Иммунология №5 2013 IM-1305-236 ВЛИЯНИЕ КОИНФЕКЦИИ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА С НА АКТИВАЦИЮ И АПОПТОЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ, ПОЛУЧАЮЩИХ АНТИРЕТРОВИРУСНУЮ ТЕРАПИЮ В.А. Черешнев1, К.В. Шмагель2, Л.Б. Королевская2, Е.В. Сайдакова2, Н.Г. Шмагель3, С.В. Слободчикова2, С.Я. Зверев3, А.В. Таранин4 1ФГБУН Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук, 620049, Ека-теринбург; 2ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской акаде-мии наук, 614081, Пермь; 3Пермский краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, 614088, Пермь; 4ФГБУН Институт молекулярной и клеточной биологии Сибирского отделения Российской академии наук, 630090, Новосибирск Исследована роль активации и апоптоза Т-лимфоцитов в развитии иммунологической неотвечаемости на антиретровирусную терапию (АРТ) у ВИЧинфицированных пациентов с коинфекцией вирусом гепатита С (ВГС). Все пациенты были разделены на 2 группы. 1-я группа – ВИЧ+/ВГС+ с числом CD4+ Тклеток > 350 в 1 мкл (наличие иммунологического ответа на АРТ); 2-я группа – ВИЧ+/ВГС+ с числом CD4+ Т-клеток < 350 в 1 мкл (иммунологические неответчики). Контролем служили 2 группы ВИЧинфицированных больных с аналогичным количеством CD4+ Т-лимфоцитов в крови, но без ВГСкоинфекции, а также относительно здоровые добровольцы без ВИЧ и ВГСинфекций. Установлено, что для ВГС/ВИЧинфекции характерны: 1) более низкое, чем при ВИЧмоноинфекции содержание CD4+ Т-лимфоцитов; 2) высокая активация CD8+ Т-клеток; 3) усиление апоптоза CD8+ Т-лимфоцитов. Полученные данные свидетельствуют о том, что коинфицирование ВГС, повидимому, может вносить дополнительный вклад в нарушение восстановления иммунитета при проведении АРТ у ВИЧинфицированных пациентов. При этом следует отметить, что повышение активации и апоптоза CD8+ Т-лимфоцитов у ВИЧинфицированных пациентов с ВГСкоинфекцией не объясняет причину развития иммунологической неотвечаемости на лечение. Механизмы, лежащие в ее основе, требуют дальнейшего исследования. Ключевые слова : ВИЧ-инфекция, вирус гепатита С, антиретровирусная терапия, активация иммунной систе-мы, апоптоз, отсутствие иммунологического ответа IM-1305-242 ВКЛАД ГОМЕОСТАТИЧЕСКОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ И СВЯЗАННЫХ С НЕЙ ПРОЦЕССОВ В ВОССТАНОВЛЕНИЕ ПОПУЛЯЦИИ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ T- КЛЕТОК В УСЛОВИЯХ ЛИМФОПЕНИИ, ИНДУЦИРОВАННОЙ ОБЛУЧЕНИЕМ А.Н. Митин, М.М. Литвина, В.В. Комогорова, Н.И. Шарова, А.А. Ярилин ФГБУ – ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, 115478, г. Москва В работе рассмотрены феноменология и некоторые механизмы восстановления популяции периферических Т-клеток (Т-клетки селезенки и лимфатических узлов) после действия сублетальных доз ионизирующей радиации. Существенных различий в динамике восстановления основных и минорных субпопуляций Тклеток не выявлено. Принципиальная особенность восстановления периферических Т-клеток по сравнению с регенерацией тимуса состоит в ее непрерывности, отсутствии вторичной атрофии, что обеспечивает поддержание (пусть на сниженном уровне) защиты организма от патогенов. Из двух механизмов восстановления популяции периферических Т-лимфоцитов – тимопоэза и гомеостатической пролиферацией самих Т-клеток – в данной работе рассмотрена роль второго механизма. Показано 2–4-кратное повышение доли пролиферирующих (Ki-67+) Т-клеток на протяжении всего восстановительного периода (с 4-х по 60-е сутки после облучения), что служит проявлением гомеостатической пролиферации Т-клеток. Спектр наивных Т-клеток и Т-клеток памяти проанализирован по экспрессии маркерных молекул CD62L и CD44. Содержание наивных Т-клеток (CD62LhiCD44lo) остается ниже уровня контроля до конца периода наблюдения (60-е сутки), тогда как уровень CD44hi Т-клеток памяти достигает исходного уже на 20-е сутки, а затем превосходит его. Предполагается, что по крайней мере частично такая ситуация является следствием