по медицинской микробиологии и вирусологии

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ
ГБОУ ВПО «ДАГЕСТАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ» МЗ РФ
ПРАКТИКУМ
ПО МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ
Учебное пособие
(Часть II)
Махачкала 2012
1
УДК - 579
ББК 52.64
П. 69
М.С. Саидов, А.Д. Гаджиева, Т.В. Царуева, Л.А. Гамидова,
Г.М. Газиев, А.И. Алиева, Б.М. Саидова, Ф.С. Акаева,
Р.И. Исаева, П.С. Саидова, З. М. Муталипова, Р.Ю. Базихова.
Рецензент:
Д.Р. Ахмедов – зав. кафедрой инфекционных болезней ДГМА,
д.м.н. профессор.
П. 69 Практикум по микробиологии: учебное пособие для медицинских вузов (под редакцией зав.каф. микробиологии вирусологии и
иммунологии доц. М.С. Саидова). Махачкала: ИПЦ ДГМА, 2012.
Практикум составлен в соответствии с действующей типовой программой по медицинской микробиологии и вирусологии. В учебном
пособии приведены краткие сведения о возбудителе, основные методы
диагностики инфекционных заболеваний. Он предназначен для самостоятельной подготовки студентов к лабораторным занятиям и освоения практических навыков. В приложении даны типовые ситуационные
задачи, тестовые задания для контроля усвоения студентами материала.
Рекомендовано к печати и использованию в учебном процессе
ЦКМС ДГМА.
2
Содержание
Частная микробиология------------------------------------------------------Список сокращений--------------------------------------------------------------Занятие №1. Общая характеристика семейства Enterobacteriaceae.
Микробиологическая диагностика эшерихиозов.-------------------------Занятие №2. Микробиологическая диагностика брюшного тифа
и паратифов-------------------------------------------------------------------------Занятие №3. Микробиологическая диагностика брюшного тифа (продолжение). Серологическая диагностика брюшного тифа--------------Занятие №4. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
пищевых токсикоинфекций---------------------------------------------Занятие №5. Микробиологическая диагностика дизентерии------------Занятие №6. Микробиологическая диагностика холеры-----------------Занятие №7. Итоговое занятие по разделу: Микробиологическая диагностика кишечных инфекций---------------------------------------------------Занятие №8. Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций. Бактериологическое исследование гноя (1день исследования)--Занятие №9. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Бактериологическое исследование гноя (2день исследования)--Занятие № 10. Нейссерии. Микробиологическая диагностика менингококковых и гонококковых инфекций. Бактериологическое исследование гноя (3 день исследования)-----------------------------------------------------Занятие № 11. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций. Бактериологическое исследование гноя (заключение)--------------Занятие № 12. Микробиологическая диагностика дифтерии и коклюшаЗанятие №13. Микробиологическая диагностика туберкулеза----------Занятие №14. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы---------------------------------------------------------------------------Занятие №15. Микробиологическая диагностика чумы и туляремии----Занятие №16. Итоговое занятие по темам №№:8-15.---------------------Занятие №17. Спирохетозы. Микробиологическая диагностика сифилиса----------------------------------------------------------------------Занятие №18. Микробиологическая диагностика риккетсиозов, хламидиозов------------------------------------------------------------------------------Частная вирусология
Занятие №19. Методы микробиологической диагностики вирусных
3
инфекций------------------------------------------------------------------------Занятие №20. Микробиологическая диагностика острых респираторных
вирусных инфекций грипп ----------------------------------------------------Занятие №21. Микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций. Микробиологическая диагностика полиомиелита-------------Занятие №22. Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов,
микробиологическая диагностика, ВИЧ-инфекции------------------------Занятие №23. Микробиологическая диагностика герпесвирусных инфекций. Онкогенные вирусы------------------------------------------------------Занятие №24. Итоговое занятие по медицинской вирусологии---Список рекомендуемой литературы--------------------------------------------Приложение---------------------------------------------------------------------------
4
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ – антиген
АТ – антитело
ВГА – вирус гепатита А
ВГВ – вирус гепатита В
ВГС – вирус гепатита С
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ВПЧ – вирус папилломы человека
ВПГ – вирус простого герпеса
ВУИ – внутриутробные инфекции
ИФА, ИФМ – иммуноферментный анализ, метод
КОЕ – колониеобразующая единица
МПА – мясопептонный агар
МПБ – мясопептонный бульон
ОМЧ – общее микробное число
ОП – оптическая плотность
РА – реакция агглютинации
РН – реакция нейтрализации
РИМ – радиоиммунный метод
РИФ – реакция иммунофлюоресценции
РНИФ- реакция непрямой иммунофлюоресценции
РПГА (РНГА) – реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации
РТГА – реакция торможения гемагглютинации
РСК – реакция связывания комплемента
ПЦР – полимеразно – цепная реакция
СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита
ЦМВ (CMV) – цитомегаловирус
5
ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Занятие 1
ТЕМА:
ОБЩАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА
СЕМЕЙСТВА
ENTEROBACTERIACEAE. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
ЭШЕРИХИОЗОВ.
Цель: изучить биологические свойства кишечной палочки. Методы
микробиологической диагностики эшерихиозов.
К кишечной группе инфекций относятся заболевания, заражение
при которых происходит через ротовую полость. К ним относятся эшерихиозы, вызванные кишечной палочкой, брюшной тиф, паратифы А и
В, дизентерия, пищевые токсикоинфекции, холера.
Возбудители кишечных инфекций в основном относятся к семейству Enterobacteriaceae, включающее более 20 родов. Поражение у человека вызывают бактерии родов Escherichia, Shigella, Salmonella,
Klebsiella, Proteus, Citrobacter, Serratia, Iersinia и другие.
Это грамотрицательные палочки средней величины с закругленными концами, подвижные или неподвижные, спор не образуют, аэробы
или
факультативные
анаэробы,
хемоорганотрофы,
каталазаположительные, оксидаза-отрицательные. Кроме родов, включающих
классические патогены, возрастает роль условно-патогенных бактерий,
часто вызывающих оппортунистические инфекции.
Типовым представителем рода Esherichia является E coli. На средах
Гисса или МТС-5У она разлагает все углеводы, кроме сахарозы, до кислоты и газа. Брюшнотифозная и дизентерийные палочки на этих средах
разлагают глюкозу, мальтозу и маннит до кислоты без газа, а лактозу и
сахарозу не разлагают. На среде Эндо колонии кишечной палочки
красные, т.к. они разлагают лактозу, фуксин восстанавливается и окрашивает колонии в красный цвет, а колонии брюшного тифа и дизентерии бесцветные, так как они лактозу не разлагают.
Кишечная палочка Escherichia coli открыта Т. Эшерихом в 1885 году из испражнений грудного младенца. Род представлен грамотрицательными подвижными (перитрихи) палочками средней величины. У
большинства представителей есть микрокапсула. Оптимум температуры 37°, ферментируют углеводы с образованием кислоты и газа.
Esherchia входят в состав микрофлоры толстого кишечника (в 1 г
испражнений в норме содержится 4 млн.клеток кишечной палочки).
Кишечные палочки рассматривают как санитарно-показательные мик6
робы (СПМ) при бактериологическом исследовании воды и пищевых
продуктов.
Кишечная палочка – основной возбудитель эшерихиозов у человека, она вызывает кишечные инфекции, поражения мочевыводящих путей, бактериемии, менингиты, сепсис.
Она имеет антигены: липополисахаридные (О-), жгутиковые белковые (Н-), капсульные полисахаридные (К-). Капсульные антигены
делятся на группы: А-термостабильный, В и L-термолабильные. Поскольку морфологических различий между патогенными и непатогенными кишечными палочками нет, их дифференцировка основана на
различиях в структуре антигена. В настоящее время различают 173 разновидности О-антигена, и 57 Н-антигена.
Кишечные палочки по антигенной структуре разделяют на следующие патогенные серовары:
1) энтеропатогенные
2) энтеротоксигенные
3) энтероинвазивные
4) энтерогеморрагические (табл.1)
Основным методом исследования при коли-инфекциях является
бактериологический. Иммунитет при этих инфекциях не напряженный,
возможно повторное заражение.
Таблица 1
№
1.
2.
3.
4.
ЭПКП
ЭТКП
ЭИКП
ЭГКП
Диареегенные эшерихии
СЕРОВАРЫ
О26, О44, О55, О111, О86, О119 и др.
О6, О8, О15, О20, О25, О114, О148 и др.
О29, О124, О135, О136, О143, О144 и др.
О26, О111, О157
Для лечения эшерихиозов применяют антибактериальные средства
(ампициллин, ко-тримоксазол, норфлоксацин и др.). Специфическую
профилактику не проводят. Профилактика коли-инфекций направлена
на соблюдение санитарно-гигиенических правил, предупреждение инфицирования продуктов питания, воды и т.д.
При длительном лечении антибиотиками подавляется нормальная
микрофлора, рост кишечной палочки и развивается дисбактериоз, для
лечения которого применяют: колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол.
7
Положительная роль кишечной палочки в организме человека:
1) входит в состав нормальной микрофлоры кишечника;
2) вырабатывает витамины группы В, К и Е;
3) является антагонистом других возбудителей кишечной группы
микробов.
4) постоянно иммунизирует организм.
Самостоятельная работа
1. Изучить схему бактериологического исследования испражнений при
колиэнтеритах.
2. Произвести посев испражнений больного колиэнтеритом ребенка на
среду Эндо.
3. Изучить на демонстрационном материале выросшие колонии:
а) отобрать колонии красного цвета на среде Эндо, сделать мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, зарисовать,
б) отобрать 10 красных колоний, поставить реакцию агглютинации на
стекле со смесью ОВ-коли сывороток и при положительном результате
– реакцию агглютинации с типовыми сыворотками,
в) пересеять агглютинабильные колонии на скошенный МПА или среду
Ресселя для накопления чистой культуры.
4. Из чистой культуры кишечной палочки:
а) поставить реакцию агглютинации на стекле со смесью ОВсывороток,
б) поставить реакцию агглютинации с типовыми сыворотками (О26, О55,
О111),
в) поставить развернутую реакцию агглютинации с живой и гретой
культурой с соответствующей О-сывороткой,
г) определить чувствительность к антибиотикам методом бумажных
дисков.
5. На демонстрационном материале произвести учет пестрого ряда или
МТС-5У. Учет антибиотикограммы.
6. Составить протокол и дать заключение.
8
Схема 1. Микробиологическое ис следование эшерихиозов
(по Борисову Л.Б. 2001)
Испражнения
I этап
II этап
III этап
Посев на среду Эндо
Характер и цвет
колоний
Мазок, окраска
по Граму
Окраска по Граму, микроскопия
Пересев агглютинабельных колоний на
скошенный МПА или
среду Расселя
для выделения
чистой культуры
Реакция агглютинации на стекле со смесью
ОK- сывороток
Реакция агглютинации с типоспецифическими сыворотками
Развернутая реакция агглютинации
Посев на пестрый
ряд и МПБ
Окончательный ответ
9
Реакция агглютинации на стекле 10 колоний со смесью
О-коли
сывороток
Указания к самостоятельной работе
1. При изучении кишечной группы бактерий необходимо отметить
какие роды входят в состав семейства Enterobacteriacеae, представители
которого вызывают кишечные заболевания.
2. Охарактеризовать сходство и отличие кишечной палочки от
возбудителей брюшного тифа, паратифов А,В, дизентерии.
3. При посеве испражнений на среду Эндо через сутки на ней вырастают красные колонии с металлическим блеском. В состав среды
Эндо входят: МПА, лактоза и обесцвеченный фуксин. При росте кишечной палочки, разлагается лактоза, фуксин восстанавливается и
окрашивает колонии в красный цвет. Красные колонии кишечной палочки внешне одинаковы. Для дальнейшего исследования берут выборочно 10 колоний, ставят реакцию агглютинации со смесью О-В сывороток. Колонию, давшую положительную агглютинацию, пересевают
на среду Ресселя для выделения чистой культуры. Среда Ресселя представляет короткий пестрый ряд – МПА, лактозу и глюкозу. Кишечная
палочка, разлагает и лактозу и глюкозу, и вся среда окрашивается в синий цвет. Для определения чистоты культуры мазки красим по Граму,
микроскопируем. С чистой культурой необходимо поставить реакцию
агглютинации со смесью ОК-сывороток, отдельно с каждой сывороткой
и с сывороткой, давшей положительную реакцию, поставить 2 развернутые реакции с гретой и негретой культурами. Чистую культуру посеять на среды Гисса или МТС-5У для изучения биохимических свойств и
на МПБ – для изучения протеолитических свойств.
В мазках отмечается грамотрицательные палочки средней величины с закругленными концами.
Посевы на средах Гисса и штативы с развернутыми реакциями агглютинации помещают в термостат на сутки при t 37°С.
На средах Гисса или МТС-5У разлагаются глюкоза, мальтоза, маннит, лактоза, а сахароза не разлагается. На МПБ выделяются: сероводород – бумажка, пропитанная уксуснокислым свинцом чернеет; индол –
бумажка, пропитанная щавелевой кислотой розовеет; аммиак – красная
лакмусовая бумажка синеет.
Идентификацию выделенной чистой культуры проводят на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств.
10
Таблица 2
Препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиозов
Препарат
Состав
Назначение
Применяется при дисбактеЖивая культура E.coli риозе кишечника, лечении
Коли-бактерин
штамма М-17
хронических колитов, эшерихиозов
Для лечения хронических
Живая культура
Бифидумбактерин
кишечных инфекций, дисбаB.bifidum
ктериоза
Живая культура E.coli Для лечения хронических
Бификол
штамма М-17 и
кишечных инфекций, дисбаB.bifidum
ктериоза
Для лечения хронических
Живые молочнокислые
Лактобактерин
кишечных инфекций, дисбабактерии
ктериоза
Коли-протейный
Фаги, лизирующие
Для лечения и профилактики
бактериофаг
эшерихии и протей
Фаги, лизирующие
Для лечения внутренних орэшерихии наиболее ганов, местно на пораженный
Коли-бактериофаг
распростаненных серо- участок, рану, в полость при
групп
абсцессах.
Вопросы для самоконтроля
1. Назовите основные роды семейства кишечных бактерий.
2. Какова физиологическая роль кишечной палочки в организме человека?
3. Назовите антигены кишечной палочки и укажите их локализацию в
бактериальной клетке.
4. Укажите морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства кишечной палочки.
5. Какие вы знаете патогенные серовары кишечной палочки?
6. Какие заболевания вызывают патогенные серовары кишечной палочки?
7. В чем особенность бактериологической диагностики коли-энтеритов?
8. Назовите препараты, применяемые для лечения колиэнтеритов.
9. Почему кишечная палочка является санитарным показателем загрязнения окружающей среды?
11
Занятие 2
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА И
ПАРАТИФОВ.
Цель: изучить бактериологический метод исследования брюшного тифа и паратифов на 1-й неделе заболевания.
Брюшной тиф, паратифы А и В – острые инфекционные заболевания, сходные по своим клиническим проявлениям, патогенезу, биологическим свойствам, характеризующиеся поражением лимфатического
аппарата тонкого кишечника, бактериемией, протекают с выраженной
интоксикацией, увеличением печени, селезенки, часто с розеолезной
сыпью. Поэтому их рассматривают вместе. Но это самостоятельные
заболевания. Возбудитель брюшного тифа Salmonella typhi (палочка
Эберта-Гаффки), паратифа А – S.paratyphi А (палочка Бриона-Кайзера);
возбудитель паратифа B – S. рaratyphi В (палочка Шотмюллера) относятся к роду Salmonella семейства Enterobactericeae. Название рода дано
в честь американского ученого Д. Салмона.
Это мелкие палочки с закругленными концами, перитрихи, спор и
капсул не образуют, грамотрицательны.
Сальмонеллы брюшного тифа и паратифов – факультативные анаэробы. Оптимальная температура роста для них 37ºС. На МПА образуют
круглые, куполообразные, влажные, гладкие S-формы колонии.
S.paratyphi B (палочка Шоттмюллера) могут вырастать в виде крупных
колоний со слизистым валиком по периферии. На дифференциальнодиагностических средах Эндо и Левина колонии сальмонелл бесцветны,
с голубоватым оттенком, на среде Вильсон-Блера (висмут-сульфит
агар) в результате восстановления сульфита натрия до сернистого
натрия – черные или коричнево-зеленые; вызывают равномерное помутнение МПБ. В коротком ряду Гисса сальмонеллы брюшного тифа
разлагают глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты без газа, а паратифозные палочки – до кислоты и газа.
Сальмонеллы брюшного тифа и паратифа А подкисляют, а паратифа В щелочат лакмусовое молоко. Желатину не разжижают, индола не
образуют, продуцируют Н2S.
Сальмонеллы содержат соматический термостабильный О-антиген,
жгутиковый, термолабильный Н-антиген. Общность антигенной структуры приводит к тому, что сальмонеллы брюшного тифа и паратифов
агглютинируются не только в гомологичной, но и в родственных ан12
тисыворотках. Для того, чтобы исключить перекрестную групповую
агглютинацию, готовят монорецепторные сыворотки, содержащие антитела против специфических фракций сальмонелл. Возбудители
брюшного тифа и партифов А и В находят по антигенным свойствам по
схеме Кауфмана-Уайта.
Источник заболевания – больные люди и носители.
Механизм передачи инфекции: фекально-оральный. Преобладает водный путь передачи, реже встречается пищевой и контактно-бытовой пути.
Таблица 3
Схема патогенеза брюшного тифа
Фаза (стадия)
развития
патогенеза
1.Дигестивная или
пищеварительная
2.Фаза инвазии
3. Фаза
бактериемии
4. Фаза
паренхиматозной
диффузии
Клинические
периоды
Сроки
заболевания
Микробиологическая
диагностика
Инкубационный
-
-
Продромальный
Начало
заболевания
1-я неделя
-
Разгар
заболевания
2-3-я неделя
5. ВыделительноРеконвалесценция
аллергическая фаза
4-я неделя
Гемокультура
Гемокультура, розеолокультура, миелокультура,
серодиагностика,
Копрокультура,
уринокультура, биликультура,
серодиагностика
6. Фаза
реконвалесценции
Возможный исход при брюшном тифе:
1. Полное выздоровление;
2. Осложнения, связанные с развитием язв-прободения, кишечные
кровотечения.
3. Переход в бактерионосительство.
Инкубационный период при брюшном тифе в среднем равен 14
дням. Начало заболевания характеризуется постепенным подъемом температуры при явлениях нарастающего отравления эндотоксином, сказывающегося в общей слабости, головной боли, помрачением сознания,
бессоннице, бреде. К концу первой недели заболевания температура тела
достигает 40-41°С. На второй неделе заболевания на коже живота появляется розеолезная сыпь, выражены симптомы энтероколита. В выделительно-аллергической фазе лимфоидная ткань фолликулов и бляшек
подвергается некрозу, что может привести в дальнейшем к перфорации
13
кишечника, перитониту и смерти (3-4 недели заболевания). Возможны
осложнения: пневмония, миокардит, инфекционно-токсический шок.
Исследуемый материал в зависимости от стадии патогенеза (указан
в таблице 3).
Питательные среды: желчный бульон, среда Рапопорта (желчный
бульон, глюкоза или маннит, индикатор Андреде). Желчь является для
сальмонелл благоприятной средой. Дифференциально-диагностические
среды Плоскирева, Эндо, Левина.
В зависимости от фазы развития заболевания, методы диагностики
различны. На первой неделе заболевания для исследования берут кровь
и выделяют гемокультуру. На второй неделе заболевания, когда в крови
появляются антитела, ставят реакцию Видаля – развернутую реакцию
агглютинации по определению антител в сыворотке крови больного. На
третьей неделе заболевания - для подтверждения диагноза на исследование берут испражнения или мочу и выделяют копрокультуру или
уринокультуру.
Самостоятельная работа студентов
1. Изучить схему бактериологического исследования крови больного
брюшным тифом (схема №2).
2. Произвести посев крови больного брюшным тифом на желчный бульон или на среду Рапопорта.
3. Пересеять культуру со среды Рапопорта на среду Эндо.
4. Из бесцветных колоний на среде Эндо приготовить мазок, окрасить
по Граму, промикроскопировать, зарисовать. Пересеять бесцветные
колонии на среду Ресселя или скошенный МПА.
5. Изучить чистоту культуры на среде Ресселя или на скошенном
МПА. Произвести посевы на МПА для определения чувствительности культуры к антибиотикам методом бумажных дисков, на среды
Гисса или МТС-12Е, на МПБ для определения биохимических и
протеолитических свойств.
6. Произвести реакцию агглютинации на стекле чистой культуры с поливалентными и монорецепторными сыворотками.
7. Произвести учет «пестрого ряда» или МТС-5 – 12Е (на демонстрационном материале). Учет антибиотикограммы.
8. Составить протокол бактериологического исследования крови больного с подозрением на брюшной тиф и дать заключение.
9. Составить схему бактериологического исследования испражнений
больного с подозрением на брюшной тиф.
14
15
Указания к самостоятельной работе
Бактериологические исследования брюшного тифа на первой неделе заболевания проходят в несколько этапов.
1-й день – 5-10 мл крови, взятой стерильно из вены больного у постели посеять в 50-100 мл желчного бульона или в среду Рапопорта.
Посевы поместить в термостат на сутки при температуре 37°С.
Среда Рапопорта состоит из мясо-пептонного бульона, 10% желчи,
2% глюкозы или 1% маннита и 1% индикатора Андреде. При росте S.
typhi на среде Рапопорта отмечается помутнение, покраснение, газа нет.
При росте . S.paratyphi А и В, среда покраснеет, в результате образования газа всплывает поплавок.
2-й день. Со среды Рапопорта пересевают на среду Эндо и помещают в термостат на сутки при температуре 37°.
3-й день. На среде Эндо вырастают бесцветные колонии (т.к. они
лактозу не разлагают), которые пересевают на среду Ресселя для выделения чистой культуры.
4-й день. Производят учет посевов на среде Ресселя, определяют
чистоту культуры. На среде Ресселя лактоза не разлагается (среда красная), глюкоза разлагается (среда синяя). Культура чистая. Готовят мазки, красят по Граму, микроскопируют, определяют подвижность. В
мазках грамотрицательные палочки средней величины с закругленными
концами, подвижные, перитрихи.
С чистой культурой ставят ориентировочную реакцию агглютинации с диагностическими агглютинирующими сыворотками брюшного
тифа, паратифов А и В. С сывороткой, давшей положительную реакцию
агглютинации, ставят развернутую. Чистую культуру высевают на среды Гисса или МТС-5У для определения биохимических свойств, на мясопептонный бульон – протеолитических свойств, на МПА – для определения чувствительности к антибиотикам и определения отношения к
брюшнотифозному бактериофагу.
На средах Гисса разлагаются глюкоза, мальтоза и маннит до кислоты без газа. Лактоза и сахароза не разлагаются. На МПБ выделяется
сероводород. Культура чувствительна к определенным антибиотикам и
лизируется под действием брюшнотифозного бактериофага. Развернутая реакция агглютинации положительна с сывороткой брюшного тифа.
16
Таблица 4
Препараты для специфической терапии и профилактики брюшного тифа
и паратифов А и В
Препарат
Показания к
применению
Состав препарата
Вакцина брюшнотифозная
ВИполисахаридная
(ВИАНАВАК)
Антигены – раствор
полисахарида,
извлеченного из супернатанта культуры сальмонелл
Химическая сорби- Полноценные антированная
тифо- гены брюшнотифозпаратифозная
ных, паратифозных
столбнячная вак- А и В-бактерий,
цина
столбнячный
анатоксин
Для профилактики брюшного
тифа у взрослых
по эпидпоказаниям
Для профилактики брюшного
тифа,
паратифов, столбняка
по эпидпоказаниям
Вакцина брюшнотифозная спиртовая,
инактивированная
Антигены
–
брюшнотифозные
палочки, инактивированные спиртом
Дивакцина спиртовая паратифозная,
сухая инактивированная
Бактериофаг
брюшнотифозный
Антигены
возбуд
ителей паратифов А
и В, инактивированных спиртом
Бактериофаги
–
фильтрат фаголизатов
сальмонелл
брюшного тифа
Для профилактики брюшного
тифа у взрослых
по эпидпоказаниям
Для профилактики паратифов
у взрослых по
эпидпоказаниям
Для лечения и
экстренной
профилактики
Какой вид иммунитета
по происхождению создается в организме
Активный искусственный,
приобретенный
антибактериальный против брюшного тифа
Активный искусственный,
приобретенный
антибактериальный против брюшного тифа,
паратифов А и В, антитоксический
против
столбняка
Активный искусственный,
приобретенный
антибактериальный против брюшного тифа
Активный искусственный,
приобретенный
антибактериальный против паратифов А и В
Иммунитета не создает,
механизм действия –
специфический
лизис
бактерий вирусами
Вопросы для самоконтроля
1. Назовите возбудителей брюшного тифа и паратифов.
2. Чем отличаются сальмонеллы брюшного тифа от сальмонелл паратифов А и В по биохимическим свойствам?
3. Какова антигенная структура возбудителя брюшного тифа?
4. Особенности патогенеза брюшного тифа (стадии заболевания).
5. Какой материал берется у больного для ранней диагностики брюшного тифа и как этот материал исследуется?
6. Каков состав среды Рапопорта?
7. Какой материал берется для бактериологического исследования у
больного с подозрением на брюшной тиф на 3-4 неделях заболевания?
17
Занятие 3
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА
(ПРОДОЛЖЕНИЕ). СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО
ТИФА.
Цель: изучить методы серологической диагностики брюшного тифа.
На второй неделе заболевания брюшным тифом, когда в крови появляются антитела, ставят реакцию Видаля. У больного для исследования берут кровь. Сыворотку больного разводят от 1:50 до 1:800. В реакции используют диагностикумы:
1) брюшного тифа с О-антигеном;
2) брюшного тифа с Н-антигеном;
3) паратифа А с О- и Н-антигенами;
4) паратифа В с О- и Н-антигенами;
Реакцию Видаля проводят в 4 рядах пробирок, по 6 в каждом (4
опытные и 2 контрольные – контроль антигена и контроль сыворотки).
Брюшнотифозные диагностикумы применяются для установления стадии заболевания, так как содержание О- и Н-антител в разные его периоды неодинаково. О-антитела накапливаются в разгар заболевания и
исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу
заболевания и сохраняются у переболевших очень долго. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Человек считается больным при
положительной реакции в титре 1:400, 1:800 с О- и Н-диагностикумами.
Это инфекционный Видаль. Иногда бывает положительная реакция Видаля в малых разведениях. Это отмечается за счет прививок или когдато перенесенного заболевания (прививочный или постинфекционный
Видаль). В этом случае реакцию ставят повторно. Если происходит
нарастание титра антител, значит человек больной. Если человек давно
болел, то положительная реакция Видаля отмечается только с Ндиагностикумом (анамнестическая реакция).
Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления
бактерионосителей используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации
для определения Vi-антител в сыворотке крови. Диагностическое значение имеет титр пассивной Vi-гемагглютинации 1:40 и выше.
Самостоятельная работа студентов
1. Составить схему реакции Видаля.
2. Поставить реакцию агглютинации Видаля для диагностики брюшного тифа и паратифов.
18
3. Произвести учет реакции Видаля по демонстрационному материалу,
дать заключение.
4. Поставить РПГА (РНГА) – реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом.
5. Произвести учет РПГА, дать заключение.
Указания к самостоятельной работе
Для постановки реакции Видаля берут кровь из пальца разовой иглой или из локтевой вены в количестве не менее 1-1,5 мл в начале второй недели заболевания. Кровь собирают в стерильную пробирку, которую помещают в термостат на 30-60 минут. Сгусток отделяют от стенок
пробирки пастеровской пипеткой, пробирку помещают в холодильник.
После отстаивания сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции.
Исследуемую сыворотку разводят стерильным физиологическим
раствором от 1:50 до 1:800. В реакции используют 2 контроля: в первом
контроле – контроль антигена (КА) содержится физиологический раствор (1 мл) и диагностикум (2 капли); второй контроль – контроль сыворотки (КС) содержит 1 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:50.
Контроль должен быть абсолютно прозрачным.
Таблица 5
Схема постановки реакции Видаля
Разведения сыворотки
Ингредиенты
1:100
1:200
1:400
1:800
КА
КС
1.Физ. раствор
1
1
1
1
1
-
2.Сыворотка больного 1:50
1
1
1
1
-
1
Брюшного тифа с О-антигеном
2к
2к
2к
2к
2к
-
Брюшного тифа с Н-антигеном
2к
2к
2к
2к
2к
-
Паратифа А с О-и Н-антигенами
2к
2к
2к
2к
2к
-
Паратифа В с О- и Н антигенами
2к
2к
2к
2к
2к
3. Диагностикумы:
в дез/ раствор
Поместить в термостат на сутки при t-37°.
Результаты:
++++ ++++
+++
19
-
-
-
После добавления диагностикумов пробирки встряхивают и помещают в термостат на сутки при температуре 37°С.
Реакция оценивается по их +: ++++ – резко положительная, +++ –
положительная, ++ – сомнительная, – отрицательная.
Высота титра агглютининов не может быть доказательством наличия заболевания. Достоверные результаты реакции агглютинации достигаются при повторных испытаниях сыворотки крови с интервалами
5-7 дней. Отчетливое нарастание титра агглютининов говорит о наличии инфекции.
Для выявления бактерионосителей реконвалесцентов используют
реакцию пассивной Vi-гемагглютинации, с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови. В качестве антигена используют
эритроцитарный Vi-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека I (0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном брюшнотифозных бактерий.
Из пальца берут 1 мл крови. Перед постановкой реакции исследуемые сыворотки нагревают при температуре 56° 30 минут для разрушения групповых агглютининов.
Таблица 6
№
Схема реакции пассивной гемагглютинации
Разведения сыворотки
Ингредиенты
1:10 1:20 1:40 1:80 1:160
1 Сыворотка больного
2 Физиологический раствор
3 Эритроцитарный диагностикум
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
дез. р-р
0,5
0,5
Контроль
0,5
0,5
В термостате при температуре 37°С на 2 часа.
Учет результатов:
Примечание: титр гемагглютининов в сыворотке 1:80.
Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в полистироловых пластинах с лунками. Сыворотку разводят от 1:10 до 1:160 –
1:320. Эритроцитарный диагностикум необходимо тщательно взболтать
и добавлять в каждую лунку по 0,5 мл. Пробирки и луночки помещают
в термостат на полтора-два часа при температуре 37°. Учет реакции
проводят не ранее момента осаждения эритроцитов в контрольных пробирках (через 2 часа) и вторично через 24 часа стояния при комнатной
температуре.
20
Контролями служат:
1) Постановка реакции с адсорбированной монорецепторной Viсывороткой. Реакция должна быть положительной до предельного титра сыворотки, указанного на этикетке ампулы.
2) Постановка реакции с О-сывороткой и физиологическим раствором. Результаты должны быть отрицательными.
Положительная реакция гемагглютинации характеризуется осадком эритроцитов на дне луночки или пробирки в виде «зонтика» с зазубренными концами. При отрицательной реакции, как и в контролях,
эритроциты оседают компактно и осадок имеет вид диска с ровными
краями и гладкой поверхностью («пуговки»)(табл.6). Диагностическое
значение имеет титр пассивной Vi-гемагглютинации с 1:40 и выше.
Вопросы для самоконтроля
1. На какой неделе заболевания брюшным тифом ставится реакция
Видаля?
2. Почему при серологической диагностике брюшного тифа используется О- и Н-антигены?
3. Что такое анамнестический, инфекционный, прививочный Видаль?
4. Укажите методы диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.
5. Назовите препараты, используемые для специфической профилактики брюшного тифа.
21
Занятие 4
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ
(САЛЬМОНЕЛЛЕЗНЫХ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ).
Цель: Изучить методы микробиологической диагностики пищевых
токсикоинфекций.
Большинство микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления
людей, относятся к роду Salmonella семейства Enterobacteriaceaе.
Название дано в честь американского ученого Сальмона. Сальмонеллы
– это грамотрицательные палочки средней величины с закругленными
концами, подвижные или неподвижные, спор не образуют, хемоорганотрофы, оксидаза-отрицательны, каталаза-положительны, биохимически
менее активны, чем кишечная палочка. На средах Гисса и МТС-5У разлагают глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты и газа или без газа, лактозу и сахарозу не разлагают.
Сальмонеллы имеют сложную антигенную структуру. Они содержат О-антигены соматические, Н-антигены жгутиковые, некоторые имеют К-антигены. По антигенным свойствам все сальмонеллы
представлены в таблице Кауфмана – Уайта, по которой они включены по О-антигену в группы, обозначаемые прописными буквами латинского алфавита (табл.7). Дифференциация сальмонелл внутри
групп проводится по антигенной специфичности Н-антигенов, существующих в 2-х фазах. Первая фаза специфическая обозначается
строчными буквами латинского алфавита, вторая неспецифическая
фаза – арабскими цифрами.
22
Таблица 7
Классификация сальмонелл по антигенной структуре
(схема Кауфмана - Уайта)
Серогруппа,
О-антиген
Н-антиген
вид или серовар
Фаза 1
Фаза 2
Серогруппа А
S. paratyphi A
1, 2, 12
а
(1, 5)
Серогруппа В
S. schottmuelleri
1, 4, (5), 12
b
1, 2
S. abony
1, 4, (5), 12
b
e, n, x
S. typhimurium
1, 4, (5), 12
i
1, 2
S. derby
1, 4, (5), 12
f, g
(1, 2)
S. wien
1, 4, 12, 27
b
1, w
S. haifa
1, 4, (5), 12
z
1, 2
S. heidelberg
1, 4, (5), 12
r
1, 2
Серогруппа C
S. hirschfeldii (S.paratyphi C)
6,7, (Vi)
c
1, 5
S. choleraesuis
6,7
(c)
1, 5
S. montevideo
6,7
m, s, (p)
S. leopoldville
6,7
b
z
S.bonn
6,7
l, v
e, n, x
Серогруппа D
S. typhi
9, 12
d
S. enteritidis
1, 9, 12
g, m
(1, 7)
S. dublin
1, 9, 12
g, p
S. rostock
1, 9, 12
g, p, u
S. moscow
9, 12
b, g
S.gallinarum
1, 9, 12
s, q
Серогруппа E
S. london
3, 10
l, v
1, 6
S. anatum
3, 10
e, h
1, 6
S. amsterdam
3, 10
g, m, s
S.zanzibar
3, 10
k
1, 5
Сальмонеллезы – это зоонозно-антропонозные инфекции. Заражение происходит при употреблении в пищу мяса свиней, крупного рогатого скота, кур, яиц, при контакте с инфицированными животными. В
последние годы увеличилась частота госпитальных вспышек сальмонеллеза. К сальмонеллезам восприимчивы взрослые и дети. Сальмонеллы могут размножаться при 4-6ºС и длительно сохраняться в зараженных мясных изделиях.
Механизм передачи – фекально-оральный. Патогенные сальмонеллы у людей вызывают гастроэнтериты, гастроэнтероколиты. Заболева23
ния регистрируются повсеместно, в основном в теплый сезон года.
Клинически выделяют гастроинтестинальные и генерализованные формы. Генерализованные формы делят на тифоподобные (с гастроэнтеритом, поражением ЦНС и сыпью) и септикопиемические (сепсис сальмонеллезной этиологии) варианты. При сальмонеллезе отмечается бактерионосительство острое, транзиторное, хроническое.
Основными возбудителями сальмонеллезных гастроэнтеритов являются: S.typhimurium, S.derby, S.enteritidis, S.heldelberg, S.anatum и др.
Помимо большой группы микробов из рода сальмонелл, вызывающих пищевые отравления у людей, есть и другие возбудители, также
вызывающие отравления. К ним относятся: кишечная палочка - Escherichia coli, возбудители дизентерии из рода Shigella, возбудители паратифов А и В – Salmonella paratyphi A и Salmonella Schotmulleri В, протейная палочка - Proteus vulgaris, золотистый стафилококк - Staphylococcus aureus, возбудитель ботулизма - Clostridium botulinum и другие.
Большое значение в возникновении и развитии сальмонеллезов
имеет количество бактерий, поступивших в кишечник. При разрушении
сальмонелл освобождается эндотоксин (ЛПС), нарушающий функцию
нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем. Возбудители
продуцируют энтеротоксин, нарушающий водно-солевой обмен, что
приводит к диарее и обезвоживанию организма.
Материалом исследования являются остатки пищи, вызвавшие
отравление, суточные пробы готовых продуктов питания, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь, моча.
Основным методом микробиологического исследования является
бактериологический. Бактериологическое исследование проводится с
целью: обследования больного для подтверждения или исключения диагноза «сальмонеллез»; выявления бактерионосительства; исследование
пищевых продуктов, воды, объектов внешней среды для установления
факторов передачи.
Иммунитет непрочный. Основное лечение направлено на дезинтоксикацию и восстановление водно-солевого баланса. Специфическую
иммунопрофилактику не проводят. Профилактика основана на проведении санитарно-гигиенических, ветеринарно-санитарных и противоэпидемических мероприятий.
Для выделения микробов из рода сальмонелл применяют накопительные среды Киллиана и Мюллера.
24
Самостоятельная работа
1.Разобрать схему микробиологической диагностики сальмонеллезов.
2. Произвести посев мясного фарша на накопительную среду Мюллера, среду Эндо, солевой агар, селективную среду для выделения протея, Китта-Тароцци.
3. Отобрать лактозонегативные колонии на среде Эндо. Из изолированных колоний приготовить мазок, окрасить по Граму, промикроскопировать.
4. Произвести пересев лактозонегативной изолированной колонии
на среду Ресселя или скошенный МПА для выделения чистой
культуры.
5. Поставить реакцию агглютинации с чистой культуры и с групповыми и монорецепторными диагностическими сыворотками по
схеме Кауфмана – Уайта.
6. Отметить на демонстрационном материале (пестрый ряд) и МТС12Е биохимические свойства выделенной чистой культуры, учет
антибиотикограммы. Определить чувствительность к антибиотикам методом бумажных дисков.
7. Составить протокол и дать заключение.
Указания к самостоятельной работе
Первый этап.
Материал исследования – мясной фарш. Производим посев на
элективные питательные среды для разных возбудителей, которые могут вызвать отравление: на среду Киллиана или Мюллера, на кровяной
агар, на среду Рапопорта, на скошенный МПА по методу Шукевича в
конденсационную воду, на среду Китта-Тароцци. Посевы помещают в
термостат на сутки при температуре 37°С.
Второй этап.
На средах Киллиана и Мюллера отмечается помутнение, на среде
Рапопорта – помутнение, покраснение; на среде Эндо, Плоскирева, кровяном агаре – выросли бесцветные колонии; на среде Китта-Тароцци и
на МПА при посеве по методу Шукевича роста нет.
Поскольку среды Киллиана и Мюллера являются накопительными
для сальмонелл, из них производят пересев на среду Ресселя для выделения чистой культуры. Посев помещают в термостат на сутки при
температуре 37°С.
25
Третий этап.
На среде Ресселя лактоза не разлагается – скошенный агар не изменит окраску, глюкоза разлагается – среда синяя. С культурой на среде
Ресселя:
а) определяем чистоту культуры – делаем мазки красим по Граму (в
мазках грамотрицательные палочки с закругленными концами средней
величины);
б) определяем подвижность в «висячей» и «раздавленной» капле;
в) ставим реакцию агглютинации чистой культуры на стекле с
групповыми и монорецепторными сыворотками по определению О- и
Н-антигенов (по схеме Кауфмана-Уайта).
г) чистую культуру сеем на среды Гисса или МТС-5У – для определения биохимических свойств и на МПБ – протеолитических свойств;
д) определяем чувствительность к антибиотикам;
е) патогенность культуры испытывается пероральным заражением
белых мышей.
Бактерионосительство выявляют при профилактическом обследовании работников пищевых блоков и в очаге инфекции. При этом исследуют испражнения, мочу, желчь.
Серологический метод. Антитела в крови переболевших обнаруживаются в реакции агглютинации с соответствующими сальмонеллезными диагностикумами. Положительной считается реакция в титре сыворотки 1:400, ставится также РНГА с эритроцитарными сальмонеллезными диагностикумами.
Таблица 8
Препараты для специфической профилактики
и терапии сальмонеллезных инфекций
Препарат
Состав
Назначение
Бактериофаг
Фильтрат фаголизатов паратифа А,
Для лечения,
сальмонеллезный
паратифа В, тифимуриум, гейдельэкстренной
групп А, В, С, Д, Е берг, ньюпорт, инфантис, холера супрофилактики
ис, ораниенбург, дублин, энтеритидис, галлинарум, анатум, ньюленд
26
Вопросы для самоконтроля
1. Какие микроорганизмы могут вызвать пищевые токсикоинфекции?
2. Какие сальмонеллы чаще всего являются возбудителями пищевых
отравлений?
3. Каковы особенности патогенеза пищевых токсикоинфекций?
4. Какие микробиологические методы используют при диагностике
пищевых токсикоинфекций?
5. Какой материал подлежит исследованию при пищевых токсикоинфекциях?
6. Как проводится идентификация сальмонелл – возбудителей токсикоинфекций?
7. Какие питательные среды используют для выделения возбудителей
пищевых токсикоинфекций?
8. Каковы меры предупреждения пищевых токсикоинфекций? Существует ли их специфическая профилактика?
27
Занятие 5
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БАКТЕРИАЛЬНОЙ
ДИЗЕНТЕРИИ.
Цель: изучить этиологическую структуру бактериальной дизентерии,
биологические свойства возбудителей. Изучить основные принципы
диагностики и уметь провести идентификацию выделенной культуры.
