýôôåêòèâíîñòè ÃÊ ïðîòèâ âèðóñîâ SARS (àòèïè÷íîé ïíåâìîíèè). Àâòîðû ñðàâíèâàëè äåéñòâèå ÃÊ, ðèáàâèðèíà, àçàóðèäèíà, ïèðàçîôóëèíà è ìèêîôåíîëîâîé êèñëîòû ïðîòèâ äâóõ êëèíè÷åñèõ èçîëÿòîâ êîðîíàâèðóñîâ (FFM-1 è FFM-2), êîòîðûå áûëè ïîëó÷åíû îò 224 ïàöèåíòîâ ñ SARS. ÃÊ îêàçàëàñü íàèáîëåå ýôôåêòèâíîé èç íèõ [103]. Ïîäîáíûé ðåçóëüòàò áûë ïîëó÷åí è äëÿ ïàòîãåííûõ ôëàâèâèðóñîâ [104]. Îáîáùàÿ ìíîãî÷èñëåííûå äàííûå ëèòåðàòóðû, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ìåõàíèçì àíòèâèðóñíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ ñêëàäûâàåòñÿ èç: - ïðÿìîãî ïðèñîåäèíåíèÿ ê ïîâåðõíîñòè âèðóñà. Ïîäîáíî äðóãèì ïîëèñàõàðèäàì, ÃÊ ñïîñîáíà íåïîñðåäñòâåííî ïðèñîåäèíÿòüñÿ ê âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû âèðóñîâ è ìèêðîîðãàíèçìîâ, îáîãàùåííîé ãëèêîëèïèäàìè èëè ëèïîèäíûìè ñîåäèíåíèÿìè, îáâîëàêèâàòü è èíàêòèâèðîâàòü èõ; - ñâÿçûâàíèÿ ðåöåïòîðîâ êëåòîê-õîçÿèíà, ïðåïÿòñòâóÿ òåì ñàìûì ïðîíèêíîâåíèþ âèðóñíûõ ÷àñòèö âíóòðü êëåòêè. Ìåõàíèçì òî÷íî íå âûÿñíåí, íî ýòè ýôôåêòû óñòàíîâëåíû in vitro äëÿ öåëîãî ðÿäà âîçáóäèòåëåé; - âîçäåéñòâèÿ íà âíóòðèêëåòî÷íûå ïðîöåññû, ïðåäîòâðàùàÿ îñâîáîæäåíèå èç êëåòêè-õîçÿèíà âíîâü ðåïëèöèðîâàííûõ âèðóñíûõ ÷àñòèö èëè êîìïîíåíòîâ âèðóñà. Óñòàíîâëåíî èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ íà êàçåèíêèíàçó II, êàçåèíêèíàçó Ñ è ïðîòåèí-êèíàçó Ñ.  öåëîì, ÃÊ àêòèâèðóåò êëåòêè-êèëëåðû è îáðàçîâàíèå íåòèìóñíûõ Ò-êëåòîê è èíãèáèðóåò ðåïëèêàöèþ âèðóñà íà ðàííåé ñòàäèè, áëîêèðóåò îñâîáîæäåíèå TNF, èíäóöèðóåò ïðîäóêöèþ γèíòåðôåðîíà. Âñå ýòî ïðåïÿòñòâóåò òðàíñêðèïöèè è ðåïëèêàöèè âèðóñà âíóòðè êëåòêè-õîçÿèíà [4, 5, 15]. Êðîìå ýòîãî, êàê óæå óïîìèíàëîñü âûøå, ñïîñîáíîñòü ÃÊ ñâÿçûâàòüñÿ ñ áåëêàìè è ôåðìåíòàìè, èìåþùèìè ñðîäñòâî ê ñòåðîèäíûì ãîðìîíàì, â ÷àñòíîñòè, ñ ðàçëè÷íûìè êèíàçàìè, òàêæå ïðèâîäèò ê âûðàæåííîìó ïðîòèâîâèðóñíîìó ýôôåêòó. Ôîñôîðèëèðîâàíèå ýòèìè êèíàçàìè ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà, ê ðåïëèêàöèè è òðàíñêðèïöèè ñàìîãî âèðóñà è ðàçâèòèþ âîñïàëåíèÿ. Íàïðèìåð, êàçåèíêèíàçà II ôîñôîðèëèðóåò ñïåöèôè÷åñêèå áåëêè èíôèöèðîâàííîé êëåòêè, íåïîñðåäñòâåííî âèðóñíûå áåëêè, â òîì ÷èñëå îáðàòíóþ òðàíñêðèïòàçó. ÃÊ èíãèáèðóåò êàçåèíêèíàçó II, òåì ñàìûì ïðåïÿòñòâóÿ ïðîöåññó ðåïëèêàöèè âèðóñà. Äðóãàÿ êèíàçà - êàçåèíêèíàçà Ñ - ôîñôîðèëèðóåò ÿäåðíûé ôàêòîð NF-kÂ, êîòîðûé, â ñâîþ î÷åðåäü, ôîñôîðèëèðóåò âèðóñíûå áåëêè è àêòèâèðóåò èíôèöèðîâàííóþ êëåòêó-õîçÿèíà. Èíãèáèðóÿ êàçåèíêèíàçó Ñ, ÃÊ ïðåïÿòñòâóåò òðàíñêðèïöèè âèðóñà [34, 37].  êóëüòóðå êëåòîê ÃÊ, êàê è èíòåðôåðîí-α, ðèáàâèðèí è 6àçàóðèäèí, èíãèáèðóþò ðåïëèêàöèþ 11 ïàòîãåííûõ ôëàâèâèðóñîâ. Ïðè ýòîì ïðåèìóùåñòâî ÃÊ çàêëþ÷àåòñÿ â âîçìîæíîñòè ïîâûøåíèÿ 225 êîíöåíòðàöèè áåç öèòîñòàòè÷åñêîãî ýôôåêòà. Íåêîòîðûå ïðîèçâîäíûå ÃÊ (ýôèðû, àìèäû, ãëèêîïåïòèäû è äð.) òàêæå îáëàäàþò ðàçëè÷íûìè âèäàìè àêòèâíîñòè, â ÷àñòíîñòè, ñïîñîáíîñòüþ èíãèáèðîâàòü ÂÈ× è äð. [105]. Curelli ñ ñîàâò. [106] èçó÷àëè ìåõàíèçì äåéñòâèÿ ÃÊ íà âèðóñ ãåðïåñà, ñâÿçàííûé ñ ñàðêîìîé Êàïîøè. Ýòîò âèðóñ, ïîäîáíî äðóãèì ãåðïåñ-âèðóñàì, ñòàíîâèòñÿ ëàòåíòíûì â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå, ÷òî äåëàåò åãî íåäîñòóïíûì äëÿ òåðàïèè. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ, ïîäàâëÿÿ ýêñïðåññèþ ÿäåðíûõ àíòèãåíîâ LANA (latencyassociated nuclear antigen), ñíèìàåò ëàòåíòíîñòü âèðóñà â Âëèìôîöèòàõ è èíäóöèðóåò ãèáåëü èíôèöèðîâàííîé êëåòêè. Àâòîðû óñòàíîâèëè, ÷òî ñíèæåíèå LANA ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè ð53, ïîâûøåíèþ óðîâíÿ ÀÔÊ, ìèòîõîíäðèàëüíîé äèñôóíêöèè è ôðàãìåíòàöèè ÄÍÊ, ÷òî âûçûâàåò àïîïòîç êëåòêè, ïðåïÿòñòâóþùèé ïåðñèñòåíöèè âèðóñà. Íàèáîëåå ðåïðåçåíòàòèâíûé ñòàòèñòè÷åñêèé ìàòåðèàë íàêîïëåí ïî óñïåøíîìó ïðèìåíåíèþ ÃÊ, â îñíîâíîì, â ñîñòàâå ïðåïàðàòà íåîìèíîôàãåíà Ñ (ßïîíèÿ) ïðè ëå÷åíèè âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ [29, 92]. 7.2.2. Ðåçóëüòààòû êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿÿ ãëèö öèððèçèíîâîé êèñëîòû ïðè âèðóñíûõ ãåïààòèòààõ. Áîëüøèíñòâî èññëåäîâàíèé äåéñòâèÿ ÃÊ êàê â ñîñòàâå íåîìèíîôàãåíà Ñ, òàê è ðàçëè÷íûõ òðàâÿíûõ ñìåñåé, ñîäåðæàùèõ ñîëîäêó, ïðîâîäèëîñü â ßïîíèè, ãäå áîëåå 50% çàáîëåâàíèé âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè ñîñòàâëÿåò ãåïàòèò Ñ, ïðè÷åì ó 20% áîëüíûõ ÷åðåç 20-30 ëåò ðàçâèâàåòñÿ öèððîç ïå÷åíè, à ó 5% áîëüíûõ â ãîä ðàçâèâàåòñÿ ãåïàòîêëåòî÷íàÿ êàðöèíîìà [107]. Ïîëîæèòåëüíûé îòâåò íà ëå÷åíèå èíòåðôåðîíîì äàþò òîëüêî 3040% áîëüíûõ, ó êîòîðûõ, êàê ïîêàçàíî, ïðèñóòñòâóåò 1b ãåíîòèï âèðóñà.  òî æå âðåìÿ ïîêàçàí ïðåâåíòèâíûé ýôôåêò äëèòåëüíîãî ïðèìåíåíèÿ ÃÊ, ïðåäóïðåæäàþùèé ðàçâèòèå ãåïàòîêëåòî÷íîé êàðöèíîìû ïðè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ  è Ñ; ýòîò ýôôåêò íå çàâèñåë îò ãåíîòèïà âèðóñà è íàáëþäàëñÿ â òîì ÷èñëå ó áîëüíûõ, íå÷óâñòâèòåëüíûõ ê ëå÷åíèþ êîìáèíàöèåé èíòåðôåðîíà ñ ðèáàâèðèíîì [29, 75, 108-110]. Y. Arase ñ ñîàâò. [108] íàáëþäàëè áîëüíûõ ñ ÕÃÑ, èç êîòîðûõ 84-ì (I ãðóïïà) ïðîâîäèëè âíóòðèâåííóþ òåðàïèþ íåîìèíîôàãåíîì Ñ (2-7 ðàç â íåäåëþ ïî 100 ìë), à äðóãèì 109 áîëüíûì (II ãðóïïà) äàâàëè ðàçëè÷íûå ïðåïàðàòû ðàñòèòåëüíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. ×åðåç 10 ëåò íàáëþäåíèé ïðîöåíò ðàçâèòèÿ ãåïàòîöåëëþëÿðíîé êàðöèíîìû ñîñòàâèë 7% ó áîëüíûõ I ãðóïïû è 12% - II ãðóïïû, à ÷åðåç 15 ëåò ýòî ðàçëè÷èå âîçðîñëî (12% è 25% ñîîòâåòñòâåííî, p<0,05). 226 Êëèíè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî äëèòåëüíîå ëå÷åíèå áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ ÃÊ â ñîñòàâå íåîìèíîôàãåíà Ñ ïðåäîòâðàùàëî ðàçâèòèå íå òîëüêî ãåïàòîêëåòî÷íîé êàðöèíîìû, íî è öèððîçà. Îòìå÷àåòñÿ ýôôåêòèâíîñòü áîëåå ÷åì 40 ëåòíåãî ïðèìåíåíèÿ íåîìèíàôàãåíà Ñ â ëå÷åíèè àëëåðãè÷åñêèõ è âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ â ßïîíèè. Ó ðÿäà áîëüíûõ ñ öèððîçîì íàáëþäàëîñü óëó÷øåíèå ñîñòîÿíèÿ ñ ïåðåõîäîì â õðîíè÷åñêóþ ôîðìó ãåïàòèòà Ñ [107, 111]. Ïîäîáíûé ïåðåõîä öèððîçà ïå÷åíè â õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò Ñ ïîñëå äâóõëåòíåãî êóðñà èíúåêöèé ÃÊ îòìå÷àëè è äðóãèå àâòîðû [112].  ðàíäîìèçèðîâàííûõ êîíòðîëèðóåìûõ èñïûòàíèÿõ, ðåçóëüòàòû êîòîðûõ ïðèâåäåíû â îáçîðå van Rossum ñ ñîàâò. [29], ÃÊ âûçûâàëà çíà÷èòåëüíîå ñíèæåíèå àìèíîòðàíñôåðàç ñûâîðîòêè è óëó÷øåíèå ãèñòîëîãè÷åñêîé õàðàêòåðèñòèêè ïå÷åíè ïî ñðàâíåíèþ ñ ïëàöåáî. Òàê, â óñëîâèÿõ äâîéíîãî ñëåïîãî, êîíòðîëèðóåìîãî ïëàöåáî, èññëåäîâàíèÿ 57 áîëüíûõ ñ ãåïàòèòîì Ñ, ðåçèñòåíòíûõ ê α-èíòåðôåðîíó, ââåäåíèå 80-240 ìã ÃÊ âíóòðèâåííî 3 ðàçà â íåäåëþ ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ ïðè îòñóòñòâèè ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ. Ïî äàííûì Abe ñ ñîàâò. [113] ñðåäè áîëüíûõ ÕÃÑ, ïîëó÷àâøèõ èíòåðôåðîí âìåñòå ñ ÃÊ (âíóòðèâåííî â òå÷åíèå 12 íåäåëü), íîðìàëèçàöèÿ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ â ñûâîðîòêå êðîâè íàñòóïèëà â 64,3% ñëó÷àåâ, òîãäà êàê ó ëå÷åííûõ òîëüêî èíòåðôåðîíîì - â 33,3%. Ïðè ýòîì èñ÷åçíîâåíèå ÐÍÊ HCV îïðåäåëÿëîñü â 38,5% è 13,3% ñîîòâåòñòâåííî.  ìåäèöèíå Êèòàÿ, ãäå îñíîâíîå çíà÷åíèå â ëå÷åíèè ïðèäàåòñÿ èìåííî âîññòàíîâëåíèþ èììóííîé ðåãóëÿöèè ñ ïîìîùüþ åñòåñòâåííûõ ðàñòèòåëüíûõ èñòî÷íèêîâ, ÃÊ â âèäå ýêñòðàêòà ñîëîäêè îáÿçàòåëüíî âêëþ÷àþò â ôîðìóëû ñìåñåé òðàâ äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ  è Ñ [14]. Ïðè ëå÷åíèè òàêèìè ñìåñÿìè áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ âûðàæåííîå óëó÷øåíèå ñîñòîÿíèÿ íàáëþäàëè ó áîëüøèíñòâà ïàöèåíòîâ, â òî âðåìÿ êàê â òàêîé æå ãðóïïå, ïîëó÷àâøåé ëå÷åíèå ïî òðàäèöèîííîé åâðîïåéñêîé ñõåìå - αèíòåðôåðîíîì - ïîëîæèòåëüíûé ýôôåêò áûë îòìå÷åí ëèøü â ìåíåå ïîëîâèíû ñëó÷àåâ [114]. Âîçìîæíîñòü âëèÿíèÿ ãåíåòè÷åñêîé ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê ïîëîæèòåëüíîìó îòâåòó íà ÃÊ òîëüêî ó æèòåëåé þãî-âîñòî÷íîé Àçèè áûëà èñêëþ÷åíà ñïåöèàëüíûì èññëåäîâàíèåì, ïîêàçàâøèì ñíèæåíèå ÀëÀÒ ïîä äåéñòâèåì âíóòðèâåííî ââîäèìîé ÃÊ ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå Ñ ó åâðîïåéñêèõ ïàöèåíòîâ, íå ÷óâñòâèòåëüíûõ ê ëå÷åíèþ èíòåðôåðîíîì [115]. Íåëüçÿ íå îòìåòèòü ðåçóëüòàòû èñïîëüçîâàíèÿ ÃÊ íà 517 ïàöèåíòàõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ ñ èñïîëüçîâàíèåì ðàçëè÷íûõ ìåäèöèíñêèõ òðàâ è èõ ñìåñåé [116]. Àâòîðû ñîîáùàþò î ñíèæåíèè àêòèâíîñòè ÀëÀÒ ïîä âëèÿíèåì ÃÊ, îäíàêî áîëüøèé 227 ýôôåêò íàáëþäàëñÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè äðóãèõ êîìáèíàöèé, â ÷àñòíîñòè, îòìå÷àåòñÿ âûñîêàÿ ýôôåêòèâíîñòü áèîôëàâîíîèäà ñèëèáèíà (silybin). Ïîä÷åðêèâàåòñÿ òàêæå íåîáõîäèìîñòü ðàñøèðåíèÿ ðàíäîìèçèðîâàííûõ èññëåäîâàíèé. Íà íàø âçãëÿä, ïîëó÷åííûé íåâûñîêèé ýôôåêò ÃÊ â ýòîé ðàáîòå ñâÿçàí ñ åå ïåðîðàëüíûì ââåäåíèåì (âñëåäñòâèå åå íèçêîé âñàñûâàåìîñòè â êèøå÷íèêå). Âíèìàíèå ê "òðàâÿíîé" ìåäèöèíå ïîâûñèëîñü â ïîñëåäíåå âðåìÿ è â ÑØÀ - â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî áîëåå òðåòè ïàöèåíòîâ ïðåäïî÷èòàþò èìåííî òàêîé ñïîñîá ëå÷åíèÿ [114]. Ïðè ýòîì îòìå÷àþò õîðîøèå ýôôåêòû, ïîëó÷åííûå ïðè ëå÷åíèè ïå÷åíè â îñíîâíîì äâóìÿ ðàñòèòåëüíûìè ñîåäèíåíèÿìè - ñèëèìàðèíà è ÃÊ. Ïîêàçàíà ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ ïðè ââåäåíèè áîëüíûì ñïîðàäè÷åñêèì âèðóñíûì ãåïàòèòîì Å. Ó íèõ îòìå÷àëè çàìåòíîå êëèíè÷åñêîå óëó÷øåíèå ïîñëå 7-äíåâíîãî êóðñà âíóòðèâåííîãî ëå÷åíèÿ, ñîïðîâîæäàþùååñÿ ñíèæåíèåì óðîâíåé ÀñÀÒ è ÀëÀÒ [117]. ÃÊ, îñîáåííî â êîìáèíàöèè ñ ëàìèâóäèíîì, îêàçàëñÿ ýôôåêòèâíûì ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Â, ïîäàâëÿÿ ðåïëèêàöèþ âèðóñà [118, 119]. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî èíòåðôåðîí ÷àñòî íå ýôôåêòèâåí ïðè ëå÷åíèè ãåíîòèïà À ýòîãî âèðóñà. Ïðåäïðèíèìàëèñü ðàçëè÷íûå ïîïûòêè ïîâûñèòü ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè. Íàïðèìåð, ââåäåíèå êðîëèêàì ÃÊ ñ äîáàâëåíèåì ìåäà ïîâûøàëî ïëîùàäü ïîä êðèâîé "êîíöåíòðàöèÿ â ïëàçìå - âðåìÿ" (AUC, area under curve) äëÿ ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû, íå âëèÿÿ, îäíàêî, íà âñàñûâàåìîñòü ñàìîé ÃÊ [120]. Ïîêàçàíî, ÷òî èçìåíåíèå ðÍ â ïðåäåëàõ 5,6 - 7 íå âëèÿåò íà ãèäðîëèç ÃÊ êèøå÷íîé ôëîðîé äî ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû [121].  òî æå âðåìÿ åñòü ìíîãîîáåùàþùèå äàííûå ïî ââåäåíèþ êðûñàì ÃÊ â ñìåñè ñ ðàçëè÷íûìè æèðíûìè êèñëîòàìè (Ñ8:0, Ñ10:0, Ñ12:0 è Ñ18:1) - â âèäå íàòðèåâûõ ñîëåé. Îêàçàëîñü, ÷òî ïðè èõ àäüþâàíòíîì ââåäåíèè âìåñòå ñ ÃÊ (êðîìå Ñ8:0) âñàñûâàíèå ïîñëåäíåé óâåëè÷èâàëîñü â 3 - 40 ðàç [122]. Ïîâûøåíèå âñàñûâàíèÿ ÃÊ â êèøå÷íèêå ïðè îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè æèðíûõ êèñëîò íàáëþäàëè è äðóãèå àâòîðû [123], ïðè÷åì ýôôåêò óâåëè÷èâàëñÿ ñ óâåëè÷åíèåì äëèíû öåïè è áûë ìàêñèìàëüíûì äëÿ îëåàòà íàòðèÿ. Òî åñòü, æèðíûå êèñëîòû ìîãóò ñëóæèòü ôàêòîðàìè, óâåëè÷èâàþùèìè âñàñûâàíèå ÃÊ â êèøå÷íèêå.  ýòîé æå ðàáîòå ñ öåëüþ ïîèñêà âîçìîæíîñòè ïîâûøåíèÿ áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ ñðàâíèâàëèñü è äðóãèå ïóòè åå ââåäåíèÿ. Òàê, ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè êðûñàì (30 ìã/êã) êîíöåíòðàöèÿ ÃÊ â ïëàçìå áûëà î÷åíü 228 íèçêîé. Íî ïðè ðåêòàëüíîì èëè íàçàëüíîì ââåäåíèè ðàñòâîðà ÃÊ â òîé æå äîçå ïëàçìåííàÿ ÀUC óâåëè÷èâàëàñü (ò.å. íàáëþäàëàñü áîëåå âûñîêàÿ êîíöåíòðàöèÿ â òå÷åíèå áîëåå äëèòåëüíîãî âðåìåíè). Àáñîëþòíàÿ áèîäîñòóïíîñòü ÃÊ ïîñëå íàçàëüíîãî ââåäåíèÿ ñîñòàâëÿëà 20%, ÷òî ïðèìåðíî â 80 ðàç âûøå, ÷åì ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè. Ïðåäïðèíèìàëèñü ïîïûòêè ïîèñêà ðàçëè÷íûõ ýôôåêòèâíûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ÃÊ. Òàê, ââåäåíèå ÃÊ â âèäå ñóïïîçèòîðèÿ îêàçàëîñü ýôôåêòèâíûì äëÿ áîëüíûõ ñ ãåïàòèòîì Ñ, îñîáåííî íå îòâå÷àþùèõ íà ÈÔÍ-òåðàïèþ. Ýôôåêòèâíîñòü çà 12 íåäåëü ëå÷åíèÿ, êîòîðóþ îöåíèâàëè ïî ñíèæåíèþ ÀëÀÒ, îêàçàëàñü ðàâíîé òàêîâîé äëÿ âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ ÃÊ [124]. Shibata ñ ñîàâò. [125] äîáèâàëèñü ïîâûøåíèÿ áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ â êèøå÷íèêå ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè. Òàê, ïðè ââåäåíèè ñîáàêàì êàïñóë, ñîäåðæàùèõ ÃÊ è ëàáðàçîë (ïîëèìåðíûé êîìïëåêñ ïîëèãëèêîëèçèðîâàííîãî ãëèöåðèäà è ÏÝÃ), ÷åðåç 24 ÷àñà íàáëþäàëè 10-êðàòíîå ïîâûøåíèå áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ. Ïðèâåäåííûå äàííûå, óêàçûâàþùèå íà âûñîêóþ ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ â ëå÷åíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè è ïðèíöèïèàëüíóþ âîçìîæíîñòü ïîâûøåíèÿ åå áèîäîñòóïíîñòè, ïîñëóæèëè íàì îñíîâàíèåì äëÿ êîìáèíèðîâàííîãî èñïîëüçîâàíèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû âìåñòå ñ ôîñôîëèïèäàìè â ñîñòàâå íîâîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 7. 1. Blumenthal M., Busse W.R., Goldberg A. The Complete Commission E Monographs: Therapeutic Guide to Herbal Medicines. Boston MA: Integrative Medicine Communications, 1998. 2. Duke J.A. CRC Handbook of Medicinal Herbs. Boca Raton, Florida, CRC Press. 1985 3. Àâèöåííà. Êàíîí âðà÷åáíîé íàóêè. Òàøêåíò, ÔÀÍ. 1956. 4. Foster S. Licorice. http://www.stevenfoster.com/education/monograph/licorice.html 5. Ñîëîäêà ãîëàÿ (Glycyrrhiza glabra) http://www.floranimal. ru/pages/flora/s/6092.html 6. Ýíöèêëîïåäèÿ ëåêàðñòâåííûõ ðàñòåíèé. Ñîëîäêà Êîðæèíñêîãî http://www.bioshelf.ru/ru/enc/lekr/solo.shtml 7. Kusano G., Shibano M., Watanabe H., Ozaki K. Pharmaceutical botanical studies on some glycyrrhiza species. Yakugaku Zasshi. 2003, 123, 619-631. 8. Liut H.M., Akiyama T., Sugimoto N., Maitani T. Isolation and identification of main constituents in an enzymatically hydrolysed 229 licorice extract sweetener. Food Addit Contam. 2001, 18, 281-284. 9. Ëèòâèíåíêî Â.È., Ïîïîâà Ò.Ï., Àìîñîâ À.Ñ.  êí: Èçó÷åíèå è èñïîëüçîâàíèå ñîëîäêè â íàðîäíîì õîçÿéñòâå ÑÑÑÐ. Àëìà-Àòà, 1991. 10. Òîëñòèêîâ Ã.À., Áàëòèíà Ë.À., Øóëüö Ý.Ý., Ïîêðîâñêèé À.Ã. Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà. Áèîîðãàíè÷åñêàÿ õèìèÿ. 1997, 23, 691709. 11. Yamamoto Y., Majima T., Saiki I., Tani T. Pharmaceutical evaluation of glycyrrhiza uralensis roots cultivated in eastern Nei-Meng-Gu of China. Biol Pharm Bull. 2003, 26, 1144-1149. 12. Ueno T., Sata M. Forefront of therapy for hepatic fibrosis. Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 2002, 99, 365-378. 13. Ãðàíêèíà Â.Ï., Íàäåæäèíà Ã.Ï. Ñîëîäêà óðàëüñêàÿ. Íàóêà, Íîâîñèáèðñê. 1991. 14 Àðòèøåâñêàÿ Ý.Â., Çåìöîâ Ð.Í., Äàðãàåâà Ò.Ä. Òèáåòñêàÿ ìåäèöèíà: èñòîðèÿ, ìåòîäîëîãè÷åñêîå èçó÷åíèå è ïåðñïåêòèâû èñïîëüçîâàíèÿ. Óëàí-Óäý. 1989. 15. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîëîãèÿ è òåðàïèÿ. 2000, 9, 39-41. 16. Glycosides. http://www.friedli.com/herbs/phytochem/glycosides. html#licorice 17. Wedell L., Combest P. Herbal Pharmacy: Licorice. http://www.uspharmacist.com. 18. Leung A.Y., Foster S. Encyclopedia of ñommon natural ingredients used in foods, drugs and cosmetics. John Wiley&Sons, New York. 1996. 19. Shim S.B., Kim N.J., Kim D.H. Beta-glucuronidase activity and hepatoprotective effect of 18-β-glycyrrhetic acid from the rhizomes of Gglycyrrhiza uralensis. Planta Med. 2000, 66, 40-43 20. Teelucksingh S., Mackie A.D., Burt D., McIntyre M.A., Brett L., Edwards C.R. Potentiation of hydrocortisone activity in skin by glycyrrhetinic acid. Lancet. 1990, 335, 1060-1063. 21. Zimmerman Ì. Immune Enhancers. http://www.newhope. com/nutritionsciencenews/NSN_backs/Feb_99. 22. Numazaki K., Nagata N., Sato T., Chiba S. Effect of glycyrrhizin, cyclosporin and tumor necrosis factor alpha on infection of U-937 and MRC-5 cells by human cytomegalovirus. J Leukoc Biol. 1994, 55, 24-28. 23. Beil W., Birkholz C., Sewing K.F. Effects of flavonoids on parietal cell acid secretion, gastric mucosal prostaglandin production and 230 Helicobacter pylori growth. Arzneimittelforschung. 1995, 45, 697-700. 24. Paolini M., Pozzetti L., Sapone A., Cantelli-Forti G. Effect of licorice and glycyrrhizin on murine liver CYP-dependent monooxygenases. Life Sci. 1998, 62, 571-582. 25. Nakajima N., Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N., Pollard R.B., Suzuki F. In vitro induction of anti-type 2T cells by glycyrrhizin. Burns. 1996, 22, 612-617. 26. Raphael T., J., Kuttan G. Effect of naturally occurring triterpenoids glycyrrhizic acid, ursolic acid, oleanolic acid and nomilin on the immune system. Phytomedicine. 2003, 10, 483-489. 27. Shishido Y., Nagayama N., Masuda K., Baba M., Tamura A., Nagai H., Akagawa S., Kawabe Y., Machida K., Kurashima A., Komatsu H., Yotsumoto H. Agranulocytosis due to anti-tuberculosis drugs including isoniazid (INH) and rifampicin (RFP) - a report of four cases and review of the literature. Kekkaku. 2003, 78, 683-689. 28. Takahara T., Watanabe A., Shiraki K. Effects of glycyrrhizin on hepatitis B surface antigen: a biochemical and morphological study. J Hepatol. 1994, 21, 601-609. 29. van Rossum T.G., J., Vulto A.G., De Man R.A., Droiwer J.T., Schalm S.W. Review article: glycyrrhizin as a potential treatment for chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205. 30. Abe N., Ebina T., Ishida N. Interferon induction by glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid in mice. Microbiol Immunol. 1982, 26, 535-539. 31. Kimura M., Watanabe H., Abo T. Selective activation of extrathumic T-cells in the liver by glycyrrhizin. Biotherapy. 1992, 5, 167-176. 32. Kobayashi M., Fujita K., Katakura T., Utsunomiya T., Pollard R.B., Suzuki F. Inhibitory effect of glycyrrhizin on experimental pulmonary metastasis in mice inoculated with B16 melanoma. Anticancer Res. 2002, 22, 4053-4058 33. Abe M., Akbar F., Hasebe A., Horiike N., Onji M. Glycyrrhizin enhances interleukin-10 production by liver dendritic cells in mice with hepatitis. J Gastroenterol. 2003, 38, 962-967. 34. Dai J.H., Iwatani Y., Ishida T., Terunuma H., Kasai H., Iwakula Y., Fujiwara H., Ito M. Glycyrrhizin enhances interleukin-12 production in peritoneal macrophages. Immunology. 2001, 103, 235-243. 35. Utsunomiya T., Kobayashi M., Ito M., Herndon D.N., Pollard R.B., Suzuki F. Glycyrrhizin restores the impaired IL-12 production in thermally injured mice. Cytokine. 2001, 14, 49-55. 36. Collins R., Howard C., Duggan S., Werling D. Bovine interleukin-12 and modulation of IFN gamma production. Vet Immunol Immunopathol. 1999, 68, 193-207. 37. Du C., Sriram S. Induction of interleukin-12/p40 by superantigens in macrophages is mediated by activation of nuclear factor231 kappaB. Cell Immunol. 2000, 199, 50-57. 38. Rosenzweig S.D., Holland S.M. Congenital defects in the interferon-gamma/interleukin-12 pathway. Curr Opin Pediatr. 2004, 16, 38. 39. Miyaji C., Miyakawa R., Watanabe H., Kawamura H., Abo T. Mechanisms underlying the activation of cytotoxic function mediated by hepatic lymphocytes following the administration of glycyrrhizin. Int Immunopharmacol. 2002, 2, 1079-1086. 40. Miyake K., Tango S., Ota Y., Mitamura K., Yoshiba M., Kako M., Hayashi S., Ikeda Y., Hayashida N., Iwabuchi S., Sato Y., Tomi T., Funaki N., Hashimoto N., Umeda T., Miyazaki J., Tanaka K., Endo Y., Suzuki H. Efficacy of Stronger Neo-Minophagen C compared between two doses administered three times a week on patients with chronic viral hepatitis background. J Gastroenterol Hepatol. 2002, 17, 11981204. 41. Darnofall M., Eckard S. Licorice. http://www.geocities.com/ chadrx/licorice.html 42. Kai K., Komine K., Asai K., Kuroishi T., Komine Y., Kozutsumi T., Itagaki M., Ohta M., Endo Y., Kumagai K. Antiinflammatory effects of intramammary infusions of glycyrrhizin in lactating cows with mastitis caused by coaulase-negative staphylococci. Am J Vet Res. 2003, 64, 1213-1220. 43. Ito M., Sato A., Hirabayashi K., Tanabe F., Shigeta S., Baba M., De Clercq E., Nakashima H., Yamamoto N. Mechanism of inhibitory effect of glycyrrhizin on replication of human immunodeficiency virus (HIV). Antiviral Res. 1988, 10, 289-298. 44. Tanahashi T., Mune T., Morita H., Tanahashi H., Isomura Y., Suwa T., Daido H., Gomez-Sanchez C.E., Yasuda K. Glycyrrhizic acid suppresses type 2 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase expression in vivo. J Steroid Biochem Mol Biol. 2002, 80, 441-447. 45. Shimoyama Y., Sakamoto R., Akaboshi T., Tanaka M., Ohtsuki K. Characterization of secretory type IIA phospholipase A2 (sPLA2-IIA) as a glycyrrhizin (GL)-binding protein and the GL-induced inhibition of the CK-II-mediated stimulation of sPLA2-IIA activity in vitro. Biol Pharm Bull. 2001, 24, 1004-1008. 46. Saeedi M., Morteza-Semnani K., Ghoreishi M.R. The treatment of atopic dermatitis with licorice gel. J Dermatolog Treat. 2003, 14, 153157. 47. Trotta M., Peira E., Debernardi F., Gallarate M. Elastic liposomes for skin delivery of dipotassium glycyrrhizinate. Int J Pharm. 2002, 241, 319-327. 232 48. Sakamoto R., Okano M., Takena H., Ohtsuki K. Inhibitory effect of glycyrrhizin on the phosphorylation and DNA-binding abilities of high mobility group proteins I and 2 in vitro. Biol Pharm Bull. 2001, 24, 906-911. 49. Dragland S., Senoo H., Wake K., Holte K., Blomhoff R. Several culinary and medicinal herbs are important sources of dietary antioxidants. J Nutr. 2003, 133, 1286-1290. 50. Kinjo J., Hirakawa T., Tsuchihashi R., Nagao T., Okawa M., Nohara T., OkabeH. Hepatoprotective constituents in plants. 14. Effects of soyasapogenol B, sophoradiol, and their glucuronides on the cytotoxicity of tert-butyl hydroperoxide to HepG2 cells. Biol Pharm Bull. 2003, 26, 1357-1260. 51. Ismair M.G., Stanca C., Ha H.R., Renner E.L., Meier P.J., KullakUblick G.A. Interactions of glycyrrhizin with organic anion transporting polypeptides of rat and human liver. Hepatol Res. 2003, 26, 343-347. 52. Nose M., Ito M., Kamimura K., Shimizu M., Ogihara Y. A comparison of the antihepatotoxic activity between glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid. Planta Med. 1994, 60, 136-139. 53. Dehpour A.R., Zahedi H., Amini S. Effects of glycyrrhiza derivatives against acetaminophen-induced hepatotoxicity. Irn J Med Sci. 1999, 24, 26-33. 54. Okamoto T., Kanda T. Glycyrrhizin protects mice from conconavalin A-induced hepatitis without affecting cytokine expression. Int J Mol Med. 1999, 4, 149-152. 55. Okamoto T., Kajino K., Hino O. Hepatoprotective drugs for the treatment of virus-induced chronic hepatitis: from hypercarcinogenic state to hypocarcinogenic state. Jpn J Pharmacol. 2001, 87, 177-180. 56. Okamoto T., Okabe S. Development of anorexia in conconavalin A-induced hepatitis in mice. Jnt J Mol Med. 2001, 7, 169-172. 57. Cai Y., Shen X.Z., Wang J.Y. Effects of glycyrrhizin on genes expression during the process of liver fibrosis. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2003, 83,1122-1125. 58. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J., DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism Rewiev. 2001, 33, 125-147. 59. Jeong H.G., You H.J., Park S.J., Moon A.R., Chung Y.C., Kang S.K., Chun H.K. Hepatoprotective effects of 18-β-glycyrrhetinic acid on carbon tetrachloride-induced liver injury: inhibition of cytochrome P450 2E1 expression. Pharmacol Res. 2002, 46, 221-227. 60. Kimura M., Inoue H., Hirabayashi K., Natsume H., Ogihara M. 233 Glycyrrhizin and some analogues induce growth of primary cultured adult rat hepatocytes via epidermal growth factor receptors. Eur J of Pharmacol. 2001, 431, 151-161. 61. Miyazawa N., Takahashi H., Yoshiike Y., Ogura T., Watanuki Y., Sato M., Kakemizu N., Yamakawa Y., U C.H., Goto H., Odagiri S. Effect of glycyrrhizin on anti-tuberculisis drug-induced hepatitis. Kekkaku, 2003, 78, 15-19. 62. Kato H., Kanaoka M., Yano S., Kobayashi M. 3-Monoglucuronylglycyrrhetinic acid is a major metabolite that causes licorice-induced pseudoaldosteronism. J Clin Endocrinol Metab. 1995, 80, 1929-1933. 63. Edwards C.R., Benediktsson R., Lindsay R.S., Seckl J.R. 11-βhydroxysteroid dehydrogenases: key enzymes in determining tissuespecific glucocorticoid effects. Steroids. 1996, 61, 263-269. 64. Heikens J., Fliers E., Endert E., Ackermans M., van Montfrans G. Liquorice-induced hypertension - a new understanding of an old disease: case report and brief review. Neth J Med. 1995, 47, 230-234. 65. van Rossum T.G., de Jong F.H., Hop W.C., Boomsma F., Schalm S.W. "Ðseudo-aldosteronism" induced by intravenous glycyrrhizin treatment of chronic hepatitis C patients. J Gastroenterol Hepatol. 2001, 16, 789-795. 66. Shimojo M., Stewart P.M. Apparent mineralocorticoid excess syndromes. J Endocrinol Invest. 1995, 18, 518-532. 67. Negro A., Rossi E., Regolisti G., Perazzoli F. Liquorice-induced sodium retention. Merely an acquired condition of apparent mineralocorticoid excess? A case report. Ann Ital Med Int 2000, 15, 296-300. 68. Soma R., Ikeda M., Morise T., Miyamori I., Takeda R. Effect of glycyrrhizin on cortisol metabolism in humans. Endocr Regul. 1994, 28, 31-34. 69. Morris D.J., Lo Y.H., Lichtfield W.R., Williams G.H. Impact of dietary Na on glycyrrhetinic acid-like factors (kidney 11beta-(HSD2)GALFs) in human essential hypertension. Hypertension. 1998, 31(1 Pt2), 469-472. 70. Stewart P.M., Wallace A.M., Valentino R., Burt D., Shackleton C.H., Edwards C.R. Mineralocorticoid activity of licorice: 11-beta-îxysterid dehydrogenase deficiency comes of age. Lancet. 1987, 2, 821-824. 71. Hanafusa J., Mune T., Tanayashi T., Isomura Y., Suwa T., Isaji M., Daido H., Morita H., Murayama M., Yasuda K. Altered corticosteroid metabolism differentially affects pituitary corticotropin response. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2002, 282, 466-473. 72. Kang D.G., Sohn E.J., Lee H.S. Effects of glycyrrhizin on renal functions in association with the regulation of water channels. Am J 234 Chin Med. 2003, 31, 403-413. 73. YohT., Nakashima T., Sumida Y., Kakisaka Y., Nakajima Y., Ishikawa H., Sakamoto Y., Okanoue,T., Mitsuyoshi H. Effects of glycyrrhizin on glucocorticoid signaling pathway in hepatocytes. Dig Dis Sci. 2002, 47, 1775-1781. 74. Agarwal R., Wang Z.Y., Mukhtar H. Inhibition of mouse skin tumor-initiating activity of DMBA by chronic oral feeding of glycyrrhizin in drinking water. Nutr Cancer. 1991, 15, 187-193. 75. Guyton K.Z., Kensler T.W. Prevention of liver cancer. Curr Oncol Rep. 2002, 4, 464-470. 76. Wang Z.Y., Nixon D.W. Licorice and cancer. Nutr Cancer. 2001, 39, 1-11. 77. Nakamura T., Fujii T., Ichihara A., Enzyme leakage due to change of membrane permeability of primary cultured rat hepatocytes treated with various hepatotoxins and its prevention by glycyrrhizin. Cell Biol Toxico. 1985, 1, 285-295. 78. Kobayashi M., Fujita K., Katakura T., Utsunomiya T., Pollard R.B., Suzuki F. Inhibitory effect of glycyrrhizin on experimental pulmonary metastasis in mice inoculated with B16 melanoma. Anticancer Res. 2002, 22, 4053-4058. 79. Hsiang C.Y., Lai I.L., Chao D.C., Ho T.Y. Differential regulation of activator protein 1 activity by glycyrrhizin. Life Sci. 2002, 70, 16431656. 80. Kao S.T., Yang S.L., Hsieh C.C., Yang M.D, Wang T.F., Lin J.G. Immunomodulation of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang on in vitro granulocyte colony-stimulating-factor and tumor necrosis factor-alpha production by peripheral blood mononuclear cells. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2000, 22, 711-720. 81. Chan H.T., Chan C., Ho J.W. Inhibition of glycyrrhizic acid on aflatoxin Bl-induced cytotoxicity in hepatoma cells. Toxicology. 2003, 188, 211-217. 82. Rossi T., Castelli M., Zandomeneghi G., Ruberto A., Benassi L., Magnoni C., Santachiara S., Baggio G. Selectivity of action of glycyrrhizin derivatives on the growth of MCF-7 and HEP-2 cells. Anticancer Res. 2003, 23, 3813-3818. 83. Stuart-Smith K. Demystified nitric oxide. J Clin Patol: Mol Pathol. 2002, 55, 360-366. 84. Yi H., Nakashima I., Isobe K. Enhancement of nitric oxide production from activated macrophages by glycyrrhizin. Am J Chin Med. 1996, 24, 271-278. 235 85. Jeong H.G., Kim J.Y. Induction of inducible nitric oxide synthase expression by 18-beta-glycyrrhetinic acid in macrophages. FEBS Lett. 2002, 513, 208-212. 86. Li Y, Cai H. Effect of glycyrrhizin on plasma endothelin and serum nitric oxide in myocardial ischemia reperfusion rabbits. Hunan Yi Ke Da Xue Xue Bao. 1999, 24, 377-378. 87. Quaschning T., Ruschitzka F., Shaw S., Luscher T.F. Aldosteron receptor antagonism normalizes vascular function in liquorice-induced hypertension. Hypertension. 2001, 37, 801-805. 88. Ruschitzka F., Quaschning T., Noll G., deGottardi A., Rossier M.F., Enseleit F., Hurlimann D., Luscher T.F., Shaw S.G. Endothelin 1 type a receptor antagonism prevents vascular dysfunction and hypertension induced by 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase inhibition: role of nitric oxide. Circulation. 2001, 103, 3129-3135. 89. Zheng Q.Z., Lou Y.J. Pathologic characteristics of immunologic injury in primary cultured rat hepatocytes and protective effect of glycyrrhizin in vitro. Acta Pharmacol Sin. 2003, 24, 771-777. 90. Szabo C. Multiple pathways of peroxynitrite cytotoxicity. Toxicol Lett. 2003, 140-141, 105-112. 91. Lampi G., Deidda D., Pinza M., Pompei R. Enhancement of antiherpetic activity of glycyrrhizic acid by physiological proteins. Antivir Chem Chemother. 2001, 12, 125-131. 92. Iino S., Tango T., Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K., Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40. 