ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1 3 ÔÈÇÈÎËÎÃÈß ÓÄÊ 612.821.2+612.434.018+591.51 ÂËÈßÍÈÅ ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÎÃÎ ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÃÎ ÀÍÀËÎÃÀ ÀÂÏ(6-9) — Ac-D-SPRG ÍÀ ÎÐÈÅÍÒÈÐÎÂÎ×ÍÎ-ÈÑÑËÅÄÎÂÀÒÅËÜÑÊÎÅ ÏÎÂÅÄÅÍÈÅ È ÓÐÎÂÅÍÜ ÒÐÅÂÎÆÍÎÑÒÈ ÁÅËÛÕ ÊÐÛÑ À.Ñ. Áåëÿêîâà, Î.Ã. Âîñêðåñåíñêàÿ, À.À. Êàìåíñêèé, Â.Ï. Ãîëóáîâè÷* (êàôåäðà ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ; e-mail: alixletter@yandex.ru) Èçó÷åíî âëèÿíèå ñèíòåòè÷åñêîãî ñòðóêòóðíîãî àíàëîãà àðãèíèí-âàçîïðåññèíà Ac-D-SPRG íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è óðîâåíü òðåâîæíîñòè áåëûõ êðûñ. Ac-DSPRG ââîäèëè èíòðàíàçàëüíî â äîçàõ 0,01; 0,1; 1,0 è 10,0 ìêã/êã â îáúåìå 1 ìêë/10 ã ìàññû òåëà çà 5 ìèí äî òåñòèðîâàíèÿ. Àc-D-SPRG âî âñåõ äîçàõ âûçûâàë óãíåòåíèå îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîé ðåàêöèè (ÎÈÐ) è ïîâûøåíèå óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. Ïðîòèâîðå÷èâûå ëèòåðàòóðíûå äàííûå íå äàþò âîçìîæíîñòè îäíîçíà÷íî ãîâîðèòü î ìåõàíèçìàõ, ëåæàùèõ â îñíîâå ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè è ÎÈÐ ñî ñòîðîíû ÀÂÏ, íî, áåçóñëîâíî, ïîäòâåðæäàþò ó÷àñòèå äàííîãî ãîðìîíà â ýòîì ïðîöåññå. Êëþ÷åâûå ñëîâà: íåéðîôèçèîëîãèÿ, àðãèíèí-âàçîïðåññèí, òðåâîæíîñòü, ôàðìàêîëîãèÿ, ðåãóëÿòîðíûå ïåïòèäû. Ðåãóëÿòîðíûå ïåïòèäû âûçûâàþò áîëüøîé èíòåðåñ ó ñîâðåìåííûõ èññëåäîâàòåëåé.  ÷àñòíîñòè, â íàñòîÿùåå âðåìÿ óñòàíîâëåí öåëûé ðÿä íåéðîïåïòèäîâ, èãðàþùèõ ðîëü íåéðîìåäèàòîðîâ è íåéðîìîäóëÿòîðîâ [1]. Ýòî ãèïîòàëàìè÷åñêèå ãîðìîíû (ëþëèáåðèí, òèðîëèáåðèí, ìåëàíîñòàòèí, ñîìàòîñòàòèí è äð.), íåêîòîðûå òàõèêèíèíû (âåùåñòâî Ð, íåéðîòåíçèí è äð.), áîìáåçèíîïîäîáíûå ïåïòèäû, àíãèîòåíçèí, à òàêæå ãèïîôèçàðíûå ãîðìîíû: âàçîïðåññèí, îêñèòîöèí, êîðòèêîòðîïèí è äð. Ýòè ãîðìîíû, êàê ñòàëî èçâåñòíî ñ ñåðåäèíû 60-õ ãã. ÕÕ â., îáëàäàþò, ïîìèìî ñâîåé ñïåöèôè÷åñêîé ãîðìîíàëüíîé àêòèâíîñòè, ðÿäîì ýêñòðàãîðìîíàëüíûõ ýôôåêòîâ [2]. Îäíèì èç ïðåäñòàâëÿþùèõ íàèáîëüøèé èíòåðåñ ãîðìîíîâ ïåïòèäíîé ïðèðîäû ÿâëÿåòñÿ àðãèíèí-âàçîïðåññèí (ÀÂÏ), ñèíòåçèðóþùèéñÿ â çàäíåé äîëå ãèïîôèçà. Ïîìèìî ïåðèôåðè÷åñêîãî äåéñòâèÿ, îí âûçûâàåò ðÿä öåíòðàëüíûõ ýôôåêòîâ, ìîäóëèðóÿ ïðîöåññû îáó÷åíèÿ è ïàìÿòè è îòâåòíûå ðåàêöèè îðãàíèçìà íà äåéñòâèå ñòðåññîãåííûõ ôàêòîðîâ [3]. Èçâåñòíî, ÷òî àðãèíèí-âàçîïðåññèí ðàñïàäàåòñÿ â îðãàíèçìå íà íåñêîëüêî ëèíåéíûõ ôðàãìåíòîâ, è äàííûå ïðîäóêòû ïðîòåîëèçà îáëàäàþò íåéðîòðîïíîé àêòèâíîñòüþ, êîòîðàÿ íå óñòóïàåò (à çà÷àñòóþ è ïðåâîñõîäèò) àêòèâíîñòü öåëîé ìîëåêóëû ÀÂÏ â îòíîøåíèè ñòèìóëÿöèè ïîâåäåíèÿ, óëó÷øåíèÿ îáó÷åíèÿ è ïàìÿòè [3]. Ïðè àíàëèçå ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ â íàøåé ëàáîðàòîðèè ïðè èññëåäîâàíèè ðàçëè÷íûõ ôðàã- ìåíòîâ àðãèíèí-âàçîïðåññèíà, áûëî âûäâèíóòî ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî äëÿ ñîõðàíåíèÿ ó àíàëîãà ïîâåäåí÷åñêîé àêòèâíîñòè íåîáõîäèìà ñëåäóþùàÿ îñíîâíàÿ ñòðóêòóðà: Z6-Pro7-Arg8-Gly9-NH2 (ãäå Z — àìèíîêèñëîòíûé îñòàòîê). Òàêèì îáðàçîì, äëÿ ïîëó÷åíèÿ àíàëîãà ÀÂÏ(6-9), îáëàäàþùåãî âûðàæåííûì íîîòðîïíûì ýôôåêòîì, áûëî öåëåñîîáðàçíî ñèíòåçèðîâàòü ïåïòèä ñ çàìåíîé Cys6 íà äðóãóþ àìèíîêèñëîòó, ñïîñîáñòâóþùóþ ïîâûøåíèþ åãî óñòîé÷èâîñòè ê ïðîòåîëèçó. Íà îñíîâàíèè êîíôîðìàöèîííîãî àíàëèçà, ïðîâåäåííîãî ïðîôåññîðîì Â.