Бактериальная дизентерия – полиэтиологическое антропонозное
заболевание, которое вызывается несколькими видами шигелл и с преимущественным поражением толстого кишечника. Общие свойства
всех шигелл - отсутствие жгутиков, менее выраженная по сравнению с
другими энтеробактериями ферментативная активность, наличие только О- антигена.
По биохимической активности и антигенной структуре все шигеллы делятся на 4 группы: А, В, С, D. К каждой группе относятся различные серовары одного вида.
Таблица 9
Международная классификация шигелл
Группа
Серовар
A – Shigella dysenteriae
1 – 12
B – Shigella flexneri
1 – 6, х, у
C – Shigella boydii
1 – 18
D – Shigella sonnei
-
Вирулентность шигелл определяется наличием факторов адгезии и
колонизации, с помощью которых шигеллы проникают в эпителий толстого кишечника и размножаются в нем. В дальнейшем развивается
гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) или инфекционная
аллергия, что приводит к развитию язвенного колита.
Токсигенность шигелл связана с образованием эндотоксина (ЛПС)
и экзотоксинов 2х типов: энтеротоксина и цитотоксина. Цитотоксин
продуцирует Shigella dysenteriae (Григорьева- Шига).
Особенностью эпидемиологии дизентерии является исчезновение в
40х годах Shigella dysenteriae и затем возвращение ее в 60-80х годах.
Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии проводится
тремя основными методами: бактериологическим, серологическим и аллергическим. Основной метод диагностики- бактериологический- производят посев испражнений на элективные и дифференциально- диагно28
стические питательные среды (селенитовая среда обогащения, среды
Плоскирева, Эндо и Левина). Следует отметить, что выделяемость антибиотикозависимых штаммов шигелл возрастает при посеве испражнений
на среды, содержащие левомицетин и тетрациклин (25мкг/л).
С целью серодиагностики ставят реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА).
Аллергодиагностика- ставят внутрикожную пробу с дизентерином
с 3 - 5 - го дня заболевания (проба Цуверкалова).
Самостоятельная работа студентов
1. Разобрать и зарисовать в тетрадь схему микробиологической диагностики бактериальной дизентерии.
2. Произвести посев испражнений больного с подозрением на бактериальную дизентерию на дифференциально- диагностические
среды Плоскирева или Эндо.
3. Изучить характер роста на среде Плоскирева (изучение культуральных свойств).
4. Из части бесцветной S- формы колоний (L- дефективные колонии) на среде Плоскирева приготовить мазок, окрасить по Граму
и промикроскопировать (изучение морфологических и тинкториальных свойств).
5. Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле со
смесью дизентерийных сывороток (Флекснера, Зонне) и монорецепторной сывороткой.
6. Для выделения чистой культуры оставшуюся часть лактозодефективной колонии (Ld-колонии) пересевают на среду Ресселя.
7. Микроскопическое изучение чистоты выделенной культуры.
8. Изучение ферментативных свойств выделенной культуры- пересев на дифференциально- диагностические среды Гисса.
9. Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам диско- диффузионным методом (метод бумажных дисков)
и фаголизабельности.
29
Схема 3. Микробиологическое исследование при дизентерии
(по Борисову Л.Б., 2001)
1 этап
Испражнения
Сыворотка крови
Бактериологическое
исследование
Серодиагностика
Посев на дифференциальные
среды (Плоскирева и др.)
Реакция агглютинации (по
типу реакции Видаля) с
дизентирийными диагностикумами, РПГА с
эритроцитарными
диагностикумами
Характер и цвет колоний
2 этап
Мазок, окраска по Граму
Реакция агглютинации на
стекле со смесью дизентерийных сывороток
Ответ
Ответ
Пересев бесцветных
колоний на среду Ресселя
или трехсахарную среду
3 этап
Посев на «пестрый» ряд
Мазок, окраска по Граму
Реакция агглютинации на
стекле со смесью дизентирийных сывороток, а затем с
видовыми и типовыми
сыворотками
Регистрация изменений
цвета среды
Заключение
30
Указания к самостоятельной работе
Бактериологическое исследование
1-й день: Испражнения больного засевают на дифференциальнодиагностические среды Плоскирева или Эндо. При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков, их
выбирают бактериологической петлей, промывают в изотоническом
растворе хлорида натрия и наносят на поверхность среды Плоскирева
или Эндо, после чего растирают шпателем. Посевы инкубируют в термостате при t - 37ºС 24 часа.
2-й день: а) прозрачные бесцветные колонии пересевают на среду
Ресселя для выделения чистой культуры;
б) оставшуюся часть изолированной колонии используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью
дизентерийных сывороток и со смесью сывороток против сальмонелл
(для исключения брюшного тифа и сальмонеллеза).
3-й день: а) через 24 часа на среде Ресселя – столбик агара посинеет.
б) выделенную культуру пересевают на дифференциально- диагностические среды Гисса или МТС – 5У;
в) определяют чувствительности выделенной культуры к антибиотикам диско- диффузионным методом и фаголизабельность.
4-й день: Окончательное заключение по результатам определения
биохимических свойств, чувствительности к антибиотикам и фаголизабельности.
Примечание: испражнения берут непосредственно у постели больного из-за неустойчивости шигелл во внешней среде.
31
Вопросы для самоконтроля:
1. Приведите современную Международную классификацию шигелл.
2. Какие свойства положены в основу классификации шигелл?
3. Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам?
4. Какой вид дизентерийных палочек продуцирует экзотоксин?
5. Перечислите основные методы микробиологической диагностики
бактериальной дизентерии.
6. Какие шигеллы наиболее часто вызывают бактериальную дизентерию в настоящее время?
7. Как и какой материал берут на исследование для выделения чистой
культуры и на какие питательные среды его засевают?
8. Препараты для специфической профилактики и лечения бактериальной дизентерии.
32
Занятие 6
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ.
Цель: изучить методы микробиологической диагностики холеры. Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии холеры.
Холера - острое антропонозное особо опасное карантинное инфекционное заболевание, характеризующееся клиническими симптомами
гастроэнтерита с резким обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.
Вид Vibrio cholerae имеет 4 биовара: cholerae, eltor, proteus (вибрион
Мечникова), albensis (светящийся вибрион). Холеру вызывают 2 биовара: cholerae и eltor. Холерный вибрион монотрих, очень подвижный,
требователен к PH, растет на щелочных средах, обладает высокой биохимической активностью. По отношению к трем углеводам- сахарозе,
маннозе и арабинозе все вибрионы делятся на 8 групп (по Хейбергу).
Биовары cholerae и eltor относятся к I группе Хейберга: расщепляют до
кислоты без газа сахарозу и маннозу и не расщепляют арабинозу.
Холерный вибрион содержит О- и Н- антигены. По О-антигену все
вибрионы делятся на серогруппы. Биовары cholerae и eltor относятся к
О- I группе. В 1993 году как возбудитель холеры выделен серовар
О139(Бенгал) Антиген О I- серогруппы состоит из 3х компонентов: А,
В и С, разные сочетания которых образуют серовары: Огава (АВ), Инаба (АС), Гикошима (АВС). Если холерные вибрионы не агглютинируются О-I сывороткой, но обладают специфическими для вида свойствами, то их называют неагглютинирующими или НАГ-вибрионами.
Вирулентность холерного вибриона обусловлена двумя токсинами:
эндотоксином и экзотоксинам. Ведущую роль в патогенезе заболевания
играет экзотоксин-холероген. Он вызывает цитотоксический эффект –
потерю организмом жидкости и солей натрия, калия ,что является главной причиной развития алгида и смерти больного.
Диагностика холеры проводится бактериологическим методом.
Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы,
пищевые продукты, трупный материал и др.
Питательные среды для культивирования холерного вибриона: 1%
щелочная пептонная вода, щелочной агар, среда ТЦБС.
33
Самостоятельная работа студентов:
1.Зарисовать в тетрадь схему микробиологической диагностики
холеры.
2. На первом этапе исследуемый материал изучают в мазках, окрашенных по Граму и методом «раздавленная» и «висячая» капля, а
затем засевают на 1% щелочную пептонную воду и плотные питательные среды.
3. Для накопления материала культуру пересевают на новую пептонную воду и еще раз на пластинчатые среды. Выделяют чистую
культуру.
4. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим и
тинкториальным (микроскопия мазков, окрашенных по Граму),
культуральным, биохимическим и антигенным свойствам.
5.Серовары Vibrio cholerae определяют в реакции агглютинации
на стекле с агглютинирующими сыворотками Инаба, Огава, Гикошима.
6. Биохимические свойства определяют к углеводам: сахароза, манноза, арабиноза.
7. Изучение препаратов для профилактики и терапии холеры.
8. Оформление протокола исследования.
34
Схема 4. Микробиологическое исследование при холере
(по Борисову Л.Б., 2001)
Испражнения, рвотные массы, желчь, патологоанатомический материал, вода и др.
Бактериоскопическое исследование
1 этап
Мазок,
окраска
по Граму
и фуксином
Бактериологическое исследование
Посев на
1%
щелочную
пептонную воду
Препарат
«висячая
капля»
Экспрессметоды
Посев на
чашки с
щелочным
питательным
агаром
Иммобилизация
вибрионов
холерными сыворотками и
фагами
Иммунофлюоресцентное
исследование
Ответ
Ответ
2 этап
Пересев пленки на чашки с
щелочным питательным
агаром и вторично на щелочную пептонную воду
Агглютинация на
стекле с Осывороткой
Мазок,
окраска
по
Граму
Пересев колоний на скошенный щелочной
питательный
агар
Ответ
3 этап
Характер
колоний
Мазок,
окраска
по Граму
Реакция агглютинации
на стекле с Осывороткой и сыворотками Инаба и Огава
Подвижность
Развернутая
реакция
агглютинации
с Осывороткой
Пересев на скошенный щелочной питательный агар. Изучение выделенной
чистой культуры
по схеме 3-4 этапов
Характер
колоний
Мазок,
окраска по
Граму
Гемолиз
Чувствитель-ность
к специфическим
фагам
Окончательный
ответ
35
Посев
на
«пестрый
ряд»
Указания к самостоятельной работе
Материал для исследования: испражнения, сыворотка крови, рвотные массы.
I. Бактериоскопическое исследование.
Из исследуемого материала готовят 2 мазка, окрашивают их по
Граму и разведенным фуксином. Подвижность определяют методом
«висячая» и «раздавленная» капля.
Обнаружение в мазках большого количества грамотрицательных
слегка изогнутых палочек, активно- подвижных, позволяет дать предварительный ориентировочный ответ.
II. Бактериологическое исследование.
Материал (испражнения, рвотные массы) засевают на жидкие и
плотные питательные среды: 1% щелочная пептонная вода, щелочной
агар, среда ТЦБС (тиосульфатцитратжелчно-сахарозный агар).
Схема исследования следующая:
Испражнения сеют на 1% щелочную пептонную воду. Посев инкубируют при температуре 37ºС. Через 5-6 часов из образовавшейся
пленки готовят мазки, красят по Граму и определяют подвижность методом «висячей» и «раздавленной» капли. Из 1-ой пептонной воды выросшую культуру пересевают во 2-ю пептонную воду. Ставят реакцию
агглютинации с агглютинирующей О- сывороткой. Наличие грамотрицательных вибрионов, агглютинирующихся О- сывороткой, позволяет
дать 2й предварительный ответ. Параллельно производят посев исследуемого материала на твердые питательные среды: щелочной агар
(мелкие колонии S- формы с голубоватым оттенком) и ТЦБС- среду
(колонии S- формы желтого цвета).
Чистую культуру выделяют на скошенном щелочном агаре (посевы
инкубируют 10-12 часов).
Вид выделенной культуры идентифицируют по следующим свойствам:
1. Микроскопия мазка окрашенного по Граму - грамотрицательные
палочки слегка изогнутые;
2. Определение чувствительности выделенной культуры к холерному бактериофагу;
3. Определение агглютинабельности противохолерной О- сывороткой и типовыми сыворотками Инаба, Огава, Гикошима.
4. Ферментация углеводов (сахарозы, арабинозы и маннозы).
36
Таблица 10
Тесты для дифференциации холерных вибрионов
Классический
Холерный вибрион
Тест
холерный
Эль-тор
вибрион
1 Агглютинация
+
+
О-сывороткой
2 Агглютинация типовыми
сыворотками (Огава, Инаба, +
+
Гикошима)
3 Лизис фагами:
холерный фаг С
+
–
(фаг IV)
фаг Эль-тор
4 Агглютинация
эритроцитов курицы
5 Гемолиз эритроцитов
барана
6 Рост на агаре с 50 ЕД
полимиксина
–
+
_
+
_
+
–
+
Таким образом, идентификацию культур проводят в 3 этапа: 1)
устанавливают их принадлежность к роду Vibrio; 2) дифференцируют
их от холероподобных вибрионов в РА с О- сывороткой, по чувствительности к специфическому фагу и другими тестами; 3)определяют
видовые свойства культур.
Окончательный ответ о выделении и идентификации выделенной
культуры дают через 36-48 часов.
III. Экспресс - методы диагностики.
1. Иммобилизация холерных вибрионов противохолерными сыворотками.
Методика: при помещении холерных вибрионов в сыворотку иммунную (содержит антитела против V.cholerae), они утрачивают подвижность (определяют в «висячей» и «раздавленной» капле).
2. РИФ (реакция иммунофлюоресценции).
Методика: препараты из исследуемого материала обрабатывают
флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе.
37
Положительный результат- обнаружение в препарате даже единичных вибрионов с ярким желто- зеленым свечением в виде блестящего
ободка по периферии клетки.
3. ДНК – диагностика – использование молекулярно-генетического
метода – ПЦР – полимеразно-цепная реакция.
IV. Серологические методы
Являются вспомогательным методом и применяется для ретроспективной диагностики холеры, а также для выявления вибрионосителей и
оценки напряженности постинфекционного и поствакцинального иммунитета. Серодиагностика проводится постановкой РА или РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с эритроцитарным диагностикумом.
Реакцию ставят на плексигласовых панелях, в луночках которых
получают разведения исследуемой сыворотки, к которым добавляют 0,5
мл 3% суспензии эритроцитарного диагностикума.
Положительный результат - эритроциты выпадают в осадок в виде
«зонтика».
Отрицательный результат - эритроциты выпадают в осадок в виде
«пуговки».
Таблица 11
Препараты для профилактики и терапии холеры
№ Название препарата
Состав
Применение
Холерный
Используется для
1
бактериофаг
Набор типовых фагов
лечебно- профилакти(поливалентный)
ческих целей
Взвесь убитых холерных
Применяется для
вибрионов Эль- Тор и
2 Холерная вакцина
активной иммунизаклассических холерных
ции против холеры.
вибрионов Инаба и Огава
Взвесь убитых холерных
вибрионов, выращенных в
Применяется для
Холерогенжидкой питательной среде.
специфической
3
анатоксин
Препарат очищен от балпрофилактики
ластных веществ, выпускахолеры.
ется в сухом виде
Тетрациклин,
Применяется для
4
Антибиотики
морфоциклин,
лечения холеры
сигмамицин.
38
Вопросы для самоконтроля:
1. Укажите таксономию (семейство, род, вид) возбудителей холеры.
2. Каковы морфологические, тинкториальные и культуральные, свойства холерного вибриона?
3. Биохимические свойства холерного вибриона. Что такое «триада
Хейберга»?
4. На чем основано разделение V.cholerae на серовары?
5. Тесты отличия биоваров V.cholerae.
6. Какие токсины образует холерный вибрион?
7. Источники и пути заражения холерой.
8. Какие правила следует соблюдать при взятии, пересылке и исследовании материала при подозрении на холеру?
9. Можно ли проводить исследования на холеру в обычных лабораториях? Если нет, то почему?
10. Отличия холерного вибриона от холероподобных вибрионов.
11. Назовите препараты, используемые для специфической профилактики и лечения холеры.
39
Занятие 7
ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛУ: «МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ»
Цель: контроль знаний студентов по разработанным на кафедре тестовым занятиям 1-2 уровня.
Занятие 8
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТАФИЛОКОККОВОЙ
ИНФЕКЦИИ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (1 ДЕНЬ
ИССЛЕДОВАНИЯ)
Цель:1.Изучить методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
2.Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии стафилококковых инфекций.
Среди большого числа шаровидных бактерий широко распространенных в природе, лишь немногие являются патогенными для человека.
Воспалительные процессы, вызываемые этими микроорганизмами,
обычно сопровождаются образованием гноя, вследствие чего их называют гноеродными или пиогенными кокками.
Стафилококки (Staphylococcus) - круглые кокки, располагающие в
культуре в виде кучек, напоминающих виноградные грозди, а в патологическом материале - в виде небольших скоплений по несколько кокков;
неподвижны, спор не имеют, капсул не образуют, грамположительны.
Среди не образующих спор бактерий, стафилококки наиболее устойчивы к различным физическим и химическим факторам. Они являются
факультативными анаэробами, но лучше развиваются в аэробных условиях. Обладают значительной химической активностью, разлагают ряд
углеводов, разжижают желатину. Диагностическое значение имеет способность сбраживать глюкозу и маннит в анаэробных условиях. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии
с ровными краями; в жидких средах дают равномерное помутнение. В
лабораториях используют способность стафилококков размножаться на
средах с большим количеством (6-10%) хлорида натрия. На таких средах
другие бактерии не растут, вследствие чего солевые среды являются
40
элективными для стафилококков. Род Staphylococcus включает 19 видов,
из них только 3 экологически связаны с организмом человека: S-aureus стафилококк золотистый, S. epidermidis - стафилококк эпидермальный и
S. saprophyticus - стафилококк сапрофитный. Заболевания, отличающиеся
разнообразием клинических проявлений, вызывают золотистые, реже
эпидермальные и еще реже сапрофитные стафилококки.
Повреждающее действие на клетки и ткани организма человека
оказывают токсины и ферменты стафилококков.
Золотистые стафилококки способны выделять ряд токсинов, в
частности лейкоцидин, который оказывает губительное действие на
лейкоциты. Гемолизины оказывают лизирующее действие на эритроциты.
Возникновение пищевых отравлений стафилококковой природы
связано с действием энтеротоксинов, продуцируемых золотистыми
стафилококками. В патогенезе стафилококковых инфекций большую
роль играют экзоферменты:
- плазмокоогулаза осуществляет свертывание плазмы;
- гиалуронидаза способствует распространению стафилококков в
тканях;
- лецитиназа разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, вызывает лейкопению;
- фибринолизин растворяет фибрин, ограничивающий местный
воспалительный очаг, чем способствует генерализации патологического
процесса.
Стафилококки широко распространены в окружающей среде - воздухе, пыли и т. д. У человека они всегда находятся на коже, а также в
сообщающихся с внешней средой полостях (ротовой и носовой) в качестве безвредных обитателей. В случае каких-либо общих нарушений в
организме или при повреждениях кожных и слизистых покровов стафилококки могут поражать любой орган и любую ткань.
Самостоятельная работа
1. Составить текст направления гноя в бактериологическую лабораторию.
2. Составить схему микробиологического исследования гнойного отделяемого, крови.
3. 1-й день исследования гноя при гнойно-воспалительных заболеваниях:
41
а) приготовить мазок, окрасить по Граму, промикроскопировать;
б) произвести посев гноя на среду ЖСА или кровяной агар методом
штриха;
в) УИРС «Определение стафилококкового носительства у студентов». Взять материал со слизистой зева и носа друг у друга стерильным ватным тампоном и произвести посев на чашку Петри с
ЖСА или кровяным агаром.
г) произвести запись в протоколе исследования (1-й день)
Схема 5. Микробиологическое исследование при стафилококковых
инфекциях(по Борисову Л.Б., 2001)
гной, экссудат, мокрота, слизь из зева, носа и др.
Бактериоскопическое
исследование
Мазок, окраска по
Граму
1-й этап Ответ
кровь при сепсисе
Бактериологическое
исследование
на ЖСА
Посев
на кровяной агар
Характер и
пигментация
колоний
посев в сахарный бульон
Гемолиз
мазок, окраска
по Граму
Ответ
Лецитиназная
активность
Мазок, окраска
по Граму
На скошенный питательный
агар (чистая культура)
3-й этап
Посев на среды
пестрого ряда с глюкозой
маннитом в
анаэробных условиях
Определение плазмокоагулазы
Фаготипирование
Определение чувствительности к антибиотикам
42
Окончательный ответ
Указания к самостоятельной работе
1. Направление в бактериологическую лабораторию
В направлении в бактериологическую лабораторию необходимо
указать следующие данные:
а) название материала
б) название учреждения, направляющего материал
в) фамилия имя отчество больного
г) возраст
д) адрес или отделение и номер палаты
е) дата заболевания
ж) дата взятия материала
з) предполагаемый клинический диагноз
и) подпись врача
Образец направления:
В бактериологическую лабораторию РКБ, хирургическое отделение
РКБ направляет гнойное отделяемое больного Гаджиева М.Г., 47 лет,
для бактериологического исследования (микрофлора, антибиотикограмма)
Диагноз: Правосторонний гнойный плеврит
Дата заболевания: 20.01.12 г.
Дата взятия материала: 25.01.12 г.
Врач Султанов А.С.
2. Бактериоскопическое исследование (схема). Из исследуемого
материала (гной) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по Граму и микроскопируют. В препаратах видны грамположительные кокки, располагающихся одиночно или попарно.
При нахождении в мазках грамположительных кокков, типа ланцетовидных диплококков с капсулой можно предположить наличие пневмококков. Если обнаруживают грамположительные кокки, расположенные цепочкой, можно предположить присутствие в этом материале
стрептококков.
3.Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают бактериальной петлей на чашки Петри с кровяным и желточносолевым агаром (ЖСА) методом штриха для получения изолированных
колоний. Посевы инкубируют при 37° С в течении суток.
43
Выросшие изолированные колонии пересевают на скошенный агар
для получения чистой культуры. Идентификацию культуры проводят
на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и
биохимических свойств. Определяют также факторы вирулентности:
1. Определение гемолитической активности
2. Определение лецитиназы
3. Определение плазмокоагулазной активности
4. Определение расщепления маннита в анаэробных условиях
Таблица № 12
Диагностические, профилактические и лечебные препараты
при стафилококковых инфекциях
Препарат
Состав
(класс препарата)
Показания к применению
Для терапии больных
хронической формой стафилококковой инфекции
Для лечения больных с
Комплекс растворимых
хроническими
Стафилококковый
термостабильных АГ
гнойничковыми
антифагин
стафилококка.
поражениями кожи
Химическая вакцина
стафилококковой этиологии
Плазма для лечения
Гипериммунная
Антитела – антитоксины. больных стафилококковым
антистафилококкоСыворотка иммунная,
сепсисом и другими
вая плазма
лечебная
острыми стафилококковыми
заболеваниями
Для лечения больных
Антитела к стафилококАнтистафилококкостафилококковым сепсисом
ковому экзотоксину.
вый иммуноглобуи другими острыми
Лечебный
лин
стафилококковыми
иммуноглобулин
заболеваниями
Стафилококковый
анатоксин
АГ, Вакцина
Вопросы для самоконтроля:
1. Перечислите патогенные кокки. Почему их называют пиогенными кокками?
2. Каковы морфологические, тинкториальные и культуральные
свойства стафилококков?
3. Какие заболевания вызывают стафилококки? Какой материал берут на исследование при различных стафилококковых инфекциях?
44
4. Какова классификация стафилококков?
5. Перечислите факторы патогенности стафилококков.
Занятие 9
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ
(2 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ).
Цель: Изучить методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций. Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии стрептококковых инфекций.
Стрептококки
Род Streptococcus, семейство Streptococcaceae включает 21 вид.
Клетки стрептококков имеют шаровидную или овальную форму, диаметром 0,6-1 мкм. Располагаются в виде цепочек разной длины или попарно. Грамположительны. Хемоорганотрофы. Требовательны к питательным средам. Стрептококки культивируются на питательных средах
с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. На поверхности плотных сред образуют мелкие, диаметром до 1 мм, бесцветные колонии, в
жидких - дают придонный, пристеночный рост, оставляя среду прозрачной. По характеру роста на кровяном агаре различают стрептококки: бета-гемолитические - вокруг колоний образуется прозрачная зона
гемолиза; альфа-гемолитические - вокруг колоний образуется неширокая, зеленоватая зона; негемолитические - среда не изменяется. Стрептококки обладают многими факторами патогенности:
1) адгезины
2) антихемотахсический фактор
3) М-белок.
Из ферментов, определяющих патогенность стрептококков,
наибольшее значение имеют гиалуронидаза и стрептокиназа (фибринолизин), которые способствуют распространению и генерализации процесса.
45
Схема 6
46
Стрептококки серогруппы А образуют ряд токсинов:
1) О-стрептолизин, 2) S-стрептолизин, 3) лейкоцидин и др.
Для скарлатинозного стрептококка характерно наличие эритрогенина-токсина, вызывающего покраснение кожи или сыпь.
Наиболее значительная роль в инфекционных заболеваниях принадлежит гемолитическому стрептококку (группа А), так как он является возбудителем сепсиса, рожистого воспаления, ревматизма, различных гнойных процессов.
Микробиологическое исследование при сепсисе
Микробиологическое исследование крови является ведущим при
лабораторной диагностике сепсиса. Кроме того, при септикопиэмиях
исследуют материал из первичных и вторичных местных очагов и инфекции. Кровь берут в период подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены в количестве не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей, так как микроорганизмы находятся в крови в сравнительно небольших количествах.
Посевы делают у постели больного в колбы с 50-100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10
превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков. В случае транспортировки
крови к ней добавляют антикоогулянты: цитрат или оксалат натрия,
декстран сульфат, гепарин.
Посевы производят на сахарный бульон и инкубируют их при 37 °C
в течении 10 дней при ежедневном контроле. В случае отсутствия роста
микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по Граму. Выделенную чистую культуру микроорганизмов идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибиотикам.
При оценке результатов необходимо исходить из того, что сепсис
является тяжелым общим инфекционным заболеванием, развивающимся в условиях резкого угнетения всех основных механизмов иммунитета. Возбудителями сепсиса являются различные патогенные и условнопатогенные микроорганизмы. Однократный посев крови при сепсисе не
всегда приводит к выделению культуры. Более информативным является трехкратный посев крови с суточным интервалом. На фоне антибиотикотерапии кровь у больных для посева следует брать 5-6 раз.
47
Самостоятельная работа
1. Произвести учет результатов посева гнойного отделяемого. Макроскопическая характеристика колоний. Отметить наличие или отсутствие пигмента.
2. Из лецитиназно-позитивных колоний на ЖСА приготовить мазок,
окрасить по Граму, промикроскопировать.
3. Пересев на скошенный МПА для выделения чистой культуры. Произвести запись в протоколе (2-й день).
4. УИРС «Носительство стафилококков среди студентов медакадемии»;
а) просмотреть чашки с посевами и отобрать подозрительные колонии;
б) из отобранных колоний приготовить мазки, окрасить по Граму;
в) материал из колоний пересеять на скошенный МПА. Произвести
запись в протоколе.
Микробиологическая диагностика
Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала, окрашивают по Граму и микроскопируют.
При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °C в течении 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают
по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным
агаром и сахарным бульоном.
Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам.
По данному признаку все стрептококки делятся на серологические
группы (A, B, C, D и т.д.). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном C, выделенным из исследуемой культуры, и сыворотками (обычно 4 наиболее
распространенные серогруппы – A, B, C, D). Большинство патогенных
для человека β-гемолитических стрептококков относится к серологической группе A. По содержанию типоспецифических антигенов протеиновой природы β-гемолитические стрептококки подразделяются на серовары, из которых 47 относятся к группе А. Серовар стрептококков
определяют в реакции агглютинации. Развернутое серологическое ис48
следование и типирование стрептококков проводят главным образом
для эпидемиологического обследования. Выделенную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. При подозрении на сепсис делают посевы из крови больного.
Серодиагностика. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют главным образом для подтверждения диагноза ревматизма. Реакция основана на подавлении способности О-стрептолизина растворять эритроциты при наличии в крови
больного соответствующих антител. Реакцию ставят со стандартным
сухим О-стрептолизином.
Таблица 13
Дифференциально-диагностические признаки стрептококков
Пробы на устойчивость
Вид,
Характер Лизис Ферментация
теллурит азид
сегогруппа гемолиза желчью
инулина
оптохин
калия натрия
S. pyogenes
β
R
S
S
серогруппа А
S. agalactiae
β
R
S
S
серогруппа В
S. pneumoniae' β, реже α
+
+
S
S
S
S. sangius'
α
R
S
S
Условные обозначения: ' разные серогруппы или без группового антигена
R – устойчив
S – чувствителен
49
Таблица 14
Диагностические, профилактические и лечебные препараты
при стрептококковых инфекциях
Препарат
Состав
Показания к применению
(класс препарата)
Стрептококковый
Фильтрат фаголизата Применяется наружно, внутрибактериофаг (жидстрептококка.
кожно, внутримышечно для
кий).
лечения при стрептококковых
заболеваниях.
О-стрептолизин су- Лиофильно высушен- Применяется для постановки
хой.
ный фильтрат бульонсерологических реакций –
ной культуры стрепопределения анти-Отококка – активного
стрептолизина в сыворотках
продуцента Окрови больных стрептококкострептолизина.
выми инфекциями (чаще ревматизмом).
Вопросы для самоконтроля:
Какие заболевания вызывают стрептококки?
Сколько видов включены в род Streptococcus?
Какие виды стрептококков чаще вызывают заболевания у человека?
Какие питательные среды используют при выделении чистых культур стрептококков?
5. Ведущие признаки патогенности стрептококков.
6. Какие признаки положены в основу классификаций стрептококков,
какие классификации вы знаете?
7. Назовите ведущие признаки, позволяющие идентифицировать Streptococcus pneumoniae.
1.
2.
3.
4.
50
Занятие 10
ТЕМА: НЕЙССЕРИИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКОГО МЕНИНГИТА И ГОНОРЕИ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ
ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (3 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ).
Цель: Изучить методы микробиологической диагностики менингококковых и гонококковых инфекций. Бактериологическое исследование
гноя (3-й день).
Менингококки
Возбудитель менингококковой инфекции (эпидемический цереброспинальный менингит, назофарингит, меннигококкемия) – Neisseria
meningitidis относится к роду Neisseria, cемейству Neisseriaceae. Менингит могут вызывать и такие микробы, как стрептококк, стафилококк,
условно патогенные энтеробактерии, микобактерии и др. Менингококк
обнаруживается в носоглотке у здоровых людей – здоровое бактерионосительство.
Менингококк – грамотрицательный диплококк, имеющий характерную форму, напоминающую боб или кофейное зерно.
Соприкасающиеся края каждого из парных кокков вогнутые почти
ровные, наружные края выпуклые. В культуре менингококки часто теряют типичную форму и представляют собой круглые или слегка
овальные шары неодинаковой величины. Менингококк неподвижен, не
имеет спор, образует микрокапсулу.
Менингококк весьма нестоек во внешней среде, быстро погибает
как в патологическом материале, так и в культуре даже при комнатной
температуре. Об этом свойстве менингококка необходимо помнить при
исследованиях с целью диагностики. Менингококки хемоорганотрофы,
требовательны к условиям культивирования; аэробы, обладают цитохромоксидазой и каталазой.
Для размножения на питательных средах менингококки нуждаются в
добавлении сыворотки или крови. На поверхности сывороточного агара
образуют нежные бесцветные колонии вязкой консистенции. Биохимическая активность менингококков выражена слабо: продуцируют ферменты, расщепляющие глюкозу и мальтозу с образованием кислоты.
Менингококк не выделяет экзотоксины, но обладает эндотоксином.
На основании различий капсульного антигена менингококки делятся на
8 серологических групп (А, В, С, D, X, V, Z, W-135). Белковые антиге51
ны наружной мембраны клеточной стенки различны у сероваров (их
обозначают цифрами).
Микробиологическая диагностика менингита
Объектом исследования является спинномозговая жидкость (для
установления диагноза менингита). Исследованию подвергается также
слизь из носоглотки больных и здоровых лиц при обследовании на бактерионосительство, кровь при подозрении на сепсис, а также органы
людей, умерших от менингококковой инфекции. При исследовании
любого материала необходимо помнить о крайней лабильности менингококка и предусмотреть все условия для сохранения: производить исследование как можно быстрее, при доставке защищать материал от
холода, в лаборатории хранить его в термостате до исследования.
Спинномозговую жидкость получают при соблюдении асептических
условий путем люмбальной пункции. Жидкость при менингите мутная,
так как содержит гнойные клетки и выходит струей под большим давлением (в норме жидкость прозрачная и вытекает по каплям, медленно).
Схема №7. Микробиологическое исследование при менингококковой
инфекции и бактерионосительстве (по Борисову Л.Б., 2001 г.)
Ликвор, слизь из зева и носа, кровь, гной,
экссудат
Бактериоскопическое
исследование
Ликвор
Бактериологическое
исследование
Сыворотка
крови
Серодиагностика
1 этап Мазок, окраска
Посев на сывоВ реакции
РПГА
по Граму
роточный питавстречного
сыворотками
тельный агар
иммуноэлектрофореза
Люминесцентная
преципитирующими
микроскопия мазков,
антименингококковыми
обработанных
сыворотками
флюоресцирующей
Ответ
иммунной
сывороткой
2 этап
Характер
Посев на сывороточный
колоний
питательный агар
(чистая культура)
3 этап
Определение
чувствительности
к антибиотикам
Мазок,
окраска по
Граму
Посев на
«пестрый»
ряд
Окончательный ответ
52
Серотипирование
культуры
Спинномозговую жидкость берут в количестве 2-5 мл и делят на
две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37оС для
накопления бактерий.
Из исследуемого материала готовят мазки и производят посевы.
Бактериоскопическое исследование. Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии
гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные, грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение – внутри
лейкоцитов, что позволяет сделать окончательное заключение о менингококковой инфекции. При микроскопии мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, а также непатогенные нейсcерии - Branchamella и др. Дифференцировать их по морфологической
картине мазка не представляется возможным.
Для экспресс - диагностики и выявления менингококков в исследуемом материале используется также метод флюоресцирующих антител.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. Кроме того, используют данную среду с добавлением антибиотика ристомицина (150 ЕД/мл.), который задерживает размножение грамположительных кокков, содержащихся в исследуемом материале, и тем самым способствует выделению
чистой культуры менингококка. Образование колоний менингококка на
этих средах наблюдается через 48 часов после инкубации посевов при
370C. В отличие от других кокков, колонии менингококка величиной с
булавочную головку, прозрачны имеют голубоватый оттенок и ровные
края. Такие колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром для
получения чистой культуры.
Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сапрофитных нейссерий, обитающих в носоглотке, проводят по ряду признаков.
Так, менингококки растут только в присутствии нативного белка, в то
время как другие нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент, на средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментируют глюкозу и мальтозу до кислоты.
Фаготипирование менингококка проводят для эпидемиологического анализа. Определение серовара производят в реакции агглютинации
в пробирках.
53
Серологическое исследование. Для экспресс – диагностики с целью
обнаружения в спинномозговой жидкости специфического полисахаридного менингококкового антигена используется метод встречного
иммуноэлектрофореза.
В агаровых пластинках на стекле размером 9×12 см вырезают два
параллельных ряда около 3 мм . В лунки одного ряда вносят исследуемую жидкость, в лунки другого ряда – преципитирующие менингококковые сыворотки разных серогрупп.
Для реакции используется веронал – мединаловый буфер. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40- 45 минут при
комнатной температуре и силе тока около 30 А. При положительном
результате между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой образуются 1-2 полосы преципитации.
Для подтверждения диагноза и при серологическом обследовании
больных используют также РПГА с парными сыворотками.
Гонококки
Гонококк - морфологически сходный с менингококком диплококк
бобовидной формы, в культуре принимающий вид разрозненных полиморфных кокков. Неподвижен, не имеет спор, не образует капсул, по
Граму красится отрицательно. В гнойном отделяемом типичное расположение гонококка внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).
Для гонококка характерна крайняя нестойкость при воздействии физических и химических агентов: он погибает уже при температуре 40-41˚;
даже в гное гонококк гибнет уже через несколько часов. Губительно действуют на гонококк и нитрат серебра в концентрации 1 : 1000, 1% раствор фенола, 0,05 % раствор биглюконата хлоргексидина. Чувствительны
микроорганизмы и к антибиотикам - пенициллину, тетрациклину, эритромицину. Однако высокая заболеваемость гонореей в последние годы и
самолечение больных привели к широкому распространению гонококков, устойчивых к сульфаниламидам и антибиотикам.
Гонококк чрезвычайно требователен к питательной среде; при выделении из организма растет только на средах с добавлением человеческого белка (асцитической жидкости, сыворотки, или крови). Растут
лучше при содержании в атмосфере 3-10% СО2. На асцит агаре гонококки образуют прозрачные колонии с ровными краями и блестящей
поверхностью. Биохимические свойства слабо выражены – из углеводов гонококки расщепляют только глюкозу, образуют каталазу и оксидазу. Протеолитической активностью не обладают.
54
Лабораторная диагностика гонореи
Neisseria gonorrhoeae является возбудителем гонореи – специфического уретрита, протекающего в острой или хронической форме. Гонококк вызывает также бленнорею – гнойное воспаление конъюнктивы
глаз. При лабораторной диагностике используют главным образом бактериоскопический и бактериологический методы исследования (схема 8).
Бактериоскопическое исследование. Материал для исследования
должен быть максимально быстро доставлен в лабораторию во избежание аутолиза гонококков, которые очень чувствительны к изменению
температуры и охлаждению. Из материала готовят мазки, окрашивают
их по Граму, а также метиленовым синим. При положительном результате в мазках обнаруживают гонококки - грамотрицательные диплококки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов. Положительный бактериоскопический диагноз ставится в основном при острой
форме гонореи до применения антибиотиков. При хронической гонорее
бактериоскопическое исследование часто дает отрицательный результат, так как в этих случаях гонококки могут иметь атипичную форму в
виде шаров или, наоборот, очень мелких образований.
Кроме того, в препарате обнаруживают разнообразную микрофлору, лейкоциты, эпителиальные и другие клеточные элементы.
Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашку
Петри со специальными питательными средами – КДС, сывороточным
агаром и др. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением
определенной концентрации казеина, дрожжевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 370 в течении 24-72 часов. Гонококки образуют прозрачные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных
колоний стафилококков, которые также могут расти на этих срезах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие
среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужидкий
агар с сывороткой и углеводами).
Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием кислоты.
Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде - Жангу.
В качестве антигена используют взвесь убитых гонококков. Реакция
Борде-Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорее.
55
Схема №8. Микробиологическое исследование при гонорее и бленнорее
Гной из мочеполовых органов, осадок мочи, гной из
конъюктивы глаза при бленнорее
Бактериоскопические исследования
1 этап
Мазок, окраска по
Граму и метиленовым синим
Ответ
2 этап
3 этап
Сыворотка крови
Бактериологические
исследования
Посев на сывороточный питательный агар и КДС
в чашки Петри
характер колоний,
Мазок, окраска по
Граму
Серодиагностика
РСК
Ответ
пересев на
сывороточный
питательный
агар (чистая культура)
посев на
«пестрый ряд»
определение
чувствительности
к антибиотикам
Окончательный ответ
Самостоятельная работа
1. Продолжить бактериологического исследования гноя. Провести
идентификацию чистой культуры. Приготовить мазок со скошенного МПА, окрасить по Граму, микроскопировать.
2. Определить наличие лецитиназы. При посеве культуры на ЖСА через сутки определить наличие вокруг колоний зоны помутнения с
радужным ореолом.
3. Изучить плазмокоагулазную активность выделенной культуры.
Произвести посев культуры в пробирку с цитратной плазмой.
4. Для оценки анаэробной ферментации маннита произвести посев
уколом выделенной культуры в столбик с маннитом.
5. Определить чувствительность к антибиотикам методом бумажных
дисков.
6. Изучить схему микробиологической диагностики менингококковой
инфекции.
7. Изучить схему микробиологической диагностики гонореи.
8. Промикроскопировать готовые мазки из уретры больных гонореей.
Зарисовать. Дать заключение.
56
Указания к самостоятельной работе
1. Определение лецитиназной активности стафилококков следует
производить массивный посев исследуемого материала на чашки с ЖСА,
а инкубацию вести в течение 2 суток при 35—37° С. Непосредственно
при просмотре чашек вокруг колоний отмечается образование радужных
венчиков и мутной зоны — лецитовителлазная реакция. Чтобы избежать
ошибок в определении желточной реакции, необходимо иметь в виду,
что иногда наблюдается помутнение среды без радужного ободка, в этом
случае проба на лецитовителлазу считается отрицательной.
2. Определение плазмокоагулазной активности. Производят посев
культуры стафилококка в цитратную плазму (кроличью или человека).
Пробирки ставят в термостат на 2 часа. При наличии фермента плазмокоагулазы происходит свертывание плазмы с образованием сгустка
фибрина. Наличие фермента плазмокоагулазы является ажным идентификационным признаком патогенного стафилококка.
3. Определение ферментации маннита в анаэробных условиях технически очень просто и осуществляется путем посева уколом исследуемых культур в пробирки с высоким столбиком полужидкого агара
Хоттнгера, содержащего 1% маннита и 0,004% индикатора бромкрезолпурпура или бромтимолблау (рН == 7,2) . Эту среду перед посевом
“регенерируют”, т.е. кипятят в водяной бане, быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Посевы
инкубируют при 37 °С в течение 5 дней. Однако в значительном числе
случаев результаты могут быть учтены уже через сутки.