93. Crance J.M., Scaramozzino N., Jouan A., Garin D. Interferon, ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin: antiviral compounds against flaviviruses. Antiviral Res. 2003, 58, 73-79. 94. Smith D. Glycyrrhizin: Research still promising still limited. AIDS Treatment News. San Francisco. 1990, 103, 2-3. 95. Tochikura T.S., Nakashima H., Yamamoto N. Antiviral agents with activity against human retroviruses. J Acquir Immune Defic Syndr. 1989, 2, 441-447. 96. Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N., Pollard R.B., Suzuki F. Effects of glycyrrhizin, an active component of licorice roots, on Candida albicans infection in thermally injured mice. Clin. Exp. Immunol. 1999, 116, 291-298. 97. Badam L. In vitro antiviral activity of indigenous glycyrrhizin, licorice and glycyrrhizic acid on Japanese encephalitic virus. J Commun 236 Dis. 1997, 29, 91-99. 98. Utsunomiya T., Kobayashi M., Pollard R.B., Suzuki F. Glycyrrhizin, an active component of licorice roots, reduces morbidity and mortality of mice infected with lethal doses of influenza virus. Antimicrob Agents Chemother. 1997, 41, 551-556. 99. Ïîêðîâñêèé À.Ã., Ïëÿñóíîâà Î.À., Ãàøíèêîâà Í.Ì., Ìàìàåâà Î.À., Ôåäþê Í.Â. Õðîíè÷åñêè èíôèöèðîâàííàÿ HIV-1 êóëüòóðà ìîíîöèòîâ ÷åëîâåêà U937 êàê ìîäåëü äëÿ èñïûòàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè àãåíòîâ ïðîòèâ ÂÈ×. Âîïð âèðóñîë. 2001, 46, 38-42. 100. Sasaki H., Takei M., Kobayashi M., Pollard R.B., Suzuki F. Effect of glycyrrhizin, an active component of licorice roots, on HIV replication in cultures of peripheral blood mononuclear cells from HIVseropositive patients. Pathobiology. 2002-2003, 70, 229-236. 101. Briolant S., Garin D., Scaramozzino N., Jouan A., Crance J.M. In vitro inhibition of Chikungunya and Semliki Forest viruses replication by antiviral compounds: synergistic effect of interferon-alpha and ribavirin combination. Antiviral Res. 2004, 61, 111-117. 102. Lin J.C. Mechanism of action of glycyrrhizic acid in inhibition of Epstein-Barr virus replication in vitro. Antiviral Res. 2003, 59, 41-47. 103. Cinati J., Morgenstern B., Bauer G., Chrandra P., Rabenau H., Doerr H.W. Glycyrrhizin as an active component of liquorice roots, and replication of SARS-assotiated coronavirus. Lancet. 2003, 361, 20452046. 104. Crance J.M., Scaramozzino N., Jouan A., Garin D. Interferon, ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin: antiviral compounds active against pathogenic flaviviruses. Antiviral Res. 2003, 58, 73-79. 105. Baltina L.A. Chemical modification of glycyrrhizic acid as a route to new bioactive compounds for medicine. Curr Med Chem. 2003, 10, 155-171. 106. Curelli F., Friedman-Kien A.E., Flore O. Glycyrrhizic acid alters Kaposi sarkoma-associated herpesvirus latencym tryggering p53-mediated apoptosis in transformed B lymphocytes. J Clin Invest. 2005, 115, 642-652. 107. Nissen, N.N., Martin P. Hepatocellular carcinoma: the highrisk patient. J Clin Gastroenterol. 2002, 35, 79-85. 108. Arase Y., Ikeda K., Murashima N., Chayama K., Tsubota A., Koida I., Suzuki Y., Saitoh S., Kobayashi M., Kumada H. The long term efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients. Cancer. 1997, 79, 494-500. 109. Chayama K. Management of chronic hepatitis C and prevention of hepatocellular carcinoma. J Gastroenterol. 2002, 37, 69-73. 237 110. Okuno M., Kojima S., Morivaki H. Chemoprevention of hepatocellular carcinoma: concept, progress and perspectives. J Gastroenterol Hepatol. 2001, 16, 1329-1335. 111. Kumada H. Long-term treatment of chronic hepatitis C with glycyrrhizin [stronger neo-minophagen C (SNMC)] for preventing liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Oncology. 2002, 62, 94-100. 112. Watanabe M., Uchida Y., Sato S., Moritani M., Hamamoto S., Mishiro T., Akagi S., Kinoshita Y., Kohge N. Report of case showing recovery from liver cirrhosis to chronic hepatitis, type C, after glycyrrhizin injection for 2 years and a sustained response by the following interferon therapy. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 1947-1949. 113. Abe Y., Ueda T., Kato T., Kohli Y. Effectiveness of interferon, glycyrrhizin combination therapy in patients with chronic hepatitis C. Nippon Rinsho. 1994, 52, 1817-1822. 114. Liu J.P., Manheimer E., Tsutani K., Gluud C. Medicinal herbs for hepatitis C virus infection. Cochrane Database Syst Rev. 2001, 4, CD003183 115. van Rossum T.G., Vulto A.G., Hop W.C., Schalm S.W. Glycyrrhizin-induced reduction of ALT in European patients with chronic hepatitis C. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 2432-2437. 116. Bean P. The use of alternative medicine in the treatment of hepatitis C. Am Clin Lab. 2002, 21, 19-21. 117. Tandon A., Tandon B.N., Bhujwala R.A. Clinical spectrum of acute sporadic hepatitis E and possible benefit of glycyrrhizin therapy. Hepatol Res. 2002, 23, 55-61. 118. Matsuo K., Takenaka K., Shimomora H., Fujii N., Shinagawa K., Kiura K., Harada M. Lamivudine and glycyrrhizin for treatment of chemotherapy-induced hepatitis B virus (HBV) hepatitis in a chronic YBV carrier with non-Hodgkin lymphoma. Leuk Lymphoma. 2001, 41, 191195. 119. Tandon A., Tandon B.N., Bhujwala R.A. Treatment of subacute hepatitis with Lamivudine and intravenous glycyrrhizin: a pilot study. Hepatol Res. 2001, 20, 1-8. 120. Ching H., Hou Y.C., Hsiu S.L., Tsai S.Y., Chao P.D. Influence of honey on the gastrointestinal metabolism and disposition of glycyrrhizin and glycyrrhetic acid in rabbits. Biol Pharm Bull. 2002, 25, 87-91. 121. Akao T. Effect of PH on metabolism of glycyrrhizin, glycyrrhetic acid and glycyrrhetic acid monoglucuronide by collected human intestinal flora. Biol Pharm Bull. 2001, 24, 1108-1112 238 122. Higaki K., Yata T., Sone M., Ogawara K., Kimura T. Estimation of absorption enhancement by medium-chain fatty acids in rat large intestine. Res Commun Mol Pathol Pharmacol. 2001, 109, 231-240. 123. Sasaki K., Yonebayashi S., Yoshida M., Shimuzu K., Aotsuka T., Takayama K. Improvement in the bioavailability of poorly absorbed glycyrrhizin via various non-vascular administration routes in rats. Int J Pharm. 2003, 265, 95-102. 124. Fujioka T., Kondou T., Fukuhara A., Tounou S., Mine M., Mataki N., Hanada K., Ozaka M., Mitani K., Nakaya T., Iwai T., Miyakawa H. Efficacy of a glycyrrhizin suppository for the treatment of chronic hepatitis C: a pilot study. Hepatol Res. 2003, 26, 10-14. 125. Shibata N., Ohno T., Shimokawa T., Hu Z., Yoshikawa Y., Koga K., Murakami M., Takada K. Application of pressure-controlled colon delivery capsule to oral administration of glycyrrhizin in dogs. J Pharm Pharmacol. 2001, 53, 441-447. 239 ÃËÀÂÀ 8. ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÀß ÊÎÌÏÎÇÈÖÈß ÍÀ ÎÑÍÎÂÅ ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ È ÔÎÑÔÀÒÈÄÈËÕÎËÈÍÀ ÑÎÈ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß È ÒÅÕÍÎËÎÃÈß ÏÎËÓ×ÅÍÈß C êîíöà 60-õ ãîäîâ ïðîøëîãî âåêà îäíèì èç ñïîñîáîâ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå áûëî èñïîëüçîâàíèå ðàñòèòåëüíûõ ÔË [1]. Ïåðâûì ïðåïàðàòîì, äåéñòâóþùèì ïî òàêîìó ìåõàíèçìó, áûë ýññåíöèàëå ("Nattermann", Ãåðìàíèÿ) [1-5], èíúåêöèîííàÿ ôîðìà êîòîðîãî ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñìåñü ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà (ÑÔÕ) è ñîëåé æåë÷íûõ êèñëîò. Îäíàêî èçâåñòíî, ÷òî æåë÷íûå êèñëîòû, â ÷àñòíîñòè, äåçîêñèõîëàò, ÿâëÿþòñÿ ñèëüíûìè äåòåðãåíòàìè è îêàçûâàþò ïîáî÷íûå òîêñè÷åñêèå ýôôåêòû, ïîýòîìó ìíåíèÿ êëèíèöèñòîâ â îòíîøåíèè ýôôåêòèâíîñòè ýòîãî ïðåïàðàòà ïðîòèâîðå÷èâû.  ñâÿçè ñ ýòèì ïðîáëåìà ðàçðàáîòêè íîâûõ ýôôåêòèâíûõ ïðåïàðàòîâ ìåìáðàíîðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè, îñîáåííî âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ, ó÷èòûâàÿ èõ âûñîêóþ ðàñïðîñòðàíåííîñòü, îñòàåòñÿ ïî-ïðåæíåìó àêòóàëüíîé [2, 6]. Ìíîãî÷èñëåííûìè èññëåäîâàíèÿìè 60-õ - 90-õ ãîäîâ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ýôôåêòèâíîñòü ôîñôîëèïèäíîé òåðàïèè ïå÷åíè îáóñëîâëåíà òåì, ÷òî ââîäèìûå â êðîâü ôîñôîëèïèäû áûñòðî ïîãëîùàþòñÿ êëåòêàìè ïå÷åíè, íîðìàëèçóþò àêòèâíîñòü êëåòî÷íûõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì è ïîâûøàþò äåòîêñèöèðóþùóþ ôóíêöèþ îðãàíà [1, 7]. Îäíàêî âîçìîæíîñòü èõ øèðîêîãî ïðèìåíåíèÿ â êëèíèêå îãðàíè÷åíà ñóùåñòâîâàíèåì åäèíñòâåííîãî ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà (ýññåíöèàëå) è îòñóòñòâèåì îòå÷åñòâåííûõ àíàëîãîâ, ÷òî è îáóñëàâëèâàåò ðàçðàáîòêó è âíåäðåíèå â êëèíè÷åñêóþ ïðàêòèêó íîâûõ ëåêàðñòâ íà ôîñôîëèïèäíîé îñíîâå, ñïîñîáñòâóþùèõ âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèé ïîâðåæäåííûõ êëåòîê ïå÷åíè.  ìèðîâîé ëèòåðàòóðå õîðîøî îáîñíîâàíà ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ ÃÊ. Îñîáî íåîáõîäèìî îòìåòèòü åå ïðîòèâîâèðóñíîå äåéñòâèå, îñíîâàííîå íà ìîäóëÿöèè èììóííûõ ñâîéñòâ â îðãàíèçìå è èíäóêöèè ÈÔÍ-γ (ñì. ãëàâó 7).  âèäå ïðåïàðàòà íåîìèíàôàãåí Ñ ÃÊ ïðèìåíÿåòñÿ â ßïîíèè äëÿ ëå÷åíèè "àëëåðãè÷åñêèõ" è âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ óæå áîëåå 30 ëåò [8-10].  Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè ýòîò ïðåïàðàò íå çàðåãèñòðèðîâàí. Èññëåäîâàíèÿ ïî âûÿñíåíèþ ðîëè ôîñôàòèäèëõîëèíà è ÃÊ â ðåïàðàöèè ãåïàòîöèòîâ è âîññòàíîâëåíèè èõ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè áûëè íà÷àòû â íàøåé ñòðàíå â ÍÈÈ ôèçèêîõèìè÷åñêîé ìåäèöèíû ÌÇ ÐÔ è çàòåì ïðîäîëæåíû â ÃÓ ÍÈÈ áèîìåäèöèíñêîé õèìèè ÐÀÌÍ â ïåðèîä 1975-1985 ã.ã. [11]. 240 Âïåðâûå êîìïîçèöèÿ, ñîñòîÿùàÿ èç ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû è ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà è îáëàäàþùàÿ ñïîñîáíîñòüþ âîññòàíàâëèâàòü ìåìáðàíû êëåòîê ïå÷åíè, àêòèâíîñòü èõ ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû, áûëà ïðåäëîæåíà íàìè â 1988 ã. [7]. Ýòîìó ïðåäøåñòâîâàëî èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ÑÔÕ (ñì. ãëàâó 6) è ÃÊ íà ïðîöåññû ðåïàðàöèè ìåìáðàí. 8.1. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ è ýôôåêòèâíîñòè çàùèòíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ íà ìèêðîñîìàëüíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè. Íåñìîòðÿ íà ìíîãî÷èñëåííûå èññëåäîâàíèÿ, ïîñâÿùåííûå ôàðìàêîëîãè÷åñêèì ñâîéñòâàì ÃÊ è åå ïðîèçâîäíûõ [8, 12], ìàëî ÷òî èçâåñòíî î åå àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòè è âëèÿíèè íà ìèêðîñîìàëüíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè.  ñâÿçè ñ ýòèì áûëè ïðîâåäåíû ýêñïåðèìåíòû ïî îöåíêå àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòè ñîëåé ÃÊ (Na1ÃÊ, Na3ÃÊ è K3ÃÊ), â êîòîðûõ ïîêàçàíî, ÷òî èõ äîáàâëåíèå ê ãåïàðèíèçèðîâàííîé êðîâè âûçâàëî òóøåíèå èíèöèèðîâàííîé èîíàìè Fe2+ õåìèëþìèíåñöåíöèè (ÕË) ïëàçìû êðîâè íà 76 ± 4,2 %; 78 ± 5,5 % è 81 ± 6,0 % [13]. Ýôôåêòèâíîñòü òóøåíèÿ áûëà ïðèáëèçèòåëüíî îäèíàêîâîé ïðè äîáàâëåíèè ñîëåé ÃÊ â íà÷àëå èëè íà ìàêñèìóìå ÕË Àíòèîêèñëèòåëüíàÿ àêòèâíîñòü ñîëåé ÃÊ áûëà ñîïîñòàâèìà ñ àêòèâíîñòüþ æèðîðàñòâîðèìîãî àíòèîêñèäàíòà èîíîëà (70 ± 5,0 %) è áîëåå, ÷åì â 3 ðàçà ïðåâûøàëà àêòèâíîñòü âîäîðàñòâîðèìîãî àíòèîêñèäàíòà ìàííèòîëà (24 ± 3,5%) â ýòèõ æå óñëîâèÿõ [13, 14]. Ýòè ðåçóëüòàòû ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îòìå÷åííîå â ðÿäå ðàáîò çàùèòíîå äåéñòâèå ÃÊ íà êëåòêè ãåïàòîöèòîâ, ïîâðåæäåííûõ ÑÑ14 â ýêñïåðèìåíòàõ in vitro, ñâÿçàíî ñ åå àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòüþ, ïîñêîëüêó íà÷àëüíûì ýòàïîì â ìåõàíèçìå öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÑÑ14 ÿâëÿåòñÿ åãî öèòîõðîì Ð450-çàâèñèìàÿ ìåòàáîëè÷åñêàÿ àêòèâàöèÿ â ïå÷åíè ñ îáðàçîâàíèåì·ÑÑ1•3-ðàäèêàëà, èíèöèèðóþùåãî ÏÎË (ñì. ãëàâó 6) [15]. Ïðè àíàëèçå ñâÿçûâàíèÿ Na3ÃÊ ñ öèòîõðîìîì Ð450 ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ãëèöèððèçèíàò îáðàçóåò ñ îêèñëåííûì ãåìîïðîòåèíîì êîìïëåêñ, õàðàêòåðèçóþùèéñÿ äèôôåðåíöèàëüíûì ñïåêòðîì ïîãëîùåíèÿ 1 òèïà ñ max = 374 íì è min = 418 íì. Ñïåêòðàëüíàÿ êîíñòàíòà ñâÿçûâàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ñ Na3ÃÊ ñîñòàâëÿëà 0,32 ± 0,05 ìÌ [13]. Ýòè ðåçóëüòàòû ñîãëàñóþòñÿ ñ ïîëó÷åííûìè ðàíåå äàííûìè î òîì, ÷òî ñóáñòðàòû 1 òèïà ñïîñîáíû çàìåäëÿòü èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 [16, 18, 19]. Âëèÿíèÿ ÃÊ íà ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó áûëî èññëåäîâàíî êàê in vitro, òàê è in vivo. Ïðè èññëåäîâàíèè äåéñòâèÿ ÃÊ íà èíàêòèâàöèþ èçîëèðîâàííîãî ãåìîïðîòåèíà, öèòîõðîì Ð450 2Â4 241 âûäåëÿëè èç ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ è ðàçâîäèëè äî êîíöåíòðàöèè 1 íìîëü/ìë 100 ìÌ ôîñôàòíîãî áóôåðà, ðÍ 7,4. Äîáàâëÿëè ðàñòâîð Na3ÃÊ â òîì æå áóôåðå äî êîíöåíòðàöèè 20 ìêÌ, è ïðåèíêóáèðîâàëè 5 ìèí ïðè 30°Ñ, ïîñëå ÷åãî â òå÷åíèå 20 ìèí ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450, îöåíèâàÿ âðåìÿ åãî èíàêòèâàöèè ïî íàêîïëåíèþ íåàêòèâíîé ôîðìû (ðàçíèöà îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé ïðè 420 è 450 íì) [7, 17]. Êàê èçâåñòíî, êîëè÷åñòâåííîé õàðàêòåðèñòèêîé èíàêòèâàöèè ãåìîïðîòåèíà ñëóæèò âðåìÿ åãî ïîëóèíàêòèâàöèè (t1/2).  îòñóòñòâèå ÃÊ t1/2 ãåìîïðîòåèíà ñîñòàâëÿëî 4 ìèí, à ïðè äîáàâëåíèè Na3ÃÊ - 9 ìèí, ò.å. ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ãåìîïðîòåèíà â ïðèñóòñòâèè ÃÊ ñíèæàëàñü áîëåå, ÷åì â 2 ðàçà. Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î ñòàáèëèçèðóþùåì âëèÿíèè ÃÊ íà öèòîõðîì Ð450 è ñîãëàñóåòñÿ ñ ðàíåå ïîëó÷åííûìè äàííûìè î çàùèòíîì äåéñòâèè íåêîòîðûõ àíòèîêñèäàíòîâ íà öèòîõðîì Ð450 [18-20]. Âëèÿíèå Na3ÃÊ íà ìèêðîñîìàëüíóþ ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè êðûñ èçó÷àëè ïîñëå êîðîòêîãî êóðñîâîãî âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ â äîçå 2 ìã/100 ã â òå÷åíèå òðåõ äíåé.  ìèêðîñîìàõ, âûäåëåííûõ èç ïå÷åíè ýòèõ æèâîòíûõ, îòìå÷åíî íåêîòîðîå óâåëè÷åíèå ñêîðîñòè ðåàêöèé ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ àíèëèíà è N-äåìåòèëèðîâàíèÿ àìèíîïèðèíà ïî ñðàâíåíèþ ñ ìèêðîñîìàìè èç ïå÷åíè èíòàêòíûõ êðûñ. Îíî áûëî îáóñëîâëåíî íåáîëüøîé èíäóêöèè öèòîõðîìà Ð450 ïîä äåéñòâèåì Na3ÃÊ (ïðèáëèçèòåëüíî íà 35%), áëàãîäàðÿ êîòîðîé â ìèêðîñîìàõ èç ïå÷åíè êðûñ îïûòíîé ãðóïïû âîçðàñòàëî óäåëüíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450. Óäåëüíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà b5 è àêòèâíîñòü ÍÀÄÍ-ôåððèöèàíèäðåäóêòàçû îñòàâàëèñü áåç èçìåíåíèé [13]. Ïðåäñòàâëåííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî íàòðèåâàÿ ñîëü ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû îáëàäàåò àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòüþ, ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, îáðàçóÿ êîìïëåêñû 1 òèïà, îêàçûâàåò ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà âîññòàíîâëåííûé ãåìîïðîòåèí è ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà è ïîâûøàåò ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450 â êëåòêàõ ïå÷åíè. Òàêèì îáðàçîì, èìåþùèåñÿ ëèòåðàòóðíûå äàííûå è ðåçóëüòàòû ñîáñòâåííûõ èññëåäîâàíèé îáîñíîâûâàþò âêëþ÷åíèå íàòðèåâîé ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ñîñòàâ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ, ïðåäíàçíà÷åííûõ äëÿ ëå÷åíèÿ òîêñè÷åñêèõ è âèðóñíûõ ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè, ÷òî äîëæíî ñïîñîáñòâîâàòü óâåëè÷åíèþ ýôôåêòèâíîñòè èõ äåéñòâèÿ íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû ÝÐ ïå÷åíè. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ñî÷åòàíèå ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÑÔÕ íà ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ è ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà è 242 Na3ÃÊ, àêòèâèðóþùåé èììóííóþ è èíòåðôåðîíîâóþ ñèñòåìû, à òàêæå ñòàáèëèçèðóþùåé ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìåáðàí ÝÐ, îêàæåòñÿ ýôôåêòèâíûì äëÿ ñîçäàíèÿ ïðèíöèïèàëüíî íîâîãî ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà, ñî÷åòàþùåãî â ñåáå ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ ýòèõ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé. 8.2. Èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ. 8.2.1. Ñðààâíèòåëüíààÿ õààðààêòåðèñòèêàà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïààðààòîâ. Ïðè èññëåäîâàíèè ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ñìåñè ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà è íàòðèåâîé ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû (ÔÕÃÊ) íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ â êà÷åñòâå ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ áûëè èñïîëüçîâàíû: (1) ÑÔÕ - ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí, (2) ÔÕÌ ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí ñ äîáàâëåíèåì ìàëüòîçû ôèðìû Nattermann, Ãåðìàíèÿ (ñîãëàñíî äîãîâîðó î íàó÷íîì ñîòðóäíè÷åñòâå) è (3) ýññåíöèàëå, øèðîêî ïðèìåíÿåìûé â êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Ìîðôîëîãèÿÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïààðààòîâ. Óëüòðàñòðóêòóðó ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö èññëåäóåìîé ñìåñè, ïîëó÷åííûõ ñ ïîìîùüþ óëüòðàçâóêîâîãî äåçèíòåãðàòîðà, à òàêæå ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ (ÑÔÕ, ÔÕÌ è ýññåíöèàëå), èññëåäîâàëè ìåòîäîì ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè [21]. Ñìåñü ÔÕÃÊ ñîñòîÿëà â îñíîâíîì èç ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö äèàìåòðîì îò 10 äî 100 íì, îñíîâíóþ ÷àñòü êîòîðûõ (90 %) ñîñòàâëÿëè ÷àñòèöû äèàìåòðîì 3545 íì. Ëèïîñîìû èç ÑÔÕ èìåëè ñðåäíèé äèàìåòð 200-250 íì, à ïðåïàðàò ÔÕÌ áûë ïðåäñòàâëåí íàíî÷àñòèöàìè äèàìåòðîì îò 25 äî 100 íì, îñíîâíàÿ ÷àñòü êîòîðûõ (95 %) èìåëà äèàìåòð 75-100 íì. Ýññåíöèàëå ïðåäñòàâëÿë ñîáîé òàêæå òîíêóþ ýìóëüñèþ ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö äèàìåòðîì îò 4 äî 50 íì. Ñîñòààâ è ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå ñâîéñòâàà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïààðààòîâ.  ñâÿçè ñ ñóùåñòâóþùèìè îïðåäåëåííûìè òðåáîâàíèÿìè Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî êîìèòåòà ê ïðåïàðàòàì íà ôîñôîëèïèäíîé îñíîâå (ðÍ, îñìîëÿðíîñòü, ðàçìåð ÷àñòèö è äð.) áûëà ðàçðàáîòàíà òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ â ëàáîðàòîðíûõ óñëîâèÿõ ñìåñè ÔÕÃÊ, îòâå÷àþùåé ýòèì òðåáîâàíèÿì. Ñîñòàâ è ôèçèêîõèìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè èññëåäóåìûõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 8.2.1. Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 8.2.1, èíäåêñ îêèñëåííîñòè ïðåïàðàòîâ, èçìåðÿåìûé êàê îòíîøåíèå ïîãëîùåíèÿ ïðè 233 íì (ìàêñèìóì ïîãëîùåíèÿ äèåíîâûõ êîíúþãàòîâ) ê ïîãëîùåíèþ ïðè 215 íì, íå ïðåâûøàë 0,32 äëÿ ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå, íî îêàçàëñÿ â 2 ðàçà âûøå ó ÔÕÌ è ÑÔÕ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïðèñóòñòâèè ïðîäóêòîâ îêèñëåíèÿ 243 Òàáëèöà 8.2.1. Ñîñòàâ è ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ* Ïðåïàðàò Ñîñòàâ 0,32 ± 0,09 7,3±0,25 Ñðåäíèé äèàìåòð íàíî÷àñòèö 35 – 45 íì Èíäåêñ ðÍ îêèñëåííîñòè ÔÕÃÊ ÑÔÕ – 50 ìã/ìë; Na3ÃÊ – 5 ìã/ìë Îñìîëÿð íîñòü 230 ± 9,5 ìîñì/ë ÑÔÕ ÑÔÕ – 50 ìã/ìë; 0,65 ± 0,12 6,7±0,2 200 – 250 íì - ÔÕÌ ÑÔÕ – 50 ìã/ìë; 0,68 ± 0,11 6,6±0,3 75 – 100 íì - 0,31 ± 0,08 7,2±0,28 10 – 45 íì 210 ±11,4 («Nattermann », Ãåðìàíèÿ ) Ýññåíöèàëå ìàëüòîçà – 200 ìã/ìë ÑÔÕ – 50 ìã/ìë; Ñîäåðæàíèå ìîñì/ë õîëåâîé êèñëîòû â ïðåïàðàòå íå óêàçàíî * - çäåñü è äàëåå (çà èñêëþ÷åíèåì îñîáî îãîâîðåííûõ ñëó÷àåâ) îøèáêà ñðåäíåé íå ïðåâûøàëà 510%. ôîñôîëèïèäîâ. Çíà÷åíèå ðÍ ýìóëüñèè ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå íå ïðåâûøàëî 7,2-7,3, íî áûëî íèæå ó ÔÕÌ è ÑÔÕ (6,4-6,6). Îñìîëÿðíîñòü, èëè ìîëÿðíîå êîëè÷åñòâî îñìîòè÷åñêè àêòèâíûõ ÷àñòèö íà ëèòð ðàñòâîðà (ìîñì/ë), êîíòðîëèðîâàëè ìåòîäîì, îñíîâàííûì íà îïðåäåëåíèè òî÷êè çàìåðçàíèÿ íà ïîëóìèêðîàâòîìàòè÷åñêîì îñìîìåòðå Knauer. Äëÿ ïðåïàðàòîâ ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå îíà ñîñòàâèëà 210230 ìîñì/ëèòð. Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîëèïèäíàÿ íàíîýìóëüñèÿ ÔÕÃÊ, ïðèãîòîâëåííàÿ ìåòîäîì óëüòðàçâóêîâîé îáðàáîòêè èç ÑÔÕ ñ äîáàâëåíèåì Na3ÃÊ, ïî îñíîâíûì ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ïàðàìåòðàì íå óñòóïàåò ýññåíöèàëå, à ïî íåêîòîðûì ñâîéñòâàì ïðåâîñõîäèò ïðåïàðàò ÔÕÌ ôèðìû "Nattermann" (Ãåðìàíèÿ). 8.2.2. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÑÔÕ è ãëèö öèððèçèíîâîé êèñëîòû íàà èíààêòèâààöèþ öèòîõðîìàà Ð450 . Ñ ïîìîùüþ îïèñàííîãî âûøå ìåòîäà îöåíêè ñòàáèëüíîñòè öèòîõðîìà Ð450 - êàê ïîêàçàòåëÿ ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè (ñì. ãëàâó 6) [7, 18, 22], áûëà èññëåäîâàíà ñïîñîáíîñòü ôîñôîëèïèäíîé íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ, îêàçûâàòü ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà ìåìáðàíû êàê â óñëîâèÿõ in vitro, òàê è in vivo, ïðè ââåäåíèè æèâîòíûì ñ ïîâðåæäåííûìè â ðåçóëüòàòå îòðàâëåíèÿ ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè ìåìáðàíàìè êëåòîê ïå÷åíè. Òàê, áûëî ïðîâåäåíî ñðàâíåíèå âëèÿíèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè èçîëèðîâàííîãî öèòîõðîìà Ð450, ò. å. îöåíêà èõ ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ íà ýòîò ãåìîïðîòåèí (òàáëèöà 8.2.2). 244 Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè (t Òàáëèöà 8.2.2. ) èçîëèðîâàííîãî öèòîõðîìà Ð450 â ïðèñóòñòâèè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ. 1/2 Óñëîâèÿ îïûòà Èçîëèðîâàííûé öèòîõðîì Ð450 2Â4 ÔÕÃÊ ÑÔÕ ÔÕÌ Ýññåíöèàëå T1/2 , ìèí 8,0 + 0,5 20,0 + 1,0** 7,0 + 1,2 7,0 + 0,8 3,0 + 0,5** Èíêóáàöèÿ ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-HC1 áóôåðà ðÍ 7,4. Ìèêðîñîìû ïðåäâàðèòåëüíî èíêóáèðîâàëè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè: 5 ìã/íìîëü öèòîõðîìà Ð450 60 ìèí ïðè 40°Ñ. Èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 îöåíèâàëè ïî äèôôåðåíöèàëüíûì ñïåêòðàì ïîãëîùåíèÿ íà ñïåêòðîôîòîìåòðå Hitachi 557 (ßïîíèÿ) ïðè ðåãèñòðàöèè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðè 450 è 420 íì â ïðîöåññå èíêóáàöèè. Ðàçíèöà ìåæäó âåëè÷èíàìè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè èíàêòèâèðîâàííîé è àêòèâíîé êàðáîêñèêîìïëåêñíîé ôîðìàìè ôåðìåíòà (ïðè 420 è 450 íì ñîîòâåòñòâåííî) - À (420 - 450) - ðàññìàòðèâàëàñü êàê ïîêàçàòåëü èíàêòèâàöèè [7, 22]. ** ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ, ð<0,05. Êàê âèäíî èç òàáëèöû 8.2.2, âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè èçîëèðîâàííîãî î÷èùåííîãî öèòîõðîìà Ð450 (êîíòðîëü) ñîñòàâëÿëî 8 ìèí. Ïîñëå èíêóáàöèè ñ ýìóëüñèåé ÔÕÃÊ îíî óâåëè÷èëîñü äî 20 ìèí. Ïðåïàðàòû ÔÕÌ è ÑÔÕ íå îêàçûâàëè ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ; âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ïðè èíêóáàöèè ñ íèìè ñîñòàâëÿëî 7 ìèí., ÷òî ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ âûñîêèì èíäåêñîì îêèñëåííîñòè ôîñôîëèïèäà. Ýññåíöèàëå â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ âûçûâàë ðåçêóþ äåñòàáèëèçàöèþ öèòîõðîìà Ð450, ñîêðàùàÿ âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè ôåðìåíòà äî 3 ìèíóò, ÷òî îáóñëîâëåíî, ïîâèäèìîìó, ïðèñóòñòâèåì â íåì ïðîèçâîäíûõ æåë÷íûõ êèñëîò, äîáàâëÿåìûõ â êà÷åñòâå äåòåðãåíòà. Òàêèì îáðàçîì, èç èññëåäóåìûõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ òîëüêî ñìåñü ÔÕÃÊ çàìåäëÿëà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè èçîëèðîâàíííîãî öèòîõðîìà Ð450, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î åå ñòàáèëèçèðóþùåì äåéñòâèè íà ýòîò ãåìîïðîòåèí. Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïîä äåéñòâèåì ãåïàòîòîêñèíîâ â ÝÐ (â ìèêðîñîìàõ) ïðîèñõîäèò ñíèæåíèå êàê àáñîëþòíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450, òàê è îñëàáëåíèå åãî ñòàáèëüíîñòè áëàãîäàðÿ ïîâðåæäåíèþ ìåìáðàíû âñëåäñòâèè èíèöèàöèè ïðîöåññîâ ÏÎË ðåàêöèîííîñïîñîáíûìè ìåòàáîëèòàìè ýòèõ ÿäîâ [18, 19, 23] (ñì. ãëàâó 6).  ñâÿçè ñ ýòèì íàìè áûëî èññëåäîâàíî âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ è ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ êàê íà àáñîëþòíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450, òàê è íà åãî àêòèâíîñòü â ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ. Äëÿ ýòîé öåëè áûëè âûáðàíû òðè ýêñïåðèìåíòàëüíûå ìîäåëè ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí: 2 èç íèõ ìîäåëè îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ââåäåíèåì ãåïàòîòîêñèíîâ CCl4 è ãåëèîòðèíà, è ìîäåëü ëåêàðñòâåííîãî 245 îòðàâëåíèÿ, âûçâàííîãî ââåäåíèåì ôåíîáàðáèòàëà [7, 23 - 26]. ×åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè è èç ïå÷åíè âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì. Óäåëüíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450 â ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ ñîñòàâëÿëî 0,52±0,07; 0,56±0,08 è 2,3±0,21 íìîëü/ìã áåëêà ïîñëå ââåäåíèÿ CCl4, ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà ñîîòâåòñòâåííî, ïî ñðàâíåíèþ ñ 0,97±0,18 íìîëü/ìã áåëêà â êîíòðîëå. Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå æèâîòíûì ãåïàòîòðîïíûõ ÿäîâ (CCl4 è ãåëèîòðèíà) ñîïðîâîæäàëîñü ñíèæåíèåì óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 íà 47 è 41 %, ñîîòâåòñòâåííî, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîâðåæäåíèè ìåìáðàí ÝÐ. Ââåäåíèå òèïè÷íîãî èíäóêòîðà öèòîõðîìà Ð450 ïîäñåìåéñòâà 2 ôåíîáàðáèòàëà, íàïðîòèâ, âûçûâàëî óâåëè÷åíèå óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ ãåìîïðîòåèíà â 2,4 ðàçà, ÷òî òàêæå õîðîøî èçâåñòíî èç ëèòåðàòóðû [28]. Íåñìîòðÿ íà ýòî, ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè âîññòàíîâëåííîãî öèòîõðîìà Ð450 â ïðåïàðàòàõ ìèêðîñîì ïå÷åíè, èíäóöèðîâàííûõ ôåíîáàðáèòàëîì êðûñ, áûëà ãîðàçäî âûøå, ÷åì â ìèêðîñîìàõ èíòàêòíûõ æèâîòíûõ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î íàðóøåíèÿõ áåëîê-ëèïèäíûõ âçàèìîäåéñòâèé (t1/2 ñîñòàâèëî 6±0,3 è 20±1,1 ìèí ñîîòâåòñòâåííî). Èíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 ïðè ââåäåíèè CCl4 è ãåëèîòðèíà áûëà òàêæå ïîâûøåíà (t1/2 ñîñòàâèëî 5±0,4 è 8±0,6 ìèí ñîîòâåòñòâåííî) (òàáë. 8.2.3). Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íàðóøåíèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà è ôîñôîëèïèäíîãî îêðóæåíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ýòèõ ìåìáðàí ïðè âñåõ òðåõ âîçäåéñòâèÿõ è äåìîíñòðèðóåò òàêæå ãåïàòîòîêñè÷íîñòü ôåíîáàðáèòàëà.  äàëüíåéøåì ýôôåêò ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ñðàâíèâàåìûõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ îöåíèâàëè ïî çàìåäëåíèþ èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â ïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàõ ïîñëå èíêóáàöèè èõ ñ ýòèìè ïðåïàðàòàìè. Ïðåäâàðèòåëüíî áûëè ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà: ñîîòíîøåíèå ôîñôîëèïèäà ê öèòîõðîìó Ð450 (5 ìã íà 1 íìîëü) è âðåìÿ èíêóáàöèè ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè (60 ìèí. ïðè òåìïåðàòóðå 4°Ñ) (òàáë. 8.2.3). Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî ïðè èíêóáàöèè ïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîì ñ íàíîýìóëüñèåé ÔÕÃÊ çàìåäëåíèå ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûëî íàèáîëåå âûðàæåííûì è ñîñòàâëÿëî 12, 15 è 16 ìèíóò äëÿ ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ CCl4, ãåëèîòðèíîì, ôåíîáàðáèòàëîì ñîîòâåòñòâåííî, â êîíòðîëå - 20 ìèí., à â ìèêðîñîìàõ áåç èíêóáàöèè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè - 5, 8 è 6 ìèí. ñîîòâåòñòâåííî. Ïðåïàðàòû ÑÔÕ è ÔÕÌ îêàçûâàëè ìåíüøèé ýôôåêò, âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè ãåìîïðîòåèíà ñîñòàâëÿëî 10-11 ìèí.  òî æå âðåìÿ äîáàâëåíèå 1 íìîëÿ ýññåíöèàëå íå òîëüêî íå âîññòàíàâëèâàëî ìåìáðàíó, íî, 246 Òàáëèöà 8.2.3. Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â ìèêðîñîìàõ, ïîâðåæäåííûõ CCl4, ãåëèîòðèíîì, ôåíîáàðáèòàëîì äî è ïîñëå èíêóáàöèè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè (t1/2, ìèí.). Ãðóïïû æèâîòíûõ Âðåìÿ ïîëó èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ïðè èíêóáàöèè ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè ÔÕÃÊ ÔÕÌ Ýññåíöèàëå ÑÔÕ Êîíòðîëü 20,0±1,1 - - - - CCl4 5,0 + 0,5 12,0 + 1,0 10,0 + 1,0 3,0 + 0,1 10,0 + 1,0 Ãåëèîòðèí 8,0 + 0,4 15,0 + 1,2 10,0 + 0,5 2,0 + 0,1 10,0 + 1,0 Ôåíîáàðáèòàë 6,0 + 0,5 16,0 + 1,1 11,0 + 1,0 2,0 + 0,1 11,0 + 1,0 Äëÿ ýêñïåðèìåíòà èñïîëüçîâàëè êðûñ-ñàìöîâ ìàññîé 100-120ã, ñîäåðæàùèõñÿ â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ; n=6 äëÿ êàæäîé ãðóïïû æèâîòíûõ. Ôåíîáàðáèòàë ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî â äîçå 0,8 ìã íà 100ã ìàññû êðûñàì â òå÷åíèå 3 äíåé. Ìîäåëè îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà ïîëó÷àëè îäíîðàçîâûì ââåäåíèåì âíóòðèáðþøèííî CCl4 (0,2 ìë/100ã ìàññû) èëè ãåëèîòðèíà (30 ìã/100ã ìàññû). Ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè ïîëó÷àëè ñòàíäàðòíûì ìåòîäîì [12]. Èíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, ïîëó÷àâøèõ CCl4, ãåëèîòðèí, ôåíîáàðáèòàë, ïðîâîäèëàñü â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ, òðèñ-HC1 áóôåðà ðÍ-7.4. Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 ðåãèñòðèðîâàëè ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí [7, 21].  