Инфекционные болезни, иммунология и иммунотерапия

Инфекционные
болезни,
иммунология
и иммунотерапия
УДК 616.155.33 : 616.514 - 056.3
И.П. Кольцов1, И.Н. Дубняк2, Е.А. Мальцева2, Н.С. Дубняк3, И.А. Храмова3, А.С. Шаронов4
СООТНОШЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ЛИЗОСОМНЫХ
МЕМБРАН (СЛМ), СЕКРЕЦИИ И СИНТЕЗА ЛИЗОЦИМА
И УРОВНЯ СЕКРЕЦИИ IL-8 МОНОЦИТОВ КРОВИ
У ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ
И ХОЛИНЭРГИЧЕСКОЙ КРАПИВНИЦЕЙ
Дальневосточный государственный медицинский университет1,
680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел.: 8-(4212)-32-63-93, e-mail: nauka@mail. fesmu.ru, г. Хабаровск;
Городская клиническая больница №22, ул. Русская, 57; тел.: 8-(4232)-32-49-62;
Владивостокский государственный медицинский университет3,
690002, пр. Острякова, 2, тел.: 8-(4232)-45-17-02; Военно-морской клинический госпиталь ТОФ4,
690005, ул. Ивановская, 4, тел.: 8-(4232)-46-78-14 - (304), e-mail: sharonova 2008@mail.ru, г. Владивосток
Среди патохимических механизмов развития разнообразных вариантов крапивницы важное место занимают холинергический и гистаминовый [1]. Причем, при
запуске холинэргического механизма включается и гистаминовый. Известно, что на плазматической мембране
клеток системы мононуклеарных фагоцитов находятся
рецепторы для многих биологически активных веществ,
в том числе для гистамина (van R. Furth, 1980 - цит. по
И.С. Фрейдлин, 1984) [4], что предполагает опосредованное их участие в аллергических реакциях в качестве клеток-мишеней П порядка [2].
Целью исследования было изучение роли моноцитов
одной из популяций клеток системы макрофагов при
формировании разных форм крапивницы и их способности к активации, являющейся важной стадией их включения в биологические реакции организма — воспаление,
иммунный ответ, процессы регенерации. При активации
макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов в клетках, в частности, происходит
повышение выхода лизосомных ферментов из клеток,
усиление выработки провоспалительных цитокинов, в
том числе секреции IL-8, уровень которого в крови заметно повышается [5, 8-10].
Секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток: при лабилизации лизосомных мембран происходит повышение
выхода ферментов, при стабилизации — снижение [7].
Было важно оценить сопряженность изменения состояния стабильности лизосомных мембран и секреторно-синтетической активности моноцитов — макрофагов
крови с вариацией уровня секреции IL-8, возникающей
при активации клеток макрофагальной системы одного
из главных продуцентов данного ИЛ.
Материалы и методы
Исследованы моноциты крови 12 здоровых и больных: 36 чел. — с аллергической и 45 чел. — с холинергической крапивницей в возрасте 20-50 лет. Моноциты
крови выделяли на градиенте плотности фиколл-верографина методом А. Boyum (1968) в описании [6]
с последующим прикреплением к поверхности стекла. Определение стабильности лизосомных мембран
(СЛМ) моноцитов с расчетом показателя стабильности
(ПСЛМ) проводили путем культивирования выделенных клеток в культуральной среде (среда 199 с 0,5%
стерильного L-глутамина и 2,5% смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56°С)
в течение 12-15 ч при 37°С с последующим определением секретированного (Lсекр.) и после 4-6-кратного
замораживания-оттаивания культивируемых клеток,
общего лизоцима (Lобщ. секретированный плюс внутриклеточный) и с расчетом ПСЛМ [6]. Синтетическую
способность макрофагальных клеток крови расчитывали в процессе выполнения метода определения ПСЛМ
21
путем оценки разницы L общ. до и после культивирования. Определение интерлейкина-8 в супернатанте
культивированных клеток (оценивалась секреция ИЛ-8
моноцитами) проводилось методом сендвич-варианта
твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.»
(США). Чувствительность метода для ИЛ-8 — 1 пг/мл.
Обработку полученных данных производили в соответствии с рекомендациями [3] с использованием пакета программ Statistica 5.