4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с применением бумажных дисков. В современный период резко возросла циркуляция микроорганизмов с приобретенной устойчивостью к
антибиотикам, что предполагает необходимость определения чувствительности к антибиотикам каждого конкретного возбудителя инфекции.
Исследованию на чувствительность к антибиотикам должен подвергаться материал в чистой культуре, так как при определении чувствительности в смешанной культуре можно получить ложные результаты вследствие микробного антогонизма и разной скорости роста микроорганизмов. На поверхность питательной среды АГВ (выпускаемой НИИПС г.
Махачкала) наносят испытуемую бактериальную взвесь в количестве 1
мл. Плотность суспензии должна соответствовать стандарту мутности №
10 ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Взвесь равномерно распределяют по чашке, остаток жидкости отсасывают пастеровской пипеткой. Чашки подсу57
шивают при комнатной температуре 30-40 мин, после чего на поверхность чашки с помощью пинцета помещают диски с антибиотиками.
Диски с антибиотиками накладывают пинцетом на равном расстоянии
друг от друга и на 2 см от края чашки. На одну чашку помещают 6-8 дисков. Чашки ставят в термостат вверх дном и инкубируют при 37 С в течение 18-20 ч. Для учета результатов чашки помещают кверху дном на
темную матовую поверхность и освещают настольной лампой под углом
45. С помощью линейки измеряют диаметры зон задержки роста вокруг
дисков, включая диаметр дисков. Не следует обращать внимания на
очень мелкие колонии в пределах зоны торможения роста.
5. Бактериоскопический метод диагностики острой гонореи. Из
исследуемого материала делают два мазка, один окрашивают по Граму,
другой метиленовым синим. При наличии в мазке гонококков видны
грамнегативные диплококки, расположенные внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).
Таблица 15
Препараты для специфической профилактики и терапии менингококковых
и гонококковых инфекций
№
Препарат
Состав
Показания к применению
1. Вакцина менингокок- Химическая вакцина Для специфической проковая группы А полииз капсульного
филактики менингококкосахаридная сухая
полисахарида А;
вой инфекции детей
(Россия)
А+С
до 1 года и старше
2. Вакцина менингококДля специфической
ковая полисахаридная
профилактики детей от 18
серогрупп А+С
мес. и старше, а также
(Франция)
взрослых.
3. Гонококковая вакцина Взвесь инактивиро- Для лечения вялотекущих
(жидкая)
ванной культуры
и хронических форм
гонококков
гонореи в составе
комплексной терапии.
58
Вопросы для самоконтроля:
1. Каковы морфологические, тинкториальные и культуральные свойства менингококков и гонококков? В чем отличие их биохимических
свойств?
2. Какие заболевания могут вызвать менингококки?
3. Какие микроорганизмы (кроме менингококков) могут вызвать воспаление спинномозговых оболочек?
4. Какова резистентность менингококков и гонококков к факторам
внешней среды?
5. Назовите методы микробиологической диагностики острой и хронической гонореи.
6. Что такое бленнорея? Могут ли болеть бленнореей взрослые?
7. Какие серологические реакции применяются при диагностике менингококковой и гонококковой инфекций?
8. Какой метод исследования применяется при подозрении на менингококковое носительство.
9. В чем заключается профилактика менингококковой инфекции.
59
Занятие 11
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (ЗАКЛЮЧЕНИЕ).
Цель: изучить методы микробиологической диагностики анаэробных
инфекций. Ознакомиться с методами специфической терапии и профилактики анаэробных инфекций.
Объединение микроорганизмов в группу анаэробов имеет лишь одну основу - анаэробный тип дыхания.
Возбудители анаэробной инфекции делятся на две большие группы: образующие споры (клостридии) и необразующие споры (неклостридиальные анаэробы).
Возбудители клостридиальной раневой инфекции являются: возбудители столбняка- Cl. tetani, ботулизма- Cl. botulini и группа возбудителей газовой анаэробной инфекции- Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl.
septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli.
К неклостридиальным, не образующим спор, анаэробам относятся:
- Грамотрицательные палочки (бактероиды, фузобактерии).
-Грамположительные палочки (пропионобактерии, бифидо и лактобактерии).
- Грамотрицательные кокки (вейлонеллы).
- Грамположительные кокки (пептококки, пептострептококки).
Эти бактерии, в основном, являются нормальными обитателями организма человека и при определенных условиях могут вызывать гнойно
- воспалительные заболевания.
Возбудители газовой гангрены
Газовая гангрена – полимикробная раневая инфекция, возбудителями которой являются клостридии – Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli. Чаще других возбудителем газовой
гангрены является – Cl. perfringens.
Представляют собой крупные, грамположительные палочки образующие споры. Все они подвижны, за исключением Cl. perfringens.
Этот возбудитель отличается и тем, что в организме человека образует
капсулу.
Возбудители газовой гангрены обладают выраженной сахаро- и
протеолитической активностью, в результате чего в ране образуются
газообразные продукты. Отсюда происходит и название болезни.
60
Основным фактором патогенности является экзотоксин. Образует
также гиалуронидазу и другие ферменты патогенности.
По антигенной специфичности выделяют 6 серологических вариантов. Газовая гангрена развивается при обширных ранениях больших
массивов мышц, при огнестрельных ранениях, обширных ожогах и т. д.
Газовая гангрена протекает без ярко выраженного воспаления и характеризуется прогрессирующим некрозом тканей, отеком, газообразованием в тканях и общей интоксикацией. Иммунитет носит антитоксический характер.
Материалом для исследования является раневое отделяемое. При
микроскопическом исследовании можно обнаружить крупные палочки,
образующие капсулу.
Но основным методом диагностики является бактериологическое
исследование. Для обнаружения вида возбудителя (токсина) ставят
биологическую пробу на морских свинках.
Для терапии применяют поливалентную противогангренозную сыворотку, а после определения типа токсина для лечения применяют видоспецифическую сыворотку.
Возбудитель столбняка относится к роду Clostridium, виду Cl.
tetani. Представляют собой крупные грамположительные палочки, образуют споры, расположенные терминально. Перитрихи.
Основным фактором патогенности является экзотоксин, который
состоит из двух фракций: тетаноспазмина, тетанолизина. Ведущую роль
в патогенезе заболевания играет тетаноспазмин.
Возбудитель столбняка находится в почве, особенно, в унавоженной в виде спор, где они могут сохраняться десятилетиями. Возбудитель столбняка распространен повсеместно, но наибольшая распространенность в южных регионах с теплым влажным климатом и плодородными почвами.
Заражение происходит через дефекты кожи и слизистых, при ранениях, ссадинах, ожогах, отморожениях.
Столбняк – тяжелое заболевание, которое характеризуется клоническими и тоническими судорогами. У человека судороги начинаются с
жевательных (тризм) и мимических мышц лица и охватывают всю скелетную мускулатуру. В этом случае больной в судорогах выгибается в
виде моста, касаясь затылком и пятками (опистотонус).
Микробиологическая диагностика столбняка проводится редко, так
как при характерной клинической картине в этом нет необходимости.
61
Бактериологическое исследование проводят при необходимости
выделить возбудителя из перевязочного материала, кетгута.
Для обнаружения столбнячного токсина ставят биологическую
пробу на белых мышах. С этой целью материал растирают в стерильной
ступке с песком, заливают изотоническим раствором хлорида натрия
для экстрагирования токсина, фильтруют через бумажный фильтр.
Часть фильтрата вводят внутримышечно белым мышам (опыт), контрольным мышам вводят другую часть фильтрата в смеси с антитоксической сывороткой. При наличии токсина в материале через 1-2 суток у
опытных мышей появляется ригидность хвостовых мышц и мышц задних конечностей «хвост трубой». Затем опытные животные погибают.
Для обнаружения токсина в крови ставится также РПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом.
Ботулизм – пищевое отравление, которое рассматривается не как
инфекционное заболевание, а как интоксикация содержащимся в пищевом продукте готовым ядом анаэробных бацилл. C. botulinum (от лат.
botulis- колбаса). Широкое распространение C. botulinum в природе, и
чрезвычайная стойкость его спор обуславливают возможность их попадания в различные пищевые продукты. Благоприятные условия для
прорастания спор и накопления токсины создаются в глубоких слоях
пищевого продукта и в особенности в герметически закупоренных консервах. В связи с этим ботулизм наблюдается чаще всего при употреблении консервов, подвергших недостаточной обработке.
В клинической картине заболевания преобладают тяжелые нервные
явления связанные с поражением ядер черепно- мозговых нервов, а не
диспептические явления, как при других пищевых отравлениях. Заболевание ботулизмом чаще заканчивается смертью.
Лабораторному исследованию подвергаются:
1. Остатки пищи, послужившие причиной отравления;
2. Материал от больного: рвотные массы и содержимое желудка
(полученное при его промывании), кровь, моча, испражнения;
3. Секционный материал, содержимое желудка, отрезки тонких и
толстых кишок, брыжеечные железы, головной и спиной мозг.
Анализ ведется в двух направлениях: получение культуры микроба
и обнаружения токсина. Выделение культуры производится по общей
методике выделения культур анаэробов.
Для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного ставят РПГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитокси62
ческими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве контроля берут нормальную сыворотку крови. Обнаружение ботулотоксина в пищевых продуктах и определение токсигенности C. botulinum проводят в реакции нейтрализации токсина на белых мышах. Для
определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалентными сыворотками А, В, Е. При нейтрализации токсина гомологичной антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.
Самостоятельная работа студентов
1. Учесть результаты определения чувствительности к антибиотикам.
Дать заключение к протоколу бактериологического исследования гноя.
2. Изучить (разобрать) схемы микробиологической диагностики газовой
гангрены, столбняка.
3. Промикроскопировать мазок, приготовленный из отделяемого раны
больного с подозрением на газовую гангрену. Окраска по Граму. Зарисовать в тетради.
4. Учесть результаты ускоренного метода обнаружения C. perfringens.
5. Выделеление чистой культуры анаэробов по способу Вейнберга- Перетца.
6. Реакция нейтрализации экзотоксина при ботулизме на белых мышах.
7. Заполнить протокол, дать заключение.
8. Изучить препараты для специфической терапии и профилактики
анаэробных инфекций.
Указания к самостоятельной работе
1. Из отделяемого раны готовится мазок, окрашенный по Граму.
В мазке определяются крупные грамположительные палочки (синефиолетового цвета), лейкоциты. Обратить внимание на характер расположения спор.
2. Ускоренный метод обнаружения C. perfringens заключается в
посеве исследуемого материала(раневого отделяемого) в две пробирки
со средой Китта- Тароцци, в две пробирки с молоком, и две пробирки
со средой Вильсон- Блера. Одна пробирка каждой среды после внесения материала прогревается при 80°С в течение 20 мин. Для C.
perfringens характерно: почернение среды Вильсон- Блера в течение 3-х
часов и бурное створаживание молока в течение 6 часов.
3. Выделение чистой культуры анаэробов по способу ВейнбергаПеретца. Берут пробирку со средой Китта-Тароцци с предполагаемым
63
ростом анаэробов и пастеровской пипеткой с запаянным концом материал переносят через 3 пробирки с физиологическим раствором. Затем
эту же пипетку вносят в две пробирки с сахарным агаром, затем в пробирку со средой Вильсон- Блера. Следует отметить, что все эти пробирки со средами предварительно следует растопить на водяной бане и затем остудить до температуры 40-45°С. Затем содержимое из пробирки
со средой Вильсон- Блера выливают в стерильную чашку Петри, а
сверху закрывают дном, так чтобы излишек агара выступал за края
чашки. Затем чашку со средой Вильсона- Блера помещают в термостат
на 2 – 3 суток. Наличие колоний черного цвета свидетельствует о чистой культуре анаэробов.
4. Реакция нейтрализации для обнаружения ботулинического токсина и его типа. Для обнаружения токсина двум белым мышам вводят
исследуемый фильтрат в количестве 0,5 мл внутрибрюшинно, другим
двум мышам 0,5 мл фильтрата и 0,2 мл смеси диагностических моновалентных сывороток типа А, В, С, Е. Перед введением смесь исследуемого материала и сывороток выдерживают при комнатной температуре
в течение 30 минут. Наблюдение за животными ведут в течении 4 суток. При наличии токсина погибают первые две мыши, остальные
остаются живы.
Для определения типа токсина в 5 пробирок разливают по 2,4 мл
исследуемого фильтрата и по 0,6 мл сыворотки. В первую пробирку
типа А, во вторую- типа В, в третью- типа С, в четвертую- типа Е.
В пятую пробирку – 0,6 мл физиологического раствора(контроль).
Смесь после 30- минутного выдерживания при комнатной температуре
вводят внутрибрюшинно по 1 мл двум мышам из каждой пробирки отдельными шприцами. Наблюдают 4 суток. При наличии токсина выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки,
остальные мыши погибнут.
Например, выжили мыши, которым вводили смесь из 1-й пробирки,
остальные мыши погибли.
Следовательно, в исследуемом материале обнаружен ботулинический токсин типа А.
64
Таблица 16
Препараты для диагностики, лечения и профилактики
анаэробных заболеваний
Препарат
Состав
Показания к применению
Противоботулиническая
Для обнаружения ботулотоксина в
антитоксическая сыворотка
АТ
исследуемом материале в реакции
(диагностическая)
нейтрализации на мышах (биопроба)
Противостолбнячная
Для обнаружения экзотоксина
антитоксическая сыворотка
АТ
возбудителя столбняка в исследуемом
(диагностическая)
материале в реакции нейтрализации
на мышах (биопроба)
Противогангренозная
Для обнаружения экзотоксинов
антитоксическая сыворотка
АТ
возбудителей газовой гангрены в
(диагностическая)
исследуемом материале в реакции
нейтрализации на мышах (биопроба)
Анатоксин столбнячный
Активная профилактика плановая,
адсорбированный
АГ
экстренная по эпидпоказаниям
(А С- анатоксин)
Секста - (пента-, тетра-,
Для профилактики ботулизма,
три-) анатоксин
АГ
столбняка и газовой инфекции по
эпидпоказаниям в возрасте
от 16 до 60 лет
Противостолбнячная
Для экстренной профилактики и
лошадиная сыворотка
АТ
лечения столбняка (при отсутствии
(ППС)
ПСЧИ)
Иммуноглобулин
Пассивная экстренная профилактика
человеческий
АТ
для нейтрализации токсина
противостолбнячный
(ПСЧИ)
Сыворотки
Поливалентные- для лечения
противоботулинические
АТ
заболеваний, вызванных неизвестным
типов А, В, Е
типом экзотоксина возбудителя
лошадиные очищенные
ботулизма
Моновалентные- для лечения
заболеваний, вызванных известным
типом экзотоксина возбудителя
ботулизма
Противогангренозная
Для экстренной профилактики и
поливалентная лошадиная
АТ
лечения газовой гангрены
сыворотка
65
Вопросы для самоконтроля
1. Какие Вы знаете анаэробные инфекции? Почему их относят к токсинемическим? Укажите латинские названия возбудителей этих инфекций.
2. Что является средой обитания анаэробных бактерий в естественных
условиях?
3. Какие основные микробиологические методы используют для диагностики анаэробных инфекций?
4. Каков механизм заражения, и каковы особенности патогенеза при
газовой гангрене?
5. Какова природа токсина столбнячной палочки и на что он действует?
6. Чем отличается картина столбняка у человека и у мелких лабораторных животных?
7. Какие типы токсина продуцирует возбудитель ботулизма и что поражает токсин?
8. Какие условия способствуют размножению возбудителя ботулизма и
накопления токсина в пищевом продукте?
9. Какие специфические препараты применяют для лечения и профилактики газовой гангрены, столбняка, ботулизма?
10. Какие Вы знаете неспорогенные анаэробные бактерии?
66
Занятие 12
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИФТЕРИИ И КОКЛЮША.
Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики дифтерии и
коклюша. 2. Ознакомиться с методами специфической профилактики и
терапии дифтерии, коклюша.
Возбудители дифтерии
Дифтерия - острое антропонозное инфекционное заболевание с
преимущественным респираторным механизмом передачи, характеризующееся местным фибринозным воспалением слизистых оболочек
(чаще зева и носа) и явлениями интоксикации. Возбудителем дифтерии
является Corynebacterium diphtheriae.
C. diptheriae - грамположительные палочки средней величины, которые в мазках располагаются под углом друг к другу, по полюсам располагаются зерна волютина. При окраске по Нейссеру палочки окрашиваются в светло- коричневый цвет, а зерна волютина в темно- синий,
почти черный цвет. Спор, капсул не образуют, неподвижны. Факультативные анаэробы.
Дифтерийные палочки требовательны к питательным средам.
Элективными являются - среда Ру (свернутая лошадиная сыворотка),
среда Клауберга, содержащая кровь и теллурит калия (или натрия).
На этой среде биовары дифтерийной палочки дают разные колонии: биовар gravis - крупные, серые с неровными краями, с радиальной
исчерченностью- R-колонии; биовар mitis - мелкие, черные, с ровными
краями- S-колонии; биовар intermedius- похожие на колонии обоих типов. Биовары отличаются и по биохимическим свойствам.
Corynebacterium diphteriae отличается от других представителей
рода, ферментирует глюкозу, на среде с цистеином дает облаковидное
почернение по ходу укола (проба Пизу); не ферментирует сахарозу и
мочевину.
К факторам вирулентности относятся:
- pili, обеспечивающие адгезию;
- ферменты патогенности - гиалуронидаза, нейраминидаза, протеаза;
- ведущий фактор вирулентности - образование экзотоксина, обладающего гистотоксическим, гемолитическим и дермонекротическим
действием.
67
Токсигенность кодируется умеренным фагом- (tox геном), т.е. является результатом лизогенной конверсии
Гистотоксин блокирует синтез белка в клетках макроорганизма, что
приводит к некрозу пораженной ткани.
Источником инфекции является только человек- больной и бактерионоситель. Передача заболевания происходит воздушно- капельным
и контактно- бытовым путями.
Заболевание носит бактериально-токсический характер. Возбудитель остается на месте входных ворот, а все проявления заболевания
связаны с действием токсина. Дифтерия характеризуется образованием
в месте локализации возбудителя плотной, спаянной с подлежащей
тканью фибринозной пленки, развитием отека и некроза ткани.
Для дифтерии характерна общая интоксикация, с избирательным
поражением сердечно - сосудистой системы, почек и надпочечников,
нервной системы.
По локализации различают: дифтерия зева, носа, гортани (дифтерийный круп), наружных половых органов, кожи, ран, глаз, уха. Чаще
встречаются дифтерия зева и носа.
После перенесенного заболевания остается достаточно напряженный антитоксический иммунитет.
Ведущим методом диагностики является бактериологическое исследование. Микробиологические исследования проводят с целью диагностики дифтерийной инфекции и выявления носительства. Материал
для исследования - отделяемое или пленка из зева и носа, а при редких
локализациях (дифтерии глаза, уха, раны, кожи, наружных половых
органов)- из очага поражения. Забор материала производят стерильным
тампоном и засевают на одну из элективных питательных сред. Средами для первичного посева служат кровяной теллуритовый агар или среда Клауберга, хинозольная среда Бучина.
Для определения напряженности противодифтерийного антитоксического иммунитета, вместо раннее применявшейся пробы Шика, ставят
РПГА с использованием эритроцитарного дифтерийного диагностикума
(взвесь эритроцитов, на которых сорбирован дифтерийный анатоксин).
Возбудитель коклюша
Коклюш – детская антропонозная инфекция, характеризующийся
приступами спазматического кашля. Возбудителем коклюша является
Bordella pertussis – мелкие, грамотрицательные, овоидные палочки с
закругленными концами неподвижны. Спор, капсул не образуют. Стро68
гие аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Для их культивирования используют сложные среды – среда Борде – Жангу (картофельно-глицериновый агар с добавлением крови), КУА – казеиновоугольный агар.
На среде Борде – Жангу возбудитель коклюша через 3-4 дня дают
рост в виде куполообразных колоний, напоминающие капельки ртути с
зоной гемолиза вокруг.
Факторы патогенности:
- экзотоксин – специфический цитотоксин, который вызывает гибель мерцательного эпителия, дыхательных путей, обладает тропизмом
к нервной и сосудистой системам;
- эндотоксин, обладающий сенсибилизирующим и общетоксическим действием;
- ферменты агрессии.
Источником инфекции являются больные и бактерионосители.
Основной путь передачи – воздушно-капельный.
Болеют в основном дети.
Заболевание характеризуется приступами спазматического кашля.
Ведущим методом микробиологической диагностики коклюша является бактериологическое исследование. Материалом для исследования является слизь из носоглотки, которую забирают стерильным ватным тампоном, который вводят в носовой ход до задних хоан.
Для взятия материала у детей используют также метод «кашлевых
пластинок». Во время приступа кашля ко рту ребенка подносят открытую чашку с питательной средой на расстоянии 15-20 см и держат на
период 6-8 кашлевых толчков, затем чашку закрывают и помещают в
термостат.
Серодиагностику чаще используют для ретроспективной диагностики заболевания (РА, РСК, ИФА, РПГА).
Для специфической профилактики используют АКДС, в которой
коклюшный компонент представлен убитой вакциной.
Самостоятельная работа студентов:
1. Зарисовать в тетради схему микробиологической диагностики дифтерии.
2. Микроскопическое изучение мазка из чистой культуры дифтерийной
и ложнодифтерийной палочек. Окраска по Граму, Нейссеру.
69
3. Стерильным ватным тампоном произвести забор материала зева и
носа с целью выявления дифтерийного бактерионосительства у
студентов, затем произвести посев исследуемого материала на среду Леффлера.
4. Учет токсигенности культуры дифтерийной палочки в реакции преципитации в агаровом геле (демонстрация).
5. Изучение биохимических свойств культур дифтерийной и ложнодифтерийной палочек: проба на уреазу и цистиназу (демонстрация).
6. Изучить схему микробиологической диагностики коклюша.
7. Изучение препаратов для профилактики и терапии дифтерии и коклюша (противодифтерийная сыворотка, АД, АДС, АДСМ, АКДС).
8. Оформление протокола исследования.
Схема 9. Микробиологическая диагностика дифтерии
Заключение
70
Указания к самостоятельной работе:
1. Микробиологическая диагностика дифтерии:
а) бактериоскопический метод.
Микроскопическое изучение мазка, приготовленного из чистой
культуры дифтерийной (ложнодифтерийной) палочки, окрашенного по
Нейссеру, Граму.
При микроскопии мазка следует обратить внимание на следующие
морфологические признаки:
- расположение палочек по отношению друг к другу;
- наличие зерен волютина и их расположение;
Для коринебактерий дифтерии характерно расположение палочек
под углом друг к другу, в виде римской цифры V, кучки булавок, зерна
волютина располагаются на концах палочек. Ложнодифтерийные палочки располагаются параллельно друг к другу, в виде “частокола”, у них
отсутствуют зёрна волютина или содержат их по всей длине палочки.
б) Бактериологический метод
Для выявления дифтерийного бактерионосительства материал берут из зева и носа отдельными тампонами. Одним тампоном берут материал с миндалин, дужек мягкого нёба, другим- из носовых ходов. Посев производят на чашку Петри с кровяно- теллуритовым агаром, делят
на две части: на одну половину производят посев материала из зева, на
вторую половину- из носа. Чашки с посевом помещают в термостат при
температуре 370 С на сутки.
В случае подозрительных колоний их отсевают для накопления и
биохимической идентификации. При биохимической идентификации
обращают внимание на пробы с уреазой и цистиназой, для этого производят пересев чистой культуры на среды с цистином и мочевиной.
Дифтерийная палочка дает положительную пробу на цистиназу:
при посеве уколом на среду с цистином дает облаковидное почернение
по ходу укола. Положительную пробу на уреазу дает ложнодифтерийная палочка. Проба на уреазу расценивается как положительная, если
среда окрашивается в малиново- красный цвет. На средах Гисса биовар
gravis расщепляет глюкозу и крахмал, биовар mitis- только глюкозу. А
ложнодифтерийная палочка глюкозу и крахмал не ферментирует.
При идентификации необходимо определение токсигенности. Токсигенность определяется методом диффузионной преципитации в агаре.
На среду, разлитую в чашки, накладывают фильтровальные бумажки,
смоченные 0,25 мл антитоксической противодифтерийной сыворотки.
71
Посев культуры производят в виде бляшек диаметром 0,7- 0,8 см с обеих
сторон бумажки на расстояние 0,5 см от нее. С одной стороны наносится
не более 5 культур (5 бляшек) в ряд. Посев испытуемых культур чередуется с посевом контрольного (токсигенного) штамма. Реакция основана
на том, что антиген (экзотоксин) и антитело (антитоксическая сыворотка)
обладают свойством в агаре диффундировать на встречу друг другу. На
месте их соединения образуется линия преципитации («усики») если выделенная культура токсигенна, то образующаяся у нее линия преципитации сливается с линией преципитации контрольного штамма.
В последние годы для определения токсигенности применяют высокочувствительные методы- ИФА с моноклональными антителами,
РНГА с антительным эритроцитарным дифтерийным диагностикумом.
2. Микробиологическая диагностика коклюша
а) Для микробиологической диагностики коклюша ведущим является бактериологический метод.
Посев делают на среды Борде – Жангу и казеиново-угольный агар
(КУА).
Возбудитель коклюша растет медленно 3-5 суток.
B.pertussis приходится дифференцировать от B.parapertussis (табл.).
Таблица 17
Вид микроба
Возбудитель
коклюша
Возбудитель
паракоклюша
Дифференциация бордетелл
Рост на Скорость Рост на среде Проба на
МПА
роста
с тирозином
уреазу
Проба на
каталазу
-
3-5 суток
-
-
-
+
сутки
Коричневый
пигмент
+
+
Возбудитель высеивают у детей в 70-80% при взятии материала в
течение первых 2-х недель. Чем позже взят материал, тем шансы обнаружить возбудителя уменьшаются. Метод «кашлевых пластинок» по
эффективности значительно уступает взятию материала тампоном.
б) Из серологических реакций для диагностики коклюша используют РА, РСК, РПГА, ИФМ и др. В настоящее время чаще используют
ИФМ. Диагноз подтверждает нарастание титров в 4 раза и более при
исследовании парных сывороток.
72
Схема10.Микробиологическая диагностика коклюша
73
Таблица 18
Препараты для специфической профилактики и
терапии дифтерии, коклюша
Препарат
Состав
Назначение
Адсорбированная
Смесь убитых
Применяется с целью
коклюшно-дифтерийно- коклюшных палочек,
создания активного
столбнячная вакцина
дифтерийного и
иммунитета против
(АКДС)
столбнячного
коклюша, дифтерии и
анатоксинов
столбняка у детей.
Адсорбированный
Смесь дифтерийного Для создания активного антидифтерийно- столбнячи столбнячного
токсического иммунитета проный анатоксин (АДС)
анатоксинов
тив дифтерии и столбняка детей, переболевших коклюшем.
Адсорбированный
Смесь дифтерийного
Для плановой
дифтерийно- столбнячи столбнячного
ревакцинации детей и взрослых
ный анатоксин с уменьанатоксинов
против дифтерии и столбняка
шенным содержанием
антигенов (АДС- М)
Анатоксин дифтерийный
Обезвреженный
С целью создания активного
(АД)
дифтерийный
антитоксического иммунитета у
анатоксин
детей и взрослых
Противодифтерийная
Антитела против
Для лечения экстренной профиантитоксическая
экзотоксина дифтелактики
сыворотка
рийных палочек
дифтерии
Вопросы для самоконтроля
1. Латинское название, морфологические и тинкториальные свойства
возбудителя дифтерии.
2. Назовите биовары дифтерийной палочки. По каким признакам их
дифференцируют?
3. Материал для исследования, методика его забора при подозрении на
дифтерию и при обследовании на бактерионосительство.
4. Отличия возбудителя дифтерии от других коринебактерий (ложнодифтерийной палочки, дифтероидов)
5. Дифтерийный токсин, его свойства. Методы определения токсичности дифтерийной палочки.
6. Иммунитет при дифтерии.
7. Какие бактерии относятся к роду Bordetella.
8. Методы микробиологической диагностики коклюша.
9. Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии и
коклюша.
74
Занятие 13
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА
Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики туберкулеза. 2. Изучить препараты для специфической диагностики, профилактики и терапии туберкулеза.
Туберкулез (от лат. tuberculum – бугорок) – хроническое инфекционное заболевание человека и животных, сопровождающееся поражением многих органов и систем. Наиболее чаще возникает туберкулез
органов дыхания, но нередко встречается туберкулез костей и суставов,
мозговых оболочек, лимфатических узлов, мочеполовой системы и т.д.
Возбудители туберкулеза человека – Mycobacterium tuberculosis,
M.bovis и M. africanum. Другие виды микобактерий, как M.avium,
M.kansassi, M.xenopii и др. могут также вызывать заболевания, объединяющее название которых микобактериозы. Микобактериозы характеризуются образованием патологических процессов во внутренних органах, лимфоузлах.
Микобактерии туберкулеза – длинные, тонкие, слегка изогнутые
палочки. Спор, капсул не образуют, неподвижны. Отличаются высоким
содержанием липидов в клеточной стенке в связи с чем они устойчивы
к кислотам, щелочам, спиртам и плохо окрашиваются обычными анилиновыми красителями. Для их окраски требуется специальный метод –
Циля – Нильсена.
Требовательны к питательным средам. Для их культивирования
применяют глицериново-картофельный агар, яичные среды, синтетически среды.
Оптимальной средой для их культивирования признана среда Левенштейна – Йенсена – яичная среда с добавлением глицерина.
На этих средах микобактерии растут медленно и дают видимый
рост через 3-4 недели. На плотных средах образуются морщинистые,
сухие, с неровными краями, не сливающиеся друг с другом колонии.
Факторами вирулентности возбудителей туберкулеза являются
токсические компоненты клеточной стенки – миколевая, фтионовая
кислоты, эндотоксин, корд-фактор.
Основной источник заболевания больной человек с активной формой туберкулеза, который выделяет бактерии в окружающую среду.
Источником заражения могут быть и больные домашние животные.
75
Пути передачи: воздушно-капельный, воздушно-пылевой, возможен и
контактно-бытовой.
При инфицировании, обычно в детском возрасте, в легких формируется первичный туберкулезный комплекс с образованием очага в
ткани легкого, с лимфангоитом, регионарным лимфаденитом.
Со временем первичный комплекс инкапсулируется, вокруг откладываются соли извести и может быть случайной находкой рентгенолога
(очаг Гона). Этот процесс не завершается освобождением организма от
микобактерий (нестерильный иммунитет).
Клиника туберкулеза характеризуется хроническим течением с образованием воспалительного процесса в различных органах, чаще всего
в легких. По локализации, кроме туберкулеза легких, различают так
называемые внелегочные формы заболевания: туберкулез почек, костно-суставной туберкулез, туберкулезный менингит и др.
Иммунитет при туберкулезе:
- нестерильный, поддерживается бактериями, персистирующими в
организме;
- антитела не играют существенной роли в противотуберкулезном
иммунитете, они являются лишь «свидетелями» наличия в организме
бактерий;
- основную роль играет клеточный механизм, реализуемый через
ГЗТ.
Для микробиологической диагностики используют разные методы:
бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический и аллергический, которые имеют различную диагностическую
ценность.
Бактериоскопический метод, кроме микроскопии окрашенных по
Цилю – Нильсону мазков, включает методы обогащения – гомогенизации, флотации, а также люминисцентную микроскопию мазков, обработанных флюорохромами. Основным является бактериологический
метод, при котором исследуемый материал засевают на питательные
среды. Недостатком метода является медленный рост микобактерий на
питательных средах.
Для диагностики туберкулеза применяют также методы иммуноиндикации, серодиагностики, молекулярно-генетические методы.
При массовых исследованиях наиболее широко применяется аллергический метод.
76
Для лечения туберкулеза применяются:
- препараты I ряда – изониазид, тубазид, фтивазид, ПАСК, стрептомицин, ГИНК;
- препараты II ряда – этионамин, циклосерин, канамицин, рифампицин, виомицин.
Специфическая профилактика проводится живой ослабленной вакциной БЦЖ. Первичная вакцинация проводится на 3-5-й день после
рождения.
77
78
Самостоятельная работа студентов
1. Разобрать схему микробиологической диагностики туберкулеза.
2. Приготовить мазок из мокроты больного туберкулезом, окрасить по
Цилю – Нильсону, промикроскопировать, зарисовать в тетрадь.
3. Изучить характер роста туберкулезных микобактерий на питательных средах (демонстрация).
4. Препараты для диагностики и профилактики туберкулеза: туберкулин сухой очищенный (РРД), вакцина БЦЖ.
Указания к самостоятельной работе
1. Бактериоскопический метод
Исследуемый материал: мокрота, моча, спинномозговая жидкость.
Мокроту помещают в чашки Петри. Петлей выбирают гнойный
комочек, переносят на предметное стекло ближе к одному из концов и,
растирая между двумя стеклами, готовят мазок.
Ликвор отстаивают в холодильнике и готовят мазки из нежной
пленки фибрина, в которой находятся микобактерии туберкулеза и клеточные элементы. Мочу центрифугируют и делают мазки из осадка.
Мазки окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют, просматривая до 100 полей зрения в препарате. Микобактерии туберкулеза
располагаются поодиночке или небольшими скоплениями и окрашиваются в ярко-красный цвет. Единичные микобактерии можно обнаружить в мокроте, если их содержание не менее 105 в 1 мл мокроты.
Для обнаружения микобактерий в мокроте при их меньшем содержании в 1 мл применяются методы «обогащения» - гомогенизации и
флотации.
Метод гомогенизации: К суточной порции мокроты добавляют
равный объем 1% раствора КОН (NaOH), флакон плотно закрывают
пробкой и энергично встряхивают до образования однообразной массы
(гомогената) в течение 10-15 минут. После центрифугирования и
нейтрализации кислотой из осадка готовят мазки и окрашивают по способу Циля – Нильсена.
Метод флотации. Гомогенизированную мокроту прогревают при
550С в течение 30 минут на водяной бане. Затем добавляют 1-2 мл ксилола, дистиллированную воду и повторно встряхивают в течение 10
минут и отстаивают 20 минут при комнатной температуре. Из образовавшейся «сливкообразной» пены готовят мазок, несколько раз наслаивая материал на предметное стекло по мере его высыхания. Мазок
79
обезжиривают эфиром, фиксируют нагреванием и окрашивают по
Цилю – Нильсену.
РИФ. Окраска флюорохромом основана на способности липидов
микобактерий воспринимать эти красители. В зависимости от красителя (родамин или аурамин) M.tuberculosis дают ярко-красное или золотисто-желтое свечение на темно-зеленом фоне.
2. Бактериологическое исследование. Исследуемый материал перед посевом в течение нескольких минут подвергают действию 10%
H2SO4 или 5% раствора NaOH для освобождения от сопутствующей
микрофлоры, затем тщательно встряхивают и центрифугируют.
Обработанный материал засевают на несколько пробирок со средой
Левенштейна-Йенсена (или с другими элективными средами). Посевы
инкубируют в термостате при температуре 370С в течение 3-4 недель.
Вирулентные культуры дают бородавчатые, морщинистые колонии (Rформа) через 21-28 дней.
Из них готовят мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и проводят
идентификацию по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Из биохимических свойств, чаще всего определяют
способность исследуемой культуры синтезировать никотиновую кислоту (ниациновая проба Коно).
Для определения ниацина к культуре микобактерий в жидкой питательной среде добавляют 1 мл раствора KCN и 1 мл 5% раствора хлорамина. При наличии ниацина через несколько минут появляется яркожелтая окраска. Это один из важных признаков с помощью которого
удается отличить M.tuberculosis, хорошо синтезирующие никотиновую
кислоту, от M.bovis, образующих ее в минимальных качествах.
Ускоренный метод диагностики туберкулеза – метод микрокультур по Прайсу.
Для этого на нескольких предметных стеклах готовят толстые мазки из исследуемого материала. Мазки обрабатывают 2-6% серной кислотой, при этом сопутствующая микрофлора погибает, а микобактерии
сохраняют жизнеспособность. Затем мазки тщательно промывают стерильным физиологическим раствором и помещают во флаконы с жидкой питательной средой (цитратная кровь) – сохранившиеся жизнеспособные микобактерии размножаются. Через 7-14 дней извлекают стекла, фиксируют препарат, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют. Вирулентные штаммы микобактерий образуют микрокультуры, имеющие вид жгутов или кос (корд-фактор).
80
Определение чувствительности к антибиотикам и химиопрепаратам проводят методом серийных разведений.
3. Биологический метод применяется для выделения чистой культуры возбудителя из органов лабораторного животного, а также для
определения вирулентности микобактерий. Исследуемый материал
предварительно обрабатывают серной кислотой для освобождения от
посторонней микрофлоры, нейтрализуют и вводят подкожно морской
свинке и кролику с отрицательными туберкулиновыми реакциями. Через 4 месяца, если животное не погибнет, его забивают и проводят макро-микроскопическое исследование органов, делают посевы. К
M.tuberculosis восприимчивы морские свинки и не восприимчивы кролики. M.bovis высокопатогенны для кроликов.
4. Серологическая диагностика применяется с целью обнаружения антител. С этой целью могут быть использованы различные реакции иммунитета: РСК, РПГА, РИФ, ИФА. Положительные результаты
отмечаются не только при активном туберкулезе, но и при инфицировании микобактериями туберкулеза, а также при вакцинации.
5. Кожно-аллергическая проба ставится с туберкулином – очищенной белковой фракцией (РРД), полученной из микобактерий туберкулеза. Туберкулин вводят внутрикожно (проба Манту). Результат учитывают через 24-48-72 ч по образованию гиперемии и папулы. Аллергическая проба Манту применяется для выявления инфицированных
лиц, для оценки напряженности иммунитета, отбора контингентов,
подлежащих ревакцинации.
Таблица 19
Диагностические и профилактические препараты при туберкулезе
Препарат
Состав
АТК – альтСгущенный фильтрат
туберкулин (старый
убитой культуры
туберкулин Коха) микобактерий туберкулеза.
Очищенный туберОчищенный белок
кулин в стандартном
туберкулезных
разведении (РРД)
микобактерий.
Вакцина БЦЖ
Высушенные живые
бактерии вакцинного
штамма M.bovis.
Вакцина БЦЖ-М.
Высушенные живые
бактерии вакцинного
штамма М. biоvis с
уменьшенным в 2 раза
содержанием антигена.
81
Назначение
Выявление Г3Т у больных
туберкулезом или инфицированных
(проба Манту)
Выявление Г3Т к возбудителю
туберкулеза (проба Манту)
Для плановой профилактики туберкулеза. Вводится на 4-7 день жизни с
последующей ревакцианацией.
Для профилактики туберкулеза детям, имеющим медицинские отводы
по введению БЦЖ.
Вопросы для самоконтроля
1. Назовите возбудителей туберкулеза и проказы.
2. Каковые морфологические и тинкториальные особенности возбудителей туберкулеза?
3. На каких питательных средах и как растут туберкулезные палочки?
4. Каковы пути заражения и особенности патогенеза туберкулеза?
5. Какие микробиологические методы применяют для диагностики
туберкулеза?
6. Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза?
В чем заключается метод обогащения исследуемого материала?
7. Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод
микрокультур)?
8. Какие лабораторные животные наиболее чувствительны к туберкулезной палочке?
9. Какова природа иммунитета при туберкулезе?
10. Какая вакцина используется для активной профилактики туберкулеза? Кем и как она была создана?
11. Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза?
Расшифруйте что такое «РРД»?
12. Какие микробиологические методы используют для диагностики
проказы?
82
Занятие 14
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА И СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ.
Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики бруцеллеза
и сибирской язвы. 2. Изучить препараты для диагностики, специфической профилактики и терапии бруцеллеза и сибирской язвы.
Бруцеллез – острое или хроническое зоонозное инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией, преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой,
мочеполовой систем и других органов, аллергизацией организма, затяжным течением, приводящим как правило к инвалидизации.
Возбудители бруцеллеза относятся к роду Brucella, который включает в себя основные патогенные для человека следующие виды:
B.abortus – возбудитель крупного рогатого скота; B.melitensis – мелкого
рогатого скота, B.suis – свиней.
Бруцеллы – мелкие, грамотрицательные, неподвижные коккобактерии, они не образуют спор. По типу дыхания аэробы.
Высокотребовательны к питательным средам. Элективными питательными средами являются печеночный агар, печеночный бульон.
На плотных средах дают рост колоний разной величины, бесцветные
с перламутровым оттенком. В жидких средах отмечается помутнение.
Факторы патогенности: эндотоксин, ферменты агрессии и защиты
(гиалуронидаза, фактор подавляющий фагоцитоз и пр.).
Источником инфекции являются больные животные. Люди, больные бруцеллезом, как источник инфекции опасности не представляют.
Основные пути заражения: алиментарный, контактно-бытовой.
Бруцеллы проникают в организм через неповрежденные кожные покровы и слизистые, откуда попадают в регионарные лимфоузлы. Бруцеллы легко преодолевают лимфатический барьер и попадают в кровь и разносятся в костный мозг, печень, почки и др. органы. Микробы и продукты их жизнедеятельности вызывают сенсибилизацию, что приводит к
развитию инфекционной аллергии. Развитие инфекционной аллергии
имеет ведущее значение в патогенезе бруцеллеза. Клиника бруцеллеза
характеризуется развитием волнообразной лихорадки, поражением
опорно-двигательного аппарата, внутренних органов, ЦНС. В течение
болезни формируется нестерильный инфекционный иммунитет.
83
Материалы для исследования – кровь, пунктат красного костного мозга, моча, испражнения, молоко и молочные продукты, кусочки органов.
Для диагностики бруцеллеза используют все методы микробиологической диагностики.
