Проект Клинические рекомендации Диагностика нарушений кишечной микрофлоры у беременных женщин с аллергическими заболеваниями для коррекции рационов питания Москва 2015 1 Разработчики: д.м.н., профессор Ревякина В.А., к.м.н. Кувшинова Е.Д., Тимофеева А.М., Шавкина М.И., Березина Е.Ю. Организация-разработчик: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт питания» 2 Содержание Стр. Разработчики…………………………………………………………………….. 3 1. Введение………………………………………………………………………. 4 2. Методология………………………………………………………………….. 5 3. Описание медицинской разработки.……………………………………….. 7 3.1. Результаты научно-исследовательской работы……………………… 7 3.2. Сведения о патентовании……………………………………………… 13 3.3. Степень готовности медицинской технологии к внедрению………. 13 3.4. Область применения медицинской технологии……………………. 13 3.5. Реализация в практике……………………………………………….. 13 4. Заключение…………………………………………………………………… 14 Список литературы………………………………………………………………. 15 3 1. Введение Стремительный рост числа аллергических заболеваний во всем мире диктует необходимость поиска профилактических мероприятий, направленных на снижение их частоты в раннем детском возрасте. Первым проявлением аллергии у детей раннего возраста обычно является атопический дерматит (АтД), развитие которого в значительной мере связано с задержкой формирования иммунного ответа в раннем периоде жизни ребенка, что сопровождается повышением содержания в сыворотке крови общего IgE, специфических IgE-антител к пищевым аллергенам. Среди факторов, влияющих на постнатальное развитие иммунной системы, важную роль играет состав кишечной микрофлоры. Микробиота желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является многофункциональной экосистемой, сосуществующей в сложном взаимодействии с микроорганизмом. Известно, что изменения в микрофлоре кишечника могут предшествовать появлению клинических симптомов аллергии. Эти изменения характеризуются в основном снижением количества бифидумбактерий (ББ) и увеличением числа клостридий и бактероидов. Возможно, ББ, достигая определенного количественного уровня, оказывают регуляторное воздействие на показатели иммунитета слизистых оболочек. При снижении количества ББ вследствие различных причин иммунные процессы нарушаются, что в определенных случаях приводит к нарушению дифференцировки Т-регуляторных лимфоцитов и их дисбалансу с развитием аллергического воспаления. Изучение влияния кишечной микрофлоры на постнатальное развитие иммунной системы является предметом многих научных исследований. Модулирование иммунного ответа путем добавления пробиотиков и/или пребиотиков является одним из возможных эффективных методов профилактики аллергических заболеваний. Пробиотики – это живые микроорганизмы, которые могут быть включены в состав различных пищевых продуктов или назначаться в виде лекарственных средств. В качестве пробиотиков чаще используются штаммы лакто- (ЛБ) и ББ. Наиболее эффективными для профилактики аллергии считаются те пробиотики, которые в меньшей степени способны стимулировать продукцию провоспалительных цитокинов. К таким пробиотикам относятся В. bifidum, B. infantis, B. longum. В последние годы большой интерес вызывает штамм молочнокислых бактерий Lactobacillus reuteri, лечебные и профилактические свойства которого требует дальнейшего изучения. В этой связи пробиотик Lactobacillus 4 reuteri в виде таблеток Рела Лайф был назначен у женщин в последнем триместре беременности и определена частота возникновения АтД у детей первых 6 месяцев жизни. Рела Лайф – пробиотик содержит уникальный штамм живых кисломолочных бактерий – Lactobacillus reuteri рrotectis, эффективность которых в нормализации микрофлоры кишечника доказана в ряде клинических исследований. Выпускается в виде капель с нейтральным вкусом и жевательных таблеток с цитрусовым вкусом для приема внутрь 1 раз в день. 2.