Роль микробиологической диагностики в комплексном

1
Роль микробиологической диагностики в комплексном
обследовании и определении тактики лечения пациентов с болезнями
периодонта.
Юдина Наталья Александровна, кандидат медицинских наук, заведующая кафедрой
общей стоматологии БелМАПО
Люговская Анна Викторовна, аспирант кафедры общей стоматологии БелМАПО
2
Annotation.
As documented by numerous publications [6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 19], periodontal
diseases are associated with a shift in the periodontal bacterial flora, from the healthy to the
diseased status. Among the periodontal pathogens, there are such species as Porphyromonas
gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis (formerly Bacteroides forsythus),
Treponema denticola and Aggregatibacter (formerly Actinobacillus) actinomycetemcomitans.
Therefore, it is important to know the composition of microorganisms in periodontal
pockets for diagnosis and rational treatment.
Methods used for microbiological diagnosis are: microscopy, culture, immunoassays and
DNA-based techniques. Each of them has some advantages and disadvantages related to cost,
accessibility, sensitivity, duration.
The aim of this present review is to give an overview of conventional and molecular
biological techniques for testing periodontal pathogens.
Аннотация.
Данные
многочисленных
исследований
[6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 19]
подтверждают, что причиной возникновения и развития болезней периодонта является
персистенция
периодонтопатогенной
микрофлоры.
Среди
периодонтопатогенов
выделяют: Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis (formerly
Bacteroides forsythus), Treponema denticola and Aggregatibacter (formerly Actinobacillus)
actinomycetemcomitans.
Определение микробного состава позволяет получить необходимую информацию
для диагностики и определения тактики лечения.
Среди микробиологических методов диагностики выделяют: бактериоскопический,
бактериологический, иммунологический и молекулярно-генетический. Каждый из
методов имеет преимущества и недостатки, связанные со стоимостью, доступностью,
чувствительностью и длительностью.
Цель данной работы – провести обзор стандартных и молекулярно-биологических
методов используемых для идентификации периодонтальных патогенов.
3
Resume.
Periodontal diseases are infections caused by bacteria found in dental plaque. Although
microbiological studies have identified more than 500 bacterial species in periodontal pockets,
only a limited number have been implicated as periodontal pathogens.
Among those, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis
(formerly Bacteroides forsythus), and Treponema denticola are strictly anaerobic and
Aggregatibacter (formerly Actinobacillus) actinomycetemcomitans.
Consequently, it is important to know the composition of microorganisms in periodontal
pockets for diagnosis and rational treatment.
For diagnosis of the activity of the different periodontitis forms, clinical symptoms alone
may not be sufficient, as they provide a historical record only (pocket formation, attachment loss,
alveolar bone loss) or have low predictive value (bleeding during probing). But predictions for
recurrence of disease and prognosis for the patient can be significantly improved whith the
presence or absence of periodontal pathogens monitored concurrently
Microscopy, culture, immunoassays, enzyme tests, and DNA-based techniques have been
introduced for the detection of periodontopathogens.
The aim of this present review is therefore to give an overview of conventional and
molecular biological techniques for testing periodontal pathogens.
Keywords: periodontal diseases; microbiological tests; periodontal pathogens
Резюме.
Основным этиологическим фактором воспалительных заболеваний периодонта в
настоящее время считаются микроорганизмы зубного налета. Хотя микробиологические
методы позволили идентифицировать в периодонтальном кармане более чем 500 видов
бактерий, только некоторые из них являются периодонтопатогенными. Среди них:
Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis (ранее Bacteroides
forsythus),
Treponema
denticola
и
Aggregatibacter
(ранее
Actinobacillus)
actinomycetemcomitans.
Микробиологическая диагностика позволяет получить необходимую информацию
для выбора препарата и метода системной терапии с использованием антибиотиков, а
также для контроля и оценки эффективности выбранного метода антибактериальной
терапии. Кроме этого, при установлении этиологического фактора врач сможет
конкретизировать диагноз и составить прогноз развития болезни.