Ï. Ãîëóáîâè÷åì â Èíñòèòóòå áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, áûë ñèíòåçèðîâàí òåòðàïåïòèä Ac-D-Met6-Pro7-Arg8Gly9-NH2. Ïî äàííûì Í.Ñ. Ïîíîìàðåâîé, äàííûé òåòðàïåïòèä îáëàäàåò ÿðêî âûðàæåííûì íîîòðîïíûì äåéñòâèåì, îí óëó÷øàåò âîñïðèÿòèå èíôîðìàöèè è ñïîñîáñòâóåò êîíñîëèäàöèè ïàìÿòíîãî ñëåäà [4]. Êðîìå òîãî, îí óñèëèâàåò îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è ñíèæàåò ýìîöèîíàëüíîñòü æèâîòíûõ [5]. Îí òàêæå îáëàäàåò àíêñèîëèòè÷åñêèì è àíòèäåïðåññàíòíûì äåéñòâèåì [6, 7]. Ñëåäóþùèì àíàëîãîì ÀÂÏ(6-9), ñèíòåçèðîâàííûì â èíñòèòóòå áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, áûë òåòðàïåïòèä Ac-D-Ser6-Pro7-Arg8-Gly9-NH2 (Ac-D-SPRG). Öåëüþ íàøåé ðàáîòû áûëî èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ îñòðîãî ââåäåíèÿ òåòðàïåïòèäà Ac-D-SPRG íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è óðîâåíü òðåâîæíîñòè áåëûõ êðûñ. * Èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, Ðåñïóáëèêà Áåëàðóñü. 2 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1 4 ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1 Ìàòåðèàëû è ìåòîäû èññëåäîâàíèÿ Ðàáîòà ïðîâîäèëàñü íà ïîëîâîçðåëûõ ñàìöàõ íåëèíåéíûõ áåëûõ êðûñ ìàññîé 220—250 ã, â êàæäîé ãðóïïå áûëî èñïîëüçîâàíî â ñðåäíåì ïî 18 æèâîòíûõ. Ac-D-SPRG ââîäèëè èíòðàíàçàëüíî â äîçàõ 0,01; 0,1; 1,0 è 10,0 ìêã/êã â îáúåìå 1 ìêë/10 ã ìàññû òåëà çà 5 ìèí äî òåñòèðîâàíèÿ. Êîíòðîëüíûì æèâîòíûì ââîäèëè ýêâèâàëåíòíûé îáúåì ðàñòâîðèòåëÿ (äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà). Èíòðàíàçàëüíûé ñïîñîá ââåäåíèÿ áûë âûáðàí ñ öåëüþ áîëåå áûñòðîé äîñòàâêè ïåïòèäà â ãîëîâíîé ìîçã, ìèíóÿ ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêèé áàðüåð. Êðîìå òîãî, ýòîò ñïîñîá ââåäåíèÿ íàèìåíåå ñòðåññîãåííûé, ÷òî ÿâëÿåòñÿ âàæíûì äëÿ èññëåäîâàíèÿ ïîâåäåí÷åñêèõ ðåàêöèé æèâîòíûõ. Îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå æèâîòíûõ èññëåäîâàëè â òåñòàõ “îòêðûòîå ïîëå” (“áåññòðåññîðíàÿ” è “ñòðåññîãåííàÿ” ìîäèôèêàöèè) è “íîðêîâàÿ êàìåðà”. Ïðè òåñòèðîâàíèè â “îòêðûòîì ïîëå” æèâîòíîå ïîìåùàëè â öåíòð àðåíû è â òå÷åíèå 2 ìèí (êàæäûå 30 ñ) âèçóàëüíî îöåíèâàëè ãîðèçîíòàëüíóþ è âåðòèêàëüíóþ äâèãàòåëüíóþ àêòèâíîñòü, êîëè÷åñòâî îòõîäîâ îò ñòåíêè àðåíû è êîëè÷åñòâî âûõîäîâ â öåíòð àðåíû, óðîâåíü ãðóìèíãà. Îïûòû ïðîâîäèëè â òèøèíå ïðè ñâåòå êðàñíîé ëàìïû â áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè, à â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè âìåñòî êðàñíîé ëàìïû íàä àðåíîé ïîìåùàëè ëàìïó ìîùíîñòüþ 200 Âò è èñïîëüçîâàëè ýëåêòðè÷åñêèé çâîíîê.  òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà” êðîìå ãîðèçîíòàëüíîé è âåðòèêàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè è ãðóìèíãà ðåãèñòðèðîâàëè õàðàêòåðíóþ äëÿ êðûñ èññëåäîâàòåëüñêóþ àêòèâíîñòü, à èìåííî êîëè÷åñòâî îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé â ïîëó àðåíû. Ðåãèñòðàöèþ ïðîâîäèëè âèçóàëüíî â òå÷åíèå òðåõ ìèíóò â òèøèíå ïðè ñâåòå êðàñíîé ëàìïû. Óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ èññëåäîâàëè â òåñòàõ “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò” è “ñâåòëàÿ-òåìíàÿ êàìåðà”.  “ïðèïîäíÿòîì êðåñòîîáðàçíîì ëàáèðèíòå” â òå÷åíèå òðåõ ìèíóò ðåãèñòðèðîâàëè îáùåå âðåìÿ íàõîæäåíèÿ íà ñâåòó, ëàòåíòíûé ïåðèîä çàõîäà â çàêðûòûé ðóêàâ, êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà, êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà ïåðâóþ èëè âòîðóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà, êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ èç îäíîãî òåìíîãî îòñåêà â äðóãîé, êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ èç îäíîãî ñâåòëîãî îòñåêà â äðóãîé, îáùåå êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ, êîëè÷åñòâî ñâåøèâàíèé ñ îòêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâî âûãëÿäûâàíèé èç çàêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, âåðòèêàëüíóþ äâèãàòåëüíóþ àêòèâíîñòü è ãðóìèíã.  òåñòå “ñâåòëàÿ-òåìíàÿ êàìåðà” â òå÷åíèå 3 ìèí âèçóàëüíî ðåãèñòðèðîâàëè ñóììàðíîå âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â ñâåòëîì îòñåêå, ëàòåíòíûé ïåðèîä ïåðåõîäà â òåìíûé îòñåê, êîëè÷åñòâî ñòîåê â ñâåòëîì è òåìíîì îòñåêàõ, êîëè÷åñòâî âûãëÿäûâàíèé èç òåìíîãî îòñåêà, êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûì è òåìíûì îòñåêàìè, ãðóìèíã â ñâåòëîì îòñåêå. Ïðè îáðàáîòêå äàííûõ èñïîëüçîâàëè ñòàíäàðòíûå ìåòîäû ñòàòèñòè÷åñêîãî àíàëèçà. Ïðè ñðàâíåíèè ïîëó÷åííûõ ìàññèâîâ äàííûõ èñïîëüçîâàëè êðèòåðèé Ñòüþäåíòà (ïàðàìåòðè÷åñêèé êðèòåðèé), à òàêæå òî÷íûé êðèòåðèé Ôèøåðà è c2 (íåïàðàìåòðè÷åñêèå êðèòåðèè). Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîèçâîäèëàñü ñ ïîìîùüþ ïàêåòà ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì Statistica 5.0 è ñðåäñòâ Microsoft Excel. Ðåçóëüòàòû  áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå ïîëå” ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà Ac-D-SPRG â äîçå 0,01 ìêã/êã íå îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà ïîâåäåíèå æèâîòíûõ. Ïðè ââåäåíèè äàííîãî ïðåïàðàòà â äîçå 0,1 ìêã/êã áûëî çàðåãèñòðèðîâàíî óâåëè÷åíèå ïðîäîëæèòåëüíîñòè ëàòåíòíîãî ïåðèîäà âûõîäà çà ïðåäåëû öåíòðàëüíîãî ñåêòîðà. Ââåäåíèå ïðåïàðàòà â äîçå 1,0 ìêã/êã ïðèâåëî ê óâåëè÷åíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê ó æèâîòíûõ îïûòíîé ãðóïïû. Âåùåñòâî â äîçå 10 ìêã/êã íå îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå æèâîòíûõ. Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî íàáëþäàëîñü äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíîé ãðóïïå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè.  ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå ïîëå” ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äîçàõ 1,0 è 0,01 ìêã/êã íå âûçûâàëî èçìåíåíèé ïàðàìåòðîâ îðèåíòèðîâî÷íîèññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ. Îäíàêî íàáëþäàëîñü äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíûõ ãðóïïàõ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè, ÷òî ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü îá óñèëåíèè ïàññèâíî-îáîðîíèòåëüíîé ðåàêöèè íà ôîíå ïîâûøåííîé òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííûõ óñëîâèÿõ.  äîçå 0,1 ìêã/êã ïðåïàðàò ïðèâîäèë ê ïîâûøåíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê. Ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äîçå 10 ìêã/êã ïðèâåëî ê óìåíüøåíèþ äëèíû ïðîáåãà â îïûòíîé ãðóïïå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ñíèæåíèè äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ (ðèñ. 1). Ïðè ýòîì òàêæå íàáëþäàëîñü äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà îòõîäîâ îò ñòåí- Ðèñ. 1. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG â äîçå 10 ìêã/êã íà äâèãàòåëüíóþ àêòèâíîñòü æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå ïîëå”. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî çâåçäî÷êîé (p < 0,05) ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1 Ðèñ. 2. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå æèâîòíûõ â òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà”: À — êîëè÷åñòâî ñòîåê, Á — êîëè÷åñòâî îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî: çâåçäî÷êîé ïðè p < 0,05, äâóìÿ çâåçäî÷êàìè ïðè p < 0,01 êè àðåíû â îïûòíîé ãðóïïå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé, ÷òî ÿâëÿåòñÿ ïîêàçàòåëåì ïîâûøåííîé òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ.  òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà” áûëî çàðåãèñòðèðîâàíî âûðàæåííîå óãíåòåíèå îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ ïðè ââåäåíèè Àc-D-SPRG â äîçàõ 0,01; 0,1 è 10,0 ìêã/êã (ðèñ. 2). Íàèáîëåå âûðàæåííûé ýôôåêò â îòíîøåíèè âèäîñïåöèôè÷åñêîé èññëåäîâàòåëüñêîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ — êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé — íàáëþäàëñÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðåïàðàòà â äîçå 0,01 ìêã/êã (ðèñ. 2, Á). Ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äàííîì ñëó÷àå ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé êàê íà ïåðâûõ äâóõ ìèíóòàõ òåñòà, òàê è ñóììàðíî. Ïðåïàðàò â äîçå 0,1 ìêã/êã âûçûâàë ñíèæåíèå êàê ãîðèçîíòàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè íà ïðîòÿæåíèè âñåãî âðåìåíè òåñòèðîâàíèÿ, òàê è ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà èññëåäîâàííûõ îòâåðñòèé.  äîçå 1,0 ìêã/êã Ac-D-SPRG íå îêàçûâàë çíà÷èìîãî âëèÿíèÿ íà ïîâåäåíèå æèâîòíûõ â äàííîì òåñòå. Ïðè ââåäåíèè ïðåïàðàòà â äîçå 10,0 ìêã/êã âåðòèêàëüíàÿ àêòèâíîñòü æèâîòíûõ ñíèæàëàñü íà ïðîòÿæåíèè âñåãî âðåìåíè òåñòèðîâàíèÿ (ðèñ. 2, À), íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå ÷èñëà èññëåäîâàííûõ îòâåðñòèé íà òðåòüåé ìèíóòå ýêñïåðèìåíòà. Òàêæå çàðåãèñòðèðîâàíî äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíîé ãðóïïå.  òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò” ïðè ââåäåíèè Ac-D-SPRG â äîçå 0,01 ìêã/êã íàáëþ3 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1 5 äàëîñü ïîâûøåíèå óðîâíÿ òðåâîæíîñòè, âûðàæåííîå â äîñòîâåðíîì óìåíüøåíèè êîëè÷åñòâà ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûìè îòñåêàìè ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ è âòîðóþ ïîëîâèíû ñâåòëîãî ðóêàâà (ðèñ. 3).  äîçå 0,1 ìêã/êã Ac-D-SPRG íå îêàçûâàë çíà÷èìîãî âëèÿíèÿ íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ â äàííîì òåñòå. Ïðè ââåäåíèè Ac-D-SPRG â äîçå 1,0 ìêã/êã íàáëþäàëîñü äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå âðåìåíè, ïðîâåäåííîãî æèâîòíûì íà ñâåòó, ÷èñëà ñâåøèâàíèé ñ îòêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà è êîëè÷åñòâà ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûìè îòñåêàìè ëàáèðèíòà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîâûøåííîì óðîâíå òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ (ðèñ. 3, À). Ïðåïàðàò â äîçå 10,0 ìêã/êã âûçûâàë äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê è êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà ëàáèðèíòà (ðèñ. 3, Á). Íàáëþäàâøååñÿ äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â äàííîì ñëó÷àå, ïî-âèäèìîìó, ñâèäåòåëüñòâóåò îá ýìîöèîíàëüíîé çàòîðìîæåííîñòè æèâîòíûõ ïðè ïîâûøåííîì óðîâíå òðåâîæíîñòè. Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå äàííîãî òåòðàïåïòèäà âî âñåõ èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ ïðèâîäèëî ê ïîâûøåíèþ óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, âûðàæåííîìó â ñíèæåíèè âðåìåíè ïðåáûâàíèÿ íà ñâåòó, ñíèæåíèè âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè è êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà ëàáèðèíòà. Ðèñ. 3. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè êðûñ â òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò”: À — âðåìÿ, ïðîâåäåííîå íà ñâåòó, Á — êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà ëàáèðèíòà. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî çâåçäî÷êîé (p < 0,05) 6 ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1 Ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ïðè òåñòèðîâàíèè æèâîòíûõ â “ñâåòëîé-òåìíîé êàìåðå”, íå ïîçâîëÿþò îäíîçíà÷íî ñóäèòü î íàïðàâëåííîñòè äåéñòâèÿ AcD-SPRG â èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, à òàêæå íà äðóãèå ïîêàçàòåëè, ðåãèñòðèðóåìûå â äàííîì òåñòå. Òàê, ñóììàðíîå êîëè÷åñòâî ñòîåê çíà÷èìî èçìåíÿëîñü òîëüêî ó æèâîòíûõ, êîòîðûì ââîäèëè Ac-DSPRG â äîçå 10,0 ìêã/êã (ñíèæàëîñü), â òî âðåìÿ êàê â îñòàëüíûõ äîçàõ âëèÿíèÿ íà äàííûé ïàðàìåòð âûÿâëåíî íå áûëî. Îäíàêî äëÿ ïîêàçàòåëÿ âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ â ñâåòëîì îòñåêå êàìåðû òàêàÿ êàðòèíà íå ñîõðàíÿåòñÿ.  