Методология Методы, использованные для сбора/селекции доказательств: поиск в электронных базах данных. Методы, использованные для оценки качества и силы доказательств: оценка значимости в соответствии с уровнями доказательности и классами рекомендаций (табл.1, 2). Таблица 1. Уровни доказательности Уровень 1 2 3 4 Источник доказательств Проспективные рандомизированные контролируемые исследования. Достаточное количество исследований с достаточной мощностью, с участием большого количества пациентов и получением большого количества данных. Крупные мета-анализы. Как минимум одно хорошо организованное рандомизированное контролируемое исследование. Репрезентативная выборка пациентов Проспективные с рандомизацией или без исследования с ограниченным количеством данных. Несколько исследований с небольшим количеством пациентов. Хорошо организованное проспективное исследование когорты. Мета-анализы ограничены, но проведены на хорошем уровне. Результаты непрезентативны в отношении целевой популяции. Хорошо организованные исследования «случай-контроль» Нерандомизированные контролируемые исследования. Исследования с недостаточным контролем. Рандомизированные клинические исследования с как минимум 1 значительной или как минимум 3 незначительными методологическими ошибками. Ретроспективные или наблюдательные исследования. Серия клинических наблюдений. Противоречивые данные, не позволяющие сформировать окончательную рекомендацию Мнение эксперта/данные из отчета экспертной комиссии, экспериментально подтвержденные и теоретически обоснованные 5 Таблица 2. Уровни рекомендаций. Уровень A B Описание Рекомендация основана на высоком уровне доказательности (как минимум 1 убедительная публикация 1 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) Рекомендация основана на среднем уровне доказательности (как минимум 1 убедительная публикация 2 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) C Рекомендация основана на слабом уровне доказательности (но как минимум 1 убедительная публикация 3 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) или нет убедительных данных ни о пользе, ни о риске) D Отсутствие убедительных публикаций 1, 2 или 3 уровня доказательности, показывающих значительное превосходство пользы над риском, либо убедительные публикации 1, 2 или 3 уровня доказательности, показывающие значительное превосходство риска над пользой Расшифровка Метод/терапия первой линии; либо в сочетании со стандартной методикой/терапией Метод/терапия второй линии; либо при отказе, противопоказании, или неэффективности стандартной методики/терапии. Рекомендуется мониторирование побочных явлений Нет возражений против данного метода/терапии или нет возражений против продолжения данного метода/терапии. Рекомендовано при отказе, противопоказании или неэффективности стандартной методики/терапии, при условии отсутствия побочных эффектов Рекомендация основана на мнении экспертов, нуждается в проведении исследований Методы, использованные для анализа доказательств: Доказательной базой для рекомендаций служили публикации, входящие в Кохрайновскую библиотеку, в базы данных EMBASE и PubMED/MEDLINE. Описание методов, использованных для анализа доказательств: Были использованы: :Аллергические заболевания у детей и окружающая среда. Ревякина В.А., Нетребенко О.К., ред. М.: OOO “Нью Информ», 2005: 240 с; .Иванова Н.А., Кузьмина Г.А., Кочина Л.Т. и др. Клинико-иммунологическая характеристика детей раннего возраста с атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал. 2011; 5: 31-36; .Шарапова К.Г. Эффективность различных диетических рационов в комплексном лечении атопического дерматита: Автореф. дисс. … канд. мед. наук. М., 2011: 21 с.; Лусс Л.В., Феденко Е.С. Пищевая аллергия и пищевая непереносимость. Книга для врачей и их пациентов. Москва: Фармарус Принт Медиа, 2008; Lee YK, Mazmanian SK. Has the microbiota played a clinical role in the evolution of the adaptive immune system? 6 Science. 2010; 330 (6012): 1768-1773; Ouwehand AC, Isolauri E, He F, et al. Differences in Bifidobacterium flora composition in allergic and healthy infants. J Allergy Clin Immunol. 2003; 3: 15-20; .Connolly E. State of the art on research of Lactobacillus reuteri. Minerva Pediatr. 2009 Dec;61(6):634-6; .Savino F, Cordisco L, Tarasco V, Palumeri E, Calabrese R, Oggero R, Roos S, Matteuzzi D. Lactobacillus reuteri DSM 17938 in infantile colic: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Pediatrics, 2010; 126 (3), 526-533 Основные рекомендации: Сила рекомендаций (A-D) приводятся при изложении текста технологии. 