Рез ю ме
Описаны результаты исследования уровня секреции
ИЛ-8, состояния стабильности лизосомных мембран и секреторно-синтетической активности моноцитов крови у 12
здоровых, 36 больных с аллергической и 45 — с холинэргической крапивницей в возрасте 20-50 лет. Показано, что
при аллергической и холинергической крапивнице происходит повышение уровня секреции ИЛ-8, лабилизация
лизосомных мембран моноцитами крови, что сопровождается повышением показателя стабильности — ПСЛМ
и секреции лизосомного фермента лизоцима, менее значительное повышение синтеза лизоцима. Причем, при холинэргической крапивнице наблюдаются более выраженные
изменения исследованных показателей функциональной
активности моноцитов крови.
Ключевые слова: макрофаги, мембраны, ферменты, цитокины, аллергические заболевания.
Результаты исследования
Полученные результаты свидетельствуют о том, что
у здоровых людей уровень секреции IL-8 моноцитами
крови колеблется в пределах от 80 до 130 пкг/мл×106 кл.
и в среднем составляет 118,7±215,3 пкг/мл×106 кл. (табл.
1). У больных аллергической крапивницей наблюдается
относительно повышенный уровень секреции IL-8, а у
больных холинэргической крапивницей он значительно
превышает уровень здоровых людей (р<0,05 и р<0,01
соответственно), что соответствует различной степени
активации клеток-продуцентов интерлейкина-8, в частности, моноцитов при разных формах крапивницы.
У больных аллергической и холинэргической крапивницей наряду с повышенным уровнем секреции IL8 культивируемыми моноцитами крови, по сравнению с
нормальным уровнем секреции IL-8 у здоровых людей,
состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов, их секреторная и синтетическая активность подвержены неоднозначным изменениям.
В табл. 2 представлены результаты исследования показателя стабильности лизосомных мембран (ПСЛМ),
уровня секреции и синтеза лизоцима — маркерного
фермента лизосом, и лизосомных мембран моноцитов
здоровых и больных аллергической и холинэргической
крапивницей. Как видно из таблицы, при аллергической крапивнице происходит незначительное повышение
I.P. Koltsov, I.N. Dubnyak, E.A. Maltseva,
N.S. Dubnyak, I.A. Khramova, A.S. Sharonov
CORRELATION OF LYSOSOME MEMBRANE
STABILITY (IMS), SECRETION AND SYNTHESIS
OF LYSOCEME WITH THE LEVEL OF IL-8
BLOOD MONOCYTE SECRETION IN HEALTHY
PEOPLE AND PATIENTS WITH ALLERGIC
CHOLINERGIC URTICARIA
Far Eastern state medical university, Khabarovsk;
Municipal hospital №2; Vladivostok state medical university;
Navy clinical hospital, Pacific Navy, Vladivostok
Summar y
The article describes the results of the study of IL-8 secretion level, condition of lysosome membrane stability and secretory-synthetic activity of blood monocytes in 12 healthy people,
36 patents with allergic and 45 patients with cholinergic urticaria at the age from 20 to 50 years. The study demonstrates
that in allergic and cholinergic urticaria there is increase of
IL-8 secretion level of blood monocyte lysosome labialization
accompanied by increased stability index and secretion of lysosome enzyme lysozyme, less significant increase of lysozyme
synthesis. At the same time, in cholinergic urticaria, there is
evidence of more marked changes of the studied indexes of
blood monocyte functional activity.
Key words: macrophages, membranes, enzymes, cytokines,
allergic diseases.
Таблица 1
Секреция IL-8 моноцитами крови здоровых
и больных аллергической и холинэргической крапивницей
Группы
IL-8 пкг/мл×106 кл.
Здоровые
118,7±25,3
Больные аллергической крапивницей
258,9±20,5
Больные холинэргической крапивницей
430,6±112,8
ПСЛМ моноцитов крови по сравнению с показателями у
здоровых людей (р>0,05), что свидетельствует о происходящей умеренной лабилизации лизосомных мембран
моноцитарных клеток у больных с данной патологией.
У больных с холинергической крапивницей наблюдается значительное повышение ПСЛМ моноцитов по
сравнению с показателями как больных аллергической
крапивницей (р>0,05), так и здоровых людей (р<0,05),
свидетельствующее о происходящей более выраженной
лабилизации лизосомных мембран клеток.