äàëüíåéøåì ìèêðîñîìû èíêóáèðîâàëè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè èç ðàñ÷åòà 5 ìã íà 1 íìîëü ãåìîïðîòåèíà â òå÷åíèå 60 ìèí ïðè 40°Ñ è âíîâü ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 [7, 13, 21]. íàïðîòèâ, óñóãóáëÿëî ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå âñåõ òðåõ ãåïàòîòîêñèíîâ, åùå áîëüøå óñèëèâàÿ èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 è ñîîòâåòñòâåííî ñíèæàÿ t1/2 â 2 - 3 ðàçà, âîçìîæíî, â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ñîëåé æåë÷íûõ êèñëîò, ïîâðåæäàþùèõ ìåìáðàíû [29]. Òàêèì îáðàçîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà öèòîõðîì Ð450 ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîêàçàëè, ÷òî èç èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ ìàêñèìàëüíûì ðåïàðèðóþùèì ýôôåêòîì íà ãåìîïðîòåèí (öèòîõðîì Ð450) îáëàäàëà ñìåñü ÔÕÃÊ. ÑÔÕ è ïðåïàðàò ÔÕÌ óñòóïàëè ïî ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ÔÕÃÊ. Ýññåíöèàëå íå òîëüêî íå îêàçûâàë ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ, íî è óñóãóáëÿë ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí. Áîëåå ýôôåêòèâíîå äåéñòâèå ÔÕÃÊ â ñðàâíåíèå ñ äðóãèìè èññëåäóåìûìè ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè áûëî òàêæå ïîäòâåðæäåíî â ýêñïåðèìåíòàõ in vivo ïîñëå èõ òðåõêðàòíîãî âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ îòðàâëåííûì æèâîòíûì (ðèñ. 8.2.1). Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, ðåçêàÿ èíàêòèâàöèÿ ãåìîïðîòåèíà â ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ CCl4 (ðèñ. 8.2.1, À) èëè 247 Ðèñ. 8.2.1. Èçìåíåíèå ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑ1 4 (À) è ãåëèîòðèíîì (Á) ïîñëå âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ ÔÕÃÊ è ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ Êðûñàì-ñàìöàì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,2 ìë/100 ã ìàññû (À), èëè ãåëèîòðèí ïî 30 ìã/100 ã (Á). ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû ÔÕÃÊ, èëè ÑÔÕ èëè ÔÕÌ èëè ýññåíöèàëå, â äîçå 20 ìã ÔË/100 ã, â òå÷åíèå òðåõ äíåé. ×åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè è ïîëó÷àëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè. Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 â îáëàñòè 400500 íì ðåãèñòðèðîâàëè â òå÷åíèå 20 ìèíóò ïðè 37î â ñðåäå, ñîäåðæàùåé 0,33 íìîëü öèòîõðîìà Ð450/ìë, è ðàññ÷èòûâàëè ðàçíèöó ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ íåàêòèâíîé è àêòèâíîé ôîðì öèòîõðîìà (À420 è À450 ñîîòâåòñòâåííî) - êàê ïîêàçàòåëü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 [7, 14]. ãåëèîòðèíîì (ðèñ 8.2.1, Á) (êðèâûå 2), çàìåäëÿëàñü ïðè ââåäåíèè æèâîòíûì âñåõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ, îäíàêî íàèáîëåå âûðàæåííûì ýôôåêò áûë ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÔÕÃÊ. Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû è ïðè îòðàâëåíèè æèâîòíûõ ôåíîáàðáèòàëîì [14]. Òàêèì îáðàçîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà öèòîõðîì Ð450 ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîêàçàëè, ÷òî èç èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ ìàêñèìàëüíûì ðåïàðèðóþùèì ýôôåêòîì íà öèòîõðîì Ð450 îáëàäàëà ñìåñü ÔÕÃÊ. ÑÔÕ è ïðåïàðàò ÔÕÌ ïî ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ óñòóïàëè ñìåñè ÔÕÃÊ. Ýññåíöèàëå íå òîëüêî íå îêàçûâàë ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ, íî è óñóãóáëÿë ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí. 8.2.3. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕà ÃÊ íàà àêòèâíîñòü ìèêðîñîìààëüíûõ ôåðìåíòîâ ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòààëüíûì òîêñè÷åñêèì ãåïààòèòîì. Ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå ìåìáðàí ìèêðîñîì îöåíèâàëè òàêæå ïî óäåëüíîìó ñîäåðæàíèþ öèòîõðîìà Ð450 è ñêîðîñòè ÍÀÄÔÍçàâèñèìîãî îêèñëåíèÿ ñóáñòðàòîâ ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû 248 àíèëèíà è àìèíîïèðèíà. Êðîìå òîãî, äëÿ îöåíêè ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ è ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ íà ìèêðîñîìàëüíûå ìåìáðàíû ïå÷åíè êðûñ â âûäåëåííûõ ìèêðîñîìàõ îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ÍÀÄÔÍ-öèòîõðîì ñ ðåäóêòàçû è ÍÀÄÍôåððèöèàíèäðåäóêòàçû (òàáë. 8.2.4). Òàáëèöà 8.2.4. Âëèÿíèå ïðåïàðàòîâ íà ïîêàçàòåëè ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì*. Ìèêðîñîìû ïå÷åíè êðûñ ñ òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ïîêàçàòåëè Ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450 , (íìîëü/ìã áåëêà) ÍÀÄÔÍ-ö öèòîõðîì ñ ðåäóêòàçà, (íìîëü âîññò. öèòîõðîìà ñ • ìã -1 •ìèí -1) ÍÀÄÍ-ô ôåððèöèàíèä ðå äóêòàçà (íìîëü âîññò. ôåððèöèàíèäà • ìã -1•ìèí -1) N-ä äåìåòèëèðîâàíèå àìè íîïèðèíà , (íìîëü ôîð - Èíòàêòíûå ìèêðîñîìû Áåç ââåäåíèÿ ôîñôî ëèïèäîâ 0,97 ± 0,06 ÔÕÃÊ ÔÕÌ Ýññåíöèàëå 0,43 ± 0,05 0,77 ± 0,06* 0,78 ± 0,04* 0,61 ± 0,03* 0,49 ±0,003 0,25 ± 0,017 0,41± 0,02* 0,37± 0,04* 0,33± 0,019** 7,3 ± 0,06 3,63 ± 0,29 6,28 ±0,54* 5,69± 0,50* 4,95± 0,35** 9,7 ± 0,3 3,89 ± 0,3 7,69 ± 0,35* 7,73 ± 0,22* 7,80 ± 0,19** 0,99 ± 0,07 0,41 ± 0,06 0,78 ± 0,08* 0,75 ± 0,04* 0,62 ± 0,03 ** ìàëüäåãèäà • ìã -1•ìèí -1) n-ããèäðîêñèëèðîâàíèå àíèëèíà , (íìîëü ï - àìèíî- ôåíîëà• ìã 1 •ìèí -1) *- Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑ14 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê â ïîäïèñÿõ ê ðèñ 8.2.1. ×åðåç ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ìèêðîñîìû ïå÷åíè è îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ñòàíäàðòíûìè ìåòîäàìè; * - p < 0,01, ** p<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ íåëå÷åííûìè æèâîòíûìè (áåç ââåäåíèÿ ÔË) [7, 18]. Èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáë. 8.2.4, âèäíî, ÷òî îñòðûé òîêñè÷åñêèé ãåïàòèò, âûçâàííûé ââåäåíèåì æèâîòíûì ÑÑ14, ñîïðîâîæäàëñÿ ñíèæåíèåì óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 â ñðåäíåì íà 55%, ñíèæåíèåì N-äåìåòèëàçíîé è n-ãèäðîêñèëàçíîé åãî àêòèâíîñòåé (íà 55-60%), à òàêæå ñíèæåíèåì àêòèâíîñòåé ÍÀÄÔÍöèòîõðîì ñ ðåäóêòàçû è ÍÀÄÍ-ôåððèöèàíèäðåäóêòàçû íà 45-50%. Ïîñëå ââåäåíèÿ ÔÕÃÊ, ÔÕÌ è ýññåíöèàëå íàáëþäàëè ïîâûøåíèå óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 (íà 35%), àêòèâíîñòåé ðåäóêòàç â ñðåäíåì íà 25-30%. Ïðè÷åì, ýôôåêòèâíîñòü âñåõ òðåõ ïðåïàðàòîâ ïðè òàêîé ñõåìå ýêñïåðèìåíòà îêàçàëàñü ïðèìåðíî îäèíàêîâîé. 8.2.4. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕà ÃÊ íàà àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèààëüíûõ ôåðìåíòîâ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòààëüíûì ãåïààòèòîì. Èçâåñòíî, ÷òî ïðè ïîâðåæäåíèè êëåòîê, âûçâàííîì äåéñòâèåì ðàçëè÷íûõ àãåíòîâ, îäíèì èç óíèâåðñàëüíûõ ýòàïîâ ÿâëÿåòñÿ 249 Òàáëèöà 8.2.5. Àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñû ïðè ââåäåíèè ÑÑ14 è èõ âîññòàíîâëåíèå ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè Ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçà Öèòîõðîìîêñèäàçà (íìîëü × ìèí × ìã ) (íìîëü × ìèí-1 × ìã-1) -1 -1 Çäîðîâûå æèâîòíûå 12,3 ± 0,92 54,8 ± 3,36 Êðûñû, ïîëó÷àâøèå: ÑÑl4 ÑÑl4 + ÔÕÃÊ 4,6 ± 0,53 19,9 ± 1.17 7,0 ± 0,68* 35,7 ± 1.25* ÑÑl4 + ýññåíöèàëå 5,8 ± 0,2 30,4 ± 1.96* Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑ14 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê â ïîäïèñè ê òàáëèöå 8.2.3. ×åðåç ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ìèòîõîíäðèè ïå÷åíè è îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ñòàíäàðòíûìè ìåòîäàìè [33]. * - ð< 0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ âåëè÷èíàìè äëÿ æèâîòíûõ, îòðàâëåííûõ ÑÑ14. íàðóøåíèå ýíåðãåòè÷åñêèõ ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé [30] (ñì. ãëàâó 4). Òàê, â ïðåïàðàòàõ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåïàòèòîì, èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑ14, íàáëþäàëîñü ðåçêîå, áîëåå, ÷åì â 2 ðàçà, ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè, ëîêàëèçîâàííûõ âî âíóòðåííèõ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàíàõ, ñóêöèíàòäåãèðîãåíàçû è öèòîõðîìîêñèäàçû, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ãëóáîêîì ïîâðåæäåíèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàííûõ ñèñòåì [31, 32].  ñâÿçè ñ ýòèì íàìè èññëåäîâàíî âëèÿíèå íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ íà àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåïàòèòîì (èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑ14) (òàáë. 8.2.5.). Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè ââåäåíèè êàê ÔÕÃÊ, òàê è ýññåíöèàëå âîçðàñòàëà àêòèâíîñòü öèòîõðîìîêñèäàçû, à ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçû - òîëüêî ïðè äåéñòâèè ÔÕÃÊ. Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîëèïèäíàÿ ñìåñü ÔÕÃÊ ñïîñîáíà âîññòàíàâëèâàòü òàêæå è àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé, õîòÿ è íå ñòîëü ýôôåêòèâíî, êàê ôåðìåíòîâ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàí. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî in vitro äëÿ ìèêðîñîìàëüíîãî öèòîõðîìà Ð450 ââåäåíèå ýññåíöèàëå îêàçûâàëî äàæå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå, óñóãóáëÿÿ âûçâàííîå ãåïàòîòîêñèíîì ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû, â òî âðåìÿ êàê in vivo ýôôåêòû ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå áûëè ñîïîñòàâèìû. 8.2.5. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕà ÃÊ íàà ãåìîëèç ýðèòðîö öèòîâ. Ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå î ñòàáèëèçèðóþùåì è ðåïàðèðóþùåì äåéñòâèè ñìåñè ÔÕÃÊ íà ìåìáðàíû ÝÐ ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü âîçìîæíîñòü àíàëîãè÷íîãî äåéñòâèÿ íà äðóãèå áèîìåìáðàíû, 250 íàïðèìåð, ìåìáðàíû ýðèòðîöèòîâ, î ïîâðåæäåíèè êîòîðûõ â óñëîâèÿõ in vitro ìîæíî ñóäèòü ïî ñòåïåíè ãåìîëèçà.  ñâÿçè ñ ýòèì áûëè ïðîâåäåíû ñðàâíèòåëüíûå èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ ñìåñè ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ (ðèñ. 8.2.2). Ðèñ. 8.2.2. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ Ýðèòðîöèòû ïîëó÷àëè èç ãåïàðèíèçèðîâàííîé êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ, îòäåëÿëè îò ïëàçìû öåíòðèôóãèðîâàíèåì è òðèæäû ïðîìûâàëè 0,9% NaCl. (ôèçðàñòâîðîì). 0,1ìë ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà (50 ìã ÑÔÕ/ìë) è 1 ìë îòìûòûõ ýðèòðîöèòîâ äîáàâëÿëè ê 3,9 ìë 0,9% NaCl (ôèçðàñòâîðà) è èíêóáèðîâàëè 2 ÷àñà ïðè 37°Ñ ïðè îñòîðîæíîì ïåðåìåøèâàíèè. Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè ñìåñü öåíòðèôóãèðîâàëè è îïðåäåëÿëè îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü íàäîñàäî÷íîé æèäêîñòè ïðè 530 íì. Ïðîöåíò ãåìîëèçà ðàññ÷èòûâàëè ïî îòíîøåíèþ ê îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðè 100% ãåìîëèçå - ïðè èíêóáàöèè ýðèòðîöèòîâ â äèñòèëëèðîâàííîé âîäå â òåõ æå óñëîâèÿõ. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, èíêóáàöèÿ ýðèòðîöèòîâ â ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå â ïðèñóòñòâèè ýññåíöèàëå ïðè êîíöåíòðàöèè, ñîîòâåòñòâóþùåé 10 ìã/ìë ïî ÑÔÕ, ïðèâîäèò ïðàêòè÷åñêè ê ïîëíîìó ãåìîëèçó óæå â òå÷åíèå 20 ìèíóò.  ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, â ïðèñóòñòâèè ñìåñè ÔÕÃÊ äàæå ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ öåëîñòíîñòü ýðèòðîöèòîâ íå íàðóøàåòñÿ ïðîöåíò ãåìîëèçà áëèçîê ê òàêîâîìó â ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå (êîíòðîëå), ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè ïîâðåæäàþùèõ âîçäåéñòâèé èññëåäóåìîé ôîñôîëèïèäíîé íàíîýìóëüñèè íà ìåìáðàíû ýðèòðîöèòîâ. 8.2.6. Ñòààáèëèçèðóþù ùåå äåéñòâèå ñìåñè ÔÕà ÃÊ íàà êóëüòóðó ýíäîòåëèààëüíûõ êëåòîê ïðè âîçäåéñòâèè òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ.  ýêñïåðèìåíòàõ in vitro áûëà ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü ñìåñè ÔÕÃÊ ïðåäîõðàíÿòü ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè (â êóëüòóðå) îò òîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ îêèñëåííûõ ïðîèçâîäíûõ õîëåñòåðèíà (ðèñ. 8.2.3). Äëÿ ýòîãî ê êóëüòóðå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê â 251 Ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè ïóïî÷íîé âåíû ÷åëîâåêà êóëüòèâèðîâàëè â ÿ÷åéêàõ ïëàøåê Costar (5 õ 104 ñì2) è èñïîëüçîâàëè íà 5-6 ñóòêè.  ñðåäó ââîäèëè õîëåñòàí-3,5,6-òðèîë äî êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 50 ìêÌ [34] è ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû - ÔÕÊà èëè ýññåíöèàëå - â êîíöåíòðàöèÿõ îò 25 äî 250 ìêã/ìë. Ïîñëå 24-÷àñîâîé èíêóáàöèè êëåòêè îòìûâàëè, ñíèìàëè 0,25 Ì ðàñòâîðîì òðèïñèí - ÅÄÒÀ è ñ÷èòàëè êîëè÷åñòâî êëåòîê íà ãåìîöèòîìåòðå [35]. Ðèñ.8.2.3. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà âûæèâàåìîñòü ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê â êóëüòóðå â óñëîâèÿõ òîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ õîëåñòàí-3 3,5,6-òòðèîëà. ñîñòîÿíèè êîíôëóýíòíîãî ìîíîñëîÿ äîáàâëÿëè õîëåñòàí-3,5,6òðèîë äî êîíöåíòðàöèè 50 ìêÌ, âûçûâàþùåé èõ ïîëíóþ ãèáåëü [34]. Ïðåäâàðèòåëüíîå äîáàâëåíèå â èíêóáàöèîííóþ ñðåäó ýìóëüñèè ÔÕÃÊ îêàçûâàëî çàùèùàþùèé ýôôåêò íà êëåòêè. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà 8.2.3, íåñìîòðÿ íà öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå õîëåñòàí-3,5,6-òðèîëà, êëåòêè îñòàâàëèñü æèâûìè ïðè êîíöåíòðàöèè èññëåäóåìîé ñìåñè (ïî ÔÕ) - 150 ìêã/ìë ñðåäû [35]. Ýññåíöèàëå â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ çàùèòíîãî äåéñòâèÿ íå îêàçûâàë. Ïðè åãî êîíöåíòðàöèè â ñðåäå, ïðåâûøàþùåé 125 ìêã/ìë (ïî ÑÔÕ), êîëè÷åñòâî ïîãèáøèõ êëåòîê óâåëè÷èâàëîñü, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, çà ñ÷åò öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âõîäÿùèõ â ñîñòàâ ýññåíöèàëå æåë÷íûõ êèñëîò. Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîëèïèäíàÿ íàíîýìóëüñèÿ, ñîñòîÿùàÿ èç ÑÔÕ è Na3ÃÊ, ñïîñîáíà îêàçûâàòü ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà ôåðìåíòû ìèêðîñîìàëüíûõ è ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí, à òàêæå âîññòàíàâëèâàòü öåëîñòíîñòü óæå ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí â êëåòêàõ ïå÷åíè æèâîòíûõ, îòðàâëåííûõ ÑÑ14, èëè ãåëèîòðèíîì.  îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, äàííàÿ êîìïîçèöèÿ íå èíãèáèðîâàëà àêòèâíîñòü öèòîõðîìà Ð450 â ïîâðåæäåííûõ êëåòêàõ è íå âûçûâàëà ãåìîëèçà ýðèòðîöèòîâ. Ïîýòîìó ñëåäóþùèì ýòàïîì áûëà ðàçðàáîòêà ñîîòâåòñòâóþùèõ òåõíîëîãèé, ïîçâîëÿþùèõ ïîëó÷àòü íà îñíîâå ýòîé ñìåñè êàïñóëüíóþ è èíúåêöèîííóþ ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ (ñîêðàùåííî: ôîñôî - ôîñôàòèäèëõîëèí, ãë - ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà, ëèâ - ïå÷åíü), ñ ïîñëåäóþùèì ïðîâåäåíèåì ñîîòâåòñòâóþùèõ äîêëèíè÷åñêèõ è êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé. 252 8.3. Òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ôîñôîãëèâà íà îñíîâå ôîñôàòèäèëõîëèíà ñîè è ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû. Äëÿ ðàçðàáîòêè òàêîé òåõíîëîãèè ïðåæäå âñåãî íåîáõîäèìî áûëî ïîäîáðàòü ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ : Na3ÃÊ, îïòèìàëüíîå íå òîëüêî ñ òî÷êè çðåíèÿ òåõíîëîãèè, íî è îáåñïå÷èâàþùåå ìàêñèìàëüíóþ áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòè ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ïðåïàðàòà. Ïðè ðàçðàáîòêå òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ ïåðîðàëüíîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîé êîìïîçèöèè íåîáõîäèìî áûëî ó÷åñòü è óñòðàíèòü íåäîñòàòêè èìåþùèõñÿ êîììåð÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ íà îñíîâå ðàñòèòåëüíûõ ôîñôîëèïèäîâ (Ýññåíöèàëå, Ëèïîñòàáèë, RhonePoulenc Rorer, Ãåðìàíèÿ). Òàê, ïåðîðàëüíàÿ ôîðìà ýññåíöèàëå ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé êàïñóëû, ñîäåðæàùèå ñèðîïîîáðàçíóþ âÿçêóþ ìàññó. Âëàãà, âõîäÿùàÿ â ñîñòàâ ìàññû, çíà÷èòåëüíî ñîêðàùàåò ñðîê õðàíåíèÿ ïðåïàðàòà è óâåëè÷èâàåò åãî òîêñè÷íîñòü çà ñ÷åò îáðàçîâàíèÿ òàêèõ ïðîäóêòîâ îêèñëåíèÿ ÑÔÕ, êàê ëèçîôîñôàòèäèëõîëèí (ëèçîëåöèòèí), êîòîðûé â ïîâûøåííîé êîíöåíòðàöèè â êðîâè (ñâûøå 0,2 ìÌ èëè ñâûøå 9% îò îáùåãî îáúåìà ëèïèäîâ â êëåòêå) âûçûâàåò ðàçðóøåíèå ìåìáðàí [36] (ñì. òàêæå ãëàâó 3). Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî, íè îäèí êîììåð÷åñêèé ôîñôîëèïèäíûé ïðåïàðàò, ïðèñóòñòâóþùèé íà ðûíêå â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, íå ðåãëàìåíòèðîâàí ïî ñîäåðæàíèþ ëèçîÔÕ. Ýòîò ôàêò áûë ó÷òåí ïðè ðàçðàáîòêå íîðìàòèâíîòåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèè äëÿ ïðîèçâîäñòâà ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ.  ÃÓ ÍÈÈ ÁÌÕ ÐÀÌÍ áûëà ðàçðàáîòàíà òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ ñóõîãî ãðàíóëÿòà äëÿ êàïñóëèðîâàíèÿ, ñîäåðæàùåãî ñìåñü ÑÔÕ è Na3ÃÊ ïðè ñîîòíîøåíèè îò 2 : 1 äî 3 : 1 [37, 38]. Ñ öåëüþ âûáîðà îïòèìàëüíîãî ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ è ñîëè ÃÊ â ýêñïåðèìåíòàõ íà êðûñàõ è ìûøàõ áûëè èññëåäîâàíû òîêñèêîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ñìåñè. Äëÿ ýòîãî æèâîòíûì ââîäèëè ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìóþ äîçó èññëåäóåìîé ñìåñè ñ ñîîòíîøåíèåì ôîñôîëèïèäà è ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû îò 1 : 1 äî 2 : 1 (1:1; 1:3; 2:3; 1:7; 2:7 è 2:1). Ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòà çà æèâîòíûìè âåëîñü íàáëþäåíèå â òå÷åíèå 14 äíåé äëÿ îïðåäåëåíèÿ ëåòàëüíîñòè è ñèìïòîìîâ îòðàâëåíèÿ. Ïîñëå çàâåðøåíèÿ òåñòèðîâàíèÿ ðàññ÷èòûâàëèñü çíà÷åíèÿ LD50 äëÿ êàæäîãî âèäà è ïîëà æèâîòíîãî. Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî â òîêñèêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâàõ èññëåäóåìûõ êîìïîçèöèé ïðàêòè÷åñêè íå áûëî ðàçëè÷èé: çíà÷åíèÿ LD50 âàðüèðîâàëè îò 2480 ± 52 ìã/êã äëÿ ñîîòíîøåíèÿ ÔÕ:Na3ÃÊ 1:7 ó êðûñ-ñàìöîâ è äî 2785 ± 165 ìã/êã ïðè ñîîòíîøåíèè 1:1 ó êðûññàìîê.  äàëüíåéøåì äëÿ ðàçðàáîòêè ïåðîðàëüíîé ëåêàðñòâåííîé ôîðìû áûëà âûáðàíà êîìïîçèöèÿ ñ ñîîòíîøåíèåì ÑÔÕ è ñîëè 253 ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû 2 : 1 ïî ìàññå. Ðàçðàáîòàííàÿ è ìàñøòàáèðîâàííàÿ â ïðîìûøëåííûõ óñëîâèÿõ òåõíîëîãèÿ ïðîèçâîäñòâà êàïñóëüíîé ôîðìû ôîñôîãëèâà âêëþ÷àåò: ïîëó÷åíèå ñìåñè èñõîäíûõ è âñïîìîãàòåëüíûõ êîìïîíåíòîâ, âëàæíîå ãðàíóëèðîâàíèå, îïóäðèâàíèå ãðàíóëÿòà, êàïñóëèðîâàíèå, óïàêîâêó ãîòîâûõ êàïñóë â êîíòóðíûå ÿ÷åéêè è êàðòîííóþ ïà÷êó (ðèñ. 8.3.1). Ñîãëàñíî ðàçðàáîòàííîìó ïðîìûøëåííîìó ðåãëàìåíòó, ïåðâûì ýòàïîì ïðè ïðîèçâîäñòâå êàïñóë ÿâëÿåòñÿ ïîëó÷åíèå ñìåñè èñõîäíûõ èíãðåäèåíòîâ (ïîðîøêîîáðàçíîé ìàññû äëÿ êàïñóëèðîâàíèÿ) ñ îïðåäåëåííûìè òåõíîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè (ðàçìåð ãðàíóë, âëàæíîñòü, ñûïó÷åñòü). Äàëüíåéøèå ýòàïû (êàïñóëèðîâàíèå, óïàêîâêà â êîíòóðíóþ ÿ÷åéêó, êàðòîííóþ ïà÷êó è äð.) ÿâëÿþòñÿ ñòàíäàðòíûìè äëÿ ôàðìàöåâòè÷åñêîãî ïðîèçâîäñòâà. Ðèñ. 8.3.1. Ñõåìà ïðîèçâîäñòâà êàïñóëüíîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ Êàïñóëüíàÿ ôîðìà ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ðàçðåøåíà ê ïðèìåíåíèþ (ðåãèñòðàöèîííûé ¹ 99/212/11, ïåðåðåãèñòðîâàí â 2003ã. й002528/01-2003). Ïðè ðàçðàáîòêå èíúåêöèîííîé ôîðìû îñíîâíîé çàäà÷åé áûëî ïîëó÷åíèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà â âèäå ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö (ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë) ñî ñðåäíèì äèàìåòðîì íå áîëåå 100 íì. Ýòî íåîáõîäèìî äëÿ îáåñïå÷åíèÿ íàèáîëüøåé áèîäîñòóïíîñòè è ìèíèìèçàöèè ðèñêà ïîãëîùåíèÿ êëåòêàìè ðåòèêóëîýíäîòåëèàëüíîé ñèñòåìû (ÐÝÑ), çàõâàòûâàþùèìè áîëåå êðóïíûå ÷àñòèöû [39-42]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî â íàñòîÿùåå âðåìÿ îäíîé èç ïðè÷èí ïîâûøåíîãî èíòåðåñà â ìåäèöèíå, â ÷àñòíîñòè, â ôàðìàöèè ê íàíî÷àñòèöàì ÿâëÿåòñÿ èõ ðàçìåð, îáóñëàâëèâàþùèé ôàðìàêîêèíåòèêó è ýôôåêòèâíîñòü ïðîíèêíîâåíèÿ â îðãàíìèøåíü. Èìåííî ðàçìåð íàíî÷àñòèö âëèÿåò íà èõ ðàñïðåäåëåíèå â îðãàíèçìå è íà ñêîðîñòü çàõâàòà êëåòêàìè ÐÝÑ [43-46]. Äàæå 254 îòíîñèòåëüíî íåáîëüøîå ñíèæåíèå ðàçìåðà ëèïîñîì ðåçêî ïðîäëåâàåò âðåìÿ èõ ïðåáûâàíèÿ â êðîâîòîêå, à òàêæå óñèëèâàåò èõ ñïîñîáíîñòü äîñòèãàòü îïðåäåëåííûõ òêàíåé-ìèøåíåé. Ïðè èçó÷åíèè ôàðìàêîêèíåòèêè óñòàíîâëåíî, ÷òî êîìïëåìåíòñòèìóëèðóþùèé çàõâàò ëèïîñîì â ïå÷åíè êðûñ çàâèñèò êàê îò ðàçìåðà ÷àñòèö, òàê è îò èõ ñîñòàâà [42, 47]. Ïå÷åíü êðûñ çàõâàòûâàëà áûñòðåå ëèïîñîìû ñ áîëüøèì (800 íì) èëè ñðåäíèì äèàìåòðîì (400 íì), ÷åì ìåëêèå (<200 íì) [48]. Îäíàêî, áûñòðîå ïîãëîùåíèå êðóïíûõ ÷àñòèö îçíà÷àåò èõ çàõâàò êóïôåðîâñêèìè êëåòêàìè ïå÷åíè è äàëüíåéøèé ìåòàáîëèçì, â òî âðåìÿ êàê ÷àñòèöû ðàçìåðîì ìåíåå 100 íì íåóëîâèìû äëÿ ðåòèêóëîýíäîòåëèàëüíîé ñèñòåìû ïå÷åíè [39, 42]. Ïîýòîìó ïîäáîð ñîñòàâà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, à òàêæå îïòèìèçàöèÿ èõ ðàçìåðà ÿâëÿëèñü îñíîâíîé öåëüþ ïðè ðàçðàáîòêå òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîé êîìïîçèöèè íà îñíîâå ÑÔÕ è ÃÊ. Èñïîëüçîâàíèå ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö íàíîäèàïàçîíà äëÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ïðåïàðàòà áûëî âûáðàíî íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ ïðåäâàðèòåëüíûõ èññëåäîâàíèé ýôôåêòèâíîñòè âîññòàíîâëåíèÿ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ ôîñôîëèïèäàìè [7, 18], ïîêàçàâøèõ ñïîñîáíîñòü ÔË èìåííî â òàêîì âèäå âñòðàèâàòüñÿ â ìåìáðàíû, ýôôåêòèâíî âîññòàíàâëèâàÿ àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Îïòèìàëüíûì ðåøåíèåì çàäà÷è ïîëó÷åíèÿ ÷àñòèö ðàçìåðîì äî 100 íì îêàçàëîñü èñïîëüçîâàíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû íå òîëüêî â êà÷åñòâå ôàðìàöåâòè÷åñêîé ñóáñòàíöèè, íî òàêæå è êàê äåòåðãåíòà, ñïîñîáñòâóþùåãî ïîëó÷åíèþ ñòàáèëüíûõ íàíî÷àñòèö. Ñ ýòîé öåëüþ áûëè ïðîâåäåíû èññëåäîâàíèÿ çàâèñèìîñòè ðàçìåðîâ ïîëó÷àþùèõñÿ ÷àñòèö îò ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ è Na3ÃÊ. ×àñòèöû ïîëó÷àëè ïóòåì âïðûñêèâàíèÿ â âîäíûé áóôåð èçîïðîïàíîëüíîãî ðàñòâîðà ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ â ðàçíûõ ñîîòíîøåíèÿõ. Õàðàêòåðèñòèêó îáðàçóþùèõñÿ âåçèêóë (íàíî÷àñòèö), íàõîäÿùèõñÿ â ðàâíîâåñèè ñ ÃÊ â âîäíîì ðàñòâîðå, ïðîâîäèëè ìåòîäàìè àíàëèòè÷åñêîãî óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ è ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè (ïðè íåãàòèâíîì êîíòðàñòèðîâàíèè ôîñôîðíîâîëüôðàìîâîé êèñëîòîé). Íà ðèñ. 8.3.2 ïðåäñòàâëåíû ýëåêòðîííûå ìèêðîôîòîãðàôèè îáðàçóþùèõñÿ ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö ïðè ðàçíûõ ñîîòíîøåíèÿõ ÑÔÕ è Na3ÃÊ. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè Na3ÃÊ â èñõîäíîì ðàñòâîðå ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ ðàçìåðà îáðàçóþùèõñÿ ÷àñòèö. Ðàñïðåäåëåíèå ïîñëåäíèõ ïî ðàçìåðàì ïðèâåäåíî â òàáë. 8.3.1. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî äèàìåòð ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö ñôîðìèðîâàííûõ áåç ÃÊ ñîñòàâëÿë â îñíîâíîì 160-220 íì.; ïðè ìèíèìàëüíîé äîëå ÃÊ (ñîîòíîøåíèå 255 Ðèñ. 8.3.2. Ýëåêòðîííàÿ ìèêðîñêîïèÿ ôîñôîëèïèäíûõ âåçèêóë ïðè ðàçíûõ ñîîòíîøåíèÿõ ÑÔÕ: Na3ÃÊ. Ýëåêòðîííûå ìèêðîôîòîãðàôèè ïîëó÷åíû íà ïðèáîðàõ "JEOL JEM 100" è "Phillips". 10 ìêë ðàñòâîðà ÔÕÃÊ ñ ðàçíûì ñîîòíîøåíèåì êîìïîíåíòîâ (óêàçàíî ïîä ñîîòâåòñòâóþùèì ñíèìêîì) â 0,1 ìÌ NH4HCO3 íàíîñèëè íà ìåäíûå ñåòêè 400 ìåø, ïîêðûòûå êàðáîíèçèðîâàííûì êîëëîäèåì, âûäåðæèâàëè 30 ñåê, çàòåì ïðîìûâàëè 2-3 êàïëÿìè âîäû. Íåãàòèâíîå êîíòðàñòèðîâàíèå îñóùåñòâëÿëè äîáàâëåíèåì 2-3 êàïëè 2% âîäíîãî ðàñòâîðà ôîñôîðíîâîëüôðàìîâîé êèñëîòû. Êîíöåíòðàöèÿ ÑÔÕ âî âñåõ îáðàçöàõ 50 ìêÌ. ÑÔÕ : Na3ÃÊ 5:1) ïðåèìóùåñòâåííûé äèàìåòð ñîñòàâëÿë 95 íì. Ïðè ïðåîáëàäàíèè Na3ÃÊ (80% èëè ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ : Na3ÃÊ 1:4) ýìóëüñèÿ ïðåäñòàâëÿëà ñîáîé ãåòåðîãåííóþ ñìåñü íàíî÷àñòèö øèðîêîãî äèàïàçîíà - îò 12,5 äî 60 íì (òàáë 8.3.1). Òàáëèöà 8.3.1 Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòèö ïî ðàçìåðàì (â âåñîâûõ %)*. Ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ: Na3ÃÊ Äèàïàçîíû äèàìåòðà ÷àñòèö, íì 12,5 ÷15 15÷ ÷17,5 22÷ ÷25 1:0 32÷ ÷37 5:1 1 7 5:2 4 20 5 17 1:4 45÷ ÷47 50÷ ÷55 4,0 5 5 60÷ ÷65 Äî 95 4,0 15 35 57 49 6 21 18 35 110 160 220 47 40 *Ïðèâåäåíû ñðåäíèå äàííûå òðåõ ýêñïåðèìåíòîâ.  äàëüíåéøåì âûáîð áûë îñòàíîâëåí íà ñîîòíîøåíèè ÑÔÕ : Na3ÃÊ 5:2, êîòîðîå îáåñïå÷èâàåò ïîëó÷åíèå íàíî÷àñòèö ñ äèàìåòðîì 25 - 65 íì è ïðè ýòîì ñîäåðæèò äîñòàòî÷íîå äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ìåìáðàííûõ ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ êîëè÷åñòâî ÑÔÕ. Âïîëíå âîçìîæíî, ÷òî ÃÊ, îáëàäàþùàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, âëèÿåò íà ñïîñîáíîñòü ÑÔÕ ê îáðàçîâàíèþ ëèïîñîì è ìèöåëë â âîäíîé ñðåäå, èëè, äðóãèìè ñëîâàìè, íà ïîâåðõíîñòíóþ àêòèâíîñòü ôîñôîëèïèäà, ñïîñîáñòâóÿ ïîëó÷åíèþ íàíî÷àñòèö ñ ìèíèìàëüíûì ðàçìåðîì. Èìåííî 256 ýòî ñâîéñòâî, îòðàæàþùåå ñïîñîáíîñòü ÔË ñíèæàòü ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå íà ãðàíèöå ñ âîäíîé ôàçîé (èçìåðÿåìîå â ìèëëèíüþòîí/ì2 ìÍ/ì2), îïðåäåëÿåò ïðî÷íîñòü îáðàçóþùèõñÿ â âîäå ôîñôîëèïèäíûõ âåçèêóë [49], èõ ñïîñîáíîñòü óäåðæèâàòüñÿ íà ãðàíèöå ñ âîäíîé ôàçîé. Ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå îáðàçóåìûõ ôîñôîëèïèäàìè ïîâåðõíîñòåé èçìåðÿþò èëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ñôåðè÷åñêèõ ïîâåðõíîñòåé - â ïóçûðüêîâîé ïóëüñèðóþùåé ñèñòåìå [50], èëè â ïëîñêîñòè íà ãðàíèöå ðàçäåëà ñðåä "âîäà - âîçäóõ" [49], ÷òî è áûëî èñïîëüçîâàíî íàìè äëÿ ñìåñè ÑÔÕ ñ ðàçíûìè êîëè÷åñòâàìè ÃÊ. Äëÿ ýòîãî áûëè ñôîðìèðîâàíû ïëåíêè ñ èñïîëüçîâàíèåì èçîïðîïàíîëüíûõ ðàñòâîðîâ ÑÔÕ (5õ10-3 Ì) ñ äîáàâëåíèåì ÃÊ, â êîòîðûõ èçìåðÿëè íàòÿæåíèå íà ñóðôàêòîìåòðå Kruss (Ãåðìàíèÿ). Ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå äëÿ ÑÔÕ (áåç ÃÊ) ñîñòàâèëî 26,5±0,1 ìÍ/ì2; äîáàâëåíèå Na3ÃÊ â øèðîêîì èíòåðâàëå êîíöåíòðàöèé íå îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà ýòó âåëè÷èíó. Òàêèì îáðàçîì, ïðîÿâëÿÿ äåòåðãåíòíûå ñâîéñòâà, ÃÊ íå ñíèæàåò ïîâåðõíîñòíóþ àêòèâíîñòü ôîñôîëèïèäà, îáåñïå÷èâàþùóþ åãî ñïîñîáíîñòü ê îáðàçîâàíèþ íàíî÷àñòèö - ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë - â âîäíîé ñðåäå.  ñâÿçè ñ õîðîøåé ðàñòâîðèìîñòüþ Na3ÃÊ â âîäå, ñ îäíîé ñòîðîíû, è åå äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, ñïîñîáñòâóþùèìè ïîëó÷åíèþ ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, ñ äðóãîé, ïðåäñòàâëÿëî èíòåðåñ èññëåäîâàòü õàðàêòåð âçàèìîäåéñòâèÿ ÑÔÕ ñ ÃÊ â âîäíîé ñðåäå, ò.å. îïðåäåëèòü, ÿâëÿåòñÿ ëè ñìåñü ÔÕÃÊ ýìóëüñèåé ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö â âîäíîì ðàñòâîðå ñîëè ÃÊ, èëè ÃÊ "âñòðîåíà" â ìåìáðàíó ýòèõ íàíî÷àñòèö. Äëÿ ýòîãî áûë èñïîëüçîâàí ìåòîä ðàâíîâåñíîãî èçîïëîòíîñòíîãî óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ â ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè [51]. Ìåòîä îñíîâàí íà òîì, ÷òî íàïðàâëåíèå äâèæåíèÿ ÷àñòèö â öåíòðîáåæíîì ïîëå â ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè îïðåäåëÿåòñÿ ñîîòíîøåíèåì ìåæäó ïëîòíîñòüþ ðàñòâîðèòåëÿ (ρð) è ñîëüâàòèðîâàííîé ïëîòíîñòüþ èññëåäóåìîãî âåùåñòâà (ρ÷). Ïðè ρ÷ > ρð ÷àñòèöû îñåäàþò, ïðè ρ÷ < ρð íàáëþäàåòñÿ èõ ôëîòàöèÿ è, íàêîíåö, ïðè ρ÷ = ρð ÷àñòèöû â öåíòðîáåæíîì ïîëå íå äâèæóòñÿ. Ïðè ïðîâåäåíèè ýêñïåðèìåíòà ïðåäâàðèòåëüíî ôîðìèðîâàëè ãðàäèåíò ïëîòíîñòè, è èññëåäóåìûé îáðàçåö âíîñèëè â åãî îïðåäåëåííóþ çîíó.  ïðîöåññå öåíòðèôóãèðîâàíèÿ â öåíòðîáåæíîì ïîëå ÷àñòèöû èññëåäóåìîãî îáðàçöà ðàñõîäÿòñÿ èç ïåðâîíà÷àëüíîãî ïîëîæåíèÿ ïî âûñîòå ïðîáèðêè â ñîîòâåòñòâèè ñ óñòàíîâèâøèìñÿ ãðàäèåíòîì, îñòàíàâëèâàÿñü â òåõ åãî îáëàñòÿõ, ãäå ïëîòíîñòü ðàâíà ïëîòíîñòè ÷àñòèö äàííîãî òèïà. Òàêèì îáðàçîì, ëîêàëèçàöèÿ ÷àñòèö â òîé èëè èíîé çîíå ãðàäèåíòà ïëîòíîñòè ïîçâîëÿåò îöåíèòü èõ "ïëàâó÷óþ ïëîòíîñòü". Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòèö ïî ïëîòíîñòè âî ôðàêöèÿõ ïî âûñîòå ïðîáèðêè îáû÷íî îïðåäåëÿåòñÿ ñ ïîìîùüþ êàêîãî-ëèáî ñïåöèôè÷íîãî ìàðêåðà (îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü, ðàäèîàêòèâíîñòü, ôëóîðåñöåíöèÿ èëè äð.). Ïðè èññëåäîâàíèè ôîñôîãëèâà è åãî êîìïîíåíòîâ â êà÷åñòâå ìàðêåðîâ ìû èñïîëüçîâàëè: 1) äëÿ ÑÔÕ - îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ïðè 320 íì (D320) è [Ñ14]257 Ðèñ. 8.3.3. Ðàâíîâåñíîå óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèå ÑÔÕ, Na3ÃÊ, ñìåñè ÔÕÃÊ è ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö (èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà). ìåòêó (èñïîëüçîâàíèå îáðàçöîâ ôîñôîãëèâà ñ äîáàâëåíèåì [Ñ14]-ÔÕ); 2) äëÿ ÃÊ - îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ïðè 256 íì (D256 ). Ðåçóëüòàòû òàêîãî ýêñïåðèìåíòà äëÿ ýìóëüñèè ÑÔÕ, Na3ÃÊ, èõ ñìåñè è ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðåäñòàâëåíû íà ðèñ 8.3.3. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà 8.3.3 (À), ïðè óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèè ýìóëüñèè ÑÔÕ ïîãëîùåíèå D320 è ðàäèîàêòèâíîñòü [Ñ14] îòëè÷íû îò íóëÿ âî ôðàêöèÿõ ñ ïëîòíîñòÿìè 1,03 1,07 ã/ìë, ñ ìàêñèìóìîì â ïëîòíîñòè 1,05 ã/ìë, ÷òî óêàçûâàåò íà ïðèñóòñòâèå â íèõ ÑÔÕ. Ïî ìåðå âîçðàñòàíèÿ ïëîòíîñòè (íà÷èíàÿ ñ ïëîòíîñòè > 1,065 ã/ìë) íàáëþäàëè ïîñòåïåííîå âîçðàñòàíèå D256 âî 258 ôðàêöèÿõ. Ýòî óêàçûâàåò íà óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÃÊ çà ñ÷åò åå ñåäèìåíòàöèè, ïëîòíîñòü êîòîðîé ñîñòàâëÿåò 1,3227 ã/ìë. Îäíîâðåìåííîå âïðûñêèâàíèå ðàñòâîðîâ ÔÕ è ÃÊ (ïîëó÷åíèå îáðàçöîâ â èçîïðîïàíîëå ñì. âûøå) â âîäíóþ ñðåäó ãðàäèåíòà ïëîòíîñòè è èçìåðåíèå D320 ïîñëå óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ (8.3.3 Á), âûÿâèëî â ýòèõ ôðàêöèÿõ íàëè÷èå âåçèêóë ñ ãèäðàòèðîâàííîé ïëîòíîñòüþ òàêîé æå, êàê ó âåçèêóë ÷èñòîãî ÑÔÕ (1,03 - 1,07 ã/ìë). Òîò æå ðåçóëüòàò íàáëþäàëè è äëÿ ãîòîâîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ (8.3.3 Â). Ñîîòíîøåíèå â ýòèõ ôðàêöèÿõ ïèêîâ D256/ D320 (ðèñ. 9.3.3Á) áûëî âûøå, ÷åì äëÿ ÷èñòîãî ÑÔÕ (~ 4 ïî ñðàâíåíèþ ñ ~ 2 äëÿ ÑÔÕ). Ýòî óêàçûâàåò íà íàëè÷èå â íèõ è ÑÔÕ, è ÃÊ, î÷åâèäíî, â ñîñòîÿíèè ñìåøàííûõ ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë.  