Сибирская язва (anthra, злокачественный карбункул) – острая зоонозная инфекционная болезнь, вызываемая Вacillus anthracis, которая
характеризуется тяжелой интоксикацией поражением кожи, лимфатических узлов и других органов, высокой летальностью.
Возбудитель сибирской язвы – Bacilla anthracis, относится к семейству Bacillaceae, роду Bacillus.
Bacilla anthracis – грамположительные крупные палочки, с обрубленными концами, в мазках часто располагаются цепочками (стрептобациллы). Образует споры, располагающиеся центрально. В организме
человека и животных образует капсулу.
Факультативные анаэробы. Не требовательны к питательным средам. На МПА образуют R-формы колоний, напоминающие «львиную
гриву» или «голову медузы».
На МПБ через 18-24 часа рост в виде «комочка ваты».
Факторы патогенности: капсула, экзо-эндотоксины. Источником
инфекции являются домашние животные: крупный и мелкий рогатый
скот, лошади, свиньи. Заражение происходит при уходе за животными,
разделке туш; употреблении в пищу мяса зараженных животных, выделке шкур.
Заражение происходит через кожу, слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта или дыхательные пути. Различают кожную, кишечную и легочную формы сибирской язвы. Наиболее тяжело с высокой летальностью протекают две последние формы заболевания.
После перенесенного заболевания остается достаточно стойкий иммунитет, который носит антибактериальный и антитоксический характер.
Для обнаружения материала используют микроскопию мазков из
патологического материала, методы иммуноиндикации – прямой РИФ,
реакцию кольцепреципитации – реакцию Асколи; бактериологическое
исследование проводится в строго-режимных лабораториях.
Специфическая терапия и профилактика. Для лечения кроме антибиотиков используют противосибиреязвенную сыворотку или специфический иммуноглобулин.
Специфическая профилактика проводится живой сибиреязвенной
вакциной СТИ.
84
85
Самостоятельная работа
1. Разобрать схему микробиологической диагностики бруцеллеза.
2. Поставить реакцию Хеддльсона. Дать заключение.
3. Поставить реакцию Райта. Учет готовых результатов. Дать заключение.
4. Ознакомить студентов с профилактическими и лечебными препаратами, применяемыми при бруцеллезе.
5. Изучить схему микробиологической диагностики сибирской язвы.
6. Поставить реакцию Асколи с готовым фильтратом из шерсти (преципитиногеном) и преципитирующей сывороткой. Дать заключение.
7. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики
и лечения сибирской язвы.
Указания к самостоятельной работе
Микробиологическая диагностика бруцеллеза
Бактериологический метод
Бактериологическое исследование с целью выделения чистой культуры проводят в специальных лабораториях с соблюдением правил
техники безопасности.
Посев крови для выделения гемокультуры проводят в первые дни
болезни при наличии лихорадки. При этом 10 мл стерильно взятой из
вены крови засевают в 2 флакона со 100-200 мл жидкой питательной
среды (сахарного, печеночного или асцитического бульона).
В одном из флаконов создают повышенную концентрацию СО210% (помещают в эксикатор со свечой для стимуляции роста B.aborus.
Учитывая медленный рост бруцелл, посевы выдерживают в термостате до 1 мес.
Бруцеллы на бульоне дают общее помутнение с последующим образованием слизистого осадка на дне, на агаре – гладкие, круглые мутноватые колонии.
Биологический метод
Для биопробы используют белых мышей и морских свинок. Животных заражают кровью внутрибрюшинно; осадком мочи и молока –
подкожно. Через 20-30 дней у зараженного животного берут кровь и
ставят с ней реакцию агглютинацию. Затем животных забивают, вскрывают и делают посевы крови из сердца, внутренних органов и лимфатических узлов. Выделенные чистые культуры бруцелл дифференцируют
по способности роста в отсутствие повышенной концентрации углекис86
лого газа, выделению сероводорода, чувствительности к бруцеллезному
фагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (фуксина и тионина).
Серологический метод
Реакция агглютинации Райта.
Реакция агглютинации – один из основных диагностических методов при бруцеллезе.
Она обладает высокой специфичностью, появляется с первых дней
болезни и остается положительной долгое время после заболеваний.
Для реакции Райта берут 2-3 мл крови шприцем из вены или пастеровской пипеткой из пальца.
Из крови получают сыворотку, первое разведение которой готовят
путем смешивания 0,1 мл сыворотки с 2,4 мл физ.раствора.
Затем сыворотку в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 разливают по 0.5 мл в пробирки, куда затем добавляют по 0.5 мл антигена.
Таким образом, степень разведения удваивается и реакция идет в
разведениях 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800. В качестве антигена употребляют готовый диагностикум (взвесь убитой культуры бруцелл),
который перед употреблением разводят таким образом, чтобы в 1 мл
содержалось 2 млрд бруцелл.
Реакция агглютинации ставится с двумя контролями: 1) испытуемая
сыворотка в разведении 1:25 в физ.растворе для исключения спонтанного
образования хлопьев в сыворотке (кс); 2) антиген + физиологический
раствор для исключения спонтанной агглютинации антигена (ка).
Пробирки ставят в термостат при t 370 на 20-24 часа, после чего
учитывают результаты.
Таблица 20
Схема постановки реакции Райта
Пробирки
1
2
3
4
Компоненты
1.Физиологический раствор
2.Сыворотка больного (1:25)
3.Диагностикум Райта
4. Конечное разведение
5.Учет результатов
5
_
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
1:50 1:100 1:200 1:400 1:800
++++ +++ +++ ++
-
87
6
7
0,5
_
0,5
_
-
0,5
0,5
_
_
-
Реакция Хеддльсона
На стеклянную пластинку наносят сыворотку больного в количестве 0,08 – 0,04 – 0,02 – 0,01 – 0,02 мл и добавляют в нее 0,03 мл антигена, а в последнюю порцию сыворотки – 0,03 мл физ.раствора (контроль сыворотки); 0,03 мл антигена + 0,03 мл физ.раствора, (контроль
антигена после чего капли смешивают и нагревают над пламенем в течение 2 минут, после чего при положительном результате быстро
наступает агглютинация. Результат считается положительным при
наличии агглютинации во всех четырех дозах сывороток.
Таблица 21
Схема постановки реакции Хеддльсона
Пробирки
1
2
3
4
Контроль
сыворотка
антиген
0,03
0,03
Компоненты
1. Физиологический
раствор
2.Сыворотка больного
_
_
0,08
0,04
0,02
0,01
0,02
_
3. Диагностикум Райта
0,03
0,03
0,03
0,03
_
0,03
Аллергический метод применяют для выявления ГЗТ к бруцеллам,
наблюдающейся у больных бруцеллезом, инфицированных бруцеллами
лиц и привитых живой бруцеллезной вакциной. Ее ставят с 15-20 дня
болезни. Аллергическая реакция бывает положительной в течение многих лет после перенесенного заболевания и у привитых.
Внутрикожная аллергическая проба Бюрне (методика постановки).
В среднюю часть сгибательной поверхности предплечья вводят
строго внутрикожно 0,1 мл бруцеллина (прозрачный фильтрат из 3-4
недельных бульонных культур бруцелл трех типов). Реакция считается
положительной, если через сутки на месте введения антигена появятся
краснота и болезненный отек размером 4×6 см и выше.
Микробиологическая диагностика сибирской язвы
Материалом для исследования служат: содержимое карбункула и
пузырьков, мокрота, испражнения, кровь, моча, секционный материал
(кусочки органов). По эпид.показаниям исследуют различные объекты
внешней среды, а также шерсть и щетину животных.
88
Все образцы помещают в герметичные сосуды и транспортируют
закупоренными в опломбированных боксах или деревянных ящиках в
лаборатории особо опасных инфекций.
Микробиологическую диагностику проводят с соблюдением правил техники безопасности как при особо опасных инфекциях.
Бактериоскопический метод
Первоначально из материала готовят мазки, окрашивают их по
Граму и для обнаружения капсул и спор (по Ожешко). Наличие в мазках крупных грамположительных стрептобацилл, окруженных капсулой дает возможность поставить предварительный диагноз.
Бактериологический метод
Для выделения чистой культуры исследуемый материал заливают
на МПА и МПБ. На жидких средах дают придонный рост в виде комочка ваты, не вызывая помутнения среды; на плотных средах образует
крупные с неровными краями, шероховатые матовые колонии (Rформа). Под лупой колонии напоминают «гриву льва».
Биологический метод
В биопробе патологический материал или испытуемую культуру
вводят подкожно: морским свинкам в паховой области, мышам в корень хвоста. Обычно мыши погибают через 1-2 суток, морские свинки –
через 2-4 суток. У павших животных исследуют печень, селезенку,
лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца, места введения
исследуемого материала.
О наличии возбудителя сибирской язвы свидетельствует типичная
патолого-анатомическая картина у подопытных животных, в мазках –
отпечатках из органов и крови – наличие грамположительных капсулированных палочек.
Серологический метод диагностики
Серодиагностика проводится в тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке
крови больного используют реакцию латексной агглютинации или
РПГА с протективным сибиреязвенным антигеном. Сибиреязвенные
антигены определяют в РИФ, ИФА, РСК, РНГА, РП в геле или реакции
термопреципитации по Асколи.
Реакция Асколи имеет большое значение, т.к. позволяет обнаружить возбудителя при отрицательных результатах бактериологического
исследования.
89
При массовом загрязнении посторонними микробами материалов
(кожа, шерсть, особенно загнившие органы трупа) исследование производят при помощи реакции термопреципитации по Асколи.
Для этого измельченный материал подвергают кипячению в физиологическом растворе в течение нескольких минут, затем фильтруют
через бумажный фильтр. В полученной прозрачной жидкости содержится антиген сибиреязвенной палочки. С этим антигеном ставят реакцию преципитации со специфической сывороткой.
Реакция ставится в 2-х преципитационных пробирках. В преципитационную опытную пробирку наливают 0.5 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки и на нее с помощью пастеровской пипетки
наслаивают полученный фильтрат (антиген).
При наличии антигена в исследуемом фильтрате на границе двух
жидкостей образуется кольцо преципитации. В контрольной пробирке
вместо преципитирующей сыворотки используется нормальная сыворотка.
Таблица 22
Лечебные, профилактические и диагностические препараты
при бруцеллезе и сибирской язве
Препарат
Состав
Назначение
Бруцеллин
Фильтрат 3-4 недельной
Для постановки
бульонной культуры трех
пробы Бюрне
основных видов бруцелл
Br.melitensis, Br.abortus
bovis, Br. abortus suis
Живая
Штамм 19-BA
Для создания искусбруцеллезная
ственного, приобретенвакцина
ного
активного иммунитета
Вакцина СТИ
Взвесь спор вакцинного
Иммунизацию проводят
(сибиреязвенная
штамма
по эпидпоказаниям
вакцина)
группам риска
Люминесцирующая
Меченые
Для быстрого
сибиреязвенная
флюоресцеинизотиоционаобнаружения и
сыворотка
том сибиреязвенные
идентификации
диагностические сыворотки возбудителя с помощью
люминесцентной
микроскопии
90
Вопросы для самоконтроля
1. Назовите возбудителей бруцеллеза.
2. Укажите основные морфологические и культуральные свойства
бруцелл.
3. Назовите источники и пути заражения бруцеллезом.
4. Перечислите методы лабораторной диагностики бруцеллеза.
5. Назовите препараты для специфической профилактики и терапии
бруцеллеза.
6. Дайте морфологическую характеристику возбудителя сибирской
язвы.
7. Перечислите методы лабораторной диагностики сибирской язвы.
8. Какая реакция применяется для обнаружения сибиреязвенного антигены?
9. Назовите основные методы специфической профилактики и терапии сибирской язвы.
91
Занятие 15
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ
Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики чумы и
туляремии. 2. Изучить препараты для диагностики, специфической
профилактики и терапии чумы и туляремии.
Чума - острое инфекционное природно-очаговое заболевание, относящееся к группе карантинных (конвенционных) инфекций, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи,
лимфатических узлов, сепсисом и высокой летальностью.
Возбудитель чумы Yersinia pestis относится к роду Yersinia, включающий в себя 11 родов, из которых в патологии человека основное
значение имеют 3 вида: возбудитель чумы Y. pestis и энтеропатогенные
иерсинии, возбудитель псевдотуберкулеза Y. pseudotuberculosis и возбудитель кишечного иерсиниоза - Y.enterocolitica.
Возбудитель чумы – J.pestis – овоидная грамотрицательная палочка,
которая окрашивается биполярно. Спор не образуют, в организме могут
образовать микрокапсулу. Неподвижны. Факультативные анаэробы. Вирулентные формы на плотных питательных средах формируют R колонии, в виде «кружевного платочка». На жидких средах чумная палочка
дает пленку со спускающимися нитями – в виде «сталактитов».
К основным факторам патогенности относятся: эндотоксин, «мышиный» экзотоксин, ферменты агрессии и защиты: фибринолизин, коагулаза, гиалуронидаза, гемолизин и др.
Чума относится к природно-очаговым инфекциям. Резервуаром являются дикие грызуны, переносчики – блохи.
Заражение человека происходит при укусе зараженными блохами,
при контакте с павшими от чумы грызунами; возможно заражение при
употреблении в пищу мяса больных верблюдов. Чума может передаваться и от человека к человеку.
В зависимости от путей проникновения различают клинические
формы: кожную, бубонную, первично-септическую и легочную.
После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.
Туляремия – острое или хроническое системное природноочаговое заболевание человека и животных, которое характеризуется
лихорадкой, интоксикацией и поражением лифатических узлов. Возбу92
дителем туляремии является Francisella tularensis, открытый в местечке
Туляре в 1911 г. Г.Мак-Коем и Х.Чепином.
Возбудитель туляремии - Francisella tularensis – мелкая, грамотрицательная коккобактерия, не образует спор, факультативный анаэроб.
Плохо растет на питательных средах.
Francisella tularensis является внутриклеточным паразитом. Вирулентность связана его способностью размножаться в фагоцитах и подавлять их киллерную активность. Возбудитель образует эндотоксин,
фермент агрессии – нейраминидазу.
Природным резервуаром являются грызуны, водяные крысы, домовые мыши.
Заражение человека происходит при прямом контакте с животными, их трупами. Заражение происходит также через пищевые продукты,
инфицированные выделениями больных грызунов.
Возможно трансмиссивное заражение через укусы кровососущих
насекомых. Больной человек не является источником инфекции, т.е.
является биологическим тупиком.
Возбудитель может проникать в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз, желудочно-кишечного тракта и
даже через неповрежденную кожу.
Это определяет разнообразие клинических форм: легочная, глазобубонная, абдоминальная, бубонная, язвенно-бубонная, генерализованная.
Иммунитет носит двухфазный характер – первые недели, месяцы
нестерильный, затем переходит в стерильный.
Для микробиологической диагностики чумы используют бактериоскопический, бактериологический, биологический и серологический
методы исследования, которые проводят в специальных лабораториях,
работающих в соответствии с инструкциями о режиме работы противочумных учреждений.
Материалами для исследования являются: пунктаты бубонов, мокрота, отделяемое карбункулов и язв, кровь, моча, рвотные массы, трупный материал. Взятие и доставка материала, как и работа с ним, производятся с соблюдением особых правил предосторожности (в противочумном костюме, с применением специальных средств и устройств,
предотвращающих контакт с кожей, слизистыми оболочками, а также
вдыхание образующихся аэрозолей).
93
Самостоятельная работа
1. Изучить режим в лабораториях особо опасных инфекций. Ознакомиться с противочумным халатом (костюмом).
2. Изучить схему лабораторной диагностики чумы.
3. Изучить культуральные свойства возбудителя чумы.
4. Промикроскопировать и зарисовать готовые мазки из чистой культуры палочки чумы.
5. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики
и лечения чумы.
6. Изучить схему микробиологической диагностики туляремии.
7. Промикроскопировать готовые препараты из чистой культуры туляремийных бактерий, зарисовать.
8. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики
и лечения туляремии.
94
95
Указания к самостоятельной работе
Микробиологическая диагностика чумы
Бактериоскопический метод диагностики. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования
материала. При наличии в окрашенных мазках грамотрицательных биполярно окрашенных овоидных бактерий диагноз чумы весьма вероятен. Однако необходимо дальнейшее исследование для точного определения вида микроба. Точная диагностика требует выделения чистой
культуры и постановки биологической пробы.
Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала
производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит
натрия).
В термостате при 25-28º С уже через 10-12 часов могут обнаружиться колонии чумной палочки в виде характерных «кружевных платочков». Из типичных колоний делают пересев в пробирку с агаром и
на чашку – газоном, куда после подсыхания наносят каплю чумного
бактериофага. Определят полученную культуру по характеру роста,
микроскопией мазков, реакцией агглютинации со специфической сывороткой, специфическим лизисом бактериофагом («стерильное пятно»).
Биологический метод. Для заражения животных используют морских свинок и лишь при отсутствии их – крыс и мышей. Обязательным является заражение втиранием и подкожно. Внутрибрюшинное
заражение ускоряет диагностику, но оно применимо только тогда, когда материал не загрязнен посторонней микрофлорой. О чумной инфекции свидетельствуют следующие патологоанатомические изменения: множественные кровоизлияния на слизистой и серозной оболочках, воспаление лимфатических узлов, наличие некротических очагов
в селезенке, реже в печени. В мазках из внутренних органов, крови,
экссудата обнаруживают большое количество грамотрицательных,
биполярно окрашенных бактерий.
Методы ускоренной диагностики чумы
Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью
бактериофага, внесенного в исследуемый материал
1. Внесение бактериофага в исследуемый материал в момент его
посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под
микроскопом негативные колонии фага или дорожку в первые
часы, когда рост бактерий еще почти не заметен (через 2,5-3 часа). Метод прост, доступен и дает хорошие результаты при вы96
сокой концентрации чумного микроба и при относительно
большом содержании посторонних микроорганизмов.
2. Определение нарастания титра чумного бактериофага, вносимого в исследуемый материал, где в случае наличия возбудителя
фаг начинает размножаться уже через 30-40 минут. Материал
сначала подращивают на средах, затем прибавляют генцианфиолетовый (1 мл 0,1 %-ный водно-спиртовой раствор на 100 мл
среды) для подавления посторонней микрофлоры, а затем добавляют в пробирки разные концентрации фага.
3. Для ускоренной диагностики чумы большое внимание заслуживает люминесцентно-серологический метод, с помощью которого можно обнаружить возбудитель чумы в воздухе, воде, пищевых продуктах.
Серологическое исследование
Серодиагностика проводится с целью ретроспективной диагностики, а также при эпизоотических обследованиях в природных очагах чумы. Проводят РНГА с эритроцитами, на которых адсорбирован капсульный антиген возбудителя чумы. Ставят также реакцию нейтрализации антигена, ИФА и непрямую модификацию РИФ. При исследовании
сывороток больных или павших грызунов в РНГА результат считается
положительным при титре 1:40 и выше.
Вопросы для самоконтроля
1. Таксономическое положение, морфологические, культуральные
свойства возбудителя чумы.
2. Пути заражения чумой.
3. Какие заболевания относят к карантинным или конвенционным?
4. Бактериологическая диагностика чумы
5. Назовите методы экспресс-диагностики чумы.
6. Охарактеризуйте методы специфической профилактики и терапии чумы.
7. Основные морфологические и культуральные свойства возбудителя туляремии?
8. В чем заключается аллергический метод диагностики туляремии?
9.Препараты для специфической профилактики и лечения туляремии.
97
Указания к самостоятельной работе
Методы микробиологической диагностики туляремии
Биологический метод
Выделить культуры возбудителя от больного путем непосредственного посева материала на среды почти никогда не удается. Присутствие
микроба в исследуемом материале обнаруживается только при заражении этим материалом лабораторных животных с последующим выделением культуры из их органов. Исследуемым материалом заражают морских свинок подкожно или внутрибрюшинно, они погибают в течение 10
дней. На вскрытии обнаруживается характерное воспаление и увеличение лимфатических узлов, некротические участки в виде беловато-серых
узелков в органах (селезенка, печень, легкие). Производят посев из крови,
лимфатических узлов и некротических участков на желточную среду,
глюкозоцистиновый агар с кровью и антибиотиками, среду Мак-Коя.
Полученную культуру идентифицируют: 1) бактериоскопией мазков;
2) посевом на яично-желточную среду или глюкозоцистиновый кровяной
агар; 3) посевом на простой агар, на котором бактерии туляремии не растут; 4) реакцией агглютинации со специфической сывороткой; 5) заражением лабораторных животных с получением у них характерной патологоанатомической картины. Биологическим методом диагностики пользуются также для определения зараженности туляремией диких грызунов
и объектов внешней среды: воды, пищевых продуктов и т.д.
Серологический метод
Серологический диагноз туляремии ставится реакцией агглютинации с сывороткой больного и туляремийным диагностикумом. Агглютинины появляются со 2-й недели заболевания и обнаруживаются много лет спустя после перенесенной болезни.
Развернутая реакция агглютинации ставится в пробирках с разведениями исследуемой сыворотки от 1:25 до 1:800. Результат реакции
получают после 2 часов стояния в термостате при 37º С и выдерживании 18-20 часов при комнатной температуре (мелкозернистая агглютинация). Положительным результатом считается ясная агглютинация
(+++) в разведении сывороток 1:100 и выше. Для ориентировочной диагностики можно воспользоваться реакцией агглютинацией на предметном стекле с цельной и разведенной сывороткой.
Кровянокапельная РА.
Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло и добавляют в нее равный объем дистиллированной воды, чтобы вы98
звать гемолиз. Рядом с кровью помещают каплю туляремийного диагностикума, обе капли смешивают стеклянной палочкой. У больных
туляремией в серопозитивном периоде (при титре 1:100 и выше ) агглютинация происходит немедленно.
Весьма чувствительным методом серологической диагностики туляремии является РНГА. Она может быть положительной уже в конце
первой – начале второй недели заболевания. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум (бараньи эритроциты, «нагруженные» туляремийным антигеном).
Для выявления антител к Francisella tularensis применяют также метод ИФА.
Аллергологическое исследование
Аллергические пробы применяют для ранней диагностики туляремии (с 5-го дня от начала заболевания). Используют два вида тулярина
и соответственно два способа их введения- накожный и внутрикожный.
Внутрикожный тулярин вводят в дозе 0,1 мл внутрь кожи ладонной части предплечья (предварительно обработанной спиртом). Результаты
пробы учитывают в динамике через 24-48 часов путем осмотра и пальпации места введения препарата. Наличие выраженного инфильтрата и
гиперемии диаметром 1,0 см и более расценивается как положительная
реакция. У отдельных больных возможно образование пустулы и даже
некроза кожи на месте введения препарата, лимфангоита, регионарного
лимфаденита с повышением температуры тела до 37,5-38ºС в течении
24-48 часов. Накожную пробу ставят путем втирания стерильным оспопрививальным пером 1 капли накожного тулярина в скарифицированный участок кожи, предварительно обработанный спиртом. Учет проводят, как описано выше; положительной считается реакция при размерах участка гиперемии и инфильтрата 0,5 см и более.
У вакцинированных или переболевших туляремией лиц в течение
ряда лет аллергические пробы могут оставаться положительными
(анамнестическая реакция).
99
Таблица 23
Диагностические, профилактические и лечебные препараты
при чуме и туляремии
Препарат
Состав
Назначение
Живая чумная вакВзвесь живых чумных
Для профилактики
цина штамм EV
авирулентных микробов,
чумы, вакцинацию
высушенных в
проводят
сахарозно-желатиновой среде
однократно по
эпидпоказаниям
Туляремийная живая
Взвесь живых микробов
Для активной
сухая накожная
вакцинного штамма
иммунизации в
вакцина
плановом порядке
или по
эпидпоказаниям
Тулярин
Взвесь убитых путем
Для диагностики
нагревания туляремийных
туляремии
бактерий
Противочумная
Сыворотка крови лошадей,
Применяется с
лечебная сыворотка
гипериммунизированных
лечебной целью
живой чумной вакциной
Противочумный
Применяется с
бактериофаг
лечебной и
профилактической
целью
Противочумный
Глобулиновая фракция
С лечебной целью
гамма-глобулин
сыворотки крови лошадей,
иммунизированных живой
чумной вакциной
Противочумная
Меченые флюоресцеинизотиоДля быстрого
люминесцирующая
ционатом диагностические
обнаружения и
сыворотка
противочумные сыворотки
идентификации
возбудителя чумы
100
Занятие 16
Итоговое занятие по темам №8-15
Цель: контроль знаний студентов по разработанным на кафедре тестовым заданиям 1,2 и 3 уровней.
Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи к разделу приведены в приложении
Занятие 17
ТЕМА: СПИРОХЕТОЗЫ.
СИФИЛИСА.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ
ДИАГНОСТИКА
Цель: изучить методы диагностики сифилиса.
Спирохеты – тонкие, подвижные бактерии, которые имеют форму
спирали с различным числом завитков и длиной 3-500мкм. Протоплазма
их спирохетообразно обвита вокруг эластической осевой нити, за счет
сокращения которой происходит движение спирохет. Различают поступательное, вращательное и маятникообразные движения спирохет.
Обобщающее название заболеваний вызываемых спирохетами – спирохетозы. Спирохеты относятся к семейству Spirochetaceaе. Медицинское
значение имеют представители родов Treponema, Borrelia и Leptospira.
Трепонемы являются возбудителями сифилиса, фрамбезии. Боррелии вызывают эпидемический и эндемический возвратные тифы, а также болезнь Лайма.
Лептоспиры вызывают лептоспирозы – зоонозные заболевания с
преимущественным фекально-оральным механизмом передачи, с поражением печени, почек, ЦНС, с общей лихорадкой и интоксикацией.
(Табл.24)
Таблица 24
Возбудители спирохетозов
Возбудитель
Заболевание
1. Treponema pallidum
Сифилис
2. Treponema pallidum подвид endemicum
Беджель (эндемичный сифилис)
3. Treponema pallidum подвид pertenue
Фрамбезия
4. Treponema carateum
Пинта
5. Borrelia recurrentis
Возвратный тиф (эпидемический)
6. Borrelia duttoni
Возвратный тиф (эндемический)
7. Borrelia burgdofteri
Болезнь Лайма, лаймоборрелиоз
8. Leptospira interrogans (более 200 сероваров)
Лептоспироз
101
Сифилис - венерическая, антропонозная инфекционная болезнь,
характеризующаяся первичным аффектом, высыпанием на коже и
слизистых оболочках с последующим поражением различных органов
и систем.
Возбудитель сифилиса - Treponema pallidum (бледная спирохета)
был открыт в 1905 году Ф.Шаудином и Э.Гофманом.
Бледная трепонема имеет извитую форму с 8-14 равномерными завитками и длиной 6-12 мкм. Спор и капсул не образует. Трепонема по
Романовскому-Гимзе окрашивается в слабо-розовый цвет.
Бледная трепонема анаэроб. Плохо культивируется даже на специальных средах. Трепонемы очень требовательны к питательным средам
и на обычных средах не растут. Выращивается на среде с кроличьей
сывороткой и кусочком мозговой ткани, залитой вазелиновым маслом
(среда Аристовского-Гельцера). Выросшие на средах трепонемы утрачивают характерную форму, а также иммуногенность и патогенность
(трепонемы Рейтера). Тканевые трепонемы, обнаруживаемые в твердом
шанкре человека, поддерживают в пассажах на кроликах, заражая их
под кожу мошонки или в паренхиму яичка. Тканевые трепонемы (трепонемы Никольса) сохраняют патогенность.
Возбудитель не устойчив к факторам окружающей среды. При
нагревании до 600С быстро погибает. Под действием антибиотиков (пенициллина) образует L-формы.
Сифилис антропонозное заболевание. Источником инфекции является только человек. Заражение сифилисом происходит половым путем,
реже бытовым – через посуду и предметы общего пользования. Вследствие внутриутробного заражения плода возможен врожденный сифилис.
Инкубационный период равен 3-4 неделям. В течении заболевания
различают первичный, вторичный и третичный периоды болезни.
Первичный период характеризуется появлением на месте внедрения
возбудителя твердого шанкра – безболезненной язвы с плотными краями
и основанием, мясо – красного цвета со скудным отделяемым, увеличиваются ближайшие к шанкру лимфоузлы, -первичный комплекс. Длится
первичный сифилис 6-7 недель. Затем твердый шанкр заживает и через 23 недели от момента возникновения шанкра в крови появляются противосифилитические антитела – серопозитивный сифилис.
Затем наступает вторичный период, который характеризуется появлением на коже и слизистых розеолезно-папулезных высыпаний, а
102
также везикул и пустул, в которых также могут быть обнаружены трепонемы, хотя и реже чем в твердом шанкре.
Через 3-4 года развивается третичный сифилис, при котором в подкожной клетчатке, внутренних органах, костях образуются гуммы. В
гуммах бледные спирохеты не обнаруживаются.
У некоторых лиц болезнь заканчивается развитием прогрессивного
паралича и спинной сухотки в результате поражения ЦНС.
Микробиологическая диагностика сифилиса включает как бактериоскопическое так и серологические исследования.
Бактериоскопическое исследование проводят при первичном сифилисе (твердом шанкре) и заключается в микроскопии мазков из тканевой жидкости для обнаружения трепонем. Начиная с 4-5-й недели от
момента возникновения твердого шанкра, когда начинается серопозитивный период сифилиса, берут кровь для постановки серологических
реакций: РСК – реакции Вассермана, реакции микрокпреципитации,
реакции Кана (флокуляционный тест), РПГА, РИФ, ИФА, РИТ и др.
Серологические реакции для диагностики сифилиса делятся на отборочные (скрининговые) и подтверждающие.
К отборочным тестам относятся реакция Вассермана, микропреципитации, флокуляционные тесты и РПГА с неспецифическим кардиолипиновым антигеном. Эти реакции применяются при массовых обследованиях населения. Эти реакции становятся отрицательными после
проведенных курсов лечения и используются для оценки эффективности лечения.
При постановке РИФ, РИТ, РПГА, ИФА в качестве антигена используется специфический трепонемный антиген - антиген из трепонем, выращенных в яичке кролика. Это высокочувствительные и высокоспецифичные тесты используются для подтверждения диагноза. Эти реакции
остаются положительными и после проведенного лечения и поэтому не
могут быть использованы для оценки эффективности лечения.
Самостоятельная работа
1. Разобрать схему микробиологической диагностики сифилиса.
2. Микроскопировать и зарисовать готовый препарат из трепонем
(окраска по Романовскому-Гимзе).
3. Поставить реакцию микропреципитации для диагностики сифилиса,
дать заключение.
4. Произвести учет реакции связывания комплемента (реакции Вассермана) по демонстрационному материалу.
103
Указания к самостоятельной работе
1. Бактериоскопическое исследование наиболее эффективно при
первичном сифилисе. Исследуют материал из твердого шанкра. Препарат
фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимзе.
Используют и темнопольную микроскопию неокрашенных препаратов.
Во втором периоде заболевания исследуют материал из кожных
высыпаний, но обнаружить в них материал удается редко.
1. Реакция микропреципитации. Осадочные реакции просты в постановке. Обладают высокой специфичностью и чувствительностью.
Для постановки необходимо иметь исследуемую сыворотку крови и
неспецифический кардиолипиновый антиген.
Реакция Вассермана
Для постановки реакции связывания комплемента при подозрении
на сифилис необходимы следующие компоненты:
1. Исследуемая инактивированная сыворотка больного в разведении 1:5.
2. Неспецифический антиген - (кардиолипиновый антиген)
3. Комплемент - в качестве комплемента используют сыворотку морской свинки. Комплемент берут в рабочей дозе.
4. Гемолитическая система - это смесь гемолитической сыворотки и
эритроцитов барана. Реакцию Вассермана ставят по общепринятой методике РСК (табл. 25).
Таблица 25
Схема постановки реакции Вассермана
Компоненты
реакции
Инактивированная исследуемая
сыворотка (1:5)
Кардиолипиновый
антиген в рабочей дозе
Комплемент (в рабочей дозе)
Физиологический раствор
1 (опыт)
0,5
№ пробирки
2 (контроль АГ)
-
3 (контроль AT)
0,5
0,5
0,5
-
0,5
0,5
0,5
-
0,5
0,5
1,0
1,0
1,0
+++
Гемолиз
Гемолиз
Инкубация при t 370 С - 40 минут
Гемолитическая система (взвесь
эритроцитов + гемолитическая
сыворотка)
Инкубация при t 370 С - 40 минут
Учет результатов
104
Отсутствие гемолиза в опытной пробирке свидетельствует о положительной реакции Вассермана. Наличие гемолиза в опытной пробирке
соответственно трактуется как отрицательная реакция Вассермана.
Учет результатов реакции производится по 4+ системе.
++++ - резко положительная реакция (полная задержка гемолиза);
+++ - положительная реакция;
++ - слабо положительная реакция;
+ - сомнительная реакция;
Полный гемолиз – отрицательная реакция.
Вопросы для самоконтроля
1. Какие Вы знаете спирохетозы?
2. Каковы морфологические признаки патогенных спирохет? Методы окраски спирохет.
3. Источник инфекции и пути передачи сифилиса.
4. Клинические стадии сифилиса.
5. Перечислите методы микробиологической диагностики сифилиса.
6. В чем заключается бактериоскопический метод диагностики?
7. Объясните механизм реакции Вассермана и осадочных реакций.
8. Какие антигены применяются при постановке серологических реакций для диагностики сифилиса?
9. Назовите антибиотики и химиопрепараты для лечения сифилиса.
Существуют ли методы специфической профилактики сифилиса?
105
Занятие 18
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА РИККЕТСИОЗОВ И
ХЛАМИДИОЗОВ.
Цель: изучить методы микробиологической диагностики риккетсиозов
и хламидиозов.
Риккетсии - это грамотрицательные неподвижные бактерии, выделенные в отдельный порядок Rickettsiales, отличаются облигатным
внутриклеточным паразитизмом. Риккетсии получили свое название в
честь американского микробиолога Т. Риккетса, который открыл возбудителя лихорадки “скалистых гор” в 1909 году. Риккетсии полиморфны, образуют кокковидные, палочковидные, бациллярные, нитевидные
формы. Размножаются поперечным делением или дроблением нитевидных форм. Спор и капсул не образуют. По типу дыхания-аэробы.
Риккетсии относятся к семейству Rickettsiaceae.
К этому семейству относятся три рода: Rickettsia, Rochalimaea и
Coxiella.
Деление риккетсий на роды основано на различии в антигенном
строении и локализации в пораженной клетке.
Риккетсии имеют два антигена: растворимый (группоспецифический) и корпускулярный (видоспецифический). Возбудители относящиеся к роду Rickettsia, располагаются в цитоплазме, реже в ядре клетки; к
роду Coxiella- в фагосомах и фаголизосомах, к роду Rochalimae- в межклеточном пространстве.
Патогенные риккетсии не способны размножаться на искусственных питательных средах.
Для их культивирования используют:
-заражение культур тканей,
-куриных эмбрионов,
-экспериментальных лабораторных животных.
Риккетсиозы, в основном, трансмиссивные инфекции. Природным
резервуаром для большинства риккетсий являются грызуны и членистоногие. Возбудитель передается человеку при укусе кровососущих
членистоногих- вшей, блох, клещей. Исключения составляет лихорадка
Ку, которая передается алиментарным или воздушно-капельным путем,
а естественным хозяином возбудителя является домашний скот.
Риккетсии поражают клетки ретикулоэндотелиальной системы и
эндотелий сосудов. В основе патогенеза риккетсиозов лежит интокси106
кация и развитие характерных изменений сосудов в виде эндоваскулита. Заболевания, вызываемые риккетсиями, называются риккетсиозами.
Риккетсиозы человека делятся на 3 группы (табл. 26).
Таблица 26
Риккетсиозы человека
Заболевание
Возбудитель
Группа сыпного тифа
эпидемический сыпной тиф
R. prowazekii
эндемический сыпной тиф
R. typhi
лихорадка Цуцугамуши
R. tsutsugamushi
Группа пятнистых лихорадок
Пятнистая лихорадка Скалистых гор
R. rickettsii
Марсельская лихорадка
R. conorii
Австралийский клещевой риккетсиоз
R. australis
Клещевой сыпной тиф Северной Азии
R. sibirica
Везикулезный риккетсиоз
R. acari
Прочие риккетсиозы
Ку- лихорадка
Coxiella burnetii
Волынская лихорадка
Rochalimaea quintana
Эрлихиоз и др.
Ehrlichia chafftensis, E. canis.
Эпидемический сыпной тиф - острое антропонозное заболевание,
вызываемое Rickettsia prowazekii и характеризующееся лихорадкой,
явлениями интоксикации и поражением внутренних органов- печени,
селезенки, миокарда, ЦНС и т.д.
Возбудителем эпидемического сыпного тифа является риккетсия
Провачека (Rickettsia prowazekii), который открыт чешским ученым
Провачеком в 1913 году.
Источником инфекции является больной человек, кровь которого заразна в течение 20-25 дней с начала заболевания. Переносчиком является
платяная вошь. Риккетсии размножаются в эпителии кишечника вши и
выделяются в наружу с экскрементами. Заражение человека происходит
при расчесывании места укуса и втирании экскрементов вши. Вспышки
сыпного тифа сопровождают войны, голод, социальные потрясения.
Инкубационный период в среднем составляет 2 недели. Заболевание
начинается остро, с резкого озноба, повышения температуры до 39-40ºС,
мучительной головной боли, бессонницы. На высоте лихорадки возможно нарушение сознания- бред, галлюцинации. На 4-5-е дни появляется
сыпь, вследствие расширения капилляров кожи и их повреждения.
107
Болезнь Брилля-Цинссера возникает у людей перенесших в прошлом сыпной тиф и характеризуется более легким течением.
Микробиологическая диагностика.
Для культивирования риккетсий Провачека применяют заражение
куриного эмбриона, культур клеток. Из лабораторных животных заражают белых мышей, морских свинок.
Для диагностики сыпного тифа широко применяются серологические методы: РА, РНГА, РСК, РИФ, ИФА.
Таблица 28
Схема постановки РСК при сыпном тифе
Разведение сыворотки
Контроль
1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640
1
2
3
Исследуемая
сыворотка
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
Антиген Провачека
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
0,25 Комплемент
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 Физиологический
раствор
0,25 0,25 Термостат 1 час
Гемолитическая
система: сенсибилизирование при 370
30 минут
0,5 0,5 0,5
0,5
0,5
0,5
0,5 0,5 0,5
Термостат 30 минут
Результат
+++ +++ +++ +++
Полный
гемолиз
Ингредиент
Для дифференциации болезни Брилля-Цинссера от сыпного тифа
применяется дифференцированное определение IgM и JgG. При сыпном тифе вначале образуются IgM, которые сменяются IgG, а при болезни Брилля-Цинссера наблюдается быстрое образование IgG. Разработана ПЦР- диагностика сыпного тифа.
Специфическая профилактика основана на введении сухой живой
комбинированной вакцины ЖКВСЕ.
Возбудителем эндемического или крысиного сыпного тифа  является риккетсия Музера (R. typhi), которая по основным биологическим свойствам близка к риккетсии Провачека.
Природным резервуаром являются крысы, полевые и домовые мыши. Переносчиком возбудителей служат блохи, гамазовые клещи.
108
Заболевания у людей в виде единичных случаев встречаются в
местностях, где наблюдаются заболевания крыс.
Проявления заболевания сходны с эпидемическим сыпным тифом.
Для микробиологической диагностики используют – биологическую пробу- заражение материалом от больных морских свинок- самцов. При эндемическом сыпном тифе у морских свинок развиваются
признаки периорхита (скротальный феномен).
-Серологическая диагностика- реакция агглютинации с диагностикумом Музера(R. typhi), РСК, ИФМ.
Серодиагностика- реакция агглютинации с диагностикумом Провачека и Музера, позволяет поставить диагноз крысиного сыпного тифа и
дифференцировать его от эпидемического сыпного тифа.
Специфическая профилактика не разработана.
Ку-лихорадка (от англ. Query- неясный, неопределенный)- зоонозная
инфекционная болезнь, возбудителем, которой является Coxiella burnetti.
Ку-лихорадка распространена повсеместно, в том числе и в России.
В эпидемическом отношении опасность представляют домашние животные, грызуны. Передача происходит трансмиссивным путем (клещи). Возможны воздушно-пылевой путь заражения при обработке шерсти, кожи животных, а также алиментарный путь при употреблении
молока и молочных продуктов больных животных.
Возбудитель, попадая в кровь распространяется по органам и тканям, вызывая поражение многих органов, чаще всего легких. Размножение микробов происходит в гистиоцитах и микрофагах, после разрушения которых отмечаются генерализация процесса и токсинемия. В
процессе инфекции развивается гипречувствительность замедленного
типа (ГЗТ). Протекает как лихорадочное заболевание. Иммунитет после
перенесенного заболевания достаточно прочный.
Микробиологическая диагностика основана на выделении возбудителя из крови, мокроты и мочи. Материал вводят морским свинкам, белым мышам. Из селезенки морской свинки возбудителя выделяют путем культивирования на курином эмбрионе.
С целью серодиагностики применяются РА, РСК, ИФМ. С диагностической целью применяется кожно-аллергическая проба.
Специфическая профилактика проводится живой ослабленной вакциной штамма М-44.
Хламидии относятся к семейству Chlamydiaceae к роду Chlamydia.
Хламидии представляют собой мелкие кокковидные бактерии (0,3-1,5
109
мкм.), которые являются облигатными внутриклеточными паразитами.
Они неподвижны, капсул не образуют, грамотрицательны.
Для них характерен уникальный цикл развития, включающий две
различные по морфологическим и биологическим свойствам формы
существования:
1) элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная форма паразита, которые имеют сферическую форму диаметром 250-ЗООнм и приспособлены для внутриклеточного существования. По Романовскому- Гимза
окрашиваются в пурпурный цвет.