3. Описание медицинской разработки Разработана диагностическая технология выявления нарушений кишечной микрофлоры у беременных женщин с аллергическими заболеваниями для коррекции рационов питания. Исследование было открытым, рандомизированным с использованием параллельных групп. От каждой женщины было получено информированное согласие на применение Lactobacillus reuteri в последнем триместре беременности. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом ФГБНУ «НИИ питания». Критериями включения беременных женщин в исследование явились: 1. наличие аллергических заболеваний у самой беременной женщины или родственников первой степени родства (отец ребенка, сибсы); 2. отсутствие тяжелых соматических, психических и неврологических заболеваний у беременной женщины; 3. согласие беременной женщины участвовать в исследовании. Исследование включало следующие этапы работы: предварительный отбор беременных женщин с положительным аллергологическим анамнезом, наблюдение за ними в последнем триместре беременности до родов, прием Lactobacillus reuteri во время беременности до родов, мотивация на грудное вскармливание ребенка. На следующем этапе (после выписки из роддома) проводили отбор детей, находящихся исключительно на грудном вскармливании. Осмотр детей осуществляли в 3 и 4,5-6 месяцев (уровень В). 3.1 Результаты научно-исследовательской работы: Для выполнения поставленной цели в исследование были включены 93 беременных женщин в возрасте от 19 до 28 лет со сроком беременности 30-32 недель. Выделены 2 группы беременных женщин. 1-ю (основную) группу составили 60 беременных женщин, получавших в последнем триместре беременности Lactobacillus reuteri (1х108 КОЕ) в виде жевательных таблеток Рела Лайф в дозе 5 мг/сут. Им был предложен рацион питания с ограничением продуктов на основе коровьего молока до 250 мл/сут и исключением орехов. 2-ю группу (контрольную) составили 33 женщины, 7 которые не получали Lactobacillus reuteri. Им был рекомендован аналогичный рацион питания, но без этого пробиотика. Среди 60 беременных женщин основной группы у 38 (63,3%) отмечались следующие аллергические заболевания: бронхиальная астма у 4 (6,7%), аллергический ринит у 26 (43,3%), крапивница у 8 (13,3%). У остальных 22 (36,7%) женщин наблюдался положительный аллергологический анамнез (родственники первой степени родства имели проявления аллергии). Среди 33 беременных женщин контрольной группы аналогичного возраста и срока беременности у 16 (48,5%) регистрировались аллергические заболевания: бронхиальная астма у 3 (9,09%), аллергический ринит у 12 (36,4%), крапивница у 2 (6,1%). Наблюдение за беременными женщинами проводили на протяжении всего периода применения Lactobacillus reuteri (до родов). После родов наблюдение осуществляли за детьми, рожденными от этих женщин, в течение 6 месяцев жизни, при этом оценку состояния детей и появления симптомов АтД проводили до введения прикорма. Детей, включенных в исследование, ежемесячно осматривали. Опрос родителей проводили с помощью дневника. При каждом осмотре исследовали кожу ребенка для выявления симптомов АтД в соответствии с диагностическими критериями, описанными в науно-практической программе (11). Диагноз АтД считали подтвержденным при обнаружении следующих симптомов: зуд, поражение лица или разгибательных поверхностей конечностей с минимальной продолжительностью симптомов в течение 4 недель. У 48 женщин (27 в основной и 21 в контрольной группах) проводили биохимическое исследование метаболической активности кишечной микрофлоры до приема Lactobacillus reuteri. Второе исследование осуществляли в динамике перед родами. Оценивали содержание монокарбоновых С2 (уксусная), С3 (пропионовая), С4 (масляная) кислот, изокислот (Cn/Cn), суммарное их содержание, соотношение изокислот к монокарбоновым кислотам. Данный способ позволяет быстро и точно оценить состояние индигенной микрофлоры, обладает большей чувствительностью и специфичностью исследования, воспроизводимостью результатов по сравнению с рутинным бактериологическим методом; обеспечивает высокую точность в оценке основных аэробных и, главное, анаэробных популяций микроорганизмов с указанием их родовой принадлежности, не требуя воспроизведения нативных условий обитания; допускает неограниченное время доставки в лабораторию, не оказывая при этом влияние на результаты исследования. 