çîíå áîëåå âûñîêèõ ïëîòíîñòåé (1,065 - 1,215 ã/ìë) âèäíî íàëè÷èå ïèêà D256 (ñ ìàêñèìóìîì ïðè 1,015 ã/ìë), ïðè D320 áëèçêîé ê íóëþ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îáðàçîâàíèè î÷åíü ìåëêèõ ñìåøàííûõ ìèöåëë ñ âûñîêèì ñîäåðæàíèåì ÃÊ, à òàêæå î ïðèñóòñòâèè ñâîáîäíîé ÃÊ â âîäíîì ðàñòâîðå. Òàêèì îáðàçîì, ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò ïðèñóòñòâèå â âîäíîé ýìóëüñèè ÔÕÃÊ è â ôîñôîãëèâå êàê ñâîáîäíî äèôôóíäèðóþùèõ, òàê è àññîöèèðîâàííûõ ñ ôîñôîëèïèäíûìè íàíî÷àñòèöàìè ìîëåêóë ÃÊ.  äàëüíåéøåì, ïðè ðàçðàáîòêå òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ, áûëè ïîäîáðàíû óñëîâèÿ äëÿ ïîëó÷åíèÿ ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö èç âîäíîãî ðàñòâîðà Na3ÃÊ è âîäíîé (ïåðâè÷íîé) ýìóëüñèè ÑÔÕ îäíèì èç èçâåñòíûõ ñïîñîáîâ - ïðîäàâëèâàíèåì (ýêñòðóçèåé) âîäíîé ýìóëüñèè ôîñôîëèïèäîâ ÷åðåç óçêèå îòâåðñòèÿ â ìåìáðàíå ïîä âûñîêèì äàâëåíèåì (800 - 1000 àòì.) [47]. Ïðåèìóùåñòâîì ýòîãî ìåòîäà ÿâëÿþòñÿ ïîëó÷åíèå íàíî÷àñòèö ñòàíäàðòíîãî ðàçìåðà, âûñîêàÿ ïðîèçâîäèòåëüíîñòü è ìèíèìàëüíîå îêèñëåíèå ÑÔÕ â ïðîöåññå ïîëó÷åíèÿ ïðåïàðàòà. Èñïîëüçîâàíèå ãîìîãåíèçàòîðà âûñîêîãî äàâëåíèÿ ïîçâîëÿåò ïîëó÷àòü íàíî÷àñòèöû â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ ïðè ïîñòîÿííîì êîíòðîëå òåìïåðàòóðû è äàâëåíèÿ. Ïîëó÷åíèå ïðåïàðàòà â ôîðìå ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, óñòîé÷èâûõ ïðè õðàíåíèè, ÿâëÿåòñÿ îäíîé èç ñëîæíûõ çàäà÷. Èçâåñòíî, ÷òî äëÿ ñòàáèëèçàöèè ïîëó÷àåìûõ íàäìîëåêóëÿðíûõ ñòðóêòóð ÷àñòî èñïîëüçóþò òåõíîëîãèþ çàìîðàæèâàíèÿ-âûñóøèâàíèÿ â ïðèñóòñòâèè êðèîïðîòåêòîðîâ. Ïðè ýòîì ïîëó÷àþò ëèîôèëüíî âûñóøåííûé ïðåïàðàò, êîòîðûé ïðè ïîâòîðíîì ðàñòâîðåíèè â âîäå ñîõðàíÿåò ñâîþ ñòðóêòóðó. Îñíîâíûì êðèòåðèåì ïîäáîðà êðèîïðîòåêòîðîâ ÿâëÿåòñÿ ñîõðàíåíèå ñòàáèëüíîñòè ïðåïàðàòà è ðàçìåðà íàíî÷àñòèö ïðè åãî ðàñòâîðåíèè [47, 52]. Õîòÿ ñ ïîìîùüþ ëèîôèëèçàöèè ìîæíî ïîëó÷àòü ñòàáèëüíûé ñóõîé ïðåïàðàò 259 íàíî÷àñòèö, ýòîò ïðîöåññ òðåáóåò òùàòåëüíîãî êîíòðîëÿ, òàê êàê íà ñòàäèÿõ çàìîðàæèâàíèÿ è îáåçâîæèâàíèÿ âîçìîæíî ôèçè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå ÷àñòèö êðèñòàëëàìè ëüäà. Ïîýòîìó ïðèìåíÿåìûé êðèîïðîòåêòîð äîëæåí áûòü ëèøåí ýâòåêòè÷åñêèõ ñâîéñòâ, ò.å. íå äîëæåí êðèñòàëëèçîâàòüñÿ ïðè çàìåðçàíèè. Ïðàâèëüíûé ïîäáîð ñêîðîñòè ñíèæåíèÿ òåìïåðàòóðû (çàìîðàæèâàíèÿ ïðåïàðàòà), ðåæèìà ñóøêè è êðèîïðîòåêòîðà (ìàëüòîçû) îáåñïå÷èëè â íàøåé ðàáîòå ïîëó÷åíèå ñòàáèëüíîãî ïðåïàðàòà â âèäå ëèîôèëèçèðîâàííîãî ïîðîøêà ñ ñîõðàíåííîé ñòðóêòóðîé íàíî÷àñòèö. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî íà ïðîöåññ ñóøêè ïðåïàðàòà è çàùèòíîå äåéñòâèå êðèîïðîòåêòîðîâ ñóùåñòâåííîå âëèÿíèå îêàçûâàåò ðàçìåð ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö. Óñòàíîâëåíî, ÷òî äèàìåòð ÷àñòèö 100 íì è ìåíüøå, à òàêæå ïðèñóòñòâèå ìàëüòîçû â ñîîòíîøåíèè 3:1 ê ÑÔÕ, ñïîñîáñòâîâàëè îïòèìèçàöèè òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîé êîìïîçèöèè. Äðóãèì, íå ìåíåå âàæíûì ôàêòîðîì çàùèòû ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö âî âðåìÿ ëèîôèëèçàöèè, ÿâëÿåòñÿ ïðåäîòâðàùåíèå ñëèÿíèÿ âåçèêóë. Ýòîãî óäàëîñü äîñòè÷ü ïîäáîðîì îïòèìàëüíîãî ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ, Na3ÃÊ è ìàëüòîçû â èñõîäíîé ýìóëüñèè - 2,5:1:9. Îïòèìàëüíîå ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ è Na3ÃÊ, ñîñòàâèâøåå â ýòèõ óñëîâèÿõ 2,5:1, è áûëî âûáðàíî äëÿ äàëüíåéøåé ðàáîòû.  ðåçóëüòàòå áîëüøîãî ÷èñëà ðàáî÷èõ ýêñïåðèìåíòîâ ïî ïîäáîðó êîíêðåòíûõ òåõíîëîãè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ áûëà ðàçðàáîòàíà è ìàñøòàáèðîâàíà òåõíîëîãèÿ ïðîèçâîäñòâà èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ, îñíîâó êîòîðîãî ñîñòàâëÿåò êîìïîçèöèÿ ÑÔÕ + Na3ÃÊ â âèäå ëèîôèëèçèðîâàííûõ ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö. Íà ðèñóíêå 8.3.4 ïðåäñòàâëåíà îáùàÿ ñõåìà òåõíîëîãèè ïðîèçâîäñòâà, êîòîðàÿ âêëþ÷àåò òàêèå îñíîâíûå ñòàäèè, êàê ýêñòðóçèÿ ïîä âûñîêèì äàâëåíèåì, ñòåðèëèçóþùàÿ óëüòðàôèëüòðàöèÿ è ëèîôèëèçàöèÿ. Ðèñ. 8.3.4. Îáùàÿ ñõåìà òåõíîëîãèè ïðîèçâîäñòâà èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ 260 Èíúåêöèîííàÿ ôîðìà ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ðàçðåøåíà ê ïðèìåíåíèþ Ìèíçäðàâîì ÐÔ â 2002 ã. (ðåãèñòðàöèîííûé íîìåð й 002528/02). Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå ñ ïîìîùüþ àòîìíî ñèëîâîé ìèêðîñêîïèè ïîêàçàëî, ÷òî äèàìåòð ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, ñîñòàâëÿþùèõ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå, ïðèáëèçèòåëüíî îäèíàêîâûé (10-45 íì è 25-60 íì ñîîòâåòñòâåííî) (ðèñ. 8.3.5) Ðèñ. 8.3.5. Ñðàâíåíèå äèàìåòðà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå (âîäíàÿ ýìóëüñèÿ) Äàííûå àòîìíî-ñèëîâîé ìèêðîñêîïèè Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðàçìåðà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö îáðàçöû ïðåïàðàòîâ (ýññåíöèàëå è ôîñôîãëèâ) íàíîñèëè íà ïîäëîæêó èç âûñîêîîðèåíòèðîâàííîãî ïèðîëèòè÷åñêîãî ãðàôèòà. Èçìåðåíèÿ ïðîâîäèëè íà ñêàíèðóþùåì çîíäîâîì ìèêðîñêîïå Solver-P47H [53.] Ïîëó÷àåìûé ïî äàííîé ñõåìå ëåêàðñòâåííûé ïðåïàðàò ôîñôîãëèâ èñïîëüçîâàëè â äàëüíåéøåì äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ íà êóëüòóðàõ êëåòîê, à òàêæå in vivo íà æèâîòíûõ ñ ìîäåëÿìè 261 ãåïàòèòîâ. Ïðåïàðàò ïðîøåë äîêëèíè÷åñêèå, à çàòåì è êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ òðåáîâàíèÿìè Ãîñóäàðñòâåííîãî Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî Êîìèòåòà ÌÇ ÐÔ. ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 8. 1. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic. Szczecin., 1993. 2. Ó÷àéêèí Â.Ô., Íèñåâè÷ Í.È., ×åðåäíè÷åíêî Ò.Â. Âèðóñíûå ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì., 1994, 304-318. 3. Guan R, Ho K.Y., Kang J.Y., Yap I., Gwee K.A., Tan C.C. The effect of polyunsaturated phosphatidylcholine in the treatment of acute viral hepatitis. Aliment Pharmakol Ther. 1995, 9, 699-703. 4. Kuntz E. "Essentielle" Phospholipide in der hepatologie - 50 Jahre Åxperimentale und Klinische Erfahrung. Z Gastroenterol. 1991, 29, 7-13. 5. Oette K. On the administration of phosphatidylcholine - metabolic and pharmacokinetic aspects in human. In: 50th Anniversary of Phospholipid Research (EPL). Ed. Gundermann K.-J., Schumacher R., wbn-Verlag, Bingen/Rhein. 1990, 35-48. 6. Ìèíóøêèí Î.Í. Íåêîòîðûå ãåïàòîïðîòåêòîðû â ëå÷åíèå çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Ëå÷àùèé âðà÷. 2002, 6, 55-58. 7. Bachmanova G.I., Abdugafurova M.A., Li V.S., Dobrynina O.V., Shatinina S.Z., Archakov A.I. Reparation of damaged rat liver cells, microsomal membranes and cytochrome P450-dependent monooxygenase system by phospholipids. In: Phosphatidylcholine (Polyenephosphatidylcholine/PPC): Effects on cell membranes and transport of cholesterol, 1988, PPC Workshop, Cologne, wbn-Verlag. Bingen/Rhein, (Archakov A.I., Gundermann K.-J., eds), 1989, 137-145. 8. Van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A., Brouwer J.T., Schalm S.W. Review article: glycyrrhizin as a potential treatment of chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205. 9. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîë è òåðàïèÿ. 2000, 9, 39-41. 10. Iino S., Tango T., Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K., Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40. 11. Ãèïåðëèïîïðîòåèíåìèÿ êàê ôàêòîð ðèñêà è òåðàïèÿ "ýññåíöèàëüíûìè" ôîñôîëèïèäàìè (EPL) (ðåä. Ý.À.Áàáàÿí, Þ.Ì.Ëîïóõèí, è äð.). Ìàòåðèàëû ñèìïîçèóìà. Óïðàâëåíèå ïî âíåäðåíèþ íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ è ìåäèöèíñêîé òåõíèêè ÌÇ ÑÑÑÐ, ÍÈÈ ôèçèêî-õèìè÷åñêîé ìåäèöèíû ÌÇ ÐÔ, Ìîñêâà, 1984. 12. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J., 262 DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism Review. 2001, 33, 125-147. 13. Àáäóãàôóðîâà Ì.À., Ëè Â.Ñ., Øåðñòíåâ Ì.Ï., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Àð÷àêîâ À.È. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ ñîëåé ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû è èõ âëèÿíèå íà ìèêðîñîìàëüíóþ ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè. Âîïð ìåä õèìèè. 1990, 36, 29-31. 14. Àáäóãàôóðîâà Ì.À. Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû êëåòîê ïå÷åíè. Äèññ. êàíä., 1989. 15. Kiso Y., Tohkin M., Hikino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T. Mechanism of antihepatotoxic activity of glycyrrhizin. I: Effect on free radical generation and lipid peroxidation. Planta Med. 1984, 50, 298-302. 16. Karuzina I.I., Zgoda V.G., Archakov A.I. Mechanisms of P4502B4 self-inactivation, heme and apoenzyme oxidative modification during catalytic turnover. Abstr. XI Intern. symposium on microsomes and drug oxidations, Los Angeles. 1996, 199. 17. Êàðóçèíà È.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Àð÷àêîâ À.È. Ñàìîèíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â êàòàëèòè÷åñêîì öèêëå. Âåñòíèê ÐÀÌÍ. 1995, 2, 17-29 18. Archakov A.I., Bachmanova G.I., Cytochrome P450 and active oxygen, Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990. 19. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È. Ìèêðîñîìàëüíîå îêèñëåíèå.  ýíöèêëîïåäèè: Ñîâðåìåííîå åñòåñòâîçíàíèå. Ìîëåêóëÿðíûå îñíîâû áèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ. 2000, 8, 261-267. 20. Mokhosoev I.M. Karuzina I.I., Oxidative degradation of dithionitereduced cytochromes P450 LM2 and LM4. In: Cytochrome P450: biochemistry and biophysics. Proceeding of the 7th Intern. Conference. Archakov A.I., Bachmanova G.I. eds. 1992, 142-144 21. Forte T.M., Cross C.E., Gunther R.A., Kramer G.C. Characterization of sheep lung lymph lipoproteins: chemical and physical properties. J Lipid Res. 1983, 24, 1358-1367. 22. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ïîãîäèíà Î.Ê., Äîáðûíèíà Î.Â., Ìèãóøèíà Â.Ë., Ñàâèí È.Ã. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ äåñòðóêöèè ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà êëåòîê ïå÷åíè. Àâòîðñêîå ñâèäåòåëüñòâî ¹1142802 (1.11.1984). 23. Êàðóçèíà È.È., Àð÷àêîâ À.È. Öèòîõðîì Ð450.  ñá. Áåëêè è ïåïòèäû (ïîä ðåä. Â.Ò.Èâàíîâà, Â.Ì.Ëèïêèíà), Íàóêà. 1995, 17-29. 24. Karuzina I.I., Archakov A.I. CCI4-induced damage to endoplasmatic reticulum membranes. Biochem Pharmacol. 1973, 22, 2095-2104. 25. Ñàâèí È.Ã., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Êàðóçèíà È.È., Ñêîöåëÿñ Å.Ä., Àíòîíîâà Ã.Í., Æèðíîâ Ã.Ô., Êàðÿêèí À.Â., Àðèïîâ À.Í., Àð÷àêîâ 263 À.È. Âëèÿíèå ãåëèîòðèíà íà ñèñòåìó ìèêðîñîìàëüíîãî îêèñëåíèÿ ïå÷åíè êðûñ. Âîïð ìåä õèìèè. 1983, 29, 1, 49. 26. Áîëäàíîâà Í. Á., Äîáðûíèíà Î.Â., Ìèãóøèíà Â. Ë., Àð÷àêîâ À.È. Çàùèòíûå äåéñòâèÿ ôîñôàòèäèëõîëèíîâûõ ëèïîñîì ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì òîêñè÷åñêîì ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986, 2, 65-67. 27. Story D.L., Meierhenry E.F., Tyson C.A., Milman H.A. Differences in rat liver enzyme-altered foci produced by chlorinated aliphatics and phenobarbital. Toxicol Ind Health. 1986, 2, 351-362. 28. Waxman D.J., Azaroff L. Phenobarbital induction of cytochrome P450 gene expression. Biochem J. 1992, 281, 577-592. 29. Jansen P.L., Sturm E. Genetic cholestasis, causes and consequences for hepatobiliary transport. Liver Int. 2003, 23, 315-322. 30. Okajasu T., Curtis M.T., Farber J.L. Structural alterations of mitochondrial membranes in ishemic liver cell. Arch Biochem Biophys. 1985, 236, 638-645. 31. Àëìàòîâ Ê.Ò., Ìèðòàëèïîâ Ä.Ò., Êàñûìîâà Ã.Ì. Èçìåíåíèÿ ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà è îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè ïðè ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986, 32, 27-30. 32. Plaa G.L. Chlorinated methanes and liver injury: highlights of the past 50 years. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2000, 40, 42-65. 33. Äîìáðîâñêàÿ Í.Â. Ñîñòîÿíèå ìèòîõîíäðèàëüíîé ñèñòåìû ïå÷åíè ïðè ãåïàòèòå è ñïîñîáû êîððåêöèè ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè. Äèññ. êàíä., 1991. 34. Êàáàåâà ÍÂ, Ïåðîâ ÍÀ, Ïåòðîâà ËÅ, Àíòîíîâ À.Ñ. Ïîâðåæäåíèå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê õîëåñòàí-3β,5α,6β-òðèîëîì è çàùèòíîå äåéñòâèå ïðåïàðàòîâ, ïîâûøàþùèõ óðîâåíü âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÌÔ. Öèòîëîãèÿ. 1992, 34, 23-29. 35. Torkhovskaya T, Khalilov E., Medvedeva N., Morozkin A., Misharin A., Ipatova O., Antonov A., Kabayeva N., Archakov A. Antiatherogenic action of micelles with glycyrrhizin on plasma lipoproteins and endothelial culture cells. XIII Lipid Meeting Leipzig, Germany. 2002, 82-83. 36. Martin GP, el-Hariri LM, Marriott C. Bile salt- and lysophosphatidylcholine-induced membrane damage in human erythrocytes. J Pharm Pharmacol. 1992, 44, 646-50. 37. Àð÷àêîâ À.È., Èâàíîâ À.Ñ., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ìàðêèí Ñ.Ñ., Êîâàëåâà Ã.Ã. Êîìïîçèöèÿ, îáëàäàþùàÿ ñâîéñòâàìè ðåïàðèðîâàòü ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ. Ïàòåíò ¹ 2043110 îò 10.09.1995ã. 38. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Èïàòîâà Î.Ì., Êíÿæåâ Â.À., Ëèñîâ Â.È., Ñêâîðöîâ È.À., Ó÷àéêèí Â.Ô., Òèõîíîâà Å.Ã., ßêóáîâñêèé Ê.Â., Öûãàíîâ Ä.È. Êîìïîçèöèÿ, îáëàäàþùàÿ ñâîéñòâàìè ðåïàðèðîâàòü áèîëîãè÷åñèå ìåìáðàíû. Ïàòåíò íà èçîáðåòåíèå ¹ 264 2133122 îò 14.10.98. 39. Moghimi S.M., Hunter A.C., Murray J.C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacol Reviews. 2001, 53, 283-318. 40. Ìàðãîëèñ Ë.Á., Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ëèïîñîìû è èõ âçàèìîäåéñòâèå ñ êëåòêàìè. Ì., Íàóêà, 1986. 41. Allen T.M., Chonn A. Large unilamellar liposomes with low uptake into reticulo-endothelial system. FEBS Lett. 1987, 223, 42-46. 42. Drummond D., Meyer O., Hong K., Kirpotin D., Papahadjopoulos D. Optimizing liposomes for delivery of chemotherapeutic agents to solid tumors. Pharmacol Rev. 1999, 51, 691-743. 43. Senior J.H. Fate and behaviour of liposomes in vivo: a review of controlling factors. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1987, 3, 123-93. 44. Hwang K.J. Liposome pharmacokinetics. In: Liposomes: From Biophysics to Therapeutics (Ostro M.J. ed). Marcel Dekker, Inc, New York. 1987, 109-156. 45. Gabizon A.A. Liposome circulation time and tumor targeting: implications for cancer chemotherapy. Adv Drug Del Rev. 1995, 16, 285294 46. Áàðñóêîâ Ë.È. Ëèïîñîìû. Ñîðîñîâñêèé îáîçðåâàòåëüíûé æóðíàë. 1998, 10, 2- 9. 47. Äóäíè÷åíêî À.Ñ., Êðàñíîïîëüñêèé Þ.Ì, Øâåö Â.È. Ëèïîñîìàëüíûå ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû â ýêñïåðèìåíòå è êëèíèêå. Õàðüêîâ, 2001. 48. Senior J., Crawley J.C., Gregoriadis G. Tissue distribution of liposomes exhibiting long half-lives in the circulation after intravenous injection. Biochim Biophys Acta. 1985, 839, 1-8. 49. Xia W.J., Onyuksel H. Mechanistic studies on surfactant-induced membrane permeability enhancement. Pharm Res. 2000, 7, 612-618. 50. Erhorning G., Pulsating bubble technique for evaluating surface tension. J Apl Physiol. 1977, 43, 198-203. 51. Birnie G.D., D.Rickwood (eds). Centrifugal Separations in Molecular and Cell Biology. Butterworths, London, 1978. 52. Aso Y, Yoshioka S. Effect of freezing rate on physical stability of lyophilized cationic liposomes. Chem Pharm Bull. 2005, 53, 301-304. 53. Kuznetsov V.Y., Ivanov Y.D., Bykov V.A., Saunin S.A., Fedorov I.A., Lemeshko S.V., Hoa H.B., Archakov A.I. Atomic force microscopy detection of molecular complexes in multiprotein P450cam-containing monooxygenase system. Proteomics. 2002, 2, 161-165. 265 ÃËÀÂÀ 9. ÄÎÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß ÔÎÑÔÎÃËÈÂÀ 9.1. Ñðàâíèòåëüíîå èçó÷åíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòîâ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå â ýêñïåðèìåíòàõ in sittu. Ôàðìàêîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü ôîñôîãëèâà îöåíèâàëè â ýêñïåðèìåíòàõ in vitro íà ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929 (ôèáðîáëàñòîïîäîáíûå êëåòêè ôèáðîñàðêîìû ìûøåé), ôèáðîáëàñòàõ êîæè ÷åëîâåêà (çäîðîâûõ äîíîðîâ) è íà ïåðèòîíåàëüíûõ ìàêðîôàãàõ ìûøåé. Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå, ðàññ÷èòàííûå ïî ÑÔÕ (0,5 - 5 ìã/ìë) äîáàâëÿëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ÷åðåç 2 ÷àñà ïîñëå ïàññèðîâàíèÿ êëåòîê è àíàëèçèðîâàëè âëèÿíèå ýòèõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ðîñò êëåòîê, ñèíòåç ÄÍÊ, ÐÍÊ è áåëêà, à òàêæå íà ïðîäóêöèþ TNF ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè. Ïðè êðàòêîâðåìåííîì (5 ÷àñîâ) êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê L929 â ïðèñóòñòâèè èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ êîëè÷åñòâî æèâûõ êëåòîê â ñðåäå ñ ôîñôîãëèâîì áûëî âûøå, ÷åì â ñðåäå ñ ýññåíöèàëå (Ðèñ. 9.1.1 À). Èç ïðåäñòàâëåííîãî ãðàôèêà âèäíî, ÷òî ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ (äî 1 ìã/ìë) ôîñôîãëèâ ïðàêòè÷åñêè íå ñíèæàë ÷èñëî æèâûõ êëåòîê â ñðåäå; ïðè êîíöåíòðàöèè 5 ìã/ìë ÷èñëî æèâûõ êëåòîê óìåíüøàëîñü íå áîëåå ÷åì íà 15-20%. Îäíàêî ýññåíöèàëå óæå â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìã/ìë îáëàäàë âûðàæåííîé öèòîòîêñè÷íîñòüþ, ðåçêî âîçðàñòàþùåé ñ óâåëè÷åíèåì êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòà. Ïðè åãî ñîäåðæàíèè 5 ìã/ìë ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà æèâûõ êëåòîê â ñðåäå ñîñòàâëÿëî 85-90%. Ðåçóëüòàòû êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê L929 â òå÷åíèå 24 ÷àñîâ â ïðèñóòñòâèè ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå ïðåäñòàâëåíû íà ðèñ. 9.1.1Á. Îò÷åòëèâî âèäíî, ÷òî ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ïðèñóòñòâèè 0,1 ìã/ìë ýññåíöèàëå âûæèâàåò òîëüêî 50% êëåòîê, à äîçà 0,2 ìã/ìë â ýòèõ óñëîâèÿõ âûçûâàåò ãèáåëü âñåõ êëåòîê.  àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ êóëüòèâèðîâàíèÿ ôîñôîãëèâ â êîíöåíòðàöèÿõ 0,5-5 ìã/ìë öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ïðàêòè÷åñêè íå ïðîÿâëÿë. ×åðåç 72-96 ÷àñîâ êóëüòèâèðîâàíèÿ (ðèñ. 9.1.1 Â), ôîñôîãëèâ çàìåäëÿë ðîñò êëåòîê òîëüêî ïðè êîíöåíòðàöèè 1,0 ìã/ìë.  ýòèõ æå óñëîâèÿõ ãîðàçäî ìåíüøàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýññåíöèàëå (0,1 ìã/ìë) îêàçàëàñü òîêñè÷íîé äëÿ êëåòîê. Êîìïîíåíòû ôîñôîãëèâà (ÑÔÕ è ÃÊ) ïðè êóëüòèâèðîâàíèè äî 6 ñóòîê ñóùåñòâåííîãî öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ íà êëåòêè íå îêàçûâàëè. Ïðè äîáàâëåíèè ôîñôîãëèâà â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ôèáðîáëàñòîâ êîæè ÷åëîâåêà íà 6-é äåíü èíêóáàöèè áûëà âûÿâëåíà ñòèìóëÿöèÿ ðîñòà êëåòîê ïðè êîíöåíòðàöèè ôîñôîãëèâà ïî ÑÔÕ 0,5 è 1 ìã/ìë. 266 Ðèñ. 9.1.1. Âëèÿíèå Ôîñôîãëèâà è Ýññåíöèàëå íà ðîñò êëåòîê L 929 Öèòîòîêñè÷íîñòü ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå îïðåäåëÿëè â îïûòàõ in vitro íà ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929 (ôèáðîáëàñòîïîäîáíûå êëåòêè ôèáðîñàðêîìû ìûøåé) ïðè èõ êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå 199 ñ 10% èëè 20% áû÷üåé ñûâîðîòêè. Êëåòêè êóëüòèâèðîâàëè â 24- è 48-ìè ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ. Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòîâ (îò 0,5 äî 5 ìã/ìë) äîáàâëÿëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ÷åðåç 2 ÷àñà ïîñëå ïàññèðîâàíèÿ êëåòîê (ðèñ. À è Á). Ïðè êóëüòèâèðîâàíèè 96 ÷àñîâ ê êóëüòóðå êëåòîê äîáàâëÿëè ôîñôîãëèâ â êîíöåíòðàöèè 1 ìã/ìë, à ýññåíöèàëå - 0,1 ìã/ìë. ×åðåç 5, 24, 48, 72 è 96 ÷àñîâ èíêóáàöèè îïðåäåëÿëè ÷èñëî êëåòîê â ëóíêå ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè 590 íì ïîñëå îêðàñêè êëåòîê 267 Ðèñ. 9.1.2. Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà ñèíòåç ÐÍÊ, ÄÍÊ è áåëêà â êëåòêàõ L 929 ïðè 4-õõ ÷àñîâîé èíêóáàöèè Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå ïî ÑÔÕ (îò 0,05 äî 5,0 ìã/ìë) äîáàâëÿëè ê êóëüòóðå ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929 è ïðåèíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 4-õ ÷àñîâ. Ñèíòåç áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ îöåíèâàëè ïî âêëþ÷åíèþ ìå÷åííûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ Ñ14-âàëèíà, Ñ14-óðèäèíà è Í3-òèìèäèíà ñîîòâåòñòâåííî, êîòîðûå âíîñèëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ïåðåä ïàññèðîâàíèåì êëåòîê [4]. 268 Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ âëèÿíèÿ ïðåïàðàòîâ íà ðîñò êëåòîê ïîêàçàëè îòñóòñòâèå öèòîòîêñè÷åñêèõ ñâîéñòâ ó ôîñôîãëèâà è åãî êîìïîíåíòîâ, íî âûÿâèëè öèòîòîêñè÷íîñòü ïðåïàðàòà ýññåíöèàëå, ñâÿçàííóþ, âåðîÿòíî, ñ ïðèñóòñòâèåì ñîëåé æåë÷íûõ êèñëîò, ñïîñîáíûõ ëèçèðîâàòü êëåòêè (ñì. ãëàâó 5) [1, 2]. Ïîìèìî ðîñòà êëåòîê, èññëåäîâàëè òàêæå âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà ñèíòåç â íèõ áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ (Ðèñ. 9.1.2, À, Á è Â). Êàê âèäíî èç ãðàôèêîâ, ïðåèíêóáàöèÿ êëåòîê L929 ñ ôîñôîãëèâîì â äîçå 0,5 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ), â òå÷åíèå 4-õ ÷àñîâ íå âëèÿåò íà ñèíòåç áåëêà â êëåòêàõ (À), íà 15-30% ñíèæàåò ñèíòåç ÐÍÊ (Á) è íà 20% óâåëè÷èâàåò ñèíòåç ÄÍÊ (Â). Ýññåíöèàëå æå è ïðè ìåíüøèõ äîçàõ èíãèáèðóåò âñå èññëåäîâàííûå ïðåïàðàòû: óæå â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) îí ~ íà 75% èíãèáèðóåò ñèíòåç áåëêà (À); ïðè êîíöåíòðàöèè 0,5 ìã/ìë íàáëþäàëîñü ïî÷òè ïîëíîå (íà 85-90%) èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ (Á, Â). Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîãëèâ íå ïîâðåæäàåò êëåòî÷íûå ñèñòåìû ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ, ÷òî ïîäòâåðæäàåò îòñóòñòâèå òîêñè÷íîñòè êàê ó ñàìîãî ïðåïàðàòà, òàê è åãî êîìïîíåíòîâ. Ðåçêîå èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ äàæå ñðàâíèòåëüíî íèçêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ïðåïàðàòà ýññåíöèàëå óêàçûâàåò íà åãî öèòîòîêñè÷íîñòü. Ïðåäñòàâëÿëîñü òàêæå öåëåñîîáðàçíûì èññëåäîâàòü âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå, íà ïðîäóêöèþ ìàêðîôàãàìè TNF. Ýòîò öèòîêèí ó÷àñòâóåò âî ìíîãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ, âêëþ÷àÿ ïðîöåññû âîñïàëåíèÿ, èíôåêöèè, øîêà è ïîâðåæäåíèÿ òêàíåé, ðàçâèòèÿ êàõåêñèè è èãðàåò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ïàòîãåíåçå ðÿäà çàáîëåâàíèé [4]. Îñíîâíûì èñòî÷íèêîì TNF â îðãàíèçìå ÿâëÿþòñÿ êëåòêè ìàêðîôàãàëüíîé ñèñòåìû [4, 5]. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ãåíåðàöèþ TNF îöåíèâàëè ïî èíäåêñó öèòîòîêñè÷íîñòè (ÈÖ) êîíäèöèîíèðîâàííîé ñðåäû ìàêðîôàãîâ, âûäåëåííûõ èç èíòàêòíûõ ìûøåé ïðè äîáàâëåíèè åå ê êóëüòóðå êëåòîê L929 (ðèñ. 9.1.3) [6]. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, âåëè÷èíà ÈÖ äî 10% õàðàêòåðèçóåò íîðìàëüíûé óðîâåíü ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF ìàêðîôàãàìè â êîíòðîëå áåç äîáàâëåíèÿ ïðåïàðàòîâ.  ïðèñóòñòâèè ýññåíöèàëå ïåðèòîíåàëüíûå ìàêðîôàãè èíòàêòíûõ ìûøåé ñåêðåòèðóþò â ñðåäó áîëüøîå êîëè÷åñòâî TNF: ÈÖ êóëüòóðàëüíîé ñðåäû ïðè äîáàâëåíèè ê ìàêðîôàãàì 2 ìã/ìë ïî ÑÔÕ ýññåíöèàëå ðàâåí ~70%.  òåõ æå óñëîâèÿõ ÈÖ ìàêðîôàãàëüíîé ñðåäû ïðè äîáàâëåíèè ôîñôîãëèâà èëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû ñîñòàâëÿë âñåãî 8 è 25% ñîîòâåòñòâåííî. Ñóùåñòâåííàÿ àêòèâàöèÿ ïåðèòîíåàëüíûõ ìàêðîôàãîâ ïîä äåéñòâèåì ýññåíöèàëå ìîæåò íà óðîâíå îðãàíèçìà ïðèâîäèòü ê ïîâûøåííûì âûáðîñàì TNF è äðóãèõ öèòîêèíîâ, ñïîñîáíûõ îêàçûâàòü íåæåëàòåëüíûå ýôôåêòû. 269 Ðèñ. 9.1.3. Ñðàâíèòåëüíîå äåéñòâèå ôîñôîãëèâà è åãî êîìïîíåíòîâ íà îáðàçîâàíèå ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé (TNF). Òàêèì îáðàçîì, è â ýòèõ ýêñïåðèìåíòàõ óñòàíîâëåíî, ÷òî â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, ôîñôîãëèâ íå òîëüêî íå îáëàäàåò öèòîòîêñè÷íîñòüþ, íî è íå àêòèâèðóåò îáðàçîâàíèå ìàêðîôàãàìè TNF. 9.2. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè îñòðîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4. Ó÷èòûâàÿ âàæíîñòü âîññòàíîâëåíèÿ áåëîêñèíòåçèðóþùåé ôóíêöèè êëåòîê ïå÷åíè â ïðîöåññå ðåãåíåðàöèè îðãàíà ïîñëå ââåäåíèÿ ÑÑl4 [7], áûëî èññëåäîâàíî âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ñèíòåç ÐÍÊ, ÄÍÊ, àëüáóìèíà, à òàêæå íà îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé ìÐÍÊ â ïîëèðèáîñîìàõ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ îòðàâëåííûõ ÑÑl4 [8]. Ïîñêîëüêó ïðè òîêñè÷åñêîì ïîðàæåíèè ïå÷åíè ÑÑl4 ðåçêî óâåëè÷èâàåòñÿ êîëè÷åñòâî êóïôåðîâñêèõ êëåòîê, ñïîñîáíûõ âûðàáàòûâàòü áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå âåùåñòâà, â òîì ÷èñëå, è TNF, îöåíèâàëîñü äåéñòâèå ïðåïàðàòîâ è íà ñåêðåöèþ ïîñëåäíåãî ìàêðîôàãàìè [9].  îïûòàõ èñïîëüçîâàëè êðûñ ñàìöîâ ëèíèè Âèñòàð, ìàññîé 160 - 180 ã, ñîäåðæàâøèõñÿ íà ñòàíäàðòíîé äèåòå. Äëÿ ðàçâèòèÿ îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî ââîäèëè ÑÑl â äîçå 0,1 ìë/100ã. Äëÿ èññëåäîâàíèÿ ñèíòåçà ÄÍÊ, ÐÍÊ è àëüáóìèíà èñïîëüçîâàëè âêëþ÷åíèå â íèõ ìå÷åííûõ [Í3]-òèìèäèíà (Ðîññèÿ, 4,3 Ku/ìÌ), [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû (Âåíãðèÿ, 40 ìêKu/ìÌ) è [Ñ14]-ëåéöèíà (×åõîñëîâàêèÿ, 80 ìêKu/ìÌ) ñîîòâåòñòâåííî. Ðåçóëüòàòû ïðèâåäåíû â òàáë. 9.2.1. 4 270 Òàáëèöà 9.2.1. Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà ñèíòåç ÐÍÊ â ïå÷åíè êðûñ, ïîðàæåííûõ ÑÑl4 Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-îîðîòîâîé êèñëîòû Ãðóïïû æèâîòíûõ â ìÐÍÊ ïîëèðèáîñîì (ôðàêöèÿ ? 80 S) â ñóììàðíóþ ÐÍÊ (èìï/ìèí/ìã ÐÍÊ) õ 10 3 (èìï/ìèí/ìã ïîëèðèáîñîì) õ 10 3 % îò âêëþ÷åíèÿ â ñóììàðíóþ ÐÍÊ Èíòàêòíûå æèâîòíûå 19,4 ± 0,6 9,8 ± 0,8 59,0 ± 2,0 ÑÑl4 6,2 ± 0,6 2,5 ± 0,7 40,6 ± 3,3 ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ 12,4 ± 0,1* # 6,9 ± 0,3* 56,0 ± 2,3# ÑÑl4 + ýññåíöèàëå 11,4 ± 1,2* # 5,0 ± 0,2* # 44,0 ± 2,1* ×èñëî æèâîòíûõ â ýêñïåðèìåíòå - 10, èç íèõ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå - 4, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 - 6;. ÑÑl4 ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 0.1 ìë/100 ã. Ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ñ êîíöåíòðàöèåé 50 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî ïî 20 ìã/100 ã åæåäíåâíî â òå÷åíèå 3 ñóòîê. ×åðåç ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ ïðåïàðàòîâ ââîäèëè [Ñ14]-îðîòîâóþ êèñëîòó, æèâîòíûõ çàáèâàëè, êëåòêè ïå÷åíè ãîìîãåíèçèðîâàëè è öåíòðèôóãèðîâàíèåì ðàçäåëÿëè íà ôðàêöèè. Ðàäèîàêòèâíîñòü ãîìîãåíàòà è ôðàêöèè ïîëèðèáîñîì îïðåäåëÿëè ïðè ïîìîùè æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rack-beta" [8]. * - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05. #- ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì, ð<0,05. Êàê âèäíî èç òàáëèöû 9.2.1, ñèíòåç ÐÍÊ (â îñíîâíîì, ìÐÍÊ) ñíèæàëñÿ ïîä äåéñòâèåì ÑÑl4 áîëåå ÷åì â 3 ðàçà, ÷òî ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ íàðóøåíèåì òðàíñêðèïöèè è/èëè àêòèâàöèåé íóêëåàç ïîä äåéñòâèåì òîêñèêàíòà. Ââåäåíèå ôîñôîãëèâà èëè ýññåíöèàëå äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëî ñèíòåç ñóììàðíîé ÐÍÊ ïî ñðàâíåíèþ ñ ñîîòâåòñòâóþùèì ïîêàçàòåëåì ó îòðàâëåííûõ êðûñ. Îäíàêî óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòîâ íå äîñòèãàë óðîâíÿ ñèíòåçà ìÐÍÊ â íîðìàëüíîé ïå÷åíè, ñîñòàâëÿÿ 63% îò êîíòðîëÿ. Ïîñêîëüêó ñóììàðíàÿ ÐÍÊ ïðåäñòàâëåíà, â îñíîâíîì, ðèáîñîìíîé ÐÍÊ [8], ìîæíî ñäåëàòü âûâîä, ÷òî ñèíòåç ðèáîñîìíîé ÐÍÊ áûñòðåå âîññòàíàâëèâàåòñÿ ïîä âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå, ÷åì ñèíòåç ìÐÍÊ. Âêëþ÷åíèå [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â ìÐÍÊ ïîëèðèáîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ñíèæàëîñü ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâûì ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ (òàáë.9.2.1); ñíèæàëîñü è îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå ìÐÍÊ, âõîäÿùåé â ñîñòàâ ïîëèðèáîñîì (âî ôðàêöèþ ÷àñòèö >80 S). Ýññåíöèàëå íåñêîëüêî áîëüøå, ÷åì ôîñôîãëèâ, óâåëè÷èâàë äîëþ íîâîîáðàçîâàííîé ìÐÍÊ, ñâÿçàííóþ ñ ðèáîñîìàìè. Èçâåñòíî, ÷òî ÑÑl4 âûçûâàåò ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ÝÐ, ïðèâîäÿùåå ê ñíèæåíèþ ñèíòåçà àëüáóìèíà [10].  íàøèõ ýêñïåðèìåíòàõ ïîêàçàíî, ÷òî ââåäåíèå ôîñôîãëèâà êðûñàì ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïðèâîäèëî ê ïîëíîé íîðìàëèçàöèè ñèíòåçà àëüáóìèíà. Ââåäåíèå ýññåíöèàëå íå îêàçûâàëî ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà ýòîò ïðîöåññ (òàáë. 9.2.2). 271 Òàáëèöà 9.2.2. Óäåëüíàÿ ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà (ïî [Ñ14]-ë ëåéöèíó) â ñûâîðîòêå êðîâè êðûñ ïîñëå îñòðîãî îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå. Óäåëüíàÿ ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà (èìï/ìèí/ìã) õ 10 3 Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà Èíòàêòíûå æèâîòíûå 9,4 ± 0,75 ÑÑl4 6,3 ± 0,56 ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ 11,4 ± 1,04* # ÑÑl4 + ýññåíöèàëå 3,7 ± 0,27* # Êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ è óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà - êàê â ïîäïèñè ê òàáë. 9.2.1. [Ñ14]-ëåéöèí ââîäèëè æèâîòíûì, ïîñëå ÷åãî îïðåäåëÿëè ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà ñûâîðîòêè êðîâè ñ èñïîëüçîâàíèåì æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rack-beta". * - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05. # - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì; ð<0,05. Êàê ñëåäóåò èç òàáëèöû 9.2.2, ñèíòåç àëüáóìèíà, ñíèæåííûé â ðåçóëüòàòå ïîâðåæäåíèÿ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàí ïðè ââåäåíèè ÑÑl4, âîññòàíàâëèâàëñÿ ó æèâîòíûõ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì.  