2) ретикулярные тельца (РТ) - вегетативная форма, имеют более
крупные размеры (800 нм до 1 мкм), овальную форму. Развивается из
элементарного тельца, проникшего в цитоплазму в течение 5-6 часов. В
начале из ЭТ образуется инициальное тельце (вегетативное тельце),
затем из вегетативного тельца образуется ретикулярное тельце (РТ).
Такой цикл продолжается 40-72 часа и завершается разрывом клетки и выходом ЭТ в межклеточное пространство.
Согласно последней классификации различают два рода хламидий :
род Chlamydia, включает вид C. trachomatis и род Chlamydophila, в который включены C. psittaci, C.pneumoniae.
110
Рис 1. Жизненный цикл хламидий
Хламидии имеют родоспецифический, видоспецифический, вариантоспецифический- антигены:
- родоспецифический термостабильный ЛПС, находящийся в клеточной стенке;
- видоспецифический антиген белковой природы, расположенный в
наружной мембране;
- вариантоспецифический антиген белковой природы.
Факторы патогенности: компоненты поверхности клетки – белки
наружной мембраны обладают адгезивными и антифагоцитарными
свойствами. Эндотоксин - ЛПС, аналогично как у грамнегативных бактерий. Ряд исследований предполагает наличие экзотоксина, который
вызывает гибель мышей.
Патогенные хламидии вызывают такие заболевания как орнитоз,
трахома, урогенитальный хламидиоз.
Орнитоз  (от греч- ornis- птица) - инфекционное заболевание, вызываемое Chlamidia psittaci и характеризующаяся интоксикацией, поражениями легких, нервной системы, гепатоспленомегалией.
111
Резервуаром инфекции являются различные птицы. В дикой природе- водоплавающие птицы, среди синантропных- голуби. Основной
путь передачи- воздушно-капельный, воздушно- пылевой, возможны
контактные и алиминтарные пути.
Инкубационный период 8-12 дней. Для клиники характерно многообразие проявлений: пневмония, бронхопневмония, миокардипатия,
увеличение печени, развитие серозного менингита и др. Постинфекционный иммунитет не стойкий.
Для выделения возбудителя применяется культуральный метод- заражения культур клеток, куриного эмбриона. Ведущее значение в диагностике орнитоза имеют серологические методы - РСК, РНГА, РИФ,
ИФА, и др.
Для диагностики орнитоза предложена внутрикожная аллергическая проба.
Трахома  хроническое инфекционное заболевание, вызываемое
Chlamidia trachomatis и характеризующееся поражением конъюнктивы
и роговицы глаз, которое может привести к слепоте.
Возбудителем трахомы является Chlamidia trachomatis, который
был открыт в 1907 году Провачеком, Хальберштедтером.
Заболевание известно с древнейших времен, в настоящее время
встречается в ряде развивающихся стран. В Дагестане трахома раннее
была распространена и до 70-х г существовал противотрахоматозный
диспансер.
C. trachomatis характеризуется всеми вышеперечисленными свойствами. Трахому вызывают серовары A, Ba, B, C, эти же серовары могут быть причиной конъюнктивитов с включениями.
Трахома распространена в Азии, Африке, Южной Америке, особенно в странах с низким уровнем санитарной культуры.
Урогенитальный хламидиоз - острое или инфекционное заболевание, вызываемое различными сероварами Chlamуdia trachomatis и характеризующееся избирательным поражением мочеполовой системы.
Возбудитель урогенитального хламидиоза- Chlamуdia trachomatis,
относящийся к семейству Chlamуdiaсеа, к роду Chlamуdia. Представляет собой мелкие грамотрицательные кокковидные бактерии, не имеет
спор, капсулы, неподвижна.
По антигенной структуре различают 18 сероваров Ch. trachomatis. К
факторам патогенности относятся адгезины – белки наружной мембраны
и эндотоксин (ЛПС), который освобождается после гибели хламидий.
112
Источником инфекции являются больные люди. Как источник инфекции наиболее опасны лица, у которых заболевание протекает бессимптомно. Основной механизм заражения- контактный, путь передачи- половой. Редко, но возможно инфицирование через предметы обихода- белье, мочалка и т.д. Новорожденные могут заразиться от больной матери при прохождении через родовые пути- хламидиоз глаз, дыхательных путей. Возможна также трансплацентарная передача хламидий от матери плоду (врожденный хламидиоз).
Входные ворота инфекции, как правило, слизистые половых органов. Возбудитель поражает не только эпителиальные клетки, но и обладают лимфотропностью. Хламидии венерической лимфогранулемы характеризуется высокой инвазивностью. Инкубационный период 1-2 недели, иногда до 1 месяца.
Таблица 27
Заболевания, вызываемые различными сероварами C. trachomatis
Вид
Серовар
Заболевание
A, B, Ba, C
Трахома, конъюнктивит
C. trachomatis
D-K
Урогенитальный хламидиоз,
хламидиоз новорожденных
L1, L2, L2а, L3
Венерическая лимфогранулема
У мужчин заболевание наиболее часто характеризуется признаками
уретрита. Жалобы на зуд и жжение в уретре, дизурические явления.
Объективно- гиперемия наружного отверстия уретры, скудные слизистые или слизисто- гнойные выделения, лейкоцитоз.
У женщин- незначительные слизистые или слизисто-гнойные выделения из цервикального канала, наличие фолликулярного цервицита,
повышенная кровоточивость слизистой шейки матки, лейкоцитоз. Далее развивается восходящая инфекция, которая может привести к внематочной беременности, к мужскому и женскому бесплодию.
Материал для исследования: соскобы эпителия из уретры, влагалища, шейки матки, биоптаты из половых органов, сыворотка крови.
Методы диагностики:
- культуральный- заражение культур клеток (например, типа Мак- Кой);
- РИФ, ИФА
- ДНК-диагностика- ПЦР, ДНК- гибридизация.
- серологический метод для определения антител в парных сыворотках
крови (РНГА, ИФА).
113
Специфическая терапия и профилактика. Для лечения урогенитального хламидиоза применяются антибиотики, способные проникать
в эпителиальные клетки и создавать там достаточные концентрации для
направленного бактерицидного и бактериостатического действия на
хламидии. В основном применяются антибиотики тетрациклинового
ряда, макролиды, фторхинолоны.
Специфическая профилактика не разработана.
Схема 14. Микробиологическое исследование при риккетсиозах
(по Борисову Л.Б., 2001)
Кровь больного, переносчики,
органы заражения животных
Серодиагностика
Биопроба
Выделение
возбудителей
Введение в
желточный
мешок
куриного
эмбриона
Сыворотка крови
Заражение
клеточных
культур
Реакция
агглютинации
риккетсий
Заражение
самцов
морских
свинок
РСК
РПГА
Препараты,
окраска по
Здродовскому
Вскрытие
животных
Ответ
Ответ
Иммунофлюоресцентный
метод
Препараты, из
органов, окраска по
Здродовскому
Ответ
Ответ
114
Самостоятельная работа
1. Разобрать схему микробиологической диагностики риккетсиозов,
зарисовать в тетрадь.
2. Поставить реакцию агглютинации с сывороткой больного и с риккетсиозными диагностикумами Провачека и Музера.
3. Произвести учет реакции агглютинации по демонстрационному материалу.
4. Разобрать схему микробиологической диагностики Ку-лихорадки.
5. Демонстрация препаратов для диагностики, лечения и профилактики возвратного и сыпного тифов, лихорадки КУ.
6. Произвести учет прямой РИФ для обнаружения хламидийного антигена.
Указания к самостоятельной работе
Прямой иммунофлюоресцентный метод (РИФ)
Методпредпологает выявление антигенов хламидий в исследуемом
клиническом метериале. Для нанесения материала применяются деколированные предметные стекла. При их отуствии применются чистые,
обезжиренные предметные стекла без царапин. Мазок фиксируют охлажденным (4°) ацетоном или метанолом в течении 5-10 минут. На фиксированный мазок наносят раствор флюоресцирующих антител (раствором
моноклональных или поликлональных, меченных Фитц с синькой Эванса) в колличестве 20-50мкл. Мазок инкубируют во влажной камере 20-25
минут, затем препарат опаласкивают фосфатнобуферным раствором 2
раза по 5 минут. После высушивания препарат исследуют в люминесцентном микроскопе. Микроскопию производят с использованием нефлюоресцирующего иммерсионного масла, объектива 90-х, окуляра – 7х.
Результат считается положительным, если в мазке обнаруживают
ярко-зеленое свечение в виде точки (для элиминтарного тельца) или
овала (для ритикуляционных телец). Тельца распологаются отдельно,
на поверхности эпителиальных клетокили внутриклеточно. Эпителиальные клетки окрашены в ярко оранжевый цвет. В этих случаях положительная оценка теста предполагает выявление в препарате не менее
10 элиментарных телец четко выделяющихся на красном фоне контрастно-окрашенных клеток. Результат считается отрицательным, если
в мазке отсуствует специфическое свеение при обязательном наличии
не менее 50 эпителиальных клеток. При ограниченном колличестве
эпителиальных клеток в клинических образцах цитоплазматические
включения обнаруживаются редко. При отсуствии в препарате эпите115
лиальных клеток , но при обнаружении образований, схожих с хламидиями , следует повторить исследование, чтобы устранить сомнения в
правильности взятия материала.
Таблица 29
Препараты для специфической профилактики риккетсиозов
Препарат
Состав
Показания
Вакцина Е
Живые авирулентные
Для специфической просыпнотифозная живая
риккетсии Провачека
филактики сыпного типфа
по эпидпоказаниям
Вакцина
Растворимый антиген
Для специфической просыпнотифозная
вирулентных риккетсии филактики сыпного типфа
химическая
Провачека
по эпидпоказаниям
Вакцина М-44 живая Аттенуированный штамм
Для специфической
риккетсий Бернета
профилактики
Ку-лихорадки
Вопросы для самоконтроля
1. Общая характеристика риккетсии. Их таксономическое положение в
систематике микроорганизмов. Что общего у риккетсии с бактериями, и какие свойства их сближают с вирусами?
2. Назовите методы культивирования риккетсий.
3. Каков механизм заражения эпидемическим сыпным тифом?
4. Какие микробиологические методы применяются для диагностики
сыпного тифа (эпидемического и эндемического)?
5. Как отличить болезнь Брилля - Цинссера от сыпного тифа?
6. Перечислите методы диагностики Ку - лихорадки.
7. Таксономическое положение хламидий. Их роль в патологии человека.
8. Методы лабораторной диагностики хламидиозов.
116
Занятие 19
ТЕМА: МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ.
Цель: изучить методы микробиологической диагностики вирусных
инфекций, методы культивирования вирусов, индикации и идентификации в курином эмбрионе и культуре клеток.
Основоположником вирусологии является русский ученый
Л.И.Ивановский, который в 1892 году открыл вирус мозаичной болезни
табака.
Для вирусов характерны две формы существования: внеклеточная
и внутриклеточная. Внеклеточный вирус имеет специфическую корпускулярную форму и называется вирион.
Рис. №2. Схема строения вириона
Структура вириона. Вирионы состоят из нуклеиновой кислоты
(ДНК или РНК), окруженной белковой оболочкой - капсидом. Простые
вирионы представляют собой нуклеокапсид, а по химическому составунуклеопротеид. Капсид вирионов состоит из определенного числа белковых молекул - капсомеров. По характеру расположения капсомеров
117
вирусы делят на три группы: с кубическим, спиральным и смешанным
типом симметрии. Большинство патогенных для человека вирусов имеет кубический тип симметрии. Спиральный тип симметрии характерен
для орто - и парамиксовирусов и некоторых арбовирусов. Смешанный
тип симметрии отмечается у поксвирусов и бактериофагов. Некоторые
вирусы имеют дополнительную внешнюю оболочку, которая называется суперкапсидом. В состав суперкапсида могут входить глико - липопротеиды, ферменты. Такие вирусы относятся к сложным вирусам.
Основные особенности вирусов, отличающие их от остальных
живых организмов
1. Вирионы содержат нуклеиновую кислоту только одного типаДНК или РНК. Все другие живые организмы содержат два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК).
2. У вирионов отсутствуют собственные белоксинтезирующие и
энергообразующие системы. У них нет рибосом. Они используют рибосомы клеток хозяина.
3. Абсолютный паразитизм.
4. Вирионы не способны к росту и бинарному делению. Вирусы
размножаются особым способом, который отличается от способов размножения всех других организмов. Их способ размножения называется
дисъюнктивная (т.е. разобщения) репродукция.
Таким образом, термин «вирус» означает внеклеточную своеобразную форму жизни, обладающую собственным геномом и способную к
воспроизведению лишь в клетках более высокоорганизованных существ.
Классификация вирусов
В основу современной классификации положены следующие основные критерии.
1. Нуклеиновая кислота: тип (РНК или ДНК), число нитей, процентное содержание, молекулярный вес, содержание гуанина и цитозина.
2. Морфология: тип симметрии, число капсомеров для вирусов с
кубической симметрией, наличие внешних липопротеидных оболочек
(суперкапсид), форма, размеры вирионов.
3. По способу репродукции, т.е. по стратегии вирусного генома различают: а) РНК +- вирусы, б) РНК - - вирусы, в) РНК- содержащие ретровирусы, г) ДНК- содержащие вирусы
4. Биофизические свойства: константа седиментации, плавучая
плотность.
118
5. Круг восприимчивых хозяев.
6. Патогенность, в том числе патологические изменения в клетках и
образование внутриклеточных включений.
7. Географическое распространение.
8. Способ передачи.
9. Антигенные свойства.
На основании перечисленных признаков вирусы делятся на семейства, подсемейства, роды, виды.
Таблица №30
Классификация ДНК-содержащих вирусов
119
Таблица№31
Классификация РНК-содержащих вирусов
120
Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций
1. Микроскопический метод. а) обнаружение в исследуемом материале с помощью специальных методов окраски внутриклеточных телец - включений. Например, при бешенстве (тельца Бабеша - Негри),
герпетической инфекции, при ветряной оспе др., б) обнаружение возбудителя в пораженной ткани с помощью флюоресцирующих антител
(РИФ), в) обнаружение возбудителя с помощью электронной микроскопии. Этот метод требует достаточно высокой концентрации возбудителя в пораженной ткани. Поэтому отрицательные результаты не являются диагностически значимыми.
2. Вирусологический метод. Для выделения чистой культуры вируса используют следующие методы: а) заражение куриных эмбрионов,
б) заражение культур клеток
3. Биологический метод.
Заражение чувствительных к данному вирусу лабораторных животных исследуемым материалом с целью воспроизведения заболевания или последующего выделения вируса.
4. Серологический метод.
Обнаружение противовирусных антител в сыворотке больного или
реконволесцента. При серологической диагностике вирусных инфекций
широко используют следующие реакции: РСК- реакция связывания
комплемента, РТГА- реакция торможения гемагглютинации, РИФ- реакция иммунофлюоресценции, РБН- реакция биологической нейтрализации вируса, РИА- радиоиммунный анализ, ИФА- иммуноферментный
анализ. РИА и ИФА отличаются наибольшей чувствительностью по
сравнению с другими серологическими реакциями. Серологические
методы просты и позволяют исследовать большое количество проб за
короткий промежуток времени. Этими методами выявляют нарастание
антител в парных сыворотках переболевших с помощью набора вирусных диагностикумов (антгенов). У больного сыворотку берут в начале
заболевания и затем через 2-4 недели. Поэтому называются эти сыворотки парные, т.е. две (пара) сыворотки. Парные сыворотки исследуют
совместно, начиная с разведений 1:10. Показателем свежеперенесенной
инфекции является не менее чем четырехератное нарастание титра антител во второй сыворотке. Молекулярно- генетический.
а) ДНК- зонд диагностика, б) ПЦР - диагностика.
121
Самостоятельная работа:
1. Зарисовать в тетради модель строения вириона, обозначить на рисунке НК, капсид, капсомеры, нуклеокапсид, суперкапсид.
2. Зарисовать в тетрадь схему строения куриного эмбриона.
3. Изучить способы заражения куриных эмбрионов, индикации вирусов в курином эмбрионе (реакция гемагглютнации) и идентификации (реакция торможения гемагглютинации - РТГА).
4. Пользуясь учебной таблицей, изобразите в виде схемы типы тканевых культур.
5. Изучить внутриклеточные включения (демострационный препарат и
таблица). Зарисовать в тетради.
6. Зарисовать в тетради таблицу «Методы обнаружения вирусов в
культуре ткани».
7. Посмотреть под микроскопом демонстрационный препарат культуры клеток.
Указания к самостоятельной работе
1. Культивирование вирусов в курином эмбрионе: существует
несколько методов заражения куриных эмбрионов: на хорионаллантоисную оболочку, в аллантоисную полость, амниотическую полость, в
желточный мешок. Для заражения используют эмбрионы 5- 11 дневного возраста. Перед заражением эмбрионы просматривают в темной
комнате при помощи овоскопа для проверки их жизнеспособности,
определения воздушной камеры и места расположения эмбриона.
122
Для заражения куриного эмбриона, например, в аллантоисную полость исследуемым вирусосодержащим материалом яйцо устанавливают в штативе в вертикальном положении тупым концом вверх. Скорлупу, над воздушной камерой обрабатывают спиртом, йодом, повторно
спиртом и прокалывают над воздушной камерой и через небольшое отверстие вводят иглой шприца на глубину 1-1,5 см материал в объеме
0,1-0,2 мл. Отверстие заливают парафином. Зараженное яйцо ставят в
термостат при 37° С на 48 часов.
Через несколько дней (2-3 дня) производят вскрытие куриных эмбрионов. Работу проводят в стерильных условиях. Яйцо ставят воздушным мешком кверху, место вскрытия смазывают спиртом, йодом, еще
раз спиртом, обжигают и ножницами удаляют прилегающую к отверстию часть скорлупы. Пинцетом снимают подскорлуповую оболочку,
прокалывают пастеровской пипеткой хорионаллантоисную оболочку и
из полости отсасывают аллантоисную жидкость, содержащую вирус.
Жидкость помещают в пробирку.
Для обнаружения вируса в исследуемом материале (в нашем опытеаллантоисная жидкость) ставится РГА. Вирус адсорбируется на куриных
эритроцитах и вызывают агглютинацию этих эритроцитов. Для постановки реакции к капле вирус-содержащего материала добавляют одну
каплю 5%- ной взвеси эритроцитов. Реакция происходит в течение 5 мин.
Обнаружение типа вируса в аллантоисной жидкости проводится с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (демонстрация).
Схема РТГА. Эта реакция может быть использована для определения типа вируса, а также для определения типа и титра антител в сыворотке. Для определения типа вируса на предметное стекло наносят по 1
капле материала, содержащего вирус. Затем в каждую каплю вносят по
одной капле типовых сывороток. Контролем служит физиологический
раствор и нормальная (неиммунная) сыворотка. Затем в каждую каплю
вносят по 1 капле 5% взвеси эритроцитов. Результат регистрируют через 5 минут. Если вирус соответствует специфической сыворотке, то он
нейтрализуется антителами этой сыворотки, и агглютинация эритроцитов не наступает, т.е. происходит торможение реакции агглютинации.
2.Культивирование вирусов в культуре ткани
Характеристика культур тканей. Культуры тканей (или культуры
клеток)- это клетки тканей, выращенные вне организма на специальной
питательной среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняют
присущий им обмен веществ и восприимчивость к определенным виру123
сам. Для культивирования вирусов особенно пригодны клетки с быстрым ростом. По этой причине широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбрионов, клетки амниона человека и др., а
также культуры клеток злокачественных опухолей). Для выращивания
культур клеток наибольшее распространение получили синтетические и
полусинтетические среды, которые содержат все необходимые вещества (соли, витамины, аминокислоты и т.д.). Например, среда 199, среда
Игла, раствор альбумина бычьей плазмы, солевой раствор Хенкса с сывороткой.
Однослойные первичные культуры тканей - это взвесь клеток, полученная путем обработки тканей протеолитическими ферментами
(трипсин, папаин и др.). Трипсинизацией достигается разделение клеток за счет переваривания межклеточного вещества. Такие клетки, помещенные в питательную среду, растут в виде монослоя и дают однослойную культуру ткани.
Перевиваемые клетки - это культура клеток, сохраняющая способность к размножению вне организма неопределенно длительное время.
В лабораториях мира имеется много перевиваемых культур, полученных из нормальных тканей человека и животных: 1) штамм клеток
Hela- клетки карциномы шейки матки человека; 2) штамм клеток Нер 2- клетки злокачественной опухоли гортани человека; 3) штаммы клеток Детройт 6- клетки, выделенные из костного мозга человека больного раком легких;
4) штаммы клеток А-О и А-I- клетки амниона человека; 5) штаммы
клеток СОЦ- клетки сердца обезьяны и др.
Техника заражения культур клеток состоит в следующем. Берут
пробирку с заранее выращенной монослойной культурой клеток. Вирус
(например, вирус вакцины) разводят средой 199 в отношении 1:3 и обрабатывают антибиотиками. Из пробирки с культурой клеток стерильной пастеровской пипеткой отсасывают питательную среду. В пробирку вносят 1 мл разведенного средой вируса вакцины, плотно закрывают
помещают в термостат в горизонтальном положении.
3.Обнаружение вирусов в культуре клеток
а) Изучение внутриклеточных включений. Универсальным методом окраски внутриклеточных включений является окраска по Манну.
Внутриклеточные включения при бешенстве (тельца Негри) обнаруживается в нервных клетках аммонова рога и в клетках Пуркинье мозжеч124
ка. При окраске по Манну- тельца Негри красного цвета на голубом
фоне цитоплазмы.
б) Цитопатический эффект (или цитопатическое действие)- это дегенерация клеток, возникающая под воздействием вируса размножающегося в культуре ткани. Микроскопически цитопатическое действие
выражается в различных изменениях морфологии клеток.
в) Гемадсорбция – адсорбция эритроцитов на поверхности поврежденных вирусом клеток.
г) Метод бляшек предложен Дюльбеком для получения изолированных колоний вируса. Метод заключается в следующем. В специальном флаконе выращивают на стенке монослой клеток, затем удаляют
питательную среду. Клетки заражают вирусом и заливают агаром, содержащим индикатор- нейтральный красный. Там, где происходит рост
клеток, среда изменится в кислую сторону и индикатор окрасится в розовый цвет. На тех участках, где клетки погибли под действием вируса,
рН среды и, следовательно, цвет индикатора не изменяется. Такие островки неокрашенной среды имеют вид беловатых бляшек.
д) Метод флюоресцирующих антител.
Основан на появлении специфического свечения в местах локализации вируса при обработке зараженной ткани флюоресцирующими
антителами. Заражаемую культуру ткани выращивают на стеклянных
пластинках. Препараты промывают физ.раствором, подсушивают и
фиксируют ацетоном. Затем обрабатывают специфической сывороткой.
Просмотр препарата производят с помощью люминисцентного микроскопа. В местах локализации вируса появляется специфическое свечение под воздействием флюоресцирующих антител.
е) Обнаружение вируса в культуре ткани методом «цветной пробы».
В основу «цветной реакции» положено то обстоятельство, что в процессе размножения и роста клеток в питательной среде накапливаются
кислые продукты обмена веществ, сдвигающие рН среды в кислую сторону. В ткани, зараженной вирусом, наступает дегенерация клеток, метаболизм их подавляется и не происходит изменения рН среды. Для выявления этих изменений в питательную среду добавляют индикатор феноловый. При рН выше 7 цвет индикатора красный, при рН 7- оранжевый,
рН ниже 7- желтый. Если клетки не заражены вирусом (или он нейтрализован специфической сывороткой) рН питательной среды сдвигается в
кислую сторону, и она становится желтой. Если вирус размножается, то
клетки дегенерируют и среда сохраняет исходный красный цвет.
125
Вопросы для самоконтроля:
1. Кем и когда были открыты вирусы?
2. Чем отличаются вирусы от всех живых организмов?
3. Что такое вирион? Что такое капсид, нуклеокапсид, суперкапсид?
4. Какие признаки вирусов положены в основу современной классификации вирусов?
5. Почему вирусы являются облигатными паразитами?
6. Перечислите основные методы диагностики вирусных заболеваний.
7. Какие методы используются для культивирования вирусов?
8. Что такое культура тканей(или культура клеток)? Какие вы знаете
типы тканевых культур?
9. Какие питательные среды используются для выращивания культур
клеток?
10. Какие существуют методы заражения куриного эмбриона? Какого
возраста эмбрионы используются для заражения?
11. Как обнаруживают наличие вируса в курином эмбрионе? Как ставится реакция торможения гемагглютинации (РТГА)? Для чего она
используется?
12. Как обнаруживают наличие вируса в культуре ткани?
13. Что такое ЦПД вируса?
14. Что собой представляет метод «бляшек»?
15. Какие вы знаете внутриклеточные включения? Какими методами их
окрашивают?
126
Занятие 20
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОСТРЫХ РЕПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. ГРИПП.
Цель: иметь представление о возбудителях ОРВИ. Изучить биологические особенности вируса гриппа и методы лабораторной диагностики.
ОРВИ включают большое количество вирусных болезней с поражением различных отделов дыхательных путей и аэрозольным механизмом передачи. Возбудителями ОРВИ могут быть более 200 различных вирусов.
Возбудители ОРВИ:
1. Вирусы гриппа (Orthomyxoviridae). Вирусы гриппа A, B и С.
2. Парамиксовирусы (Paramyxoviridae) - в это семейство входят различные представители, в том числе вирусы парагриппа человека
(ВПГЧ) 1,2,3,4-го типов, паротита, респираторно-синцитиальный вирус
(RS-вирус), вирус кори (род Morbilivirus).
3. Респираторные коронавирусы (Coronaviridae).
4. Пикорнавирусы (Picornoviridae). Из этого семейства собственно
возбудителями ОРВИ являются риновирусы (род Rhinovirus,более 100
серовариантов), а также некоторые сероварианты вирусов ECHO и Коксаки (род Enterovirus).
5. Респираторные реовирусы (Reoviridae).
6. Респираторные аденовирусы (Adenoviridae).
Все перечисленные семейства относятся к РНК-содержащим вирусам, за исключением аденовирусов, геном которых представлен двунитевой ДНК.
Вирус гриппа относится к семейству ортомиксовирусов. Вирион
имеет фрагментированную одноцепочечную РНК, которая состоит из 8
фрагментов, что обусловливает большую изменчивость вируса. Форма
вириона чаще сферическая, капсид построен из простых белков, покрыт
суперкапсидной оболочкой (см. схему строения вируса гриппа). На поверхности суперкапсидной оболочки имеются гликопротеины, представленные гемагглютинином и нейраминидазой. Гемагглютинин распознает
мукопептидные рецепторы чувствительных клеток и способствуют адсорбции вируса на клетке. Нейраминидаза обеспечивает проникновение
вируса в клетку, расщепляя сиаловые кислоты, входящие в состав мембран клетки. Вирус гриппа имеет внутренние антигены, на основании
которых вирусы гриппа подразделяются на типы А, В и С, а также по127
верхностные антигены, представленные гемагглютинином (Н) и нейраминидазой (N). Эти поверхностные антигены более вариабельны. У вируса гриппа А различают 15 вариантов гемагглютинина и 10 вариантов
нейраминидазы. Вирус гриппа А, поражающий человека имеет гемагглютинины Н1, Н2 , Н3 и нейраминидазу N1, N2.. В зависимости от их
сочетания выделяют три варианта вируса гриппа H1N1,H2N2,H3N2 .
Источником инфекции для человека является больной человек.
Путь заражения - воздушно-капельный. Возможен также контактный
путь за счет попадания возбудителя инфекции в носоглотку через грязные руки, а также предметы бывшие в контакте с больным человеком носовые платки, маски, инструменты и т.д. Природным резервуаром
вируса гриппа А являются птицы, реже животные. Вирус гриппа В
встречается только у людей, С - у людей, а также у свиней, возможно у
собак. Вирусы адсорбируются на эпителиальных клетках дыхательных
путей и с помощью нейраминидазы проникают в клетку, где происходит размножение. Из-за повреждения мембраны эпителиальных клеток
на поверхности слизистой дыхательных путей образуются эрозии. Через эрозированную поверхность вирусы пападают в кровь (вирусемия)
и разносятся по всему организму. Продукты распада клеток и некоторые вирусные белки оказывают токсическое действие на органы и системы организма. Инкубационный период короткий от нескольких часов до 7 суток, в среднем 1-2 суток. Для гриппа характерно острое
начало, высокая температура, общая интоксикация, характеризующаяся
недомоганием, головными болями, болями в глазных яблоках, мышцах.
Рис. 4. Этиологическая структура ОРВИ
128
Микробиологическая диагностика
Материалом для исследования служат смыв из носоглотки, кровь.
Методы исследования:
- вирусологический - из исследуемого материала вирус выделяют
при заражении куриного эмбриона и культур тканей с последующей
индикацией и идентификацией в РГА, РТГА или РСК;
- иммуноиндикация - обнаружение антигена вируса в носоглоточных, бронхиальных смывах с помощью РТГА, ИФА или РИФ, которые
применяются для экспресс-диагностики гриппа;
- серологический - определяют антитела в сыворотке крови больных начиная со второй недели, используют - РТГА, РСК, ИФА с парными сыворотками. С помощью ИФА определяют и титр секреторных
Ig А в носоглоточных смывах.
Самостоятельная работа студентов.
1. Изучить и зарисовать схему микробиологической диагностики ОРВИ.
2. Зарисовать и поставить РГА для индикации вируса.
3. Изучить схему постановки РТГА для идентификации выделенного
вируса. Учесть результаты, дать заключение.
Указания к самостоятельной работе
1. Схема микробиологической диагностики ОРВИ (таблица).
2. Техника постановки РГА (реакции гемагглютинации).
о
+
-
1
1-опыт
к
2
2-контроль
Рис. 5. Реакция гемагглютинации
Реакцию гемагглютинации ставят на стекле (по типу ориентировочной реакции агглютинации), в пластмассовых планшетках с лунками или в пробирках.
При положительной реакции в опытной капле происходит склеивание эритроцитов. В контроле склеивание эритроцитов на происходит. К
капле аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа, прибавляют
каплю 5%-ной взвеси куриных эритроцитов. В контроле вместо аллантоисной жидкости используют физиологический раствор.
129
3.Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
РТГА может быть использована для определения типа вируса и
титра антител (см. рис 6). Для определения типа вируса на предметное
стекло наносят по одной капле вирусосодержащего материала – аллантоисной жидкости (количество капель должно соответствовать количеству сывороток). В приготовленные капли последовательно вносят по
одной капле типовых сывороток – А, А1, А2, В, С. Контролем служит
физиологический раствор и нормальная сыворотка. Затем в каждую
каплю вносят по одной капле 5% - ной взвеси эритроцитов. Результат
регистрируют через 5 минут. При соответствии вируса типу сыворотки
антитела связывают гемагглютинин вируса, и гемагглютинация не
наступает (РТГА положительная).
А
А1
А2
В
С
КС
КА
+
-
+
+
+
+
-
Рис.6.Схема РТГА для определения типа вируса гриппа
Эта реакция может быть поставлена и в пробирках с целью титрования вируса или антител.
130
Таблица№32
Препараты для специфической профилактики гриппа
Наименование
Состав
Показания
1. Живая вакцина интраживой аттенуированный
по эпидпоказаниям
назальная, подкожная
вирус гриппа А
2.Убитая цельно-вирионная
интраназальная, парентеральная
убитый вирус гриппа А
по эпидпоказаниям
3.Химическая вакцина
субвирионная вакцина из
расщепленных вирионов
по эпидпоказаниям
4.Субъединичная вакцина
вакцина, содержащая
только гемагглютинин и
нейраминидазу
ежегодно, однократно по
эпидпоказаниям
«Ваксигрипп»-(Франция)
сплит-вакцина
гриппозная
ежегодно, однократно по
эпидпоказаниям
«Инфлювак»-(Голландия)
субъединичная
ежегодно, однократно по
эпидпоказаниям
«Агриппал»
субъединичная
ежегодно, однократно по
эпидпоказаниям
«Гриппол»
трехвалентная, субъединичная
ежегодно, однократно по
эпидпоказаниям
Противогриппозный донорский иммуноглобулин
готовые антитела
при тяжелых формах
заболевания
Примечание: курсивом выделены более используемые препараты
131
Вопросы для самоконтроля:
1. Дайте характеристику ортомиксовирусов и парамиксовирусов Какие
возбудители вирусных инфекций относятся к этим двум семействам?
2. Опишите антигенную структуру вируса гриппа. Назовите типы вируса гриппа и его антигены?
3. Перечислите методы лабораторной диагностики гриппа.
4. Специфическая профилактика гриппа.
5. Назовите препараты, применяемые для лечения гиппа.
6.Дайте характеристику респираторно-синтициального вируса(RS).
7. Лабораторная диагностика эпидемического паротита.
8. Методы лабораторной диагностики кори.
9. Аденовирусы, общая характеристика.
10. Методы лабораторной диагностики аденовирусных инфекций.
11. Как обнаружить вирус гриппа, и как его идентифицировать в курином эмбрионе?
12. Почему происходит реакция агглютинации эритроцитов в присутствии вируса гриппа? Каков механизм этой реакции? Иммунные ли
это реакции?
13. Механизм реакции торможения (нейтрализации) гемагглютинации?
Для чего она используется?
132
Занятие 21
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЭНТЕРОВИРУСНЫХ
ИНФЕКЦИЙ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПОЛИОМИЕЛИТА.
Цель: иметь представление о биологических особенностях энтеровирусов, их классификация. Изучить методы лабораторной диагностики полиомиелита и других энтеровирусных инфекций.
В семейство пикорнавирусов (pico - мелкие, rna –содержащие РНК)
включены энтеровирусы (вирус полиомиелита, Коксаки, ECHO), вирус
ящура, риновирусы и некоторые неклассифицированные агенты. Всего
более 100 вирусов. Энтеровирусы – группа вирусов, обитающих преимущественно в кишечнике человека, и вызывающих разнообразные по
клиническим признакам болезни.
Для энтеровирусов характерен фекально-оральный механизм заражения. Местом их первичной локализации является кишечник (или носоглотка), они могут проникать в кровь и гематогенно попадать в другие органы.
К энтеровирусам относятся вирусы полиомиелита, вирусы Коксаки
А и В, вирусы ЕСНО, энтеровирусы серотипов 68-71 и вирус гепатита
А (энтеровирус серотип 72).
Полиомиелит (старое название детский паралич или болезнь
Гейне-Медине) - заболевание известное с древнейших времен. Вирус
полиомиелита имеет мельчайшие размеры, РНК-содержащий. Вирион
имеет сферическую форму, капсид состоит из 60 капсомеров, располагающихся по кубическому типу симметрии, в виде икосаэдров, не имеет суперкапсидной оболочки. В его составе нет углеводов и липидов,
поэтому он не чувствителен к эфиру. По антигенным и биологическим
свойствам различают 3 типа вируса полиомиелита - I, II и III типа. Паралитическую форму чаще вызывает серовар I.
Вирус полиомиелита - размножается как в первичных, так и перевиваемых (например, Неlа) культурах клеток, что сопровождается ЦПД
и образованием внутриклеточных включений. Вирус не обладает гемагглютинирующей активностью.
Вирус устойчив к факторам внешней среды, к действию эфира,
70% спирта, к детергентам, формальдегиду, хлору. В канализационных
водах, в фекалиях при 0°С вирус сохраняет инфекционную активность в
течение месяца.
133
Источником инфекции является больной человек, который выделяет
возбудителя в течение всего периода заболевания и даже после выздоровления. Наиболее заразительными являются последние 3-5 дней инкубационного периода и первые 3-5 дней заболевания. Основной механизм
передачи - фекально-оральный. Заражение происходит через пищу, воду,
грязные руки. Мухи играют роль как механический переносчик.
Входными воротами инфекции являются слизистые полости рта.
Еще до появления клинических признаков возбудителя можно обнаружить в носоглотке.
В эти ранние сроки вирус может передаваться при кашле, чихании,
т.е. воздушно-капельным путем. Но этот путь не основной и кратковременный.
Из полости рта, носоглотки вирус попадает в лимфатические узлы,
затем в кровь и гематогенно поражает клетки передних рогов спинного
мозга, т.е. двигательный нейрон, и вызывает параличи. Полиовирус
может поражать и двигательные клетки продолговатого мозга, варолиева моста, мозжечка.
По течению заболевания различают 4 клинические формы полиомиелита: паралитическую (около 1% случаев), непаралитическую (менингеальную), абортивную (кишечную форму с маловыраженной симптоматикой) и инаппарантную (скрытую).
Инкубационный период продолжается в среднем 1-2 недели. Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле. Параличи развиваются внезапно, на 1-6-й день болезни, в первые часы после понижения температуры. Восстановительный период длится 3-6 месяцев.
Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий к соответствующему серотипу, носит гуморальный и клеточный характер.
Важная роль принадлежит местным секреторным IgA кишечника.
Вирусы Коксаки выделены от больных с полиомиелитоподобным
заболеванием в 1948 году в США в местечке Коксаки. Вирусы Коксаки
делятся на подгруппы А и В. Вирусы Коксаки А имеют 1- 24 серовара, а
В 1 - 6 сероваров. Некоторые серовары обладают гемагглютинирующей
активностью, в отличие от вируса полиомиелита.
Клинические формы инфекции, вызванной вирусами Коксаки, разнообразны. Вирусы Коксаки А вызывают заболевания, характеризующиеся лихорадкой, менингеальными явлениями, «герпетической» ангиной, перикардитами. Вирусы Коксаки В в силу своей нейротропности
134
вызывают энцефаломиелиты, менингиты, полиомиелитоподобные заболевания.
Вирусы ЕСНО (enteric cytopathogenic human orphan в дословном переводе: кишечные цитопатогенные человеческие вирусы – сироты)
насчитывают более 30 сероваров этих вирусов, отличающихся по антигенным свойствам. В 1951-53г были выделены из фекалий Дж. Мельником, их роль была неизвестна поэтому назвали вирусами – «сиротами».
Большинство из них обладают гемагглютинирующей активностью,
непатогенны для белых мышей, а в культуре тканей дают выраженное
цитопатическое действие.
Вирусы ЕСНО вызывают кишечные инфекции, ОРВИ у детей, а
также полиомиелитоподобные заболевания с синдромами поражения
ЦНС-асептический менингит, иногда энцефалит. ЕСНО вызывают также гастроэнтериты и диареи у детей.
Микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций.
Лабораторный диагноз полиомиелита может быть поставлен на основании:
1. Вирусологического метода - обнаружение вируса в испражнениях больного или носителя путем заражения первичных культур почек
обезьян, клеток HELA и др.,
2. Иммунноиндикации – обнаружение антигена вируса в носоглоточном смыве с помощью ПЦР, ИФА и РИМ.
3. Серологической диагностики - используется РБН (реакция биологической нейтрализации методом «цветной пробы»), РСК, ИФА, обнаружение противовирусных антител с помощью реакции преципитации.
Самостоятельная работа студентов:
1. Изучить и зарисовать схему микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO и др.).
2. Зарисовать в тетради модель строения вириона полиомиелита, обозначить на рисунке НК, капсид, капсомеры, нуклеокапсид.
3. Изучить результаты идентификации энтеровирусов в реакции
нейтрализации со специфическими иммунными сыворотками. Дать
заключение. Зарисовать в тетради схему РБН (реакция биологической нейтрализации) для идентификации вируса.
4. Оценить результаты титрования вируснейтрализующих антител в
РБН парными сыворотками. Дать заключение.
5. Разобрать схему обнаружения противовирусных антител или антигенов с помощью реакции преципитации.
135
Указания к самостоятельной работе:
1. Схема микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (таблица).
2. Обнаружение вируса в культуре ткани методом «цветной
пробы». В основу «цветной реакции» положено, то обстоятельство, что
в процессе размножения и роста клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты обмена веществ, сдвигающие рН среды, в
кислую сторону. В ткани, зараженной вирусом, наступает дегенерация
клеток, метаболизм их подавляется и не происходит изменения рН среды. Для выявления этих изменений в питательную среду добавляют
индикатор феноловый. При рН выше 7 цвет индикатора красный, при
рН 7- оранжевый, рН ниже 7- желтый. Если клетки не заражены вирусом (или он нейтрализован специфической сывороткой), то рН питательной среды сдвигается в кислую сторону, и она становится желтой.
Если вирус размножается, то клетки дегенерируют и среда сохраняет
исходный красный цвет.
Таблица №33
3. Схема определения титра антител методом цветной пробы
Разведение сыворотки
Контроль
1:4
1:8 1:16 1:32 1:64 Токсичности Роста Роста
сыворотки
клеток вируса
Сыворотка, мл 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
0,25
Вирус, мл
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
0,25
40 минут при комнатной температуре для нейтрализации вируса
Клеточная
суспензия, мл 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
0,25
0,25
0,25
Вазелиновое
По 0,4 во все пробирки
масло, мл
Термостат 370 3-7 дней
Ингредиент
Результат: Пожелтение цвета среды свидетельствует о нейтрализации вируса
антителами сыворотки
4. Обнаружение противовирусных антигенов с помощью реакции преципитации. Реакция преципитации в агаре широко используется для диагностики вирусных заболеваний (полиомиелита, Коксаки и
др.) Реакция может быть поставлена в чашках Петри, на предметных
стеклах и в капиллярах.
Постановка реакций преципитации на предметных стеклах для выявления антигена вируса полиомиелита.