Среди микробиологических методов диагностики выделяют: бактериоскопический,
бактериологический, иммунологический и молекулярно-генетический.
Целью нашего обзора явилось описание основных методов микробиологической
4
диагностики, используемых для детекции периодонтопатогенов.
Ключевые
слова:
болезни
периодонтальные патогенны.
периодонта,
микробиологическая
диагностика,
5
Роль микробиологической диагностики в комплексном обследовании и
определении тактики лечения пациентов с болезнями периодонта.
The role methods of microbiological diagnosis in examining and choosing the therapy
of periodontal diseases.
N.A. Yudina, H.V.Liuhouskaya
Н.А. Юдина, А.В. Люговская
В современной стоматологии диагностика и лечение заболеваний маргинального
периодонта представляет сложную и актуальную проблему, которая приобрела не только
медицинскую, но и социальную значимость. Распространенность болезней периодонта в
мире составляет 98% (HaffajeeA.D., Socransky S.S.1994, Безрукова И.В.,2004) и является
основной причиной потери зубов у лиц старше 40 лет (Jeffcoat, 1994; Davapanah et.
al.1994). По данным ВОЗ (1998) пик заболеваемости приходится на 15-18 лет и 35-44 года.
В последние годы наблюдается тенденция к росту числа случаев периодонтитов у лиц
молодого возраста.
Данные эпидемиологических исследований в Беларуси подтвердили высокое
распространение
периодонтальной
болезни
у
взрослого
населения
(П.А.Леус,
Л.Г.Борисенко, Л.А.Казеко, 1996, Л.А.Казеко, Н.А.Юдина, 2003)[4].
Основным этиологическим фактором воспалительных заболеваний периодонта в
настоящее время считаются микроорганизмы зубного налета (Н.В. Курякина 2000; Л.А.
Дмитриева 2001; И.В. Безрукова 2002; А.И. Грудянов 2002).
За последние два десятилетия современные научные методы изменили взгляд на
зубной налет, и сейчас многие ученые-стоматологи рассматривают его как биопленку
( Allais G.2006, Леус П.А 2007)[5].
Основными свойствами биопленки являются:
1) взаимодействующая общность разных типов микроорганизмов (микробиоценоз) с
симбиотическими связями;
2) микроорганизмы образуют микроколонии;
3) микроколонии окружены защитным матриксом, пронизанным каналами, по
которым циркулируют питательные вещества, продукты жизнедеятельности, ферменты,
метаболиты и кислород;
4) микроорганизмы имеют определенную систему связи;
5) микроорганизмы в биопленке устойчивы к антибиотикам, антимикробным
средствам и реакции организма хозяина.
Исследования, проведенные на биопленках в их естественном состоянии, показали,
что существуют большие различия в поведении бактерий в лабораторной культуре и в их
6
естественных экосистемах. К примеру, бактерия в биопленке вырабатывает такие
вещества, которые она не продуцирует, будучи в культуре. Кроме того, матрикс,
окружающий микроколонии, служит защитным барьером. Это помогает понять, почему
антимикробные средства как общего действия, так и применяемые местно, не всегда дают
успешные
результаты,
даже
тогда,
когда
они
нацелены
на
конкретный
вид
микроорганизмов. Это также помогает объяснить, почему механическое удаление бляшек
и личная гигиена ротовой полости продолжают оставаться неотъемлемой составной
частью лечения заболеваний пародонта.
В полости рта человека находится около 530 видов микробов (Царев В.Н.,1996;
ДмитриеваЛ.А.,2001; Drizhal I.,2001).
Согласно
современной
концепции
периодонтит
вызывают
не
отдельные
специфические виды микроорганизмов, а их различные поликомпонентные сочетания
(HaffajeeA.D., Socransky S.S. 1991, 1992, 1997). Определить роль каждого из видов
микроорганизмов в процессе возникновения и развития воспаления в тканях периодонта
достаточно сложно. До сих пор не ясно, какие из них вызывают первичные
повреждения, а какие из них присоединяются позже.