фенотипической конверсии наивных Т-клеток, вступающих в гомеостатическую пролиферацию, в Т-клетки памяти центрального типа (CD62LhiCD44hi), о чем свидетельствует также повышение в ходе восстановительных процессов доли CD62LhiCD44hi-клеток, слабо экспрессирующих молекулу CD49d. Эти клетки рассматриваются как суррогатные Т-клетки памяти, с накоплением которых связывают развитие в последующем аутоиммунных процессов. Ключевые слова : Т-лимфоциты, лимфатические узлы, селезенка, ионизирующая радиация, гомеостатическая пролиферация, регенерация, проточная цитометрия IM-1305-247 ВЛИЯНИЕ КИССПЕПТИНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОЦИТОВ О.Л. Горбунова, С.В. Ширшев, С.А. Заморина Лаборатория иммунорегуляции ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения РАН, 614081, г. Пермь, ул. Голева, 13; тел. (342)2808431, факс (342)2809211; e-mail: olia15_77@mail.ru Исследовано влияние недавно открытого гормона кисспептина, который детектируется в периферической крови только в период беременности, на функциональную активность моноцитов. Выявлено, что кисспептин в концентрации, соответствующей III триместру беременности, стимулирует фагоцитарную активность моноцитов и во всех исследуемых концентрациях повышает продукцию активных форм кислорода в реакции спонтанной и стимулированной люминолзависимой хемилюминесценции. Показано, что кисспептин в концентрации, соответствующей II триместру беременности, понижает активность внутриклеточной миелопероксидазы (МПО) моноцитов, повышая при этом активность секреторной МПО и липополисахарида индуцированной индоламин-2,3-диоксигеназы. Таким образом, впервые показано, что ранее не учитываемый гормон кисспептин является важным регулятором функций моноцитов во время беременности. Ключевые слова : кисспептин, моноциты, фагоцитоз, люминолзависимая хемилюминесценция, миелопероксида-за, индоламин-2,3-диоксигеназа IM-1305-251 ПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ АУТОКРИННЫХ ФАКТОРОВ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ T-ЛИМФОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ ХИМИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ Г.В. Луценко, М.В. Гречихина, Л.Г. Дьячкова, А.М. Сапожников ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10 Исследовали влияние аутокринных факторов клеток цитотоксической линии CTLL2 на их жизнеспособность и энергетический метаболизм в условиях химической интоксикации, создаваемой с использованием азида натрия (NaN3) или хлорида кобальта (CoCl2). Показано, что аутокринные факторы, содержащиеся в 50% кондиционированной среде клеток CTLL-2, способны восстанавливать уровень АТФ в этих клетках, сниженный в условиях химической гипоксии, которая получена при их инкубации в течение 3 ч в присутствии 10 мМ NaN3 или 200 мкМ CoCl2. Результаты цитометрического анализа количества клеток CTLL-2, проведенного после 20 ч культивирования в условиях химической гипоксии (200 мкМ CoCl2), показали, что более 90% клеток подвергаются гибели по пути апоптоза или некроза. Добавление к клеткам 50% кондиционированной среды, богатой аутокринными факторами, снижало уровень погибших клеток до 10%. Сделан вывод о том, что аутокринные факторы цитотоксических клеток CTLL-2 в условиях химической гипоксии способны оказывать протективное действие на клетки за счет переключения энергетического метаболизма на анаэробный гликолиз. Ключевые слова : аутокринные факторы, цитотоксические Т-лимфоциты, химическая гипоксия, апоптоз, не-кроз, проточная цитометрия IM-1305-254 ВЛИЯНИЕ ПРОТИВОПАРКИНСОНИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ГИМАНТАН НА УРОВЕНЬ ЦИТОКИНОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ А.В. Таллерова, Е.А. Иванова, И.Г. Капица, Л.П. Коваленко, Е.А. Вальдман, Т.