8 Диагностическим критерием синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке является повышение концентрации короткоцепочечных жирных кислот изменение их качественного состава: уксусной, и пропионовой и масляной, что свидетельствующего об активизации тех или иных родов микроорганизмов Результаты биохимического исследования метаболической активности кишечной микрофлоры у 48 беременных женщин основной и контрольной групп до приема Lactobacillus reuteri были однотипными, в связи с чем их показатели были объединены (табл. 3). У большинства (77%) беременных женщин отмечалось достоверное снижение суммарного количества изучаемых 6 кислот C i (р<0,01). В профиле С2-С4 i 2 монокарбоновых кислот отмечено повышение относительного количества уксусной кислоты при сниженном содержании пропионовой (С3) и масляной (С4) кислот (р<0,01). Выявлены низкие показатели ∑ (изо С4 + изоС5 + изоС6) и повышение соотношения изокислот к монокрабоновым кислотам (изоCn/Cn). Полученные данные свидетельствуют о снижение метаболической активности молочнокислой флоры: бифидумабактерий и лактобактерий и появление измененными свойствами. Низкие значения пропионовой кислоты штаммов с указывают на нарушение синтеза биогенных аминов, которые блокируют адгезию патогенов, При этом повышается активность отдельных штаммов аэробных бактерий, обладающих протеолитической активностью: сапрофитных штаммов стрептококков и стафилококков при снижении активности анаэробных микроорганизмов – бактероидов, эубактерий и клостридий. Снижение масляной кислоты указывает на энергодефицит колоноцитов или является признаком недостатка в рационе питания пищевых волокон. Смещение окислительно-восстановительного потенциала внутрипросветной среды смещен в сторону отрицательных значений, что свидетельствует о дисбалансе аэробных/анаэробных популяций микроорганизмов. Все эти изменения в микробиоте кишечника согласуются с наличием частых запоров, которые наблюдались у беременных женщин. Таким образом, выявленные нарушения в микробиоте кишечника у беременных женщин создают предпосылки для изменения иммунного гомеостаза и воздействия рецепторов врожденного иммунитета ребенка на дифференцировку Т-лимфоцитов в направлении как регуляторных, так и эффекторных клеток, снижая противоинфекционную защиту в ЖКТ и за его пределами. Использование Lactobacillus reuteri (Рела Лайф) в течение последнего триместра у беременных женщин оказало положительное влияние на их общее самочувствие и 9 состояние ЖКТ. У подавляющего большинства беременных женщин (84,5%) отмечено исчезновение запоров. Переносимость Lactobacillus reuteri (Рела Лайф) у наблюдаемых женщин была хорошей. Побочных реакций на его прием не отмечено. Таблица 3. Результаты биохимического исследования метаболической активности кишечной микрофлоры у женщин основной и контрольной группы в последнем триметре беременности до приема Lactobacillus reuteri (n=48) Показатели С2 (уксусная) С3 (пропионовая) С4 (масляная) ИзоCn/Cn ∑ (изоС4 + изоС5 + изоС6) ИзоCn/Cn Общее содержание Абсолютное содержание, мг/г Результат Норма 5,653 0,555 5,88 1,22 0,524 0,201 1,79 0,95* 0,489 0,237 1,75 0,85* 0,313 0,110 Относительно содержание, ед. Результат Норма 1,892 0,012 0,634 0,015* 0,127 0,015 0,189 0,011* 0,030 0,008 0,178 0,011* 0,631 0,011* 0,022 0,003 0,059 0,015 Результат 2,227 1,264* Норма 0,430 0,130 2,136 1,59* 10,51 2,50 –0,261 0,0011 -0,576 0,110 6 C i 2 i Анаэробный индекс (С2С4) * р – достоверность различий между полученными результатами и нормальными значениями. Динамика показателей биохимического исследования метаболической активности кишечной микрофлоры у беременных женщин основной группы на фоне приема Lactobacillus reuteri (Рела Лайф) представлена в табл. 2. Как видно, использование данного пробиотика у женщин основной группы способствовало достоверному повышению суммарного количества монокарбоновых и изокислот (р<0,001), а также у них отмечено повышение метаболической активности молочнокислой флоры и восстановление баланса между аэробными/анаэробными микроорганизмами. На этом фоне обмечалось уменьшение запоров у беременных женщин этой группы. В то же время у беременных женщин контрольной группы не обнаружено статистически значимых изменений в показателях кишечной микробиоты (табл. 3). 