В 1994-1995 гг. ВОЗ рекомендовала среди нормальной или резидентной флоры
полости рта
выделять так называемые «периодонтопатогенные виды», которые
отличаются от других высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами
по отношению к тканям периодонта[3,6,7,8].
К ним относят бактерии: Actinobacillus (Aggregatibacter) actinomycetemcomitans,
Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Bacteroides forsythus (Tannerella forsythia) и
Treponema denticola [6,7,10,11,12,13,14,15,16,19].
Особенностью действия этих бактерий является то, что при их разрушении
выделяются чрезвычайно активные эндотоксины, которые приводят к длительному
воспалению
и
разрушению
тканей
десны
и
альвеолярного
отростка
челюсти,
кровоточивости, нарушению сосудистой микроциркуляции крови в тканях десен,
дистрофическим изменениям, рассасыванию костной основы и выпадению зубов [1,8]
Они также вызывают общую интоксикацию организма, с поражением иммунной и
эндокринной систем, провоцируют развитие атеросклероза сосудов мозга и сердца,
повышают риск развития инсульта и инфаркта миокарда [17,18].
Микробные комплексы и их роль в развитии определенных нозологических форм
болезней периодонта [19].
На основе исследования сложных механизмов взаимодействия между различными
бактериями
налета
и
организмом
хозяина
была
разработана
классификация
7
периодонтальных микробных комплексов (Socransky et. al., 1998). Микробные
комплексы различаются по частоте встречающихся в их составе микроорганизмов.
Различают
красный, зеленый,
желтый, пурпурный,
оранжевый
микробные
комплексы.
Красный комплекс
Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsitus, Treponema Denticole (Gmur et.al.,1989,
Socransky et. al., 1998). Этот комплекс отличается специфичностью действия на
периодонт
и
особыми
клиническими
проявлениями.
Характерна
выраженная
воспалительная реакция и кровоточивость при зондировании.
Представители «красного комплекса» Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus
проявляют сильную протеиназную активность.
Положительная
корреляция
между
«красным
комплексом»
и
сульфатредуцирующими бактериями может подтвердить их этиологическую роль в
развитии воспалительных форм заболеваний периодонта.
Зеленый комплекс
Actinobacillus Actinomycetemcomitans, Campylobacter consisus и Eilenella corrodens
(Socransky et. al., 1998). Зеленый комплекс характерен для форм заболеваний с
выраженной деструкцией тканей периодонта. Также этому комплексу отводится
определенная роль в развитии поражений слизистой оболочки рта и твердых тканей
зубов.
Оранжевый комплекс
Сочетание Prevotella intermedia/nigrescenc, Peptostreptococcus micros, Campylobacter
rectus и Campylobacter spp. характерено для быстропрогрессирующих болезней
периодонта.
Ученые выделяют также желтый (S. mitis, S. israilis, S. sangvis) и пурпурный
комплексы (V. Parvula, A. odontolyticus), которые могут играть защитную роль, вступая в
антогонистические взаимодействия с периодонтальными патогенами, роль этих
комплексов до конца не изучена.
Для абсцедирующих форм заболевания периодонта наиболее важные сочетания:
1. Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis и Fusobacterium
nucleatum
2.Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus и Campylobacter rectus.
Для ювенильного периодонтита с быстрой утерей костных структур (3-4 раза выше,
чем при периодонтите у взрослых) микроорганизмы 3-х групп (Actinobacillus
actinomycetemomitans 95-100%, Bacteroides, Сapnocytophaga sputigena).
8
Для
развития
перепубертантного
периодонтита
(быстропрогрессирующее
деструктивное заболевание, развивающееся до 11 лет) имеет значение специфическая
инфекция: Actinobacillus actinomycetemomitans, Bacteroides, Сapnocytophaga sputigena,
Eilkenella corrodes.