ýêñïåðèìåíòàõ ñ ââåäåíèåì [Í3]-òèìèäèíà íàìè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ðàçâèòèå îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ââåäåíèåì ÑÑl4, ñîïðîâîæäàëîñü ñíèæåíèåì ñèíòåçà ÄÍÊ â ÿäðàõ è ìèòîõîíäðèÿõ íà 50 è 65 % ñîîòâåòñòâåííî. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì íå îêàçûâàëî ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà ñèíòåç ÿäåðíîé ÄÍÊ, íî â 3 ðàçà óñèëèâàëî ñèíòåç ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ. Íàðóøåíèå ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé ïðè èíòîêñèêàöèè ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ, ïî-âèäèìîìó, ñëåäñòâèåì ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâàöèè òîêñèêàíòà íåïîñðåäñòâåííî â ýòèõ îðãàíåëëàõ [11], ïîñêîëüêó êîâàëåíòíîå ñâÿçûâàíèå ìåòàáîëèòîâ ÑÑl4 ñ ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ â äåñÿòêè ðàç âûøå, ÷åì ñ ÿäåðíîé ÄÍÊ. Êðîìå òîãî, ñèíòåç ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ áîëåå ÷óâñòâèòåëåí ê ïîâðåæäàþùåìó äåéñòâèþ ÑÑl4, ÷åì ñèíòåç ÿäåðíîé ÄÍÊ [12]. Ñïîñîáíîñòü ôîñôîãëèâà âîññòàíàâëèâàòü ñèíòåç ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ èìååò áîëüøîå çíà÷åíèå äëÿ íîðìàëèçàöèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê è, â ÷àñòíîñòè, ìèòîõîíäðèé [13, 14]. Ïðîâåäåííûå íàìè ãèñòîëîãè÷åñêèå è ãèñòîõèìè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ÷åðåç 4 ñóòîê ïîñëå ââåäåíèÿ ÑÑl4 â òêàíè ïå÷åíè ðàçâèâàëèñü ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ (òàáëèöû 9.2.3 è 9.2.4).  ÿäðàõ ÷àñòè ãåïàòîöèòîâ íàáëþäàëèñü ÿâëåíèÿ öåíòðàëüíîãî õðîìàòîëèçà, âïëîòü äî êàðèîëèçà, óìåíüøàëîñü ñîäåðæàíèå ÄÍÊ.  öèòîïëàçìå ãèñòîëîãè÷åñêè èçìåíåííûõ êëåòîê íàáëþäàëàñü áåëêîâàÿ è æèðîâàÿ äèñòðîôèÿ, óìåíüøàëîñü ñîäåðæàíèå ÐÍÊ è ñòðóêòóðíûõ ôîñôîëèïèäîâ (òàáëèöà 9.2.3). 272 Òàáëèöà 9.2.3 Ìîðôîëîãè÷åêàÿ îöåíêà ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè êðûñ ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 è ââåäåíèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ (â áàëëàõ).* Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà Äèñòîôè - Èíòåíñèâ íîñòü ÷åñêèå èçìåíåíèÿ íåêðîçà Ìàêðîôà ãàëüíàÿ ðåàêöèÿ Èíòàêòíûå æèâîòíûå 1,3 0 0 ÑÑl4 3,3 2,0 ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ 1,7 0 ÑÑl4 + ýññåíöèàëå 3,3 1,0 Ôèáðîáëàñòè ÷åñêàÿ ðåàêöèÿ Ðàçâèòèå ãðàíó ëÿöèîííîé òêàíè 0 3,7 2,8 1,5 1,5 1,0 0 3,3 2,0 0 2,0 * ñîñòîÿíèå òêàíè ïå÷åíè îöåíèâàëè ãèñòîõèìè÷åñêè ïî èíòåíñèâíîñòè íåêðîçà, ìàêðîôàãàëüíîé è ôèáðîáëàñòè÷åñêîé ðåàêöèÿì, à òàêæå ïî ñóììàðíûì äèñòðîôè÷åñêèì èçìåíåíèÿì, ðåãèñòðèðóåìûì ïî 5-áàëëüíîé øêàëå: Î - îòñóòñòâèå ïðèçíàêà; 1 íåçíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ; 2 - óìåðåííî âûðàæåííûé ïðèçíàê; 3 - âûðàæåííûé ïðèçíàê; 4 ñèëüíî âûðàæåííûé ïðèçíàê [9]  òêàíè ïå÷åíè áûëè îòìå÷åíû î÷àãè íåêðîçîâ, è ðàçâèòèå íà ìåñòå íåêðîçîâ ãðàíóëÿöèîííîé òêàíè, íà îñíîâå êîòîðîé âïîñëåäñòâèè, êàê èçâåñòíî, ðàçâèâàþòñÿ öèððîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ [15]. Îäíîâðåìåííî óñèëèâàëàñü ïðîëèôåðàöèÿ ôèáðîáëàñòîâ, ïðèâîäÿùàÿ ê ôèáðîçó [16]. Ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â ýòîò ïåðèîä åùå íå ïðîÿâëÿëèñü, íàïðîòèâ, ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ è êîëè÷åñòâî äâóÿäåðíûõ êëåòîê äàæå óìåíüøàëèñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì (òàáë. 9.2.4). Òàáëèöà 9.2.4 Ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ è ñîäåðæàíèå äâóÿäåðíûõ êëåòîê (â %) â ïå÷åíè êðûñ ïîñëå îñòðîãî îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ñ ïîñëåäóþùèì ââåäåíèåì ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ. Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà Èíòàêòíûå æèâîòíûå ÑÑl4 ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ ÑÑl4 + ýññåíöèàëå Ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ Êîë -ââî äâóÿäåðíûõ êëåòîê 0,17±0,08 0,07±0,05 1,30±0,40* # 0,13±0,04** 8,30±0,80 4,75±0,64 6,80±0,80* # 7,07±1,06** Êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ è óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà êàê â ïîäïèñè ê òàáë. 9.2.1. Êîëè÷åñòâî ãåïàòîöèòîâ â ñîñòîÿíèè ìèòîçà è äâóÿäåðíûõ êëåòîê ðàññ÷èòûâàëè íà 500 êëåòîê â ïðîöåíòíûõ ñîîòíîøåíèÿõ [8, 9]. * - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05. # - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì; ð<0,05. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 9.2.4 äàííûõ, ââåäåíèå æèâîòíûì ôîñôîãëèâà ïðèâîäèëî ê óâåëè÷åíèþ èññëåäîâàííûõ ïàðàìåòðîâ. Îñîáåííî ýòî îòíîñèòñÿ ê ðåçêîìó ïîâûøåíèþ ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà, ÷òî óêàçûâàåò íà àêòèâàöèþ 273 ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè. Ïîñëå ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà îòìå÷åíî ïðåêðàùåíèå ðàçâèòèÿ íåêðîòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, ÷òî âèäíî èç òàáëèöû 9.2.3.  ïå÷åíè æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íàáëþäàëîñü ìåíüøå äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé, îòñóòñòâóåò íåêðîç, à òàêæå ñíèæåíû ïðîöåññû îáðàçîâàíèÿ ãðàíóëÿöèîííîé è ôèáðîçíîé òêàíè (ôèáðîáëàñòè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ). Ó ýòîé ãðóïïû æèâîòíûõ îòìå÷åíî ïîâûøåííîå ñîäåðæàíèå ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíûõ êðóïíûõ ãåïàòîöèòîâ ñ âûñîêèì óðîâíåì ÐÍÊ è ôîñôîëèïèäîâ â öèòîïëàçìå ïî ñðàâíåíèþ ñ íå ëå÷åíûìè êðûñàìè èëè æèâîòíûìè, ïîëó÷àâøèìè ýññåíöèàëå. Íåñìîòðÿ íà íåêîòîðîå ñíèæåíèå îáùåãî êîëè÷åñòâà ìàêðîôàãîâ â ïå÷åíè æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ýòèõ êëåòîê (ïðîÿâëÿþùèåñÿ â óâåëè÷åíèè èõ ðàçìåðîâ, íàëè÷èè ôàãîöèòàðíûõ âàêóîëåé â öèòîïëàçìå, ØÈÊ-ïîçèòèâíîé çåðíèñòîñòè) ñâèäåòåëüñòâóþò î ïîâûøåíèè èõ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè [9]. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ýññåíöèàëå, ëå÷åáíûé ýôôåêò áûë âûðàæåí â ìåíüøåé ñòåïåíè. Ó íèõ ñëàáåå ïðîÿâëÿëèñü ðåïàðàòèâíûå ïðîöåññû, íàáëþäàëèñü áîëåå âûðàæåííûå äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ, ó ÷àñòè æèâîòíûõ èìåëèñü î÷àãîâûå íåêðîçû. Àêòèâàöèÿ ôîñôîãëèâîì çàùèòíîé àêòèâíîñòè ìàêðîôàãîâ ó æèâîòíûõ îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ïðîÿâèëàñü òàêæå â èíäóêöèè ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè ïå÷åíè ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF, îöåíèâàåìûõ ïî ÈÖ êîíäèöèîíèðîâàííîé ñðåäû ìàêðîôàãîâ êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4. Ïðè ýòîì îáðàáîòêà ôîñôîãëèâîì in situ ìàêðîôàãîâ çäîðîâûõ æèâîòíûõ ïðàêòè÷åñêè íå âëèÿëà íà ÈÖ ïðè äîçàõ ïðåïàðàòà äî 0,2 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ), â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, óâåëè÷èâàþùåãî ÈÖ â 1,5 - 2 ðàçà [9], ÷òî ïîäòâåðæäàëî âûøå ïðèâåäåííûå äàííûå î öèòîòîêñè÷íîñòè ýññåíöèàëå äëÿ ìàêðîôàãîâ ìûøåé (ðèñ. 9.1.3).  ìàêðîôàãàõ ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4, îáà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòà ñòèìóëèðîâàëè ñèíòåç è ñåêðåöèþ TNF: äî 20-40% ÈÖ - ïðè âñåõ êîíöåíòðàöèÿõ äëÿ ýññåíöèàëå, íà÷èíàÿ ñ 0,05 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) è ïðè êîíöåíòðàöèÿõ ôîñôîãëèâà, ïðåâûøàþùèõ 0,1 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ). Òàêèì îáðàçîì, ñïîñîáíîñòü ôîñôîãëèâà òîëüêî ïðè äîñòàòî÷íî âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ñóùåñòâåííî àêòèâèðîâàòü ìàêðîôàãàëüíóþ ðåàêöèþ è èíäóöèðîâàòü ýêñïðåññèþ ìàêðîôàãàëüíîãî TNF, íåñîìíåííî, îòíîñèòñÿ ê åãî ïîëîæèòåëüíûì ñâîéñòâàì. Âîçìîæíî, ÷òî óìåðåííàÿ ñòèìóëÿöèÿ ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF ôîñôîãëèâîì áëàãîòâîðíî âëèÿåò íà ïðîöåññû ðåãåíåðàöèè ïîâðåæäåííîé ïå÷åíè. 274 Íà îñíîâàíèè ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ íà ìîäåëè îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî îòðàâëåíèåì êðûñ ÑÑl4, ìîæíî çàêëþ÷èòü, ÷òî ôîñôîãëèâ ýôôåêòèâíåå, ÷åì ýññåíöèàëå ïðåäîòâðàùàåò äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ è îáðàçîâàíèå íåêðîçîâ, à òàêæå óñèëèâàåò ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â êëåòêàõ. 9.3. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ôîñôîãëèâà â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4. Èññëåäîâàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ôîñôîãëèâà â ýêñïåðèìåíòàõ ñ èíäóöèðîâàííûì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì áûëè ïðîâåäåíû íà äâóõ ãðóïïàõ æèâîòíûõ: (1) ñ òîêñè÷åñêèì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì, âûçâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl4 â òå÷åíèå 2-õ íåäåëü; (2) ñ òîêñè÷åñêèì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà, âûçâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl4 â òå÷åíèå 6 íåäåëü [17].  ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñ ñàìöîâ âåñîì 120 - 150ã, êîòîðûì ââîäèëè ÑÑl4 äâà ðàçà â íåäåëþ âíóòðèáðþøèííî â äîçå 0,1 ìë/100ã. Ðàçâèòèå õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ó æèâîòíûõ ïîäòâåðæäàëè ãèñòîëîãè÷åñêèìè è ãèñòîõèìè÷åñêèìè àíàëèçàìè. Ëå÷åíèå æèâîòíûõ ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå ïðîâîäèëè, íà÷èíàÿ ñ ïåðâîãî äíÿ ââåäåíèÿ ÿäà òàêæå ïî äâóì ñõåìàì: (1) â òå÷åíèå 2-õ íåäåëü; (2) â òå÷åíèå 6 íåäåëü. Ïðåïàðàòû ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî (20 ìã ÑÔÕ íà 100ã ìàññû òåëà) òðèæäû â íåäåëþ. Äëÿ õàðàêòåðèñòèêè âîññòàíîâëåíèÿ áåëîêñèíòåçèðóþùåé ôóíêöèè ïå÷åíè ïîä äåéñòâèåì ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ â ãåïàòîöèòàõ èññëåäîâàëè ñèíòåç ìÐÍÊ è áåëêà, îöåíèâàåìûå ïî âêëþ÷åíèþ â íèõ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû è [Ñ14]-ëåéöèíà ñîîòâåòñòâåííî [17, 18]. Ïðè îòðàâëåíèè êðûñ ÑÑl4 ïî ñõåìå 1 (â òå÷åíèè 2-õ íåäåëü) â ÿäðàõ êëåòîê ïå÷åíè çíà÷èòåëüíî âîçðàñòàëî êîëè÷åñòâî íîâîñèíòåçèðîâàííûõ áåëêîâ 10,3 ± 1,8 îòí.åä. (ïî âêëþ÷åíèþ [Ñ14]-ëåéöèíà), â êîíòðîëå - 4,8 ± 0,72 îòí.åä.; 1 îòíîñèòåëüíàÿ åäèíèöà = èìï/ìèí/ìã áåëêà õ 103. Ýòî ìîæåò ñëóæèòü ïðèçíàêîì ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ.  öèòîçîëå (40,8 ± 4,7 îòí.åä. ïðîòèâ 35,4 ± 3,3 îòí.åä. â êîíòðîëå) è â ìèòîõîíäðèÿõ (1,00 ± 0,09 îòí.åä. ïðîòèâ 1,22 ± 0,17 îòí.åä. â êîíòðîëå) ñóùåñòâåííûõ èçìåíåíèé â ñèíòåçå áåëêà íå íàáëþäàëîñü. Ëå÷åíèå êðûñ ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå â òå÷åíèå 2-õ íåäåëü íå îêàçûâàëî ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà ñèíòåç áåëêà âî ôðàêöèÿõ êëåòîê ïå÷åíè. Òàê, âêëþ÷åíèå [Ñ14]-ëåéöèíà â áåëêè öèòîçîëÿ ó ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì æèâîòíûõ ñîñòàâèëî 42,4 ± 6,5 îòí.åä., à ýññåíöèàëå 275 58,6 ± 4,5. Âêëþ÷åíèå â áåëêè ÿäåð êëåòîê ïå÷åíè ñîñòàâèëî ñîîòâåòñòâåííî 10,1 ± 1,7 îòí.åä. è 6,5 ± 1,9 îòí.åä. Äàííûå, ïîëó÷åííûå ïî âêëþ÷åíèþ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â ÐÍÊ ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ÷åðåç äâå íåäåëè ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïîêàçàëè, ÷òî óðîâåíü ñèíòåçà ñóììàðíîé ÐÍÊ â ÿäðàõ è ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé ÐÍÊ â öèòîïëàçìå êëåòîê ïå÷åíè íåëå÷åííûõ æèâîòíûõ ïîâûøàëèñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè (278,9 ± 21,5 îòí.åä ïî ñðàâíåíèþ ñ 143,9 ± 25,1 5 îòí.åä. â ÿäðàõ êëåòîê êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è 169,7 ± 17,9 îòí.åä. ïî ñðàâíåíèþ ñ 106,5 ± 20,8 â öèòîçîëå êëåòîê êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ; 1 îòí.åä. = èìï/ìèí/ìã ÐÍÊ õ 103). Ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â êëåòêàõ ïå÷åíè êðûñ íå îòëè÷àëñÿ îò ñèíòåçà ìÐÍÊ â ïå÷åíè îòðàâëåííûõ, íî íåëå÷åííûõ æèâîòíûõ. Òàê, íàïðèìåð, óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â êëåòêàõ ïå÷åíè êðûñ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì, â öèòîçîëå ñîñòàâèë 166,9 ± 12,1 îòí.åä., à ýññåíöèàëå - 179,8 ± 20,4 îòí.åä. Òàêèì îáðàçîì, ÷åðåç äâå íåäåëè ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4, óðîâåíü ñèíòåçà ÐÍÊ â ÿäðàõ è ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé ÐÍÊ â öèòîïëàçìå êëåòîê ïå÷åíè íå ëå÷åíûõ êðûñ ïîâûøàëèñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè. Ýòî, òàê æå, êàê è èçìåíåííûé ñèíòåç áåëêà, îòðàæàåò ðåàêöèþ ïå÷åíè íà ïðîèñõîäÿùèå â íåé íåêðîòè÷åñêèå ïðîöåññû. Ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â êëåòêàõ ïå÷åíè êðûñ íå îòëè÷àëñÿ îò ñèíòåçà ìÐÍÊ â ïå÷åíè îòðàâëåííûõ, íî íåëå÷åííûõ êðûñ. Íà îñíîâàíèè ïðèâåäåííûõ äàííûõ ìîæíî çàêëþ÷èòü, ÷òî ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì èëè ýññåíöèàëå â òå÷åíèå ïåðâûõ 14 äíåé (èëè 2-õ íåäåëü), êîòîðîå ïðîâîäèëè ïàðàëëåëüíî ñ ââåäåíèåì êðûñàì ÑÑl4, íå îêàçûâàëî êàêîãî-ëèáî âëèÿíèÿ íà ïîâûøåííûé âñëåäñòâèå ïðîòåêàþùèõ ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ, óðîâåíü ñèíòåçà áåëêà è ìÐÍÊ â ãåïàòîöèòàõ. Äàííûå ãèñòîëîãè÷åñêîãî è ãèñòîõèìè÷åñêîãî àíàëèçà ïå÷åíè êðûñ ïðè îòðàâëåíèè ÑÑl4, ïîêàçàëè, ÷òî óæå ê 14-îìó äíþ â êëåòêàõ ðàçâèâàþòñÿ äèñòðîôè÷åñêèå è íåêðîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ è, â îòâåò íà íèõ, - âîñïàëèòåëüíàÿ èíôèëüòðàöèÿ, ïðîëèôåðàöèÿ ôèáðîáëàñòîâ, ïðèâîäÿùàÿ ê ðàçâèòèþ ãðàíóëÿöèîííîé òêàíè. Çà ýòîò ïåðèîä íà÷èíàåòñÿ ôèáðîòè÷åñêèé ïðîöåññ, ïðîèñõîäèò ôîðìèðîâàíèå êîëëàãåíîâûõ âîëîêîí, îáðàçîâàíèå ïðîñëîåê, ñîñòîÿùèõ èç ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè. Çàìåòíîé ïåðåñòðîéêè òêàíè ïå÷åíè çà 14 äíåé íå îòìå÷åíî [18]. Îäíàêî, óâåëè÷åíèå ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà è ÷èñëà äâóÿäåðíûõ è ïîëèïëîèäíûõ êëåòîê óêàçûâàþò íà íà÷àëî ðåãåíåðàöèîííûõ ïðîöåññîâ â ïå÷åíè. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå çà ýòîò ïåðèîä (14 äíåé) íå 276 ïðèâîäèò ê çàìåòíîìó îñëàáëåíèþ ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà. Ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ â ïå÷åíè æèâîòíûõ ýòèõ ãðóïï ìàëî îòëè÷àþòñÿ îò êðûñ, íå ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàòû. Ñëåäóþùèì ýòàïîì áûëî èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ ïðè 45-äíåâíîì (6-òè íåäåëüíîì) ëå÷åíèè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà (ñõåìà 2) [17]. Ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ââîäèëè ñ ñàìîãî íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà (ñî 2-ãî äíÿ îòðàâëåíèÿ æèâîòíûõ ÑÑl4). Èìåííî â òàêèõ ýêñïåðèìåíòàõ áûëî ïðîäåìîíñòðèðîâàíî â ñâîå âðåìÿ çàùèòíîå äåéñòâèå ýññåíöèàëå íà ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ è ïðåäîòâðàùåíèå ðàçâèòèÿ ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â òêàíÿõ ïå÷åíè [19, 20].  òàáëèöå 9.3.1 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñèíòåçà áåëêà â ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèÿõ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ïðè äëèòåëüíîì îòðàâëåíèè ÑÑl4 ñ îäíîâðåìåííûì ââåäåíèåì ôîñôîãëèâà èëè ýññåíöèàëå (ïî ñõåìå 2). Òàáëèöà 9.3.1. Âêëþ÷åíèå [Ñ14]-ë ëåéöèíà â áåëêè ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà ïîñëå ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå â òå÷åíèå 45 äíåé. Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-ëåéöèíà (èìï/ìèí/ìã áåëêà) õ 10 3 ßäðà Ìèòîõîíäðèè Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà Öèòîçîëü Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà 72,3 ± 1,75 12,2 ± 0,55 2,83 ± 0,26 Ãðóïïà ñ õðîíè÷åñêèì 20,3 ± 1,74* 3,0 ± 0,35* 1,02 ± 0,14* + ôîñôîãëèâ 69,47 ± 4,74* # 9,34 ± 1,7* # 3,07 ± 0,19* # + ýññåíöèàëå 59,28 ± 6,5* # 11,78 ± 1,2* # 3,07 ± 0,39* # ãåïàòèòîì Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå = 5. ÑÑl4 ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 0,1 ìë/100 ã 2 ðàçà â íåäåëþ â òå÷åíèå 45 äíåé. Ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ñ êîíöåíòðàöèåé 50 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî ïî 20 ìã/100 ã 3 ðàçà â íåäåëþ â òå÷åíèå âñåãî ýêñïåðèìåíòà. Ìå÷åííûå ïðåäøåñòâåííèê [Ñ14]-ëåéöèí ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 50 ìêKu/100 ã âåñà çà 10 ìèí. äî äåêàïèòàöèè æèâîòíûõ. Èç ãîìîãåíàòà ïå÷åíè ìåòîäîì äèôôåðåíöèàëüíîãî öåíòðèôóãèðîâàíèÿ ïîëó÷àëè ôðàêöèè öèòîçîëÿ, ÿäåð è ìèòîõîíäðèé. Îïðåäåëåíèå ðàäèîàêòèâíîñòè ïðîâîäèëè ïðè ïîìîùè æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rackbeta" [17, 18]. * - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ; ð<0,05. # - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê íåëå÷åííûì æèâîòíûì; ð<0,05. Êàê âèäíî èç òàáëèöû 9.3.1, ââåäåíèå êàê ôîñôîãëèâà, òàê è ýññåíöèàëå ïðåïÿòñòâóåò ñíèæåíèþ âêëþ÷åíèÿ [Ñ14]-ëåéöèíà â áåëêè ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëÿåìûõ ÑÑl4. Ðåçóëüòàòû âêëþ÷åíèÿ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â ÐÍÊ ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì 277 õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà ïðè ëå÷åíèè ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè â òå÷åíèå 45 äíåé ïðåäñòàâëåíû â òàáëèöå 9.3.2. Òàáëèöà 9.3.2. Âëèÿíèå 45-ä äíåâíîãî ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå íà âêëþ÷åíèå [Ñ14]îðîòîâîé êèñëîòû â ÐÍÊ ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà. Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-î îðîòîâîé êèñëîòû Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà (èìï/ìèí/ìã ÐÍÊ) Öèòîçîëü ßäðà õ 10 3 Ìèòîõîíäðèè Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà 63,6 ± 3,06 40,2 ± 4,7 4,83 ± 0,51 Ãðóïïà ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì + ôîñôîãëèâ 32,15 ± 4,14* 47,2 ± 4,97* 3,83 ± 0,57* 60,5 ± 6,22* # 33,8 ± 4,38* # 6,03 ± 0,91* # + ýññåíöèàëå 100,1 ± 11,8* # 40,2 ± 3,11* # 3,19 ± 0,21* # Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå 5. Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑl4 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáëèöå 9.3.1. [Ñ14]-îðîòîâóþ êèñëîòó ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî â äîçå 50 ìêKu/100 ã âåñà çà 60 ìèí. äî äåêàïèòàöèè æèâîòíûõ. Äàëåå ãîìîãåíàòû ïå÷åíè îáðàáàòûâàëè êàê óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáë. 9.3.1. * - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ; ð<0,05. # - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê íåëå÷åííûì æèâîòíûì; ð<0,05. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ ðåçóëüòàòîâ, ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ïîëíîñòüþ âîññòàíàâëèâàëè áèîñèíòåç ÐÍÊ â öèòîçîëå, ñíèæåííûé ïîä äåéñòâèåì ÑÑl 4. Ãèñòîëîãè÷åñêèå è ãèñòîõèìè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ÷åðåç 45 äíåé ââåäåíèÿ ÑÑl 4, ïî ìåðå çàìåùåíèÿ î÷àãîâ íåêðîçà ñîåäèíèòåëüíîé òêàíüþ è ñîçðåâàíèÿ ãðàíóëÿöèîííîé òêàíè, ïðîöåññ ôèáðîçîîáðàçîâàíèÿ óñèëèâàëñÿ, îòìå÷åíî îáðàçîâàíèå ëîæíûõ äîëåê, ôîðìèðóåìûõ ñîåäèíèòåëüíîòêàííûìè ñåïòàìè, ðàçâèâàëàñü êàðòèíà êëàññè÷åññêîãî öèððîçà. Ââåäåíèå êðûñàì ôîñôîãëèâà íà ôîíå äëèòåëüíîãî îòðàâëåíèÿ ÑÑl 4 ïðåïÿòñòâîâàëî ðàçâèòèþ ìîðôîëîãè÷åñêèõ äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé òêàíè ïå÷åíè (òàáë. 9.3.3). Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 9.3.3, ââåäåíèå ýññåíöèàëå ìàëî âëèÿëî íà ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ â òêàíÿõ ïå÷åíè; îíè îñòàëèñü, ïðàêòè÷åñêè, íà òîì æå óðîâíå, ÷òî è ó æèâîòíûõ, íå ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò. Ââåäåíèå ôîñôîãëèâà, íàïðîòèâ, ñäåðæèâàëî äèôôóçíîå ðàçðàñòàíèå ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè è öèððîòè÷åñêóþ ïåðåñòðîéêó îðãàíà. Îòìå÷åíî ñóùåñòâåííîå îñëàáëåíèå äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé, ôèáðîçà, ðàçâèòèÿ ëîæíûõ äîëåê, 278 Òàáëèöà 9.3.3. Ìîðôîëîãè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè è ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ ïå÷åíè êðûñ ïîëó÷àâøèõ ÑÑl4 è ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû â òå÷åíèå 45 äíåé. Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà Êîíòðîëüíûå æèâîòíûå Õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò + ôîñôîãëèâ + ýññåíöèàëå Äèñò ðîôè - Èíòåíñèâ - Ôèáðîç íîñòü ÷åñêèå èçìåíå íåêðîçà í èÿ Ëîæíûå äîëüêè Ôèáðî áëàñòè ÷åñêàÿ ðåàêöèÿ Ðàçâèòèå ãðàíóëÿ öèîííîé òêàíè Âîñïàëè òåëüíàÿ ðåàêöèÿ 0,33 0 0 0 0 0 0 2,3 0,33 2,3 3,0 2,3 1,0 2,3 1,3 2,3 0 0 1,0 2,3 1,0 2,3 1,0 1,7 0 0 1,0 2,0 Ìèòîçû (%) 0,13 ± 0,04 0,3 ± 0,07 0,33 ± 0,03 0,47 ± 0,07 Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå 5. Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà - êàê óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáëèöå 9.3.1. Ñîñòîÿíèå òêàíè ïå÷åíè îöåíèâàëè ãèñòîõèìè÷åñêè ïî èíòåíñèâíîñòè íåêðîçà, ìàêðîôàãàëüíîé è ôèáðîáëàñòè÷åñêîé ðåàêöèÿì, à òàêæå ïî ñóììàðíûì äèñòðîôè÷åñêèì èçìåíåíèÿì, ðåãèñòðèðóåìûì ïî ïðèíÿòîé 5-áàëëüíîé øêàëå: Î - îòñóòñòâèå ïðèçíàêà; 1 íåçíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ; 2 - óìåðåííî âûðàæåííûé ïðèçíàê; 3 - âûðàæåííûé ïðèçíàê; 4 ñèëüíî âûðàæåííûé ïðèçíàê. âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè.  âåëè÷èíå ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé ìåæäó ãðóïïàìè æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ è íå ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íå âûÿâëåíî. Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå ôîñôîãëèâà â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè ñïîñîáñòâîâàëî ñíèæåíèþ ìîðôîëîãè÷åñêèõ íàðóøåíèé òêàíè ïå÷åíè íà èíäóöèðîâàííûõ ÑÑl 4 ìîäåëÿõ îñòðîãî è õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ó êðûñ. Îñëàáëåíèå íàðóøåíèé ïðîöåññîâ ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ ïîä âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà íàáëþäàëè íà ìîäåëÿõ îñòðîãî ãåïàòèòà [8], à òàêæå íà ìîäåëè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà ïðè åãî 6-íåäåëüíîì îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè íà ôîíå îòðàâëåíèÿ ÑÑl 4 [17, 18]. Ïðè ìåíüøåé ïðîäîëæèòåëüíîñòè ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì îí, íå âëèÿÿ íà áèîñèíòåòè÷åñêèå ïðîöåññû, òåì íå ìåíåå, ñíèæàë ðàçâèâàþùèåñÿ ïîä âëèÿíèåì òîêñèêàíòà ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ïå÷åíè. Íà îñíîâàíèè ñåðèè ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ ìîæíî ñäåëàòü ñëåäóþùèå âûâîäû: - ðåçóëüòàòû ãèñòîëîãè÷åñêîãî è ãèñòîõèìè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñîãëàñóþòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè áèîõèìè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé è ñâèäåòåëüñòâóþò î áåçóñëîâíîé ëå÷åáíîé ýôôåêòèâíîñòè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ; - ôîñôîãëèâ íå óñòóïàåò, à â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ îáëàäàåò áîëåå âûðàæåííûì ãåïàòîïðîòåêòîðíûì äåéñòâèåì, ÷åì ýññåíöèàëå. Îäíèì èç êðèòåðèåâ âîññòàíîâëåíèÿ íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ïå÷åíè ïîñëå åå òîêñè÷åñêîãî 279 ïîâðåæäåíèÿ ÿâëÿåòñÿ âîññòàíîâëåíèå ìàññû òåëà è îáåñïå÷åíèå íåîáõîäèìîé ñêîðîñòè åå íàðàñòàíèÿ. Ïðè àíàëèçå âëèÿíèÿ ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà èçìåíåíèå ìàññû òåëà êðûñ îòìå÷àëè åñòåñòâåííîå óâåëè÷åíèå ìàññû òåëà ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ íà ïðîòÿæåíèè âñåãî ýêñïåðèìåíòà. Ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl 4 ïðèðîñò ìàññû òåëà, íà÷èíàëñÿ òîëüêî ñ 15-ãî äíÿ îò íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà. Ïðè ëå÷åíèè ýññåíöèàëå êðûñû âåñèëè ìåíüøå èñõîäíûõ âåëè÷èí äî 20-ãî äíÿ ýêñïåðèìåíòà, è òîëüêî çàòåì èõ âåñ íà÷èíàë óâåëè÷èâàòüñÿ. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèëî ê ïðèðîñòó ìàññû òåëà, íà÷èíàÿ ñ 14 äíÿ, ïðè ýòîì ñêîðîñòü åå íàðàñòàíèÿ áûëà áëèçêà ê ñêîðîñòè óâåëè÷åíèÿ ìàññû òåëà êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ.  öåëîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ íà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ ñ ìîäåëÿìè ãåïàòèòîâ, èíäóöèðîâàííûõ ââåäåíèåì ÑÑl 4 , ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîãëèâ ñïîñîáåí âîññòàíàâëèâàòü êëåòêè ïå÷åíè ïîñëå îñòðîãî îòðàâëåíèÿ, à òàêæå çàùèùàòü èõ â óñëîâèÿ äëèòåëüíîãî ïîâðåæäåíèÿ, èìèòèðóþùåãî ìîäåëü õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà. Ïîäâîäÿ èòîãè ðåçóëüòàòîâ äîêëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ôîñôîãëèâà íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî: - ôîñôîãëèâ è åãî êîìïîíåíòû â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå íå îáëàäàþò öèòîòîêñè÷íîñòüþ (íå èíãèáèðóåò ðîñò êëåòîê â êóëüòóðå); - ôîñôîãëèâ, â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, íå ïîâðåæäàåò êëåòî÷íûå ñèñòåìû ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ; ó êðûñ ñ îñòðûì òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì, èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl 4, ôîñôîãëèâ ïðåäîòâðàùàåò äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ è óñèëèâàåò ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â ïå÷åíè, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïåðñïåêòèâíîñòè åãî ïðèìåíåíèÿ ïðè îñòðîì òîêñè÷åñêîì ãåïàòèòå â êà÷åñòâå ãåïàòîïðîòåêòîðà; - ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå è ïðè öèððîçå, âûçâàííîì xpîíè÷åñêîé èíòîêñèêàöèåé ÑÑl 4 , îáà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòà ñòèìóëèðóþò ïðîöåññû âîññòàíîâëåíèÿ ñèíòåçà áåëêà è ìÐÍÊ â ãåïàòîöèòàõ, îáåñïå÷èâàþò íå òîëüêî âîññòàíîâëåíèå ìàññû òåëà æèâîòíûõ, íî è íåîáõîäèìóþ ñêîðîñòü åå íàðàñòàíèÿ; ðåçóëüòàòû ãèñòîëîãè÷åñêîãî è ãèñòîõèìè÷åñêîãî àíàëèçà ñâèäåòåëüñòâóþò î ñïåöèôè÷åñêîé ãåïàòîïðîòåêòîðíîé è àíòèöèððîòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ. 280 9.4. Ðàñïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ ôîñôîãëèâà - ÃÊ è ÑÔÕ - â îðãàíèçìå. Êàê áûëî îòìå÷åíî (ñì. ãëàâû 6, 7), êîìïîíåíòû ôîñôîãëèâà, ÑÔÕ è ÃÊ, êàæäûé â îòäåëüíîñòè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé äàâíî èñïîëüçóåìûå â ìåäèöèíå ñîåäèíåíèÿ, ñ èçó÷åííîé ôàðìàêîêèíåòèêîé è ôàðìàêîäèíàìèêîé [2, 19, 21 - 23, 28]. Íî ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ åäèíñòâåííîé êîìïîçèöèåé, ãäå ýòè êîìïîíåíòû ïðèñóòñòâóþò âìåñòå. Ïîýòîìó áûëî èíòåðåñíî èññëåäîâàòü ôàðìàêîêèíåòèêó ýòèõ ñîåäèíåíèé â ñîñòàâå ïðåïàðàòà. Âïîëíå âîçìîæíî, ÷òî òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ ôîñôîãëèâà îêàæåò âëèÿíèå íà ôàðìàêîêèíåòèêó åãî êîìïîíåíòîâ. Èçó÷åíèå ðàñïðåäåëåíèÿ â îðãàíèçìå ÑÔÕ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé äîñòàòî÷íî òðóäíóþ çàäà÷ó èç-çà åãî ñõîäñòâà ñ ýíäîãåííûì ÔÕ, âûñîêîé ðàñïðîñòðàíåííîñòüþ â îðãàíèçìå è ò.ä. (ñì. ãëàâó 1). Îïðåäåëåíèå ÃÊ è åå ìåòàáîëèòîâ â áèîëîãè÷åñêèõ îáðàçöàõ ìåòîäîì ÂÝÆÕ íå ïðåäñòàâëÿåò îñîáûõ ñëîæíîñòåé. Åå ìåòàáîëèçì â îðãàíèçìå êðûñû ïðîèñõîäèò â ñðåäíåì çà 70 ÷àñîâ [24]. Ïîýòîìó î ðàñïðåäåëåíèè ôîñôîãëèâà ñóäèëè, èññëåäóÿ ñîäåðæàíèå ÃÊ è åå ìåòàáîëèòà ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (ÃÒ) â ñûâîðîòêå êðîâè è òêàíÿõ. Ôîñôîãëèâ ââîäèëè â õâîñòîâóþ âåíó â äîçå, ñîîòâåòñòâóþùåé 50 ìã/êã âåñà ÃÊ è 125ìã/êã ÑÔÕ. Îïðåäåëåíèå ÃÊ è ÃÒ â îáðàçöàõ ïðîâîäèëè ìåòîäîì ÂÝÆÕ (ðèñ. 9.4.1). Ïî äàííûì ðèñóíêà 9.4.1 êîíöåíòðàöèÿ ÃÊ â êðîâè è òêàíÿõ ðåçêî ñíèæàåòñÿ â òå÷åíèå ïåðâûõ 2-õ ÷àñîâ ïîñëå ââåäåíèÿ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ äàííûìè Tsai ñ ñîàâò. [25], ïîëó÷åííûìè ïðè âíóòðèâåííîì ââåäåíèè êðûñàì àíàëîãè÷íîãî êîëè÷åñòâà ñâîáîäíîé ÃÊ. Îäíàêî, åñëè ïðè ââåäåíèè ñâîáîäíîé ÃÊ ÷åðåç 1,5 ÷àñà îïðåäåëèòü åå ñîäåðæàíèå â ïëàçìå óæå íåâîçìîæíî èç-çà ïðåäåëüíî íèçêîé êîíöåíòðàöèè [23], òî ïðè ââåäåíèè ôîñôîãëèâà ìû íàáëþäàëè ïîñòåïåííîå ñíèæåíèå êîíöåíòðàöèè ÃÊ â êðîâè, à â êîíöåíòðàöèè 3 ìêã/ìë îíà îïðåäåëÿëàñü äàæå ÷åðåç 72 ÷àñà ïîñëå ââåäåíèÿ. Ñëåäîâàòåëüíî, âêëþ÷åíèå ÃÊ â ôîñôîëèïèäíûå íàíî÷àñòèöû ïðîëîíãèðóåò åå öèðêóëÿöèþ â êðîâè. Íåîæèäàííûì îêàçàëîñü áûñòðîå ïîÿâëåíèå â ñûâîðîòêå â äîñòàòî÷íî âûñîêîé êîíöåíòðàöèè åå ìåòàáîëèòà - ÃÒ, äàëüíåéøàÿ ýëèìèíàöèÿ êîòîðîé ïðîèñõîäèò ïàðàëëåëüíî ñ ÃÊ.  ëèòåðàòóðå ýòîò ôåíîìåí íå áûë îïèñàí. Èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò ïîÿâëåíèå ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû â êðîâè òîëüêî â ñëó÷àå ïåðîðàëüíîãî ââåäåíèÿ ÃÊ, êàê ðåçóëüòàò ãèäðîëèçà ïîñëåäíåé ôåðìåíòàìè èñêëþ÷èòåëüíî êèøå÷íîé ìèêðîôëîðû [26]. Ïîÿâëåíèå ÃÒ â êðîâè ðàññìàòðèâàþò êàê ðåçóëüòàò åå âòîðè÷íîãî âñàñûâàíèÿ ïîñëå ñåêðåöèè ÃÊ â æåë÷ü è ñâÿçûâàþò ñ åå âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî â ðàáîòå Takeda ñ ñîàâò. [27], èçó÷àâøèìè ðàñïðåäåëåíèå ÃÊ â îðãàíèçìå, ïðè ñðàâíåíèè ïåðîðàëüíîãî è âíóòðèâåííîãî åãî ââåäåíèÿ, òàêæå íàáëþäàëè 281 Ðèñ. 9.4.1. Äèíàìèêà èçìåíåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÃÊ è ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû â ñûâîðîòêå êðîâè, ïå÷åíè è ïî÷êàõ êðûñ ïîñëå â/âåííîãî ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà Ôîñôîãëèâ ââîäèëè êðûñàì â õâîñòîâóþ âåíó â êîëè÷åñòâå ñîîòâåòñòâóþùåì 50 ìã/êã âåñà ÃÊ èëè 125ìã/êã ÑÔÕ. ×åðåç óêàçàííûå íà ðèñóíêå ïðîìåæóòêè âðåìåíè æèâîòíûõ äåêàïèòèðîâàëè.  ñûâîðîòêå êðîâè è îáðàçöàõ òêàíåé ïå÷åíè è ïî÷åê îïðåäåëÿëè ñîäåðæàíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû (ÃÊ) è ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (ÃÒ) ìåòîäîì ÂÝÆÕ (êîëîíêà Ñ-18, ðåãèñòðàöèÿ ïðè 258 íì); äàíû ñðåäíèå ðåçóëüòàòû ïî òðåì èçìåðåíèÿì. ïîÿâëåíèå ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû â ñûâîðîòêå êðîâè ïðàêòè÷åñêè ñðàçó æå ïîñëå âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ ÃÊ. Ýòîò ôàêò àâòîðû îáúÿñíèëè "áèîòðàíñôîðìàöèåé ÃÊ â îðãàíèçìå", îáóñëîâëåííîé ãèäðîëèçîì â ïå÷åíè êðûñû ñ ïîìîùüþ β-ãëþêóðîíèäàçû äî ÃÒ 282 ÷åðåç ìîíîãëþêóðîíèä. Ïîñëåäíèé çàòåì ìåäëåííî ãèäðîëèçóåòñÿ äî ÃÒ.  