10 Таблица 4. Динамика показателей биохимического исследования метаболической активности кишечной микрофлоры у беременных женщин основной группы на фоне приема Lactobacillus reuteri (Рела Лайф) (n=27) Абсолютное содержание, мг/г до лечения после Относительно содержание, ед. до лечения После С2 (уксусная) 5,653 0,555 4,926 1,230 1,892 0,012 С3 (пропионовая) С4 (масляная) ИзоCn/Cn ∑ (изоС4 + изоС5 + изоС6) 0,524 0,201 0,489 0,237 1,812 0,442* 0,127 0,015 0,199 0,010* 1,721 0,236* 0,030 0,008 0,118 0,011* 0,313 0,110 0,538 0,011 Показатели ИзоCn/Cn Общее содержание 0,864 0,013* 0,022 0,003 0,053 0,005 до лечения 2,227 1, 264 после лечения 0,320 0,130* 2,136 1,59 7,42 2,58* 6 C i 2 i Анаэробный индекс (С2–0,261 0,0011 +0,576 0,110 С4) Здесь и в табл. 3: * р – достоверность различий до и после лечения. Таблица 5 Динамика показателей биохимического исследования метаболической активности кишечной микрофлоры у беременных женщин контрольной группы, не принимающих Lactobacillus reuteri (Рела Лайф) (n=21) Показатели С2 (уксусная) С3 (пропионовая) С4 (масляная) ИзоCn/Cn ∑ (изоС4 + изоС5 + изоС6) ИзоCn/Cn Общее содержание Абсолютное содержание, мг/г до лечения после 5,653 0,555 5,648 1,24 0,524 0,201 0,367 0,009 0,489 0,110 0,945 0,019 Относительно содержание, ед. до лечения После 1,892 0,012 1,684 0,015 0,177 0,015 0,179 0,012 0,030 0,008 0,042 0,011 0,313 0,110 0,022 0,003 0,369 0,011 0,069 0,004 до лечения 2,626 1, 48 после лечения 2,430 0,130 2,136 1.59* 2,127 2,50 –0,261 0,0011 –0,489 0,111 6 C i 2 i Анаэробный индекс (С2- С4) Полученные данные подтверждают гипотезу о воздействии пробиотиков, в частности Lactobacillus reuteri, на микробиоту кишечника ребенка из группы высокого риска развития атопии. Эффект пробиотических бактерий, по-видимому, связан с иммуномодулирующим воздействием на иммунитет ребенка, что выражается в предотвращении или снижении выраженности аллергических заболеваний. 11 На следующем этапе данного исследования был проведен анализ кумулятивной частоты АтД у детей, рожденных от наблюдаемых матерей. Так, при первичном осмотре ребенка в родильном дому с матерями проводили индивидуальную беседу с акцентированием преимуществ грудного вскармливания, разъясняли принципы его правильного применения. После рождения в исследование были включены только дети, находящиеся исключительно на грудном вскармливании. В случае гипо- или агалактии у матери ребенка переводили на смешанное или искусственное вскармливание, при этом его исключали из дальнейшего клинического наблюдения. В 1-ю группу вошли 30 детей, рожденных от матерей, принимающих в последнем триместре беременности Lactobacillus reuteri, а 2-ю группу составили 32 ребенка, рожденных от матерей, не получающих Рела Лайф. Дети обеих групп находились на грудном вскармливании, при этом соблюдался гипоаллергенный рацион питания кормящих матерей (табл. 6). 31 ребенок не вошел в исследование в связи с отсутствием грудного вскармливания. Таблица 6. Наиболее важные клинические показатели наблюдаемых детей Клинические показатели Количество матерей, включенных в исследование Количество детей, включенных в исследование Возраст матерей, годы Количество родов Количество детей с семейным аллергическим анамнезом: по материнской линии по отцовской линии одновременно со стороны отца и матери Масса тела при рождении, г Длина тела при рождении, см Прибавка массы тела от 0 до 6 мес, г Прибавка роста от 0 до 6 мес, см 1-я группа 44 2-я группа 42 30 32 25,7±4,5 1,53±0,71 24,9±5,3 1,57±0,77 19 7 5 16 8 7 3344±456 49,2±1,5 27,4±4,1 0,75±0,14 3376±482 49,4±1,9 26,4±3,7 0,74±0,10 Основные характеристики и демографические данные детей, вошедших в исследование, были сходными (табл. 3). Физическое развитие детей за период наблюдения соответствовало возрастной норме и не имело различий между группами. Кумулятивная частота АтД была достоверно ниже в группе детей, матери которых во время беременности получали Lactobacillus reuteri (6,7%), чем в группе детей матерей контрольной группы (24,2%) (р<0,001). Анализ клинических особенностей АтД показал, 12 что у детей основной группы наблюдался АтД легкой степени тяжести (индекс SCORAD составлял 12,3±0,14 баллов). У детей контрольной группы тяжесть АтД расценивалась как средне-тяжелая и тяжелая (индекс SCORAD - 22±0,07 и 52±0,19 баллов соответственно). Таким образом, использование беременными женщинами в последнем триместре беременности Lactobacillus reuteri