Мутации KRAS и BRAF как биологические маркеры чувствительности к анти-EGFR терапии пациентов с онкологическими заболеваниями Колоректальный рак является широко распространенной в мире патологией, ежегодная заболеваемость достигает 1 миллиона случаев, а ежегодная смертность превышает 500 000. Колоректальный рак занимает второе место по смертности от злокачественных новообразований среди мужчин и женщин. Причем большое количество случаев заболевания относится к метастазной форме рака (mCRC). В настоящее время терапия пациентов с колоректальным раком основывается на использовании таргетных моноклональных антител, которые блокируют рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), в сочетании с традиционными хемотерапевтическими агентами. EGFR представляет собой трансмембранный рецептор тирозин-зависимой киназы, контролирующий запуск каскада фосфорилирований, передающих сигнал от клеточной мембраны к ядру клетки, что играет ключевую роль в клеточном росте, дифференцировке, адгезии и апоптозе. Дезрегуляция этого сигнального пути приводит к онкогенезу. Таким образом, EGFR является объектом направленной антиопухолевой терапии препаратами нового поколения на основе моноклональных антител. К таким препаратам относятся Bevacizumab (Avastin®), Cetuximab (Erbitux®), Panitumumab (Vectibix™). В многочисленных исследованиях было показано, что часть пациентов хорошо отвечает на анти-EGFR терапию, а другая часть – нет. И этот факт объясняется наличием или отсутствием мутаций в генах KRAS и BRAF. Мутации в гене KRAS были хорошо изучены на большой выборке различных опухолей человека, включая метастатический колоректальный рак, немелкоклеточный рак легких, меланома и рак щитовидной железы. Мутации в гене KRAS выявляются приблизительно в 60% случаев колоректального рака. Основная мутагенная нагрузка приходится на кодоны 12, 13 и 16 гена KRAS, который локализуется на хромосоме 12. Сигнальный путь Ras-Raf-MAPK запускается активацией рецептора EGFR. Мутация в гене KRAS приводит к тому, что клетки становятся независимыми от активации/ингибирования EGFR в ходе моноклональной анти-EGFR терапии. Таким образом, пациенты с такой мутацией становятся не восприимчивыми к терапии препаратами на основе моноклональных антител. BRAF представляет собой RAS-регулируемую серин/треонин киназу, которая наряду с KRAS является еще одним участником сигнального пути Ras-Raf-MAPK, контролирующего клеточную пролиферацию, дифференцировку и апоптоз. Как KRAS-, так и BRAF-гены, склонны к мутациям. Мутации в гене BRAF часто обнаруживаются в злокачественных опухолях человека, таких как метастатический колоректальный рак, немелкоклеточный рак легких, меланомы и папиллярный рак щитовидной железы. Данные, представленные в 2012 году на 20-м Симпозиуме по направленной и антиопухолевой терапии (20th Symposium on Molecular Targets and Cancer Therapies) демонстрируют, что мутации в гене KRAS играют ведущую роль в активации сигнального пути, который приводит к прогрессии опухоли и обнаруживается у 30–40% пациентов с неэффективным ответом на терапию препаратами Erbitux (Cetuximab) и Vectibix (Panitumumab). Однако мутации в гене BRAF ответственны за дополнительные 12– 15% пациентов, которые не отвечает на анти-EGFR терапию. Таким образом, тестирование гена BRAF дополняет анализ на KRAS мутации, и имеет ключевое значение для принятия решения о типе противоопухолевой терапии. Мутации BRAF как биологический маркер предоперационной диагностики рака щитовидной железы Пальпаторно определяемые тиреоидные узлы встречаются у 5–7% взрослого населения. При этом представляется важным исключить случаи малигнизации увеличенных тиреоидных узлов, что составляет 5–15% всех увеличенных узлов. Тонкоигольная аспирация в настоящий момент является стандартной диагностической процедурой, позволяющей патологам гистологически охарактеризовать тиреоидные узлы, для определения является ли узел доброкачественным или злокачественным. Однако в 10–40% случаев гистологическая диагностика не дает однозначного ответа по причине перекрывающихся цитологических характеристик доброкачественных и злокачественных тиреоидных узлов. Наличие мутации в гене BRAF (в кодоне 600) в клетках аспирата щитовидной железы свидетельствует об агрессивном характере опухоли, что определяет дальнейшую тактику оперативного вмешательства. СХЕМА ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ Компания Asuragen (США) разработала диагностические реагенты для быстрого генетического анализа KRAS и BRAF мутаций в образцах опухолевой ткани пациента с использованием мультипараметрического анализатора Luminex. Набор Signature® KRAS Mutations Kit используется для быстрой детекции мутаций в гене KRAS при исследовании геномной ДНК, выделенной из человеческих клеток, а также из свежих, замороженных и фиксированных формалином парафиновых препаратов (FFPE) тканей. Принцип метода основан на постановке мультиплексной ПЦР с последующей мультипараметрической детекцией флуоресцентного сигнала. Тест позволяет проводить одновременно обнаружение 7 основных KRAS мутаций в кодонах 12 и 13 вместе с внутренним контролем в одной лунке. После постановки мультиплексной ПЦР, осуществляется идентификация меченых ПЦР-продуктов путем гибридизации их на микросферах и детекция результатов с использованием анализатора Luminex. Набор Signature® BRAF Mutations Kit предназначен для определения конкретных BRAF мутаций в геномной ДНК, выделенной из фиксированных формалином парафиновых препаратов (FFPE) ткани кишечника или из аспирата щитовидной железы. Принцип метода также основан на постановке мультиплексной ПЦР с последующей мультипараметрической детекцией флуоресцентного сигнала на анализаторе Luminex. Тест позволяет проводить одновременно обнаружение нескольких BRAF мутаций вместе с внутренним контролем в одной лунке. ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА Кат. номер Название набора 76017 Signature® KRAS Mutations Kit Signature® BRAF Mutations Kit 76020 Назначение набора Набор для определения мутаций в гене KRAS Количество тестов 48 тестов Набор для определения мутаций в гене BRAF 48 тестов Официальный дистрибьютор компании Asuragen в России ЗАО «БиоХимМак» 119991 Москва, Ленинские горы, 1-11, МГУ им. Ломоносова Тел.: (495) 647-2740, 939-2421, факс (495) 939-0997 E-mail: pcr@biochemmack.ru, www.biochemmack.ru