А. Воронина ФГБУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, 125315, г. Москва Известно, что воспаление способно провоцировать и усугублять развитие нейродегенеративных заболеваний. В посмертных образцах мозга пациентов с болезнью Паркинсона обнаруживают повышенный уровень провоспалительных цитокинов. При моделировании паркинсонического синдрома (ПС) у грызунов установлено, что введение токсинов, вирусных и бактериальных агентов в кору, гиппокамп, стриатум и черную субстанцию вызывает активацию микроглии, плотность которой в несколько раз больше в дофаминергических структурах мозга, что приводит к снижению концентрации дофамина в стриатуме и гибели дофаминергических нейронов. Данная работа посвящена изучению выраженности системной воспалительной реакции у крыс с двумя типами экспериментальной патологии – 6-гидроксидофамининдуцированным и липополисахаридиндуцированным ПС – и оценке влияния на нее нового противопаркинсонического препарата гимантан, а также исследованию действия препарата на острую воспалительную реакцию на модели конканавалин Аиндуцированного отека у мышей. Ключевые слова : болезнь Паркинсона, гимантан, воспаление, цитокины IM-1305-258 ФОРМИРОВАНИЕ И ПОДДЕРЖАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА НА ВАКЦИНАЦИЮ ПРИОРИКС А.П. Топтыгина1, Е.Л. Семикина2, В.А. Алешкин1 1Лаборатория цитокинов, ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, 125212, Москва, 2Объединенная клинико-диагностическая лаборатория ГУ Научный центр здоровья детей РАМН Двадцать детей (9 мальчиков и 11 девочек) в возрасте от 1 до 2 лет (группа 1) и 20 детей (10 мальчиков и 10 девочек) в возрасте от 6 до 7 лет (группа 2) были привиты (группа 1) или ревакцинированы (группа 2) тривалентной живой аттенуированой вакциной, содержащей вирусы кори, краснухи и эпидемического паротита, – Приорикс. Лимфоциты периферической крови (ЛПК) были изолированы на градиенте плотности до вакцинации, через 1 и 6 нед после и разделены на две части. Первую часть ЛПК окрашивали CFSE и инкубировали в присутствии антигенов вирусов кори или краснухи 8 дней. Вторую часть ЛПК инкубировали при тех же условиях 15 ч и метили CD8 (FITC) и CD107a (РЕСу5) антителами. Интенсивность флюоресценции оценивали с помощью проточного цитометра. В группе 1 антигены вирусов кори и краснухи не индуцировали митозов до вакцинации и через неделю после нее, как и в отрицательном контроле, однако через 6 нед более 40% ЛПК демонстрировали антигениндуцированную пролиферацию. Специфическая дегрануляция CD8highклеток также отсутствовала до вакцинации и через неделю после, но достигала 4– 5% через 6 нед после прививки. В группе 2, напротив, до прививки 27–28% ЛПК проходили 1–2 митоза. Через неделю специфическая пролиферация ЛПК снижалась, а через 6 нед достигала 40%. Специфическая CD8high пролиферация была около 2,5% до ревакцинации, повышалась до 3,5–4% через неделю и стабилизировалась на 3% через 6 нед. Показано, что оба использованных нами метода (антигениндуцированная пролиферация и дегрануляция CD8high ) способны выявлять антигенспецифические Т-клетки памяти, формирующиеся в ответ на прививку. Ключевые слова : Т-клетки памяти, специфический клеточный иммунный ответ, дегрануляция CD8high, про-лиферативная реакция Т-лимфоцитов IM-1305-257 ФОРМИРОВАНИЕ И ПОДДЕРЖАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА НА ВАКЦИНАЦИЮ ПРИОРИКС А.П. Топтыгина1, Е.Л. Семикина2, В.А. Алешкин1 1Лаборатория цитокинов, ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, 125212, Москва, 2Объединенная клинико-диагностическая лаборатория ГУ Научный центр здоровья детей РАМН Двадцать детей (9 мальчиков и 11 девочек) в возрасте от 1 до 2 лет (группа 1) и 20 детей (10 мальчиков и 10 де-вочек) в возрасте от 6 до 7 лет (группа 2) были привиты (группа 1) или ревакцинированы (группа 2) тривалентной живой аттенуированой вакциной, содержащей вирусы кори, краснухи и эпидемического паротита, – Приорикс. Лимфоциты периферической крови (ЛПК) были изолированы на градиенте плотности до вакцинации, через 1 и 6 нед после и разделены на две части. Первую часть ЛПК окрашивали CFSE и инкубировали в присутствии