На обычные предметные стекла наносят 2 мл расплавленного и
охлажденного до 60º агара (I % - ый агар на физиологическом растворе с
136
1:20000 мертиолята). Толщина слоя агара на стекле составляет около I
мм. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 3-4мм с
расстоянием между центрами луночек 5-6 мм. Количество луночек и их
расположение на стекле могуть быть различными в зависимости от
условий опыта. Объем используемых ингредиентов 0,02 мл. Реакция
ставится с несколькими контролями. Для определения антигена вируса
вырезают 4 лунки (см. схему) и каждую из них наливают соответственно следующие ингредиенты: специфическая сыворотка, специфический
антиген, нормальная сыворотка, искомый антиген. Если искомый интиген соответствует сыворотке, то между соответствующими луночками
должна появиться линия преципитации. Линия преципитации должна
также появиться между лунками со специфической сывороткой и специфическим антигеном.
Преципитация наблюдается через 4-5 часов инкубации в термостате во влажной камере.
Схема постановки реакции преципитации в агаре для выявления
вирусного антигена (рис. 7).
Ac
Cc
Aи
CH
Сс - сыворотка специфическая; Сн - сыворотка нормальная;
Ас - антиген специфический; Аи - антиген искомый.
Рис.№7. Реакция преципитации для обнаружения противовирусных антигенов
Таблица №34
Препараты для специфической профилактики полиомиелита
Наименование
Вакцина полиомиелитная
пероральная (ОПВ)
(Россия)
Вакцина полиомиелитная
«Имовакс Полио» (Франция)
Состав
Показания
живая вакцина Смородинцева и Чума- по прививочному
кова приготовленная из 1, 2, 3 типов
календарю
аттенуированных штаммов Сэбина
инактивированная вакцина Солка
по прививочному
календарю
Комплексная вакцина «Пен- адсорбированная вакцина для профи- по прививочному
таксим» (Франция)
лактики столбняка, дифтерии (анатоккалендарю
сины), коклюша (химическая вакцина), полиомиелита (инактивированная), инфекции Haemophilis influenzae
тип В (конъюгированная)
Примечание: курсивом выделен более используемый препарат.
137
Вопросы для самоконтроля:
1. Какие вирусы относятся к энтеровирусам? Дайте общую характеристику рода энтеровирусов?
2. Принципы антигенной классификации энтеровирусов.
3. Дайте характеристику вируса полиомиелита. Сколько существует
серотипов полиовируса?
4. Какие вирусологические методы применяют для диагностики полиомиелита и других энтеровирусных заболеваний?
5. Какие серологические методы диагностики могут быть использованы при заболевании полиомиелитом?
6. Можно ли провести серодиагностику полиомиелита, располагая
лишь одной сывороткой, полученной от больного в остром периоде
заболевания?
7. Укажите препараты, применяемые для специфической профилактики полиомиелита.
8. Какие вирусы относятся к пикорновирусам?
9. Перечислите заболевания, вызаемые вирусами Коксаки и ECHO.
10. Методы диагностики вирусной инфекции Коксаки и ECHO.
138
Занятие 22
ТЕМА: МИКРОБИЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ. МИКРОБИЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ- ИНФЕКЦИИ (ВИРУС ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА).
Цель: иметь представление о биологических особенностях возбудителей вирусных гепатитов. Изучить методы микробиологической диагностики вирусных гепатитов. Иметь представление о биологических особенностях возбудителя вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Изучить методы микробиологической диагностики ВИЧ.
Возбудители вирусных гепатитов. Вирусные гепатиты являются
важнейшей проблемой инфекционной патологии. Это системные инфекционные заболевания с преимущественным поражением клеток печени.
В зависимости от основных путей заражения вирусные гепатиты делятся
на энтеральные, к которым относятся вирусы гепатитов А и Е, и парентеральные, к которым относятся вирусы гепатитов B, C, D, G и др.
Вирусный гепатит А - антропонозное острое инфекционное заболевание, вызывается РНК содержащим вирусом гепатита А и характеризуется лихорадкой, поражением печени, интоксикацией.
Вирус гепатита А - обозначается HAV (Hepatis A Virus) и относится
к семейству Picornaviridae, к роду Enterovirus. Открыт Фейнстоном в 1973
году в фекалиях методом ИЭМ. Вирион гепатита А представляет однонитевую + РНК, окруженную белковой оболочкой. Как и другие представители семейства пикорнавирусов, имеет мелкие размеры 27 - 32 нм.
Капсид состоит из 60 капсомеров, суперкапсидной оболочки не имеет.
Вирус гепатита А не размножается в куриных эмбрионах и организме
лабораторных животных. В отличие от других энтеровирусов плохо размножается в культурах тканей. Вирус устойчив к действию температуры
(600 С в течение 12 часов), инактивируется при 1000 в течение 5 минут.
Быстро погибает при действии дезинфицирующих веществ.
Источником инфекции являются больные с явной клинической
картиной и со скрытой инфекцией. Вирус выделяется с фекалиями в
течение последней недели инкубационного периода и в поджелтушном
периоде. Хроническое носительство при гепатите А не установлено.
Механизм передачи фекально - оральный. Пути передачи: через воду,
пищу, предметы обихода. Нередко отмечаются водные вспышки заболевания в связи с фекальным загрязнением открытых водоемов. Распространен повсеместно, чаще в странах с дефицитом воды, с низкой
139
санитарной культурой населения. Наиболее восприимчивы дети от 4 до
15 лет (60% заболевших - это дети до 14 лет). Исход благоприятный
90% полного выздоровления, после перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.
Вирусный гепатит Е антропонозная инфекция с фекально- оральным механизмом передачи и преимущественным поражением печени,
вызывается вирусом гепатита E (HEV). HЕV - РНК содержащий вирус,
выделен в отдельный род Hepevirus. Вирион безоболочечный, сферический, диаметром 27 - 34 нм. Геном – однонитевая плюс - РНК. Источник инфекции- больной человек. Механизм передачи фекальнооральный. Пути передачи - через пищу, воду. Инкубационный период 2
- 6 недель. Заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией, реже желтухой. Прогноз благоприятный. Заболевание тяжело протекает у беременных, летальность у них достигает 20%.
Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий.
Возбудители парентеральных гепатитов. Гепатит В - антропонозная инфекция, вызываемая ДНК содержащим вирусом с преимущественным парентеральным механизмом заражения и поражением печени в виде острого и хронического гепатита с переходом в цирроз или
первичный рак печени.
Возбудитель гепатита В (HВV) относится к семейству
Hepadnaviridae. В 1970 году Дейн впервые обнаружил частицы сферической формы в сыворотке крови больных гепатитом методом электронной микроскопии.
Возбудитель гепатита В - ДНК- содержащий вирус, имеющий суперкапсид сферической формы, диаметром 42 нм. Сердцевина вируса
Нвс, окружена оболочкой, содержащей поверхностный Нвs аг (австралийский аг). Таким образом при вирусном гепатите B обнаруживаются
Нвs, Нвс, Нве, и иногда обнаруживается Нвx аг.
Нвs – аг (австралийский аг) представляет собой гликопротеин с липидным компонентом, который содержится во внешней оболочке вируса.
Нвс – является нуклеопротеином. Содержится в сердцевине вирионов, находится в ядрах гематоцитов, но не постоянно в крови.
Нве – аг – отщепляетя от Нвс аг при прохождении через мембрану
гепацитов, вследствие чего обнаруживается в крови.
Вирусы чувствительны к эфиру, детергентам. Необычным свойством вируса является устойчивость к высокой температуре. Они вы140
держивают нагревание до 100о с 1 – 2 мин., устойчивость повышается
при нахождении в сыворотке крови.
Источником инфекции являются больные с острой и хронической
формами гепатита, а также вирусоносители. Основной путь заражения парентеральный. Механизм передачи - при переливании крови, ее препаратов, массовые прививки, хирургические вмешательства, зубоврачебные манипуляции и пр). Заражение возможно при близком бытовом
контакте, половым путем. Возможна передача вируса от матери плоду
трансплацентарно, а также после родов через молоко, слюну и т.д. , т.е.
почти все биологические жидкости больных гепатитом В содержат вирус. Вирус проникает в кровь парентерально, с кровью переносится в
печень и размножается в гепатоцитах.
Вирус гепатита D. был открыт в 1977 году Ризетто. Вирус гепатита D неклассифицирован.
Было установлено, что ВГD является сателлитом вируса гепатита
В, дефектным вирусом. Дефектом его является отсутствие собственной
оболочки, поэтому для проявления патогенного действия он должен
использовать оболочку вируса гепатита В. Вирион имеет сферическую
форму, диаметр-36 нм, однонитчатую РНК, сердцевинный дельта антиген (НДс-антиген).
Резервуаром вируса гепатита D являются носители ВГВ. Передается парентерально, также как и вирус В, но распространен реже. Вирус
гепатита D может вызвать поражение печени лишь у людей, уже инфицированных вирусом гепатита В (супер-инфекция). Инфицирование
вирусом гепатита больных с хроническим гепатитом В вызывает тяжелые формы заболевания с развитием печеночной недостаточности и
цирроза печени. Одновременное заражение вирусом гепатита В и ГD
(коинфекция) обычно приводит к развитию умеренной формы болезни.
Диагностика заключается в выявлении антител к ВГD с помощью
иммуноферментного метода. Разработана также полимеразная цепная
реакция (ПЦР). Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.
Гепатит С. (иначе его называли гепатит ни А ни В). Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae род Нерасivirus. Это РНКсодержащий вирус диаметром - 55 - 60 нм. вирион сферической формы. Вирус имеет сложную структуру. Имеет поверхностные гликопротеидные
антигены, сердцевинный антиген (НСс-антиген). Источником инфекции
являются больные и носители гепатита С.Пути передачи такие же, как
141
для вируса ГВ. Наиболее часто заболевают лица после повторных переливаний крови.
Антитела к вирусу гепатита С обнаружены у 0,5 - 1% доноров. Заболевание протекает легче, чем вызванное вирусом ГВ, лишь в четверти случаев сопровождается желтухой.
Гепатит G. Вирус гепатита G предположительно относится к семейству к Feaviviridae к роду Hepacivirus. известно 5 генотипов вируса –
GB-A, GB-B, GB-C и др.
Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов.
Гепатит А Для лабораторной диагностики гепатита А применяются методы: ИЭМ (иммунной электронной микроскопии). Принцип метода ИЭМ основан на формировании комплексов антиген- антитело
(при смешивании исследуемого антигена и заведомо известный специфической антисыворотки или заведомо известного антигена и исследуемой сыворотки). Образующиеся специфические комплексы выявляются в электронно- микроскопических препаратах.
Основной метод диагностики серологический. Серологическая
диагностика основана на использовании РИМ и ИФА обнаружении Ig
M. Выявление в сыворотке больного анти- HAV Ig M дает основание
установить диагноз гепатита А, т.к. антитела этого класса появляются
еще в инкубационном периоде и сохраняются на протяжении 1,5- 6
мес. Ig G, обнаруживаемые в периоде реконвалесценции имеет анамнестическое значение.
Гепатит E
- серологический метод, с помощью ИФА в сыворотке крови определяют анти- HЕV антитела- Ig M и Ig G.
- молекулярно- генетический метод, который заключается в определении РНК вируса с помощью ПЦР в кале и сыворотке крови больных в острой фазе инфекции.
Гепатит B Диагностика основана на обнаружении специфических
антигенов и антител с использованием ИФА (РИМ, РНГА): Нвs – аг,
анти Нвs, Нве – аг, анти Нве, Нвс– аг, анти Нвс.
Определяющим является обнаружение Нвs – аг, который выявляется в сыворотке больных через 3-5 недель от момента инфицирования и
сохраняется в течение всей болезни.
Наибольшее количество Нвs – аг в разгар заболевания продолжает
оставаться на высоком уровне 2-3 месяца, исчезает через 6-8 месяцев.
142
Обнаружение Нвs – аг через год свидетельствует о развитии хронического гепатита или бессимптомного носительства. Показателем острой
инфекции является одновременное обнаружение Нвs – аг и Нве – аг.
Присутствие в крови анти- Нвс – аг класса Ig M достоверно свидетельствует об остром гепатите В.
Гепатиты C,D. Диагностируют серологическим методом в парных
сыворотках путем постановки ИФА, и путем обнаружения вируса в
крови с помощью ПЦР.
Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к семейству ретровирусов. Имеется два типа ВИЧ- ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вызывающие ВИЧинфекцию. ВИЧ-1 является основным возбудителем и вызывает до 90%
ВИЧ-инфекции. ВИЧ-2 выделяют, в основном, в Западной Африке.
Впервые ВИЧ-инфекция в своей финальной стадии описана в 1981
году в Калифорнии (США). Возбудитель был обнаружен французскими
учеными под руководством Л. Монтанье в 1983 году, а затем независимо от него американскими исследователями под руководством Р. Галлов 1984 году.
ВИЧ представляет собой сложный вирус сферической формы 100120 нм в диаметре. Характерной особенностью вируса является наличие
фермента обратной транскриптазы. В наружной двухслойной липидной
оболочке имеются гликопротеиновые шипы, каждый из которых состоит из двух субъединиц – gp 41 и gp 120. Из них gp 120 находится на поверхности суперкапсида, а gp 41 погружен в оболочку. Под суперкапсидом находится сердцевина вируса, которая имеет форму усеченного
конуса, в состав которого входят белки р 24 и р25. Промежуток между
суперкапсидом и сердцевиной вируса заполнен матриксным белком,
состоящим из р 17 и р18.
Геном вируса - это две однонитчатые молекулы РНК со знаком +.
Кроме генома в сердцевине находятся ферменты - обратная транскриптаза (ревертаза), интеграза и протеазы. Геном вируса имеет 9 генов, из
которых 3 кодируют синтез белков вирусных частиц, а 6- являются регуляторными генами, обеспечивающими осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном процессе.
Антигенными свойствами обладают белки сердцевины и оболочечные гликопротеины. Они характеризуются высокой изменчивостью, что
объясняется высокой скоростью замен нуклеотидов.
ВИЧ характеризуется невысокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Температура выше 56 С быстро и полно143
стью инактивирует вирус. При комнатной температуре в жидкой и сухой
среде сохраняется до недели. ВИЧ устойчив к высушиванию, в высохшей
крови сохраняется до 7 суток. Мало чувствителен к действию УФ излучения. Вирус погибает быстро (в течение нескольких секунд) под действием 70% спирта, О,5% раствора формальдегида, 3% раствора перекиси водорода, О,5% раствора лизола, О, 2 % раствора гипохлорита натрия.
Источником инфекции является инфицированный человек. Факторами передачи являются кровь, сперма, влагалищные и цервикальные
выделения, грудное молоко. Слюна, моча, слезная жидкость также содержат ВИЧ, однако, количество вирусов недостаточно для заражения.
Пути заражения: половой, парентеральный (через нестерильные
инструменты, шприцы, при переливании инфицированной крови, кровезаменителей) и вертикальный - от зараженной матери к плоду. В мире
85-90 % случаев заболевания возникает при половых контактах, причем
в 70% при гетеросексуальных контактах. Передача вируса от зараженной матери трансплацентарно, во время родов, при кормлении грудью
происходит в 25-30 % случаев.
Вирус иммунодефицита не проникает через неповрежденные кожные покровы. Нет опасности заразиться, купаясь в бане или бассейне.
Заражение не происходит бытовым путем, вирус не передается при рукопожатии, соприкосновениях, при кашле, чихании, через продукты
питания. Нет риска заразиться при пользовании общей посудой, ванной, общественным туалетом. Не доказана возможность передачи вируса через комаров.
К вирусу иммунодефицита человека восприимчивы как женщины,
так и мужчины независимо от возраста. Наиболее высокие показатели
зараженности приходятся на возрастную группу от 20 до 39 лет.
Вирус обладает иммунотропностью. Взаимодействие вируса с клеткой организма начинается со связывания gp 120 ВИЧ с рецептором CD4.
ВИЧ избирательно поражает клетки, имеющие рецептор CD4 – Т хелперы, моноциты, макрофаги, клетки микроглии, т.е. иммунокомпетентные клетки. После проникновения вируса внутрь клетки и депротеинизации на +РНК вируса с помощью фермента обратной траскриптазы достраивается комплементарная нить ДНК. Затем под действием другого
фермента рибонуклеазы у этой гибридной молекулы происходит расщепление исходной РНК. На оставшейся нити ДНК обратная транскриптаза синтезирует вторую цепь ДНК, используя первую как матрицу. Генетическая информация вируса уже в форме двухцепочечной ДНК про144
никает в клеточное ядро и с помощью фермента интегразы происходит «
встраивание» (интеграция) геном а вируса в геном клетки. Эта вирусная
ДНК, интегрированная в геном клетки называется «провирус».
В таком состоянии вирус сохраняется годами в клетке, передаваясь
при делении клетки их следующим поколениям. При этом у зараженных пациентов на протяжении 10-15 лет могут отсутствовать симптомы
заболевания. Это интегративная, перманентная форма инфекции.
В случае продуктивной инфекции в клетках под влиянием ферментов происходит синтез вирусных частиц и белковой оболочки, затем их
сборка. При активной репродукции ВИЧ происходят множественные
повреждения мембраны и клетка-хозяин погибает.
ВИЧ-инфекция протекает в несколько стадий. Инкубационный период, составляющий от одной недели до трех месяцев, в среднем 2-4
недели. Стадия первичных проявлений - клинически эта стадия напоминает любую острую инфекцию. Длится эта стадия 2- недели и завершается бессимптомной инфекцией. Латентный период связан с тем, что
вирус замедляет свою репликацию и переходит в состояние персистенции. Эта стадия может длиться 5-10 лет и более. Стадия вторичных заболеваний протекает с поражением дыхательной, нервной системы, желудочно-кишечного тракта. Терминальная стадия характеризуется кахексией, упорной диареей, адинамией, анемией, деменцией, снижением
всех иммунных показателей с летальным исходом.
Микробиологическая диагностика:
1. Вирусологический метод применяется редко т.к. вирус размножается только в культуре Т-лимфоцитов на сложных средах с добавлением иммуномодулятора – интерлейкина-2.
2. В практическом здравоохранении чаще применяются серологические методы. ИФА – основной скрининговый метод, который
позволяет выявить вирусные антигены и антитела. ВИЧ антитела
появляются через 2-4 недели, у некоторых и позже.
3. Как подтверждающий диагноз тест используют иммуноблоттинг.
4. Для диагностики ВИЧ инфекции применяют и ПЦР, способную
выявлять вирусный генный материал в инкубационном и раннем
клиническом периоде, однако ее чувствительность ниже, чем ИФА.
145
Самостоятельная работа
1. Схематически изобразить классификацию энтеральных и парентеральных гепатитов.
2. Зарисовать в тетради схему вириона гепатита В.
3. Разобрать структуру и химический состав ВИЧ. Зарисовать в тетрадь.
4. Изучить схему микробиологичекой диагностики ВИЧ- инфекции.
5. Разобрать методы постановки ИФА, и иммуноблоттинга.
Рис. 8. Схема строения вириона ВИЧ
Указания к самостоятельной работе
1. Для определения ВИЧ антител разработано множество тестсистем, которые позволяют выявить до 99,9% всех положительных
проб. Поставить диагноз на основании только одного ИФА нельзя т.к.
хотя и тест специфичный и высокочувствительный, но возможны как
ложноположительные так и ложноотрицательные результаты. В зависимости от используемых тест-систем средняя частота ложноотрицательных результатов 1:1000, а ложноположительных – 1:10000. Для
подтверждения диагноза необходимо использовать иммуноблот (Вестернблот), который заключается в разделении белков ВИЧ с помощью
иммуноэлектрофореза с последующим определением антител к белкам
gp 41, gp 120, p 24.
146
2. ИФА иммуноферментный метод, выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментомметкой (пероксидазой или щелочной фосфатазой). После соединения
антигена с меченной ферментом иммунной сыворотко в смесь добавляют субстрат/ хромоген. Субстрат расщепляется ферментом, и изменяется цвет прдукта реакция- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Твердофазный ИФА – наиболее распространенный вариант иммунологического теста, когда один из компонентов иммунной реакции
(антиген или антиела) сорбирован на твердом носителе, например в
лунках планшеток из полистерола. При определении антител в лунки
планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют
сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную
ферментом, и субстратом, и субстрат (хромоген) для фермента. Каждый
раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положительном результате изменяется цвет раствора хромогена. Твердофазный
носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый
антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную
ферментом, а затем субстрата для фермента.
3. Метод иммуноблоттинга (ИБ)- высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.
Антиген выделяют с помощью электрофореза с полиакриламидном
геле, затем переносят его (блоттинг - от англ. blot. пятно) из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с
помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоска с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку
против иммуноглобулинов человека, меченую ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс антиген+ антитело больного+ антитело
против Ig человека выявляют довалением субстрата хромогена, изменяющего окраску под действием фермента. ИБ используют как дагностический метод при ВИЧ – инфекции и др.
147
Таблица №35
Препараты для специфической профилактики гепатитов
Наименование
1.Вакцина гепатита А «ГепА-ин-вак» (Россия)
Состав
инактивированная, культуральная вакцина
Показания
по эпидпоказаниям
Вакцина гепатита А «Аваксим» (Франция)
инактивированная, культуральная вакцина
по эпидпоказаниям
Вакцина гепатита А «HAYRIX» (Англия)
инактивированная, культуральная вакцина
по эпидпоказаниям
2.Вакцина гепатита В
«Комбиотех»
(Россия)
генно-инженерная рекомбинантная дрожжевая вакцина
по прививочному
календарю детям и
подросткам
Вакцина гепатита В «Регевак» (Россия)
генно-инженерная рекомбинантная дрожжевая вакцина
по прививочному
календарю детям и
подросткам
Вакцина гепатита В «Энджерикс В» (Россия)
генно-инженерная рекомбинантная дрожжевая вакцина
по прививочному
календарю детям и
подросткам
Вакцина гепатита В
«Эувакс В» (Франция, Южная Корея)
генно-инженерная рекомбинантная дрожжевая вакцина
по прививочному
календарю детям и
подросткам
Вопросы для самоконтроля.
Дайте характеристику вируса гепатита A.
Методы микробилогической диагностики вирусных гепатитов A и E.
Дайте характеристику вирусов гепатита B,C и D.
Методы микробилогической диагностики вирусных гепатитов B и C.
К какому семейству и подсемейству относится ВИЧ?
Какие клетки организма являются «мишенью» для ВИЧ?
Что такое иммунорегуляторный индекс (ИРИ) и чему он равняется у
больных ВИЧ-инфекцией?
8. Механизм действия фермента обратной траскриптазы или ревертазы.
9. В каких случаях употребляют термины ВИЧ, СПИД?
10. Основные пути передачи ВИЧ.
11. Контингенты риска при ВИЧ - инфекции.
12. Перечислить первичный комплекс симптомов, позволяющих заподозрить заболевание.
13. Почему до сих пор не решен вопрос изготовления вакцины при
ВИЧ-инфекции?
14. Разработана ли специфическая прфилактика ВИЧ- инфекции?
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
148
Занятие 23
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕРПЕСВИРУСНЫХ
ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА. ОНКОГЕННЫЕ ВИРУСЫ.
Цель: 1. Изучить методы диагностики герпес-вирусных инфекций человека. 2. Ознакомиться с онкогенными вирусами.
Герпесвирусы представлены, морфологически на отличимых друг
от друга, группой крупных ДНК-содержащих вирусов, патогенных для
человека.
Вирион герпесвирусов имеет сферическую форму (рис. Схема вириона герпеса). Геном представлен двунитевой ДНК и состоит из 80 генов,
которые кодируют вирусные белки. Капсид состоит из 162 капсомеров,
расположенных по кубическому типу симметрии, окружен суперкапсидом, содержащим липиды, что делает вирусы чувствительными к эфиру.
Антигенными свойствами обладают гликопротеиды суперкапсида и белки нуклеокапсида. Первые обладают свойствами вариантспецифического, вторые – группоспецифического антигенов. Семейство герпесвирусов (Herpesviridae) включает 8 типов ДНК-содержащих вирусов, которые вызывают различные заболевания человека.
Эти вирусы объединены в 3 подсемейства:
1) подсемейство альфа-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-1,;
ГВЧ-2; ГВЧ-3;
2) подсемейство бета-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-5;
ГВЧ-6; ГВЧ-7;
3) подсемейство гамма-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-4;
ГВЧ-8.
149
Таблица №36
Герпесвирусы человека
Герпесвирусы человека Обозначения
Основные заболевания
Вирус простого герпеса
ГВЧ-1
Герпес кожи слизистых,
1 типа
офтальмогерпес, генитальный
герпес, герпетические энцефалиты.
Вирус простого герпеса
ГВЧ-2
Генитальный герпес,
2 типа
неонатальный герпес
Вирус ветряной оспы опоГВЧ-3
Ветряная оспа, опоясывающий герпес.
ясывающего герпеса
Вирус Эпштейн-Барр
ГВЧ-4
Инфекционный мононуклеоз, назофарингеальная карцинома, Лимфома
Беркитта, волосатая лейкоплакия.
Цитомегаловирус
ГВЧ-5
Цитомегалия. Врожденные поражения
ЦНС. Ретинопатия. Рак предстательной
железы.
Вирусы герпеса
ГВЧ-6;
Лимфотропные вирусы, внезапная
6-го и 7 типов
ГВЧ-7
экзантема (до 2-х лет); синдром
хронической усталости.
Вирус герпеса человека
ГВЧ-8
Саркома Капоши
8 типа
ГВЧ-1
Альфа-герпесвирусы. Подсемейство альфа-герпесвирусов включает
вирусы простого герпеса 1 и 2-го типов, а также вирус ветряной оспы
(вирус герпес зостер).
Вирусы простого герпеса первого типа (ВПГ-1) вызывают стоматиты, кератоконъюктивиты, поражение глаз, ЦНС. После первичной
острой инфекции в виде стоматитов, чаще у детей, возможно длительная персистенция вируса в организме. При снижении защитных сил организма отмечается обострение инфекции в виде носогубного герпеса
(herpes labialis).
Вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ) вызывает генитальный герпес и герпес новорожденных, инфицирование которых происходит черед родовые пути.
Не исключена возможность онкогенного действия ВПГ-2.
Источником инфекции является больной и вирусоноситель. Пути
передачи: контактный через предметы обихода, половой путь, а также
вертикальный путь передачи от матери к плоду.
Вирус широко распространен. У 80-90% взрослых людей обнаруживаются антитела к ВПГ.
150
Инкубационный период от 2-х до 12 дней. Заболевание начинается
с появления на пораженных участках зуда, пузырьков, наполненных
жидкостью. При ВПГ-1 пузырьки появляются преимущественно на коже, слизистых рта, глотки, глаз, ЦНС, а при ВПГ-2 типа пузырьки локализуются в области гениталий. В месте появления пузырьков больные
чувствуют сильную, жгучую боль.
Вирус Herpes zoster вызывает у детей острую воздушно-капельную
инфекцию – ветряную оспу. Ветряной оспой обычно болеют дети от 2-х
месяцев до 10 лет. Болезнь характеризуется лихорадкой, появлением
папуловезикулярной сыпи на коже туловища, лица, шеи, конечностей,
иногда половых органов и полости рта. Заболевание очень заразно, но у
большинства протекает доброкачественное. Тяжело протекает у детей
до 1 года – возможны осложнения в виде пневмоний, отитов, пиодермий, энцефалитов. В организме беременных женщин, особенно в ранние сроки, обладает тератогенным действием на плод.
Вирус Herpes zoster у взрослых вызывает опоясывающий герпес –
заболевание характеризующееся образованием везикулезной сыпи по
ходу нервов. Опоясывающий герпес обычно встречается у людей перенесших ветряную оспу в детстве.
Бета – герпесвирусы. К группе бета-герпес вирусов относятся цитомегаловирусы (ГВЧ-5), а также ГВЧ-6 и ГВЧ-7.
Цитомегаловирус (ЦМВ) размножаясь в культуре фибробластов и
диплоидных клеток легких эмбриона человека вызывает образование
гигантских клеток с внутриядерными включениями, что и дало название вирусам.
В зараженных клетках организма, особенно в клетках слюнных желез и почек обнаруживают внутриядерные включения. Вызываемая
ЦМВ инфекция имеет латентное течение, часто развивается иммунодефицитное состояние, т.к. вирусы обладают лимфопролиферативным и
иммунодепрессивным действием.
Источник инфекции – больной или вирусоноситель.
Инфицирование может быть при половых контактах, переливании
крови, пересадке органов. Возможен вертикальный путь передачи – от
матери к плоду.
Около 1% новорожденных инфицируется трансплацентарно. У новорожденных – гепатоспленомегалия, желтуха, поражение ЦНС.
К бета-герпесвирусам относятся также ГВЧ-6 и ГВЧ-7.
151
ГВЧ-6 был выделен Р.Галло с сотрудниками из лимфоцитов крови
ГВЧ-6 может постоянно инфицировать слюнные железы и выделять из
них. ГВЧ-6 вызывает внезапную экзантему младенцев от 6 мес до 3 лет
с внезапным подъемом температуры до 400С и с таким же спадом на
фоне сыпи через 3 дня.
Считают также, что ГВЧ-6 является причиной синдрома хронической усталости с субфебрильной температурой, потливостью, артралгией, слабостью.
Гамма – герпесвирусы. К этой группе относятся ВГЧ-4 и ВГЧ-8. Для
этих вирусов характерна способность размножаться в В-лимфоцитах.
Морфологически эти вирусы не отличаются от ВПГ, но отличаются
антигенным строением и рядом биологических свойств.
ГВЧ-4 – вирус Эпштейн-Барр был выделен из биопсийного материала взятого у африканца с лимфомой Беркитта в 1964 году канадскими
учеными М.Эпштейн и У.Барр.
Вирус Эпштейн-Барр вызывает:
- инфекционный мононуклеоз, характеридующийся высокой лихорадкой, недомоганием, фарингитом, лимфаденопатией.
- «волосатую» оральную лейкоплакию – поражение слизистой при
СПИДе.
- лимфопролиферативные болезни. Вирус является митогеном для
В-лимфоцитов, способствует развитию опухолей – лимфомы Беркитта,
назофарингеальной карциномы.
- ГВЧ-8 был выделен из ткани саркомы Капоши у больных СПИдом – герпес-вирус, ассоциированный с саркомой Капоши.
Микробиологическая диагностика герпесвирусных инфекций
Материалом для исследования при ВПГ-1 и ВПГ-2 служат содержимое везикул, кровь, а при ЦМВ – инфекции также слюна, моча, ликвор.
Методы диагностики герпесвирусных инфекций делятся на прямые
и непрямые.
К прямым методам относятся:
1) цитологические исследования с обнаружением гигантских многоядерных клеток с внутриядерными включениями;
2) вирусологические исследования путем заражения культур клеток
с последующей индикацией;
3) методы иммуноиндикации с обнаружением антигена методом
прямой РИФ, ИФА
4) методы генной диагностики, в частности ПЦР.
152
К непрямым относятся серологические методы диагностики, которые заключаются в обнаружении нарастания титров антител в РСК, РН,
РНИФ, ИФМ. Четырехкратное нарастание титров антител отмечается
при первичном заболевании, а при рецидивах инфекции оно отмечается
не более в 5% случаев.
Для ранней диагностики ЦМВ инфекции у новорожденных значение имеет обнаружение специфических антител – IgM в диагностических титрах.
Диагностическая ценность лабораторных методов герпесвирусных
инфекций отражена в таблице.
Таблица №37
Лабораторная диагностика герпетической инфекции
№
пп
1
2
3
4
Название
метода (теста)
Преимущества
Цитологическое
исследование
(окрашенные
препараты)
Простота,
невысокая стоимость
Недостатки
Примечание
Низкая чувствиМетод субъективен,
тельность, сложность
требует высокой
диф. диаг-ностики с
квалификации.
другими вирусными
инфекциями.
Культуральные ВысокочувствиДлителен (до 5-7
Применяют, главным
исследования
тельный и специдней), необходимо
образом, в научных
фический..
дополнительно изуцелях.
чать цитопатичес-кое
действие ВПГ и
идентифици-ровать
ВПГ-1 и ВПГ-2.
Прямая иммуВысокая специНедостаточно
нофлюоресфичность, невысо- высокая чувствительценция.
кая стоимость.
ность и пропускная
способность.
ВысокочувствиПЦР-анализ
Дорогостоящ,
Необходимо контротельный и специфисложен
лировать развитие
чески. Возможности
перекрестной контатипирования вируса:
минации.
ВПГ-1 и ВПГ-2.
5
Иммуноферментный анализ
(ИФА) – для
обнаружения
антигена,
антител.
Высокие
специфичность и
скорость
постановки, невысокая стоимость.
Недостаточно
Необходимость соповысокая чувствиставления результательность, отсуттов с клиническими
ствие возможности проявлениями герпетипирования вируса. тической инфекции.
Примечание. Чувствительность прямых методов детекции зависит от стадии заболевания, локализации и времени сбора образца: везикула – 90%, пустула – 80-90%, язвы (≤ 5
дней) – до 75%, язвы (<5 дней) – около 50%, корки – 20-30%, а также от длительности
доставки материала и условий его хранения.
153
Самостоятельная работа
1. Изучить методы диагностики герпетической инфекции (табл. 37).
2. Зарисовать в тетради вирион герпесвируса.
3. Изучить под микроскопом препарат, приготовленный из материала
больного с подозрением на герпетическую инфекцию методом прямой РИФ (Демонстрация).
4. Оценить результаты ИФА для диагностики герпетической инфекции
по демонстрационному материалу.
5. Ознакомиться с препаратами для диагностики, лечения и профилактики герпесвирусных инфекций.
Указания к самостоятельной работе
1. Прямой метод иммунофлюоресценции обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью (соответственно 80 и 90%).
Материал берут из содержимого везикул, а также из уретры, цервикального канала, шейки матки, прямой кишки и т.д.
Материал наносят на чистое обезжиренное стекло, фиксируют ацетоном (или метанолом), препарат обрабатывают флюоресцентномечеными антителами и микроскопируют под люминисцентным микроскопом.
При учете результатов обращают внимание на характер и количество
антигенсодержащих клеток, локализацию специфического ярко зеленого
свечения и его интенсивность. Для вируса герпеса свойственно многообразие в характере свечения: от очагов в виде «глыбок» в ядрах и свечения
околоядерного участка цитоплазмы до диффузного свечения всей клетки.
Возможно обнаружение многоядерных гигантских клеток.
Результат считается положительным при наличии не менее 3 морфологически неизменных клеток эпителия с интенсивным яркозеленым специфическим свечением типичной локализации.
Иммуноферментный метод. Для серологической диагностики герпес вирусной инфекции, обусловленной ВПГ-1 и ВПГ-2 применяются
разнообразные варианты ИФМ.
Для определения антител к вирусам простого герпеса в практических лабораториях наиболее широко применяется метод твердофазного
иммуноферментного анализа.
У обследуемого берут 3-5 мл крови в сухую стерильную пробирку.
Для постановки реакции испытуемые и контрольные сыворотки
вносят в лунки планшета с сорбированным герпетическим антигеном и
инкубируют в течение 30 минут при 370С для связывания антигена и
154
антител. Затем планшету отмывают от несвязавшихся антител ФСБ с
твином пятикратно.
2. В лунки вносит антисывооротки, к иммуноглобулиам человека
меченую ферментом и инкубируют в течение 30 минут при 370С.
3. Затем следует пятикратное отмывание от непрореагировавших
антител.
4. В лунки вносят субстрат для фермента.
При наличии антител к вирусам герпеса наступает изменение цвета. Интенсивность окраски раствора соответствует количеству фермента в смеси, следовательно, количеству образовавшихся комплексов антиген-антитело, число которых определяется содержанием противогерпетических антител в сыворотке крови больного.
Учет результатов проводят с помощью спектрофотометра, измеряя
оптическую плотность на длине волны 450 нм. Результаты исследеования оценивают при соответствующих значениях ОП контролей.
Таблица №38
Препараты для диагностики, специфической терапии и
диагностики герпесвирусных инфекций
Препарат
Назначение
1. Вакцина герпетическая куль- Препарат применяется для лечения больтуральная живая сухая.
ных герпетической инфекции. Курс лечения состоит из 1-2 циклов с интервалом
7-10 дней. Цикл состоит из 5 инъекций с
интервалом 3-4 дня.
2. Вакцина против ветряной оспы Применяется для профилактики ветряной
«Варилрикс» живая аттенуирооспы детям от 12 мес до 13 лет однократванная (Бельгия).
но, старше 13 лет двукратно с интервалом
6-10 недель.
3. Вакцина для профилактики
Для создания иммунитета против ветряветряной оспы «Окавакс»
ной оспы однократно для всех лиц.
Япония.
155
Вопросы для самоконтроля
 Какое строение имеет вирион простого герпеса.
 Какие разновидности вируса простого герпеса Вы знаете, их роль в
патологии человека.
 ЦМВ, его роль в патологии человека.
 Методы диагностики герпесвирусных инфекций?
 Какие заболевания у человека вызывает вирус Эпштейн-Барр?
 ВГЧ 6,7 и 8, их роль в патологии человека?
 Онкогенные вирусы. Вирусно-генетическая теория возникновения
злокачественных опухолей.
 Какие Вы знаете онкогенные вирусы?
 Препараты для специфической терапии и профилактики герпетических инфекций.
Занятие 24
Итоговое занятие по медицинской вирусологии.
Цель: Контроль знаний студентов, по разработанным на кафедре
тестовым заданиям 1,2 и 3 уровней.
Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи к разделу приведены в приложении.
156
Приложение
Тестовые задания, и типовые ситуационные задачи
по частной микробиологии
I. Тестовые задания и ситуационные задачи по разделу «Микробиологическая диагностика кишечных инфекций».
1. В клинику поступил грудной ребенок с явлениями диспепсии.
Предполагаемый диагноз – колиэнтерит. Какой материал надо взять для
исследования и как провести микробиологическую диагностику?
2. При посеве испражнений ребенка на среду Эндо получены красные колонии с металлическим блеском. С 10 колониями поставили ориентировочную реакцию агглютинации с поливалентной О-сывороткой.
Реакция оказалась отрицательной со всеми десятью колониями. Какое
Вы дадите заключение по проведенному бактериологическому исследованию?
3. При изучении биохимических свойств культуры, выделенной из
испражнений ребенка, получен следующий результат: глюкоза, лактоза,
мальтоза и маннит ферментированы до кислоты и газа, сахароза не
ферментирована. На МПБ выделены сероводород и индол. Для какого
микроба из кишечной группы это характерно?
4. В клинику поступил больной с высокой температурой. Реакция
Видаля положительна в титре 1:100. Ваше заключение.
5. У больного, поступившего в инфекционную клинику с подозрением на брюшной тиф, реакция Видаля положительна в разведении сыворотки 1:800 с О-диагностикумом и 1:400 с Н-диагностикумом. Подтверждают ли результаты реакции предполагаемый диагноз?
6. В клинику поступил больной с пищевым отравлением. Как выделить возбудителя? Что служит материалом для исследования? На какие
питательные среды надо посеять материал?
7. Из рвотных масс больного выделены сальмонеллы. Как Вы будете их идентифицировать? Какие сальмонеллы чаще всего вызывают
отравление?
8. При посеве пищевого продукта (соскоба из поверхности и кусочка из глубины массы) на косой мясо-пептонный агар в конденсационную воду получен ползучий рост по поверхности агара в виде голубого
нежного налета. При микроскопии обнаружены подвижные грамотрицательные палочки. Дайте предварительное заключение – какой микроб
присутствует в пищевом продукте, вызвавшем отравление.
157
9. У больного пищевое отравление. Бактериологически диагноз
сальмонеллеза не подтвердился. Есть ли возможность ретроспективно
подтвердить диагноз сальмонеллеза?
10. В клинику поступил ребенок с подозрением на бактериальную
дизентерию. Необходимо выделить возбудителя. Как следует взять материал для исследования, учитывая неустойчивость дизентерийных
бактерий во внешней среде.
11. При посеве испражнений на среде Плоскирева выросли единичные красные и бесцветные S-формы колонии в значительном количестве. Какие бактерии дали красные колонии? Какие из этих колоний
характерны для шигелл? Как дальше проводится бактериологическое
исследование выросшей культуры?
12. Поставили реакцию агглютинации выделенной культуры шигелл со специфическими агглютинирующими сыворотками групп А, В,
С, D. Положительная реакция агглютинации получена с сывороткой
группы D. Дайте заключение.
13. а) В инфекционную клинику г. Махачкалы доставлен больной, у
которого отмечаются сильная рвота, понос в виде «рисового отвара»,
понижение температуры тела. Какое заболевание можно предположить
у больного и какой материал надо взять на исследование?
б) В мазках из исследуемого материала отмечаются грамотрицательные вибрионы, расположенные в виде «стаек рыб». Соответствует
ли результат микроскопии Вашему предварительному диагнозу?
в) Каким образом следует продолжить лабораторные исследования
для окончательного диагноза?
14. При посеве исследуемого материала на щелочной МПА выросли прозрачные S- формы колонии с голубоватым оттенком выпуклые
дисковидные с розовыми краями, а на щелочном бульоне 1% щелочной
пептонной воде- нежная поверхностная пленка с голубоватым оттенком. Для какого микроба характерны эти культуральные свойства?
15. Из исследуемого материала выделена культура, подозрительная
на холерный вибрион. По каким признакам проводится дифференциация холерного и холероподобного вибрионов?
16. Выделен холерный вибрион. По каким свойствам можно отличить классический холерный вибрион от вибриона Эль- Тор?