Факторы вирулентности микроорганизмов (таб.1):
- микробная инвазия (изучена в эксперименте и клинике путем культивирования и
идентификации различных микроорганизмов, например спирохет и фузобактерий при
гингивите);
- действие эндотоксинов, которые устойчивы к температурным воздействиям,
стимулируют образование нормальных антител (результат действия грамотрицательной
микрофлоры);
- выделение энзимов, они благодаря своей метаболической активности способны
вызывать целевую деструкцию тканей и участвовать в механизмах образования
периодонтального кармана;
- реакции антиген-антитело.
Таблица 1
Факторы вирулентности периодонтальных патогенов
Механизмы
адгезии
Подавление
и
защитных
Повреждение тканей периодонта
механизмов хозяина
колонизации
микроорганизмов
Капсульный
Угнетение хемотаксиса
Лейкотоксин
антиген
Супрессия
полиморфноядерные лейкоциты
Фимбрии
лимфоцитов
Антогонизм
Торможение
Синергизм
фибробластов
Эндотоксин
Протеазы
Расщепление
вызывает резорбцию кости
иммуноглобулинов
Коллагеназа
функции
разрушает
и
моноциты
функции
Цитотоксин
(липополисахариды)
Протеаза
Фосфолипаза А
Щелочные и кислые фосфатазы
Трипсиноподобные пептидазы
разрушающие
поддерживающие
ткани, иммуноглобулины и белки
9
комплемента
Фактор,
цитотоксичный
фибробластов,
ингибирующий
пролиферацию,
для
их
тормозящий
коллагеновый синтез
Клиническая картина зависит от количества периодонтопатогенов и факторов
вирулентности.
Таблица 2
Классификация периодонтопатогенов в соответствии с их взаимосвязью с болезнями
периодонта ([Ханс-Петер Мюллер,2004]).
Патогены с выраженной взаимосвязью с Actinobacillus
болезнями периодонта
actinomycetemcomitans
Porphyromonas gingivalis
Bacteroides forsythus
Патогены с умеренной взаимосвязью
Treponema denticola
с болезнями периодонта
Prevotella intermedia
Campylobacter rectus
Peptostreptococcus micros
Eikenella corrodens
Fusobacteriums spp.
Eubacterium spp.
β-гемолизирующие стрептококки
Имеют значение в отдельных случаях
Staphylococcus spp.
Pseudomonas spp.
Энтерококки, кишечные палочки
Candida spp.
Для решения проблемы болезней периодонта зарубежными и отечественными
учеными четко определена теоретическая база. В связи с этим основной целью терапии
периодонтита является подавление адгезии, колонизации, роста и размножения
микроорганизмов
и устранение отрицательных
последствий их
воздействия на
окружающие ткани и макроорганизма в целом.
Повышение эффективности терапии возможно при целевом воздействии на
микробные сочетания, ответственные за возникновение конкретных нозологических форм
болезней периодонта.
10
Микробиологическая диагностика позволяет получить необходимую информацию
для выбора препарата и метода системной терапии с использованием антибиотиков, а
также для контроля и оценки эффективности выбранного метода антибактериальной
терапии[8]. Кроме этого, при установлении этиологического фактора врач сможет
конкретизировать диагноз и составить прогноз развития болезни.
В современной стоматологии есть разные мнения по выбору методов диагностики
болезней периодонта, но большинство ученых сходятся на необходимости проведения
микробиологических
исследований.
Проведение
микробиологической
диагностики
показано в определенных случаях, см. таблицу 3.
Таблица 3
Показания
к
применению
методов
микробиологической
диагностики
при
обследовании пациентов с болезнями периодонта.