ïðîâåäåííûõ íàìè ýêñïåðèìåíòàõ, ÷åðåç 30 ìèíóò ïîñëå ââåäåíèÿ 50 ìã/êã ÃÊ â ñîñòàâå ôîñôîãëèâà ñóùåñòâåííàÿ åå ÷àñòü (420 ìêã/ã) è ÷àñòü ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (115 ìêã/ã) áûëè îáíàðóæåíû â ïå÷åíè. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ÑÔÕ, ïðèñóòñòâóþùèé â ôîñôîãëèâå, âëèÿåò íà ìåòàáîëèçì ýòèõ ñîåäèíåíèé, óâåëè÷èâàÿ ïîñòóïëåíèå ÃÊ â ïå÷åíü. Íèçêèé óðîâåíü ÃÊ è ÃÒ â òå÷åíèå âñåãî ýêñïåðèìåíòà ñîõðàíÿëñÿ â ïî÷êàõ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ äàííûìè î íèçêîì âûâåäåíèè ýòèõ ñîåäèíåíèé ñ ìî÷îé ïðè â/â ââåäåíèè ÃÊ êðûñàì [24]. 9.5. Òîêñèêîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ôîñôîãëèâà. Ôîñôîãëèâ èññëåäîâàëè â ýêñïåðèìåíòàõ íà îñòðóþ è õðîíè÷åñêóþ òîêñè÷íîñòü, ìóòàãåííîñòü, êàíöåðîãåííîñòü è ýìáðèîòîêñè÷íîñòü. Ýêñïåðèìåíòû ïðîâîäèëèñü ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì òðåáîâàíèÿì ê ôàðìàöåâòè÷åñêèì ïðåïàðàòàì [29] â Ðîññèéñêîì êàðäèîëîãè÷åñêîì íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííîì êîìïëåêñå ÌÇ ÑÐ ÐÔ, â ëàáîðàòîðèè ëåêàðñòâåííîé òîêñèêîëîãèè ïîä ðóêîâîäñòâîì ïðîôåññîðà Å. Â. Àðçàìàñöåâà. Ïðè òîêñèêîëîãè÷åñêîì èçó÷åíèè ôîñôîãëèâà áûëî îòìå÷åíî, ÷òî ïðåïàðàò â äèàïàçîíå èñïûòàííûõ äîç 1400-35000 ìã/êã ïðè îäíîêðàòíîì âíóòðèæåëóäî÷íîì ââåäåíèè ìûøàì BALB/C è êðûñàì Wistar íå âûçûâàë âèäèìûõ ïðèçíàêîâ èíòîêñèêàöèè è ãèáåëè æèâîòíûõ. Ïðè ýòîì èñïûòàííûå äîçû ïðåïàðàòà â 14-350 ðàç ïðåâûøàëè ñðåäíåñóòî÷íóþ ëå÷åáíóþ äîçó, ðåêîìåíäîâàííóþ äëÿ ÷åëîâåêà. Ïîýòîìó ïðè äàííîì ñïîñîáå îäíîêðàòíîãî ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà ëàáîðàòîðíûì æèâîòíûì ñðåäíå-ñìåðòåëüíûå äîçû (LD50) íå óäàëîñü óñòàíîâèòü. Îòìå÷åíî îòñóòñòâèå õðîíè÷åñêîé òîêñè÷íîñòè ïðè âíóòðèâåííîì ââåäåíèè ñîáàêàì ïðåïàðàòà â äîçå 1000 ìã/êã. Ïðè ýòîì íàáëþäàëèñü ïîëîæèòåëüíûå ìåòàáîëè÷åñêèå ýôôåêòû ïîâûøåíèå ýêñêðåòîðíîé ôóíêöèè ïå÷åíè, ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ ïëàçìû êðîâè. Îòñóòñòâèå âëèÿíèÿ äëèòåëüíîãî ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà íà ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå âàæíåéøèõ îðãàíîâ è ñèñòåì ñîáàê ïîäòâåðæäåíî ðåçóëüòàòàìè ïàòîìîðôîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé, ïîêàçàâøèõ îòñóòñòâèå òîêñè÷åñêèõ ïîâðåæäåíèé âíóòðåííèõ îðãàíîâ, îáùèõ è ìåñòíûõ òîêñèêî-àëëåðãè÷åñêèõ ðåàêöèé. Îòñóòñòâèå ìóòàãåííîñòè è êàíöåðîãåííîñòè ïîêàçàíî ïðè âíóòðèïåðèòîíåàëüíîì ââåäåíèè ìûøàì: - íå îòìå÷åíî õðîìîñîìíûõ àáåððàöèé â êëåòêàõ êîñòíîãî ìîçãà 283 ïðè äîçå 1325 ìã/êã; - íå îáíàðóæåíû ìóòàöèè â øòàììàõ ñàëüìîíåëëû â ïðåäåëàõ 25 ìã íà ÷àøêó Ïåòðè (òåñò Ýéìñà); - íå îáíàðóæåíî ïîâðåæäåíèé ÄÍÊ ïðè "SOS-õðîìîòåñòå"; - â ïðåäåëàõ êîíöåíòðàöèé äî 450 ìã/êã íå îòìå÷åíî âëèÿíèÿ íà äîìèíàíòíûå ëåòàëüíûå ìóòàöèè â çàðîäûøåâûõ êëåòêàõ. Òåðàòîãåííîñòü è ýìáðèîòîêñè÷íîñòü îòñóòñòâîâàëè ïðè âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè ôîñôîãëèâà êðûñàì â äîçå 80 ìã/êã. Èññëåäîâàíèÿ àëëåðãè÷åñêèõ è èììóíîòîêñè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðåïàðàòà ïîêàçàëè, ÷òî àëëåðãè÷åñêèå ðåàêöèè îòñóòñòâîâàëè, íå óñòàíîâëåíà äåãðàíóëÿöèÿ æèðîâûõ êëåòîê. Ïðåïàðàò â äîçàõ, íå ïðåâûøàþùèõ 125 ìã/êã, íå âëèÿë íà ïåðâè÷íûå èììóííûå ðåàêöèè, íå âûçûâàë ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòü çàìåäëåííîãî òèïà. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïî âûðàæåííîìó ñïåöèôè÷åñêîìó ãåïàòîïðîòåêòîðíîìó äåéñòâèþ ôîñôîãëèâà ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ãåïàòèòàõ, à òàêæå ïî îòñóòñòâèþ òîêñè÷íîñòè è íåãàòèâíûõ âîçäåéñòâèé íà êëåòêè, ïîñëóæèëè îñíîâàíèåì äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðàçðåøåíèÿ Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî Ãîñóäàðñòâåííîãî êîìèòåòà ÐÔ íà åãî êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ (ïðîòîêîë ¹11 îò 4.07.96). ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 9. 1. Martin G.P., el-Hariri L.M., Marriott C. Bile salt- and lysophosphatidylcholine-induced membrane damage in human erythrocytes. J Pharm Pharmacol. 1992, 44, 646-650. 2. Oette K. On the administration of phosphatidylcholine - metabolic and pharmacokinetic aspects in human. In: 50th Anniversary of Phospholipid Research (EPL). Ed. Gundermann K.-J., Schumacher R., wbn-Verlag, Bingen/Rhein, 1990, 35-48. 3. Gross KJ., Pogo AO. Control of ribonucleic acid synthesis in eukaryotes. 2. The effect of protein synthesis on the activities of nuclear and total DNA-dependent RNA polymerase in yeast. Biochemistry. 1976, 15, 2070-2081. 4. Carpentier I., Coornaert B., Beyaert R. Function and regulation of tumor necrosis factor type 2. Curr Med Chem. 2004, 11, 2205-2212. 5. Trinchieri G. Regulation of tumor necrosis factor production by monocyte-macrophages and lymphocytes. Immunol Res. 1991, 10, 89103. 6. Medvedev A.T., Fuchs B.B., Rachmilevich A.L. A study of the action of immunosuppressive factors from tumour cells on lymphocytes and macrophages in vitro and on the graft-versus-host reaction in mice. Biomed Sci. 1990, 1, 261-266. 7. Weber L.W., Boll M., Stampfl A. Hepatotoxicity and mechanism 284 of action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model. Crit Rev Toxicol. 2003, 33, 105-136. 8. Èïàòîâà Î. Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò. È., Êíÿæåâ Â. À., Êàðóçèíà È. È., Áà÷ìàíîâà Ã. È., Ãóñåâà Ì. Ê., Àð÷àêîâ À. È. Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå äåéñòâèÿ ýññåíöèàëå è íîâîãî îòå÷åñòâåííîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîëèâ" íà ìîäåëè îñòðîãî ãåïàòèòà ó êðûñ. Âîïð ìåä õèìèè. 1998, 44, 544-550. 9. Ïîäîáåä Î.Â., Ôåäîðîâà Ë.Ì., ßêóøåâà È.Â., Àáàêóìîâà Î.Þ., Öâåòêîâà Ò.À., Êîâàëåâà Ã.Ã. Ãàâðèëü÷àê À.Â. Øåõòåð À.Á. Âëèÿíèå ôîñôàòèäèëõîëèíà íà ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â êëåòêàõ ïå÷åíè ïðè åå îñòðîì ïîðàæåíèè ÑÑ14. Âîïð ìåä õèìèè, 1995, 41, 13-16. 10. Weignand K., Muller M., Urban J., Schreiber G. Intact endoplasmic reticulum and albumin synthesis in rat liver cell suspensions. Exp Cell Res. 1971, 67, 27-32. 11. Tomasi A., Albano E., Banni S., Botti B., Corongiu F., Dessi M.A., Iannone A., Vannini V., Dianzani M.U. Free-radical metabolism of carbon tetrachloride in rat liver mitochondria. A study of the mechanism of activation. Biochem J. 1987, 246, 313-317. 12. Levy G.H., Brabek M.J. Binding of carbon tetrachloride metabolites to rat hepatic mitochondrial DNA. Toxicol Lett. 1984, 22, 229-234. 13. Sawyer D.E., van Houten B. Repair of DNA damage in mitochondria. Mutat Res. 1999, 434, 161-176. 14. Ãàçèåâ À.È., Ïîäëóòñêèé À.ß. Íèçêàÿ ýôôåêòèâíîñòü ñèñòåìû ðåïàðàöèè ÄÍÊ â ìèòîõîíäðèÿõ. Öèòîëîãèÿ. 2003, 45, 403-417. 15. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. - Ì., Ìåäèöèíà. Èçä. 2-å, 1993. 16. Øåðëîê Ø., Äóëè Äæ. Çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè è æåë÷íûõ ïóòåé. Ìîñêâà, ÃÝÎÒÀÐ Ìåäèöèíà, 1999. 17. Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Êíÿæåâ Â.À., Êàðóçèíà È.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Àð÷àêîâ À.È. Òîðìîæåíèå ñ ïîìîùüþ íîâîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà "Ôîñôîãëèâ" ðàçâèòèÿ õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ó êðûñ. Âîïð ìåä õèì. 1998, 44, 537-543. 18. Ïîäîáåä Î.Â., Ôåäîðîâà Ë.Ì., Àáàêóìîâà Î.Þ., ßêóøåâà È.Â., Öâåòêîâà Ò.À., Ãàâðèëü÷àê À.Â. Øåõòåð À.Á., Êàðÿêèí À.Â. Èññëåäîâàíèå ãåïàòîçàùèòíûõ ñâîéñòâ ïðåïàðàòà ôîñôîëèâ, ñîäåðæàùåãî ôîñôàòèäèëõîëèí èç ñåìÿí ïîäñîëíå÷íèêà è ãëèöèððèçèíîâóþ êèñëîòó, íà ìîäåëè öèððîçà ïå÷åíè êðûñ. Áþëë ýêñï áèîë ìåä. 1997, 124, 311-314. 19. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic. Szczecin, 1999. 20. Kuntz E. "Essentielle" Phospholipide in der hepatologie - 50 Jahre Åxperimentale und Klinische Erfahrung. Z Gastroenterol. 1991, 285 29, 7-13. 21. Zierenberg O. Intestinal absorption of polyenephosphatidylcholine in man. J Lipid Res. 1982, 23, 1136-1142. 22. van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A. et al. Review article: Glycyrrhizin as a Potential Treatment of Chronic Hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205. 23. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J., DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism Review. 2001, 33, 125-147. 24. Ichikawa T., Ishida S., Sakiya Y., Akada Y. High performance liquid chromatographic determination of Glycyrrhizin and Glycyrrhetinic acid in biological materials. Chem Pharm Bull. 1984, 32, 3734-3738. 25. Tsai T.H., Liao J.F., Shum A.Y., Chen C.F. Pharmacokinetics of Glycyrrhizin after intravenous administration to rats. J Pharm Sci. 1992, 81, 961-963. 26. Akao T. Localization of enzymes involved in metabolism of glycyrrhizin in contents of rat gastrointestinal tract. Biol Pharm Bull. 1997, 20, 122-126. 27. Takeda S., Ishthara K., Wakui Y., Amagaya S., Maruno M., Akao T., Kobashi. Bioavailability study of glycyrrhetic acid after oral administration of glycyrrhizin in rats; relevance to the intestinal bacterial hydrolysis. J Pharm Pharmacol. 1996, 48, 902-905. 28. Hîlzl J. Pharmacokinetic studies on phosphatidylcholine and phosphatidylinositol. In: Phosphatidylcholine - biochemical and clinical aspects of essential phospholipids. H.Peeters ed., Springer Press, Berlin - Heidelberg - New York, 1976, 66-79 29. Áåëîóñîâ Þ.Á., Ìîèñååâ Â.Ñ., Ëåïàõèí Â.Ê. Êëèíè÷åñêàÿ ôàðìàêîëîãèÿ è ôàðìàêîòåðàïèÿ. Ðóêîâîäñòâî äëÿ âðà÷åé., M., 1997. 286 ÃËÀÂÀ 10. ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ ÏÐÅÏÀÐÀÒÀ ÔÎÑÔÎÃËÈÂ. 10.1. Îáîñíîâàíèå êëèíè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ Êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ôîñôîãëèâà ïðîâîäèëèñü, â ïåðâóþ î÷åðåäü, íà áîëüíûõ ñ çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè, â îñíîâíîì ñ ðàçëè÷íûìè ôîðìàìè ãåïàòèòîâ, äëÿ ëå÷åíèÿ êîòîðûõ è ðàçðàáàòûâàëñÿ äàííûé ïðåïàðàò. Èçâåñòíî, ÷òî íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ñïîñîáîì ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ ÿâëÿåòñÿ òåðàïèÿ èíòåðôåðîíîì (ÈÔÍ). Îäíàêî îíà îêàçûâàåòñÿ ýôôåêòèâíîé òîëüêî ó 40-60% áîëüíûõ, à â ñëó÷àå ðàçâèòèÿ öèððîçà ýòà öèôðà îêàçûâàåòñÿ ìåíåå 20% [1, 2]. Ðÿä èññëåäîâàòåëåé îòìå÷àþò, ÷òî íåñìîòðÿ íà óëó÷øåíèå ñîñòîÿíèÿ, âñå æå ó áîëåå 50% [3] èëè 60% [4] áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ ñòàíäàðòíàÿ òåðàïèÿ èíòåðôåðîíîì èëè íå äàåò ðåçóëüòàòîâ, èëè íåâîçìîæíà èç-çà âûñîêîãî ðèñêà ðàçâèòèÿ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ.  äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [5, 6] óêàçûâàåòñÿ, ÷òî íà ÈÔÍ-òåðàïèþ âîîáùå îòâå÷àåò îêîëî 20% áîëüíûõ [5, 6]. Ïðè ðåçêîì ïîâûøåíèè äîçû èíòåðôåðîíà èõ êîëè÷åñòâî óâåëè÷èâàåòñÿ äî 30% [7], ïðè êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì - äî 35-37% [8-10] è ïî÷òè äî 55% ïðè èñïîëüçîâàíèè, òàê íàçûâàåìîãî, ïýãèëèðîâàííîãî (ÏÝÃ) èíòåðôåðîíà [6].  äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [11, 12] ïðèâîäèòñÿ áîëåå âûñîêèé ïðîöåíò áîëüíûõ, îòâå÷àþùèõ íà êîìáèíèðîâàííóþ òåðàïèþ ÏÝÃ-èíòåðôåðîíîì â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì. Îäíàêî âñå àâòîðû îáðàùàþò îñîáîå âíèìàíèå íà íåîáõîäèìîñòü ïðè ýòîì î÷åíü òùàòåëüíîãî èññëåäîâàíèÿ ðèñêà âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ [3, 6, 12]. Ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòà  ïîëîæèòåëüíûé ýôôåêò òåðàïèè èíòåðôåðîíîì îáíàðóæåí ó 33% áîëüíûõ, èç êîòîðûõ ó 13% íàáëþäàëàñü ïîâòîðíàÿ ðåàêòèâàöèÿ âèðóñà ïîñëå îêîí÷àíèÿ ëå÷åíèÿ [13]. Òàêèì îáðàçîì, óñòîé÷èâîñòü çíà÷èòåëüíîãî ÷èñëà áîëüíûõ ê òàêîìó âèäó ëå÷åíèÿ, íàðÿäó ñ ðèñêîì ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ åãî íîâûõ êîìáèíèðîâàííûõ ôîðì, îáóñëàâëèâàåò íåîáõîäèìîñòü ïîèñêà äðóãèõ, áîëåå ýôôåêòèâíûõ ñðåäñòâ äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ [14]. Ïðåïàðàòû íà îñíîâå ÃÊ ïðèîáðåòàþò â ïîñëåäíèå ãîäû âñå áîëüøóþ ïîïóëÿðíîñòü ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòîâ, è ñðåäè íèõ íåîìèíîôàãåí Ñ, ðàçðàáîòàííûé â ßïîíèè è ïðèìåíÿåìûé â êëèíèêå óæå áîëåå 30 ëåò [15, 16]. Îñîáóþ ýôôåêòèâíîñòü ýòîãî ïðåïàðàòà îòìå÷àþò ïðè ëå÷åíèè õðîíè÷åñêèõ ãåïàòèòîâ [14-23]. Ñ÷èòàþò, ÷òî òåðàïåâòè÷åñêóþ ýôôåêòèâíîñòü åãî ïðèìåíåíèÿ îáóñëàâëèâàþò ïðîòèâîâèðóñíûå è èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà ÃÊ, à òàêæå ñïîñîáíîñòü ê èíäóêöèè γ-èíòåðôåðîíà [24-26]. Îïðåäåëåííûé âêëàä â ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ âíîñÿò åå 287 àíòèîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà, à òàêæå ñïîñîáíîñòü ïîâûøàòü äåòîêñèöèðóþùóþ àêòèâíîñòü ïå÷åíè [27-29]. Îáëàäàÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûì äåéñòâèåì, ÃÊ ïîäàâëÿåò ðåïðîäóêöèþ âèðóñà â ïå÷åíè è äðóãèõ îðãàíàõ çà ñ÷åò ñòèìóëÿöèè ñèíòåçà èíòåðôåðîíà, ïîâûøåíèÿ ôàãîöèòîçà, óâåëè÷åíèÿ àêòèâíîñòè åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ è äð. (ñì. ãëàâó 7). Êàê áûëî ïîêàçàíî âûøå, ÑÔÕ îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ âîññòàíàâëèâàòü öåëîñòíîñòü êëåòî÷íûõ ìåìáðàí (ñì. ãëàâó 6). Èñïûòàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè ÑÔÕ, â òîì ÷èñëå è â ñîñòàâå ýññåíöèàëå, áûëè ïðîâåäåíû â îáùåé ñëîæíîñòè â áîëåå ÷åì 170 èññëåäîâàíèÿõ, âêëþ÷àÿ 18 äâîéíûõ "ñëåïûõ", íà íåñêîëüêèõ òûñÿ÷àõ ïàöèåíòîâ ñ ðàçëè÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè, òàêèìè, êàê îñòðûé è õðîíè÷åñêèé âèðóñíûå ãåïàòèòû, îæèðåíèå ïå÷åíè, àëêîãîëüíûå, òîêñè÷åñêèå è ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè, öèððîç è äð. [30 - 35]. Ðåçóëüòàòû ýòèõ èññëåäîâàíèé ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ÑÔÕ ñïîñîáñòâóåò: - íîðìàëèçàöèè ñóáúåêòèâíûõ ñèìïòîìîâ çàáîëåâàíèé, êëèíè÷åñêèõ ïðîÿâëåíèé è áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé; - óìåíüøåíèþ âîñïàëèòåëüíûõ ðåàêöèé, íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê, ñíèæåíèþ æèðîâûõ èíôèëüòðàöèé, êëåòî÷íîé äèñòðîôèè è ôèáðîãåíåçà; - óñêîðåíèþ ñåðîêîíâåðñèè HBsAg ïðè îñòðûõ âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ; - ñîêðàùåíèþ ñðîêîâ ãîñïèòàëèçàöèè. Ïîêàçàíî ýôôåêòèâíîå äåéñòâèå ÑÔÕ íà áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ [36]. Íåäàâíî óñòàíîâëåíî, ÷òî â ïîâðåæäåííîé àëêîãîëåì ïå÷åíè ÑÔÕ ïðåïÿòñòâóåò ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè öèòîõðîìà CYP2E1, âûçûâàþùåãî ãåíåðàöèþ àöåòàëüäåãèäà è ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, è ïîäàâëÿåò ôèáðîç [37]. ßâëÿÿñü îñíîâíûì ñòðóêòóðíûì êîìïîíåíòîì áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, ÑÔÕ âñòðàèâàåòñÿ â íèõ, âîññòàíàâëèâàÿ ñòðóêòóðó è ôóíêöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ, öåëîñòíîñòü êëåòîê è óáåðåãàåò èõ îò íåîáðàòèìûõ íåêðîòè÷åñêèõ ïîâðåæäåíèé. ÑÔÕ ñïîñîáñòâóåò íîðìàëèçàöèè áåëêîâîãî, ëèïèäíîãî è æèðîâîãî îáìåíîâ, âîññòàíàâëèâàåò äåòîêñèêàöèîííóþ ôóíêöèþ ïå÷åíè, èíãèáèðóåò ôîðìèðîâàíèå ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè â ïå÷åíè, ñíèæàåò ðèñê âîçíèêíîâåíèÿ ôèáðîçà è öèððîçà [32, 35]. Ðåçóëüòàòû äîêëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé è àíàëèç äàííûõ ëèòåðàòóðû î ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ÃÊ è ÑÔÕ ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ðàçðàáîòàííûé íîâûé îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò ôîñôîãëèâ, äîëæåí ñî÷åòàòü â ñåáå ýôôåêòû íåîìèíîôàãåíà Ñ, ýññåíöèàëå è èíòåðôåðîíîòåðàïèè ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòîâ, à òàêæå ðÿäà äðóãèõ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè, ñâÿçàííûõ ñ íàðóøåíèåì íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ýòîãî îðãàíà. 288 Ôîñôîãëèâ âûïóñêàåòñÿ â äâóõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðìàõ - êàïñóëû è ëèîôèëèçèðîâàííûé ïîðîøîê äëÿ âíóòðèâåííûõ èíúåêöèé. Ïðîâåäåííûå äîêëèíè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ, ïîêàçàâøèå ãåïàòîïðîòåêòîðíóþ àêòèâíîñòü ôîñôîãëèâà íà ìîäåëÿõ îñòðîãî è õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà, ïðîÿâëÿþùóþñÿ â ñòèìóëÿöèè ïðîöåññîâ âîññòàíîâëåíèÿ ñèíòåçà áåëêà è ìÐÍÊ â ïîâðåæäåííûõ êëåòêàõ ïå÷åíè è íîðìàëèçàöèè ìîðôîëîãèè ïå÷åíè (ñì. ãëàâó 9), ïîñëóæèëè îñíîâàíèåì äëÿ èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ïðåïàðàòà. Îò÷åòû î õîäå êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ôîðì ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðåäñòàâëåíû àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ïîêðîâñêèì Â.È., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ó÷àéêèíûì Â.Ô., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Õàèòîâûì Ð.Ì., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Èâàøêèíûì Â.Ò., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ñòîðîæàêîâûì Ã.È., ÷ëåí- êîðð. ÐÀÌÍ Î.À. Äóíàåâñêèì, ïðîôåññîðàìè Ëó÷øåâûì Â.È., ×åøèêîì Ñ.Ã., Àëüòøóëåðîì Â.Á., Ãàëüïåðèíûì Ý.È., Áóòîâûì Þ.Ñ., Ìàÿêîâîé Ñ.À. è äð. Âñå èññëåäîâàíèÿ âûïîëíåíû â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðîòîêîëîì êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé, ðàçðàáîòàííûì àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ó÷àéêèíûì Â.Ô. Ëå÷åíèå êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ôîðìàìè ôîñôîãëèâà áûëè ïðîâåäåíû íà áîëåå ÷åì 400 áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè è ñ ðàçëè÷íîé ñòåïåíüþ âûðàæåííîñòè ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè (òàáë.10.1.1). Òàáëèöà 10.1.1. Ãðóïïû áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ×èñëî áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ ×èñëî áîëüíûõ â êîíòðîëå Îñòðûé ãåïàòèò  (ÂÃÂ) èëè ÂÃ(Â+Ñ) 87 75 Õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò (ÕÃ) Ñ, Â, ÕÃ(Ñ + B) 126 73 Äèôôóçíûå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè (æèðîâîé, ëåêàðñòâåííûé, àëêîãîëüíûé è äèàáåòè÷åñêèé ãåïàòîçû, ãèïåðëèïèäåìèÿ è äð.) 82 32 Çàáîëåâàíèÿ êîæè, àññîöèèðîâàííûå ñ âòîðè÷íûìè äèñëèïèäåìèÿìè (ïñîðèàç, ýêçåìà, íåéðîäåðìèò è äð.) 35 40 Îíêîëîãè÷åñêèå áîëüíûå ñ âèðóñíûì ãåïàòèòîì  è òîêñè÷åñêèì ïîðàæåíèåì ïå÷åíè 31 10 Êàëüêóëåçíûé õîëåöèñòèò 32 6 Îñòðûé ãåïàòèò À ó äåòåé 12 14 Îñòðûé ãåïàòèò  ó äåòåé 15 13 Âñåãî 410 249 Çàáîëåâàíèÿ 289 10.2. Ïðèìåíåíèå êàïñóëüíîé ôîðìû ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ. Èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðè ëå÷åíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè ðàçëè÷íîé ýòèîëîãèè áûëè íà÷àòû â 1998 ãîäó ñ èñïûòàíèÿ êàïñóëüíîé ôîðìû [38-44].  ÷àñòíîñòè, 19 áîëüíûõ ñ îñòðûì âèðóñíûì ãåïàòèòîì  (Âà Â) ñî ñðåäíå-òÿæåëûìè ôîðìàìè çàáîëåâàíèÿ íà ôîíå áàçèñíîé òåðàïèè ïîëó÷àëè êàïñóëû ôîñôîãëèâ (ïî 2 êàïñ. 3 ðàçà â äåíü) â òå÷åíèå 30 äíåé. Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà, ñîñòîÿùàÿ èç 10 áîëüíûõ, ïîëó÷àëà òîëüêî áàçèñíóþ òåðàïèþ (ãëþêîíàò êàëüöèÿ, àñêîðóòèí, ìåçèì ôîðòå è ò.ä.). Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âêëþ÷åíèå êàïñóë ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ áîëüíûõ ñ îñòðûì âèðóñíûì ãåïàòèòîì â öåëîì óñêîðÿëî èñ÷åçíîâåíèÿ êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ èíòîêñèêàöèè (òîøíîòà, àíîðåêñèÿ è ò.ä.) è ïðèâîäèëî ê ñîêðàùåíèþ îáùåãî êîëè÷åñòâà "êîéêî-äíåé". Ôîñôîãëèâ óëó÷øàë è áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ñûâîðîòêè êðîâè, ÿâëÿþùèåñÿ îáû÷íî èíäèêàòîðàìè ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (òàáëèöà 10.2.1). Òàáëèöà 10.2.1. Äèíàìèêà èçìåíåíèé áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè, â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ Îàïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì [38] Ïîêàçàòåëü Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì Äî ëå÷åíèÿ Áàçèñíàÿ òåðàïèÿ Äî Ïîñëå ëå÷åíèÿ ëå÷åíèÿ Ïîñëå ëå÷åíèÿ ÀëÀÒ, åä/ë 1600 + 162 530 + 38* 1450 + 170 710 + 64 ÀñÀÒ, åä/ë 995 + 13 280 + 94 1522 + 163 296 + 40 Áèëèðóáèí (îáùèé) ìêìîëü/ë 118 + 3,9 44+ 2,1* 122 + 4,1 80 + 3,4 Îòëè÷èÿ ìåæäó ïîêàçàòåëÿìè â ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ êîìïëåêñíóþ òåðàïèþ ñ ôîñôîãëèâîì è áàçèñíóþ òåðàïèþ (* ð < 0,05); àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ (ÀëÀÒ, ÀñÀÒ) èçìåðÿëàñü â íìîëü/ñåê-1ë-1 . Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.2.1, àêòèâíîñòü ÀëÀÒ, èñõîäíî ïîâûøåííàÿ ïî÷òè íà ïîðÿäîê ïî ñðàâíåíèþ ñ íîðìîé, ñíèçèëàñü ïîñëå ëå÷åíèÿ â îáåèõ ãðóïïàõ áîëüíûõ. Îäíàêî ñíèæåíèå áûëî âûðàæåíî â áîëüøåé ñòåïåíè ó áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ. Àêòèâíîñòü ÀñÀÒ ñíèçèëàñü â îáåèõ ãðóïïàõ îäèíàêîâî. Íàèáîëåå âûðàæåííûì îêàçàëîñü äåéñòâèå ôîñôîãëèâà íà óðîâåíü áèëèðóáèíà. Äëÿ áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû èñõîäíûé åãî óðîâåíü, ïðåâûøàâøèé â íåñêîëüêî ðàç íîðìàëüíûå âåëè÷èíû, ñíèçèâøèñü â 1,5 ðàçà, äàëåå íå ìåíÿëñÿ, à ó áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, ïðîäîëæàë ñíèæàòüñÿ; ê êîíöó ëå÷åíèÿ óðîâåíü áèëèðóáèíà ó ýòèõ áîëüíûõ áûë âäâîå íèæå, ÷åì ïðè èñïîëüçîâàíèè áàçèñíîé òåðàïèè [38]. 290 Ïîäîáíûé ýôôåêò íàáëþäàëè òàêæå ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ìèêñòãåïàòèòàìè Âà (Â+Ñ) è Âà À. Ïðåïàðàò îáëàäàë õîðîøåé ïåðåíîñèìîñòüþ, ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ íå íàáëþäàëîñü [38-40, 44].  öåëîì, ðåçóëüòàòû äàííîãî èññëåäîâàíèÿ ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ áîëüíûõ Âà Â, ÂÃ(Â+Ñ) è Âà À ñïîñîáñòâóåò áîëåå áûñòðîé íîðìàëèçàöèè áèîõèìè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ êðîâè è óëó÷øåíèþ êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ [38 - 40, 42].  äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèÿõ ôîñôîãëèâ (ïî 2 êàïñ. 3 ðàçà â äåíü) äàâàëè áîëüíûì ñ êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì (32 ïàöèåíòà) â òå÷åíèå 5 äíåé ïåðåä ïëàíîâîé îïåðàöèåé è 5 äíåé â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå. Ãðóïïà êîíòðîëÿ (10 ïàöèåíòîâ) ïîëó÷àëà ñòàöèîíàðíîå ëå÷åíèå.  ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò, íîðìàëèçàöèÿ áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè ïîñëå îïåðàöèè íàñòóïàëà áûñòðåå, ÷åì ïðè îáû÷íîé (áåç ôîñôîãëèâà) òåðàïèè. Òàê, âîçðîñøàÿ ïîñëå îïåðàöèè êîíöåíòðàöèÿ áèëèðóáèíà ñíèæàëàñü ïîä âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà äî èñõîäíîãî óðîâíÿ. Ó áîëüíûõ îáåèõ ãðóïï íàáëþäàëè ñóùåñòâåííîå âîçðàñòàíèå àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â êðîâè ñðàçó ïîñëå îïåðàöèè. Ýòà ãèïåðôåðìåíòåìèÿ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå ñîõðàíÿëîñü è â ïîñëåäóþùèå äíè.  òî æå âðåìÿ ó áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, àêòèâíîñòü àìèíîòðàíñôåðàç ñíèçèëàñü â 1,5 - 2 ðàçà (ð<0,05) ÷åðåç 5-6 äíåé ïîñëå îïåðàöèè [45]. Âñå ýòè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ îêàçûâàåò çàìåòíîå ãåïàòîïðîòåêòèâíîå äåéñòâèå â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó áîëüíûõ ñ êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì [44-46].  öåëîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ïðèåì êàïñóëüíîé ôîðìû ôîñôîãëèâà áîëüíûìè õðîíè÷åñêèì êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì ïðè îïåðàöèîííîì ñòàöèîíàðíîì ëå÷åíèè ìîæåò ñëóæèòü äîïîëíèòåëüíîé ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèåé, ñïîñîáñòâóþùåé âîññòàíîâëåíèþ ôóíêöèè ïå÷åíè ïîñëå îïåðàöèè.  êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Â.Ò.Èâàøêèíà (1998 ã.) ôîñôîãëèâ â êàïñóëàõ ïîëó÷àëè 17 áîëüíûõ (èç íèõ 9 - ñ æèðîâûì ãåïàòîçîì, 4 - ñ Õà  è 4 - ñ öèððîçîì ïå÷åíè). Ôîñôîãëèâ îêàçûâàë ïîëîæèòåëüíîå âëèÿíèå íà êëèíè÷åñêèå ñèìïòîìû, òàêèå, êàê àñòåíè÷åñêèé è äèñïåïñè÷åñêèé ñèíäðîìû, à òàêæå "ñèíäðîì ïðàâîãî ïîäðåáåðüÿ".  äèíàìèêå íàáëþäåíèÿ (÷åðåç 1,5 ìåñ.) îòìå÷åíî ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîå (ð<0,05) ñíèæåíèå ñðåäíåé êîíöåíòðàöèè õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ ó áîëüíûõ ñ ãåïàòîçîì - ñ 571±112,1 ìã% äî 432,5±112,1 ìã% (íîðìà 200-400 ìã%) [44].  êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ, ïðîôåññîðà Ã.È.Ñòîðîæàêîâà (1998ã.) êàïñóëüíóþ ôîðìó ôîñôîãëèâà ïîëó÷àëè 7 áîëüíûõ ñ àëêîãîëüíûì ïîðàæåíèåì ïå÷åíè è 6 ñ äèàáåòè÷åñêèì ãåïàòîçîì è ãèïåðëèïèäåìèåé. 291 Ëå÷åíèå ïðåïàðàòîì áûëî íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ó ïàöèåíòîâ ñ õðîíè÷åñêèìè àëêîãîëüíûìè ïîðàæåíèÿìè ïå÷åíè è ãåïàòîçîì, ÷òî âûðàæàëîñü â ðåãðåññèè ñèìïòîìîâ ïîëèíåéðîïàòèè, íîðìàëèçàöèè ëèïèäíîãî ñïåêòðà, óìåíüøåíèè äîçû ââîäèìîãî èíñóëèíà. Ýòè ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ ýôôåêòèâíûì ãåïàòîïðîòåêòîðîì äëÿ ïàòîãåíåòè÷åñêîãî ëå÷åíèÿ áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèìè äèôôóçíûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè [44]. Òàêèì îáðàçîì, â ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ôîñôîãëèâ êàïñóëüíîé ôîðìû ïðîÿâèë ñåáÿ êàê ýôôåêòèâíîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî äëÿ ëå÷åíèÿ íåêîòîðûõ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè (îñòðûé âèðóñíûé ãåïàòèò, æèðîâîé ãåïàòîç, êàëüêóëåçíûé õîëåöèñòèò è äð.) çà ñ÷åò ïîñòåïåííîãî íàêîïëåíèÿ ÑÔÕ â ìåìáðàíàõ ãåïàòîöèòîâ, ñîïðîâîæäàþùåãîñÿ èõ ðåïàðàöèåé è íîðìàëèçàöèåé ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê, ïàðàëëåëüíî ñ ïðîÿâëåíèåì òåðàïåâòè÷åñêîãî àíòèâèðóñíîãî ýôôåêòà ÃÊ [1, 14-16]. 10.3. Êëèíè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà. Èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà áûëè íà÷àòû â 2000 ãîäó è íà ïåðâîì ýòàïå ïðîâåäåíû ó 83 áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè è ñ ðàçëè÷íîé ñòåïåíüþ âûðàæåííîñòè ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè. Ãðóïïó êîíòðîëÿ, ñîïîñòàâèìóþ ïî ôîðìå è òÿæåñòè çàáîëåâàíèÿ, ñîñòàâèëè 80 ïàöèåíòîâ (òàáë.10.3.1). Òàáëèöà 10.3.1. Ãðóïïû áîëüíûõ, ó÷àñòâóþùèõ â èñïûòàíèè èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà (ýòàï 1). Çàáîëåâàíèÿ Êîëè÷åñòâî áîëüíûõ Áîëüíûå, ïîëó÷àâøèå ôîñôîãëèâ, âñåãî â òîì ÷èñëå: Âà  83 19 ÕÃ Ñ 22 Õà Â+Ñ Öèððîç 10 ïå÷åíè àëèìåíòàðíîé è âèðóñíîé 15 ýòèîëîãèè Ãåïàòèò àëèìåíòàðíîé ýòèîëîãèè 11 Íåàëêîãîëüíûé ñòåàòîãåïàòèò 2 Äðóãèå ôóíêöèîíàëüíûå íàðóøåíèÿ 4 Ãðóïïà êîíòðîëÿ 80 Äëÿ ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà ñîäåðæèìîå ôëàêîíà (2,5 ã ñóõîãî ëèîôèëèçèðîâàííîãî ïîðîøêà) ïåðåä óïîòðåáëåíèåì ðàñòâîðÿëè â 10 ìë âîäû äëÿ èíúåêöèé. Ïðåïàðàò ââîäèëè âíóòðèâåííî ïî 292 ñõåìå: 2,5 ã ôîñôîãëèâà (1 ôëàêîí) 2 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 10 äíåé. Ïîñëå îêîí÷àíèÿ êóðñà âíóòðèâåííûõ èíúåêöèé áîëüíûå ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ â êàïñóëàõ (ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü) â òå÷åíèå 20-30 äíåé ïðè îñòðîé ôîðìå çàáîëåâàíèÿ è 3 - 6 ìåñÿöåâ ïðè õðîíè÷åñêîé (ñõåìà ¹1). Áîëüíûå êîíòðîëüíîé ãðóïïû ïîëó÷àëè "áàçèñíóþ" òåðàïèþ. Âî âñåõ ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íàáëþäàëàñü ïîëîæèòåëüíàÿ äèíàìèêà êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ (ðèñ. 10.3.1). Ðèñ. 10.3.1. Ïðîäîëæèòåëüíîñòü êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ ó áîëüíûõ îñòðûì ãåïàòèòîì  è Â+Ñ ëå÷åíûõ ôîñôîãëèâîì (1) è â ãðóïïå êîíòðîëÿ (2) Ñíèæåíèå âûðàæåííîñòè êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ îòðàæàëîñü íà îáùåì ñîñòîÿíèè ïàöèåíòîâ, ó áîëüøèíñòâà èç êîòîðûõ ïîñëå ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì áûëî êîíñòàòèðîâàíî óëó÷øåíèå êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ (ðèñ. 10.3.2). Ðèñ. 10.3.2. Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà íà îáùåå ñîñòîÿíèå áîëüíûõ ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ (ãåïàòèò âèðóñíûé è àëèìåíòàðíûé, öèððîç âèðóñíûé è àëèìåíòàðíûé, ñòåòîãåïàòèò) [44] 293 Îäíèì èç ïðîÿâëåíèé ïîëîæèòåëüíîé äèíàìèêè ÿâèëîñü ñîêðàùåíèå ðàçìåðîâ ïå÷åíè. Èñõîäíî ïå÷åíü âûñòóïàëà èç ïîä êðàÿ ðåáåðíîé äóãè íà 2-8 ñì, à ó íåêîòîðûõ áîëüíûõ (ñ àëèìåíòàðíûì öèððîçîì) äàæå íà 11 ñì. Ïîñëå ëå÷åíèÿ ïå÷åíü ó áîëüøèíñòâà èç íèõ ñîêðàòèëàñü íà 1-2 ñì., ó íåêîòîðûõ èç íèõ ðàçìåðû ïå÷åíè ïîëíîñòüþ íîðìàëèçîâàëèñü. Õîðîøèé è óäîâëåòâîðèòåëüíûé ýôôåêò îò ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà ïî ñõåìå 1 ïðè Âà  îòìå÷àëñÿ â ñðåäíåì ó 94% áîëüíûõ, à ïðè ÕÃ Ñ - â 83% ñëó÷àåâ, ïðè ìèêñò-ãåïàòèòå - ó 78%. Ïîëîæèòåëüíûå ñäâèãè áûëè îòìå÷åíû è ïðè ñðàâíåíèè áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé - ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (òàáëèöà 10.3.2). Òàáëèöà 10.3.2. Èçìåíåíèå óðîâíÿ áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè â êðîâè áîëüíûõ ïðè ëå÷åíèè èíúåêöèîííîé ôîðìîé ôîñôîãëèâà (ñõåìà ¹1) [44]. Äî ëå÷åíèÿ Îà(n=19) Ïîñëå Äî ëå÷åíèÿ 24,3±3,4 ÕÃ Ñ (n=22) Ïîñëå % ñíèæ Õà Â+Ñ (n=10) Äî ëå÷åíèÿ Ïîñëå 18,3±2 24,6 105±30 39±14** 62,8* 38,2±12,4 40,7 97±18 54.6±11 43,7 Áèë. 105±28 39±5,6** % ñíèæ. 62,8** % ñíèæ ìêìîëü/ë 143±17 83±20 41,9 64,5±16 ÀëÀÒ 1425±397 211±33,2** 85,2** 556±232 96±24,9** 84.5** 943±150 236±152** 75,0** åä/ë 2495±238 931±212 62,6 1331±345 278±73 79,1 1587±273 773±196 51,3 ÀñÀÒ 875±431 95±19,3** 89,1** 159±61 43±7,6 73,0 343±49 85±50** 75,2** åä/ë 1475±125 533±195 63,9 631±187 88±22 86 888±206 458±113 48,4 ÃÃÒÏ 132±31 68,6±6** 53.2** 79±19 47±4** 40.5** 118±30 92±17 22,0 åä/ë 123±25 98±12 20,3 148±25 121±19 18,9 148±31 127±34 14,2 ÙÔ 347±56 243±32 30,0 177±21 125±11** 29.3** 224±27 165±17 26,3 åä/ë 337±35 247±33 26,7 292±47 254±30 13,0 424±76 299±37 29,5 Äëÿ êàæäîãî ïîêàçàòåëÿ âåðõíÿÿ ñòðîêà - áîëüíûå, ïîëó÷àâøèå ôîñôîãëèâ, íèæíÿÿ ñòðîêà - êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà ** ð< 0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé. Ñîêðàùåíèÿ: Áèë - îáùèé áèëèðóáèí, ÀëÀÒ - àëàíèí àìèíîòðàíñôåðàçà, ÀñÀÒ - àñïàðòàò àìèíîòðàíñôåðàçà, ÃÃÒÏ - ãàììàãëóòàìèí-òðàíñïåïòèäàçà, ÙÔ - ùåëî÷íàÿ ôîñôàòàçà Èç ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 10.3.2 äàííûõ âèäíî, ÷òî ó áîëüíûõ, ñ Âà Â, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ ïî ñõåìå 1, óðîâåíü îáùåãî áèëèðóáèíà áûë äîñòîâåðíî íèæå ïîñëå îêîí÷àíèÿ ëå÷åíèÿ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé - 39±5,6 è 83±20 ìêìîëü/ë ñîîòâåòñòâåííî. Âî âñåõ ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîñëå îêîí÷àíèÿ êóðñà ëå÷åíèÿ çàðåãèñòðèðîâàíû áîëåå íèçêèå çíà÷åíèÿ ÀëÀÒ ïî ñðàâíåíèþ ñ áîëüíûìè êîíòðîëüíûõ ãðóïï (òàê, â ñëó÷àå ÕÃ Ñ - 96± 24,9 è 278±73 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî). Ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòà  òàêæå äîñòîâåðíî íèæå áûëè ïîêàçàòåëè ÀñÀÒ (95±19,3 è 533±195 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî) è ÃÃÒÏ (68,6±6 è 98±12 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî), à ïðè ãåïàòèòå Ñ - óðîâíè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû (125±11 è 254±30 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî) è ÃÃÒÏ (47±4 è 121±19 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî). 294 Áîëåå òîãî, ó áîëüíûõ ñ Õà C, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, ñóùåñòâåííî ñíèæàëèñü àêòèâíîñòü ÃÃÒÏ (â ñðåäíåì íà 40,5%), à òàêæå àêòèâíîñòü ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû (íà 29,3%) ïî ñðàâíåíèþ ñ 18,9 % è 13% ñîîòâåòñòâåííî ó àíàëîãè÷íûõ áîëüíûõ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå. Äëÿ áîëüíûõ ñ ìèêñò-ãåïàòèòîì Â+Ñ ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèëî ê áîëåå ñóùåñòâåííîìó ñíèæåíèþ êîíöåíòðàöèè áèëèðóáèíà è àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ. Ôîñôîãëèâ ñíèæàë àêòèâíîñòü ÀëÀÒ è ÀñÀÒ íà 82-83% ïî ñðàâíåíèþ ñ 47 è 54% â êîíòðîëüíîé ãðóïïå, à òàêæå ñíèæàë áîëåå, ÷åì â ïîëòîðà ðàçà àêòèâíîñòü ÃÃÒÏ è ÙÔ, óðîâåíü êîòîðûõ ïðàêòè÷åñêè íå ìåíÿëñÿ ïðè áàçèñíîé òåðàïèè. Òàêèì îáðàçîì, òåðàïèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìîé ôîñôîãëèâà â òå÷åíèè 10 äíåé ñ ïîñëåäóþùèì ïðèåìîì êàïñóë â òå÷åíèå 30 äíåé áîëüíûõ îñòðîé è õðîíè÷åñêîé ôîðìîé âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ Â, Ñ, Â+Ñ, íîðìàëèçóåò áèîõèìè÷åñêèå ïàðàìåòðû ñûâîðîòêè êðîâè è ïðèâîäèò ê óëó÷øåíèþ îáùåãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ. Ïîëîæèòåëüíàÿ äèíàìèêà áûëà çàðåãèñòðèðîâàíà ó 77% áîëüíûõ ãåïàòèòîì Â, 74% áîëüíûõ ñ ÕÃÑ è ó 78% - ñ ìèêñò-ãåïàòèòàìè Â+Ñ.  öåëîì, áîëüíûõ, "îòâåòèâøèõ" íà ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì áûëî áîëüøå, ÷åì ïðè òåðàïèè èíòåðôåðîíîì [5 - 10]. Íè ó îäíîãî èç ïàöèåíòîâ ïðåïàðàò íå îòìåíÿëè èç-çà íåïåðåíîñèìîñòè, è òîëüêî ó îäíîãî áîëüíîãî íå áûëî ïîëó÷åíî ëå÷åáíîãî ýôôåêòà.  ýòèõ èññëåäîâàíèÿõ òàêæå ïðèíèìàëè ó÷àñòèå 7 ïàöèåíòîâ ñ öèððîçîì ïå÷åíè âèðóñíîé ýòèîëîãèè (â îñíîâíîì, ñ âèðóñîì ãåïàòèòà Ñ) â òÿæåëîé ôîðìå. Ó áîëüíûõ áûëè îòìå÷åíû èñõîäíî âûñîêèå çíà÷åíèÿ àêòèâíîñòè ÃÃÒÏ (â ñðåäíåì 832 åä/ë). Ïîñëå âíóòðèâåííîãî êóðñà ôîñôîãëèâà óðîâåíü ôåðìåíòà â êðîâè ñíèæàëñÿ â ñðåäíåì â äâà ðàçà.  òî æå âðåìÿ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ ó ýòèõ áîëüíûõ, ìàëî èçìåíÿþùèåñÿ âî âðåìÿ êóðñà èíúåêöèé, ñóùåñòâåííî ñíèçèëèñü ïîñëå ïîñëåäóþùåãî ïðèåìà êàïñóë ôîñôîãëèâ. Ïðè àëèìåíòàðíîì öèððîçå ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ýòèõ ôåðìåíòîâ ïðîÿâèëîñü óæå ïîñëå êóðñà âíóòðèâåííîãî ëå÷åíèÿ, òàê æå êàê àêòèâíîñòè ÃÃÒÏ è ÙÔ [2]. Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîãëèâ îêàçûâàåò òåðàïåâòè÷åñêîå äåéñòâèå íà áîëüíûõ öèððîçîì, íî, ïîâèäèìîìó, ó òàêèõ òÿæåëûõ ïàöèåíòîâ äëÿ ïðîÿâëåíèÿ áîëüøåé ýôôåêòèâíîñòè ïðåïàðàòà íåîáõîäèì áîëåå äëèòåëüíûé êóðñ ëå÷åíèÿ. Ó÷èòûâàÿ ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ÃÊ [15, 22], îäíîé èç çàäà÷ ïðîâîäèìîãî êëèíè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ áûëî èçó÷åíèå âèðåìèè è óðîâíåé ÄÍÊ èëè ÐÍÊ âèðóñîâ ãåïàòèòîâ  è Ñ, ðåãèñòðèðóåìûõ ñ ïîìîùüþ ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè (ÏÖÐ) (òàáëèöà 10.3.3). 295 Òàáëèöà 10.3.3 Ïîêàçàòåëè âèðóñíîé íàãðóçêè ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì Ïîêàçàòåëü Âèðåìèÿ HCV (Lg 10/ìë) Âèðåìèÿ HCV (Lg 10/ìë) ÐÍÊ HCV (â Lg òèòðîâ) ÄÍÊ HÂV (â Lg òèòðîâ) Çàáîëå âàíèå Ê-â âî áîëüíûõ Äî ëå÷åíèÿ Ïîñëå â/â êóðñà (10 äíåé) Ïîñëå ïåð îðàëüíîãî êóðñà (20 äíåé) Öèððîç ïå÷åíè 4 5,6 ± 0,2 4,6 ± 0,1* 3,1 ± 0,4** ÕÃ Ñ 5 5,1 ± 0,2* 3,4 ± 0,6** ÕÃ Ñ 14 2,5 ± 0,12 1,7 ± 0,15* 1,6 ± 0,13* Õà  18 2,5 ± 0,13 1.8 ± 0,12* 1,2 ± 0,11** 6,2 ± 0,4 * - p<0.05, ** - p<0.01 (ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè) Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.3.3, ó áîëüíûõ ñ öèððîçîì ïå÷åíè è ÕÃ Ñ â õîäå ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì íàáëþäàëîñü ïîñòåïåííîå óìåíüøåíèå âèðåìèè HCV. Òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèëà ê ñíèæåíèþ ÐÍÊ HCV. Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû ó áîëüíûõ ñ ãåïàòèòîì  äëÿ ÄÍÊ HÂV. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèò ê ïîäàâëåíèþ ðåïëèêàöèîííîé àêòèâíîñòè HÑV è HÂV, ïîâèäèìîìó, çà ñ÷åò âõîäÿùåé â ñîñòàâ ïðåïàðàòà ÃÊ [1, 28].  ñâÿçè ñ äàííûìè îá èììóíîìîäóëèðóþùåì è èíòåðôåðîíñòèìóëèðóþùåì äåéñòâèè ÃÊ [24, 26] ïðåäñòàâëÿëîñü öåëåñîîáðàçíûì èññëåäîâàòü ïîêàçàòåëè èììóíîëîãè÷åñêîãî è èíòåðôåðîíîâîãî ñòàòóñà ó áîëüíûõ, ïðîøåäøèõ êóðñ ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì. Ýòè èññëåäîâàíèÿ áûëè ïðîâåäåíû ñîâìåñòíî ñ Èíñòèòóòîì èììóíîëîãèè ÌÇ ÐÔ íà 7 áîëüíûõ ñ ÕÂà Ñ. Ó÷èòûâàÿ, ÷òî èñõîäíûé èììóíîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ ó áîëüíûõ ñèëüíî ðàçëè÷àëñÿ, ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû íîñÿò ïðåäâàðèòåëüíûé õàðàêòåð.  êðîâè áîëüíûõ îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî Òëèìôîöèòîâ (CD3) è êîëè÷åñòâî êëåòîê åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ (NK). Óðîâåíü ÈÔÍ-α è ÈÔÍ-γ îïðåäåëÿëè â ñóïåðíàòàíòå íåñòèìóëèðîâàííîé è ñòèìóëèðîâàííîé êóëüòóðû ëèìôîöèòîâ, ïîëó÷åííûõ èç êðîâè áîëüíûõ. Ïðè ýòîì â õîäå îïðåäåëåíèÿ ÈÔÍα èñïîëüçîâàëè ñòèìóëÿöèþ âèðóñîì ãåïàòèòà Ñ, à äëÿ ÈÔÍ-γ êëåòêè ñòèìóëèðîâàëè äîáàâëåíèåì ôèòîãåìàããëþòèíèíà. Êàê ïîêàçàëè èññëåäîâàíèÿ, òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì âûçûâàëà èçìåíåíèÿ èììóííîãî è èíòåðôåðîíîâîãî ñòàòóñà áîëüíûõ. Ó ýòèõ ïàöèåíòîâ îòìå÷åíî 2-3 êðàòíîå óâåëè÷åíèå îáùåãî êîëè÷åñòâà Ò-ëèìôîöèòîâ (CD3) è NK, ÷òî ÿâëÿåòñÿ ïðèçíàêîì óëó÷øåíèÿ ñèñòåìû 296 èììóíèòåòà, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, â ðåçóëüòàòå ïðîÿâëåíèÿ èììóíîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ ÃÊ [1, 25].  ñòèìóëèðîâàííîé êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ, ïîëó÷åííûõ îò ÷åòûðåõ áîëüíûõ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì, íàáëþäàëè óâåëè÷åíèå ñèíòåçà ÈÔÍ-α.  íå ñòèìóëèðîâàííîé êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ îòìå÷åíî óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÈÔÍ-γ. Ñòèìóëÿöèÿ ñ ïîìîùüþ ÃÊ ñèíòåçà ÈÔÍ-γ áûëà ïîêàçàíà íà ìûøàõ áîëåå 20 ëåò íàçàä [26], î âëèÿíèè åå íà ñèíòåç ÈÔÍ-α ñîîáùåíèé â ëèòåðàòóðå íåò. Ôàêò åãî àêòèâàöèè ìîã áû ïîñëóæèòü ñâÿçûâàþùèì çâåíîì ìåæäó èíòåðôåðîíîòåðàïèåé ãåïàòèòîâ (îáû÷íî èñïîëüçóþùåé ÈÔÍ-α) è èñïîëüçîâàíèåì ÃÊ â ñîñòàâå íåîìèíîôàãåíà Ñ [16] è ôîñôîãëèâà. Îäíàêî äëÿ îêîí÷àòåëüíûõ âûâîäîâ íåîáõîäèìî ïðîâåäåíèå òàêèõ èññëåäîâàíèé íà áîëüøåì ÷èñëå áîëüíûõ. Òàêèì îáðàçîì, â ïðîâåäåííûõ íà ïåðâîì ýòàïå êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ôîñôîãëèâ óëó÷øàåò áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè êðîâè è êëèíè÷åñêîå ñîñòîÿíèå áîëüíûõ, à òàêæå îáëàäàåò ïðîòèâîâèðóñíûì è èììóíîñòèìóëèðóþùèì ñâîéñòâàìè. Âíóòðèâåííàÿ ôîðìà ïðåïàðàòà õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ áîëüíûìè, íå äàåò ïîáî÷íûõ ðåàêöèé. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ òàêæå ïîêàçàëè, ÷òî ýôôåêòèâíîñòü ëå÷åíèÿ ïðè ïàðåíòåðàëüíîì è ïåðîðàëüíîì ïðèåìå ïðåïàðàòà çàìåòíî ðàçëè÷àëèñü (òàáë. 10.3.4). Òàáëèöà 10.3.4. Äèíàìèêà ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè ó ïàöèåíòîâ ïîñëå ïàðåíòåðàëüíîãî è ïåðîðàëüíîãî ïðèåìà ôîñôîãëèâà [49]. ÀëÀò (åä/ë) 110,1 ± 27,4 Ïîñëå â/â ââåäåíèÿ (14 äíåé) 30,1 ± 5,6* Óðîâåíü âèðóñíîé íàãðóçêè ( lg 10/ìë) 6,2 ± 1,3 3,4 ± 1,1* Ïîêàçàòåëü Äî ëå÷åíèÿ Ïîñëå 20 íåäåëü ïðèåìà êàïñóë 42,6 ± 17,3 5,1 ± 0,2 - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîêàçàòåëÿìè, ïîëó÷åííûìè äî ëå÷åíèÿ - óðîâåíü âèðóñíîé íàãðóçêè - êîëè÷åñòâåííîå ñîäåðæàíèå HCV ÐÍÊ â åä. lg 10/ìë. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ (òàáë. 10.3.4), ïîñëå 2-õ íåäåëüíîãî êóðñà â/â ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà ó âñåõ áîëüíûõ íîðìàëèçîâàëñÿ óðîâåíü ÀëÀÒ è ñíèæàëàñü âèðóñíàÿ íàãðóçêà. Îäíàêî ïîñëåäóþùèé ïðèåì êàïñóë ôîñôîãëèâà (20 íåäåëü) íå ñïîñîáñòâîâàë äàëüíåéøåìó ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ñîäåðæàíèÿ âèðóñà â êðîâè [47]. Î÷åâèäíî, äëÿ äàëüíåéøåãî 297 ïîâûøåíèÿ ýôôåêòèâíîñòè ëå÷åíèÿ íåîáõîäèìî óâåëè÷èòü äëèòåëüíîñòü êóðñà òåðàïèè êàê èíúåêöèîííîé ôîðìîé (íå ìåíåå 2-3 ìåñÿöåâ), òàê è ïîñëåäóþùåé êàïñóëüíîé ôîðìîé (íå ìåíåå 612 ìåñÿöåâ), ÷òîáû ïîëíîñòüþ íîðìàëèçîâàòü êàê áèîõèìè÷åñêèå, òàê è ñåðîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè êðîâè. 10.4. Ïðèìåíåíèå êîìáèíèðîâàííîãî (êàïñóëüíîãî è â/â) êóðñà ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì.  êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Ã.È.Ñòîðîæàêîâà áûëè ïðîâåäåíû ðàíäîìèçèðîâàííûå èññëåäîâàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè ôîñôîãëèâîì ïî ñõåìå áîëåå äëèòåëüíîãî ïðèåìà (ñõåìà 2), â ñðàâíåíèè ñî ñòàíäàðòíîé òåðàïèåé âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ (èíòåðôåðîí, ðèáàâèðèí). Áîëüíûå ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ ïàðåíòåðàëüíî ïî 2,5 ã (1 ôëàêîí) 2 ðàçà â íåäåëþ è ïàðàëëåëüíî ôîñôîãëèâ ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 48 íåäåëü.  èññëåäîâàíèå áûëî âêëþ÷åíî 79 ïàöèåíòîâ â âîçðàñòå îò 18 äî 57 ëåò. Îñíîâíûìè êðèòåðèÿìè îòáîðà ïàöèåíòîâ áûëè: íàëè÷èå Õà Ñ, ñ ïîçèòèâíûì ðåçóëüòàòîì íà HCV ÐÍÊ ïî äàííûì ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè (ÏÖÐ), ïîâûøåííàÿ àêòèâíîñòü ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â òå÷åíèå, êàê ìèíèìóì, ïðåäøåñòâóþùèõ 6 ìåñÿöåâ, ïîëîæèòåëüíûå äàííûå èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) íà íàëè÷èå ñóììàðíûõ àíòèòåë ê HCV. Ñ öåëüþ âåðèôèêàöèè äèàãíîçà õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ, îöåíêè íàëè÷èÿ êðèòåðèåâ âêëþ÷åíèÿ â èññëåäîâàíèå è îïðåäåëåíèÿ ñòåïåíè àêòèâíîñòè ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà âñå áîëüíûå (79 ÷åëîâåê) áûëè îáñëåäîâàíû ïî åäèíîé ñõåìå. Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ïàöèåíòîâ ïðèâåäåíà â òàáëèöå 10.4.1. Ïîñëå ïðîâåäåííîãî êëèíè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ âñå ïàöèåíòû áûëè ðàçäåëåíû íà 4 ãðóïïû ñîîòâåòñòâåííî 4 ñõåìàì òåðàïèè (òàáë. 10.4.2).  I ãðóïïó âîøëè 20 áîëüíûõ, ñðåäíèé âîçðàñò 35,4±12,1 ëåò, 14 ìóæ÷èí è 6 æåíùèí, êîòîðûå ïîëó÷àëè ìîíîòåðàïèþ ôîñôîãëèâîì. II ãðóïïó ñîñòàâèëè 19 ïàöèåíòîâ, èç íèõ 13 ìóæ÷èí è 6 æåíùèí, ñðåäíèé âîçðàñò 32,3±6,9 ëåò, ïîëó÷àâøèå ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì â ñî÷åòàíèè ñ ÈÔÍ-α.  III ãðóïïó âîøëî 20 áîëüíûõ, 16 ìóæ÷èí è 4 æåíùèíû, ñðåäíèé âîçðàñò 27,4±9,2 ëåò, êîòîðûì ïðîâîäèëàñü ìîíîòåðàïèÿ ÈÔÍ-α. IV ãðóïïà (ñòàíäàðòíàÿ òåðàïèè), ñîñòîÿùàÿ èç 20 ïàöèåíòîâ, 15 ìóæ÷èí è 5 æåíùèí (ñðåäíèé âîçðàñò 35,3±12,0 ëåò), 298 Òàáëèöà 10.4.1. Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ïàöèåíòîâ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ äî íà÷àëà ëå÷åíèÿ. Õàðàêòåðèñòèêà Ðåçóëüòàò Àñòåíè÷åñêèé ñèíäðîì 0,71±0,05 Ãåïàòîìåãàëèÿ 0,61±0,05 Äèñïåïòè÷åñêèé ñèíäðîì 0,58±0,05 Ñèíäðîì äèñêèíåçèè æåë÷åâûâîäÿùèõ ïóòåé 0,48±0,05 Íàëè÷èå àíòèòåë (à/ò) ê HCV (ñóììàðíûå) ÀëÀÒ, åä/ë îáíàðóæåíû ó âñåõ 132,5±10,6 Íàëè÷èå HCV ÐÍÊ ìåòîäîì ÏÖÐ (êà÷åñòâåííî) îáíàðóæåíà ó âñåõ q HCV RNA, lg/mcg 1à 5,23±0,3 10,1% (n=8) 1â 29,1% (n=23) 1à +1â 2,5% (n=2) 2à 13,9% (n=11) 1à+2à 2,5% (n=2) 3à 39,3% (n=31) 1à +3à 1,3% (n=1) 2à + 3à 1,3% (n=1) Ãåíîòèï Ìîðôîëîãè÷åñêèå äàííûå ïóíêöèîííîé áèîïñèè ïå÷åíè (â áàëëàõ): 1) Èíäåêñ ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè (ÈÃÀ) ïî èíäåêñó Knodell [48] 8,94±3,42 ïî øêàëå METAVIR [48] 1,58±0,63 2) Èíäåêñ ôèáðîçà (ÈÔ) ( METAVIR [48]) 1,61±0,98 (n=57) Ñòåïåíü æèðîâîé äèñòðî ôèè ãåïàòîöèòîâ 0,39±0,05 (n=47)  ñêîáêàõ ïîêàçàíî ÷èñëî áîëüíûõ, ó êîòîðûõ îáíàðóæåí èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü; îáùåå ÷èñëî îáñëåäîâàííûõ - 79 áîëüíûõ. ïîëó÷àëà ëå÷åíèå ÈÔÍ-α â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì (òàáë. 10.4.2). Îáùàÿ ïðîäîëæèòåëüíîñòü òåðàïèè âî âñåõ ãðóïïàõ - 48 íåäåëü. Ó âñåõ ïàöèåíòîâ ïðîâîäèëîñü íàáëþäåíèå êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ è îöåíêà ìàðêåðîâ HCV-èíôåêöèè íà 12-îé, 24-îé è 48-îé (ïî 299 Òàáëèöà 10.4.2. Ñõåìû òåðàïèè, èñïîëüçîâàííûå â èññëåäîâàíèè. Ãðóïïà Ñõåìà òåðàïèè (48 íåäåëü) I ãðóïïà (n=20) ôîñôîãëèâ ïî 2,5 ã â/â 2 ðàçà â íåäåëþ + ôîñôîãëèâ ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü II ãðóïïà (n=19) ôîñôîãëèâ ïî 2,5 ã â/â 2 ðàçà â íåäåëþ + ôîñôîãëèâ ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü + èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ïîäêîæíî (ï/ê) III ãðóïïà (n=20) èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ï/ê IV ãðóïïà (n=20) èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ï/ê + ðèáàâèðèí ïî 100 ìã â ñóòêè ïåðîðàëüíî Òàáëèöà 10.4.3. Äèíàìèêà èçìåíåíèé àêòèâíîñòè ÀëÀÒ (åä/ë) [49] Ïåðèîä ëå÷åíèÿ Äî ëå÷åíèÿ I ãðóïïà (ìîíîòåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì) 149,3 ± 26,0 II ãðóïïà (ôîñôîãëèâ + ÈÔÍ -α α) 144,7 ± 24,9 III ãðóïïà (ÈÔÍ -α α) 130,2 ± 17,5 IV ãðóïïà (ÈÔÍ -α α+ ðèáàâèðèí ) 106,0 ± 15,5 ×åðåç 12 íåäåëü 83,8 ± 16,8* 56,3 ± 14,1** 31,2 ± 3,3* 33,4 ± 3,58* ×åðåç 24 íåäåëè 40,5 ± 7,3* 27,2 ± 2,4* 30,4 ± 2,6* 34,7 ± 3,4* ×åðåç 48 íåäåëü 30,5 ± 1,7* 28,1 ± 1,8* 31,4 ± 4,1* 36,2 ± 6,3* Ïðèìå÷àíèå: * ð<0,01 è ** ð<0,05- â ñðàâíåíèè ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè â êàæäîé ãðóïïå. Òàáëèöà 10.4.4. Äèíàìèêà èçìåíåíèé ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà Ñ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ [49] q HCV RNA, lg10/mcg Äî ëå÷åíèÿ I ãðóïïà (ìîíîòåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì) 4,35 ± 0,46 II ãðóïïà (ôîñôîãëèâ + ÈÔÍ -α α) 4,71 ± 0,68 III ãðóïïà (ÈÔÍ -α α) 6,33 ± 0,57 IV ãðóïïà (ÈÔÍ -α α+ ðèáàâèðèí) 5,52 ± 0,51 ×åðåç 12 íåäåëü 3,89 ± 0,56 0,78 ± 0,33* 1,67 ± 0,52* 0,69 ± 0,23* ×åðåç 24 íåäåëè 1,64 ± 0,43* 0,72 ± 0,35* 1,94 ± 0,57* 0,98 ± 0,41* ×åðåç 48 íåäåëü 1,04 ± 0,25** 0,93 ± 0,35* 1,47 ± 0,35* 1,14 ± 0,61* * ð<0,01 è ** ð<0,05- â ñðàâíåíèè ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè â êàæäîé ãðóïïå. çàâåðøåíèþ êóðñà òåðàïèè) íåäåëÿõ. Äèíàìèêà èçìåíåíèÿ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè ó áîëüíûõ ÕÃ Ñ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ ïðèâåäåíà â òàáëèöàõ 10.4.3 è 10.4.4 ñîîòâåòñòâåííî. 300 Ïðè ñðàâíèòåëüíîì àíàëèçå ðåçóëüòàòîâ èññëåäîâàíèé áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî âñå ñõåìû ëå÷åíèÿ ïðèâîäèëè ê ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè â êðîâè áîëüíûõ. Ïðè÷åì, åñëè íà 12-é íåäåëå òåðàïèè ìåæäó 1 è òðåìÿ äðóãèìè ãðóïïàìè íàáëþäàëèñü ðàçëè÷èÿ, òî íà 24-é è 48-é íåäåëÿõ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé ìåæäó ãðóïïàìè íå âûÿâëåíî.  öåëîì, 48-íåäåëüíàÿ òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïî áèîõèìè÷åñêèì è âèðóñîëîãè÷åñêèì äàííûì ïðèâîäèò ê ðåçóëüòàòàì, ñðàâíèìûì ñ ìîíîòåðàïèåé ÈÔÍ-α. Ñóììàðíûå ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ ïî áîëüíûì âñåõ ÷åòûðåõ ãðóïï, âûðàæåííûå â âèäå ïðîöåíòà ïàöèåíòîâ, îòâåòèâøèõ íà òåðàïèþ, ïðèâåäåíû â òàáëèöå 10.4.5. Òàáëèöà 10.4.5. Ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ. Îòâåò íà òåðàïèþ I ãðóïïà (ìîíîòåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì) (n=20) II ãðóïïà (ôîñôîãëèâ + ÈÔÍ -α α) (n=19) III ãðóïïà (ÈÔÍ -α α) (n=20) IV ãðóïïà α+ (ÈÔÍ -α ðèáàâèðèí) (n=20) Ïîëíûé îòâåò 40% 57,9% 40% 75% ×àñòè÷íûé îòâåò* 55% 42,1% 35% 5% Íåò îòâåòà 5% 0% 25% 20% * - íîðìàëüíûé óðîâåíü ÀëÀÒ, íî ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà ïî äàííûì ÏÖÐ-àíàëèçà. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, îêîí÷àòåëüíûå ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì (I ãðóïïà) èëè ôîñôîãëèâîì â ñî÷åòàíèè ñ èíòåðôåðîíîì (II ãðóïïà) îêàçàëèñü çíà÷èòåëüíî ëó÷øå, ÷åì ìîíîòåðàïèÿ ïàðåíòåðàëüíîé ôîðìîé ÈÔÍ-α Îñîáåííî ïðèìå÷àòåëüíûì áûëî òî, ÷òî äîñòèæåíèå ïîëíîé èëè ÷àñòè÷íîé ðåìèññèè ó ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì áîëüíûõ íå ñîïðîâîæäàëîñü ïîáî÷íûìè ýôôåêòàìè, òîãäà êàê ïðè ìîíîòåðàïèè èíòåðôåðîíàìè ïðàêòè÷åñêè âñåãäà âîçíèêàëè ïîáî÷íûå ýôôåêòû, ÷òî â ðÿäå ñëó÷àåâ ïðèâîäèëî ê îòìåíå ëå÷åíèÿ [49] (òàáë. 10.4.6). Ó 2 ïàöèåíòîâ (10%) â ãðóïïå áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ìîíîòåðàïèþ ôîñôîãëèâîì â íà÷àëå ëå÷åíèÿ (2 è 4 íåäåëè) îòìå÷åíî ïîâûøåíèå àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ (ÀÄ) äî 160/105 ìì.ðò. ñò. â îäíîì ñëó÷àå è äî 155/98 ìì.ðò. ñò. - â äðóãîì. Ïîñëå íàçíà÷åíèÿ ñîîòâåòñòâóþùèõ àíòèãèïåðòåíçèâíûõ ïðåïàðàòîâ 301 Òàáëèöà 10.4.6. ×àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ðàçëè÷íûõ âàðèàíòîâ ýòèîïàòîãåíåòè÷åñêîé òåðàïèè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ, âêëþ÷àþùèõ ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà. Ïîáî÷íûé ýôôåêò I ãðóïïà (ìîíîòåðà ïèÿ ôîñôî ãëèâîì) (n=20) II ãðóïïà (ôîñôîãëèâ + ÈÔÍ-α α) (n=19) III ãðóïïà (ÈÔÍ-α α) (n=20) IV ãðóïïà α+ (ÈÔÍ-α ðèáàâèðèí) (n=20) Ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì - 68,4% 90% 95% Ëåéêîïåíèÿ - 31,6% 45% 80% Òðîìáîöèòîïåíèÿ - - 10% 25% Ñíèæåíèå ãåìîãëîáèíà è/èëè ýðèòðîöèòîâ - - - 35% Àðòåðèàëüíàÿ ãèïåðòåíçèÿ 10% - - 5% Êîæíûå ðåàêöèè - 5,3% 10% 10% Ïîâûøåíèå êîíúþãèðîâàííîãî áèëèðóáèíà - 5,3 - - Ñíèæåíèå ìàññû òåëà - 52,6% 35% 35% Áàêòåðèàëüíûé êîíúþêòèâèò - - 5% - ×àñòè÷íàÿ àëîïåöèÿ - - 15% 20% Òèðåîèäíàÿ äèñôóíêöèÿ - - 25% 15% Äåïðåññèÿ - - 30% 45% Îäûøêà - - - 20% Ôàðèíãèò - - - 20% Íîðìàëüíûé óðîâåíü ÀëÀÒ, íî ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà ïî ÏÖÐ àðòåðèàëüíîå äàâëåíèå ó íèõ íîðìàëèçîâàëîñü, ÷òî ïîçâîëèëî ïðîäîëæèòü òåðàïèþ áåç êîððåêöèè åå ðåæèìà. Ïîñëå çàâåðøåíèÿ êóðñà ëå÷åíèÿ è îòìåíû àíòèãèïåðòåíçèâíîé òåðàïèè ÀÄ îñòàâàëîñü â ïðåäåëàõ íîðìû. Òåðàïèÿ ÈÔÍ-α ñîïðîâîæäàëàñü òèïè÷íûìè ïîáî÷íûìè ÿâëåíèÿìè. Íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àëñÿ ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì (90%). Êðîìå òîãî, ó ïàöèåíòîâ II è III ãðóïï îòìå÷àëñÿ ðÿä ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé, ñâÿçàííûõ ñ èíòåðôåðîíîòåðàïèåé, òàêèõ êàê ëåéêîïåíèÿ, òðîìáîöèòîïåíèÿ, ñíèæåíèå ìàññû òåëà, áàêòåðèàëüíûé êîíúþíêòèâèò, ÷àñòè÷íàÿ àëîïåöèÿ, íàðóøåíèå ôóíêöèé ùèòîâèäíîé æåëåçû, äåïðåññèÿ. Äîáàâëåíèå ôîñôîãëèâà ê 302 ÈÔÍ-α íå ñîïðîâîæäàëîñü óñèëåíèåì ïîáî÷íûõ ÿâëåíèé. Ëåéêîïåíèÿ âñòðå÷àëàñü ðåæå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ III è IV ãðóïï (31,6%) è ó áîëüíûõ ýòîé ãðóïïû êîëè÷åñòâî íåéòðîôèëîâ íå ñíèæàëîñü äî êðèòè÷åñêèõ âåëè÷èí. Ïàöèåíòû IV ãðóïïû, ïîëó÷àâøèå ÈÔÍ-α è ðèáàâèðèí, íåñìîòðÿ íà âûñîêèé ïðîöåíò îòâåòà íà ëå÷åíèå (75%), ïëîõî ïåðåíîñèëè òåðàïèþ, è ó íèõ ðàçâèâàëîñü áîëüøîå ÷èñëî ïîáî÷íûõ ðåàêöèé, îñîáåííî ëåéêîïåíèÿ (äî 80%) è ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì (äî 95%) ïîâëåêøèõ çà ñîáîé îòìåíó ëå÷åíèÿ [44].  îòëè÷èå îò âûøåïðèâåäåííûõ äàííûõ, ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ïðàêòè÷åñêè íå ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ ïîáî÷íûõ ðåàêöèé (òàáë. 10.4.6).  ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ó áîëüíûõ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ âî âñåõ ãðóïïàõ áûë ïðîâåäåí àíàëèç ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, äàííûå ïî èçìåíåíèþ êîòîðûõ ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 10.4.7. Òàáëèöà 10.4.7. Äèíàìèêà ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé ó ïàöèåíòîâ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ [44] Ïîêàçàòåëü Ñòåïåíü ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè (ÑÃÀ) (METAVIR) Èíäåêñ ãèñòîëîãè÷åñ êîé àêòèâíîñòè (ÈÃÀ) (Knodell) Ñòåïåíü ôèáðîçà (ÑÔ) (METAVIR) Ñòåïåíü æèðîâîé äèñòðîôèè (CÆÄ) I ãðóïïà (ìîíîòåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì) (n=20) 1,54±0,24 0,54±0,14 II ãðóïïà (ôîñôîãëèâ + ÈÔÍ -α α) (n=19) 1,36±0,51 III ãðóïïà α) (ÈÔÍ -α (n=20) 1,56±0,11 IV ãðóïïà α+ (ÈÔÍ -α ðèáàâèðèí) (n=20) 1,8±0,18 0,73±0,14 0,94±0,06 0,53±0,13 8,46±1,39 7,73±0,9 9,0±0,45 10,47±0,87 1,54±0,43 2,82±0,85 3,5±0,43 1,53±0,45 1,0±0,25 2,0±0,36 0,94±0,22 0,93±0,18 0,62±0,21 1,46±0,43 0,88±0,23 0,6±0,13 0,31±0,05 0,31±0,09 0,13±0,05 0,2±0,06 0,14±0,04 0,16±0,05 0,09±0,03 0,1±0,04 Äëÿ êàæíîãî ïîêàçàòåëÿ âåðõíÿÿ ñòðîêà - çíà÷åíèÿ äî ëå÷åíèÿ, íèæíÿÿ - ïîñëå ëå÷åíèÿ. Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.4.7, íàèáîëåå âûðàæåííîå ñíèæåíèå ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé íàáëþäàëñÿ ó áîëüíûõ I è IV ãðóïï. Ó÷èòûâàÿ áîëüøóþ âûðàæåííîñòü ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ïðè èíòåðôåðîíîòåðàïèè (IV ãðóïïà), ëå÷åíèå áîëüíûõ I ãðóïïû (êîìáèíèðîâàííûé âíóòðèâåííûé è ïåðîðàëüíûé êóðñ ôîñôîãëèâà) ìîæíî ñ÷èòàòü áîëåå óñïåøíûì. Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ (îöåíêà ìàðêåðîâ HCV-èíôåêöèè 303 ïî çàâåðøåíèè êóðñà òåðàïèè è ìîðôîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè) ïîçâîëèëè ñäåëàòü âûâîäû î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ïîäàâëÿòü ðåïëèêàöèþ âèðóñà ãåïàòèòà Ñ è ñóùåñòâåííî ñíèæàòü àêòèâíîñòü ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà. Òåðàïèÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ôîñôîãëèâà õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ è íå âûçûâàåò îñëîæíåíèé [38 - 47, 50]. Ôîñôîãëèâ ìîæíî ñ÷èòàòü ïðåïàðàòîì âûáîðà ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ Õà Ñ, îñîáåííî ó ïàöèåíòîâ ñ âûñîêèì ðèñêîì ðàçâèòèÿ ñóùåñòâåííûõ ïîáî÷íûõ ÿâëåíèé ïðè òåðàïèè èíòåðôåðîíîì è ðèáàâèðèíîì, èëè â ãðóïïå ïàöèåíòîâ, ãäå òðàäèöèîííîå ïðîòèâîâèðóñíîå ëå÷åíèå ãåïàòèòà Ñ ïðîòèâîïîêàçàíî. 10.5. Ïåðñïåêòèâû ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà. Íàðÿäó ñ ïðîäåìîíñòðèðîâàííûì âûøå òåðàïåâòè÷åñêèì ýôôåêòîì ôîñôîãëèâà ó áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, ýòîò ïðåïàðàò áûë ýôôåêòèâåí è ïðè êóðñîâîì ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì. Èññëåäîâàíèÿ ïðîâåäåíû ñîâìåñòíî ñ Èíñòèòóòîì ðåâìàòîëîãèè ÌÇ ÐÔ [51, 52]. Áîëüíûå (32 ÷åëîâåêà) ñ ðàçëè÷íûìè êëèíè÷åñêèìè ôîðìàìè àêòèâíîãî ïñîðèàçà ïîëó÷àëè íà ôîíå áàçèñíîé òåðàïèè (ìåòîòðåêñàò èëè ñóëüôàëàçèí, ïëþñ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûå ïðåïàðàòû), ôîñôîãëèâ â êàïñóëüíîé ôîðìå â òå÷åíèå 3-õ ìåñÿöåâ ïî 6 êàïñóë â ñóòêè. Îöåíèâàëèñü âàæíûå äëÿ òàêèõ áîëüíûõ ãåìîäèíàìè÷åñèå ïîêàçàòåëè (âðåìÿ îáðàçîâàíèÿ àãðåãàòîâ ýðèòðîöèòîâ è èõ ãèäðîäèíàìè÷åñêàÿ ïðî÷íîñòü), à òàêæå îáùåå (ñóáúåêòèâíîå è îáúåêòèâíîå) ñîñòîÿíèå áîëüíûõ [53]. Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ áîëüíûõ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì ïðèâîäèò ê óëó÷øåíèþ ðåîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ êðîâè: óâåëè÷åíèþ âðåìåíè îáðàçîâàíèÿ àãðåãàòîâ ýðèòðîöèòîâ (îò 3,36 ± 0,16 ñåê. äî ëå÷åíèÿ äî 4,25 ± 0,42 ñåê. ïîñëå ëå÷åíèÿ) è ñíèæåíèþ â 2 ðàçà ïðî÷íîñòè ýòèõ àãðåãàòîâ. Êðîìå ýòîãî îòìå÷åíî óëó÷øåíèå ìèêðîöèðêóëÿöèè êðîâè è êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ. Ñ ó÷åòîì òîãî, ÷òî ïàòîãåíåç ïñîðèàòè÷åñêîãî àðòðèòà ÷àñòî ñîïðÿæåí ñ ïå÷åíî÷íîé íåäîñòîòî÷íîñòüþ, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ýôôåêò ôîñôîãëèâà ïðè ëå÷åíèè äàííûõ áîëüíûõ ñâÿçàí òàêæå ñ âîññòàíîâëåíèåì ôóíêöèé ïå÷åíè [30, 54, 55]. Ôîñôîãëèâ òàêæå ïðîÿâèë õîðîøóþ ýôôåêòèâíîñòü ïðè êóïèðîâàíèè àëêîãîëüíîãî àáñòèíåíòíîãî ñèíäðîìà, ñâÿçàííîãî, êàê ïîëàãàþò [37, 56], ñ ôóíêöèîíàëüíîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïå÷åíè â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ýòàíîëà íà ôîñôîëèïèäû ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ. Ïî äàííûì êëèíèêè ÍÈÈ íàðêîëîãèè (Â.Á.Àëüòøóëåð, 1998), íàçíà÷åíèå ôîñôîãëèâà ñïîñîáñòâîâàëî 304 áîëåå áûñòðîìó èñ÷åçíîâåíèþ âåãåòàòèâíûõ àáñòèíåíòíûõ ðàññòðîéñòâ (ãèïåðãèäðîç, òðåìîð), âîññòàíîâëåíèþ àïïåòèòà, èñ÷åçíîâåíèþ òîøíîòû è æàæäû; îáíàðóæåíà òåíäåíöèÿ ê íåêîòîðîìó îáùåñòèìóëèðóþùåìó ýôôåêòó. Ó ïàöèåíòîâ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, îòìå÷àëîñü çíà÷èìîå (ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé) ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî â îñíîâå òàêîãî äåéñòâèÿ ôîñôîãëèâà ïðè àáñòèíåíòíîì ñèíäðîìå ëåæèò âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû è ôóíêöèé ìåìáðàí êëåòîê ïå÷åíè, êîòîðîå ïðè îáû÷íîé òåðàïèè òàêèõ ïàöèåíòîâ íå ïðîèñõîäèò [44]. 10.6. Ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â ïåäèàòðèè.  íàñòîÿùåå âðåìÿ â ëèòåðàòóðå åñòü äàííûå ïî ëå÷åíèþ õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ (Õà Ñ) ó äåòåé ïðåïàðàòàìè ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåðôåðîíà â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì [5, 11, 57], àìàíòàäèíîì [3, 58], óðñîäåçîêñèõîëåâîé êèñëîòîé [59], ýññåíöèàëüíûìè ôîñôîëèïèäàìè [60] è äð. Ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ïðè êîìáèíèðîâàííîì ëå÷åíèè äîñòèãàåòñÿ äàæå â òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà ìîíîòåðàïèÿ ÈÍÔ-α îêàçûâàåòñÿ íåýôôåêòèâíîé [5, 6]. Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðåäñòàâëåííûå ðåçóëüòàòû êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè âåñüìà ïðîòèâîðå÷èâû [6, 12].  êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Â.Ô.Ó÷àéêèíà áûëè ïðîâåäåíû êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ôîñôîãëèâà êàïñóëüíîé ôîðìû â êîìáèíàöèè ñ îòå÷åñòâåííûì ðåêîìáèíàíòíûì ÈÍÔ-α â âèäå êîììåð÷åñêîãî ïðåïàðàòà âèôåðîí ó äåòåé ñ õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè Ñ è  [44]. Ïîä íàáëþäåíèåì íàõîäèëîñü 177 áîëüíûõ äåòåé â âîçðàñòå îò 6 ìåñ. äî 14 ëåò, áîëüíûõ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì, ïîäòâåðæäåííûì ó áîëüøèíñòâà äàííûìè ïóíêöèîííîé áèîïñèè ïå÷åíè.  ðåçóëüòàòå ñåðîëîãè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ áîëüíûõ ñ ïîìîùüþ òåñò-ñèñòåì íà âèðóñû ãåïàòèòîâ Â, Ä è Ñ íà îñíîâå ÈÔÀ è ÏÖÐ ó 70 äåòåé áûë óñòàíîâëåí Õà  è ó 107 - Õà Ñ. Âñå äåòè íàõîäèëèñü â ñòàäèè îáîñòðåíèÿ áîëåçíè.  ïðîöåññå êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîãî îáñëåäîâàíèÿ ó áîëüøèíñòâà áîëüíûõ îòìå÷àëèñü ðàçëè÷íîé ñòåïåíè âûðàæåííîñòè ñèìïòîìû èíòîêñèêàöèè è àñòåíî-âåãåòàòèâíûå ïðîÿâëåíèÿ; ó âñåõ áûëà ãåïàòîñïëåíîìåãàëèÿ è öèòîëèòè÷åñêèé ñèíäðîì â âèäå 5-10-êðàòíîãî ïîâûøåíèÿ àêòèâíîñòè àìèíîòðàíñôåðàç (ÀëÀÒ è ÀñÀÒ), îïðåäåëÿåìûõ åæåìåñÿ÷íî. Ïîêàçàíèåì ê íàçíà÷åíèþ êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè áûëî âûÿâëåíèå õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà  èëè Ñ, ñîïðîâîæäàþùèõñÿ äëèòåëüíûì è ñòàáèëüíûì (áîëåå ãîäà) ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ ñ îáíàðóæåíèåì ìàðêåðîâ àêòèâíîé ðåïëèêàöèè âèðóñîâ ãåïàòèòà  (ÄÍÊ HBV, HBeAg) è ãåïàòèòà Ñ (ÐÍÊ HCV). Êðèòåðèåì ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè 305 ñëóæèëè: (1) Áèîõèìè÷åñêèé ïîêàçàòåëü - àêòèâíîñòü ÀëÀÒ. Èññëåäîâàíèÿ âûïîëíÿëèñü åæåìåñÿ÷íî â õîäå ëå÷åíèÿ è â òå÷åíèå 6 ìåñ. ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè; çàòåì êàæäûå 6 ìåñ. íà ïðîòÿæåíèè 36 ìåñ. (2) Âèðóñîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè: - êà÷åñòâåííûé è êîëè÷åñòâåííûé àíàëèçû ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV. (3) Ãèñòîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè - îöåíêà èíäåêñà ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè. Ïî ðåçóëüòàòàì ýòèõ èññëåäîâàíèé îïðåäåëÿëè äèíàìèêó áîëåçíè: ðåìèññèÿ, íåïîëíàÿ ðåìèññèÿ, îòñóòñòâèå ðåìèññèè. Ýôôåêòèâíîñòü ïðîâîäèìîé òåðàïèè îöåíèâàëè ñòðîãî ïî ïðîãðàììå "EUROHEP" [61].  ïðîöåññå êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ðàçëè÷àëè: (1) Ïåðâè÷íóþ ðåìèññèþ - 2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèÿ óðîâíÿ ÀëÀÒ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ - áëèæå ê êîíöó, ñ èíòåðâàëîì íå ìåíåå 2 íåäåëü; èñ÷åçíîâåíèå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV ê êîíöó òåðàïèè; (2) Ñòàáèëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV â òå÷åíèå 6 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè; (3) Äëèòåëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV â òå÷åíèå 24 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè (4) Ïðåêðàùåíèå ðåìèññèè â õîäå ëå÷åíèÿ ("óñêîëüçàíèå") - â õîäå 6 ìåñÿ÷íîé òåðàïèè ïîñëå íîðìàëèçàöèè ÀëÀÒ, åå óðîâåíü âíîâü ïîâûøàëñÿ (2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ àíàëèçà ñ èíòåðâàëîì 2 íåäåëè), ïîâòîðíîå ïîÿâëåíèå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV â ëþáîé òî÷êå âðåìåíè ïîñëå åå èñ÷åçíîâåíèÿ (5) Îòñóòñòâèå ðåìèññèè - ëþáàÿ äðóãàÿ äèíàìèêà àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è íàëè÷èå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV ê îêîí÷àíèþ òåðàïèè. 