158
1. ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОГО ТИФА СТАВЯТ СЕРОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКЦИЮ
1) Видаля
2) Вассермана
3) Борде - Жангу
4) Асколи
5) Райта
2. БАКТЕРИАЛЬНАЯ ДИЗЕНТЕРИЯ – ЭТО
1) шигеллез
2) сальмонеллез
3) эшерихиоз
4) трепонематоз
5) микобактериоз
3. ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУР ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БРЮШНОГО
ТИФА И ПАРАТИФОВ КРОВЬ ЗАСЕВАЮТ НА СРЕДУ
1) Раппопорта
2) Эндо
3) Желточно - солевую среду
4) МПА
5) Левенштейна – Йенсена
4. ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА НА ПЕРВОЙ НЕДЕЛЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПРОВОДИТСЯ ПУТЕМ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
1) желчи
2) крови
3) испражнений
4) гноя
5) мочи
5. ПРИ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ДИЗЕНТЕРИИ ИСПРАЖНЕНИЯ ЗАСЕВАЮТ
1) на МПА
2) на среду Плоскирева
3) на сахарный МПБ
4) на среду Китта – Тароцци
5) на среду Леффлера
6. ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ КОЛИЭНТЕРИТОВ
ИСПРАЖНЕНИЯ БОЛЬНОГО ЗАСЕВАЮТ НА
1) МПА
2) среду Леффлера
159
3) среду Эндо
4) желчный бульон
5) среду Вильсон – Блера
7. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ ПРИМЕНЯЮТ
1) бактериологическое исследование испражнений
2) кожно-аллергическую пробу Манту
3) реакцию флокуляции
4) микроскопию мазка
5) феномен Исаева – Пфейффера
8. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ХОЛЕРЫ ПРОВОДИТСЯ ПУТЕМ ПРИМЕНЕНИЯ
1) антитоксической сыворотки
2) живой вакцины
3) анатоксина - холерогена
4) аутовакцины
5) вакцины АКДС
9. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ ПРОВОДИТСЯ
ПУТЕМ
1) посева исследуемого материала на щелочную пептонную воду
2) микроскопии мазков крови
3) исследования испражнений в реакции преципитации
4) заражения белых мышей
5) постановки кожно-аллергической пробы
10. РОСТ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ ОТМЕЧАЕТСЯ
1) через 24-48 ч
2) через 6-8 ч
3) через 1-2 недели
4) в анаэробных условиях
5) при повышенной концентрации СО2
11. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ ВЕДУЩИМ ЯВЛЯЕТСЯ МЕТОД
1) микроскопический
2) бактериоскопический
3) бактериологический
4) биологический
5) аллергический
160
12. КОПРОКУЛЬТУРА – ЭТО КУЛЬТУРА, ВЫДЕЛЕННАЯ ИЗ
1) крови
2) мочи
3) испражнений
4) гноя
5) ликвора
13. ИДЕНТИФИКАЦИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ПРОВОДИТСЯ НА ОСНОВАНИИ
ПРИЗНАКОВ
1) морфологических
2) тинкториальных
3) антигенных
4) фаголизабельных
5) антибиотико – чувствительности
14. БИЛИКУЛЬТУРА – КУЛЬТУРА, ВЫДЕЛЕННАЯ ИЗ
1) крови
2) гноя
3) желчи
4) испражнений
5) мочи
15. ЭНТЕРОТОКСИГЕННЫЕ КИШЕЧНЫЕ ПАЛОЧКИ ВЫЗЫВАЮТ У ЧЕЛОВЕКА
1) дизентерие подобное заболевание
2) холероподобную коли инфекцию
3) колиэнтериты
4) брюшной тиф
5) паратифы
16. ДИФФЕРНЦИАЦИЯ СВОЙСТВ БАКТЕРИЙ НА СРЕДЕ ЭНДО ОСНОВАНА НА
1) расщеплении глюкозы
2) расщеплении лактозы
3) разложении пептона
4) грампозитивной и грамнегативной окраске
5) выявлении гемолитической активности
17. КОЛИЭНТЕРИТЫ У ДЕТЕЙ ВЫЗЫВАЮТ КИШЕЧНЫЕ ПАЛОЧКИ
1) энтеропатогенные
2) энтеротоксигенные
3) энтероинвазивные
4) энтероадгезивные
5) энтерогеморрагические
161
18. РЕАКЦИЯ ВИДАЛЯ В РАЗГАР ЗАБОЛЕВАНИЯ ХАРАКТЕРИЗУЕТСЯ
1) наличием О и Н агглютининов в диагностическои титре
2) наличием только Н-антител
3) наличием К-антител
4) снижением титра-антител
5) верно все перечисленное
19. ПРИ «ПРИВИВОЧНОМ» ВИДАЛЕ НАБЛЮДАЕТСЯ
1) нарастание титра специфических антител
2) присутствие специфических Н-антител
3) наличие О - антител в высоком титре
4) отсутствие антител
5) наличие антител к дизентерийным бактериям
20. ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ БРЮШНОМ ТИФЕ
1) больной человек
2) крупный рогатый скот
3) мелкий рогатый скот
4) грызуны
5) свиньи
21. ПИЩЕВЫЕ ТОКСИКОИНФЕКЦИИ ХАРАКТЕРИЗУЮТСЯ
1) коротким инкубационным периодом
3) стойким иммунитетом после перенесенного заболевания
3) хроническим течением
4) длительным инкубационным периодом
5) трансмиссивным путем заражения
22. МАТЕРИАЛОМ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗАХ СЛУЖАТ
1) спинномозговая жидкость
2) мокрота
3) испражнения
4) мазок из зева
5) мазок из влагалища
23. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗАХ
ВКЛЮЧАЕТ
1) микроскопию испражнений
2) аллергическую пробу
3) постановку реакции Асколи
4) идентификацию возбудителя с помощью адсорбированных
монорецепторных сывороток
5) постановку реакции Райта
162
24. ДИЗЕНТЕРИЯ В НАСТОЯЩЕЕ ВРЕМЯ НАИБОЛЕЕ ЧАСТО ВЫЗЫВАЕТСЯ ШИГЕЛЛАМИ
1) Флекснера
2) Зонне
3) Григорьева-Шига
4) Бойда
5) Видаля
25. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОЛИЭНТЕРИТОВ У ДЕТЕЙ
1) испражнения
2) моча
3) материнское молоко
4) спинномозговая жидкость
5) гнойное отделяемое из раны
26. КИШЕЧНАЯ ПАЛОЧКА ФЕРМЕНТИРУЕТ
1) лактозу до кислоты и газа
2) глюкозу с образованием кислоты без газа
3) мальтозу с образованием сероводорода
4) глюкозу с образованием ацетона
5) сахарозу до кислоты и газа
27. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ
ВКЛЮЧАЕТ
ДИАГНОСТИКА
ПРИ
ЭШЕРИХИОЗАХ
1) идентификацию патогенных сероваров с помощью диагностических сывороток
2) микроскопию испражнений
3) посев на среду Бучина
4) биологическую пробу на белых мышах
5) определение уреазной и цистиназной активности
28. РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХОЛЕРЫ
1) быстро погибает при низкой температуре
2) чувствителен к кислой среде желудочного сока
3) сохраняется при кипячении
4) устойчив к действию дезинфицирующих веществ
5) в испражнениях больного мало устойчив
29. САЛЬМОНЕЛЛЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ
1) S.typhi
2) S.paratyphi A
3) S.paratyphi B
163
4) S.typhimurium
5) S. Enteritidis
30. ХОЛЕРОГЕН, СИНТЕЗИРУЕМЫЙ ХОЛЕРНЫМ ВИБРИОНОМ ОТНОСИТСЯ К
1) экзотоксинам
2) эндотоксинам
3) анатоксинам
4) бактериоцинам
5) бактериофагам
31. ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ПО СПОСОБНОСТИ
ФЕРМЕНТИРОВАТЬ ЛАКТОЗУ, ИСПОЛЬЗУЮТ СРЕДЫ
1) Левина
2) МПБ
3) Плоскирева
4) Эндо
5) МПА
32. ИСТОЧНИКОМ ИНФЕКЦИИ ПРИ ХОЛЕРЕ ЯВЛЯЕТСЯ
1) больной человек или бактерионоситель
2) насекомые - переносчики
3) крупный рогатый скот
4) мелкий рогатый скот
5) мыши
33. ПРИЗНАКИ, ХАРАКТЕРНЫЕ ДЛЯ ВСЕХ ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
1) ферментация лактозы
2) наличие О - антигена
3) наличие ЛПС
4) образование экзотоксина
5) отсутствие жгутиков
34. ВОЗБУДИТЕЛЬ ХОЛЕРЫ АГГЛЮТИНИРУЕТСЯ
1) 01 - сывороткой
2) 02 - сывороткой
3) 03 - сывороткой
4) 04 - сывороткой
5) не агглютинируется сывороткой
35. КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
1) прихотлив к питательным средам
2) растет в анаэробных условиях
3) способен расти на холоде
164
4)не требователен к условиям культивирования, способен к быстрому росту
5) нуждается в длительном культивировании
36. ОСНОВНЫЕ КРИТЕРИИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ АЗИАТСКОЙ ХОЛЕРЫ И ХОЛЕРЫ ЭЛЬ - ТОР
1) гемолиз эритроцитов барана
2) чувствительность к пенициллину
3) чувствительность к бактериофагам
4) агглютинация куриных эритроцитов
5) отсутствие подвижности
37. ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
1) арабиноза
2) экзотоксин
3) эндотоксин
4) наличие капсулы
5) нейраминидаза
38. ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА О - АНТИГЕНА ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
1) представлен ЛПС
2) термостабилен
3) белковой природы
4)чувствителен к действию формалина и спирта
5) термолабилен
39. ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА В СТАДИИ РЕКОНВАЛЕСЦЕНЦИИ
ПРОВОДИТСЯ ПУТЕМ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
1) крови
2) гноя
3) испражнений
4) мазка из зева
5) желудочного сока
40. ИНГРЕДИЕНТЫ НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ВИДАЛЯ
1) брюшнотифозный О - диагностикум
2) брюшнотифозный Н - диагностикум
3) эритроцитарный Vi-диагностикум
4) комплемент
5) гемолитическая сыворотка
41. ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОГО ТИФА В
КАЧЕСТВЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА ИСПОЛЬЗУЮТ
1) кровь
2) желчь
165
3) ликвор
4) слизь из носоглотки
5) испражнения
42. ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОГО ТИФА НА 3-4 НЕДЕЛЕ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) бактериологическое исследование крови
2) серологическую диагностику
3) выделение копрокультуры
4) бактериологическое исследование ликвора
5) бактериологическое исследование мокроты
43. ДЛЯ УСКОРЕННОГО ОБНАРУЖЕНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА ИСПОЛЬЗУЮТ
1) иммунофлюоресцентный метод
2) выделение биликультуры
3) серологический метод
4) аллергический метод
5) полимеразно-цепную реакцию
43. СЕРОВАРЫ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
1) Огава
2) Инаба
3) Гикошима
4) Эль-Тор
5) Бюрне
44. ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ ЯВЛЯЮТСЯ
1) кишечная палочка
2) ВИЧ
3) сальмонеллы
4) дифтерийная палочка
5) протей
45. МАТЕРИАЛЫ, ИССЛЕДУЕМЫЕ ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМ ДИАГНОСТИКЕ БОТУЛИЗМА
1) ликвор
2) рвотные массы
3) трупный материал
4) слизь из носоглотки
5) пищевые продукты
46.ПУТИ ПЕРЕДАЧИ ХОЛЕРЫ
1) водный
2) контактный
166
3) алиментарный
4) воздушно-капельный
5) воздушно-пылевой
47. ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СРЕДОЙ ДЛЯ ШИГЕЛЛ
ЯВЛЯЕТСЯ
1) среда Плоскирева
2) МПА
3) Кровяной агар
4) среда Китта-Тароцци
5) среда Раппопорта
48. ПОДВИЖНОСТЬ Е.COLI ОПРЕДЕЛЯЮТ
1) по Граму
2) по Нейссеру
3) методом «висячей капли»
4) по Цилю-Нильсену
5) реакцией агглютинации
49. АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ВЫДЕЛЕННОЙ КУЛЬТУРЫ ШИГЕЛЛ
ОПРЕДЕЛЯЮТ
1) методом мембранных фильтров
2) фаготипированием
3) методом бумажных дисков
4) РИФ
5) ПЦР (полимеразно-цепная реакция)
50. ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ ПРИМЕНЯЕТСЯ
РЕАКЦИЯ
1) Райта
2) Асколи
3) РПГА
4) Манту
5) Оухтерлони
51. ОСНОВНОЙ МЕХАНИЗМ ПЕРЕДАЧИ ХОЛЕРЫ
1) аэрогенный
2) кровяной
3) вертикальный
4) фекально-оральный
5) контактно-половой
52. ФАКТОР, ОБУСЛОВЛИВАЮЩИЙ РАЗВИТИЕ ДИАРЕИ ПРИ ХОЛЕРЕ
1) инвазия эпителия кишечника
2) циркуляция возбудителя в кровотоке
167
3) образование дефектов кишечной стенки
4) действие экзотоксина
5) действие эндотоксина
53. ИСТОЧНИКИ ИНФЕКЦИИ ПРИ ХОЛЕРЕ
1) больные и бактерионосители
2) насекомые-переносчики
3) грызуны
4) гидробионты
5) крупный рогатый скот
54. НА СРЕДЕ ЭНДО КИШЕЧНАЯ ПАЛОЧКА ОБРАЗУЕТ
1) бесцветные колонии с голубоватым оттенком
2) колонии желтого цвета
3) колонии с зоной гемолиза вокруг колоний
4) красные колонии с металлическим блеском
5) синие колонии
55. ДИЗЕНТЕРИЕПОДОБНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ВЫЗЫВАЮТ ЭШЕРИХИИ
1) энтеропатогенные
2) энтероинвазивные
3) энтеротоксигенные
4) энтерогеморрагические
5) парентеральные
56. МАТЕРИАЛОМ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЯХ ЯВЛЯЮТСЯ
1) рвотные массы
2) остатки продуктов
3) промывные воды желудка
4) слизь из носоглотки
5) моча
57. ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ PROTEUS VULGARIS, КАК ВОЗБУДИТЕЛЯ ПИЩЕВЫХ
ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ ИСПОЛЬЗУЮТ ПИТАТЕЛЬНУЮ СРЕДУ
1) Клауберга
2) Эндо
3) скошенный агар по Шукевичу
4) Раппопорта
5) Ресселя
168
II. Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи по разделу
«Патогенные кокки, возбудители дифтерии, туберкулеза,
зоонозных инфекций»
1. В клинику поступил больной с множественными фурункулами.Что
будет служить материалом для лабораторного исследования? Напишите
направление в лабораторию на бактериологическое исследование.
2. У больных хирургического отделения больницы после операции
стали отмечаться осложнения в виде различных нагноительных процессов. При бактериологическом исследовании из гнойного содержимого
выделяется стафилококк коагулазопозитивный,т.е предполагается внутрибольничная стафилококковая инфекция. Что делать? Как выявить
бактерионосителей? Как типировать стафилококки с эпидемиологической целью?
3. Больной страдает хроническим, рецидивирующим фурункулезом.
Какие специфические препараты вы ему назначите?
4. Больному поставлен диагноз: сепсис. Откуда и в каком количестве возьмете кровь для выделения гемокультуры? На какие среды произведете посев крови?
5. Реакция Дика у ребенка отрицательная. О чем свидетельствует
такой результат?
6. На прием к врачу явился больной А. 25 лет, холост, с жалобами
на обильное гнойное отделяемое из уретры.
а) какое заболевание Вы заподозрите? Какой анализ порекомендуете сделать?
б) в мазке из гнойного отделяемого уретры обнаружены грамотрицательные диплококки, расположенные внеклеточно и внутриклеточно. Какой диагноз поставите?
7. Больной жалуется на длительные выделения гноя из уретры, рези и
боли при мочеиспускании. Вы предполагаете хроническую гонорею. Какими микробиологическими методами можно подтвердить этот диагноз?
8. Детей из детского сада нужно обследовать на носительство менингококка. Какой материал подлежит исследованию? На какие питательные среды необходимо засевать этот материал?
9. В больницу поступил больной с клинической картиной менингита. При пункции получена мутная спинномозговая жидкость:
а) какие меры предосторожности следует соблюдать при транспортировке ликвора в лабораторию в холодное время года.
169
б) в мазке из осадка спинномозговой жидкости обнаружены диплококки. Какой вы поставите диагноз? Как дальше продолжите исследование ликвора?
10. В спинномозговой жидкости больного ребенка обнаружены Г+
ланцетовидные диплококки, окруженные капсулой. Каков ваш предположительный диагноз?
11. В клинику поступил больной с обширным ранением нижних
конечностей. Какой препарат следует применить с целью профилактики
газовой гангрены?
12. Пробу почвы засеяли на среду Китта-Тароцци. Выросшую в бульоне культуру ввели мышке у корня хвоста. Через сутки хвост встал
«трубой», развились контрактуры мышц и мышь погибла. От чего погибла мышь?
13. Работая в огороде, женщина поранила лопатой ногу. Какие
профилактические препараты следует назначить больной после хирургической обработки раны?
14. Мальчик 12 лет, ученик школы №13, упал с дерева и глубоко
поранил руку. Нужно ли вводить этому мальчику препараты для профилактики столбняка?
15. У больного подозревается ботулизм.
а) какой материал постараетесь взять на исследование? Какими
методами будете проводить микробиологическую диагностику?
б) в чем будет заключаться специфическое лечение и профилактика этого заболевания?
16. При посеве слизи из зева на теллуритовую среду получены серовато-черные колонии с зубчатым краем. Выделенная культура расщепляет глюкозу, цистин, а также крахмал, гликоген и декстрин. Какой
это вариант дифтерийной палочки?
17. При оформлении на работу в детсад воспитательница Иванова
А.П. проходила медицинское обследование. При бактериологическом
исследовании слизи из носа у нее выделена палочка Леффлера (С.mitis).
Можно ли Ивановой приступить к работе, если все остальные анализы
в норме?
18. В городе отмечено несколько случаев дифтерии. В этой связи
решено проверить наличие противодифтерийного иммунитета в различных детских коллективах:
а) какими методами и с помощью каких реакций Вы это сделаете?
170
б) исследование показало, что антитоксический иммунитет у
большинства детей низкий. Каковы Ваши дальнейшие мероприятия?
19. В детском интернате мальчик заболел дифтерией:
а) какие специфические препараты назначите для лечения больного?
б) какие препараты Вы примените для профилактики контактировавших детей?
20. В детскую поликлинику привели ребенка, страдающего приступами спазматического кашля. Какое заболевание Вы заподозрите? Как
возьмете материал для посева? Какие среды можно использовать для
посева?
21. Ребенок длительно кашлял, причем приступы носили спазматический характер и заканчивались выделением большого количества
вязкой мокроты, а иногда и рвотой. Как установить, перенес ли ребенок
коклюш, т.е. как провести ретроспективную диагностику?
22. При рентгенологическом исследовании в легких обнаружен инфильтрат. Подозревают туберкулез легких.
а) при бактериоскопическом и бактериологическом исследовании
мокроты микобактерии туберкулеза не обнаружены. Исключает
ли это туберкулез легких у данного больного? Какой метод микробиологической диагностики более чувствительный? Как Вы его
проведете?
б) после п/к введения морской свинке мокроты больного, животное погибло после заражения через 1,5 месяца. На вскрытии обнаружены казеозные паховые лимфоузлы и увеличенная селезенка, на поверхности которой несколько желтоватых бугорков. Как
вы будете расценивать эту биологическую пробу? Какой диагноз
поставите больному на основании этой пробы?
23. При посеве мокроты на среду Левенштейна-Йенсена через 4 дня
обнаружены гладкие, влажные колонии желтого цвета. Из колоний сделан мазок и окрашен по Цилю-Нильсену. При бактериоскопии мазка
обнаружены кислотоустойчивые палочки. Какое Вы дадите заключение? Получен ли рост микробактерий туберкулеза или нет?
24. В больницу поступил больной с предварительным диагнозом
«бруцеллез». Какие методы микробиологической диагностики могут
быть использованы для подтверждения диагноза?
171
25. Животноводам одного из районов Дагестана поставлена проба
Бюрне. В нескольких случаях получена положительная реакция. О чем
она свидетельствует?
26. В больницу доставлен больной с ундулирующей лихорадкой,
увеличением печени и селезенки, поражением суставов. Какое заболевание можно предположить? Какой материал можно взять для проведения
а) бактериологического исследования?
б) серологической диагностики?
27. В одном из районов Дагестана были выявлены больные бруцеллезом. Надо ли проводить вакцинацию жителей этого района? Если да,
то какой контингент населения должен быть вакцинирован в первую
очередь и какими препаратами проводится вакцинация?
28. Из лаборатории получены результаты исследования сыворотки
больного с подозрением на бруцеллез.
а) Реакция Хеддельсона – резко положительная(++++)
б) Реакция Райта положительная в титре 1:200
в) РПГА - положительная в титре 1:800. Дайте заключение.
29. В больницу доставлен больной с кожной формой сибирской язвы. Какой материал берется для исследования? Какие методы лабораторной диагностики могут быть использованы для подтверждения диагноза?
30. В больницу обратился больной с жалобами на карбункул появившийся на руке. Выяснилось, что он работает ветврачом и производил вскрытие павшего от неизвестного заболевания животного. Как
проверить, не болело ли животное сибирской язвой?
31. В лабораторию доставлена шерсть овец для обследования на
наличие возбудителя сибирской язвы. Какую реакцию надо поставить
для обнаружения антигена? Какие ингредиенты необходимы для этой
реакции?
32. При микроскопическом исследовании содержимого карбункула
обнаружены толстые грамположительные палочки с «обрубленными»
концами, расположенные отдельно по 2-3 особи, окруженные капсулой.
Какое заболевание у больного? Можно ли поставить предварительный
диагноз на основании этих данных? Как установить окончательный диагноз?
33. При посеве гноя из бубонов на МПБ отмечается рост в виде
«сталактитов», а на МПА- колонии с плотным центром и ажурной периферией в виде «кружевного платочка». Для какого микроба характерны подобные культуральные свойства?
172
34. В клинику поступил больной с подозрением на чуму. Какие методы ускоренной диагностики можно использовать?
35. У охотника М.А. образовался бубон размером с грецкий орех в
подмышечной области. Подозревается туляремия. Опасен ли больной
для окружающих? Какие методы микробиологической диагностики
следует применить для уточнения диагноза?
36. При исследовании сыворотки больного с подозрением на туляремию получены следующие результаты:
а) кровяно-капельная реакция положительная
б) РА с туляремийным диагностикумом положительная (1:800)
в) РПГА положительная (1:1280). Дать заключение.
37. Больной Иванов заболел две недели тому назад. Врач предполагает, что у него туляремия. Результаты обследования следующие:
а) внутрикожная проба с тулярином положительная (+++)
б) РА с туляремийным диагностикумом положительная (1:100)
Дать заключение.
173
1. ПРИЗНАКИ ПАТОГЕННОСТИ СТАФИЛОКОККОВ
1) продукция коагулазы
2) продукция уреазы
3) образование гемагглютининов
4) каталазная активность
5) образование капсулы
2. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БОРДЕТЕЛЛ ИСПОЛЬЗУЮТ СРЕДУ
1) Борде-Жангу
2) Бучина
3) Эндо
4) КУА
5) Леффлера
3. ВОЗБУДИТЕЛЬ ДИФТЕРИИ ОБРАЗУЕТ
1) экзотоксин
2) эндотоксин
3) анотоксин
4) гиалуронидазу
5) ревертазу
4. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ КОКЛЮША, ДИФТЕРИИ И
СТОЛБНЯКА ПРИМЕНЯЕТСЯ
1) вакцина БЦЖ
2) вакцина СТИ
3) вакцина Смородинцева-Чумакова
4) АКДС
5) вакцина Сэбина
5. ЭЛЕКТИВНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВ
1) сывороточный агар
2) среда Эндо
3) желчный бульон
4) среда Китта - Тароцци
5) желточно - солевой агар
6. КАКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ИСПОЛЬЗУЮТ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПНЕВМОКОККОВ
1) кролики
2) морские свинки
3) крысы
4) мыши
5) куры
174
7. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СТАФИЛОКОККОВОГО СЕПСИСА ПРИМЕНЯЮТСЯ
1) прямая микроскопия крови
2) посев крови на МПА
3) посев крови на ЖСА
4) посев крови на сахарный бульон
5) метод иммунофлюоресценции
8. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДИФТЕРИЙНОЙ ПАЛОЧКИ ИСПОЛЬЗУЮТ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
1) мясо - пептонный агар
2) Клауберга
3) Эндо
4) Плоскирева
5) Гисса
9. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МЕНИНГОКОККОВ ПРИМЕНЯЮТ СРЕДЫ
1) 1 % пептонная вода
2) печеночный бульон
3) Раппопорта
4) сывороточный агар
5) желточный агар
10. ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ ПРИМЕНЯЮТ
СРЕДЫ
1) агар Мак-Конки
2) КУА
3) Борде - Жангу
4) Левенштейна - Йенсена
5) Клауберга
11. ЗАБОЛЕВАНИЕ, ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ КОТОРОГО
ПРИМЕНЯЮТ АНТИТОКСИНЫ
1) листериоз
2) нокардиоз
3) эшерихиоз
4) дифтерия
5) туберкулез
12. КОКЛЮШ НАИБОЛЕЕ ЗАРАЗЕН В СТАДИИ
1) катаральной
2) пароксизмальной
3) инкубационной
175
4) регенерации
5) реконвалесценции
13. ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ А
1) уреаза
2) белок М
3) коллагеназа
4) пенициллиназа
5) липаза
14. ВОЗБУДИТЕЛИ АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ КУЛЬТИВИРУЮТ НА
СРЕДАХ
1) Китта-Тароцци
2) содержащих желчь
3) печеночном бульоне
4) среде Дьедоне
5) щелочном агаре
15. ОСНОВНЫЕ ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ STREPTOCOCCUS PNEUMONIAЕ
1) микроворсинки
2) капсула
3) нейраминидаза
4) субстанция С
5) каталаза
16. ДЛЯ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ПРИМЕНЯЮТ ПРОБУ
1) Шика
2) Дика
3) Бюрне
4) Манту
5) Френкеля
17. УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ТУБЕРКУЛЕЗА
1) гомогенизации
2) флотации
3) бактериоскопический
4) микрокультур по Прайсу
5) аллергический
18. МИКОБАКТЕРИИ ТУБЕРКУЛЕЗА
1) споровые грам (-) палочки
2) окрашиваются по Цилю - Нильсену в красный цвет
176
3) имеют жгутики
4) имеют зерна волютина
5) образуют капсулу
19. ИММУНИТЕТ ПОСЛЕ ПЕРЕНЕСЕННОЙ ДИФТЕРИИ
1) кратковременный
2) антитоксический
3) нестерильный
4) выявляется в реакции Дика
5) естественный пассивный
20. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ МЕНИНГИТА ИССЛЕДОВАНИЮ ПОДТВЕРГАЮТ
1) мочу
2) испражнения
3) мокроту
4) спинномозговую жидкость
5) слюну
21. ТУБЕРКУЛЕЗ У ЧЕЛОВЕКА ВЫЗЫВАЮТ
1) М.tuberculosis
2) M.bovis
3) M.africanum
4) M. kansasii
5) M. marinum
22. МЕНИНГОКОККИ
1) кокки ланцетовидной формы
2) грамположительные
3) образуют споры
4) грамотрицательные диплококки бобовидной формы
5) имеют зерна волютина
23. ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИГЕННОСТИ ДИФТЕРИЙНОЙ ПАЛОЧКИ
ИСПОЛЬЗУЮТ РЕАКЦИЮ
1) преципитации в геле
2) агглютинации
3) бактериолиза
4) кольцепреципитации
5) связывания комплемента
24. ВАКЦИНУ БЦЖ СОЗДАЛИ
1) Зильбер Л.А.
2) Смородинцев А.А.
3) Гайский Н.А.
177
4) Кальметт А. и Герен М.
5) Вершилова П.А.
25. ОСНОВНОЙ МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ГНОЙНО- ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ СТАФИЛОККОКОВОЙ ИНФЕКЦИИ
1) серологический
2) биологический
3) бактериологический
4) аллергический
5) люминисцентно-серологический
26. ДЛЯ ПНЕВМОКОККА ХАРАКТЕРНО
1) грамотрицательная окраска
2) образование спор во внешней среде
3) образование капсул в организме человека
4) продуцирование экзотоксина
5) высокая устойчивость во внешней среде
27. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ МЕНИНГОКОККОВОГО НОСИТЕЛЬСТВА ИССЛЕДУЮТ
1) ликвор
2) кровь
3) испражнения
4) слизь из носоглотки
5) мочу
28. ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОЙ ГОНОРЕИ
ПРИМЕНЯЮТ
1) реакцию Асколи
2) РТГА
3) реакцию Видаля
4) микроскопический метод
5) реакцию Вассермана
29. ДЛЯ ЭКСТРЕННОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СТОЛБНЯКА ПРИМЕНЯЮТ
1) бактериофаг
2) антитоксическую сыворотку и анатоксин
3) антимикробную сыворотку
4) АКДС
5) убитую вакцину
30. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ГАЗОВОЙ АНАЭРОБНОЙ
ИНФЕКЦИИ ПРИМЕНЯЮТ
1) антимикробную сыворотку
2) поливалентную антитокическую сыворотку
178
3) убитую вакцину
4) бактериофаг
5) аутовакцину
31. ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОТУЛИЗМА ИСПОЛЬЗУЮТ
1) антимикробную сыворотку
2) поливалентную антитоксическую сыворотку
3) аутовакцину
4) бактериофаг
5) убитую вакцину
32. К MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS ВОСПРИИМЧИВЫ
1) белые мыши
2) морские свинки
3) хомяки
4) крысы
5) собаки
33. МИКОБАКТЕРИИ ТУБЕРКУЛЕЗА НА ПЛОТНЫХ СРЕДАХ ДАЮТ РОСТ
1) через 16-18 ч
2) через сутки
3) через неделю
4) через 2-4 недели
5) через 6 месяцев
34. ДЛЯ БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКОЙ
ПРИМЕНЯЮТ
ДИАГНОСТИКИ
ТУБЕРКУЛЕЗА
1) микроскопию препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену
2) микроскопию препаратов, окрашенных по Граму
3) метод висячей капли
4) фазово-контрастную микроскопию
5) микроскопию в «темном поле»
35. ИЗ ПЕРЕЧИСЛЕННЫХ ВИДОВ БАКТЕРИЙ ОТНОСЯТСЯ К КОАГУЛАЗОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ СТАФИЛОКОККАМ
1) S. epidermidis
2) S. saprophyticus
3) S. aureus
4) S. haemolyticus
5) S.hominis
36. ДЛЯ STAPHYLOCOCCUS AUREUS ХАРАКТЕРНО
1) плазмокоагулазная активность
2) лецитиназная активность
3) грамотрицательная окраска
179
4) образование жгутиков
5) образование спор
37. ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВ ШИРОКО ИСПОЛЬЗУЕТСЯ
1) среда Эндо
2) среда Левина
3) ЖСА (желточно-солевой агар)
4) свернутая лошадиная сыворотка
5) среда Клауберга
38. КЛИНИЧЕСКИМИ ФОРМАМИ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
ЯВЛЯЮТСЯ
1) эпидемический цереброспинальный менингит
2) пневмония
3) диарея
4) менингококкцемия
5) назофарингит
39. ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПНЕВМОКОККОВ ИСПОЛЬЗУЮТ СРЕДЫ
1) желточно-солевой агар
2) желчный бульон
3) кровяной агар
4) Эндо
5) Левина
40. МОРФОЛОГИЯ ПНЕВМОКОККА ПРИ МИКРОСКОПИИ
1) диплококки с ланцетовидными концами
2) тетракокки
3) мелкие кокки, расположенные в цепочку
4) кокки, расположенные по одному
5) кокки, образующие скопления в виде «виноградных гроздьев»
41. О-СТРЕПТОЛИЗИН ПРОДУЦИРУЮТ СТРЕПТОКОККИ
1) S. pyogenes
2) S. pneumoniae
3) S. faecalis
4) S. mutans
5) S. mitis
42. ПАТОГЕННЫМИ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ЯВЛЯЮТСЯ КОРИНЕБАКТЕРИИ
1) С. diphtheriae
2) С. pseudodiphtheriae
3) C. xerosis
4) C. ulcerans
5) C. pseudotuberculosis
180
43. НЕПАТОГЕННЫЕ НЕЙССЕРИИ, ВЫДЕЛЯЕМЫЕ ИЗ НОСОГЛОТКИ
ЗДОРОВОГО ЧЕЛОВЕКА
1) N. meningitidis
2) N. gonorrhoeae
3) N. subflava
4) N. flava
5) N.sicca
44. БИОВАРЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ
1) gravis
2) mitis
3) intermedius
4) xerosis
5) ulcerans
45. ДЛЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ПАРАКОКЛЮША ХАРАКТЕРНО
1) рост колоний через 6-8 часов
2) на питательном агаре с 0,1 % тирозина растет, изменяя цвет среды
3) положительная проба на уреазу
4) рост колоний через 24-48 часов
5) отрицательная проба на уреазу
46. К НЕСПОРООБРАЗУЮЩИМ АНАЭРОБАМ ОТНОСЯТСЯ
1) бактероиды
2) клостридии
3) хламидии
4) кампилобактерии
5) микобактерии
47. БИОВАРЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ
1) xerosis
2) gravis
3) ovis
4) canis
5) mitis
48. НА СРЕДЕ ВИЛЬСОН-БЛЕРА ЧЕРЕЗ 4-6 ЧАСОВ ОБРАЗУЮТ КОЛОНИИ ЧЕРНОГО ЦВЕТА
1) Clostridium perfringens
2) Escherichia coli
3) Salmonella typhi
4) Corynebacterium dyphteriae
5) Mycobacterium
181
49. МИКОБАКТЕРИОЗЫ ВЫЗЫВАЮТ
1) M.tuberculosis
2) M. bovis
3) M. kansasi
4) M.leprae
5) M. africanum
50. ВАКЦИНАЦИЮ ПРОТИВ ТУБЕРКУЛЕЗА ПРОВОДЯТ
1) туберкулином
2) анатоксином
3) антитоксической сывороткой
4) БЦЖ
5) бруцеллином
51. ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ТУБЕРКУЛЕЗА
1) туберкулин
2) кордфактор
3) капсула
4) жгутики
5) экзотоксин
52. ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ОСОБООПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЯВЛЯЮТСЯ
1) Iersinia pestis
2) Mycobacterium tuberculosis
3) Staphylococcus aureus
4) Clostridium tetani
5) Salmonella typhi
53. ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО АНТИГЕНА ПРИМЕНЯЕТСЯ РЕАКЦИЯ
1) Видаля
2) Райта
3) Хеддльсона
4) Асколи
5) Кумбса
54. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПРИМЕНЯЕТСЯ ВАКЦИНА
1) АКДС
2) БЦЖ
3) Солка
4) Сэбина
5) СТИ
182
55. ВОЗБУДИТЕЛЬ ЧУМЫ МОРФОЛОГИЧЕСКИ ПРЕДСТАВЛЯЕТ СОБОЙ
1) биполярно окрашенные грамотрицательные, неподвижные, мелкие палочки
округлой формы
2) грамположительные кокки, расположенные в виде цепочки
3) грамположительные палочки с закругленными концами
4) грамотрицательные подвижные палочки, не образующие спор и
капсул
5) грамположительные палочки, не образующие спор
56. БРУЦЕЛЛЕЗ У ЧЕЛОВЕКА ВЫЗЫВАЮТ
1) B.melitensis
2) B.abortus
3) B.suis
4) B. ovis
5) B. canis
57. ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ПРИМЕНЯЕТСЯ РЕАКЦИЯ
1) Асколи
2) Видаля
3) Райта
4) Вассермана
5) термопреципитации
58. ИСТОЧНИКОМ ТУЛЯРЕМИИ ЯВЛЯЮТСЯ
1) больные в инкубационном периоде
2) больные в периоде разгара болезни
3) бактерионосители
4) реконвалесценты
5) больные животные
59. ВИРУЛЕНТНЫЕ ШТАММЫ ЧУМНЫХ ПАЛОЧЕК НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ ОБРАЗУЮТ КОЛОНИИ
1) S-формы
2) R-формы
3) круглые выпуклые золотистого цвета с ровными краями
4) мелкие, круглые, блестящие как капельки ртути
5) шероховатые колонии, напоминающие локоны или гриву льва;
60. КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) рост в бульоне в виде пленки
2) образуют помутнение бульона
3) на плотной среде образуют мелкие прозрачные колонии с ровными краями
183
4) на поверхности агара через сутки образуют шероховатые колонии с неровными
краями, напоминающие локоны или львиную гриву;
5) через 3-4 недели после посева на плотных средах образуют морщинистые сухие
кремового цвета колонии;
61. ЧЕЛОВЕК ЯВЛЯЕТСЯ БИОЛОГИЧЕСКИМ ТУПИКОМ (НЕ ЯВЛЯЕТСЯ
ИСТОЧНИКОМ ИНФЕКЦИИ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩИХ ЛЮДЕЙ)
1) чума
2) коклюш
3) бруцеллез
4) полиомиелит
5) возвратный тиф
62. ДЛЯ СОЗДАНИЯ НЕВОСПРИИМЧИВОСТИ К ЧУМЕ ПРИМЕНЯЮТ
1) убитую корпускулярную вакцину
2) живую аттенуированную (штамм EV) вакцину
3) БЦЖ
4) анатоксин
5) антитоксическую сыворотку
63. ИЗ ПЕРЕЧИСЛЕННЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОСОБООПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ К ОБРАЗОВАНИЮ СПОР СПОСОБНЫ
1) бациллы сибирской язвы
2) палочки чумы
3) бактерии туляремии
4) бруцеллы
5) холерный вибрион
64. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ РАЙТА ПРИМЕНЯЕТСЯ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ
1) сибирской язвы
2) бруцеллеза
3) чумы
4) туляремии
5) дизентерии
65. БРУЦЕЛЛЕЗ У ЧЕЛОВЕКА МОГУТ ВЫЗЫВАТЬ
1) Brucella canis
2) Brucella abortus
3) Brucella ovis
4) Brucella neotomae
5) Brucella melitensis
184
66. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ НА ПЛОТНЫХ СРЕДАХ ОБРАЗУЕТ
1) S-колонии
2) R-колонии в виде львиной гривы
3) мелкие колонии с ровными краями
4) колонии в виде «яичницы-глазуньи»
5) колонии в виде «битого стекла»
67. ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ПРИМЕНЯЮТ
1) реакцию агглютинации Видаля
2) реакцию Вассермана
3) реакцию Асколи
4) реакцию Хеддльсона
5) реакцию Манту
68. ДЛЯ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ПРИМЕНЯЮТ
ПРОБУ
1) Манту
2) Пирке
3) Бюрне
4) Френкеля
5) Шика
69. КЛИНИЧЕСКАЯ ФОРМА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ, КОТОРАЯ ДАЕТ БОЛЕЕ
БЛАГОПРИЯТНЫЙ ИСХОД
1) кишечная
2) легочная
3) кожная
4) септическая
5) менингоэнцефалит
70. ДЛЯ УСКОРЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) реакцию агглютинации
2) посев по способу Шукевича
3) биологическую пробу
4) прямой иммунофлюоресцентный метод
5) непрямой иммунофлюоресцентный метод
71. ВНУТРИКОЖНАЯ ПРОБА БЮРНЕ ПРИМЕНЯЕТСЯ ДЛЯ АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКИ
1) чумы
2) туляремии
3) бруцеллеза
4) сибирской язвы
5) туберкулеза
185
72. ВАКЦИНУ СТИ ПРИМЕНЯЮТ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ
1) бруцеллеза
2) чумы
3) сибирской язвы
4) туляремии
5) холеры
73. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ BAC.ANTHRACIS ИСПОЛЬЗУЮТСЯ СРЕДЫ
1) МПА, МПБ
2). Эндо
3). Плоскирева
4) Левина
5) Левенштейна-Йенсена
74. РОСТ В ВИДЕ «ВАТНОГО КОМОЧКА» НА ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ
СРЕДЕ ХАРАКТЕРЕН ДЛЯ
1) Y. pestis
2) Bac. anthracis
3) F. tularensis
4) Br. melitensis
5) Br. suis
75. НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ ОБЫЧНО ДАЕТ РОСТ В ВИДЕ R – ФОРМЫ
КОЛОНИЙ
1) Francisella tularensis
2) Bacillus subtilis
3) Yersinia pestis
4) Brucella melitensis
5) Brucella suis
76. ВОЗБУДИТЕЛИ, РАЗМЕРЫ КОТОРЫХ НАХОДЯТСЯ НА ПРЕДЕЛЕ
РАЗРЕШАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА
1) Y. pestis
2) F. tularensis
3) Bac. anthracis
4) E. coli
5) M. tuberculosis
77. В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ ОБЫЧНОГО РЕЖИМА
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТУЛЯРЕМИИ ИСПОЛЬЗУЮТ МЕТОД
1) бактериоскопический
2) бактериологический
186
3) биологический
4) серологический
5) аллергический
78. ПРИ ОСТРОМ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ЧАЩЕ ВСЕГО УДАЕТСЯ ВЫДЕЛИТЬ
ВОЗБУДИТЕЛЯ ИЗ
1) мокроты
2) ликвора
3) крови
4) гноя
5) пунктата костного мозга
79. РЕАКЦИЯ ХЕДДЛЬСОНА ПРИМЕНЯЕТСЯ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ
1) бруцеллеза
2) туляремии
3) сибирской язвы
4) чумы
5) чолеры
80. К КАРАНТИННЫМ (КОНВЕНЦИОННЫМ) ЗАБОЛЕВАНИЯМ ОТНОСЯТСЯ
1) чума
2) бруцеллез
3) брюшной тиф
4) дифтерия
5) дизентерия
81. БРУЦЕЛЛЫ НАИБОЛЕЕ ВИРУЛЕНТНЫЕ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА
1) Br. abortus
2) Br. melitensis
3) Br. ovis
4) Br. neotomae
5) Br. canis
82. ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ТИТР РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ РАЙТА
1) 1:50
2) 1:800
3) 1:10
4) 1:200
5) 1:1600
187
III. Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи по разделу
«Микробиологическая диагностика спирохетозов, риккетсиозов,
хламидиозов»
1. В кожно-венерологический диспансер явился на прием больной с
твердым шанкром. Нужно микробиологически подтвердить диагноз.