Николаева Е.Н., 2007
Bauermeister C.-D., 2003
Болезни пародонта в детском и
подростковом
Все случаи пародонтита у взрослых, а
возрасте. также
(препубертантный,
подростковые
и
юношеские
юношеский пародонтиты, характеризующиеся упорным
пародонтит),
и быстро прогрессирующим течением.
Тяжелая
форма
болезней
Тяжелые формы генерализованного
пародонта у взрослых (утрата более 50% пародонтита взрослых, устойчивые и плохо
костных тканей альвеолярных отростков поддающиеся лечению.
для более чем 14 зубов),
Рефрактерный периодонтит,
Тяжелые
пародонтита
Обследование членов семьи больного,
у которого выявлены пародонтопатогенные
формы
на
маргинального бактерии, особенно P. gingivalis и A.
фоне системных Аctinomycetemcomitans.
заболеваний (в особенности дисфункции
При комплексном лечении в случаях
нейтрофильных гранулоцитов, диабета и сложного
протезирования
или
HIV-инфекционных
заболеваний
с внутрикостной
имплантации
зубов,
показателем CD4< 200/мм3.)
связанных с большими финансовыми
затратами.
После
проведения
курса
пародонтологического лечения, особенно, с
применением
лоскутных
операций,
коррекции прикуса в практике ортодонтии
11
и т.п.
Существует
бактериоскопический,
несколько
методов
бактериологический,
микробиологической
иммунологический
диагностики:
и
молекулярно-
биологический (таб.4) [2,8,9].
Таблица 4
Преимущества и недостатки методов микробиологической диагностики.
Метод
Преимущества метода
Недостатки
бактериоскопический
-простота
-мало чувствителен
-доступность
-низкая специфичность
-быстрота
-экономичность
бактериологический
высокая -длительность( до 3х недель)
-относительно
чувствительность
и -не
всегда
дает
возможность
точность метода;
получить бактерии искомых видов
-возможность
-повышенные
тестирования
требования
к
vitro условиям проведения
in
восприимчивости
-проведение
в
специальных
изолированных штаммов лабораториях, количество которых
бактерий к различным ограничено
антибактериальным
-высокая стоимость
препаратам
молекулярно-
-высокая специфичность
-ограниченное
количество
генетический
-быстрота
которые
могут
метод
-простота практического идентифицированы;
видов,
быть
применения
-невозможность проведения тестов
-необязательное
на определение чувствительности
присутствие
живых микроорганизмов к антибиотикам.
микроорганизмов
-не
специальных
требуется
условий
12
для транспортировки
Микроскопический метод
Совокупность способов изучения морфологических и тинкториальных (способность
окрашиваться) свойств микроорганизмов в исследуемом материале с помощью
микроскопии в фиксированных и нативных препаратах. Этой методикой можно выявлять
подвижные бактерии и идентифицировать спирохеты, протозоа, фузобактерии, грибы и
др.
Бактериологический (культуральный) метод исследования
Совокупность способов, направленных на выделение и идентификацию чистых
культур микроорганизмов с помощью культивирования на питательных средах.
Молекулярно-генетический метод.
В последние годы в практику периодонтологов многих стран вошли методики, с
успехом заменившие выращивание культур бактерий, требующих значительных затрат
времени. Применение генетических зондов и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
начала 90х прошлого века позволило получить доказательства наличия условнопатогенной флоры, при этом происходит селективная идентификация не самих
патогенных бактерий, а их специфических нуклеиновых кислот. Метод ПЦР сочетает в
себе высочайшую чувствительность всех микробиологических методов и направлен на
выявление «маркерных» микроорганизмов, что исключает различные осложнения и
потенциально ошибочные этапы [6,7,8]. Любой положительный результат имеет
клиническое значение, а те концентрации бактерий, которые могут присутствовать в
здоровой слизистой оболочке, дают отрицательный результат.
Важность использования в практике врача-стоматолога микробиологической
диагностики рассмотрим на клиническом примере.