37 áîëüíûõ (29 áîëüíûõ ñ ÕÃÑ è 8 - ñ ÕÃÂ) ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ â êàïñóëàõ â êîìáèíàöèè ñ ðåêîìáèíàíòíûì ÈÔÍ-α-2b - âèôåðîíîì â ñâå÷àõ, è 104 áîëüíûõ (70 áîëüíûõ ñ ÕÃ Ñ è 34 - Õà Â) ïîëó÷àëè ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì. Ôîñôîãëèâ íàçíà÷àëè äåòÿì äî 3 ëåò ïî 0,5 êàïñóëû, îò 3 äî 7 ëåò ïî 1 êàïñóëå, îò 7 ëåò - ïî 1,5 êàïñóë 3 ðàçà â äåíü. Âèôåðîí áîëüíûå ïîëó÷àëè èç ðàñ÷åòà 3 ìëí ÌÅ/ì2 ïëîùàäè ïîâåðõíîñòè òåëà 3 ðàçà â íåäåëþ. Êóðñ ëå÷åíèÿ ïðîäîëæàëñÿ 6 èëè 9 ìåñ. Ãðóïïó êîíòðîëÿ ïîäáèðàëè ïî ñëó÷àéíîìó ïðèçíàêó (ñëåïûì ìåòîäîì); îíà âêëþ÷àëà 39 äåòåé (ó 27 - Õà Â, ó 12 -Õà Ñ), êîòîðûå ïîëó÷àëè ñèìïòîìàòè÷åñêóþ òåðàïèþ (äèåòà, ðåæèì, æåë÷åãîííûå ïðåïàðàòû, ïîëèâèòàìèíû). Ïîñëå îêîí÷àíèÿ 6-ìåñÿ÷íîãî êóðñà ëå÷åíèÿ âèôåðîíîì è êàïñóëàìè ôîñôîãëèâà ñîñòîÿíèå ïîëíîé ðåìèññèè ïðè ÕÃ Ñ îòìå÷àëîñü â 34% ñëó÷àåâ, íåïîëíîé ðåìèññèè åùå â 38% è òîëüêî ó òðåòè (28%) áîëüíûõ íå íàáëþäàëè ñêîëüêî-íèáóäü ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ ëå÷åíèÿ íà ðåïëèêàöèþ âèðóñà è àêòèâíîñòü ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà (ðèñ. 10.6.1). Ïðè Õà  ïåðâè÷íàÿ ðåìèññèÿ îòìå÷åíà ó 50% áîëüíûõ. 306 ÂÈÔÅÐÎÍ (n = 70) ÂÈÔÅÐÎÍ + ÔÎÑÎÃËÈ (n = 29) Ðèñ. 10.6.1. Ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ âèôåðîíà â êîìáèíàöèè ñ ôîñôîãëèâîì (â êàïñóëàõ) â òå÷åíèå 6 ìåñ. ó áîëüíûõ ÕÃ Ñ (ïî êîíñåíñóñó "Eurohep").  ãðóïïå áîëüíûõ Õà Ñ, ïîëó÷àâøèõ ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì ïåðâè÷íàÿ ïîëíàÿ ðåìèññèÿ íàáëþäàëàñü ó 39%, íåïîëíàÿ (áèîõèìè÷åñêàÿ) åùå ó 17% è îòñóòñòâèå ýôôåêòà - ó 44%. Ò.å. âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â âèôåðîíîâóþ (ÈÔÍ-α) òåðàïèþ çíà÷èòåëüíî ñíèçèëî (îò 44 äî 28) ïðîöåíò íå îòâå÷àþùèõ íà òåðàïèþ áîëüíûõ, ïðèâåäÿ èõ â ñîñòîÿíèå ÷àñòè÷íîé ðåìèññèè. Ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå  ïîëíàÿ è ÷àñòè÷íàÿ ðåìèññèÿ îòìå÷åíû ó ó 66% è 12% áîëüíûõ, 22% íå îòâå÷àëè íà äàííûé ñïîñîá ëå÷åíèÿ. Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî áîëüøèíñòâî äåòåé, âêëþ÷åííûõ â ãðóïïó ëå÷åíèÿ êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèåé, áûëè ðåôðàêòåðíûìè íà ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì. Ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ â ïðîâîäèìûõ èññëåäîâàíèÿõ íå íàáëþäàëîñü.  ãðóïïå äåòåé, íå ïîëó÷àâøèõ ïðîòèâîâèðóñíîå ëå÷åíèå, íè â îäíîì ñëó÷àå íå îòìå÷àëîñü ïîëíîé ðåìèññèè (íåïîëíàÿ áèîõèìè÷åñêàÿ èëè ñåðîëîãè÷åñêàÿ ðåìèññèÿ îòìå÷àëàñü ó 5 èç 27 áîëüíûõ Õà  è ó 3 èç 12 áîëüíûõ Õà Ñ.) Êðîìå êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè ñ âèôåðîíîì, ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì â êàïñóëàõ ïîëó÷àëè 54 ðåáåíêà: ñ Âà À -12 è ñ Âà  15 äåòåé. Ãðóïïó êîíòðîëÿ ñîñòàâèëè 14 áîëüíûõ ñ Âà À è 13 - ñ Âà Â. Ïðåïàðàò äàâàëè äåòÿì äî 7 ëåò â äîçå 0,5-1 êàïñ. 3 ðàçà â äåíü, ñòàðøå 7 ëåò - ïî 1,5 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü. Äåòè â ñðàâíèâàåìûõ ãðóïïàõ áûëè îäíîãî âîçðàñòà, èìåëè îäèíàêîâóþ ñòåïåíü òÿæåñòè çàáîëåâàíèÿ, íàõîäèëèñü â îäíèõ è òåõ æå óñëîâèÿõ è ïîëó÷àëè 307 îäèíàêîâóþ áàçèñíóþ òåðàïèþ. Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå ïîêàçàòåëè îöåíèâàëè äî ëå÷åíèÿ, íà 10-é è 20-é äíè ëå÷åíèÿ. Ó áîëüíûõ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì, íà 10 äåíü îò íà÷àëà òåðàïèè, áûñòðåå, ÷åì ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû, óìåíüøàëàñü æåëòóõà, ñîêðàùàëèñü ðàçìåðû ïå÷åíè, â ñûâîðîòêå êðîâè ñíèæàëîñü ñîäåðæàíèå îáùåãî è, îñîáåííî, êîíúþãèðîâàííîãî áèëèðóáèíà, óìåíüøàëàñü àêòèâíîñòü ÀëÀÒ (è â ìåíüøåé ñòåïåíè ÀñÀÒ). Ïîêàçàòåëè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû è òèìîëîâîé ïðîáû òàêæå áûëè ëó÷øå, ÷åì â ãðóïïå êîíòðîëÿ (õîòÿ ýòè ðàçëè÷èè áûëè íåäîñòîâåðíûìè). Íà 20-é äåíü îò íà÷àëà òåðàïèè ó âñåõ äåòåé, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì, æåëòóõà îòñóòñòâîâàëà, òîãäà êàê â ãðóïïå êîíòðîëÿ ó 7 äåòåé èç 13 ñ Âà  åùå ñîõðàíÿëàñü ëåãêàÿ èêòåðè÷íîñòü ñêëåð. Ðàçìåðû ïå÷åíè â ýòè ñðîêè â ãðóïïå áîëüíûõ ãåïàòèòîì À áûëè â ïðåäåëàõ íîðìû ó 10 èç 12 ïàöèåíòîâ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ è ó 9 èç 14 - â ãðóïïå êîíòðîëÿ.  ãðóïïå ñ Âà  ýòè ïîçèòèâíûå èçìåíåíèÿ íàáëþäàëèñü ñîîòâåòñòâåííî ó 8 èç 15 è ó 4 èç 13.  ñûâîðîòêå êðîâè íà 20-é äåíü ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì â êàïñóëàõ ó âñåõ äåòåé ñ Âà À è ñ Âà  íàñòóïèëà íîðìàëèçàöèÿ óðîâíÿ îáùåãî áèëèðóáèíà (ñíèæåíèå îò 54 ± 2,1 äî 10 ± 1,3 ìêìîëü/ë), òîãäà êàê â ãðóïïå êîíòðîëÿ ýòè âåëè÷èíû íå äîñòèãàëè íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé (ñíèæåíèå îò 56 ± 3,2 äî 24 ± 1,9 ìêìîëü/ë). Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è ïðè èññëåäîâàíèè àêòèâíîñòè ÀëÀÒ. Ó äåòåé ñ Âà  â ãðóïïå êîíòðîëÿ àêòèâíîñòü ÀëÀÒ ñîõðàíÿëàñü ïîâûøåííîé â 2-2,5 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ íîðìàëüíûìè âåëè÷èíàìè, òîãäà êàê â ãðóïïå ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì îíà áûëà â ïðåäåëàõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé (65 ± 3,9 åä/ë) [44]. Äåòåé, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, âûïèñûâàëè èç ñòàöèîíàðà â ñðåäíåì íà 4-6 äíåé ðàíüøå, ÷åì äåòåé êîíòðîëüíûõ ãðóïï.  öåëîì, ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â êàïñóëàõ â êîìïëåêñíîé òåðàïèè ïðè Âà À è Âà  ó äåòåé ñïîñîáñòâóåò áîëåå áûñòðîìó óëó÷øåíèþ îáùåãî ñîñòîÿíèÿ, ñíèæåíèþ ñèìïòîìîâ èíòîêñèêàöèè, ñîêðàùåíèþ ðàçìåðîâ ïå÷åíè, íîðìàëèçàöèè óðîâíÿ áèëèðóáèíà è àêòèâíîñòè ÀëÀÒ. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ñîêðàùàåò ñðîêè ïðåáûâàíèÿ áîëüíûõ â ñòàöèîíàðå. Ôîñôîãëèâ õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ äåòüìè. Ïîáî÷íûõ ðåàêöèé íå îòìå÷àëîñü. Ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû ïðè ïåðîðàëüíîì ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì â êîìáèíàöèè ñ ìîñëåöèòèíîì [62] áûëè ïîëó÷åíû è â êëèíèêå ÎÍÖ èì. Í.Í.Áëîõèíà ÐÀÌÍ [44]. Ó 11 áîëüíûõ äåòåé ñ ãåìîáëàñòîçàìè è ðàçëè÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè (ãåïàòèò Â, òîêñè÷åñêîå ïîðàæåíèå ïå÷åíè) áûñòðåå êóïèðîâàëèñü ñèìïòîìû èíòîêñèêàöèè (ñëàáîñòü, àíîðåêñèÿ, òîøíîòà) ïî ñðàâíåíèþ ñ 308 äåòüìè êîíòðîëüíîé ãðóïïû (10 áîëüíûõ). Êðîìå òîãî, ó áîëüíûõ ãåìîáëàñòîçàìè ñíèæàëàñü àêòèâíîñòü ÀëÀÒ êàê â ãðóïïå äåòåé ñ ãåïàòèòîì Â, òàê è ó áîëüíûõ ñ òîêñè÷åñêèì ïîðàæåíèåì ïå÷åíè [44]. Òàêèì îáðàçîì, ìíîãîöåíòðîâûå êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ïîêàçàëè: 1) Âûñîêóþ ýôôåêòèâíîñòü ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ó áîëüíûõ êàê îñòðûìè, òàê è õðîíè÷åñêèìè Â, Ñ è ìèêñò Â+Ñ ãåïàòèòàìè, à òàêæå õðîíè÷åñêèìè äèôôóçíûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè, îáóñëîâëåííûìè ìåòàáîëè÷åñêèìè íàðóøåíèÿìè (ãèïåðëèïèäåìèÿ, àëêîãîëüíîå ïîðàæåíèå ïå÷åíè, êàëüêóëåçíûé õîëåöèñòèò è äðóãèå). 2) Ôîñôîãëèâ ñóùåñòâåííî óëó÷øàåò ñèíòåòè÷åñêóþ ôóíêöèþ ïå÷åíè è ñíèæàåò êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå ïðîÿâëåíèÿ ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè ðàçëè÷íîé ýòèîëîãèè. 3) Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ è áàçèñíîé òåðàïèè ïîêàçàëî, ÷òî ïî êëèíè÷åñêèì è áèîõèìè÷åñêèì ïîêàçàòåëÿì ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ áîëåå ýôôåêòèâíûì, ÷åì ïðèìåíÿåìàÿ îáùåïðèíÿòàÿ áàçèñíàÿ òåðàïèÿ. Ó áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè Ñ, Â, Ñ+ ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ â/âåííîé ôîðìîé ôîñôîãëèâà íåñðàâíåííî ëó÷øå, ÷åì ïðè ìîíîòåðàïèè ïàðåíòåðàëüíàìè ïðåïàðàòàìè α-èíòåðôåðîíà. 4) Ôîñôîãëèâ ïîäàâëÿåò ðåïëèêòèâíóþ àêòèâíîñòü HBV è HCV. 5) Ôîñôîãëèâ îáëàäàåò õîðîøåé ïåðåíîñèìîñòüþ, ïîáî÷íûå ðåàêöèè â âèäå àëëåðãè÷åñêîé ñûïè âñòðå÷àþòñÿ ëèøü ó åäèíè÷íûõ áîëüíûõ; ïðè äëèòåëüíîì âíóòðèâåííîì ïðèìåíåíèè (12 ìåñÿöåâ è áîëåå) âîçìîæíà òðàíçèòîðíàÿ àðòåðèàëüíàÿ ãèïåðòîíèÿ. 6) Ðåçóëüòàòû êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé ïîçâîëÿþò ðåêîìåíäîâàòü ôîñôîãëèâ äëÿ ëå÷åíèÿ êàê îñòðûõ, òàê è õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ è äèôôóçíûõ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. ÐÅÊÎÌÅÍÄÎÂÀÍÍÛÅ ÑÕÅÌÛ ËÅ×ÅÍÈß ÔÎÑÔÎÃËÈÂÎÌ. 1.Ñõåìà 1 (Ìîíîòåðàïèÿ Ôîñôîãëèâîì). Ôîñôîãëèâ âíóòðèâåííî ïî 5,0 ã. 3 ðàçà â íåäåëþ.  ïðîìåæóòêå ìåæäó èíúåêöèÿìè (îñòàëüíûå äíè íåäåëè) ïðèåì ôîñôîãëèâà â êàïñóëàõ ïî 2 êàïñ. 3-4 ðàçà â äåíü. Äëèòåëüíîñòü ëå÷åíèÿ 2 ìåñÿöà ñ ïîñëåäóþùåé ïîääåðæèâàþùåé òåðàïèåé êàïñóëàìè ôîñôîãëèâ ïî 2 êàïñ. 3-4 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 6-24 ìåñÿöåâ. Ïðè îòñóòñòâèè (èëè íåäîñòàòî÷íî âûðàæåííûõ) ïîëîæèòåëüíûõ èçìåíåíèÿõ â êðîâè áîëüíûõ (ïå÷åíî÷íûå ïðîáû, âèðåìèÿ), èíúåêöèîííûé êóðñ ôîñôîãëèâà ìîæåò áûòü ïðîäîëæåí 309 ïîä êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûì êîíòðîëåì äî 6 ìåñÿöåâ ñ ïîñëåäóþùåé ïîääåðæèâàþùåé êàïñóëàìè òåðàïèåé (ïðèåì íå ìåíåå 6 êàïñóë â äåíü) äî 12-24 ìåñÿöåâ. Ýôôåêòèâíîñòü ïðîâîäèìîé òåðàïèè îöåíèâàþò ÷åðåç êàæäûå 1-2 ìåñÿöà ïî ïðîãðàììå "EUROHEP". Ðàçëè÷àþò: - Ïåðâè÷íóþ ðåìèññèþ - 2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèÿ óðîâíÿ ÀëÀÒ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ - áëèæå ê êîíöó, ñ èíòåðâàëîì íå ìåíåå 2 íåäåëü; èñ÷åçíîâåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV; - Ñòàáèëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV â ñûâîðîòêå êðîâè â òå÷åíèå 6 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè; - Äëèòåëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV â ñûâîðîòêå êðîâè â òå÷åíèå 24 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè - Ïðåêðàùåíèå ðåìèññèè â õîäå ëå÷åíèÿ ("óñêîëüçàíèå") - â õîäå 6 ìåñ. òåðàïèè ïîñëå íîðìàëèçàöèè ÀëÀÒ, åå óðîâåíü âíîâü ïîâûøàåòñÿ (2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ àíàëèçà ñ èíòåðâàëîì 2 íåäåëè), ïîâòîðíîå ïîÿâëåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV, îïðåäåëÿåìîå â ëþáîé ìîìåíò âðåìåíè ïîñëå èõ èñ÷åçíîâåíèÿ. - Îòñóòñòâèå ðåìèññèè - ëþáàÿ äðóãàÿ äèíàìèêà àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è íàëè÷èå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV ê îêîí÷àíèþ òåðàïèè. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ïî ïðèâåäåííîé âûøå ñõåìå ìîæíî â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè êîìáèíèðîâàòü êàê ñ ïðåïàðàòàìè èíòåðôåðîíà (Èíòðîí À, ðîôåðîí-À, ðåàôåðîí è äð), òàê è ñ ïðåïàðàòàìè, áëîêèðóþùèìè ðàçìíîæåíèå âèðóñà (ñ ðèáàâåðèíîì â äîçå åæåäíåâíî 1000 ìã â ñëó÷àå ãåïàòèòà Ñ è ëàìèâóäèíîì ïî 100 ìã 2 ðàçà â äåíü, â ñëó÷àå ãåïàòèòà Â). Ïðè ýòîì îáà êëàññà ïðåïàðàòîâ ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ â èõ òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçèðîâêàõ â ñî÷åòàíèè ñ èíúåêöèÿìè ôîñôîãëèâà. Ìèíèìàëüíàÿ äëèòåëüíîñòü âíóòðèâåííîãî êóðñà ëå÷åíèÿ - 2 ìåñÿöà ñ ïîñëåäóþùèì âîçìîæíûì ïðîäîëæåíèåì ïî êëèíèêîëàáîðàòîðíûì ïîêàçàòåëÿì äî 6 ìåñÿöåâ ñ êàïñóëüíîé ïîääåðæèâàþùåé òåðàïèåé â òå÷åíèè 1-2 ëåò. Àëãîðèòì òåðàïèè. Ïî äîñòèæåíèè ïîëíîé ðåìèññèè ëå÷åíèå ïðîäîëæàòü äî 3-õ ìåñÿöåâ äëÿ çàêðåïëåíèÿ ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè.  ñëó÷àå ðåàêòèâàöèè ïðîöåññà (ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀÒ, ÀñÀÒ, ïîÿâëåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV) êóðñ ëå÷åíèÿ ïîâòîðÿåòñÿ. Ïðè ýòîì ïðè ìîíîòåðàïèè ôîñôîãëèâîì â ñõåìó ëå÷åíèÿ äîáàâëÿþò (ñõåìà 2): -  ñëó÷àå ÕÃ Ñ - ðèáàâèðèí åæåäíåâíî ïî 1000 ìã/ñóòêè (2 òàáë. 310 óòðîì, 3 òàáë. âå÷åðîì). -  ñëó÷àå Õà  - ëàìèâóäèí ïî 100 ìã/2 ðàçà â ñóòêè. Ïðè ðåàêòèâàöèè ïðîöåññà â ñëó÷àå êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè âìåñòî ðèáàâåðèíà è ëàìèâóäèíà ëå÷åíèå ïðîâîäÿò ôîñôîãëèâîì â êîìáèíàöèè ñ èíòåðôåðîíîì (ñõåìà 3). ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 10. 1.van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A. Glycyrrhizin as a potential treatment of chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205. 2. Àð÷àêîâ À.È.,.Ñåëüöîâñêèé À.Ï., Ëèñîâ Â.È., Öûãàíîâ Ä.È., Êíÿæåâ Â.À., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È. Ôîñôîãëèâ: ìåõàíèçì äåéñòâèÿ è ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ â êëèíèêå. Âîïð ìåä õèìèè. 2002, 48, 139-151. 3. Smith J.P., Riley T.R., Devenyi A., Bingaman S.I., Kunselman A. Amantadine therapy for chronic hepatitis C. J Gen Intern Med. 2004, 19, 662668. 4. Kwo P.Y. Treatment of chronic hepatitis C in nonresponders to interferon monotherapy. Curr Gastroenterol Rep. 2000, 2, 11-17. 5. Scott L.J., Perry C.M. Interferon-alpha-2b plus ribavirin: a review of its use in the management of chronic hepatitis C. Drugs. 2002, 62, 507-556. 6. Garcia Compean D. Treatment of acute hepatitis C. Rev Gastroenterol Mex. 2002, 67, 61-66. 7. Shiffman M.L., Hofmann C.M., Gabbay J., Luketic V.A., Sterling R.K., Sanyal A.J., Contos M.J., Ryan M.J., Yoshida C., Rustgi V. Treatment of chronic hepatitis C in patients who failed interferon monotherapy: effects of higher doses of interferon and ribavirin combination therapy. Am J Gastroenterol. 2000, 95, 2928-2935. 8. Poynard T., Marcellin P., Lee S.S., Niederau C., Minuk G.S., Ideo G., Bain V., Heathcote J., Zeuzem S., Trepo C., Albrecht J. Randomised trial of interferon alpha2b plus ribavirin for 48 weeks or for 24 weeks versus interferon alpha2b plus placebo for 48 weeks for treatment of chronic infection with hepatitis C virus. Lancet. 1998, 352 ,1426-1432. 9. Narayanan Menon K.V., Poterucha J.J., El-Amin O.M., Burgart L.J., Kremers W.K., Rosen C.B., Wiesner R.H., Charlton M. Treatment of posttransplantation recurrence of hepatitis C with interferon and ribavirin: lessons on tolerability and efficacy. Liver Transpl. 2002, 8, 623629. 10 Pariente A., Djilloul A., Cadranel J.F. Treatment of chronic hepatitis C with interferon alpha and ribavirin. Results in "real life". Gastroenterol Clin Biol. 2003, 27, 590-595. 11. Khokhar N. Effectiveness of 48 weeks Interferon alfa-2b in com311 bination with ribavirin as initial treatment of chronic hepatitis. J Ayub Med Coll Abbottabad. 2002, 14, 5-8. 12. Ward R.P., Kugelmas M., Libsch K.D. Management of hepatitis C: evaluating suitability for drug therapy. Am Fam Physician. 2004, 69, 1429-1436. 13. van Zonneveld M., Honkoop P., Hansen B.E., Niesters H.G., Murad S.D., de Man R.A., Schalm S.W., Janssen H. Long-term followup of alpha-interferon treatment of patients with chronic hepatitis B. Hepatology. 2004, 39, 804-810. 14. Hoofnagle J., Di Bisceglie A. The treatment of chronic viral hepatitis. N Engl J Med. 1997, 336, 347-356. 15. Iino S., Tango T, Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K., Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40. 16. Kumada H. Long-term treatment of chronic hepatitis C with glycyrrhizin [stronger neo-minophagen C (SNMC)] for preventing liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Oncology. 2002, 62, 94-100. 17. Abe Y., Ueda T., Kato T., Kohli Y. Effectiveness of interferon, glycyrrhizin combination therapy in patients with chronic hepatitis C. Nippon Rinsho. 1994, 52, 1817-1822. 18. Arase Y., Ikeda K., Murashima N., Chayama K., Tsubota A., Koida I. Suzuki Y., Saitoh S., Kobayashi M., Kumada H. The long term efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients. Cancer. 1997, 79, 494-500. 19. Okuno M., Kojima S., Moriwaki H. Chemoprevention of hepatocellular carcinoma: concept, progress and perspectives. J Gastroenterol Hepatol. 2001, 16, 1329-1335. 20. Sumiyama K., Kobayashi M., Miyashiro E., Koike M. Combination therapy with transfer factor and high dose stronger neominophagen C in chronic hepatitis B in children (HBe Ag positive). Acta Paediatr Jpn. 1991, 33, 327-334. 21. van Rossum T.G., Vulto A.G., Hop W.C., Schalm S.W. Glycyrrhizin-induced reduction of ALT in European patients with chronic hepatitis C. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 2432-2437. 22. Fujisawa Y., Sakamoto M., Matsushita M., Fujita T., Nishioka K. Glycyrrhizin inhibits the lytic pathway of complement - possible mechanism of its anti-inflammatory effect on liver cells in viral hepatitis. Microbiol Immunol. 2000, 44, 799-804. 23. Yamamura Y., Kotaki H., Tanaka N., Aikawa T., Sawada Y., Iga T. The pharmacokinetics of glycyrrhizin and its restorative effect on hepatic function in patients with chronic hepatitis and in chronically carbon-tetrachloride-intoxicated rats. Biopharm Drug Dispos. 1997, 18, 312 717-725. 24. Numazaki K., Nagata N., Sato T., Chiba S. Effect of glycyrrhizin, cyclosporin and tumor necrosis factor alpha on infection of U-937 and MRC-5 cells by human cytomegalovirus. J Leukoc Biol. 1994, 55, 24-28. 25. Nakajima N., Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N., Pollard R.B., Suzuki F. In vitro induction of anti-type 2 T cells by glycyrrhizin. Burns. 1996, 22, 612-617. 26. Abe N., Ebina T., Ishida N. Interferon induction by glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid in mice. Microbiol Immunol. 1982, 26. 535-539. 27. Vaya J., Belinky P.A., Aviram M. Antioxidant constituents from licorice roots: isolation, structure elucidation and antioxidative capacity toward LDL oxidation. Free Radic Biol Med. 1997, 23, 302-313. 28. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîëîãèÿ è òåðàïèÿ. 2000, 9, 39-41. 29. Dragland S., Senoo H., Wake K., Holte K., Blomhoff R. Several culinary and medicinal herbs are important sources of dietary antioxidants. J Nutr. 2003, 133, 1286-1290. 30. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic. Szczecin.. Publisher Polish Section of European Society of biochemical pharmacology. Szczecin. 1993. 31. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. Ìåäèöèíà, Ì. 1984, 433447. 32. Kuntz E. "Essentielle" phospholipide in der hepatologie - 50 jahre experimentale und klinische erfahrung. Z Gastroenterol, 1991, 29, 7-13. 33. Ó÷àéêèí Â.Ô., Íèñåâè÷ Í.È., ×åðåäíè÷åíêî Ò.Â. Âèðóñíûå ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì. 1994, 304-318. 34. Barbarino F., Suciu A., Neumann E. Effect of "essential" phospholipids in chronic hepartitis and on immunology processses. Therapiewoche Osterreich. 1989, 4, 155-162. 35. Guan R., Ho K.Y., Kang J.Y., Yap I., Gwee K.A., Tan C.C. The effect of polyunsaturated phosphatidylcholine in the treatment of acute viral hepatitis. Aliment Pharmakol Ther. 1995, 9, 699-703. 36. Niederau C., Strohmeyer G., Heintges T., Peter K., Gopfert E. Polyunsaturated phosphatidylcholine and interferon alpha for treatment of chronic hepatitis B and C: a multi-center, randomized, doubleblind, placebo-controlled trial. Leich Study Group. Hepatogastroenterology. 1998, 45, 797-804. 37. Lieber C.S. Liver diseases by alcohol and hepatitis C: early detection and new insights in pathogenesis lead to improved treatment. Am J Addict. 2001, 10, 29-50. 38. Ó÷àéêèí Â.Ô., Òîpõîâñêàÿ Ò. È., Äóíàåâñêèé Î. À., Ëó÷øåâ 313 Â. È., Ãàëüïåpèí Ç. È., Êîâàëåâ Î. Á., Êèñåëåâ Í. È., Æàpîâ Ñ. Í., Äîêó÷àåâ Ê. Â., Ïèñàpåâà Å. À., Êîíåâ Â. Ïðèìåíåíèå îòå÷åñòâåííîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ" ïðè îñòðûõ è õðîíè÷åñêèõ çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè. Ýïèäåì èíôåêö áîëåçí. 1999, 1, 49-54. 39. Ó÷àéêèí Â.Ô., Ëó÷øåâ Â. È., Æàpîâ Ñ. Í., Êîâàëåâ Î. Á., Èïàòîâà Î. Ì., Òèõîíîâà Å. Ã., Òîpõîâñêàÿ Ò. È., Êíÿæåâ Â. À., Äóíàåâñêèé Î. À., Àp÷àêîâ À. È. Íîâûé îòå÷åñòâåííûé ôîñôîëèïèäíûé ïpåïàpàò "Ôîñôîãëèâ" êàê ýôôåêòèâíîå ñpåäñòâî ïpè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ îñòpûìè âèpóñíûìè ãåïàòèòàìè. Êëèí ìåä. 2000, 5, 39-42. 40. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ó÷àéêèí Â.Ô., Ëó÷øåâ Â.È., Æàðîâ Ñ.Í., Êîâàëåâ Î.Á., Ïèñàðåâà Å.À., Êîíåâ Â.Â., Êíÿæåâ Â.À. Êëèíèêî-ýêñïåðèìåíòàëüíîîå îáîñíîâàíèå ìåìáðàííîé òåðàïèè ãåïàòèòîâ. Íîâûé ôîñôîëèïèäíûé ïðåïàðàò "Ôîñôîãëèâ". Ìàòåðèàëû êîíôåðåíöèÿ "Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå àñïåêòû ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèè". Âèòåáñê, Áåëîðóññèÿ. 1999, 1216. 41. Àð÷àêîâ À.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Èïàòîâà Î.Ì., Áóòîâ Þ.Ñ., Âàñåíîâà Â.Þ., Õðóñòàëåâà Å.À., Ïîïîâ Ê.Â. Ñðåäñòâî äëÿ êîìïëåêñíîãî ëå÷åíèÿ õðîíè÷åñêèõ äåðìàòîçîâ: ïñîðèàçà, àòîïè÷åñêîãî äåðìàòèòà, ýêçåìû è êåðàòîäåðìèé è ñïîñîá ëå÷åíèÿ õðîíè÷åñêèõ äåðìàòîçîâ. Ïàòåíò ÐÔ 2196585 îò 06.03.01. 42. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Ó÷àéêèí Â.Ô. Ïðèìåíåíèå ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ ñ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè. V Ðîññèéñêèé íàöèîíàëüíûé êîíãðåññ "×åëîâåê è ëåêàðñòâî". Ìîñêâà. 1998. 43. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È. Òåîðåòè÷åñêèå îñíîâû ïðèìåíåíèÿ ýññåíöèàëüíûõ ôîñôîëèïèäîâ è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå. Ñèìïîçèóì "Îïûò êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿ îòå÷åñòâåííîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ". 8-îé ðîññèéñêèé íàöèîíàëüíûé êîíãðåññ "×åëîâåê è ëåêàðñòâî". Ìîñêâà. 2001. 44. ÔÎÑÔÎÃËÈÂ. Ëå÷åíèå è çàùèòà ïå÷åíè. Ïîñîáèå äëÿ âðà÷åé. (Ó÷àéêèí Â.Ô., Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì. è äð., ïîä ðåäàêöèåé Ó÷àéêèíà Â.Ô.) Ìîñêâà, ÃÓ ÍÈÈ ÁÌÕ ÐÀÌÍ, 2004. 45. Ó÷àéêèí B.Ô., Êíÿæåâ Â.À, Ãàëüïåðèí Ý.È., Äîêó÷àåâ Ê.Â., Òîðõîâñêàÿ Ò.È, Êîâàëåâ Î.Á., Ïèñàðåâà Å.À., Êîíåâ Â.À., Àð÷àêîâ À.È. Ãåïàòîïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà "ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ, îïåðèðîâàííûõ ïî ïîâîäó õðîíè÷åñêîãî êàëüêóëåçíîãî õîëåöèñòèòà. Õèðóðãèÿ. 2000, 3, 14-18. 46. Èïàòîâà Î.Ì., Ó÷àéêèí B.Ô., Êíÿæåâ Â.À, Ãàëüïåðèí Ý.È., Äîêó÷àåâ Ê.Â., Òîðõîâñêàÿ Ò.È, Àð÷àêîâ À.È. Êîìáèíàöèÿ 314 ìåòàáîëè÷åñêîé è õèðóðãè÷åñêîé òåðàïèè áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì: èñïîëüçîâàíèå íîâîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ". Ìàòåðèàëû êîíôåðåíöèè "Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå àñïåêòû ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèè". Âèòåáñê, Áåëîðóññèÿ. 1999, 34-41. 47. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å., Íèêèòèí È.Ã., Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì. Òåîðåòè÷åñêèå è ïðàêòè÷åñêèå àñïåêòû ïðèìåíåíèÿ ãëèöèððèçèíà Êëèíè÷åñêèå ïåðñïåêòèâû ãàñòðîýíòåðîëîãèè, ãåïàòîëîãèè. 2003, 1, 35-39. 48. Coton T., Matton T., Pecarrere J.L., Monchy D., Debonne J.M. Interobserver reproducibility of the Knodell score and the Metavir score in chronic viral hepatitis C. Results of 60 liver biopsies. Gastroenterol Clin Biol. 2001, 25, 915-916. 49. Áàéêîâà È.Å. Êëèíèêî-ìîðôîëîãè÷åñêàÿ äèíàìèêà õðîíè÷åñêîãî âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ íà ôîíå ðàçëè÷íûõ âàðèàíòîâ ýòèîïàòîãåíåòè÷åñêîãî ëå÷åíèÿ. Àâòîðåô. êàíä. äèññ, 2003. 50. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Ó÷àéêèí Â.Ô. Íîâûé îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò Ôîñôîãëèâ. Ìåäèöèíñêàÿ êàôåäðà. 2003, 4, 62-65, 135-141. 51. Èïàòîâà Î.Ì., Íàñîíîâ Å.Ë., Êîðîòàåâà Ò.Â., Ôèðñîâ Í.Í., Èâêèíà Î.À., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Àð÷àêîâ À.È. Ãåìîðåîëîãè÷åñêàÿ è êëèíè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü íîâîãî ôîñôîëèïèäíîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà "ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì. Áèîìåäèöèíñêàÿ õèìèÿ. 2003, 49, 484491. 52. Êîðîòàåâà Ò.Â., Íàñîíîâ Å.Ë., Èïàòîâà Î.Ì., Ôèðñîâ Í.Í., Èâêèíà Î.À. Ïðèìåíåíèå ôîñôîëèïèäíîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà "ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì (ÏÀ) (ïðåäâàðèòåëüíûå ðåçóëüòàòû). Íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêàÿ ðåâìàòîëîãèÿ, 2004, 3, 40-45. 53. Íàñîíîâ Å.Ë., ×è÷àñîâà Í.Â., Èìàìåòäèíîâà Ã.Ð. Ìåòîäû îöåíêè ïîðàæåíèÿ ñóñòàâîâ, àêòèâíîñòè çàáîëåâàíèÿ è ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì. Ìåòîäè÷åñêîå ïîñîáèå äëÿ âðà÷åé. Ìîñêâà. 2001. 54. Raychaudhuri S.P., Raychaudhuri S.K. Role of NGF and neurogenic inflammation in the pathogenesis of psoriasis. Prog Brain Res. 2004, 146, 433-437. 55. Ghoreschi K., Rocken M. Immune deviation strategies in the therapy of psoriasis. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2004, 3, 193198. 56. Lieber C.S., DeCarli L.M., Mak K.M., Cim C.I., Leo M.A. Attenuation of alcohol-induced hepatic fibrosis by polyunsaturated lecithin. Hepathology. 1990, 12, 1390-1398. 315 57. McHutchison J.G., Gordon S.C., Schiff E.R., Shiffman M.L., Lee W.M., Rustgi V.K., Goodman Z.D., Ling M.H., Cort S., Albrecht J.K. Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin as initial treatment for chronic hepatitis C. Hepatitis Interventional Therapy Group N Engl J Med. 1998, 339, 1485-1492. 58. Kullig U., Porst H., Wiese M. et al. Treatment of chronic hepatitis C with a combination of high-dose interferon, ribavirin and amantadine in nonresponders. Poster abstracts, Falk symposium ¹ 115, Part II of the Basel liver week, 1999, XI Internat. Congr. of liver diseases, liver cirrhosis and its development. abstr. 112. 59. Kiso S., Kawata S., Tamura S., Imai Y., Inui Y., Nagase T., Maeda Y., Yamasaki E., Tsushima H., Igura T., Himeno S., Seki K., Matsuzawa Y. Efficacy of combination therapy of interferon-alfa with ursodesoxycholic acid in chronic hepatitis C. A randomized controlled clinical trial. J Gastroenterol. 1997, 32, 56-63. 60. Ãîðáàêîâ Â.Â. Ñîâðåìåííûå ïîäõîäû ê äèàãíîñòèêå è ëå÷åíèþ âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ. Ðîññèéñêèé æóðíàë ãàñòðîýíòåðîëîãèè, ãåïàòîëîãèè, êîëîïðîêòîëîãèè, 1998, 5, 61-67. 61. Schalm S.W., Eurohep A. European Community sponsored concerted action on viral hepatitis: its rationale and execution. J Hepatol. 1992, 15, 1-3. 62. Èïàòîâà Î.Ì., Ïðîçîðîâñêàÿ Í.Í., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ãóñåâà Ä.Í. Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ñîåâûõ ôîñôîëèïèäîâ. Áèîìåäèöèíñêàÿ õèìèÿ. 2004, 50, 436-450 316 ÑÏÈÑÎÊ ÑÎÊÐÀÙÅÍÈÉ ÀëÀÒ ÀñÀÒ ÀÒÔ ÀÔÊ ÂÈ× ÃÊ ÃÒ ÃÔË ÄËÔÕ ÄÏÔÕ ÅÊ ÆÊ ÈÃÀ ÈÔÍ ÈÖ ÊË ËèçîÔÊ ËèçîÔÕ ËÍÏ ËÎÍÏ ËÂÏ ËÕÀÒ Âà ÏÍÆÊ ÏÎË ÑÌ ÑÌàçà ÑÔ ÑÔË ÑÔÕ Òô.ï. ÓÄÔ ÔÀÒ Ôà ÔÈ ÔÊ ÔË ÔÑ ÔÕ ÔÕÌ ÔÝ - - àëàíèí àìèíîòðàíñôåðàçà àñïàðòàò àìèíîòðàíñôåðàçà àäåíîçèí-3-ôîñôîðíàÿ êèñëîòà àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà âèðóñ èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà ãëèöåðîôîñôîëèïèäû äèëèíîëåîèëôîñôàòèäèëõîëèí äèïàëüìèòîèëôîñôàòèäèëõîëèí åñòåñòâåííûå êèëëåðû æèðíûå êèñëîòû èíäåêñ ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè èíòåðôåðîí èíäåêñ öèòîòîêñè÷íîñòè êàðäèîëèïèí ëèçîôîñôàòèäíàÿ êèñëîòà ëèçîôîñôàòèäèëõîëèí ëèïîïðîòåèíû íèçêîé ïëîòíîñòè ëèïîïðîòåèíû î÷åíü íèçêîé ïëîòíîñòè ëèïîïðîòåèíû âûñîêîé ïëîòíîñòè ëåöèòèí-õîëåñòåðèí-àöèëòðàíñôåðàçà îñòðûé ãåïàòèò ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ ñôèíãîìèåëèí ñôèíãîìèåëèíàçà ñôèíãîçèí ñôèíãîëèïèä ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí òåìïåðàòóðà ôàçîâîãî ïåðåõîäà óðèäèí äèôîñôàò ôàêòîð àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ ôîñôàòèäèëãëèöåðèí ôîñôàòèäèëèíîçèòîë ôîñôàòèäíàÿ êèñëîòà ôîñôîëèïèäû, ôîñôîëèïèä ôîñôàòèäèëñåðèí ôîñôàòèäèëõîëèí ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí ñ äîáàâëåíèåì ìàëüòîçû ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí 317 Õà ÖÄÔ ÖÒÔ ÖÒ ÖÒË ÝÏÐ ÝÐ - - AIF DD EGF eNOS FADD FLICE FLIP GPCR HBV HCV HâsAg IL iNOS ñPLA2 iPLA2 sPLA2 MAPK NFκB NÊ PAF PG PIP PIP2 PTP PK C (R) S1P SPC SREBP TNF TRADD TRAIL VCAM - - õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò (õðîíè÷åñêèé âèðóñíûé ãåïàòèò) öèòèäèí äèôîñôàò öèòèäèí òðèôîñôàò öèòèäèëòðàíñôåðàçà öèòîòîêñè÷åñêèå Ò-ëèìôîöèòû ýëåêòðîííûé ïàðàìàãíèòíûé ðåçîíàíñ ýíäîïëàçìàòè÷åñêèé ðåòèêóëóì ôàêòîð,âûçûâàþùèé àïîïòîç, apoptosis inducing factor "äîìåí ñìåðòè", "death domain" ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîðà ðîñòà ýíäîòåëèàëüíàÿ NO-ñèíòàçà Fas-àññîöèèðîâàííûé DD FADD-Like Interleukin Converting Enzyme FLICE inhibitory protein G-protein coupled receptors, ðåöåïòîð, ñâÿçûâàþùèé G-áåëîê âèðóñ ãåïàòèòà  âèðóñ ãåïàòèòà Ñ àíòèãåí âèðóñíîãî ãåïàòèòà  èíòåðëåéêèí èíäóöèáåëüíàÿ NO-ñèíòàçà öèòîçîëüíàÿ ôîñôîëèïàçà öèòîçîëüíàÿ Ñà2+- íåçàâèñèìàÿ ôîñôîëèïàçà ñåêðåòîðíàÿ ôîñôîëèïàçà ìèòîãåí-àêòèâèðóåìàÿ ïðîòåèíêèíàçà ÿäåðíûé ôàêòîð κB, nuclear factor κB åñòåñòâåííûé êèëëåð, natural killer platelet activating factor, ôàêòîð àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ ïðîñòàãëàíäèíû ÔÈ-4-ôîñôàò ÔÈ-4,5-äèôîñôàò permeability transition pore ïðîòåèíêèíàçà Ñ (R) ñôèíãîçèí-1-ôîñôàò ñôèíãîçèë-ôîñôîðèëõîëèí sterol regulatory element binding protein ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè, tumor necrosis factor áåëîê TNF-R-àññîöèèðîâàííûé ñ DD TNF-related apoptosis-inducing ligand vascular cell adhesive molecule 318