Секреция лизоцима моноцитов крови, как видно из
полученных данных, повышена у больных аллергической (р<0,05) и еще более с холинэргической крапивницей
Таблица 2
Показатели стабильности лизосомных мембран,
синтетической и секреторной активности моноцитов крови
здоровых и больных аллергической и холинэргической
острой крапивницей
Группы
ПСЛМ, %
Lсекр., мкг/мл Lсинт., мкг/мл
Здоровые
53,8±1,3
0,76±0,03
0,44±0,01
Больные аллергической крапивницей
57,5±1,2
0,85±0,01*
0,57±0,05*
Больные холинэргической крапивницей
64,7±2,7*
0,95±0,03**
0,59±0,07*
Примечания. * — р<0,05 при сравнении с показателями здоровых
людей; ** — р<0,01 при сравнении с показателями здоровых людей.
22
(р<0,01) по сравнению с показателями секреции лизоцима моноцитами и макрофагами у здоровых людей. Синтез
лизоцима моноцитами крови у больных аллергической и
холинергической крапивницей повышен по отношению к
показателям здоровых людей (р<0,05).
Оценивая полученный результат с точки зрения
особенностей изменения функционального состояния
клеток системы макрофагов при разных вариантах крапивницы по сравнению с их состоянием у здоровых людей, можно отметить, что повышение уровня секреции
IL-8 моноцитами крови при аллергической и значительно более — при холинэргической крапивнице и процесс
лабилизации лизосомных мембран с повышением секреции и синтеза лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови являются сопряженными процессами.
По-видимому, это обусловлено однонаправленностью
данных внутриклеточных процессов, связанных с активацией системы макрофагов при крапивнице различного
генеза, причем изменение активности макрофагальных
клеток при холинергической крапивнице более выражено за счет двойного действия ацетилхолина и гистамина, как описано [1].
5. Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы: развитие, активация, эффекторные функции // RJI. - 1999. - Vol.
4, suppl. 1. - С. 9-15.
6. Чередеев А.Н. Количественная и функциональная
оценка Т- и В-систем иммунитета у человека // Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники. - М.: ВИНИТИ,
1976. - Т.4. - С. 124-160.
7. Шаронов А.С. Фагоциты, лизосомы, мембраны. Владивосток: Дальнаука, 2007. - 128 с.
8. Швыдченко И.Н., Быковская Е.Ю., Роменская В.А.
и др. Влияние глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП)
на продукцию интерлейкина-8 нейтрофильными гранулоцитами при патологии в эксперименте in vitro // Рос.
иммунол. журн. - 2009. - Т.3 (12), №3-4. - С. 288-292.
9. Ярилин А.А. Клеточные основы мукозального иммунитета // Рос. иммунол. журн. - 2008. - Т.2 (11), №1.
- С. 3-19.
10. Bulut У., Faure E., Thomas L. et. al. Chlamydial heat
shock protein 60 activates macrophages and endothelial cells
through toll-like receptor 4 and MD2 in a MyD88-dependent
pathway // J. Immunol. - 2002. - Vol. 168. - P. 1435-1440.
Координаты для связи с авторами: Кольцов Игорь
Петрович — канд. мед. наук, доцент, зав.кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии ДВГМУ, тел.:
8-(4212)-32-63-93, e-mail: nauka@mail.fesmu.ru; Дубняк
Игорь Николаевич — врач-нейрохирур ГКБ №2; Мальцева Елена Анатольевна — канд. мед. наук, мед. представитель ЗАО «Сандоз», ГКБ №2, тел.: 8-(4232)-32-49-62;
Дубняк Наталья Степановна — канд. мед. наук, доцент
кафедры кожных и венерических болезней ВГМУ, тел.:
8-(4232)-36-05-76; Храмова Ирина Афанасьевна — канд.
мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии
ВГМУ, тел.: 8-(4232)-27-26-87; Шаронов Анатолий Степанович — доктор мед. наук, профессор, зав. аллергокабинетом Военно-морского клинического госпиталя ТОФ,
тел.: 8-(4232)-46-78-14 - (304).
Ли те ра тура
1. Баранов А.А., Балаболкина И.И. и др. Детская аллергология: рук-во для врачей. - М.: Гэотар-Медиа, 2006.
- 687 с.
2. Гущин И.С. Взаимодействие иммунологического
и эффекторного звеньев аллергического ответа и возможные пути его фармакологического контроля: мат-лы
Междун. симп. по аллергии к морепродуктам [под ред.
А.С. Шаронова]. - Владивосток, 1993. - С. 27-35.
3. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских
данных. Применение прикладных программ Statistica. М.: Медиа сфера, 2002. - 305 с.
4. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. - М.: Медицина, 1984. - 272 с.
23