Клинический случай: пациентка Б., 46 лет, обратилась на кафедру по поводу
кровоточивости десны, подвижности зубов и неприятного запаха изо рта.
Анамнез жизни.
Страдает общесоматической патологией: гипоиммуноглобулинемия по классу А,
хроническая энтеропатия, заболевания суставов.
Ранее обращалась за лечением к периодонтологу, при этом проводились мотивация и
обучение гигиеническому уходу, а также удаление зубных отложений. Оперативные
вмешательства на периодонте не проводились.
13
При осмотре: внешний вид без особенностей, открывание рта не затруднено,
регионарные лимфатические узлы эластичные подвижные, диаметром до 0.5 см. При
осмотре полости рта: глубина преддверия более 5мм, уздечки губ вплетаются вне
межзубных сосочков, длинные, тонкие, щечные тяжи не травмируют периодонт, уздечка
языка не ограничивает его функции; слюноотделение свободное, слюна жидкая.
При осмотре отмечено: плохая гигиена полости рта, частичные дефекты зубных
рядов (отсутствуют18,17,16,15,25,38,37,36,46), коронки на 14,13.
Периодонтальный статус: десна гиперемирована, отечна, при зондировании
кровоточит. Отмечена рецессия десны в области 35, 31,41,42 на 1мм; 21, 22, 23, 24, 44, 47
на 2мм; 45 на 3мм, 26 на 5 мм. При зондировании глубина периодонтальных карманов в
области 12 11 21 22 23 24 26 27 28 32 31 41 42 43 составила 4-5мм.
Индексная оценка:
Упрощенный индекс гигиены Грина-Вермиллиона (Greene J., Vermillion J., 1964) равен
3,5 (плохая гигиена).
Воспаление десны по индексу GI=1,0 (средняя степень воспаления десны).
Подвижность зуба 26-1-2 степени по шкале Миллера.
Рентгенологическая картина: на ортопантомограмме- неравномерная горизонтальная
резорбция костной ткани до 1/3 длины корня в области 13, 14, 33, 34, 35, 44, 47, 48 . В
области 12, 11, 32, 31, 41, 42,43 на ½ длины корня, 21, 22, 23, 24, 28 более чем на 2/3,
расширение периодонтальной щели по всей длины корня. Вертикальная деструкция в
области 45, 27. Определяются тени твердых поддесневых зубных отложений на корнях
зубов.
Молекулярно-генетический метод позволил выделить в пробе содержимого
периодонтального
кармана
Actinobacillus
actinomycetemcomitans
(с
выраженной
взаимосвязью с болезнями периодонта), Prevotella intermedia и Treponema denticola ( с
умеренной взаимосвязью с болезнями периодонта) (таб.2).
Диагноз в соответствии с классификацией ВОЗ, 1994: хронический сложный
периодонтит.
Прогноз сомнительный.
При
составлении
плана
лечения
учитывались:
особенность
клинического
проявления, наличие фоновой патологии, а также результаты микробиологической
диагностики.
Лечение включало проведение инструктажа по вопросам гигиены, обучение
стандартному
методу
чистки
с
подбором
индивидуальных
средств
гигиены,
профессиональную гигиену и антибактериальную терапию. Через месяц произведено
14
повторное ПЦР исследование, которое позволило выделить в пробе только один
периодонтопатоген
Prevotella
обладающий
intermedia,
умеренной
ассоциацией
с
болезнями периодонта.
Таким образом, результаты ПЦР диагностики в комплексном обследовании
пациентов с заболеваниями периодонта помогают составить прогноз и контролировать
терапевтический
успех
после
механического
лечения,
применения
средств
профессиональной гигиены или курса антибиотиков.
Используемая литература:
1. Безрукова И.В., Грудянов А.И. Агрессивные формы пародонтита.-Москва,2002.
2. Борисенко Л.Г.Диагностика и комплексное лечение заболеваний периодонта:
учеб.-метод. пособие. -Мн., 2003.