ýòîì ñëó÷àå çíà÷èìûå îòëè÷èÿ íàáëþäàþòñÿ äëÿ ìàëûõ äîç (0,01 è 0,1 ìêã/êã); ïðè ýòîì ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ Ac-D-SPRG â äîçå 0,01 ìêã/êã, âåðòèêàëüíàÿ àêòèâíîñòü â ñâåòëîì îòñåêå êàìåðû çíà÷èìî âîçðàñòàåò, à ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò â äîçå 0,1 ìêã/êã, íàîáîðîò, ñíèæàåòñÿ. Äëÿ áîëüøèõ äîç çíà÷èìûõ îòëè÷èé çàðåãèñòðèðîâàíî íå áûëî, îäíàêî ýôôåêò òàêæå íå áûë îäíîíàïðàâëåííûì äëÿ ðàçíûõ äîç. Âðåìÿ ïðåáûâàíèÿ æèâîòíûõ íà ñâåòó çíà÷èìî èçìåíÿëîñü (ñíèæàëîñü) òîëüêî â ãðóïïå æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ Ac-D-SPRG â äîçå 0,1 ìêã/êã. Äëÿ äðóãèõ äîç äîñòîâåðíûõ èçìåíåíèé çàðåãèñòðèðîâàíî íå áûëî. Êîëè÷åñòâî óìûâàíèé çíà÷èìî ñíèæàëîñü â ãðóïïàõ æèâîòíûõ, ïîëó÷èâøèõ Ac-D-SPRG â äîçàõ 1,0 è 10,0 ìêã/êã. Îáñóæäåíèå ðåçóëüòàòîâ Ðåçóëüòàòû ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ ïîêàçàëè, ÷òî èíòðàíàçàëüíîå ââåäåíèå Àc-D-SPRG â äîçàõ 10,0; 1,0; 0,1 è 0,01 ìêã/êã âûçûâàëî óãíåòåíèå îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ, êîòîðîå áûëî íàèáîëåå âûðàæåíî â òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà”: ââåäåíèå Àc-D-SPRG ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó óìåíüøåíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê è êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Ïî ëèòåðàòóðíûì äàííûì [8], ñàì ãîðìîí àðãèíèí-âàçîïðåññèí ïðè âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè çà 1 ÷ äî òåñòèðîâàíèÿ â “íîðêîâîé êàìåðå” â äîçå 0,001 ìã/êã ïîâûøàë êîëè÷åñòâî îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Íàøå èññëåäîâàíèå ïðîäåìîíñòðèðîâàëî, ÷òî Ac-D-SPRG â äîçàõ 10; 1,0; 0,1 è 0,01 ìêã/êã îêàçûâàåò îáðàòíîå äåéñòâèå. Ââåäåíèå Ac-D-SPRG íå îêàçûâàëî çíà÷èòåëüíîãî âëèÿíèÿ íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå â áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè òåñòà, îäíàêî ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ ãîðèçîíòàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà. Ýòî èçìåíåíèå, ïî-âèäèìîìó, ñâÿçàíî ñ ïîâûøåííûì óðîâíåì òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ïåïòèä, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ â ðåàêöèè çàòàèâàíèÿ êðûñ â ñòðåññîãåííûõ óñëîâèÿõ. Î ïîâûøåííîì óðîâíå òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ ñâèäåòåëüñòâóåò òàêæå ñíèæåíèå âðåìåíè ïðåáûâàíèÿ íà ñâåòó, ñíèæåíèå âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè è êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà “ïðèïîäíÿòîãî êðåñòîîáðàçíîãî ëàáèðèíòà”, íàáëþäàåìûå ïðè ââåäåíèè ïåïòèäà âî âñåõ èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ. Ïðîòèâîðå÷èâûå ëèòåðàòóðíûå äàííûå íå äàþò âîçìîæíîñòè îäíîçíà÷íî ãîâîðèòü î ìåõàíèçìàõ, ëåæàùèõ â îñíîâå ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè ñî ñòîðîíû ÀÂÏ, íî, áåçóñëîâíî, ïîäòâåðæäàþò ó÷àñòèå äàííîãî ãîðìîíà â ýòîì ïðîöåññå. Ïðîåêöèè îò ÀÂÏ-ñèíòåçèðóþùèõ êëåòîê íàïðàâëÿþòñÿ â ïåðåäíèé ìîçã, â ÷àñòíîñòè â ëàòåðàëüíóþ îáëàñòü ñåïòóìà. Çäåñü ñîäåðæèòñÿ ãóñòàÿ ñåòü ÂÏ-ñîäåðæàùèõ âîëîêîí [9]. Ïîâðåæäåíèÿ ýòîé çîíû ìîçãà ñíèæàþò óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. ÀÂÏ, âûäåëÿþùèéñÿ â ñåïòóìå, ó÷àñòâóåò â ôîðìèðîâàíèè ýìîöèîíàëüíîãî ñòàòóñà (ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè è ñòðàõà [10]). Èìåþùèåñÿ ëèòåðàòóðíûå äàííûå îòðèöàþò ó÷àñòèå V1b-ðåöåïòîðîâ â ðåãóëÿöèè òðåâîæíîñòè [11]. Îäíàêî ðÿäîì àâòîðîâ [12, 13] áûëî ïîêàçàíî, ÷òî èñïîëüçîâàíèå àíòàãîíèñòà V1a-ðåöåïòîðîâ èìååò àíêñèîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå, ÷òî áûëî ïðîäåìîíñòðèðîâàíî â òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò”. Ïîëó÷åííûå íàìè ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî çàìåíà àìèíîêèñëîòíîãî îñòàòêà Cys6 â ìîëåêóëå ÀÂÏ(6-9) íà D-Ser ïðèâåëà ê ñíèæåíèþ îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ è ïîâûøåíèþ óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. Ñëåäîâàòåëüíî, ìû ìîæåì ïðåäïîëîæèòü, ÷òî Ac-D-SPRG ÿâëÿåòñÿ àãîíèñòîì V1a ðåöåïòîðîâ ÀÂÏ. Òàêèì îáðàçîì, èñõîäÿ èç ïîëó÷åííûõ â íàøèõ ýêñïåðèìåíòàõ ðåçóëüòàòîâ, ìîæíî ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå, ÷òî çàìåíà àìèíîêèñëîòíîãî îñòàòêà â 4-ì ïîëîæåíèè ìîëåêóëû ÀÂÏ(6-9) ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü ñîçäàíèþ íîâûõ ïåïòèäíûõ ñîåäèíåíèé ñ îïðåäåëåííûì çàäàííûì ôèçèîëîãè÷åñêèì äåéñòâèåì. * * * Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ïîääåðæêå ÔÖÏ “Íàó÷íûå è íàó÷íî-ïåäàãîãè÷åñêèå êàäðû èííîâàöèîííîé Ðîññèè” íà 2009—2013 ãã. (¹ Ï1057). ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ 1. Herbert E. Discovery of pro-opiomelanocortin-cellular polyprotein // Trends in Biochemical Sciences. 1981. Vol. 6. P. 184—188. 2. de Wied D. The influence of the posterior and inter-mediate lobe of the pituitary and pituitary peptides on the maintenance of a conditioned avoidance response in rats // International Journal of Neuropharmacology. 1965. Vol. 4. N 3. P. 157—167. 3. Burbach J.P., Kovacs G.L., de Wied D., van Nispen J.W., Greven H.M. A major metabolite of arginine vaso- ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1 pressin in the brain is a highly potent neuropeptide // Science. 1983. Vol. 221. P. 1310—1312. 4. Ïîíîìàðåâà Í.Ñ., Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À. Âëèÿíèå îðèãèíàëüíîãî àíàëîãà Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà âàçîïðåññèíà íà ïîâåäåíèå áåëûõ êðûñ // Æóðí. ÂÍÄ. 1998. Ò. 48. ¹ 3. Ñ. 471—477. 5. Ïîíîìàðåâà Í.Ñ., Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À. Óëó÷øåíèå ñåëåêòèâíîãî âîñïðèÿòèÿ è îáó÷åíèÿ êðûñ îðèãèíàëüíûì àíàëîãîì Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà âàçîïðåññèíà // Ôèçèîë. æóðí. 1998. Ò. 84. ¹ 12. Ñ. 1363—1369. 6. Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À., Ãîëóáîâè÷ Â.Ï. Íåéðîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü ñèíòåòè÷åñêîãî àíàëîãà Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà àðãèíèí-âàçîïðåññèíà // News of Biomedical Sciences ÍÀÍ Áåëàðóñè. 2004. ¹ 1. Ñ. 72—78. 7. Voskresenskaya O.G., Golubovich V.P., Kamensky A.A. Prenatal administration of analog of AVP(6-9) — Ac-D-MPRG influences on the postpound behavior in white rats // Abstracts of the 21st Congress of the European College of Neuropsychopharmacology, August 20—September 3, 2008. Barcelona, 2008. 