Какой материал нужно взять у больного для лабораторного подтверждения диагноза?
2. В кожно-венерологический диспансер поступил больной сифилисом. Как лабораторно подтвердить диагноз?
3. Из лаборатории кожно- венерологического диспансера получены
результаты реакции Вассермана больного И.С.
РСК с антигеном №1-положительная
с антигеном №2-положительная
с антигеном №3-положительная
Объясните, что собой представляют антигены №1,2,3 и дайте заключение.
4. У больного характерная клиническая картина возвратного тифа.
Какой материал нужно взять у больного для лабораторного подтверждения диагноза? Когда взять – во время приступа, в период эпирексии? Как его исследовать на наличие спирохет возвратного тифа?
5. Кровью больного возвратным тифом заразили морскую свинку.
Через 6 дней в крови животного обнаружили большое количество боррелий. У больного эпидемический или эндемический возвратный тиф?
6. Несколько человек заболели после купания в озере. Какое инфекционное заболевание, относящееся к спирохетозам, Вы заподозрите?
Какие методы диагностики используете для подтверждения диагноза?
7. В больницу поступил больной с заболеванием печени. Выяснилось, что год назад он перенес какое-то заболевание с явлениями желтухи. Можно ли ретроспективно установить диагноз лептоспироза? Если да, то при помощи какой реакции?
8. Из лаборатории получен результат исследования парных сывороток в реакции агглютинации больного с подозрением на лептоспироз.
Реакция агглютинации положительна с лептоспирозным диагностикумом в 1-ой сыворотке (8-й день заболевания) в титре 1:100, во второй
сыворотке (20-й день заболевания) в титре 1:800. Дайте заключение.
9. В больницу доставлен больной с подозрением на эпидемический
сыпной тиф. Какие методы лабораторной диагностики Вы можете
предположить для обследования этого больного?
188
10. У больного предполагают сыпной тиф. Болеет 2 недели. При
постановке реакции агглютинации с антигеном Провачека получен положительный результат в титре 1:1280. Поставьте диагноз.
11. Из лаборатории получен результат реакции агглютинации. У
больного предполагают сыпной тиф.
Диагностикум
1 Провачека
2 Музера
Разведение сыворотки
1:20
++
++++
1:40
+++
1:80
++
1:160
++
1:320
-
Дайте заключение.
12. Из лаборатории получен результат РСК, поставленный с целью
дифференцирования первичного сыпного тифа от болезни БрилляЦинссера.
Сыворотка
Обработанная
2-меркаптоэтанолом
Не обработанная
2-меркаптоэтанолом
Разведение сыворотки
1:50 1:100 1:200 1:300 1:400 1:500
1:600
+
+
-
-
-
-
-
+
+
+
+
+
+
+
Дайте заключение
13. В клинику поступил больной с лихорадкой, головными болями
и пневмонией. На 2-й неделе поставили реакцию агглютинации с сывороткой больного и антигеном из риккетсий Бернетта, реакция оказалась
положительной в титре 1:256. Дайте заключение.
14. В инфекционную больницу доставлен мужчина с высокой температурой, резко выраженными явлениями интоксикации, кашлем. Выяснилось, что дома он держит попугаев. Какое инфекционное заболевание Вы заподозрите? Какие исследования назначить больному?
15. При исследовании парных сывороток, взятых в начале заболевания и через 2 недели после начала болезни, у птичницы Г.Н, 35 лет,
РСК положительная с орнитозным диагностикумом в разведениях соответственно 1:16 и 1:64.
Дайте заключение.
189
16. У больного длительно принимавшего антибиотики подозревают
кандидомикоз мочеполовых органов. Какой материал Вы будете исследовать, чтобы подтвердить диагноз?
17. У больного Г.Р.,58 лет с подозрением на кандидоз получены
следующие результаты:
а) РА- положительная в разведении 1:100
б)РСК – положительная 1:80. При повторном исследовании через
2 недели титры антител в РА- 1:400, в РСК – 1:320. Дайте заключение.
18. У беременной женщины в анамнезе 2 выкидыша. Какие микробиологические исследования необходимо провести, чтобы исключить
токсоплазмоз?
19. Решено провести массовое эпидемиологическое обследование
на токсоплазмоз в одном из животноводческих хозяйств. Какие методы
исследования Вы будете использовать?
20. При 1-м обследовании беременной женщины (срок до 12 недель)
внутрикожная проба и серологические реакции на токсоплазмоз отрицательные. При повторном обследовании этой женщины (срок до 20
недель) РСК положительна в титре 1:40, РИФ 1:160. Дайте заключение.
21. В клинику поступил больной с подозрением на малярию. Что
будет служить материалом для исследования? Когда следует брать материал – до начала приступа, во время его или же в период ремиссии?
Какие методы исследования Вы будете применять для обнаружения
малярийных плазмодий?
22. В мазке крови больного, окрашенном по Романовкому- Гимзе
обнаружены в эритроцитах какие-то включения с голубой протоплазмой и рубиново- красным ядром. Кроме этого в некоторых эритроцитах
имеются глыбки коричнево - черного цвета. Объясните, что это такое.
Поставьте диагноз.
190
1. К РИККЕТСИОЗАМ ОТНОСЯТСЯ
1) сыпной тиф
2) брюшной тиф
3) возвратный тиф
4) паратиф А
5) паратиф В
2. РИККЕТСИИ ПРОВАЧЕКА ОБРАЗУЮТ
1) экзотоксин
2) эндотоксин
3) споры
4) капсулу
5) анатоксин
3. ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО СЫПНОГО ТИФА ЯВЛЯЮТСЯ
1) гонококк
2) стафилококк
3) риккетсии Провачека
4) риккетсии Музера
5) риккетсии Бернетта
4. РИККЕТСИИ ОКРАШИВАЮТСЯ ПО
1) Бурри - Гинсу
2) Бурри
3) простым методом
4) Нейссеру
5) Романовскому - Гимзе
5. МЕХАНИЗМЫ ПЕРЕДАЧИ ИНФЕКЦИИ ПРИ СЫПНОЙ ТИФЕ
1) кровяной
2) фекально-оральный
3) аэрогенный
4) контактный
5) вертикальный
6. ПЕРЕНОСЧИКАМИ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО СЫПНОГО ТИФА ЯВЛЯЮТСЯ
1) вши
2) комары
3) мухи
4) клещи
5) собаки
7. СЫПНОЙ ТИФ ОТНОСИТСЯ К ИНФЕКЦИЯМ ПЕРЕДАЮЩИМСЯ ПУТЕМ
1) трансмиссивным
2) алиментарным
3) воздушно-капельным
191
4) воздушно-пылевой
5) вертикальным
8. ПЕРЕНОСЧИКАМИ ЭНДЕМИЧЕСКОГО СЫПНОГО ТИФА ЯВЛЯЮТСЯ
1) комары
2) грызуны
3) клещи
4) больные животные
5) больной человек
9. РИККЕТСИИ БЕРНЕТА ВЫЗЫВАЮТ
1) эпидемический сыпной тиф
2) эндемический сыпной тиф
3) КУ - лихорадку
4) марсельскую лихорадку
5) желтушную лихорадку
10. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА СЫПНОГО ТИФА ПРОВОДИТСЯ
1) анатоксином
2) антитоксической сывороткой
3) живой вакциной
4) антирабической вакциной
5) интерфероном
11. РИККЕТСИИ ОТНОСЯТСЯ К
1) бактериям
2) спирохетам
3) актиномицетам
4) хламидиям
5) простейшим
12. ИСТОЧНИКОМ ИНФЕКЦИИ ПРИ ЭПИДЕМИЧЕСКОМ СЫПНОМ ТИФЕ ЯВЛЯЮТСЯ
1) больные животные
2) больной человек
3) бактерионоситель
4) вирусоноситель
5) комары
13. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РИККЕТСИЙ БЕРНЕТА ИСПОЛЬЗУЮТ
1) искусственные питательные среды
2) МПА
3) куриные эмбрионы
4) среду Эндо
5) среду Сабуро
192
14. РИККЕТСИИ БЕРНЕТА ПРОЯВЛЯЮТ ТРОПИЗМ К
1) центральной нервной системе
2) иммунной системе
3) легочной ткани
4) желудочно - кишечному тракту
5) лимфатическим сосудам
15. СЫПНОЙ ТИФ (ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ) ВЫЗЫВАЮТ
1) риккетсии Провачека
2) риккетсии Музера
3) риккетсии Бернета
4) спирохеты
5) хламидии
16. ВОЗБУДИТЕЛЬ ЭНДЕМИЧЕСКОГО СЫПНОГО ТИФА
1) R. prowazekii
2) R. typhi
3) R. conorii
4) R. sibirica
5) R. burneti
17. БОЛЕЗНЬ БРИЛЛЯ - ЦИНССЕРА ВЫЗЫВАЮТ
1) риккетсии Провачека
2) риккетсии Музера
3) риккетсии Бернета
4) спирохеты
5) сальмонеллы
18. БОЛЕЗНЬ БРИЛЛЯ - ЦИНССЕРА ЯВЛЯЕТСЯ РЕЗУЛЬТАТОМ
1) повторного инфицирования риккетсиями
2) эндогенного рецидива эпидемического сыпного тифа
3) суперинфекции
4) рецидива эндемического сыпного тифа
5) рецидива Ку-лихорадки
19. ВОЗБУДИТЕЛЬ КУ-ЛИХОРАДКИ
1) сальмонеллы
2) риккетсия Провачека
3) риккетсия Музера
4) риккетсия Бернета
5) риккетсия Конори
20. РЕЦИДИВ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО СЫПНОГО ТИФА НАЗЫВАЕТСЯ
1) Ку-лихорадка
2) эндемический сыпной тиф
3) болезнь Брилля - Цинссера
193
4) лихорадка Цуцугамуши
5) желтая лихорадка
21. К ПАТОГЕННЫМ СПИРОХЕТАМ ОТНОСЯТСЯ
1) кишечная палочка
2) сальмонелла
3) бледная трепонема
4) пневмококки
5) актиномицеты
22. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИФИЛИСА ОТНОСИТСЯ К РОДУ
1)Treponema
2) Staphylococcus
3) Streptococcus
4) Eschеrichia
5) Sаlmonella
23. ТРЕПОНЕМЫ
1) подвижны
2) не подвижны
3) образуют споры
4) растут на простых питательных средах
5) образуют капсулу
24. TREPONEMAPALLIDUM ПО РОМАНОВСКОМУ - ГИМЗЕ ОКРАШИВАЕТСЯ В
ЦВЕТ
1) синий
2) голубой
3) бледно - розовый
4) красный
5) зеленый
25. ИСТОЧНИКОМ ИНФЕКЦИИ ПРИ СИФИЛИСЕ ЯВЛЯЮТСЯ
1) больной человек
2) вирусоноситель
3) бактерионоситель
4) животные
5) насекомые
26. ОСНОВНОЙ ПУТЬ ЗАРАЖЕНИЯ СИФИЛИСОМ
1) алиментарный
2) воздушно - капельный
3) половой
4) трансмиссивный
5) водный
194
27. ИММУНИТЕТ ПРИ СИФИЛИСЕ
1) стерильный
2) нестерильный
3) антитоксический
4) врожденный
5) антипаразитарный
28. ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА ПРИМЕНЯЕТСЯ РЕАКЦИЯ
1) Борде - Жангу
2) Видаля
3) Асколи
4) Вассермана
5) Дика
29. ВОЗБУДИТЕЛЬ ВОЗВРАТНОГО ТИФА ОТНОСИТСЯ К РОДУ
1) трепонема
2) боррелия
3) лептоспира
4) сальмонелла
5) эшерихия
30. МАТЕРИАЛОМ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ВОЗВРАТНОМ ТИФЕ ЯВЛЯЕТСЯ
1) ликвор
2) +кровь
3) гной
4) мокрота
5) испражнения
31.ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ВОЗВРАТНЫЙ ТИФ ПЕРЕДАЕТСЯ
1) клопами
2) вшами
3) клещами
4) комарами
5) блохами
32. МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ПЕРВИЧНОМ СИФИЛИСЕ
1) кровь
2) ликвор
3) содержимое твердого шанкра
4) содержимое мягкого шанкра
5) испражнения
33. ВОЗБУДИТЕЛЬ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ВОЗВРАТНОГО ТИФА БЫЛ ОТКРЫТ
1) Кохом
2) Пастером
195
3) Обермейером
4) Ивановским
5) Мечниковым
34. БОРРЕЛИИ
1) образуют экзотоксин
2) образуют эндотоксин
3) неподвижны
4) образуют споры
5) образуют капсулу
35. К БОРРЕЛИОЗАМ ОТНОСЯТСЯ
1) возвратный тиф эпидемический
2) возвратный тиф эндемический
3) болезнь Лайма
4) сыпной тиф
5) брюшной тиф
36. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА СИФИЛИСА
1) разработана
2) не разработана
3) вакцина живая
4) БЦЖ
5) специфическая иммунная сыворотка
37. ЛЕЧЕНИЕ ВОЗВРАТНОГО ТИФА ПРОВОДЯТ
1) анатоксином
2) антитоксической сывороткой
3) вакциной
4) антибиотиками
5) бактериофагом
38. ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА ИСПОЛЬЗУЮТ
1) анатоксин
2) антибиотики
3) лечебную сыворотку
4) иммуноглобулин
5) вакцину
39. ЭНДЕМИЧЕСКИЙ ВОЗВРАТНЫЙ ТИФ
1) природно - очаговая инфекция
2) кишечная инфекция
3) особоопасная инфекция
4) протозойная инфекция
5) вирусная инфекция
196
40. ЛЕПТОСПИРЫ ОТНОСЯТСЯ К
1) спирохетам
2) бактериям
3) грибам
4) вирусам
5) актиномицетам
41. ОСНОВНОЙ ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ ЛЕПТОСПИРОЗЕ
1) больной человек
2) животные
3) клещи
4) вши
5) блохи
42. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА ПРИМЕНЯЮТ
1) гаммаглобулин
2) антибиотики
3) убитую вакцину
4) бактериофаг
5) специфические сыворотки
43. ЛЕПТОСПИРЫ ВЫЗЫВАЮТ
1) возвратный тиф
2) сыпной тиф
3) инфекционную желтуху (болезнь Васильева - Вейля)
4) актиномикоз
5) кандидоз
44. К БОРРЕЛИОЗАМ ОТНОСЯТСЯ
1) сифилис
2) сыпной тиф
3) болезнь Лайма
4) фрамбезия
5) лептоспироз
45. ОБРАЗОВАНИЕ ЦИСТ ХАРАКТЕРНО ДЛЯ
1) бактерий
2) простейших
3) вирусов
4) риккетсий
5) грибов
197
IV. Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи по разделу
«Медицинская вирусология»
1. В одной из обследованных деревень к врачам принесли из многодетной семьи мальчика, 6 лет, который заболел 5 дней назад. Внезапно
повысилась температура, сильно заболела голова, была повторная рвота, боль в руках и ногах. В последующие дни состояние ребенка ухудшилось. При обследовании у ребенка высокая температура, резкая слабость, менингеальные симптомы, на правой ноге снижен мышечный
тонус, резко ослаблены сухожильные рефлексы, стопа свисает. При
пункции спинномозгового канала цереброспинальная жидкость вытекала под повышенным давлением, увеличено количества лимфоцитов,
бактерии не обнаружены.
Какой диагноз вы поставите? Как проводиться специфическая активная профилактика полиомиелита, применяемые препараты? В чем
преимущество живой вакцины Сэбина?
2. Вечером, после прихода матери и девочки Иры, 3 лет, из детского
садика, мать обратила внимание на бледность ребенка, вялость, высокую температуру (38,00С). Вечером была два раза рвота, утром ребенок
стал жаловаться на боль в животе и появился неоднократный жидкий,
водянистый стул. Ваш диагноз? Укажите таксономическое положение
ротавирусов.
3. Больная Р., 31 год, обратилась к врачу с жалобами на слабость, головную боль, тошноту, тяжесть в эпигастральной области, двукратную
рвоту, отсутствие аппетита, высокую температуру (380С), темную окраску мочи. Считает себя больной 4-й день. Из анамнеза известно, что больная работает продавцом на овощном рынке, правила гигиены соблюдает
не всегда, иногда ест немытые фрукты. За последние полгода парэнтеральных вмешательств, посещений стоматолога, гинеколога не было.
Замужем, внебрачные связи отрицает. Ранее гепатитом не болела.
Каким образом могло произойти заражение пациентки гепатитом?
Какие данные эпиданамнеза указывают на гепатит А и исключают другие вирусные гепатиты?
4. Пациент М., 27 лет, был направлен в инфекционную клинику с
симптомами гепатита. Больной жалуется на слабость, быструю утомляемость, отсутствие аппетита. За последние дни повысилась температура
тела до 37,80С, моча приобрела темный цвет (цвет пива), а кал обесцветился. При обследовании отмечается боль в эпигастральной области
справа, печень уплотнена и болезненна. Из анамнеза известно, что
198
больной имел несколько месяцев назад интимные отношения с женщиной, которая впоследствии заболела вирусным гепатитом В.
Какие результаты лабораторных исследований позволяют подтвердить диагноз «Гепатит В» и дифференцировать от других вирусных гепатитов?
5. Молодой специалист Максим Р., 23 лет, при поступлении на пищевое предприятие был направлен на врачебное обследование для получения «Медицинской книжки».
При отсутствии жалоб, у обследованного обнаружено увеличение
печени. Из скриннинговых ИФА на гепатиты, положительной оказалась
реакция на гепатит С. Максим признался, что в 16-летнем возрасте он
вместе с группой подростков несколько раз пробовал наркотики, которые они вводили внутривенно, пользуясь одним шприцом.
Укажите таксономическое положение вируса гепатита С (ВГС) и
опишите строение вириона.
6. Участковый педиатр был вызван к 8-летнему мальчику. Ребенок
болен 2-й день. Заболел внезапно. Резко поднялась температура
(38,50С), появились сильная головная боль, мышечные боли, общая
слабость. На следующий день присоединился сухой кашель, першение
в горле. Аппетит отсутствует. В его классе болеют несколько детей.
Врач поставил предварительный диагноз: «ОРВИ, возможно грипп»?
Задание: В чем заключается экстренная профилактика гриппа, когда следует ее проводить?
7. Больной Н., 42 лет, в тяжелом состоянии был снят с поезда и помещен в районную больницу. Он возвращался из командировки в Китай, где в это время была эпидемия гриппа.
У больного высокая температура (39,80С), сухой кашель, выраженная интоксикация, сопровождающаяся рвотой, судорогами, сильной
головной болью. Имеются менингиальные симптомы.
Предварительный диагноз: «Грипп, тяжелая форма, осложнение
со стороны нервной системы»?
Задание: Какими микробиологическими методами можно потвердить правильность диагноза?
8. Больной К., 32 лет, поступил в терапевтическое отделение больницы по поводу пневмонии. В последние полгода он часто болеет: повторяется стоматит (молочница), периодически обостряется фурункулез и опоясывающий герпес. Больной сильно похудел, отмечает нарастающую
слабость. Больной имел гомосексуальные связи в течение более 10 лет.
199
О каком заболевании вы подумаете?
Какими методами лабораторной диагностики можно диагностировать ВИЧ-инфекцию.
9. Женщина, 26 лет, поступила в роддом и родила ребенка весом 2
кг без признаков недоношенности. Во время беременности в женскую
консультацию не обращалась. В роддоме матери и ребенку были сделаны анализы на ВИЧ, у обоих результат положительный (ИФА). При
врачебном обследовании у женщины симптомов ВИЧ-инфекции не обнаружено, ребенок ослабленный. В течение 3-х лет она жила с гражданским мужем, который, узнав о беременности, ушел от нее.
Перечислите возможные пути передачи возбудителя.
10. У больной с подозрением на грипп взяли смыв из носоглотки и
заразили куриный эмбрион на хорионаллантоисную оболочку. Как
определить наличие вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона? А при положительном результате как определить тип вируса гриппа?
11. В глазном отделении возникла внутрибольничная – вспышка
конъюктивита. Предполагается аденовирусная инфекция. Какие методы
можно использовать для установления диагноза?
12. В городе началось эпидемия гриппа. Вы участковый врач. Какие методы экстренной профилактики гриппа будете применять, для
предотвращения распространения вспышки?
13. В детском саду проводится специфическая профилактика полиомиелита. Какие существуют препараты для специфической профилактики полиомиелита? Какой препарат используется для специфической профилактики полиомиелита в нашей стране?
14. У больного предполагается полиомиелит. Какие реакции вы
можете предположить для серодиагностики? Можно ли провести серодиагностику полиомиелита, располагая лишь одной сывороткой, полученной от больного в острый период заболевания?
15. Собака укусившая человека была убита и доставлена в ветеринарную клинику. В клетках аммонова рога погибшего животного обнаружены элементарные тельца Бабеша-Негри. Каким заболеванием болело животное? Что нужно сделать укушенному человеку?
16. При плановом обследовании сотрудников одного из детских садов у воспитательницы младшей группы обнаружены антитела к ВИЧ
методом ИФА (иммуноферментный анализ). Необходимо ли использо200
вание других методов исследования для подтверждения диагноза инфекции ВИЧ? Какие еще методы могут быть применены? Почему?
1. РАЗМЕРЫ ВИРУСОВ ОПРЕДЕЛЯЮТСЯ СЛЕДУЮЩИМИ СПОСОБАМИ
1) электронной микроскопией
2) радиальной иммунодиффузией
3) люминесцентным микроскопом
4) световым микроскопом
5) осаждением трихлоруксусной кислотой (ТХУ)
2. НАИБОЛЕЕ КРУПНЫМ ВИРУСОМ ЯВЛЯЕТСЯ
1) вирус полиомиелита
2) вирус натуральной оспы
3) вирус ящура
4) вирус гриппа
5) вирус кори
3. В СОСТАВ ВИРИОНА ВХОДИТ
1) цитоплазма
2) капсид
3) ядро
4) липосомы
5) клеточная стенка
4. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
1) серологический
2) аллергический
3) бактериологический
4) паразитологический
5) биохимический
5. ДЛЯ ВИРУСОВ ХАРАКТЕРНО
1) наличие только одной нуклеиновой кислоты
2) относительный паразитизм
3) рост на искусственных питательных средах
4) размножение путем поперечного деления
5) наличие РНК и ДНК
6. МЕТОДЫ ИНДИКАЦИИ ВИРУСОВ
1) цитопатогенное действие (ЦП5)
2) метод Вейнберга - Перетца
3) метод Цейслера
4) реакция Вассермана (RW)
5) проба Манту
201
7. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА БЕШЕНСТВА ПРОВОДИТСЯ
ВАКЦИНОЙ
1) Солка
2) Сэбина
3) БЦЖ
4) антирабической
5) Коха
8. ВИРУСЫ ЦИТОМЕГАЛИИ ОТНОСЯТСЯ К СЕМЕЙСТВУ
1) рабдовирусов
2) пикорнавирусов
3) герпесвирусов
4) аденовирусов
5) ареновирусов
9. ВИРУС БЕШЕНСТВА ИЗБИРАТЕЛЬНО ПОРАЖАЕТ
1) серое вещество передних рогов спинного мозга
2) клетки Пуркинье мозжечка и амоннова рога
3) кожу
4) органы дыхания
5) спинной мозг
10. АНТИРАБИЧЕСКАЯ ВАКЦИНА ВПЕРВЫЕ ПОЛУЧЕНА
1) Солком
2) Сэбином
3) Мечниковым
4) Кохом
5) Пастером
11. К ВИРУСНЫМ ИНФЕКЦИЯМ ОТНОСЯТСЯ
1) туберкулез
2) холера
3) корь
4) брюшной тиф
5) сыпной тиф
12. ЗАРАЖЕНИЕ АРБОВИРУСАМИ ПРОИСХОДИТ СЛЕДУЮЩИМ ПУТЕМ
1) контаминационным
2) трансмиссивным
3) алиментарным
4) трансплацентарным
5) воздушно-капельным
202
13. ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ А ОТНОСИТСЯ К ЗАБОЛЕВАНИЯМ
1) антропонозным
2) зоонозным
3) антропозоонозным
4) конвенционным
5) трансмиссивным
14. ВИРУСЫ ВПЕРВЫЕ ОТКРЫТЫ
1) Пастером
2) Кохом
3) Ивановским
4) Мечниковым
5) Эрлихом
15. ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫМ ПУТЕМ НЕ ПЕРЕДАЮТСЯ ВИРУСЫ
1) гриппа
2) гепатита В
3) кори
4) ветряной оспы
5) эпидемического паротита
16. ВИРУСЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ДНК
1) герпесвирусы
2) пикорнавирусы
3) ретровирусы
4) коронавирусы
5) арбовирусы
17. ВИРУС ГРИППА СОДЕРЖИТ ФЕРМЕНТ
1) коллагеназу
2) нейраминидазу
3) гиалуронидазу
4) плазмокоагулазу
5) каталазу
18. ВИРИОН СЛОЖНОУСТРОЕННЫХ ВИРУСОВ СОСТОИТ ИЗ
1) нуклеиновой кислоты
2) капсида
3) суперкапсида
4) митохондрий
5) ядра
19. ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ ГЕПАТИТА А
1) алиментарный
2) половой
203
3) трансмиссивный
4) парентеральный
5) воздушно-капельный
20. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ТЕЛЬЦА БАБЕША - НЕГРИ ХАРАКТЕРНЫ ДЛЯ
ВИРУСА
1)бешенства
2) натуральной оспы
3) полиомиелита
4) кори
5) СПИДа
21. ОСНОВНОЙ ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
1) алиментарный
2) водный
3) трансмиссивный
4) половой
5) воздушно-капельный
22. К ГЕРПЕСВИРУСАМ ОТНОСЯТСЯ ВИРУСЫ
1) цитомегалии
2) полиомиелита
3) парагриппа
4) гриппа
5) бешенства
23. К ГЕРПЕСВИРУСАМ ОТНОСЯТСЯ ВИРУСЫ
1) гриппа
2) парагриппа
3) эпидемического паротита
4) ветряной оспы
5) вирус гепатита В
24. СВОЙСТВА, ХАРАКТЕРНЫЕ ДЛЯ ВИРУСОВ ГЕРПЕСА
1) способность размножаться на простых питательных средах
2) наличие ДНК
3) длительная персистенция в организме
4) наличие РНК
5) быстрое выведение из организма
25. ОБРАТНУЮ ТРАНСКРИПТАЗУ (РЕВЕРТАЗУ) ОБРАЗУЮТ
1) рабдовирусы
2) ретровирусы
3) миксовирусы
204
4) тогавирусы
5) поксвирусы
26. ПРОВИРУС - ЭТО ВИРУС
1) интегрированный с клеточным геномом
2) интегрированный в цитоплазму
3) интегрированный в капсулу
4) интегрированный в ядро
5) интегрированный в клеточную стенку
27. ДНК - СОДЕРЖАЩИЕ ВИРУСЫ
1) поксвирусы
2) пикорнавирусы
3) ретровирусы
4) ареновирусы
5) рабдовирусы
28. ВИРУС ГРИППА ПРИНАДЛЕЖИТ К СЕМЕЙСТВУ
1) парамиксовирусов
2) ортомиксовирусов
3) пикорнавирусов
4) аденовирусов
5) рабдовирусов
29. «БЕШЕНСТВО» В ЛАТИНСКОЙ ТЕРМИНОЛОГИИ
1) Variola
2)Rabies
3) Anthrax
4) Pestis
5) Pertussis
30. К АРБОВИРУСАМ ОТНОСЯТСЯ
1) вирус клещевого энцефалита
2) вирус желтой лихорадки
3) вирус геморрагической лихорадки конго-крым
4) ротавирусы
5) вирус гриппа
31. РЕЗЕРВУАР РАБДОВИРУСОВ В ПРИРОДЕ
1) собаки, волки, шакалы, лисы, кошки
2) клещи
3) комары
4) человек
5) птицы
32. ОСНОВНЫЕ ПУТИ ПЕРЕДАЧИ ВИЧ
205
1) половой
2) парентеральный
3) вертикальный
4) воздушно-капельный
5) алиментарный
33. КЛЕТОЧНЫЕ ПОПУЛЯЦИИ НАИБОЛЕЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ К ИНФИЦИРОВАНИЮ ВИЧ
1) СД-4 лимфоциты (хелперы)
2) эндотелиоциты
3) гепатоциты
4) В-лимфоциты
5) эпителиальные клетки
34. К ПЕРЕВИВАЕМЫМ КУЛЬТУРАМ ТКАНЕЙ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
ОТНОСЯТСЯ
1) НеIа
2) Эндо
3) Левина
4) БЦЖ
5) СТИ
35. ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) агглютинации
2) иммуноферментный метод (ИФМ)
3) преципитации
4) РСК
5) РТГА
36. ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫМ ПУТЕМ ПЕРЕДАЮТСЯ ВИРУСЫ
1) вирус гепатита В
2) ВИЧ
3) вирус кори
4) вирус клещевого энцефалита
5) вирус бешенства
37. ПРОЧНЫЙ (ПОЖИЗНЕННЫЙ) ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ИММУНИТЕТ
ОСТАЕТСЯ ПОСЛЕ
1) кори
2) гриппа
3) парагриппа
4) аденовирусных инфекций
5) цитомегалии
38. К РНК СОДЕРЖАЩИМ ВИРУСАМ ОТНОСЯТСЯ
206
1) поксвирусы
2) пикорнавирусы
3) паповавирусы
4) парвовирусы
5) герпесвирусы
39. В СЕМЕЙСТВО ОРТОМИКСОВИРУСОВ ВХОДЯТ ВОЗБУДИТЕЛИ
1) гриппа
2) ВИЧ
3) натуральной оспы
4) полиомиелита
5) бешенства
40. МИКСОВИРУСЫ ХАРАКТЕРИЗУЮТСЯ СЛЕДУЮЩИМИ ПРИЗНАКАМИ
1) поражают кожу
2) образуют внутриклеточные включения
3) обладают тропизмом к мукоидным тканям
4) содержат ДНК
5) верно все перечисленное
41. ПРИЗНАК, ХАРАКТЕРНЫЙ ДЛЯ ВИРУСА ГРИППА
1) размножается поперечным делением
2) содержит митохондрии
3) характеризуется изменчивостью антигенной структуры
4) относится к пикорнавирусам
5) культивируется на искусственных питательных средах
42. УЛИЧНЫЙ ВИРУС БЕШЕНСТВА ХАРАКТЕРИЗУЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМИ ПРИЗНАКАМИ
1) циркулирует в природе в организме диких животных
2) не образует в клетках ЦНС тельца-включения
3) патогенен только для кроликов
4) неверно все перечисленное
5) верно все перечисленное
43. «ФИКСИРОВАННЫЙ» ВИРУС БЕШЕНСТВА ИСПОЛЬЗУЮТ ДЛЯ
1) приготовления вакцины
2) диагностики бешенства
3) постановки серологических реакций
4) лечения бешенства
5) постановки аллергических проб
44. ИНТЕГРАЦИЯ ВИРУСНОЙ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ХРОМОСОМУ КЛЕТКИ ХОЗЯИНА НАЗЫВАЕТСЯ
207
1) бактериемией
2) вирусемией
3) вирогенией
4) токсинемией
5) септикопиемией
45. ВИРУСЫ, КОТОРЫЕ МОГУТ ВЫЗЫВАТЬ РАЗВИТИЕ ОПУХОЛЕЙ У
ЧЕЛОВЕКА
1) вирус гриппа
2) вирус полиомиелита
3) вирус геморрагической лихорадки
4) вирус папилломы человека
5) вирус бешенства
46. ВИРУС ГЕПАТИТА В ОТНОСИТСЯ К СЕМЕЙСТВУ
1) пикорнавирусов
2) рабдовирусов
3) гепаднавирусов
4) аденовирусов
5) ортомиксовирусов
47. АНТИТЕЛА ОПРЕДЕЛЯЕМЫЕ ПРИ РЕТРОСПЕКТИВНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПОЛИОМИЕЛИТА
1) агглютинины
2) преципитины
3) вируснейтрализующие антитела
4) антитоксины
5) лизины
48. ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСАМИ КОКСАКИ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) аллергический метод
2) заражение чувствительных животных
3) обнаружение вирусных антигенов в сыворотке крови
4) реакцию преципитации в геле
5) реакцию агглютинации Райта
49. ДЛЯ АКТИВНОЙ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ КОРИ ПРИМЕНЯЮТ
1) инактивированную вакцину
2) живую вакцину
3) химическую вакцину
4) антитоксическую сыворотку
208
5) антибиотики
50. К ОНКОГЕННЫМ ОТНОСЯТСЯ ВИРУСЫ СЕМЕЙСТВ
1) ортомиксовирусов
2) рабдовирусов
3) паповавирусов
4) герпесвирусов
5) гепаднавирусов
51. ВИРУС КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА ОТНОСИТСЯ К
1) пикорнавирусам
2) рабдовирусам
3) ретровирусам
4) тогавирусам
5) флавивирусам
52. ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ДЕФЕКТНОГО ВИРУСА ГЕПАТИТА D НЕОБХОДИМО УЧАСТИЕ ВИРУСА-ПОМОЩНИКА. ЕГО РОЛЬ ВЫПОЛНЯЕТ
1) вирус гепатита А
2) вирус гепатита В
3) вирус гепатита С
4) вирус гепатита Е
5) вирус гепатита F
53. АБСОЛЮТНЫМ ОСНОВАНИЕМ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ ДИАГНОЗА ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЯВЛЯЕТСЯ
1) наличие антител в сыворотке крови
2) обнаружение вирусов в носоглотке
3) обнаружение вирусов в моче
4) обнаружение вирусов в смывах носоглотки
5) нарастание титра антител в парных сыворотках в 4 раза
54. ВИРУС ЯЩУРА ОТНОСИТСЯ К
1) энтеровирусам
2) тогавирусам
3) парамиксавирусам
4) афтовирусам
5) орбивирусам
55. ВИРУС ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКАБЫЛ ОТКРЫТ
1) Л. Пастером
2) Р. Галло, Л. Монтанье
3) Р. Кохом
4) Кальметом и Гереном
209
5) Д. Ивановским
56. НАЗОВИТЕ МАРКЕРЫ СУПЕРКАПСИДНОЙ ОБОЛОЧКИ ВИЧ
1) р7
2) р9
3) gр 120
4) р 18
5) gр 24
57. ВИРУС ВЕЗИКУЛЯРНОГО СТОМАТИТА ОТНОСИТСЯ К СЕМЕЙСТВУ
1) рабдовирусов
2) ортомиксовирусов
3) парамиксовирусов
4) аденовирусов
5) флавивирусов
58. К РОДУ ЭНТЕРОВИРУСОВ ОТНОСИТСЯ ВИРУС
1) полиомиелита
2) Коксаки
3) ЕСНО
4) риновирусы
5) вирус ящура
59. К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ГЕПАТИТОВ ОТНОСЯТСЯ
1) вирус гепатита В
2) вирус гепатита D
3) вирус гепатита С
4) вирус гепатита А
5) вирус гепатита Е
60. ВИРУС ЭПШТЕЙН-БАРР ПЕРЕДАЕТСЯ ПУТЕМ
1) алиментарным
2) половым
3) воздушно-капельным
4) через слюну
5) вертикальным
61. ГЕНИТАЛЬНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ ЧАЩЕ ВЫЗЫВАЮТ
1) ВПГ-1
2) ВПГ-2
3) ЦМВ
4) Вирус Эпштейн-Барр
5) ВГЧ-6
210
62. ВИРУС ЭПШТЕЙН-БАРР ВЫЗЫВАЕТ
1) инфекционный мононуклеоз
2) лимфому Беркитта
3) назофарингеальную карциному
4) все перечисленное
5) неверно все перечисленное
63. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЦМВ-ИНФЕКЦИИ ИСПОЛЬЗУЕТСЯ
1) вакцина Солка
2) убитая вакцина
3) живая вакцина
4) вакцина Сэбина
5) не разработана
64. К АЛЬФА-ГЕРПЕСВИРУСАМ ОТНОСИТСЯ
1) ЦМВ
2) ВПГ-1
3) Вирус Эпштейн-Барр
4) ВГЧ-6
5) ВГЧ-7
65. ВИРУС ОПОЯСЫВАЮЩЕГО ЛИШАЯ VARICELLA-ZOSTERVIRUS
ВЫЗЫВАЕТ
1) натуральную оспу
2) ветряную оспу
3) желтую лихорадку
4) цетомегамию
5) полиомиелит
76.ВИРУС ВЕТРЯНОЙ ОСПЫ ОТНОСИТСЯ К
1) вирусам герпеса человека 1
2) вирусам герпеса человека 2
3)вирусам герпеса человека 3
4) поксвирусам
5) реовирусам
77.ВИРУС ЭПШТЕЙН-БАРР ВЫЗЫВАЕТ
1) саркому Капоши
2) цитомегалию
3) опоясывающий лищай
4) лимфому Беркитта
5) эпидемический паротит
211
78. К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ С ЭНТЕРАЛЬНЫМ МЕХАНИЗМОМ ПЕРЕДАЧИ ОТНОСЯТСЯ
1) HAV
2) HBV
3) HCV
4) HDV
5) HEV
79.ДЖЕННЕР ВПЕРВЫЕ ПРОВЕЛ ЭФФЕКТИВНУЮ ИСКУССТВЕННУЮ
ПРИВИВКУ (ВАКЦИНАЦИЮ) ПРОТИВ
1) туберкулеза
2) гриппа
3) полиомиелита
4) кори
5) натуральной оспы
80. ЧАСТИЦАМИ ДЕЙНА НАЗЫВАЮТ ВИРИОН
1) вируса гепатита А
2) вируса гепатита В
3) вируса кори
4) вируса паротита
5) вируса везикулярного стоматита
81. АВСТРАЛИЙСКИМ НАЗЫВАЮТ СЛЕДУЮЩИЙ АНТИГЕН ВИРУСА
ГЕПАТИТА В
1) НВS
2) НВс
3) НВе
4) НВх
5) ни один из перечисленных
82. ДЛЯ ПАССИВНОЙ ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ ГЕПАТИТА А
ИСПОЛЬЗУЮТ
1) вакцину СТИ
2) вакцина Солка
3) вакцина Сэбина
4) анатоксин
5) иммуноглобулин, полученный из смеси донорских сывороток
83. HERPES ZOSTER – ВОЗБУДИТЕЛЬ
1) ветряной оспы
2) натуральной оспы
3) эпидемиологического паротита
4) полиомиелита
212
5) кори
84. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИППА ПРИМЕНЯЮТ
1) живую вакцину
2) инактивированную вирионную вакцину
3) инактивированную субъединичную вакцину
4) все перечисленные
5) специфическая профилактика не разработана
85.К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
ОТНОСЯТСЯ
1) HBV
2) HCV
3) HДV
4) HAV
5) HEV
86. К СЕМЕЙСТВУ ПАРАМИКСОВИРУСОВ ОТНОСЯТСЯ
1) вирус гриппа
2) вирус паротита
3) вирус полиомиелита
4) риновирус
5) вирус везикулярного стоматита
87.ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ПОЛИОМИЕЛИТА В НАШЕЙ СТРАНЕ ПРИМЕНЯЮТ
1) иммуноглобулин
2) интерферон
3) анатоксин
4) химическую вакцину
5) живую вакцину
88.ВИРУС БЕШЕНСТВАОТНОСИТСЯ К РОДУ
1) Vesiculovirus
2) Morbilivirus
3) Pneumovirus
4) Lissavirus
5) Paramyxovirus
213
Список рекомендуемой литературы:
а) основная
1. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология (под
ред. Л.Б. Борисова) М.: «Медицина», 2001.
2. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология (под
ред. ак. А.А. Воробьева) М.:МИА, 2008.
3. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология (под
ред. ак. В.В. Зверева) М.:ГЭОТАР Медиа, 2010.
4. Практикум лабораторных работ с иллюстрированными ситуационными заданиями по микробиологии, вирусологии, иммунологии
(под ред. ак. А.А. Воробьева, проф.В.Н. Царева)М.:МИА, 2008.
5. Саидов М.С. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология (конспект лекций, часть II), Махачкала,2011
б) дополнительная
1. Воробьева А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская
и санитарная микробиология М.: «Академия», 2003.
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, СПб., 2002.
3. Медицинская микробиология (под ред.ак. В.И Покровского) М.:
ГЭОТАР,2005.
4. Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии (под ред. Г.М. Шуб) М.: «Логос», 2001.
214
215
Под авторской редакцией
Сдано в набор 02.07.12 г. Подписано в печать 30.07.12 г.
Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печ. л. 13,5.
Тираж 500. Заказ 138.
Издательско-полиграфический центр ДГМА
г. Махачкала, ул. Ш. Алиева, 1.
216
217
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ
ГБОУ ВПО «ДАГЕСТАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ» МЗ РФ
ПРАКТИКУМ
ПО МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ
И ВИРУСОЛОГИИ
Учебное пособие
(Часть II)
218
Махачкала 2012
219