3. Грудянов А.И., Овчинникова В.В.,
Дмитриева И.А. Антимикробная и
противовоспалительная терапия в пародонтологии. -Москва, 2004.
4. Казеко Л.А., Юдина Н.А. Болезни пародонта у населения Республики
Беларусь//Dental Forum.-2005.-№2.-С.16-19.
5. Леус П.А. Микробный биофильм на зубах. Физиологическая роль и патогенное
значение //Стоматологический журнал.- 2007. - №2. С. 100-111.
6. Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н.Применение новой тест системы,
основанной
на
полимеразной
цепной
реакции,
в
пародонтологии
//Институт
стоматологии.-2004.-№4.-С.63-66.
7. Царёв В.Н., Николаева Е.Н., Плахтий Л.А.Перспективы применения молекулярногенетических
методов
исследования
в
диагностике
пародонта
//Российский
стоматологический журнал.-2002.-№5.-С.6-9.
8. Bauermeister C.-D. Микробиологическая диагностика заболеваний тканей
пародонта //Новое в стоматологии.-2003.-№7.-С.27-30.
9. Conrads, Georg. Testing for Marker Bacteria In Progressive Periodontitis: The European
Experience.//Infectious Diseases in Clinical Practice.-2001.-V.10.-P.481-487.
10. Daniel H. Fine, Kenneth Markowitz, David Furgang,Deborah Goldsmith, Danette
Ricci-Nittel, Christine H. Charles, Penny Peng, and Michael C. Lynch. Effect of Rinsing With
an Essential Oil–Containing Mouthrinse on Subgingival Periodontopathogens//Journal of
Periodontology.-2007.-V.78.- P. 1935-1942
11. Eija Könönen, Susanna Paju, Pirkko J. Pussinen, Mari Hyvönen, Paulo Di Tella, Liisa
Suominen-Taipale, and Matti Knuuttila .Population-Based Study of Salivary Carriage of
Periodontal Pathogens in Adults//Journal of clinical microbiology.-2002.-V.40.-P.821-825.
15
12. E. J. Leys, A. L. Griffen, S. J. Strong and P. A. Fuerst. Detection and strain
identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans by nested PCR// Journal of clinical
microbiology.- 1994.-V.32.-P. 1288-1294.
13. Eugene J. Leys, Sharon R. Lyons,Melvin L. Moeschberger,Robert W. Rumpf, and Ann
L. Griffen. Association of Bacteroides forsythus and a Novel Bacteroides Phylotype with
Periodontitis// Journal of Clinical Microbiology.-2002.-v.40.-p. 821–825.
14. Khalil Boutaga, Arie Jan van Winkelhoff, Christina M. J. E. Vandenbroucke-Grauls,
and Paul H. M. Savelkoul. Comparison of Real-Time PCR and Culture for Detection of
Porphyromonas gingivalis in Subgingival Plaque Samples// Journal of clinical microbiology.2003.-v.41.-p. 4950–4954.
15. Mohammad Hossein Salari and Zainab Kadkhoda. Rate of cultivable subgingival
periodontopathogenic bacteria in chronic periodontitis// Journal of Oral Science.-2004.- v.40.-p.
157-161.
16. Sharon R. Lyons, Ann L. Griffen, and Eugene J. Leys. Quantitative Real-Time PCR for
Porphyromonas gingivalis and Total Bacteria.//Journal of Clinical Microbiology.-2000.-v.38.-p.
2362-2365.
17. Starka M. Parodontologia 2000// New York, 2000.-V.1-p.64.
18. Straka M. Пародонтит и атеросклероз-существует ли между ними связь?//Новое в
стоматологии.-2001.-№8.-с.26-33.
19. Socranssky S.S., Haffajee A.D., Cuginni M.A., Kent R.L. Microbial complexes in
subgingival plague // J Clin periodontal.- 1998.-V. 25.-P.134-144.