8. Íèêîíîâà À.Á., Ìàêàðîâà Í.Â., Òèòîâ Ñ.À. Èçáèðàòåëüíîå ñòèìóëèðîâàíèå âàçîïðåññèíîì èññëåäîâàòåëü- 7 ñêîãî ïîâåäåíèÿ ó êðûñ // Æóðí. ÂÍÄ. 1987. Ò. 37. ¹ 3. Ñ. 570—572. 9. de Vries G.J., Miller M.A. Anatomy and function of extrahypothalamic vasopressin system in the brain // Prod. Brain Res.1998. Vol. 119. P. 3—20. 10. de Vries G.J., Buijs R.M. The origin of the vasopressinergic and oxitocinergic innervation of the rat brain with special reference to the lateral captum // Brain. Res. 1983. Vol. 273. N 2. P. 307—317. 11. Stemmelin J., Lukovic L., Salome N., Griebel G. Evidence that the lateral septum is involved in the antidepressant-like effects of the vasopressin V1b receptor antagonist, SSR149415 // Neuropsychopharmacology. 2005. Vol. 30. N 1. P. 35—42. 12. Landgraf R. Intracerebrally released vasopressin and oxitocin (measurement, mechanism and behavioural consequences) // J. Neuroendocrinol. 1995. P. 243—253. 13. Everts H.G.J., Koolhaas J.M. Differential modulation of lateral septal vasopressin receptor blockade in spatial-learning, social recognition, and anxiety-related behavior in rats // Behav. Brain Res. 1999. Vol. 99. P. 7—16. Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ 13.12.10 INFLUENCE OF ORIGINAL STRUCTURAL ANALOGUE AVP(6-9), Ac-D-SPRG, ON EXPLORATORY ACTIVITY AND LEVEL OF ANXIETY OF WHITE RATS A.S. Belyakova, O.G. Voskresenskaya, A.A. Kamensky, V.P. Golubovich The influence of synthetic structural analogue of arginine-vasopressin (AVP) Ac-D-SPRG on orientation and exploratory activity and level of anxiety of white rats was studied. The c-D-SPRG was injected nasally in doses of 0,01; 0,1; 1,0 and 10,0 mg/kg in volume of 1 ml per 10 g of body weight 5 min before the testing. The analogue caused depression of orientation and exploratory activity (OEA) and increase of anxiety level in animals. The contradictory literature data give no opportunity to conclude unambiguously on mechanisms underlying bases of regulation of anxiety level and OEA from AVP but nevertheless confirm the participation of this hormone in given process. Key words: neurophysiology, arginine-vasopressin, anxiety, pharmacology, regulatory peptides. Ñâåäåíèÿ îá àâòîðàõ Áåëÿêîâà Àëåêñàíäðà Ñåðãååâíà — èíæåíåð-ëàáîðàíò, ñîèñêàòåëü êàôåäðû ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-28-95; e-mail: alixletter@yandex.ru Âîñêðåñåíñêàÿ Îëüãà Ãåîðãèåâíà — êàíä. áèîë. íàóê, ñò. íàó÷. ñîòð. êàôåäðû ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-28-95; e-mail: voskresenskaya05@mail.ru Êàìåíñêèé Àíäðåé Àëåêñàíäðîâè÷ — äîêò. áèîë. íàóê, ïðîô., çàâ. êàôåäðîé ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-33-55; e-mail: kamensky_msu@mail.ru Ãîëóáîâè÷ Âëàäèìèð Ïåòðîâè÷ — äîêò. áèîë. íàóê, ïðîô., çàâ. ëàáîðàòîðèåé ïðèêëàäíîé áèîõèìèè ÃÍÓ èíñòèòóòà áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè. E-mail: golubovich@iboch.bas-net.by 4 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1