анти-генов вирусов кори или краснухи 8 дней. Вторую часть ЛПК инкубировали при тех же условиях 15 ч и метили CD8 (FITC) и CD107a (РЕ-Су5) антителами. Интенсивность флюоресценции оценивали с помощью проточного цитоме-тра. В группе 1 антигены вирусов кори и краснухи не индуцировали митозов до вакцинации и через неделю после нее, как и в отрицательном контроле, однако через 6 нед более 40% ЛПК демонстрировали антигениндуцированную пролиферацию. Специфическая дегрануляция CD8high-клеток также отсутствовала до вакцинации и через неделю после, но достигала 4–5% через 6 нед после прививки. В группе 2, напротив, до прививки 27–28% ЛПК проходили 1– 2 митоза. Через неделю специфическая пролиферация ЛПК снижалась, а через 6 нед достигала 40%. Специфическая CD8high пролиферация была около 2,5% до ревакцинации, повышалась до 3,5–4% через неделю и стабилизировалась на 3% через 6 нед. Показано, что оба использованных нами метода (антигениндуцированная пролиферация и дегрануляция CD8high ) способны выявлять антигенспецифические Т-клетки памяти, формирующиеся в ответ на прививку. Ключевые слова : Т-клетки памяти, специфический клеточный иммунный ответ, дегрануляция CD8high, про-лиферативная реакция Т-лимфоцитов IM-1305-262 ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ CD4+- И CD8+T-ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И СЕЛЕЗЕНКЕ У МЫШЕЙ ЛИНИИ ASC (ANTIDEPRESSANTS SENSITIVE CATALEPSY) С НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬЮ К ДЕПРЕССИВНО-ПОДОБНОМУ ПОВЕДЕНИЮ М.М. Геворгян1, Е.Л. Альперина1, А.В. Куликов2, Г.В. Идова1 1ФГБУ НИИ физиологии СО РАМН, г. Новосибирск, 630117, ул. Тимакова, 4; 2ФГБУН Институт цитологии и ге-нетики СО РАН, 630090, г. Новосибирск, пр. Лаврентьева, 10 Выявлены различия субпопуляционного состава периферической крови и селезенки у мышей линии ASC (Antidepres-sants Sensitive Catalepsy) с наследственно обусловленным депрессивноподобным поведением и мышей родительской линии CBA, не имеющей признаков депрессии. Мыши линии ASC характеризуются разнонаправленным изменением соотношения CD4+- и CD8+Tлимфоцитов до и после иммунизации: снижением индекса иммунореактивности у интактных животных и его увеличением в ответ на введение T-зависимого антигена (эритроциты барана). Ключевые слова : CD4+- и CD8+T-лимфоциты, проточная цитофлюорометрия, депрессивно-подобное поведение IM-1305-265 ВЛИЯНИЕ ВИРУСА ЭПШТЕЙНА–БАРР НА ИММУННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ В.В.Киреев, А.К. Джапаров, Д.А. Мусаходжаева Институт иммунологии АН РУз, 700060, г. Ташкент, Республика Узбекистан В данной работе показано, что в инфицированной синовиальной жидкости (СЖ) вирусом Эпштейна–Барр (ВЭБ) у больных ревматоидным артритом (РА) повышено относительное количество CD8+, CD16+ и CD20+ по сравнению с аналогичными показателями неинфицированной СЖ и нормой. А в неинфицированной ВЭБ СЖ у больных РА повышено относительное количество CD25+, CD95+, CDHLADR+ и уровень циркулирующих иммунных комплексов. Относительный уровень CD3+, CD4+, IgА, IgМ и IgG и степень снижения комплексов ФАН существенно не отличаются между собой в инфицированной и неинфицированной ВЭБ СЖ. Ключевые слова : ревматоидный артрит, вирус Эпштейна–Барр, синовиальная жидкость, иммунофенотипы лимфоцитов, иммуноглобулины IM-1305-267 ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОЗЫ И ИНСУЛИНА НА СЕКРЕЦИЮ ЦИТОКИНОВ МОНОНУКЛЕАРАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ IN VITRO И.В. Кологривова, Т.Е. Суслова, О.А. Кошельская, И.В. Винницкая, О.