и соблюдение рациона питания (ограничение молочных продуктов, исключение орехов) снижают частоту АтД у детей с высоким риском развития атопии. К 6 месяцам жизни кумулятивная частота АтД у детей, рожденных от матерей, получавших в последнем триместре беременности Lactobacillus reuteri, составила 6,7%, что достоверно ниже по сравнению с детьми от матерей, не получавших пробиотики (24,2%, р<0,001). Использование пробиотиков, в частности, Lactobacillus reuteri, у детей с высоким риском развития атопии, открывает новые и эффективные пути профилактики развития такого распространенного аллергического заболевания как АтД. 3.2 Сведения о патентовании: нет 3.3. Степень готовности разработки к внедрению Научно-исследовательская разработка может быть внедрена в практику лечебнопрофилактических учреждений, центров здоровья, диетологических кабинетов лечебнопрофилактических учреждений в Российской Федерации в виде методических указаний по выявлению нарушений кишечной микробиоты у беременных женщин, страдающих аллергическими заболеваниями. 3.4 Область применения разработки. Здравоохранение: внутренние болезни, диетология, аллергология, гастроэнтерология, обучение студентов высших медицинских учебных заведений, курсантов сертификационных и тематических циклов усовершенствования и специализации врачей по диетологии и нутрициологии. 3.5. Где реализовано в практике: клиника ФГБНУ «НИИ питания», кафедра диетологии и нутрициологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России, кафедра диетологии и нутрициологии ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России. 13 4.Заключение Описанный способ опробован при обследовании и лечении 93 беременных женщин в возрасте от 19 до 28 лет со сроком беременности 30-32 недель. Для коррекции выявленных нарушений в микробиоте кишечника этих детей был применен пробиотик , Lactobacillus reuteri с гипоаллергенным рационом питания в последнем триместре беременности. Это позволило добиться улучшения самочувствия беременных женщин и устранить, имеющиеся у них симптомы со стороны желудочно-кишечного тракт, а также и снизить частоту возникновения атопического дерматита у их детей. Исследование проводилось на базе отделения аллергологии ФГБНУ «НИИ питания» с использованием биохимического метода определения микробиоты кишечника Предложенный способ коррекции рационов питания с добавлением пробиотика Lactobacillus reuteri позволяет добиться значительного снижения частоты атопического дерматита, как маркера первых проявлений пищевой аллергии у детей. 14 Литература 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Пищевая аллергия у детей. Балаболкин И.И., Ревякина В.А., ред. М.: Династия, 2010: 190 с. Аллергические заболевания у детей и окружающая среда. Ревякина В.А., Нетребенко О.К., ред. М.: OOO “Нью Информ», 2005: 240 с. Иванова Н.А., Кузьмина Г.А., Кочина Л.Т. и др. Клиникоиммунологическая характеристика детей раннего возраста с атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал. 2011; 5: 31-36. Шарапова К.Г. Эффективность различных диетических рационов в комплексном лечении атопического дерматита: Автореф. дисс. … канд. мед. наук. М., 2011: 21 с. Лусс Л.В., Феденко Е.С. Пищевая аллергия и пищевая непереносимость. Книга для врачей и их пациентов. Москва: Фармарус Принт Медиа, 2008. Lee YK, Mazmanian SK. Has the microbiota played a clinical role in the evolution of the adaptive immune system? Science. 2010; 330 (6012): 17681773. Ouwehand AC, Isolauri E, He F, et al. Differences in Bifidobacterium flora composition in allergic and healthy infants. J Allergy Clin Immunol. 2003; 3: 15-20. Connolly E. State of the art on research of Lactobacillus reuteri. Minerva Pediatr. 2009 Dec;61(6):634-6. Savino F, Cordisco L, Tarasco V, Palumeri E, Calabrese R, Oggero R, Roos S, Matteuzzi D. Lactobacillus reuteri DSM 17938 in infantile colic: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Pediatrics, 2010; 126 (3), 526-533 Egervarn W, Lindmar H, Olsson J, Roos S. Transferability of tetracycline resistance gene from Lactobacillus reuteri to bacteria in gastrointestinal tract of humans. Antoine Von Leeuwenhoe, 2010; 97 (2):189-200 Научно-практическая программа «Атопический дерматиту детей: диагностика, лечение и профилактика. Москва, ЗАО, «Информатик», 2010, 75 с. 15