А. Трубачева ФГБУ Научно-исследовательский институт кардиологии СО РАМН, 634012, г. Томск Целью настоящего исследования стало изучение влияния разной концентрации инсулина и глюкозы на секрецию цитокинов с различными биологическими эффектами у здоровых лиц и пациентов с сахарным диабетом (СД) 2-го типа (СД2). Мы показали, что для пациентов с СД-2 характерно повышение содержания интерлейкина IL-4, IL-6, IL-10, фактора некроза опухоли α (TNFα) и IL-17A в сыворотке периферической крови. У здоровых лиц при высоком содержании глюкозы in vitro увеличивалась секреция IL-23, трансформирующего фактора роста β (TGFβ) и TNFα мононуклеарами. У пациентов с СД-2 повышение концентрации глюкозы в среде не оказывало влияния на секрецию цитокинов. При добавлении инсулина в физиологической концентрации в среду культивирования с глюкозой у здоровых лиц снижалась секреция IL-23, IL-6 и TGFβ мононуклеарами, в то время как клетки пациентов с СД-2 оказались инертными к воздействию инсулина. Ключевые слова : цитокины, сахарный диабет 2-го типа, глюкоза, инсулин IM-1305-271 МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АТРОФИИ ТИМУСА ПРИ СТРЕССЕ И.С. Старская1, 2, А.В. Полевщиков1–3 1НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, 197376, г. Санкт-Петербург; 2Санкт-Петербургский государ-ственный университет, 199034, г. Санкт-Петербург; 3Дальневосточный федеральный университет, 690950, г. Владивосток Несмотря на многолетнюю историю изучения тимуса, вопрос стрессиндуцированной атрофии тимуса является не до конца изученным и требует внимания. В обзоре подробно рассмотрен морфологический анализ тимуса в норме и при стрессе, включая изменения структуры органа, микроциркуляторного русла, состава клеточных популяций как непосредственно в ходе атрофии тимуса, так и при его восстановлении, а также представлены возможные механизмы, ответственные за стрессиндуцированную атрофию тимуса. Ключевые слова : тимус, атрофия, стресс, глюкокортикоиды, гистология IM-1305-277 ЕСТЕСТВЕННЫЕ АНТИТЕЛА КАК КЛЮЧЕВОЙ ЭЛЕМЕНТ МЕХАНИЗМА, ПОДДЕРЖИВАЮЩЕГО ГОМЕОСТАЗ В ИММУННОЙ СИСТЕМЕ М.М. Зиганшина1, Н.В. Бовин2, Г.Т. Сухих1 1ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздрава России, 117997, г. Москва; 2ФГУ Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, 117997, г. Москва Tак называемые естественные антитела (ЕАТ) являются частью гуморальной составляющей врожденного иммунитета, представленной в основном низкоаффинными антителами, присутствующими в организме без явной антигенной стимуляции. Мишенями ЕАТ являются как экзо-, так и эндогенные антигены, в том числе и бактериального происхождения, что определяет функцию ЕАТ как элементов первой линии иммунной защиты против патогенов. Кроме того, показано участие ЕАТ в клиренсе продуктов катаболизма. Уровень ЕАТ в крови довольно высок, а репертуар стабилен в течение всей жизни; отклонения свидетельствуют о развитии патологии. Все это указывает на важную роль ЕАТ в гомеостазе. ЕАТ являются важным регуляторным компонентом сети идиотипантиидиотипических взаимодействий, оказывающим стимулирующее или супрессорное влияние на все звенья иммунной системы. В обзоре рассматриваются гипотезы образования ЕАТ, их функции, роль в иммунном ответе, а также значение при некоторых патологиях. Ключевые слова : естественные антитела, тканевой гомеостаз, иммунорегуляция, идиотип-антиидиотипичес-кие взаимодействия, естественные скрытые антитела IM-1305-282 ОПУХОЛЕВЫЕ МОДЕЛИ В ИЗУЧЕНИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И.В. Холоденко, И.И. Доронин, Р.В. Холоденко ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, г. Москва Рак наряду с сердечнососудистыми и цереброваскулярными заболеваниями, является наиболее опасной патологией в современном мире. Для изучения молекулярных механизмов развития онкологических заболеваний и разработки новых противораковых агентов крайне важными являются исследования, проводимые на животных моделях. Такие модели должны быть максимально релевантны соответствующему заболеванию человека, для того, чтобы протестированные на них препараты после попадания в клинику были не только эффективны, но и безопасны. В представленном обзоре собрана информация о наиболее актуальных в доклинических исследованиях мышиных моделях онкологических заболеваний, их недостатках и преимуществах. Ключевые слова : онкологические заболевания, мышиные модели, рак